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JP2012509479A - フェノキシアルキル、アルコキシフェニルアルキルまたはフェノキシフェニルアルキルリガンドベースの新規クロマトグラフィー媒体 - Google Patents

フェノキシアルキル、アルコキシフェニルアルキルまたはフェノキシフェニルアルキルリガンドベースの新規クロマトグラフィー媒体 Download PDF

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Abstract

以下の式の媒体から選択される逆相クロマトグラフィー媒体：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
および前記式の疎水性末端キャップされた媒体、
［式中、ｎは１〜４の数字であり、ｍは０または１であり、ｍが１である場合、Ｘは、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基およびフェニル基の群から選択され、ｍが０である場合、Ｘは、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ基およびフェノキシ基から選択され、Ｚは、シリカまたは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、シリカまたは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の前記逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］。

Description

本発明は、小分子を分離および精製するための新規クロマトグラフィー媒体およびその使用に関する。より詳細には、本発明は、Ｃ−Ｏ−Ｃ結合を含有するフェノキシアルキル、アルコキシ−フェニルまたはフェノキシフェニル型のリガンドを固体支持体に付着させることによって調製した新規疎水性クロマトグラフィー媒体を開示する。また、媒体は疎水性末端キャップも有し得る。本発明で提供する新しいクロマトグラフィー媒体は、親水性かつπ−π相互作用に基づく様々な分子の分離に特に有用である。さらに、新しい媒体は、高水性の移動相のみを使用した水溶性の高い化合物の分離に使用することができる。
逆相ＨＰＬＣ媒体は、医薬品、農薬類、ならびにペプチドおよび小タンパク質などの多くの基本的な化合物の分離において幅広い有用性が見つかっている。明確に定義された直径、孔径、孔体積、表面積および強剛性のいくつかの構造的に適切な球状シリカ粒子およびポリマー粒子が、分析用および調製用のどちらのスケールのＨＰＬＣにも利用可能である。また、極性および非極性リガンドで修飾された化学的に異なるシリカ系およびポリマーの固定相媒体も幅広く使用されている。シアノ、アミノ、ジオール、およびＣ４、Ｃ８またはＣ１８、ならびにフェニルリガンドなどの、用いるリガンドの化学的性質以外にも、残留ＳｉＯＨ基の分布も分離方法に大きな役割を果たし得ることが周知である。
一般に、ほとんどのクロマトグラフィー媒体は、不規則形状から球状の粒子形状の、異なる粒子径および孔径を有するポリマーまたはシリカ粒子に基づく。最も一般的なクロマトグラフィー媒体は、ポリマーまたはシリカ粒子に、１〜３０個の炭素原子の鎖長を有する一連のアルキル基を結合させることによって調製されていた。オクタデシル（Ｃ１８）アルキルが最も人気があり、続いてＣ８およびＣ４結合シリカである。次の開発は末端キャップの使用であり、より小さな試薬（ＴＭＳ、塩化トリメチルシリル）を用いて未反応のＳｉ−ＯＨ基をキャップした。結合の度合はシリカの種類間で異なり、これは、固定相の割合、したがってカラムの全体的な保持特性の大まかな指針である、表面被覆率のパーセンテージから見られる炭素負荷に反映される。
逆相クロマトグラフィーでは水性有機移動相を用い、分離は移動相と固定相との間の分析物の分配に基づき、分析物の極性および疎水性によって支配される。溶出液の強度は、通常はメタノール、アセトニトリル、またはＴＨＦのいずれかである、有機モディファイヤーの割合によって支配される。それぞれのモディファイヤーと分析物および媒体のリガンドとの相互作用は異なる場合があるため、任意の分析化合物の選択性または相対的保持率は分子の極性および移動相の溶出強度に依存する。目的の化合物をカラムから溶出させるために多様かつ様々な量の溶媒を移動相中で使用することは一般的である。しかし、クロマトグラフィー単位操作を製造のために使用する応用方法では、安全性および経済性の理由のため、可能な限り最少量の有機溶媒を使用して小分子を溶出することが非常に好ましい。しかし、現在利用可能なクロマトグラフィー媒体を使用しては、ほとんどの分離が分析物とリガンドとの強力な相互作用に基づいてではなく、移動相中における分配に基づいて起こるため、このことは可能でない。
本発明者らは、媒体上に特定のリガンドを存在させることによって、疎水性ファンデルワールス（ｖａｎｄｅｒｗａｌｌｓ）相互作用、π−π相互作用および水素結合を含めた複数の相互作用部位がもたらされるため、より良好な分離を達成できることを見出した。溶出液の有機構成成分の通常の優先は、経済性または効率のためにメタノールまたはアセトニトリルのどちらかであるが、いくつかの理由により理想的な溶出溶媒は水である。多くの様々な逆相媒体が、Ｍａｌｌｉｎｃｋｒｏｄｔ Ｂａｋｅｒ，Ｉｎｃ．を含めたいくつかの製造者から市場で知られているが、特異的な相互作用が存在しない限りは、同様の種類のカラム間の選択性の差異は、通常、溶出液の溶媒を変えた際に導入される差異よりも小さい。
本発明の目的の１つは、本明細書中に記載の新しい逆相媒体がユニークな分離を示すだけでなく、水のみを移動相として使用して目的の化合物を溶出させることを示すことである。さらに、この媒体は、高水性の移動相を用いた水溶性分析物の分離に使用することができる。
本発明は、以下の式の媒体から選択される逆相クロマトグラフィー媒体：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
［式中、ｎは、１〜４の数字、好ましくは２〜４、より好ましくは３または４、さらにより好ましくは３であり、ｍは、０または１、好ましくは１であり、ｍが１である場合、Ｘは、Ｈ、１〜６個、好ましくは１〜４個、より好ましくは２〜４個の炭素原子を有するアルキル基、およびフェニル基の群から選択され、Ｘは好ましくはＨであり、ｍが０である場合、Ｘは、１〜６個の炭素原子、好ましくは１〜４個の炭素原子、より好ましくは１〜２個の炭素原子、さらにより好ましくは１個の炭素原子を有するアルコキシ基、およびフェノキシ基から選択され、Ｘは好ましくはメトキシであり、Ｚは、シリカまたは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、シリカまたは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の前記逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］および前記式の疎水性末端キャップされた媒体を提供する。本発明は、シリカクロマトグラフィー支持体の骨格上にシラノール部分の疎水性末端キャップを有する、または親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格上にヒドロキシル、アミンもしくはイミン部分の末端キャップを有する、該式のそのような末端キャップされた媒体を提供する。該式の新規クロマトグラフィー媒体は、
（ａ）（１）シリカ骨格の表面上にヒドロキシル基を有するシリカ支持体または（２）ポリマー骨格の表面上にヒドロキシル、アミンもしくはイミン基を有する親水性ポリマー支持体から選択されるクロマトグラフィー媒体支持体を、
（ｂ）以下の式の反応物質：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｐ−Ｓｉ（Ｙ）４−ｐ
［式中、ｐは、１〜３の数字、好ましくは１であり、Ｙは、塩素、臭素、ヨウ素またはアルコキシ基中に１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基であり、好ましくは塩素であり、ｍ、ｎおよびＸは、上記定義したとおりである］と反応させることによって調製し、以下の式のリガンド：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］−
は、シリカ骨格上のヒドロキシル基を介してまたは親水性ポリマー骨格上のヒドロキシル、アミンもしくはイミン基を介して、シリカまたは親水性ポリマー支持体の骨格と付着して、以下の式の逆相クロマトグラフィー媒体：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
［式中、ｎは、１〜４の数字、好ましくは２〜４、より好ましくは３または４、さらにより好ましくは３であり、ｍは、０または１、好ましくは１であり、ｍが１である場合、Ｘは、Ｈ、１〜６個、好ましくは１〜４個、より好ましくは２〜４個の炭素原子を有するアルキル基、およびフェニル基の群から選択され、Ｘは好ましくはＨであり、ｍが０である場合、Ｘは、１〜６個の炭素原子、好ましくは１〜４個の炭素原子、より好ましくは１〜２個の炭素原子、さらにより好ましくは１個の炭素原子を有するアルコキシ基、およびフェノキシ基から選択され、Ｘは好ましくはメトキシであり、Ｚは、シリカまたは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、シリカまたは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の前記逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］を提供する。シリカまたは親水性ポリマー支持体対反応物質の重量比を約２０：１〜約２：１、好ましくは約１３：１〜約５：１、最も好ましくは約７：１として、反応物質をシリカ支持体または親水性ポリマー支持体と反応させる。前述の式の逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性末端キャップを有することを所望する場合は、そのような媒体を、任意の適切な疎水性末端キャップ反応物質と反応させて、末端キャップ反応物質を、シリカの骨格上の残留シラノール基のいずれか、または親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格上の残留ヒドロキシル、アミンもしくはイミン基のいずれかと反応させ得る。
これらのリガンドがシリカまたは親水性ポリマー支持体の骨格と付着した、生じたクロマトグラフィー媒体により、水性移動相中での分析物の分離能力を提供するクロマトグラフィー媒体が提供されることが発見された。さらに、前記クロマトグラフィー媒体を疎水性末端キャップした場合、生じた末端キャップされた媒体は、親水性末端キャップされた媒体と比較して、増加した水性媒体中での安定性、および増加した保持特性をもたらす、リガンドまたは末端基との増加した疎水性相互作用を有する。さらに、かつ驚くべきことに、疎水性末端キャップされた媒体は高水性の移動相中での分離を可能にする。
本発明は、それだけには限定されないが、図中に示す本発明の実施形態によって例示される。
図１は、アセトアミノフェンを分離した、応用実施例１の分離のクロマトグラムを示す図である。 図２は、カフェインを分離した、応用実施例２の分離のクロマトグラムを示す図である。 図３は、イオジキサノールを分離した、応用実施例３の分離のクロマトグラムを示す図である。 図４は、イオジキサノールを分離した、応用実施例４の分離のクロマトグラムを示す図である。 図５は、ウラシル、フェノール、ｍ−ＤＥＴＡおよびビフェニルを含有する混合物を分離した、応用実施例５の分離のクロマトグラムを示す図である。 図６は、イオジキサノールを分離した、比較応用実施例の分離のクロマトグラムを示す図である。
本発明は、以下の式の媒体から選択される逆相クロマトグラフィー媒体：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
［式中、ｎは、１〜４の数字、好ましくは２〜４、より好ましくは３または４、さらにより好ましくは３であり、ｍは、０または１、好ましくは１であり、ｍが１である場合、Ｘは、Ｈ、１〜６個、好ましくは１〜４個、より好ましくは２〜４個の炭素原子を有するアルキル基、およびフェニル基の群から選択され、Ｘは好ましくはＨであり、ｍが０である場合、Ｘは、１〜６個の炭素原子、好ましくは１〜４個の炭素原子、より好ましくは１〜２個の炭素原子、さらにより好ましくは１個の炭素原子を有するアルコキシ基、およびフェノキシ基から選択され、Ｘは好ましくはメトキシであり、Ｚは、シリカまたは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、シリカまたは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の前記逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］および前記式の疎水性末端キャップされた媒体を提供する。本発明は、シリカクロマトグラフィー支持体の骨格上にシラノール部分の疎水性末端キャップを有する、または親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格上にヒドロキシル、アミンもしくはイミン部分の末端キャップを有する、該式のそのような末端キャップされた媒体を提供する。該式の新規クロマトグラフィー媒体は、
（ａ）（１）シリカ骨格の表面上にヒドロキシル基を有するシリカ支持体または（２）ポリマー骨格の表面上にヒドロキシル、アミンもしくはイミン基を有する親水性ポリマー支持体から選択されるクロマトグラフィー媒体支持体を、
（ｂ）以下の式の反応物質：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｐ−Ｓｉ（Ｙ）４−ｐ
［式中、ｐは、１〜３の数字、好ましくは１であり、Ｙは、塩素、臭素、ヨウ素またはアルコキシ基中に１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基であり、好ましくは塩素であり、ｍ、ｎおよびＸは、上記定義したとおりである］と反応させることによって調製し、以下の式のリガンド：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］−
は、シリカ骨格上のヒドロキシル基を介してまたは親水性ポリマー骨格上のヒドロキシル、アミンもしくはイミン基を介して、シリカまたは親水性ポリマー支持体の骨格と付着して、以下の式の逆相クロマトグラフィー媒体：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
［式中、ｎは、１〜４の数字、好ましくは２〜４、より好ましくは３または４、さらにより好ましくは３であり、ｍは、０または１、好ましくは１であり、ｍが１である場合、Ｘは、Ｈ、１〜６個、好ましくは１〜４個、より好ましくは２〜４個の炭素原子を有するアルキル基、およびフェニル基の群から選択され、Ｘは好ましくはＨであり、ｍが０である場合、Ｘは、１〜６個の炭素原子、好ましくは１〜４個の炭素原子、より好ましくは１〜２個の炭素原子、さらにより好ましくは１個の炭素原子を有するアルコキシ基、およびフェノキシ基から選択され、Ｘは好ましくはメトキシであり、Ｚは、シリカまたは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、シリカまたは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の前記逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］を提供する。シリカまたは親水性ポリマー支持体対反応物質の重量比を約２０：１〜約２：１、好ましくは約１３：１〜約５：１、最も好ましくは約７：１として、反応物質をシリカ支持体または親水性ポリマー支持体と反応させる。前述の式の逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性末端キャップを有することを所望する場合は、そのような媒体を、任意の適切な疎水性末端キャップ反応物質と反応させて、末端キャップ反応物質を、シリカの骨格上の残留シラノール基のいずれか、または親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格上の残留ヒドロキシル、アミンもしくはイミン基のいずれかと反応させ得る。
シリカまたは親水性ポリマー支持体対反応物質の重量比を約２０：１〜約２：１、好ましくは約１３：１〜約５：１、最も好ましくは約７：１として、反応物質をシリカ支持体または親水性ポリマーと反応させる。
前述の式の逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性末端キャップを有することを所望する場合は、そのような媒体を、任意の適切な疎水性末端キャップ反応物質と反応させて、末端キャップ反応物質を、シリカの骨格上の残留シラノール基のいずれか、または親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格上の残留ヒドロキシル、アミンもしくはイミン基のいずれかと反応させ得る。シリカの骨格上の未反応のシラノール基と反応することができる、または親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格上に残留する未反応のヒドロキシル、アミンもしくはイミン基と反応することができる、任意の適切な疎水性末端キャップ反応物質を本発明で用い得る。適切な末端キャップ反応物質には、それだけには限定されないが、ヘキサメチルジシラザン、１−（トリメチルシリル）イミダゾール、ならびにトリメチルクロロシランおよびトリエチルクロロシランなどのトリアルキルハロシランが含まれる。ヘキサメチルジシラザンおよび１−（トリメチルシリル）イミダゾールが末端キャップ反応物質として好ましく、ヘキサメチルジシラザンがさらにより好ましい。一般に、末端キャップされていない物質は、シリカ対試薬を５：１〜１０：１の比で使用して、適切な末端キャップ試薬と、トルエンなどの適切な溶媒中、室温または９０℃までの温度で、２４時間まで反応させる。生じた生成物をトルエンなどの適切な溶媒で洗浄し、８５℃で乾燥させた。
本発明の一実施形態は、
（ａ）以下の式の逆相クロマトグラフィー媒体：
［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
［式中、ｎは、１〜４の数字、好ましくは２〜４、より好ましくは３もしくは４、さらにより好ましくは３であり、ｍは、０もしくは１、好ましくは１であり、ｍが１である場合、Ｘは、Ｈ、１〜６個、好ましくは１〜４個、より好ましくは２〜４個の炭素原子を有するアルキル基、およびフェニル基の群から選択され、Ｘは好ましくはＨであり、ｍが０である場合、Ｘは、１〜６個の炭素原子、好ましくは１〜４個の炭素原子、より好ましくは１〜２個の炭素原子、さらにより好ましくは１個の炭素原子を有するアルコキシ基、およびフェノキシ基から選択され、Ｘは好ましくはメトキシであり、Ｚは、シリカもしくは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、シリカもしくは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の前記逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］、または疎水性末端キャップを有するそのような逆相クロマトグラフィー媒体を詰めたクロマトグラフィーカラムを提供することと、
（ａ）分析物の溶液を該詰めたカラム内に注入することと、
（ｂ）分析物を溶出させることと
を含む、分析物を含有する溶液から分析物を分離する方法を含む。
これらのリガンドがシリカまたは親水性ポリマー支持体の骨格に付着した本発明のクロマトグラフィー媒体、特にフェノキシアルキルリガンド、特にフェノキシプロピルリガンドおよびアルコキシフェニルアルキルリガンド、特にメトキシフェニルプロピルリガンドを有するものは、高水性の移動相中での分析物の分離能力を提供するクロマトグラフィー媒体を提供する。たとえば、フェノキシプロピルリガンドを有する本発明の媒体は、イオジキサノール、すなわち５−［アセチル−［３−［アセチル−［３，５−ビス（２，３−ジヒドロキシプロピルカルバモイル）−２，４，６−トリヨード−フェニル］アミノ］−２−ヒドロキシ−プロピル］アミノ］−Ｎ，Ｎ’−ビス（２，３−ジヒドロキシプロピル）−２，４，６−トリヨード−ベンゼン−１，３−ジカルボキサミドを、どのような有機媒体も使用せずに他の関連する不純物から分離することができ、したがって、水を唯一の溶出液として用いてイオジキサノールを分離することができる。同様に、媒体、特にフェノキシプロピルリガンドを有する本発明の媒体は、水を移動相として使用してアセトアミノフェンを溶出させることができる。応用実施例１に実証するように、アセトアミノフェンを本発明の媒体を詰めたカラム上に載せ、水を用いて鋭いピークとして溶出される。
本発明の一実施形態によれば、逆相媒体のうちの１つは、３−フェノキシプロピルトリクロロシラン（Ｃ９Ｈ１１Ｃｌ３ＯＳｉ、ＣＡＳ番号６０３３３−７６−８）を、４０〜６０ミクロン、１２０Åの球状シリカと、トルエン／メタノール混合物中、室温で約１６〜２０時間反応させることによって調製する。
本発明の別の実施形態では、５０グラムのシリカを、５ｍｌのメタノールを含有する２５０ｍｌのトルエン中でスラリー化し、７．５グラムのフェノキシプロピルトリクロロシランをそれに加え、約６時間、室温で反応させた。スラリーをメタノールで洗浄し、８５℃で乾燥させた。％Ｃに基づく表面被覆率は１７９マイクログラム／ｍ２であった。生じた媒体を分析用カラム（４．６×２５０ｍｍ）および半調製用カラム（１０×２５０ｍｍ）中に詰め、様々な条件下でいくつかの小分子の分離について試験した。
本発明の媒体用のシリカまたは親水性ポリマー支持体は、任意の適切なヒドロキシル化シリカまたは適切な親水性ポリマーであることができる。媒体用のシリカゲル支持体は、一般に約２ミクロン〜約２５０ミクロンの範囲内の粒子径および約３０Å〜約２０００Åの孔径を有する、不規則形状または球状であることができる。同様に、本発明のビーズの媒体の親水性ポリマーは、一般に２ミクロン〜２５０ミクロンの範囲内の粒子径および約３０Å〜約２０００Åの孔径を有する、不規則形状または球状であることができる。親水性ポリマーは、好ましくは、表面上にヒドロキシル、アミン、またはイミン基を有する、ポリメタクリレート、ヒドロキシル化スチレン−ジビニルベンゼン、ヒドロキシル化ジビニルベンゼン、セルロース、またはアガロースの群から選択されるポリマービーズである。たとえば、ヒドロキシル化ポリメタクリレートは、グリシジル（ｇｌｙｃｉｄｅｙｌ）−メタクリレート（ＧＭＡ）とエチレングリコールジメチルアクリレート（ＥＧＤＭ）との間の重合、続いて酸または塩基加水分解から誘導することができる。
本発明の別の実施形態では、本発明の媒体は、約２０００以下、さらには約１５００以下、また１０００以下の分子量の小分子を、高水性の移動相から分離するために使用する。
本発明で合成した物質を、そのイオジキサノール溶出挙動（比較応用実施例）について、フェニルブチルリガンドで作製した既知のシリカ媒体（比較合成実施例）と比較する。
合成実施例１
１３０Åの孔径を有する５０ミクロンの平均粒子径を有する５０ｇのシリカを、漏斗、撹拌器および陽圧窒素導入口を備えた１Ｌの丸底フラスコ中に入れ、２５０ｍｌのトルエンおよび５ｍｌのメタノールをそれに加え、室温で撹拌した。７．５ｇの３−フェノキシプロピルトリクロロシランを１分間未満でフラスコに加え、室温で約１６時間撹拌した。スラリーを濾過し、２５０ｍｌのメタノールで洗浄し、９ｔ８５℃で終夜乾燥させた。元素分析：Ｃ、６．３２％；Ｈ、０．９０％。表面被覆率：１７９マイクログラム／ｍ２。
合成実施例２
１３０Åの孔径を有する２０ミクロンの平均粒子径を有する２００ｇのシリカを、漏斗、撹拌器および陽圧窒素導入口を備えた２Ｌの丸底フラスコ中に入れ、１０００ｍＬのトルエンおよび２０ｍｌのメタノールをそれに加え、室温で撹拌した。３０．０ｇの３−フェノキシプロピルトリクロロシランを１分間未満でフラスコに加え、室温で１６時間撹拌した。スラリーを濾過し、１０００ｍｌのメタノールで洗浄し、８５℃で終夜乾燥させた。元素分析：Ｃ、６．５７％；Ｈ、１．００％。表面被覆率：２０３マイクログラム／ｍ２。
合成実施例３
１４０Åの孔径を有する１０ミクロンの平均粒子径を有する１２０ｇのシリカを、漏斗、撹拌器および陽圧窒素導入口を備えた１Ｌの丸底フラスコ中に入れ、５００ｍｌのトルエンおよび１５ｍｌのメタノールをそれに加え、室温で撹拌した。１８ｇの３−フェノキシプロピルトリクロロシランを１分間未満でフラスコに加え、室温で約１６時間撹拌した。スラリーを濾過し、５００ｍｌのメタノールで洗浄し、８５℃で終夜乾燥させた。元素分析：Ｃ、５．９２％；Ｈ、０．７８％。表面被覆率：１９８マイクログラム／ｍ２。
合成実施例４
１３０Åの孔径を有する５０ミクロンの平均粒子径を有する１５０ｇのシリカを、漏斗、撹拌器および陽圧窒素導入口を備えた２Ｌの丸底フラスコ中に入れ、７５０ｍｌのトルエンおよび１５ｍｌのメタノールをそれに加え、室温で撹拌した。２２．５ｇのメトキシフェニルプロピルトリクロロシラン（ＣＡＳ番号１６３１５５−５７−５）を１分間未満でフラスコに加え、室温で約１６時間撹拌した。スラリーを濾過し、７５０ｍｌのメタノールで洗浄し、８５℃で終夜乾燥させた。元素分析：Ｃ、６．４９％；Ｈ、０．９５％。表面被覆率：１７５マイクログラム／ｍ２。
合成実施例５
１２０Åの孔径を有する５０ミクロンの平均粒子径を有する１．０Ｋｇのシリカを、漏斗、撹拌器および陽圧窒素導入口を備えた１Ｌの丸底フラスコ中に入れ、５Ｌのトルエンおよび１００ｍｌのメタノールをそれに加え、室温で撹拌した。１５０ｇの３−フェノキシプロピルトリクロロシランを１分間未満でフラスコに加え、室温で約１６時間撹拌した。スラリーを濾過し、２５０ｍｌのメタノールで洗浄し、８５℃で終夜乾燥させた。元素分析：Ｃ、６．３８％；Ｈ、１．１３％。表面被覆率：１６９マイクログラム／ｍ２。
比較合成実施例
１３０Åの孔径を有する５０ミクロンの平均粒子径を有する５０ｇのシリカを、漏斗、撹拌器および陽圧窒素導入口を備えた１Ｌの丸底フラスコ中に入れ、２５０ｍｌのトルエンおよび５ｍｌのメタノールをそれに加え、室温で撹拌した。７．５ｇの４−フェニルブチルトリクロロシランを１分間未満でフラスコに加え、室温で約１６時間撹拌した。スラリーを濾過し、２５０ｍｌのメタノールで洗浄し、８５℃で終夜乾燥させた。元素分析：Ｃ、７．５１％；Ｈ、１．１３％。表面被覆率：２１３マイクログラム／ｍ２。
合成実施例６
１３０Åの孔径を有する５０ミクロンの平均粒子径を有する、１００ｇの３−フェノキシプロピルと結合したシリカ（Ｃ＝６．０６％）を、漏斗、撹拌器および陽圧窒素導入口を備えた２Ｌの丸底フラスコ中に入れ、５００ｍｌのトルエンをそれに加え、室温で撹拌した。１２．５ｇのヘキサメチルジシラザン（ＣＡＳ番号９９９−９７−３）を１分間未満でフラスコに加え、室温で約１６〜２０時間撹拌した。スラリーを濾過し、５００ｍｌのトルエンで２回、５００ｍｌのメタノールで３回洗浄し、８５℃で終夜乾燥させた。元素分析：Ｃ、７．０％；Ｈ、１．３％。表面被覆率：１９６マイクログラム／ｍ２。
合成実施例７
１３０Åの孔径を有する５０ミクロンの平均粒子径を有する、１００ｇの３−フェノキシプロピルと結合したシリカ（Ｃ＝６．０６％）を、漏斗、撹拌器および陽圧窒素導入口を備えた２Ｌの丸底フラスコ中に入れ、５００ｍｌのトルエンをそれに加え、室温で撹拌した。１２．５ｇの１−（トリメチルシリル）イミダゾール）（ＣＡＳ番号１８１５６−７４−６）を１分間未満でフラスコに加え、室温で約１６〜２０時間撹拌した。スラリーを濾過し、５００ｍｌのトルエンで２回、５００ｍｌのメタノールで３回洗浄し、８５℃で終夜乾燥させた。元素分析：Ｃ、７．１１％；Ｈ、０．８９％。表面被覆率：１９９マイクログラム／ｍ２。
応用実施例１
合成実施例１で調製したシリカに付着したフェノキシプロピルリガンドを含有するクロマトグラフィー媒体を、分析用カラム（４．６×２５０ｍｍ）中に詰めた。５マイクロリットルの、水中の１ｍｇ／ｍｌのアセトアミノフェンを含有する溶液をカラムに注入し、０．８５ｍｌ／分の流速を用いて溶出させ、水を移動相として使用して、約４５分までの期間、溶出を２４５ｎｍで監視した。生じたクロマトグラムを図１に示す。
応用実施例２
合成実施例２で調製したシリカに付着したフェノキシプロピルリガンドを含有するクロマトグラフィー媒体を、分析用カラム（４．６×２５０ｍｍ）中に詰めた。５マイクロリットルの、水中の１ｍｇ／ｍｌのカフェインを含有する溶液をカラムに注入し、０．８５ｍｌ／分の流速を用いて溶出させ、水を移動相として使用して、約４５分まで、１００％の水から５０％のメタノールおよび５０％の水まで３０分の勾配で、溶出を２４５ｎｍで監視した。生じたクロマトグラムは図２であり、７３分にカフェインの溶出が示される。
応用実施例３
合成実施例３で調製したシリカに付着したフェノキシプロピルリガンドを含有するクロマトグラフィー媒体を、半調製用カラム（１０ｍｍ×２５０ｍｍ）中に詰めた。２５マイクロリットルの、水中の２．５ｍｇ／ｍｌのイオジキサノールを含有する溶液を、４．０２ｍｌ／分の流速でカラム内に注入した。イオジキサノールは水のみを移動相として３３．７分に溶出される。生じたクロマトグラムは図３である。
応用実施例４
合成実施例４で調製したシリカに付着したメトキシフェニルプロピルリガンドを含有するクロマトグラフィー媒体を、半調製用カラム（１０ｍｍ×２５０ｍｍ）中に詰めた。２５マイクロリットルの、水中の２．５ｍｇ／ｍｌのイオジキサノールを含有する溶液を、４．０２ｍｌ／分の流速でカラム内に注入した。イオジキサノールは水のみを移動相として３３．１分に溶出された。クロマトグラムは図４である。
応用実施例５
合成実施例５で調製したシリカに付着したフェノキシプロピルリガンドを含有するクロマトグラフィー媒体を、半調製用カラム（１０ｍｍ×２５０ｍｍ）中に詰めた。５０マイクロリットルの、ウラシル、フェノール、ｍ−ＤＥＴＡおよびビフェニルの混合物を含有する溶液を、２ｍｌ／分の流速で５０／５０のアセトニトリル：水の移動相を用いてカラム内に注入し、生じたクロマトグラムを図５に示す。
比較応用実施例
比較合成実施例で調製したシリカに付着したフェニルブチルリガンドを含有するクロマトグラフィー媒体を、分析用カラム（４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）中に詰めた。５マイクロリットルの、水中の２．５ｍｇ／ｍｌのイオジキサノールを含有する溶液を０．８５ｍｌ／分の流速でカラム内に注入した。フェニルブチルリガンドを有する媒体および水を移動相として使用した場合、水中で４５分まででもイオジキサノールが溶出されなかった。むしろ、フェニルブチル（ｂｕｔｙ）リガンド媒体は、イオジキサノールを溶出させるために３０％のメタノールを必要とした。イオジキサノールは、移動相中に約３０％のメタノールを用いて６３分に溶出された。生じたクロマトグラムは図６である。これは本発明の媒体（実施例３、図３）と比較したものであり、イオジキサノールを高水性の溶液から溶出および分離できることを示している。
本発明は、その具体的な実施形態を参照して本明細書中に記載したが、本明細書中に開示する本発明の概念の精神および範囲から逸脱せずに、変更、改変および変形できることを理解されたい。したがって、添付の特許請求の範囲の精神および範囲内にあるすべてのそのような変更、改変および変形が包含されることを意図する。

Claims (23)

  1. 以下の式の媒体から選択される逆相クロマトグラフィー媒体：
    ［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
    ［式中、ｎは１〜４の数字であり、ｍは０または１であり、ｍが１である場合、Ｘは、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基およびフェニル基の群から選択され、ｍが０である場合、Ｘは、
    １〜６個の炭素原子を有するアルコキシ基、および
    フェノキシ基
    から選択され、Ｚは、シリカまたは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、該シリカまたは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の該骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の該逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］
    および該式の疎水性末端キャップされた媒体。
  2. Ｚがシリカ支持体の骨格である、請求項１に記載の逆相クロマトグラフィー媒体。
  3. Ｚがシリカ支持体の骨格であり、ＸがＨであり、ｍ＝１であり、ｎ＝３である、請求項１に記載の逆相クロマトグラフィー媒体。
  4. 前記媒体が疎水性末端キャップを有しており、該疎水性末端キャップがヘキサメチルジシラザンによるものである、請求項３に記載の逆相クロマトグラフィー媒体。
  5. Ｚがシリカ支持体の骨格であり、Ｘがメトキシ基であり、ｍ＝０であり、ｎ＝３である、請求項１に記載の逆相クロマトグラフィー媒体。
  6. 以下の式の逆相クロマトグラフィー媒体を調製する方法：
    ［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
    ［式中、ｎは１〜４の数字であり、ｍは０または１であり、ｍが１である場合、Ｘは、
    Ｈ、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基、およびフェニル基
    の群から選択され、ｍが０である場合、Ｘは、
    １〜６個の炭素原子を有するアルコキシ基、および
    フェノキシ基
    から選択され、Ｚは、シリカまたは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、該シリカまたは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の該骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の該逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］であって、
    （ａ）（１）該シリカ骨格の表面上にヒドロキシル基を有するシリカ支持体または（２）該ポリマー骨格の表面上にヒドロキシル、アミンもしくはイミン基を有する親水性ポリマー支持体から選択されるクロマトグラフィー媒体支持体を、
    （ｂ）以下の式の反応物質：
    ［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｐ−Ｓｉ（Ｙ）４−ｐ
    ［式中、ｐは、１〜３の数字であり、Ｙは、塩素、臭素、ヨウ素およびアルコキシ基であって、該アルコキシ基中に１〜４個の炭素原子を有するアルコキシ基からなる群から選択され、ｍ、ｎおよびＸは、上記定義したとおりである］と反応させ、
    （ｃ）任意選択で、生じた以下の式の逆相クロマトグラフィー媒体：
    ［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
    を疎水性末端キャップ反応物質と反応させて、該媒体の疎水性末端キャップを提供することを含む方法。
  7. ｐ＝１であり、前記反応物質と反応させたシリカまたは親水性ポリマー支持体の重量比が約２０：〜約２：１の範囲内にある、請求項６に記載の方法。
  8. Ｚがシリカ支持体である、請求項７に記載の方法。
  9. ｐ＝１であり、ＸがＨであり、ｍ＝１であり、ｎ＝３であり、Ｙが塩素であり、生じた媒体を疎水性末端キャップ試薬と反応させる、請求項８に記載の方法。
  10. 前記末端キャップ試薬がヘキサメチルジシラザンである、請求項９に記載の方法。
  11. ｐ＝１であり、Ｘがメトキシであり、ｍ＝０であり、ｎ＝３であり、Ｙが塩素である、請求項８に記載の方法。
  12. 分析物を含有する溶液から該分析物を分離する方法であって、
    （ａ）以下の式の媒体から選択される逆相クロマトグラフィー媒体：
    ［Ｘ−Ｃ６Ｈ４−（Ｏ）ｍ−（ＣＨ２）ｎ］ｑ−Ｚ
    ［式中、ｎは１〜４の数字であり、ｍは０または１であり、ｍが１である場合、Ｘは、Ｈ、１〜６個の炭素原子を有するアルキル基およびフェニル基の群から選択され、ｍが０である場合、Ｘは、１〜６個の炭素原子を有するアルコキシ基およびフェノキシ基から選択され、Ｚは、シリカまたは親水性ポリマークロマトグラフィー支持体の骨格であり、ｑは、該シリカまたは疎水性ポリマークロマトグラフィー支持体の該骨格に付着したリガンドの数に等しい数字であり、ただし、該式の該逆相クロマトグラフィー媒体が疎水性基で末端キャップされていない場合は、ｍ＝１の場合にＸはＨではない］
    および該式の疎水性末端キャップされた媒体を詰めたクロマトグラフィーカラムを提供することと、
    （ｂ）該分析物の溶液を該詰めたカラム内に注入することと、
    （ｃ）該分析物を溶出させることと
    を含む、方法。
  13. Ｚがシリカ支持体である、請求項１２に記載の方法。
  14. Ｚがシリカ支持体であり、ＸがＨであり、ｍ＝１であり、ｎ＝３である、請求項１２に記載の方法。
  15. 前記媒体が疎水性末端キャップを有しており、該疎水性末端キャップがヘキサメチルジシラザンによるものである、請求項１４に記載の方法。
  16. Ｚがシリカ支持体であり、Ｘがメトキシ基であり、ｍ＝０であり、ｎ＝３である、請求項１２に記載の方法。
  17. 前記分析物がアセトアミノフェンであり、該アセトアミノフェンの溶出が水移動相中で起こる、請求項１２に記載の方法。
  18. 前記媒体Ｚがシリカ支持体であり、ＸがＨであり、ｍ＝１であり、ｎ＝３である、請求項１７に記載の方法。
  19. 前記分析物がイオジキサノールであり、該イオジキサノールの溶出が水移動相中で起こる、請求項１２に記載の方法。
  20. 前記媒体Ｚがシリカ支持体であり、Ｘがメトキシ基であり、ｍ＝０であり、ｎ＝３である、請求項１９に記載の方法。
  21. 前記分析物が約２００以下の分子量の分析物であり、該分析物の溶出が水移動相中で起こる、請求項１２に記載の方法。
  22. 前記媒体Ｚがシリカ支持体であり、ＸがＨであり、ｍ＝１であり、ｎ＝３であり、該媒体がヘキサメチルジシラザンによる疎水性末端キャップを有する、請求項２１に記載の方法。
  23. 前記媒体Ｚがシリカ支持体であり、Ｘがメトキシ基であり、ｍ＝０であり、ｎ＝３である、請求項２１に記載の方法。
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