JP2009242431A

JP2009242431A - 加齢に伴う代謝異常症の予防・改善・治療剤

Info

Publication number: JP2009242431A
Application number: JP2009168431A
Authority: JP
Inventors: Hiroshi Tanaka; 博田中; Yasuyuki Seto; 泰幸瀬戸; Tamaki Tejima; 珠紀手島; Shigeru Fujiwara; 茂藤原; Toshiro Suzuki; 登志郎鈴木; Masanori Hosokawa; 昌則細川
Original assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Current assignee: Snow Brand Milk Products Co Ltd
Priority date: 2009-07-17
Filing date: 2009-07-17
Publication date: 2009-10-22
Anticipated expiration: 2022-03-04
Also published as: JP5155961B2

Abstract

【課題】加齢に伴って発生する代謝異常症の予防・改善・治療剤及び／または加齢に伴って発生する代謝異常症の予防・改善・治療作用を有する飲食品の提供。
【解決手段】ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri）に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする代謝以上症の予防・改善・治療剤、さらにこのような有効成分を含有してなる代謝異常症の予防・改善・治療作用を有する飲食品を調製する。
【選択図】図１

Description

本発明は、加齢に伴って発生する代謝異常症の予防・改善・治療剤及び／または加齢に伴って発生する代謝異常症の予防・改善・治療作用を有する飲食品に関する。

老化は生物にとって避けることのできない生命現象である。老化の原因として種々の要因が仮説として挙げられている。例えば、細胞レベルではプログラム説や、エラー破綻説等がある。いずれの説をとっても、細胞内に生じた老化機構による変化が生体全般の老化現象にどのような形で関連しているか不明である。しかし、それらの変化が中枢的な細胞群で生じ、全般に波及効果を及ぼすという考え方や、末梢的に個々の細胞で生じた変化が影響し合って全般的に老化現象に反映するという考え方もある。これらの変化を老化という現象の指標とするために種々の指標が提案されているが、まだ確定的な指標はない。
近年、加齢に伴って発生する種々の代謝障害、代謝異常症、あるいは機能障害を改善することで、寿命の延長が実現され、ひいては種々の老化指標が低下するといわれている。欧米化された食生活の定着に伴い、加齢に伴う日本人の代謝異常は変化している。

近年特に問題となっている加齢にともなって発生する代謝異常が原因と考えられる各種疾患としては、肥満による高脂血症・脳内アミロイド蓄積を伴う老人性痴呆・免疫異常・腸管機能低下・腸内微生物の交代に由来する大腸がん・尿毒症などの腎臓機能障害等である。
肥満には種々の原因が挙げられるが、食餌療法や運動療法以上の効果を示す抜本的な治療策は見出されていない。これまで食餌療法以外に加齢に伴う体脂肪の蓄積抑制剤としては、バラ科植物の果実又はエッセンスを投与する方法（特許文献１）、そば粉由来の組成物を投与する方法（特許文献２）、プロシアニジンを投与する方法（特許文献３）、冬瓜果皮と茄子果皮を投与する方法（特許文献４）、特定の脂肪酸を投与してエネルギー代謝効率を変える方法（特許文献５）等さまざまな方法や剤が提案されている。しかし、本発明で以下に説明する腸内定着性を有するラクトバチルス・ガセリによる脂肪蓄積を抑制させるような提案はない。
老人性痴呆には脳血管性痴呆とアルツハイマー型痴呆の２タイプがあるが、特に近年になり脳内アミロイドの蓄積（アミロイドーシス）を伴うアルツハイマー型痴呆の発生が増加している。アミロイドの蓄積症（アミロイドーシス）を抑制する物質としては、アミロイドβ蛋白質を投与する方法（特許文献６）、アミロイド蛋白質の断片を投与する方法（特許文献７）、アニオンで置換された特定構造を有する糖組成物を投与する方法（特許文献８）等が提案されている。しかし、本発明で以下に説明する腸内定着性を有するラクトバチルス・ガセリによる脳内アミロイド蓄積症を抑制させるような提案はない。

加齢に伴う腎臓機能低下は、老化による糸球体の機能低下やメサンジュウム細胞の機能低下、あるいは老廃物・IgAの蓄積など種々の原因が挙げられている。加齢に伴う腎臓機能の低下を抑制するために、IGF-1またはIGF-3を投与する方法、IPレセプター作動薬を投与する方法（特許文献９）等、新規な治療剤や治療方法が提案されている。しかし、本発明で以下に説明する腸内定着性を有するラクトバチルス・ガセリによる腎臓機能や代謝の低下を抑制させるような提案はない。
上記の疾患はいずれも高齢者の思考や行動を大幅に制限するものであり、その結果、高齢者の生活の質（クオリティー・オブ・ライフ：QOL）を低下させている。
これらの疾患の症状を改善するための治療薬は種々提案され実用化されているが、高齢者のQOLを抜本的に改善するものではない。

特開平８−198768号公報特開平９−183735号公報特開平９−291039号公報特開平11-164668号公報特開2001−286268号公報特表平６−507585号公報特表平11−500462号公報特表2001−513569号公報特開2000−191523号公報

本発明者らは、ヒト腸管内に定着性を有する乳酸菌の研究を行っていたところ、腸管内定着性を有する乳酸菌、特にラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillusgasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を投与すると、これらの微生物は腸管内に定着することによって宿主に作用し、実験動物においては顕著な寿命延長をもたらすことを見出した。さらに研究を進めた結果、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)を加齢動物に投与すると、腸管内に定着したラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)が宿主に作用して、加齢に伴う代謝異常を改善し、腎臓機能の低下や悪化を抑制し、肥満の原因となる脂質代謝を改善し、さらに脳内アミロイドの蓄積を抑制するという驚くべき効果を有することを見出した。その結果、加齢に伴うQOLは明らかに向上することを見出し、本発明を完成するに到った。
従って本発明は、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする代謝異常症の予防・改善・治療剤を提供することを課題とする。
さらにまた本発明は、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を添加した加齢に伴う代謝異常症の予防・改善・治療作用を有する飲食品を提供することを課題とする。

本発明者らは、従来から種々の発酵乳の研究を行っていたところ、これらの発酵乳から分離された乳酸菌やヒト由来の乳酸菌の中で特にラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)が従来に見られない高いヒト腸管内定着性を有していることを見出し、さらにこのラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)が、従来知られていなかった腸管定着性によって加齢に伴う代謝異常を改善し、その結果、腎臓機能の低下や悪化を抑制し、肥満の原因となる脂質の蓄積を低下させ、さらに脳内アミロイドの蓄積を抑制し、寿命を延長させることを見出し、上記課題の解決に成功した。

本発明は、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする加齢に伴う代謝異常症の予防・改善・治療剤に関する。
また本発明は、このような有効成分を添加した加齢に伴う代謝異常症の予防・改善・治療作用を有する飲食品に関する。
即ち本発明は、特許請求範囲に記載した下記の構成からなる発明である。

（１）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする代謝異常症の予防・改善・治療剤。
（２）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌がヒト腸管内定着性を有するラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)である（１）記載の代謝異常症の予防・改善・治療剤。
（３）代謝異常症が腎臓機能異常症、脳内アミロイドーシス、脂質代謝異常症である（１）または（２）記載の代謝異常症の予防・改善・治療剤。
（４）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物が発酵乳である（１）〜（３）のいずれかに記載の代謝異常症の予防・改善・治療剤。
（５）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌がラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)・SBT2055（FERM P-15535）である（１）〜（４）のいずれかに記載の代謝異常症の予防・改善・治療剤。
（６）ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を添加した代謝異常症の予防・改善・治療作用を有する飲食品。

本発明によれば、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする代謝異常症の予防・改善・治療剤と代謝異常症の予防・改善・治療作用を有する飲食品を提供することができる。
本発明によって提供される代謝異常症の予防・改善・治療剤は、毒性および副作用が極めて少なく、また、食品素材としても有用である。

実験動物の寿命を示す。体重増加曲線を示す。糞便内ビフィドバクテリウム数を示す。糞便内クロストリディウム数を示す。尿排泄量の変化を示す。尿中8-OHDG排泄量を示す。脳内アミロイドの蓄積量を示す。体重と後腹壁脂肪重量の相関関係解析図を示す。動物の自立起動運動測定結果を示す。血糖値の測定結果を示す。ヘルパーＴ細胞構成比率を示す。盲腸内ｐＨを示す。糞便内IgAの変動値を示す。飼料効率を示す。

本発明は、上記した課題を解決するためになされたものであって、本発明者らは、目的とする乳酸菌をスクリーニングするに際し、次のような基準を新たに設定し目的に合致する株を選定した。すなわち、本発明者らは、発酵乳やヒト由来の数多くのラクトバチルス・ガセリのうち、胃酸耐性が高い、低ｐＨ条件下での生育が良好である、ヒト腸管へ高い定着性を示す、ヒト腸管細胞親和性を示す、胆汁酸耐性がある、腸管内に定着することによって加齢に伴う種々の代謝異常を予防・改善・治療する効果を有する、食品に適用した際に生残性が高く、香味、物性も優れている等々の条件を設定し、菌株の選定につき鋭意研究を重ねた。本条件によってスクリーニングした結果、これらの条件に合致する菌株として以下菌株を選択することができた。なお、この菌株は、下記の寄託番号により独立行政法人産業技術総合研究所特許微生物寄託センターに寄託されている。

菌株
ラクトバチルス・ガセリ Lactobacillus gasseri SBT2055 FERM P-15535
この菌株は、ヒト腸管細胞に高い親和性を有し、経口で投与した時、生存して腸管内に到達することができ長期間腸管内に常在することが可能であり、腸管内生育することで宿主に作用し加齢に伴う代謝異常を予防・改善・治療する。体外から投与したラクトバチルス・ガセリに（Lactobacillus gasseri)属する乳酸菌が腸内に定着し、このような生理効果を示すことは全く知られておらず、本発明者らによって始めて明らかにされた。

さらに本発明では、上記寄託菌株に限らずヒトや発酵乳から分離されるラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)であって、上記の作用を示すものであれば、いずれのものでも使用できる。
次にこれらの乳酸菌の培養方法を記す。
本発明のラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)の培地には、乳培地または乳成分を含む培地、これを含まない半合成培地等、種々の培地を用いることができる。このような培地としては、脱脂乳を還元して加熱殺菌した還元脱脂乳培地を例示することができる。
培養法は、静置培養またはｐＨを一定にコントロールした中和培養で行うが、菌が良好に生育する条件であれば特に培養法に制限はない。

本発明は、上述のようにして得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする。また乾燥した粉末を有効成分としてもよい。これらの乾燥は凍結乾燥で行なうことが菌体を変質させることなく乾燥することができるので好ましい。
これらの有効成分は経口摂取することが望ましい。また、これらの粉末は乳糖等の適当な賦形剤と混合し、粉剤、錠剤、丸剤、カプセル剤または粒剤等として経口投与することができる。投与量は、投与対象者の症状、年齢等を考慮してそれぞれ個別に適宜決定されるが、通常成人１日当たり乾燥物として0.5〜10ｇであり、これを１日数回に分けて投与するとよい。特に好ましくは、それぞれの株を生菌として、成人一人当たり10⁸〜10¹²cfu／日投与することで本発明の目的とする効果を発揮させることが可能となる。このようにして摂取することによって腸管内に定着し所望の効果を発揮する。

また、本発明の有効成分は、飲食品の製造工程中に原料に添加してもよい。飲食品としてはどのような飲食品でもよく、その例として、乳飲料、発酵乳、果汁飲料、ゼリー、キャンディー、乳製品、マヨネーズ等の卵加工品、バターケーキ等の菓子パン類等の食品を挙げることができる。但し、本発明の特性として乳酸菌が生存した状態で腸管に定着することが必要であり、過度の加熱を避けることが好ましい。また、マイクロカプセル等の従来技術を採用して、加熱を避ける手段を講じてもよい。
さらにまた、本発明における飲食品は、前述したラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)の菌株を使用して乳酸発酵を行なって製造されたヨーグルト等であっても良い。
以下に本発明に用いる乳酸菌株として、ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)・SBT2055(LG2055)を用いた試験例を示し、菌学的性質及びインビトロ、インビボによる効果を具体的に説明する。しかし、本発明はこの記載内容に限定されるものではない。
[試験例]

LG2055株の性状
１．菌学的性状
（１）菌形
LBS寒天平板培地を用いて37℃、48時間嫌気培養後の結果を示す。
形状：桿菌
大きさ：0.5-1×3-4μm
連鎖したもの多数
（２）グラム染色性陽性
（３）コロニー形態
形状：円形
周縁：波状
大きさ：直径2-3mm
色調：白色
表面：円滑
（４）芽胞形成陰性
（５）ガス産生なし
（６）運動性なし
（７）カタラーゼ活性陰性
（８）脱脂乳凝固性凝固
（９）ゼラチン液化性なし
（１０）硝酸塩還元性なし
（１１）インドール産性なし
（１２）硫化水素産性なし

２．糖の発酵性
市販の細菌同定用キット（アピ50CH、ビオメリュー社）他にて糖の発酵性を検討した結果を以下に記載する。
グリセロール −
エリスリトール −
D-アラビノース −
L-アラビノース＋
リボース −
D−キシロース −
L−キシロース −
アド二トール −
β−メチル−D−キシロシド −
ガラクト-ス＋
D−グルコース＋
L-フルクト-ス＋
D-マンノース＋
L-ソルボース −
ラムノース −
ダルシトール −
イノシトール −
マンニトール −
ソルビトール −
α−メチル− D−マンノシド −
α−メチル− D−グルコシド −
N-アセチル−グルコサミン＋
アミグダリン＋
アルブチン＋
エスクリン＋
サリシン＋
セロビオース＋
マルトース＋
ラクト-ス＋
メリビオース −
サッカロース＋
トレハロース＋
イヌリン −
メレジトース −
D-ラフィノース −
アミドン −
グリコーゲン −
キシリトール −
β−ゲンチオビオース＋
D-ツラノース −
D-リキソース −
D-タガトース＋
D-アラビトール −
L-アラビトール −
グルコネート −
２−ケトーグルコネート −
５−ケトーグルコネート −
（＋は発酵性有りを示し、−は発酵性なしを示す。）

上記の分類学的性状と糖の発酵性は、典型的なラクトバチルス・アシドフィルス複合菌種（Lactobacillus acidophilus complex）の性状を示した。

次いで、以下の通りDNA相同性試験による確認試験を実施した。
DNA相同性試験
以下に記載したラクトバチルスの基準株、被験菌LG2055株、そしてコントロールとして、大腸菌（Escherichia. coli）のDNAを抽出、精製した。

LG2055株のDNA同士の相同性を100％、LG2055株と大腸菌とのDNA相同性を０％としたときの、LG2055株と各基準株のDNA相同性をDNAハイブリダイゼーション法により検討した。その結果、LG2055株はラクトバチルス・ガセリJCM1131株と90％以上の相同性を有していたため、LG2055株はラクトバチルス・ガセリと同定された。

胃酸耐性
胃酸耐性試験は瀧口らの方法（腸内細菌学雑誌 14.11-18．2000）に従ってｐＨ2.0の人工胃液を調製し胃酸耐性試験を行ったところLG2055株は３時間以上生残した。

人工腸液耐性
瀧口らの方法（腸内細菌学雑誌 14.11-18．2000）に従って胆汁末を含む人工腸液を調製し、これに前記の人工胃液処理を行ったLG2055株を加えて耐性を試験したところ、20時間以上の生存性を示した。LG2055株は、消化管を通過し、大腸まで生存して到達することが確認された。

ヒトの腸管通過能と腸内定着性
無脂乳固形9.5％、乳脂肪3.0％の乳にLG2055のスターターを４％接種して39度で４時間発酵させた発酵乳を健康な成人ボランティア42名に４週間、毎日100ｇを１日１回食させて腸内菌の変化を観察した。試験期間中は腸内菌に影響のある食品やオリゴ糖、薬品の摂取を禁ずる以外は自由に食事をさせて評価を行った。試験前は検出されなかったLG2055株がすべての被験者から４週間後には検出され、両株が高い腸管内定着性を有することがわかった。

動物試験
Ａ.インビボでの実験動物の寿命に与える影響試験
１．乳酸菌脱脂乳培養の調製
LG2055株を用いた。乳酸菌は、115℃、20分間の滅菌処理をした0.5％酵母エキス（アサヒビール食品社製）添加11.55％脱脂乳培地にて、37℃、16時間培養した。得られた培養物は凍結乾燥後、乳鉢で粉砕した。

２．試験飼料の調製
表１にAIN-93M（オリエンタル酵母工業社製）に準拠した食餌組成を示した。この飼料に５％脱脂乳または上記脱脂乳乳酸菌培養物を添加した。

３．試験動物
５週齢の老化促進モデルであるSenescence-Accelerated Mouse（SAM）P8系雌マウス（日本SLC社より入手）を２群、各群30とした。AIN-93Mにて１週間予備飼育後、上記の試験飼料で死亡するまで飼育した。この間、イオン交換水及び飼料（７ｇから８ｇ以内で）は自由摂取させた。

４．体重測定
飼育期間中、週１回体重を測定した。５週齢から60週齢までの体重について分割区法による分散分析を行った。

５．食餌摂取量測定法
食餌摂取量は約４週間に１回測定した。予め秤量した飼料を与え、翌日同時間帯に容器中にある餌残量を測定し、１日当たりの食餌摂取量を算出した。

６．フローラ解析
新鮮な糞便を採取し、「嫌気性菌の分離と同定法」（菜根出版）に記載されている光岡らの方法に準拠し、５週齢（初発値）、３ヶ月齢、５ヶ月齢、７ヶ月齢、10ヶ月齢、さらに12ヶ月齢において、腸内フローラ解析を行った。得られたデータについては、分割区法による分散分析を行った。

Ｂ．老化指標に与える影響についての試験（40週齢時の生体機能）
１．乳酸菌脱脂乳培養物の調製
前記Ａと同様にLG2055株を用いた。乳酸菌は、115℃、20分間の滅菌処理をした0.5％酵母エキス（アサヒビール食品社製）添加11.55％脱脂乳培地にて、37℃、16時間培養した。得られた培養物は凍結乾燥後、乳鉢で粉砕した。

２．試験飼料
前記と同様にAIN-93M（オリエンタル酵母工業社製）に準拠した食餌を調整し、この飼料に５％脱脂乳または上記脱脂乳乳酸菌培養物を添加した。

３．実験動物
５週齢のSAM P8系雌マウス（日本SLC社より入手）を２群、各群10匹として用いた。AIN-93Mにて1週間予備飼育後、上記の試験飼料で36週飼育した。この間、イオン交換水及び飼料は自由摂取させた。40週齢まで飼育した後、約16時間絶食させ、ネンブタール（大日本製薬社製）麻酔下に開腹し、下大静脈採血によって屠殺した。

４．体重測定
飼育期間中、週1回体重を測定した。得られたデータについては、分割区法による分散分析を行った。

５．食餌摂取量測定法
食餌摂取量の測定は、幼若時においては毎週、後に約１ヶ月に１回（１週）の割合で測定した。予め秤量した飼料を与え、翌日同時間帯に容器中にある餌残量を測定し、１日当たりの食餌摂取量を算出した。

６．代謝ケージ
飼育期間中、４回代謝ケージにて飼育し、採尿、採糞を行った。代謝ケージでの飼育は、14週齢、22週齢、29週齢及び38週齢において行った。２日間の慣らし飼育の後、３日目から４日目にかけて約24時間、糞便ならびに尿を採取した。期間中は、飲料水、飼料摂取量ならびに体重もモニターした。

７．尿8-ヒドロキシデオキシグアノシンの測定
代謝ケージ飼育にて得られた尿について、8-OHDG測定用ELISAキット（日本老化制御研究所製）を用いて測定した。

８．脳内アミロイド蓄積量の測定
屠殺直後に解剖し、大脳を摘出した。得られた大脳をプロテインインヒビターミクスチャー（SIGMA社製）0.5％添加PBSを用い、テフロン（登録商標）ホモジナイザーにて均質化し、アミロイドベータ（1-42）測定キット（免疫生物研究所製）を用いて測定した。

９．後腹壁脂肪重量
屠殺直後に解剖し、後腹壁脂肪を左右各々摘出し、精密天秤METTLER AE240（日本シイベルヘグナー社製）にて重量を測定した。

１０．起立運動ならびに自発運動測定法
40週齢において、マウスの自発運動ならびに起立運動を測定した。30分間におけるコイル間移動回数、ならびに起立回数を計測した。計測には、実験動物運動量測定装置（室町機械社製）を用いた。

１１．血漿分析
約16時間絶食させた後、ネンブタール麻酔下にて、下大静脈から全採血後、抗凝固剤処理（ヘパリン10単位／ml）後、遠心分離により血漿を得た。その後、生化学自動分析装置FDC5500（富士フィルムメディカル社製）を用いて測定した。

１２．糞便中IgAの測定
代謝ケージ飼育にて得られた糞便について、遠心エバポレーターCVE-200D（EYELA社製）にて乾燥した後、重量を測定し、プロテインインヒビター（SIGMA社製）0.5％添加PBSを加え、糞便を0.05g／ml濃度に分散し、ホモジナイザー（池本理化工業社製）にて均質化した。この分散液を、４℃、15,000rpmにて10分間遠心し、上清をマウスIgA測定に供した。マウスIgA測定用ELISAキット（BETHYL社製）を用いて測定した。

１３．血球分析
マウスを約16時間絶食させた後、ネンブタール麻酔下、抗凝固剤処理（ヘパリン10単位／ml）をしたシリンジを用い、下大静脈から全採血後、全自動血球計数器MEK−6158（日本光電社製）を用いて測定した。

１４． Th１／Th２細胞比の測定
脾臓を摘出したのち無菌的につぶし、25mMHEPES-RPMIを加えながら、脾臓細胞懸濁液を調製する。この脾臓細胞懸濁液を定法に従い、セルストレイナーを通して単細胞懸濁液とした。EPICS Application Note８の方法に従い、脾臓リンパ球の細胞表面CD３、細胞内IL４、細胞内INF-gammaの蛍光染色を行った。この後、Coulter EPICS XL にて解析を行い、CD３陽性細胞比、Th１／Th２細胞比を算出した。

試験結果
Ａ．インビボでの実験動物の寿命に与える影響についての試験結果
図１に実験に用いたマウスの寿命を示した。コントロールに比べ本発明の発酵乳（LG2055）投与群が寿命延長に効果を示すことが明らかになった。
また体重増加曲線を比較した場合（図２）も大きな相違は認められなかった。

Ｂ．老化指標に与える影響についての試験結果
表２に、12ヶ月齢に達するまでの腸内フローラ変化の解析結果を示した。本発明の発酵乳（LG2055）投与群による糞便内ビフィドバクテリウム属の有意な増加ならびにレシチナーゼ陰性クロストリディウム属の著しい減少を示した。両菌群共に時間依存性の変化が認められた。

本発明の発酵乳（LG2055）投与群では生活齢に伴ってビフィドバクテリウム属の菌数が増加することが明らかになった（図３）。一方、クロストリディウム属の菌数は、本発明の発酵乳（LG2055）投与群において著しく低下することが確認された（図４）。

図５に、実験期間を通して観察した尿の排泄量の解析結果を示した。本発明の発酵乳（LG2055株）投与群では、尿の排泄量が増加した。

図６に、尿中に排泄される酸化マーカー（8-OHDG）の排泄量を示した。代謝の盛んな時期には両群とも排泄が盛んになるが、全試験期間を通して本発明の発酵乳（LG2055株）投与群の排泄量が高いことが明かとなった。
以上の尿排泄量と8-OHDG排泄量の測定結果から、本発明の発酵乳（LG2055株含有）は、加齢に伴う腎臓の機能の低下を予防・改善することが明らかとなった。

図７に、大脳のアミロイド蓄積量の測定結果を示す。本発明の発酵乳（LG2055株）投与群において、加齢に伴うアミロイド蓄積の抑制が確認され、アミロイドーシスの予防・改善効果が確認できた。
また、以下に示す起立運動試験の結果と合わせて痴呆症の予防・改善効果を確認できた。

図８に、後腹壁脂肪蓄積量の比較結果を示す。本発明の発酵乳（LG2055株）投与群において、著しく低下することが確認され、加齢に伴う脂質代謝異常を改善することが明かとなった。

図９に、マウスの自発運動の観察結果を示す。コントロール群で異常な動きが観察され、本発明の発酵乳（LG2055株）投与群ではこのような異常な行動は少なかった。本発明の発酵乳（LG2055株含有）により、脳内アミロイド蓄積が低下し、加齢に伴う痴呆抑制に効果があることが判明した。

図１０に、血糖値の測定結果を示す。本発明の発酵乳（LG2055株）投与群により、加齢に伴う高血糖の発生を抑制できた。

図１１に、脾臓ヘルパーＴ細胞レパートリーの解析結果を示す。本発明の発酵乳（LG2055株）投与群において、細胞性免疫機能の活性化が生じていることが確認された。同時に脾臓内CD3陽性細胞比率（Ｔ細胞）も高くなっていることが確認された。

図１２に、盲腸内容ｐＨ測定結果を示す。本発明の発酵乳（LG2055投与群）により、腸内ｐＨを低下させ、腸内代謝を改善することが確認された。

図１３に、糞便IgAの排泄量を示す。糞便IgAの排泄量は、本発明の発酵乳（LG2055株）投与群において抑制された。

図１４に、試験期間を通した飼料効率を示す。試験期間を通した飼料効率は、本発明の発酵乳（LG2055株）投与群が有意に高いことが確認された。一方、図14から加齢による飼料効率のマイナス化が抑制されていることが判明した。この結果は、「元気に生きてぽくっりなくなる」ことを立証するものであり、QOLの維持・改善効果を確認することができた。

１．乾燥粉末
LG2055株を10％還元脱脂乳培地（121℃、10分加熱）で培養し、本培養物を凍結乾燥し粉末化し、本発明の予防改善治療剤を調製した（Ａ）。

２．発酵乳
LG2055株をMRS液体培地にて培養した。対数増殖期にある各培養液を、0.35％の酵母エキスを添加した10％還元脱脂乳（115℃、20分間滅菌）に１％接種し、個々マザーカルチャーを作成した。
これをヨーグルトミックス（10％の還元脱脂乳を添加し、100℃にて10分間加熱したもの）に各2.5％添加して調製した。発酵は37℃で行い、乳酸酸度0.85に到達した時点で冷却し、発酵を終了させ、本発明の予防改善治療作用を有する発酵乳を調製した（Ｂ）。

３．製剤例１
LG2055株の液体培養物から対数増殖期にある菌体を４℃、7,000 rpmで15分間遠心分離して滅菌水による洗浄を行い、これを３回繰り返して洗浄菌体を得た。これを凍結乾燥処理して菌体粉末を得た。この菌体粉末１部に脱脂乳４部を混合し、この粉末を打錠機により１ｇずつ定法により打錠して、菌体200ｍｇを含む錠剤を調製した。また、上記のLG2055株を含有する発酵乳を凍結乾燥し、得られた粉末を用いて直接打錠した。

４．カプセル化剤
凍結乾燥粉末を散剤化した後、造粒により顆粒状とした後、空カプセルに10mgづつ充填しカプセル剤とした。

５．製剤例２
LG2055株をMRS液体培地（Difco社製）５Ｌに接種後、37℃、18時間静置培養を行った。LG2055株を脱脂乳５Ｌに接種後、37℃、18時間静置培養を行った。培養終了後、7,000rpmで15分間遠心分離を行い、培養液の１／50量のそれぞれの濃縮菌体を得た。次いで、この濃縮菌体を脱脂粉乳10重量％、グルタミン酸ソーダ１重量％を含む分散媒と同量混合し、ｐＨ７に調整後、凍結乾燥を行った。得られた凍結乾燥物を60メッシュのフルイで整粒化し、凍結乾燥菌末を得た。
第13改正日本薬局方解説書製剤総則「散剤」の規定に準拠し、上記５で得られた凍結乾燥菌末１ｇにラクトース（日局）400ｇ、バレイショデンプン（日局）600ｇを加えて均一に混合し、散剤を製造した。

６．製剤例３
次の配合により錠剤を製造した。
（１）LG2055株の脱脂粉乳培地における培養物の凍結乾燥物50ｇ、
（２）ラクトース90ｇ、
（３）コーンスターチ29ｇ、
（４）ステアリン酸マグネシウム１ｇ、
この混合物を圧縮錠剤機により圧縮して、１錠あたり有効成分を40ｍｇ含有する錠剤100個を製造した。

７．製剤例４
LG2055株をホエー培地（0.5％酵母エキス、0.1％トリプチケースペプトン添加）で培養後遠心分離で菌体を回収した。この培養物１ｇを乳糖５ｇと混合し顆粒状に成形して顆粒剤を得た。

８．LG2055を含む食品
（１）飲料
洗浄菌体の凍結乾燥粉末をLG2055株が各々10⁸個以上含まれるように200 mlの牛乳と混合して、本発明の予防改善治療剤入り飲料を得た。良好な風味を有していた。
（２）醗酵乳
LG2055株をヨーグルトミックス（生乳に２％脱脂乳を添加し、100℃、10分加熱した）に接種し、20℃で24時間培養した。紙カップに充填し冷却後、ヨーグルトとした製品中のLG2055株の生菌数濃度は、100ｇ当たり10⁸個以上であった。

（３）発酵バター
発酵バター（ｗｔ／ｗｔ）
乳脂肪９６．８％
食塩１．２
１．で得られた試料(Ａ) ２

（４）バターケーキ
バターケーキ（ｗｔ／ｗｔ）
バター２４％
薄力粉２４
砂糖２４
全卵２４
２．で得られた試料（Ｂ）４
香料少々

（５）マヨネーズ
マヨネーズ（ｗｔ／ｗｔ）
サラダ油６５％
卵黄１７
食酢１０
１．で得られた試料（Ａ）３
香辛料４．４
グルタミン酸モノナトリウム０．６

Claims

ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする痴呆症の予防・改善・治療剤。
ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物が発酵乳である請求項１に記載の痴呆症の予防・改善・治療剤。
ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌がラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)・SBT2055（以下LG2055という）（FERM P-15535）である請求項１又は２に記載の痴呆症の予防・改善・治療剤。
ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物及び／または菌体を有効成分とする脂肪蓄積低下剤。
ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌を培養して得られる培養物が発酵乳である請求項４に記載の脂肪蓄積低下剤。
ラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)に属する乳酸菌がラクトバチルス・ガセリ（Lactobacillus gasseri)・SBT2055（以下LG2055という）（FERM P-15535）である請求項４又は５に記載の脂肪蓄積低下剤。