JP2004512371A

JP2004512371A - Ｔｉｒｃ７リガンド結合の阻害剤を得るための方法およびその使用

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Publication number: JP2004512371A
Application number: JP2002538960A
Authority: JP
Inventors: ウトゥク，　ナラン
Original assignee: ウトゥク　ナラン
Priority date: 2000-10-30
Filing date: 2001-10-29
Publication date: 2004-04-22
Also published as: US20040072780A1; DE60121811T2; ES2269505T3; WO2002036149A2; ATE333889T1; WO2002036149A3; DE60121811D1; EP1353687B1; CA2425583A1; EP1353687A2; AU2002221775B2; AU2177502A

Abstract

対象において、移植片対宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症の治療用の、腫瘍の治療用の、創傷治癒の改良用の、または免疫非応答性の誘導または維持用の、医薬組成物を調製するための、ＨＬＡ（ヒト白血球関連抗原）クラスＩＩアルファ（α）鎖のごときそのリガンドとＴＩＲＣ７との相互作用に干渉する作用物質の使用が提供される。加えて、そのような作用物質を同定及び取得するための方法が記載される。さらに、ＴＩＲＣ７リガンドの存在または不存在を判定することによって免疫疾患または腫瘍を診断する方法が提供される。

Description

【０００１】
本発明は、対象における、移植片宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症の治療のための、腫瘍の治療のための、創傷治癒の改良のための、または免疫非応答性を誘導または維持するための医薬組成物を調製するための、ＴＩＲＣ７とそのリガンドとの相互作用に干渉する阻害剤の使用に関する。加えて、本発明は、免疫疾患の緩和、治療および予防用の医薬組成物の調製のための、該阻害剤をコードする核酸分子または該核酸分子を含むベクターの使用に関する。加えて、本発明は、ＴＩＲＣ７およびそのリガンドの間の相互作用に干渉することができる作用物質を同定する方法、および／または対象において免疫応答の調節に関与する（ポリ）ペプチドを同定する方法を提供する。さらなる実施態様において、本発明は、ここに定義され、または本発明の方法によって同定される阻害剤、作用物質または（ポリ）ペプチドを精製する方法に関する。さらに、本発明は、本明細書中に開示する方法によって同定および／または精製される作用物質、（ポリ）ペプチドを含む医薬組成物の調製に関する。さらなる実施態様において、本発明は、医薬組成物を調製するための、本明細書中に開示する方法によって同定および／または精製される阻害剤、作用物質または（ポリ）ペプチドの使用に関する。
【０００２】
本明細書のテキストを通じていくつかの書類が引用される。（いずれかの製造業者の仕様書、指示書等を含む）本明細書中で引用する書類の各々を、ここに引用によって援用する。しかしながら、引用されたいずれの書類も、事実、本発明に関する先行技術であることを認容するものではない。
【０００３】
Ｔ細胞の活性化が多数のシグナル経路および遺伝子発現の連続的変化を含む一連のプロセスであり、その結果、Ｔ細胞は識別される亜集団、すなわち、Ｔｈ１およびＴｈ２に分化し、これらは、サイトカイン産生のそのパターンによって識別でき、細胞免疫応答の態様を特徴付ける。Ｔ細胞の応答は、抗原提示細胞（ＡＰＣ）の表面の主要組織適合性複合体（ＭＨＣ）分子によって提示されたペプチドと抗原特異的Ｔ細胞受容体（ＴＣＲ）との相互作用によって開始される。さらなるシグナルが、集合的に、共刺激シグナル（Ｐｅｒｅｚ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ６（１９９７年），４１１）と呼ばれるＣＤ２８／ＣＴＬＡ４およびＢ７、ＣＤ４０／ＣＤ４０Ｌ、ＬＦＡ−１およびＩＣＡＭ−１（Ｌｅｎｓｃｈｏｗ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５７（１９９２年），７８９−７９２；Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１１（１９９３年），１９１−２１２；Ｘｕ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ１（１９９４年），４２３−４３１；Ｂａｃｈｍａｎｎ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ７（１９９７年），５４９−５５７；Ｓｃｈｗａｒｔｚ，Ｃｅｌｌ７１（１９９２年），１０６５−１０６８）のごとき多数の膜タンパク質によって媒介される受容体―リガンドの相互作用のネットワークによって供給される。これらの膜タンパク質は区別される方法でＴ細胞の活性化を変化させ得（Ｂａｃｈｍａｎｎ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ７（１９９７年），５４９−５５７）、これらの分子によって供給される陽性および陰性シグナルの統合によって免疫応答を調節する（Ｂｌｕｅｓｔｏｎｅ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ２（１９９５年），５５５−５５９；Ｐｅｒｅｚ，Ｉｍｍｕｎｉｔｙ６（１９９７年），４１１）。細胞の免疫応答を調節するのに効果的な作用物質の多くはＴ細胞受容体と干渉し（Ｃｏｓｉｍｉ，Ｔｒａｎｐｌａｎｔａｔｉｏｎ３２（１９８１年），５３５−５３９）、共刺激シグナリングをブロックし（Ｌａｒｓｅｎ，Ｎａｔｕｒｅ３８１（１９９６年），４３４−４３８；ＢｌａｚａｒＪ．Ｉｍｍｕｎｏ．１５７（１９９６年），３２５０−３２５９；Ｋｉｒｋ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ９４（１９９７年），８７８９−８７９４；Ｌｉｎｓｌｅｙ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２５７（１９９２年），７９２−９５；Ｔｕｒｋａ，Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ８９（１９９２年），１１１０２−１１１０５）、またはこれらの初期細胞膜トリガーから下流の細胞内活性化シグナルを阻害する（ＳｃｈｒｅｉｂｅｒａｎｄＣｒａｂｔｒｅｅ，ＩｍｍｕｎｏｌｏｇｙＴｏｄａｙ１３（１９９２年），１３６−４２）のいずれかである。器官移植または自己免疫疾患におけるＴ細胞活性化の治療的予防は、現在、下流の細胞内事象に干渉する汎免疫抑制薬物に頼っている。免疫応答の特異的調節は、免疫学的研究における長年の目標のままである。
【０００４】
ヒト身体の免疫応答に関係する疾患のための治療手段の必要性に鑑み、本発明の技術的課題は、対象における免疫非応答性のごとき免疫応答の調節のための手段および方法を提供することにある。当該技術的に対する解決は、請求項で特徴付けられる実施態様を提供することによって達成される。
【０００５】
従って、１つの態様において、本発明は、対象における、移植片宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症の治療のための、腫瘍の治療のための、創傷治癒の改良のための、または免疫非応答性を誘導または維持するための医薬組成物を調製するための、ＴＩＲＣ７とそのリガンドとの相互作用に干渉する阻害剤の使用に関する。
【０００６】
本発明に関して使用される用語「ＴＩＲＣ７」は、Ｔ細胞の活性化および／または増殖のシグナル変換に関与し、好ましくは、可溶性型において、混合リンパ球培養においてアロ活性化に応答して、または外因的に前記培養に添加された場合にマイトジェンに応答して、Ｔ細胞増殖を阻害または抑制することができるタンパク質を示す。Ｉｎｖｉｔｒｏで翻訳されたＴＩＲＣ７タンパク質は、混合リンパ球培養においてアロ活性化に応答して、またはマイトジェンに応答して、Ｔ細胞の増殖を用量依存的に効果的に抑制することができる。ＴＩＲＣ７は当業者に知られており、とりわけ、ＷＯ９９／１１７８２およびＵｔｋｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ　９（１９９８年），５０９−５１８に記載されている。
【０００７】
用語「ＴＩＲＣ７とそのリガンドとの相互作用に干渉する阻害剤」とは、本発明においては、ＴＩＲＣ７とその対応するリガンドとの相互作用を阻害および／または調節できる作用物質を意味する。ＴＩＲＣ７とそのリガンドとの相互作用は免疫応答の過程で重要な事象を調節するので、そのような阻害剤は免疫応答を調節することもできるはずである。本発明では、前記阻害剤は、好ましくは、例えば、リガンドに特異的に結合することによってＴＩＲＣ７−リガンドと相互作用する。「特異的に結合する」とは「特異的に相互作用する」を意味し、それにより、該相互作用は、とりわけ、共有結合的、非共有結合的および／または疎水性的であり得る。そのような阻害剤は本明細書中にて後に定義されるか、本明細書中に記載する方法によって得ることができる。潜在的阻害剤は、該リガンド上の関連する部位に結合し、それに干渉しおよび／またはそれを占める小分子を含む。小さな分子の例は小さなペプチドまたはペプチド様分子を含む。
【０００８】
用語「免疫非応答性」は、Ｔ細胞またはＢ細胞、ＮＫ細胞、単球および／またはマクロファージのような免疫細胞サブセットの非応答性を含む。免疫非応答性は、自己免疫疾患を有する対象においてＴＩＲＣ７に結合する各リガンドタンパク質の刺激をブロックして、自己免疫疾患の徴候を緩和することによって維持することができる。これらの場合、ＴＩＲＣ７またはそのリガンド阻害剤を、免疫非応答性を維持するのに十分な量および期間にて対象に投与される。別法として、免疫非応答性を反転させて、腫瘍を有する対象において腫瘍特異的免疫応答を刺激したり、ワクチンを接種された対象においてワクチンの効率を増強させたりすることができる。例えば、細胞（例えば、腫瘍細胞）を修飾してＴＩＲＣ７リガンドを発現させることができ、あるいは腫瘍を有する対象、または腫瘍の再発を防ぐために外科的に腫瘍が取り除かれた対象にＴＩＲＣ７刺激剤を投与することができる。加えて、抗原特異的応答性は、ＴＩＲＣ７またはそのリガンドを通じて免疫細胞を刺激することによって、Ｉｎｖｉｔｒｏにてアネルギー化免疫細胞に復帰させることができる。Ｉｎｖｉｔｒｏで生じた応答性細胞は、次いで、対象に投与することができる。
【０００９】
用語「治療」、「治療する」などは、本明細書中においては、一般に、所望の薬理学的および／または生理学的効果を得ることを意味するように用いられる。該効果は、その疾病または徴候を完全にまたは部分的に防止する点で予防的であり得るかおよび／または疾病および／または該疾病に帰せられる悪影響を部分的または完全に治癒する点で治療的であり得る。本明細書中で用いる用語「治療」は、哺乳動物、特にヒトにおける病気のいずれの治療も網羅し、（ａ）当該疾病に対する素因があり得るが、未だそれを有すると診断されていない対象において発病するのを妨ぐこと；（ｂ）疾病を阻害すること、すなわち、その進行を阻止すること／または（ｃ）疾病を緩和すること、すなわち、疾病の退行を引き起こすことを含む。
【００１０】
さらに、本明細書中で使用される用語「対象」は、本明細書中に開示する免疫学的疾病の軽減、治療および／または予防が必要な動物に関する。最も好ましくは、該対象はヒトである。
【００１１】
好ましい実施態様において、前記リガンドは、ＨＬＡ−ＤＲα鎖とも言われるＨＬＡ（ヒト白血球関連抗原）クラスＩＩアルファ（α）鎖である。これらの用語は交換可能に使用される。
【００１２】
ＨＬＡクラスＩＩは２つの膜貫通糖タンパク質、アルファおよびベータ鎖のヘテロダイマーである。そのアミノ末端が外方向で、両鎖は、１回の細胞膜貫通を形成する疎水性酸配列によって短い細胞質テールに連結した、各々９０−１００アミノ酸の２つの細胞外ドメインを含む。アルファ鎖において、膜遠位ドメインはアルファ１として知られており、膜近位ドメインはアルファ２として知られている。同様に、ベータ鎖においては、膜遠位ドメインはベータ１として知られており、膜近位ドメインはベータ２として知られている。両膜近位ドメインは、Ｃ１タイプの免疫グロブリンドメインに特徴的な構造を保有する。アルファ１およびベータ１ドメインは多型であって、Ｔ細胞活性化の間にペプチド（１２−２４量体）のＴ細胞受容体への提示で占有される。部位特異的突然変異体を用いた研究によってＨＬＡクラスＩＩ分子の膜近位ベータ２ドメインに結合するＣＤ４の部位がマップされた。
【００１３】
ある種のＨＬＡクラスＩＩ分子の発現およびそれらの多型は、インスリン依存性糖尿病、グットパスツール症候群、尋常性天疱瘡、全身性エリタマートーデス、多発性硬化症、グラーベ病、慢性関節リウマチおよび重症筋無力症のごとき多数の病気に強く関連する。ＨＬＡ多型に関連する病気の多くは能動感染を伴わず、それらの徴候は炎症および／または自己免疫の慢性状態によって引き起こされる。糖尿病の場合、提唱されている１つの一般的メカニズムは、微生物抗原の提示によってＴ細胞が活性化され、引き続き、それに対し活性化前に寛容性であった自己ペプチドと交差反応することである。かくして、コキサッキーウイルス感染は糖尿病と関連付けられており、腸の種々の細菌感染はＨＬＡクラスＩＩ関連病と関連付けられてきた。
【００１４】
感染症においては、ＨＬＡ多型の効果については比較的あまり知られていない。ＡＩＤＳ患者のコホートについての研究から、病気のより速い進行のごときＨＬＡ効果が認められる（Ｒｏｇｅｒら、Ｆａｓｅｂ，１２，１９９８，ｐ．６２５−３２，Ｍａｒｓｈ，ＰａｒｈａｍおよびＢａｒｂｅｒ， “ＴｈｅＨＬＡ−ＦＡＣＳ−Ｂｏｏｋ”，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ（２０００年），３７−９７）。病状の進行に伴い、ヒトの応答は、リンパ球が接触される健康な細胞および組織の正常な成分に対して寛容になる。特に重要なものの内には、個人の免疫系は、その同一個人の細胞の表面に発現された自己ＨＬＡクラスＩおよびＩＩアロタイプに対して寛容性を生じることである。対照的に、個人の免疫系は、器官移植の後のごとき他のヒトによって発現された非自己ＨＬＡアロタイプの数百に対しては寛容とならない。従って、一旦個人が移植を受け、もし受容者およびドナーが細胞表面で発現されたそれらのＨＬＡ抗原型が適合しなければ移植された器官に対する超急性または急性拒絶が起きる確率が高い。
【００１５】
本発明においては、驚くべきことに、添付の実施例に示すごとく、ＨＬＡクラスＩＩα鎖がＴＩＲＣ７と相互作用できることが見出された。従って理論に拘束されるつもりはないが、ＴＩＲＣ７　ＨＬＡクラスＩＩα鎖との間の該結合／相互作用への干渉は、対応する受容体／リガンド相互作用による細胞応答の修飾をもたらす。該修飾は、阻害性ならびに刺激性細胞応答を含むが、それらに限定されない。しかしながら、好ましくは、分子の作用メカニズムの背後にある理論にかかわらず、本発明による使用のための阻害剤は、（１）ＴＩＲＣ７またはそのリガンドに相互作用／結合する、および（２）ＷＯ９９／１１７８２およびＵｔｋｕＲａら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ　９（１９９８年），５０９−５１８に記載されているごとき、アッセイにおいてマイトジェン刺激ＰＢＭＣの増殖を阻害することができることによって特徴付けることができる。好ましくは、前記阻害剤は、例えば、それと該リガンドが相互作用するＴＩＲＣ７の部位を占めることによって、該阻害剤が、該リガンドがＴＩＲＣ７と相互作用するのを妨げるように、該阻害剤はＴＩＲＣ７の該リガンドに、またはＴＩＲＣ７に相互作用／結合する。前記したごとき、好ましくは、該リガンドはＨＬＡクラスＩＩα鎖である。ヒトＭＨＣクラスＩＩ　ＨＬＡ−ＤＲ−アルファ鎖のヌクレオチドおよびアミノ酸配列は当業者に知られており、公のデータベース、例えば、Ｇｅｎｂａｎｋ登録番号Ｖ００５２３およびＭ６０３３４から入手することができる。本発明によって同定されたＨＬＡクラスＩＩα鎖ノヌクレオチドおよびアミノ酸配列は、各々、配列番号：１および配列番号：２に示される。
【００１６】
従って、本発明の好ましい実施態様において、前記阻害剤は：
（ａ）配列番号：２に示されるアミノ酸配列を含む（ポリ）ペプチドまたは（ａ）その断片に結合するおよび／またはそれに干渉する作用物質、
（ｂ）配列番号：１に示されるヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされる（ポリ）ペプチドまたは（ａ）その断片に結合する作用物質、および
（ｃ）（ａ）または（ｂ）に定義される（ポリ）ペプチドまたはその断片の誘導体のアナログ；
よりなる群から選択される。
【００１７】
クラスＩＩ主要組織適合性抗原（ＭＨＣ）は２つの非共有結合したポリペプチド鎖よりなる。内部ジスルフィド結合を含み、それらのアミノ酸配列によって判断されるベータ２、アルファ２鎖はイムノグロブリンスーパーファミリーに属し、アルファ１、ベータ１鎖はＭＨＣクラスＩＩ分子のペプチド結合ドメインである。異なる細胞種でのＭＨＣ分子の発現は、これらの細胞の表面に存在する外来性抗原とＴリンパ球が相互作用できるか否かを決定する。ＭＨＣクラスＩＩ分子はほとんどの免疫および非免疫ヒト細胞で発現される。ＭＨＣ遺伝子産物の発現は、細胞型特異的因子によって、およびＩＦＮ−γのようなサイトカインのような炎症性および免疫性刺激因子によって転写レベルで大いに調節される。マクロファージのごときいくつかの細胞は、サイトカイン、特にＩＦＮ−γによってクラスＩＩ分子を発現するように誘導することができ、他方、他の細胞およびＢリンパ球はクラスＩＩ分子を構成的に発現する。抗原によるＣＤ４ヘルパーＴ細胞の活性化は、Ｔリンパ球以外の細胞の関与を必要とする；これらの細胞は、しばしば、それらの表面でＭＨＣクラスＩＩ分子を発現するアクセサリ細胞と呼ばれる。リンパ球活性化におけるアクササリー細胞の必須の役割は２つの方法に従う：まず、アクセサリ細胞は抗原提示細胞（ＡＰＣ）であり、それらはタンパク質抗原をペプチドに変換し、それらはＣＤ４^＋Ｔ細胞によって認識できるような形態でペプチド−ＭＨＣ複合体を提示する。ＡＰＣによるネイティブタンパク質のＭＨＣ関連ペプチド断片への変換は抗原プロセッシングと呼ばれる。アクセサリ細胞の第２の機能は、Ｔ細胞抗原受容体に結合するペプチド−ＭＨＣ複合体によって開始されたものを超え、刺激をＴ細胞に与えることである。共刺激体活性と呼ばれるこれらの刺激は、アクセサリ細胞の膜結合または分泌産物によってもたらされるＴ細胞の十分な生理学的活性化に必要である。
【００１８】
免疫応答は、ＡＰＣ上のＭＨＣクラスＩまたはＩＩ分子による抗原のＴ細胞への成功した提示に強く依存する。ＣＤ４細胞への不十分な抗原提示の場合、免疫応答は生じない。その代わり、非応答または無視が起こるであろう。これは、感染症ならびに創傷治癒および敗血症などにおいて必要な、外来性粒子を破壊する免疫系の能力のかなりの低下に至るであろう。Ｕｔｋｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ　９（１９９８年）、５０９−５１８によって示されているごとく、特異抗体によるＴＩＲＣ７のターゲッティングは免疫応答を阻害し、ＩＦＮ−γのごときＴＨ−１タイプのリンパ球サイトカインの発現を低下させる。
【００１９】
本発明においては、驚くべきことに、配列番号：２に示したポリペプチドがＴＩＲＣ７と相互作用できるタンパク質であることが見出され、そのｃＤＮＡがＴＩＲＣ７ポリペプチドに対するヒトリンパ球から酵母ツーハイブリッドライブラリーをスクリーニングすることによって単離された。た。前記したごとく配列番号：２、および配列番号；１に示されたそれをコードするヌクレオチド配列はＨＬＡ−ＤＲα−鎖に関する。ＨＬＡ−ＤＲは、添付の実施例に示されたごとくＴＩＲＣ７に結合し／それと相互作用する。従って、理論に拘束されることなく、該結合／相互作用は、対応する受容体／リガンド相互作用に対する細胞応答の修飾に至ると考えられる。該修飾は、限定されるものではないが、阻害性ならびに刺激性細胞応答を含む。
【００２０】
本明細書中で用いられる用語「作用物質（原語：ａｇｅｎｔ）」は、（ポリ）ペプチド、無機および／または有機物質ならびに合成的に合成された分子のような分子に関する。例えば、前記「作用物質」はペプチド、無機および／または有機物質ような「小さな分子」、またはＤ−アミノ酸を含むペプチド−アナログのようなペプチド−様分子を含むことができる。前記「作用物質」は、特異的（オリゴ）ヌクレオチド、ＰＮＡＳおよび／またはアプタマーのような核酸分子を含むこともできる。本発明では、本明細書中で用いられる用語「作用物質」は、単一の物質、または同一であってもなくてもよい複数の物質であり得る物質も含む。前記作用物質／化合物は、例えば、植物、動物または微生物からの全ての抽出物質中に含まれ得る。
【００２１】
配列番号：２に記載された前記ポリペプチドは、添付の実施例で説明するごとくｃＤＮＡ−クローン「ｃＤＮＡ−スクリーン７」に由来する。本発明においては、ＨＬＡＩＩ−ＤＲに対応する前記ポリペプチドは、配列番号：２に記載された正確なアミノ酸配列のみならず、該アミノ酸配列に対して相同性を示し、本明細書中に開示するごとくＨＬＡＩＩ−ＤＲ分子（「ｃＤＮＡ−スクリーン７」遺伝子産物）として機能することができるアミノ酸配列を含むポリペプチドも含む。これらの相同アミノ酸配列は、とりわけ、ＨＬＡＩＩ−ＤＡの「バリアント（変異体）」を含むことができる。用語「バリアント」は、限定されるものではないが、対立遺伝子バリアント、スプライスバリアント、合成により生産されたバリアントまたは遺伝子工学により作製されたバリアントを含む。これらのバリアントはポリヌクレオチドおよび／またはポリペプチドレベルいずれかで異なっていてもよい。あるいは、天然に生じないバリアントは前記特定の作用物質の結合パートナーとしても構成される。これらの天然に生じないバリアントは、とりわけ、突然変異誘発技術によって、または直接合成によって生産される。従って、前記定義のポリペプチドに結合しおよび／またはそれと干渉する作用物質は、そのようなバリアントと相互作用し、それに結合しおよび／またはそれに干渉することができる作用物質をもいう。従って、本明細書中で用いられる用語「断片」は、前記ＨＬＡＩＩ−ＤＲ−分子に由来し、前記作用物質に結合しおよび／またはそれと相互作用することができるペプチドおよびポリペプチドをいう。
【００２２】
本明細書中で用いられる用語、ポリペプチドまたはその断片の「アナログまたは誘導体」は、ＨＬＡＩＩ−ＤＲおよびＴＩＲＣ７の相互作用を特異的に阻害することができる前記分子の前記定義バリアントとは対照的に配列番号：２に示されるアミノ酸配列および／またはＨＬＡＩＩ−ＤＲのアナログまたは誘導体を意味する。従って、これらのアナログ／誘導体は、とりわけ、通常はＨＬＡＩＩ−ＤＲ−ＴＩＲＣ７相互作用によって媒介される生理学的および／または細胞応答を誘導することができない化学的におよび／または遺伝子学的に修飾されたＨＬＡＩＩ−ＤＲ−分子を含む。本発明においては、これらのアナログおよび／または誘導体は、前記ＨＬＡＩＩ−ＤＲ−ＴＩＲＣ７相互作用に干渉することができるさらなる分子またはポリペプチド−断片と組み合わされてＨＬＡＩＩ−ＤＲおよび／またはその断片を含む融合タンパク質および／またはモザイクポリペプチドであってもよい。当業者であれば、そのようなアナログ／誘導体、融合タンパク質および／またはモザイクポリペプチドの調製のための方法／技術を十分に知っている；Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（Ｍｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇ；ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ．ＳｅｃｏｎｄＥｄｉｔｉｏｎ，ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ；ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＮＹ（１９８９年））ｏｒＯｘｅｎｄｅｒａｎｄＦｏｘ（１９８７年） “Ｐｒｏｔｅｉｎｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ”，ＬｉｓｓＮｅｗＹｏｒｋ参照。これらの手法は、例えば、突然変異誘発法、直接的生化学および／または化学合成を含む。従って、前記アナログ／誘導体は天然起源または合成もしくは半合成分子であり得る。
本発明のさらなる好ましい実施態様において、前記阻害剤はＨＬＡ−ＩＩα鎖に特異的に結合するアプタマーまたは抗体である。抗−ＨＬＡ−ＤＲ−抗体を用いることによるＴＩＲＣ７の結合のブロックは陽性シグナルのブロックに導き、増殖の阻害に導き、望まない免疫反応を調節するのに非常に重要である。
【００２３】
本発明においては、用語「アプタマー」は、標的分子、すなわち、前記定義の標的分子ＨＬＡＩＩ−ＤＲに結合することができる核酸分子を意味する。アプタマーは通常はＲＮＡ、ｓｓＤＮＡ、修飾されたＲＮＡ−ＤＮＡを含む。アプタマーの調製は当該分野で知られており、例えば、結合部位を同定するためのコンビナトリアルライブラリーの使用を含むことができる。（ＧｏｌｄＡｎｎ．Ｒｅｖ．Ｂｉｏｃｈｅｍ．６４（１９９５年），７３６−７９７）。
【００２４】
前記したごとく、ＴＩＲＣ７とそのリガンドとの相互作用に干渉できる阻害剤は、本明細書中で定義されるＨＬＡ−ＩＩ−ＤＲ−分子に特異的に結合する抗体を含むこともできる。該抗体はモノクローナル、ポリクローナル、合成、キメラ、ヒト化、異種間および／または半合成抗体を含むことができる。用語「抗体」はＦａｂ、Ｆｖ、またはＳｃＦｖ−断片のごとき断片を含むこともできる。抗体、その断片、誘導体は、例えば、ＨａｒｌｏｗおよびＬａｎｅ「Ａｎｔｉｂｏｄｉｅｓ，ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ」ＣＳＨＰｒｅｓｓ，１９８８年に記載されているように公知の方法によって産生しおよび／または得ることができる。キメラ抗体の調製はＷＯ８９／０９６２２に記載されている。
【００２５】
さらに、本発明は、対象における、移植片宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症のような免疫学的障害の治療のための、腫瘍の治療のための、創傷治癒の改良のための、または免疫非応答性を誘導または維持するための医薬組成物を調製するための、前記阻害剤をコードする核酸分子の使用に関する。本発明で使用される核酸分子はｍＲＮＡのようなＲＮＡ、ｃＤＮＡのようなＤＮＡを含む。前記用語はＰＮＡも含む。加えて、本発明は、対象において、前記定義の免疫学的障害を治療するための、または創傷の改良のための、または免疫非応答性を誘導または維持するための医薬組成物の製造のための、前記した核酸分子を含むベクターの使用に関する。本発明のベクターは、例えば、遺伝子治療アプローチで用いられるプラスミド、コスミド、ウイルスまたは他のベクターであり得る。さらなる詳細については、例えば、ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ａＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｕａｌ：第２版、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、１９８９年、ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ参照。例えば、核酸コンストラクトの調製、突然変異誘発法（前記参照）、配列決定法、ＤＮＡの細胞への導入および遺伝子発現、およびタンパク質の分析などにおける、多くの核酸操作方法及びプロトコルは、ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ、第２版、Ａｕｓｕｂｅｌら編、ＪｏｈｎＷｉｌｅｙ＆Ｓｏｎｓ，１９９４年および更新された別版に詳細に記載されている。ＳａｍｂｒｏｏｋらおよびＡｕｓｕｂｅｌらの開示をここに引用によって援用する。
【００２６】
さらに、本発明は，
（ａ）（ポリ）ペプチドまたは物質の集団に対して、ＴＩＲＣ７およびＨＬＡＩＩ−ＤＲの間の相互作用を阻害するそれらの能力を、適当な読出系を用いてテストする工程；及び、
（ｂ）工程（ａ）においてＴＩＲＣ７とそのリガンドとの相互作用の阻害につきそのテストが陽性を示す（ポリ）ペプチドまたは物質を同定する工程；
を含む、ＴＩＲＣ７およびそのリガンドの間の相互作用に干渉することができる作用物質を同定し及び取得する方法に関する。
【００２７】
工程（ａ）の前記テストは、とりわけ、ＨＬＡＩＩ−ＤＲ−分子への結合の検出が可能なアッセイにおいて前記（ポリ）ペプチドまたは物質（例えば、前記定義の作用物質）をテストすることを含む。これらの（ポリ）ペプチドまたは物質は、ＨＬＡＩＩ−ＤＲ−分子に特異的に結合することによって、ＴＩＲＣ７−ＨＬＡＩＩ−ＤＲシグナリング経路に干渉することができる。従って、ＴＩＲＣ７およびそのリガンドの間の相互作用を「干渉／阻害する能力についての該テスト」は、当該分野で知られた特異的免疫学的および／または生化学的アッセイによって行うことができる。そのようなアッセイは複合体形成の測定、ＥＬＩＳＡ、ＲＩＡ等のような、結合パートナーが検出されるアッセイを含む。前記相互作用アッセイは、とりわけ、ＨＬＡＩＩ−ＤＲの結合パートナーを検出することができるツーハイブリッドシステム（これは、ＨＬＡＩＩ−ＤＲ／ＴＩＲＣ７相互作用に干渉するのに用いることができる）またはイン・ビトロ結合アッセイのような当該分野で知られた読出システムを含むこともできる。該アッセイおよび対応する読出システムは、複合体形成および／またはそのような複合体形成の阻害の検出を含むこともできる。例えば、検出されるべき（ポリ）ペプチド物質、作用物質の存在下で、ＴＩＲＣ７／ＨＬＡＩＩ−ＤＲ（またはその断片）のｉｎｖｉｔｒｏ複合体が形成されるか否かをテストすることができる。ここにおいて、読出システムは、とりわけ、蛍光キットや免疫沈澱アッセイのような免疫アッセイであり得る。また、本発明の方法ではハイスループットスクリーニングを使用することも考えられる。
【００２８】
よって、１つの実施態様において、本発明は、
（ａ）その転写が、スクリーニングされるべき化合物と共に、ＴＩＲＣ７およびＨＬＡクラスＩＩα鎖を含むダイマーまたはそれらの対応する相互作用結合ドメインによって直接的または間接的に活性化されるレポーター遺伝子を含む宿主細胞をスクリーニングする工程；及び、
（ｂ）レポーター遺伝子の活性化を抑制する化合物を選択する工程；
を含む、免疫疾患の治療用の作用物質を同定し単離する方法に関する。
【００２９】
かくして、ＴＩＲＣ７およびＨＬＡクラスＩＩα鎖を含むダイマーまたはマルチマー複合体の形成を妨げる化合物は、ＴＩＲＣ７関連疾患における治療的介入として用いることができる。従って、本発明のこの実施態様は、免疫系に応答して、ＴＩＲＣ７媒介およびＨＬＡクラスＩＩα鎖関連シグナル変換を阻害する化合物を発見する方法を提供する。本発明の方法に従うアッセイのための基本的な設定は当業者によく知られている。これは、いわゆる酵母「ツーハイブリッド系」の使用によって、Ｓｃｏｆｉｅｌｄ（Ｓｃｉｅｎｃｅ　２７４（１９９６年），２０６３−２０６５）に記載されているごとく、当該分野でよく知られたアッセイによって達成することができる。この系においては、ＴＩＲＣ７をコードする核酸分子またはそのより小さな部分によってコードされたタンパク質は、ＧＡＬ４転写因子のＤＮＡ−結合ドメインに連結させることができる。この融合タンパク質を発現し、かつＧＡＬ４転写因子によって認識される適当なプロモーターによって駆動されるｌａｃＺレポーター遺伝子を含む酵母株を、活性化ドメインに融合したＴＩＲＣ７のタンパク質リガンドまたはそのペプチドを発現するベクターで形質転換する。かくして、ＴＩＲＣ７および前記リガンド、例えば、ＨＬＡクラスＩＩα鎖を含むダイマーまたはマルチマー複合体の形成に干渉する物質の非存在下では、複合体はレポーター遺伝子の発現を指令することができる。例えば、実施例に記載されたツーハイブリッドアッセイ系はそれに従って適合させることができる。かくして、ＴＩＲＣ７の既に同定された結合パートナー、すなわち、ＨＬＡクラスＩＩα鎖とＴＩＲＣ７との相互作用に干渉する物質の同定を除き、ＴＩＲＣ７の相互作用パートナーをスクリーニングすることはもはや使用されない。かくして、前記した方法の好ましい実施態様においては、スクリーニングアッセイで用いる宿主細胞は、転写活性化またはＤＮＡ結合ドメインに作動可能に連結した少なくともＨＬＡクラスＩＩα鎖またはその断片をコードするＤＮＡ分子を含有する少なくとも１つの発現ベクターを含む。いわゆるスリーハイブリッド系で同様の戦略を追求することができる。
【００３０】
ＴＩＲＣ７および前記リガンド、例えば、ＨＬＡクラスＩＩα鎖を含むダイマーまたはマルチマー複合体の形成に干渉する化合物を同定する他の方法は、例えば、ファージディスプレイシステムでのｉｎｖｉｔｒｏスクリーニングならびにフィルター結合アッセイまたは、例えば、ＢＩＡｃｏｒｅ装置（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）を用いる相互作用の「リアルタイム」測定である；前記引用の文献参照。
【００３１】
好ましい実施態様において、本発明は、
（ｃ）同定された（ポリ）ペプチドまたは物質で工程（ａ）および（ｂ）を１回以上反復する工程であって、新たに同定された（ポリ）ペプチドまたは物質は、さらなる相互作用（ポリ）ペプチドまたは物質の同定のためのおとり（原語：ｂａｉｔ）として先に同定された（ポリ）ペプチドまたは物質を置き換える工程をさらに含む、ＴＩＲＣ７およびそのリガンドの間の相互作用に干渉することができる作用物質を同定する方法に関する。
【００３２】
加えて、本発明は、
（ａ）（ポリ）ペプチド集団を、配列番号：２に示されるアミノ酸配列を有する、または配列番号：１によってコードされる、あるいは本明細書中で開示された方法によって得ることができる（ポリ）ペプチドまたは断片と、該（ポリ）ペプチドの結合を可能とする適当な条件下で、接触させる工程；
（ｂ）（ａ）で定義された前記（ポリ）ペプチドまたはその断片に結合しない（ポリ）ペプチドを前記（ポリ）ペプチド集団から除去する工程；及び、
（ｃ）（ａ）で定義された前記（ポリ）ペプチドまたはその断片に結合する（ポリ）ペプチドを同定する工程；
を含む、対象において免疫応答の調節に関与する（ポリ）ペプチドを同定し及び取得する方法に関する。
【００３３】
本発明の方法に従ってテストし同定することができる化合物および（ポリ）ペプチド集団は発現ライブラリー、例えば、ｃＤＮＡ発現ライブラリー、ペプチド、タンパク質、核酸、抗体、小有機化合物、ホルモン、ペプチドミメティックス、ＰＮＡ等であり得る（Ｍｉｌｎｅｒ，ＮａｔｕｒｅＭｅｄｉｃｉｎｅ１（１９９５年），８７９−８８０；Ｈｕｐｐ，Ｃｅｌｌ８３（１９９５年），２３７−２４５；Ｇｉｂｂｓ，Ｃｅｌｌ７９（１９９４年），１９３−１９８および前記引用文献）。本発明の前記方法のいずれか１つの好ましい実施態様において、例えば、免疫系の腫瘍組織または細胞に由来する細胞溶解物を用い、最も好ましくは、ヒトリンパ球溶解物が用いられる；実施例および図３参照。
【００３４】
さらに、本発明は、
（ａ）ペプチドミメティックスによって作用物質または（ポリ）ペプチドをモデリングすること；及び、
（ｂ）モデル化された化合物を化学的に合成すること；
を含む、本明細書中で定義された阻害剤または本明細書中に開示した方法によって同定された作用物質または（ポリ）ペプチドを精製する方法に関する。
【００３５】
かくして、前記方法は、もちろん、前記スクリーニング方法または当該分野でよく知られた他のスクリーニング方法のいずれかの１以上の工程と組み合わせることができる。臨床的化合物発見のための方法は、例えば、リードの同定のための超ハイスループットスクリーニング（Ｓｕｎｄｂｅｒｇ，Ｃｕｒｒ．Ｏｐｉｎ．Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌ．１１（２０００年），４７−５３）、および構造ベースの薬物デザイン（ＶｅｒｌｉｎｄｅおよびＨｏｌ，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ２（１９９４年），５７７−５８７）およびリード最適化のためのコンビナトリアル化学（Ｓａｌｅｍｍｅら，Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ１５（１９９７年），３１９−３２４）を含む。一旦薬物が選択されたならば、該方法は、修飾された薬物を用いて合理的薬物デザインを行い、例えば、相互作用／エネルギー分析に従って該修飾された薬物が良好なアフィニティを呈するか否かを評価するのに用いられる方法を反復するさらなる工程を有することができる。

【００３６】
従って、前記方法によって単離された化合物は、アナログ化合物（類縁化合物）の開発のためのリード化合物として利用することもできる。アナログは、鍵となる官能基が、リード化合物と実質的に同一の方法でＴＩＲＣ７またはそのリガンドに提示されるのを可能とする安定化された電子的立体配置および分子立体配座を有するべきである。特に、アナログ化合物は、結合領域に匹敵する空間的電子的特性を有するが、しばしば、約２ｋＤ未満、好ましくは約１ｋＤ未満の分子量を有するリード化合物よりも小さい分子であり得る。アナログ化合物の同定は、自己−合致場（ＳＣＦ）分析、立体配置相互作用（ＣＩ）分析、および通常態様の動的分析のごとき手法の使用を介して実施することができる。これらの手法を実行するためのコンピュータープログラムは入手可能である；例えば、Ｒｅｉｎ，Ｃｏｍｐｕｔｅｒ−ＡｓｓｉｓｔｅｄＭｏｄｅｌｉｎｇｏｆＲｅｃｅｐｔｏｒ−ＬｅｇａｎｄＩｎｔｅｒａｃｔｉｏｎｓ（ＡｌａｎＬｉｓｓ，ＮｅｗＹｏｒｋ，１９８９年）。化学的誘導体およびアナログの調製方法は当業者によく知られており、例えば、Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ，ＨａｎｄｂｏｏｋｏｆＯｒｇａｎｉｃＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，ＳｐｒｉｎｇｅｒｅｄｉｔｉｏｎＮｅｗＹｏｒｋＩｎｃ．，１７５ＦｉｆｔｈＡｖｅｎｕｅ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｎ．Ｙ．１００１０Ｕ．Ｓ．Ａ．ａｎｄＯｒｇａｎｉｃＳｙｎｔｈｅｓｉｓ，Ｗｉｌｅｙ，ＮｅｗＹｏｒｋ，Ｕ．Ｓ．Ａ．に記載されている。さらに、前記誘導体およびアナログは当該分野で知られた方法に従ってその効果につきテストすることができる；前記参照。さらに、適当な誘導体およびアナログのペプチドミメティックスおよび／またはコンピューター支援デザインを、例えば、前記した方法に従って用いることができる。薬物発見におけるリード生成のための方法は、タンパク質および質量分析（Ｃｈｅｎｇｅｔａｌ．Ｊ．Ａｍ．Ｃｈｅｍ．Ｓｏｃ．１１７（１９９５年），８８５９−８８６０）およびいくつかの核磁気共鳴（ＮＭＲ）方法（Ｆｅｊｚｏら、Ｃｈｅｍ．Ｂｉｏｌ．６（１９９９年），７５５−７６９；Ｌｉｎら、Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．６２（１９９７年），８９３０−８９３１）のごとき検出方法を含む。
【００３７】
本発明の組成物で用いる阻害剤、作用物質および（ポリ）ペプチドは、好ましくは、ＴＩＲＣ７のリガンドに対する結合特異性と少なくとも実質的に同一の特異性を有し、特に、もしＴＩＲＣ７刺激が望まれるのであれば、該リガンドは好ましくはＨＬＡクラスＩＩα鎖である。阻害剤は、免疫細胞のＴＩＲＣ７媒介増殖が抑制されるべき場合、少なくとも１０^５Ｍ^−１、好ましくは１０^７Ｍ^−１より高い、有利には１０^１０Ｍ^−１までのＨＬＡクラスＩＩα鎖タンパク質に対する結合アフィニティを有することができる。好ましい実施態様において、抑制物質または阻害剤は少なくとも約１０^−７Ｍ、好ましくは少なくとも約１０^−９Ｍ、最も好ましくは少なくとも約１０^−１１Ｍのアフィニティを有する。アンチセンス核酸分子の場合、それらは、コーディング配列の２０連続ヌクレオチドの正確な相補体よりも最大で２倍、５倍または１０倍低い、ＨＬＡクラスＩＩα鎖をコードするものに対する結合アフィニティを有するのが好ましい。
【００３８】
好ましくは、親油性細胞膜を通って細胞に入ることができるためには、阻害剤、作用物質または（ポリ）ペプチドは５００−６００Ｄａの「バイオアベイラビリティ壁」より大きくない。他方、タンパク質治療においては、最近、ＨＩＶウイルス由来の部分タンパク質に融合した酵素は、マウスにおいてｉｎｖｉｖｏでその酵素活性を保持しつつ、細胞膜を通過することができることが示されている（Ｓｃｈｗａｒｚｅ，Ｓｃｉｅｎｃｅ２８５（１９９９年），１５６９−１５７２）。ほぼ１０年間、ＨＩＶウイルスからの転写活性化調節タンパク質（ＴＡＴタンパク質）が、受容体またはトランスポーターを用いることなく、またはＡＴＰを必要とすることなく細胞膜を横切る異常な能力を有することが知られている（ＧｒｅｅｎａｎｄＬｏｅｗｅｎｓｔｅｉｎ，Ｃｅｌｌ５５（１９８８年），１１７９−１１８８）。その正確なメカニズムは解明されていないが、ＴＡＴのタンパク質変換ドメイン（ＰＴＤ）は細胞膜脂質二重層中に「穴」を開け、再度それを閉じる前にそれを通じて共有結合したものを引き出すことが示されている。これは、さもなければ細胞を損傷してしまう特異的プロセスである。かくして、本発明の方法によって同定された機能的阻害剤または（ポリ）ペプチドはリンカーを介してＰＴＤにカップリングして、それらを細胞膜を通過させることができる；レビューについては、ＤＤＴ４（１９９９年），５３７参照。
【００３９】
加えて、本発明は、本明細書中に開示する阻害剤、本明細書中に開示する方法によって同定された作用物質、本明細書中に開示された方法によって同定された（ポリ）ペプチドまたは本明細書中に開示される方法によって精製された作用物質または（ポリ）ペプチドおよび、必要に応じて、医薬上許容される担体およびまたは希釈剤を配合することを含む、組成物の生産方法に関する。
【００４０】
本発明の前記方法のうちのいずれか一つに従って一旦薬物が選択されたならば、薬物またはそのプロドラッグを治療上有効量となるように合成することができる。本明細書中で用いるごとく、用語「治療上有効量」とは、有効な患者の利益、すなわち、例えば免疫疾患の治療、治癒、予防または緩和、またはそのような疾患の治療、治癒、予防または緩和の速度の増大を示すのに十分な薬物またはプロドラッグの合計量を意味する。加えて、あるいは代替的に、特に薬物の前臨床試験に関しては、用語「治療上有効量」とは、好ましくは、非−ヒト動物試験において、その標的ＴＩＲＣ７またはそのリガンドに対するその結合に際して、生理学的応答を誘導するのに十分な薬物またはプロドラッグの合計量を含む。
【００４１】
そのｉｎｖｉｖｏ投与後に薬物またはプロドラッグは代謝されて、排出によって、または１以上の活性または不活性代謝産物への代謝によって排除される（Ｍｅｙｅｒ，Ｊ．Ｐｈａｒｍａｃｏｋｉｎｅｔ．Ｂｉｏｐｈａｒｍ．２４（１９９６年），４４９−４５９）。かくして、本発明の方法によって同定及び取得された現実の化合物または薬物を用いるよりはむしろ、患者内でその活性形に変換されるプロドラッグとしての対応する処方を用いることができる。プロドラッグおよび薬物の適用のために取ることができる予防手段は文献に記載されている；レビューについては、Ｏｚａｍａ，Ｊ．Ｔｏｘｉｃｏｌ．Ｓｃｉ．２１（１９９６年），３２３−３２９参照。

【００４２】
好ましい実施態様において本発明はここに開示する方法に関し、それにおいて前記組成物は医薬組成物である。この実施態様では、前記方法のいずれの１つにおいても以下の工程を含む。すなわち工程（ａ）：（ｉ）カルボキシル基のエステル化、または（ｉｉ）ヒドロキシル基の炭素酸でのエステル化または（ｉｉｉ）ヒドロキシル基の、例えば、ホスフェート、ピロホスフェートもしくはスルフェートまたはヘミスクシネートへのエステル化、または（ｉｖ）医薬上許容される塩の形成、または（ｖ）医薬上許容される複合体の形成、または（ｖｉ）薬理学的に活性なポリマーの合成、または（ｖｉｉ）親水性部位の導入、または（ｖｉｉｉ）アロメートまたは側鎖上の置換基の導入／交換、置換基パターンの変化、または（ｉｘ）等電子または生物等電子部位の導入による修飾、または（ｘ）相同化合物の合成、または（ｘｉ）分岐側鎖の導入、または（ｘｉｉ）アルキル置換基の環状アナログへの変換、または（ｘｉｉｉ）ヒドロキシル基のケタール、アセテートへの誘導体化、または（ｘｉｖ）アミド、フェニルカルバメートへのＮ−アセチル化、または（ｘｖ）マンニッヒ塩基、イミンの合成、または（ｘｖｉ）ケトンまたはアルデヒドのシフの塩基、オキシル、アセタール、ケタール、エノールエステル、オキサゾリジン、チオゾリジンまたはその組合せへの変換による、（ｉ）作用の修飾された部位、活性のスペクトル、器官特異性および／または（ｉｉ）改良された効力、および／または（ｉｉｉ）低下した毒性（改良された治療指数）および／または（ｉｖ）低下した副作用および／または（ｖ）治療作用の修飾された開始、効果の持続および／または（ｖｉ）修飾された薬物動態パラメーター（吸収、分布、代謝および排出）および／または（ｖｉｉ）、修飾された物理化学的パラメーター（溶解度、吸湿度、色、味覚、匂い、安定性、状態）および／または（ｖｉｉｉ）、改良された一般的特異性、器官／組織特異性および／または（ｉｘ）最適化された適用形態および経路、を達成するために、本発明の方法によってリード化合物としての同定された作用物質を修飾する肯定、及び（ｂ）：前記修飾によって得られる生成物を医薬上許容される担体と配合する工程、である。
【００４３】
前記種々の工程は一般に当該分野で知られている。それらは定量的構造−作用関係（ＱＳＡＲ）分析（Ｋｕｂｉｎｙｉ，Ｉ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．４１（１９８８年），２２５５３−２５６４；Ｐｈａｒｍ．ＵｎｓｅｒｅｒＺｅｉｔ２３（１９９４年），２８１−２９０）、コンビナトリアル生化学、古典的化学その他を含み、またはそれに依存する。
【００４４】
本発明においては、用語「医薬組成物」は所望により、さらに、例えば、免疫系を調節しおよび／またはそれに干渉することができる分子のような、他の分子を単独または組み合わせて含む。医薬組成物は固体、液体または気体形態とすることができ、とりわけ、（ａ）粉末、（ａ）錠剤、（ａ）溶液またはアエロゾルの形態とすることができる。
【００４５】
本発明の医薬組成物は、さらに、医薬上許容される担体を含むことができる。適当な医薬担体の例は当該分野で知られており、リン酸緩衝生理食塩水、水、水中油型エマルジョンのごときエマルジョン、種々のタイプの湿潤剤、滅菌溶液等を含む。そのような担体を含む組成物はよく知られた慣用的方法によって配合することができる。これらの医薬組成物は適当な用量にて対象に投与することができる。適当な組成物の投与は、種々の方法によって、例えば、静脈内、腹腔内、皮下、筋肉内、局所または皮内投与によって行うことができる。投与方法は主治医および臨床的因子によって決定されるであろう。医学分野でよく知られているごとく、いずれの患者についての投与量も、患者のサイズ、体表面積、年齢、投与すべき特定の化合物、性別、投与の時間および経路、全体の健康状態、および同時投与すべき他の薬物を含めた多くの因子に依存する。
【００４６】
さらに、本発明は、対象における、移植対宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症の治療用の、腫瘍の治療用の、創傷治癒の改良用の、または免疫非応答性の誘導または維持用の医薬組成物の調製のための、本明細書に記載した阻害剤、本明細書に開示した方法によって同定された作用物質または（ポリ）ペプチド、または本明細書に開示した方法によって精製された阻害剤の使用に関する。
【００４７】
加えて、本発明は、本明細書中で定義される阻害剤、核酸分子、ベクターおよび／または作用物質および／または本明細書中に開示した方法によって同定された（ポリ）ペプチドを含む医薬組成物に関する。
【００４８】
さらに、本発明は、前記定義のヌクレオチド配列を含む核酸配列によってコードされた遺伝子産物を過剰発現する非ヒト・トランスジェニック動物に関する。さらに、本発明は、前記定義の核酸分子またはそのホモログ、パラログもしくはオルソログがサイレントでありおよび／または突然変異した非ヒト・トランスジェニック動物を提供する。該非ヒト・トランスジェニック動物は、特に、医療および科学的研究目的で有用であり、マウス、ラット、イヌ、ヒツジ等ならびにＣ．ｅｌｅｇａｎｓまたはＤｒｏｓｏｐｈｉｌａのような非脊椎動物を含むことができる。非ヒト動物は、ここに記載した本発明のスクリーニング方法に従って用いることができる。トランスジェニック胚の生産およびそれらのスクリーニングは、例えば、Ａ．Ｌ．ＪｏｙｎｅｒＥｄ．，ＧｅｎｅＴａｒｇｅｔｉｎｇ，ＡＰｒａｃｔｉｃａｌＡｐｐｒｏａｃｈ（１９９３年），ＯｘｆｏｒｄＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙＰｒｅｓｓによって記載されているごとく行うことができる。胚の胚膜のＤＮＡは、例えば、適当なプローブでのサザーンブロットを用いて分析することができる。
【００４９】
さらに、本発明は、免疫疾患または腫瘍の治療用の薬物の同定のための、または前記方法のいずれか１つにおけるリガンドとしての、ＨＬＡクラスＩＩα鎖または断片もしくは誘導体の使用に関する。
【００５０】
さらなる態様において、本発明は、
（ａ）ＨＬＡクラスＩＩα鎖をコードするポリヌクレオチドにおける突然変異の存在または不存在を判定すること；及び
（ｂ）前記突然変異の存在または不存在に基づいて、病的状態、または病的状態に対する罹患性を診断すること；
を含む、ＴＩＲＣ７の活性によって媒介される、またはそれに応答性である障害に関連する対象において病的状態、または病的状態に対する罹患性を診断する方法に関する。
【００５１】
加えて、本発明は、
（ａ）生物学的試料中のＨＬＡクラスＩＩα鎖ポリペプチドの存在または発現量を測定すること；及び、
（ｂ）前記ポリペプチドの存在または発現量に基づいて、病的状態、または病的状態に対する罹患性を診断すること；
を含む、ＴＩＲＣ７の活性によって媒介される、またはそれに応答性である障害に関連する対象において、病的状態、または病的状態に対する罹患性を診断する方法に関する。
【００５２】
これらの実施態様において、前記で同定されたＨＬＡクラスＩＩα鎖ポリヌクレオチド、核酸分子、（ポリ）ペプチド、抗体または化合物は好ましくは検出可能に標識される。種々の手法が生体分子を標識するのに利用でき、それは当業者によく知られており、本発明の範囲内にあると考えられる。そのような手法は、例えば、Ｔｉｊｓｓｅｎ， “Ｐｒａｃｔｉｃｅａｎｄｔｈｅｏｒｙｏｆｅｎｚｙｍｅｉｍｍｕｎｏａｓｓａｙｓ”，Ｂｕｒｄｅｎ，ＲＨａｎｄｖｏｎＫｎｉｐｐｅｎｂｕｒｇ（Ｅｄｓ），Ｖｏｌｕｍｅ１５（１９８５年）， “Ｂａｓｉｃｍｅｔｈｏｄｓｉｎｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙ”；ＤａｖｉｓＬＧ，ＤｉｂｍｅｒＭＤ；ＢａｔｔｅｙＥｌｓｅｖｉｅｒ（１９９０年），Ｍａｙｅｒｅｔａｌ．，（Ｅｄｓ） “Ｉｍｍｕｎｏｃｈｅｍｉｃａｌｍｅｔｈｏｄｓｉｎｃｅｌｌａｎｄｍｏｌｅｃｕｌａｒｂｉｏｌｏｇｙ” ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｌｏｎｄｏｎ（１９８７年）、または、ｉｎｔｈｅｓｅｒｉｅｓ “ＭｅｔｈｏｄｓｉｎＥｎｚｙｍｏｌｏｇｙ”，ＡｃａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ，Ｉｎｃ．に記載されている。当業者に知られた多くの異なる標識および標識方法がある。一般に使用される標識は、とりわけ、（フルオレセイン、ローダミン、テキサスレッド等のような）フルオロクローム、（ホースラディッシュペルオキシダーゼ、β−ガラクトシダーゼ、アルカリ性ホスファターゼのような）酵素、（３２Ｐまたは１２５Ｉのような）放射性同位体、ビオチン、ジゴキシゲニン、コロイド状金属、（ジオキセタン、ルミノールまたはアクリジニウムのような）ケミ−またはバイオルミネセント化合物を含む。酵素またはビオチニル基の共有結合カップリング、ヨウ素化、リン酸化、ビオチニル化、ランダムプライミング、ニック−トランスレーション、（ターミナルトランスフェラーゼを用いる）テーリングのような標識手法は当該分野でよく知られている。検出方法は、限定されるものではないが、オートラジオグラフィー、蛍光顕微鏡、直接的および間接的酵素反応等を含む。
【００５３】
加えて、前記化合物等は固相に結合させることができる。固相は当該分野でよく知られており、ポリスチレンビーズ、ラテックスビーズ、磁性ビーズ、コロイド金属粒子、ガラスおよび／またはシリコンチップおよび面、ニトロセルロースストリップ、膜、シート、動物赤血球細胞、または赤血球細胞ゴースト、デュアラサイトおよび反応トレイのウェルの壁、プラスチックチューブまたは他のテストチューブを含むことができる。固相へのＨＬＡクラスＩＩα鎖核酸、（ポリ）ペプチド、タンパク質、抗体等を固定化する適当な方法は、限定されるものではないが、イオン、疎水性、共有結合相互作用等を含む。固相は、前記定義の領域を引き付け固定化する能力を有する１以上のさらなる受容体を保持することができる。この受容体は、試薬それ自体、または捕獲試薬にコンジュゲートした荷電物質に対して反対に荷電した荷電物質を含むことができるか、または受容体は、固相に固定化された（付着された）、かつ前記定義の試薬を固定化することができるいずれの特異的結合パートナーでもあり得る。
【００５４】
一般に使用される検出アッセイは放射性同位体または非放射性同位体方法を含むことができる。これらは、とりわけ、ＲＩＡ（放射性同位体アッセイ）およびＩＲＭＡ（免疫ラジオイムノメトリックアッセイ）、ＥＩＡ（酵素免疫アッセイ）、ＥＬＩＳＡ（酵素連結イムノアッセイ）、ＦＩＡ（蛍光免疫アッセイ）およびＣＬＩＡ（ケミルミネセント免疫アッセイ）を含む。当該分野で用いられる他の検出方法は、トレーサー分子を用いないものである。これらの方法の１つのプロトタイプは、少なくとも２つの粒子を架橋する与えられた分子の特性に基づく凝集アッセイである。
【００５５】
臨床および／または研究用検体中の（ポリ）ペプチド、ポリヌクレオチド等の診断および定量では、核酸ハイブリダイゼーションアッセイ、ＰＣＲアッセイまたはＤＮＡ酵素免疫アッセイ（Ｍａｎｔｅｒｏら、ＣｌｉｎｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ３７（１９９１年），４２２−４２９）のような、前記した種々の免疫学的方法ならびに分子生物学的方法が開発されており、当該分野でよく知られている。ここにおいて、ＨＬＡクラスＩＩα鎖核酸分子はＰＮＡ、アミド骨格結合を含む修飾されたＤＮＡアナログも含むことができるのに注意すべきである。そのようなＰＮＡは、とりわけ、ＤＮＡ／ＲＮＡハイブリダイゼーションのためのプローブとして有用である。
【００５６】
前記組成物は、例えば、対象の細胞からｍＲＮＡを得、次いで、かく得られたｍＲＮＡを、適当なハイブリダイゼーション条件下で、ＨＬＡクラスＩＩα鎖ポリヌクレオチドと特異的にハイブリダイズすることができる核酸分子を含むプローブ／プライマーと接触させ、次いで、該プローブ／プライマーにハイブリダイズしたｍＲＮＡの存在を検出することを含む、ＨＬＡクラスＩＩα鎖（ポリ）ペプチドをコードするｍＲＮＡの存在を検出することによって、ＨＬＡクラスＩＩα鎖ポリヌクレオチドの発現を検出する方法において用いることができる。試料中の核酸分子の検出に導くさらなる診断方法は、例えば、ポリメラーゼチェーン反応（ＰＣＲ）、リガーゼチェーン反応（ＬＣＲ）、核酸ハイブリダイゼーションと組み合わせたサザーンブロッティング、比較ゲノムハイブリダイゼーション（ＣＧＨ）または代表差分析（ＲＤＡ）を含む。核酸分子の存在につきアッセイするこれらの方法は当該分野で知られており、過度の実験もなくして行うことができる。
【００５７】
さらに、本発明は、対象から細胞試料を得、抗体がＨＬＡクラスＩＩα鎖タンパク質に結合するのを可能とする条件下で該試料を前記抗体のうちの１つと接触させ、次いで、例えば、ラジオイムノアッセイまたは酵素免疫アッセイのごとき免疫アッセイ法を用いてそのように結合した抗体の存在を検出することを特徴とする、試料、例えば細胞試料中のＨＬＡクラスＩＩα鎖タンパク質の存在を検出する方法を含む。さらに、当業者であれば、ＨＬＡクラスＩＩα鎖活性を有する（ポリ）ペプチドを特異的に認識するが、その不活性形態を認識しない、または不活性形態を特異的に認識するが、ＨＬＡクラスＩＩα鎖活性を有する対応のポリペプチドを特異的に認識しない抗体を用いることによって、そのＨＬＡクラスＩＩα鎖活性を欠失または改変した突然変異形態から機能的ＨＬＡクラスＩＩα鎖タンパク質であるポリペプチドを特異的に検出し、区別することができる。
【００５８】
さらに、本発明は、前述の方法において前記試料が毛髪、血液、血清、痰、糞、または他の体液である、またはそれに由来する方法に関する。分析すべき試料は、とりわけ、核酸分子、（ポリ）ペプチドまたは抗体を抽出するごとく処理することができる。
【００５９】
好ましくは、ＴＩＲＣ７によって媒介され、前記方法で診断されるべき疾患または免疫疾患は、移植対宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症、腫瘍、特に免疫細胞に関連するもの、創傷治癒の欠乏、および適当な免疫応答を誘導する対象の欠乏よりなる群のうちの１つである。
【００６０】
また、本発明は、前記したもののごときＨＬＡクラスＩＩα鎖特異的試薬を含有するキット組成物に関する。ＨＬＡクラスＩＩα鎖ＤＮＡまたはＲＮＡ、ＨＬＡクラスＩＩα鎖に対する抗体、またはＨＬＡクラスＩＩα鎖タンパク質を含有するキットを調製することができる。そのようなキットを用いて、ＨＬＡクラスＩＩα鎖ＤＮＡまたはＲＮＡにハイブリダイズするＤＮＡを検出し、または試料中のＨＬＡクラスＩＩα鎖タンパク質またはペプチド断片の存在を検出する。そのような特徴付けは、限定されるものではないが、法医学分析、診断適用、および本発明の前記方法による疫学的研究を含めた種々の目的で有用である。組換えＨＬＡクラスＩＩα鎖タンパク質、ＤＮＡ分子、ＲＮＡ分子および抗体は、ＨＬＡクラスＩＩα鎖の検出およびタイピングに適したキットの構成に適合するように調製される。そのようなキットは、典型的には、少なくとも１つの容器における密接な封じ込めにて保持するのに適した区画化キャリアを含む。該キャリアは、さらに、組換えＨＬＡクラスＩＩα鎖タンパク質またはＨＬＡクラスＩＩα鎖に適した抗−ＨＬＡクラスＩＩα鎖抗体のごとき試薬を含むであろう。また、該キャリアは、標識抗原または酵素基質のごとき検出用の手段を含むことができる。
【００６１】
本明細書中で引用した書類の開示内容はここに引用によって援用する。
【００６２】
これらおよび他の実施態様は、本発明の記載および実施例によって開示され、包含される。本発明で使用されるべき方法、使用および化合物のいずれか１つに関するさらなる文献は、例えば、エレクトロニックデバイスを用いて公のライブラリーから検索することができる。例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／ＰｕｂＭｅｄ／ｍｅｄｌｉｎｅ．ｈｔｍｌ．下でインターネットで利用できる公のデータベース「Ｍｅｄｌｉｎｅ」を利用することができる。ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｎｃｂｉ．ｎｌｍ．ｎｉｈ．ｇｏｖ／，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｉｎｆｏｂｉｏｇｅｎ．ｆｒ／，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｆｍｉ．ｃｈ／ｂｉｏｌｏｇｙ／ｒｅｓｅａｒｃｈ＿ｔｏｏｌｓ．ｈｔｍｌ，ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ．ｔｉｇｒ．ｏｒｇ／のごときさらなるデータベースおよびアドレスは当業者に知られており、例えば、ｈｔｔｐ：／／ｗｗｗ／ｌｙｃｏｓ．ｃｏｍを用いて得ることもできる。バイオテクノロジーにおける特許情報の概観および遡及的サーチで、および現在の認識で有用な特許情報の関連ソースの概観は、Ｂｅｒｋｓ，ＴＩＢＴＥＣＨ１２（１９９４年），３５２−３６４に与えられる。
【００６３】
本開示は、参照として組み込まれる添付の図面と組み合わせて最良に理解することができる。さらに、本発明の、およびその多くの利点の良好な理解は、例示として与えられる以下の実施例から得られ、それは限定を意図するものではない。
【００６４】
実施例において、特記しない限り、組換えＤＮＡ技術は、Ｓａｍｂｒｏｏｋら、（１９８９年），ＭｏｌｅｃｕｌａｒＣｌｏｎｉｎｇ：ＡＬａｂｏｒａｔｏｒｙＭａｎｎｕａｌ．ＣｏｌｄＳｐｒｉｎｇＨａｒｂｏｒＬａｂｏｒａｔｏｒｙＰｒｅｓｓ，ＮＹｏｒｉｎＶｏｌｕｍｅｓ１ａｎｄ２ｏｆＡｕｓｕｂｅｌら、（１９９４年），ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓｉｎＭｏｌｅｃｕｌａｒＢｉｏｌｏｇｙ，ＣｕｒｒｅｎｔＰｒｏｔｏｃｏｌｓに記載されたプロトコルに従って実行される。
【００６５】
実施例は本発明を説明する。
実施例１：ツーハイブリッドライブラリースクリーニングを用いることによるＴＩＲＣ７のリガンドの同定
Ｕｔｋｕら、Ｉｍｍｕｎｉｔｙ９（１９９８年），５０９−５１８によって公表されたＴＩＲＣ７ｃＤＮＡを用いて、Ｓｔｒａｔａｇｅｎｅ，ＬａＪｏｌｌａ，ＵＳＡによるＨＹＢＲＺＡＰ２．１システムによるツーハイブリッドスクリーニングを実施した。配給業者の指示書に従って陽性クローンをアッセイした。クローン「ｃＤＮＡ−スクリーン７」は、ヒト白血球抗原クラスＩＩ−ＤＲとの１００％同一性を示した８１９ｂｐ長のｃＤＮＡインサートを明らかにした（図１ａ−ｂ）。
【００６６】
実施例２：ＨＬＡ−ＤＲアルファ鎖の免疫沈澱
共免疫沈澱は、Ｊｏｎｓら、Ｈｉｓｔｏｃｈｅｍ．Ｃｅｌｌ．Ｂｉｏｌ．，１９９９年，１１１（４），３１３−８に記載されているごとく行った。簡単に述べれば、ＣＢＬ１２０モノクローナル抗体（Ｃｙｂｕｓ−Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ）（図１ｃ、レーン２）を利用することによって、活性化されたヒト末梢血液リンパ球溶解物（図１ｃ、レーン１）をＨＬＡ−ＤＲアルファ鎖の免疫沈澱で用いた。対照的に、対照抗体であるイソタイプＩｇＧ１（Ｐｈａｒｍｉｎｇｅｎ）はいずれの沈殿も示さない（図１ｃ、レーン３）。
【００６７】
【配列表】

【図面の簡単な説明】
【図１ａ】８１９ヌクレオチドを含むヒトＨＬＡ　ＤＲアルファ鎖のｃＤＮＡ配列が示され、ヒトリンパ球から酵母ツー２ハイブリッドライブラリーのスクリーニングによって単離されたｃＤＮＡが示される。
【図１ｂ】メチオニンで開始される２５４アミノ酸を含むＨＬＡ　ＤＲ分子のアミノ酸配列が示される。
【図１ｃ】特異的抗ＴＩＲＣ７および抗ＨＬＡ　ＤＲアルファ鎖抗体を用いることによるヒトリンパ球溶解物からのＨＬＡ　ＤＲタンパク質でのＴＩＲＣ７タンパク質の共免疫沈澱が示される。

Claims

対象における、移植片宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症の治療のための、腫瘍の治療のための、創傷治癒の改良のための、または免疫非応答性を誘導または維持するための医薬組成物を調製するための、ＴＩＲＣ７とそのリガンドとの相互作用に干渉する阻害剤の使用。
前記リガンドはＨＬＡ（ヒト白血球関連抗原）クラスＩＩアルファ（α）鎖である請求項１記載の使用。
前記阻害剤が：
（ａ）　配列番号：２に示されたアミノ酸配列を含む（ポリ）ペプチドまたは（ａ）その断片に結合するおよび／またはそれに干渉する作用物質；
（ｂ）　配列番号：１に示されたヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドによってコードされた（ポリ）ペプチドまたは（ａ）その断片に結合する作用物質；及び
（ｃ）　（ａ）または（ｂ）で定義された（ポリ）ペプチドまたはその断片の誘導体のアナログ；
よりなる群から選択される請求項２記載の使用。
前記阻害剤が、請求項２または３で定義された（ポリ）ペプチドに特異的に結合するアプタマー、または抗体である請求項１ないし３のいずれかに記載の使用。
対象において、移植片宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症の治療のための、腫瘍の治療のための、創傷治癒の改良のための、または免疫非応答性を誘導または維持するための医薬組成物を調製するための、請求項１ないし４のいずれかに記載の阻害剤をコードする核酸分子の使用。
前記核酸分子がベクターに組み込まれる請求項５記載の使用。
（ａ）（ポリ）ペプチドまたは物質の集合に対して、ＴＩＲＣ７およびＨＬＡクラスＩＩα鎖（ポリ）ペプチドまたはその断片の間の相互作用を阻害するその能力を、適当な読み出しシステムを用いてテストする工程；及び
（ｂ）工程（ａ）におけるＴＩＲＣ７とそのリガントとの相互作用の阻害につきそのテストが陽性である（ポリ）ペプチドまたは物質を同定する工程；
を含む、ＴＩＲＣ７およびそのリガンドの間の相互作用に干渉できる作用物質を同定し及び取得するための方法。
前記ＨＬＡクラスＩＩα鎖（ポリ）ペプチドまたはその断片が、配列番号２に由来する、または配列番号１によってコードされるアミノ酸配列を含む請求項７記載の方法。
さらに、（ｃ）同定された（ポリ）ペプチドまたは物質につき工程（ａ）および（ｂ）を１回以上反復する工程であって、新たに同定された（ポリ）ペプチドまたは物質が、さらなる相互作用（ポリ）ペプチドまたは物質の同定のためのおとりとして、先に同定された（ポリ）ペプチドまたは物質を置き換える工程を含む、請求項７または８記載の方法。
（ａ）（ポリ）ペプチド集団を、ＨＬＡクラスＩＩα鎖（ポリ）ペプチドまたはその断片と、または請求項７ないし９のいずれかに記載の方法によって得ることができる（ポリ）ペプチドまたは物質と、該（ポリ）ペプチドの結合を可能とする適当な条件下で接触させる工程；
（ｂ）（ａ）で定義された前記（ポリ）ペプチドまたはその断片に結合しなかった（ポリ）ペプチドを前記（ポリ）ペプチド集団から除去する工程；及び
（ｃ）（ａ）で定義された前記（ポリ）ペプチドまたはその断片に結合する（ポリ）ペプチドを同定する工程；
を含む、対象において免疫応答の調節に関与する（ポリ）ペプチドを同定し及び取得する方法。
（ａ）ＴＩＲＣ７およびＨＬＡクラスＩＩα鎖を含むダイマーまたはスクリーニングされるべき化合物とのそれらの対応する相互作用結合ドメインによって、その転写が直接的または間接的に活性化されるレポーター遺伝子を含む宿主細胞をスクリーニングする工程；及び
（ｂ）レポーター遺伝子の活性化を抑制する化合物を選択する工程；
を含む、免疫疾患の治療のための作用物質を同定し及び取得する方法。
前記宿主細胞が、転写活性化またはＤＮＡ結合ドメインに作動可能に連結した少なくともＨＬＡクラスＩＩα鎖またはその断片をコードするＤＮＡ分子を含有する、少なくとも１つの発現ベクターを含む請求項１１記載の方法。
請求項１ないし４のいずれかで定義された阻害剤、または請求項７ないし１０、１１または１２のいずれかに記載の方法によって同定された作用物質、または請求項１０記載の方法によって同定された（ポリ）ペプチドを精製する方法であって、
（ａ）前記作用物質または（ポリ）ペプチドを、ペプチドミメティックスによってモデル化する工程；及び
（ｂ）モデル化された化合物を化学的に合成する工程；
を含む方法。
請求項１ないし４のいずれかで定義された阻害剤、または請求項７ないし９、１１または１２のいずれかに記載の方法によって同定された作用物質、または請求項１０記載の方法によって同定された（ポリ）ペプチド、または請求項１３記載の方法によって精製された作用物質またはポリ（ペプチド）、および、必要に応じて、医薬上許容される担体および／または希釈剤を配合することを含む、組成物の製造方法。
請求項７ないし１３のいずれかに記載の方法における前記工程、および前記作用物質または（ポリ）ペプチド、および、必要に応じて、医薬上許容される担体および／または希釈剤を配合するさらなる工程を含む、組成物の製造方法。
前記組成物が医薬組成物である請求項１４または１５記載の方法。
対象における、移植片宿主病、自己免疫疾患、アレルギー疾患、感染症、敗血症の治療のための、腫瘍の治療のための、創傷治癒の改良のための、または免疫非応答性を誘導または維持するための医薬組成物を調製するための、請求項７ないし９、１１または１２のいずれかに記載の方法によって同定された作用物質、または請求項１０記載の方法によって同定されたポリ（ペプチド）、または請求項１３記載の方法によって精製された作用物質または（ポリ）ペプチドの使用。
請求項５で定義された核酸分子のヌクレオチド配列を含む核酸分子配列によってコードされた遺伝子産物を過剰発現する非ヒト・トランスジェニック動物。
請求項５で定義された核酸分子またはそのホモログ、パラログまたはオルソログがサイレントであるか、および／または突然変異している非ヒト・トランスジェニック動物。
免疫疾患または腫瘍の治療用医薬物の同定のための、ＨＬＡクラスＩＩα鎖または断片または誘導体の使用。
請求項７ないし９または１１ないし１３いずれか１記載の方法によって得られた作用物質の有効量を対象に投与することを含む、免疫疾患または腫瘍を治療する方法。
（ａ）ＨＬＡクラスＩＩα鎖をコードするポリヌクレオチドにおける突然変異の存在または不存在を決定すること；及び
（ｂ）前記突然変異の存在または不存在に基づいて、病的状態、または病的状態に関する罹患性を診断すること；
を含む、ＴＩＲＣ７活性によって媒介される、またはそれに対して応答する障害に関連する対象における病的状態、または病的状態に対する罹患性を診断する方法。
（ａ）生物学的試料中でのＨＬＡクラスＩＩα鎖ポリペプチドの発現の存在または量を測定し、次いで、
（ｂ）ポリペプチドの存在または発現量に基づいて、病的状態、または病的状態に対する罹患性を診断すること；
を含む、ＴＩＲＣ７の活性に媒介される、またはそれに対して応答する障害に関する対象において病的状態、または病的状態に対する罹患性を診断する方法。
請求項２２または２３記載の方法に有用なキットであって、ＨＬＡクラスＩＩα鎖ポリペプチドまたはその生物学的に活性な断片と、ＨＬＡクラスＩＩα鎖をコードする核酸分子またはＨＬＡクラスＩＩα鎖遺伝子にハイブリダイズする長さが少なくとも１５ヌクレオチドの核酸分子または抗−ＨＬＡクラスＩＩα鎖抗体と、および、必要に応じて、検出するための適当な手段と、を含むキット。