JP2003528923A

JP2003528923A - 骨合成代謝活性物質として金属プロテイナーゼ−２（ｔｉｍｐ−２）の組織阻害剤を含む薬剤

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Publication number: JP2003528923A
Application number: JP2001572122A
Authority: JP
Inventors: フランツヨーゼフクラマー; ジルケマルク; ルートガーシュテントカー; ヴォルフゲオルクフォルスマン
Original assignee: イーペーエフファルマシューティカルスゲゼルシャフトミットベシュレンクテルハフツング
Priority date: 2000-04-05
Filing date: 2001-04-04
Publication date: 2003-09-30
Anticipated expiration: 2021-04-04
Also published as: WO2001074380A2; US7232796B2; EP1267916A2; CA2404696A1; AU2001252278A1; CA2404696C; ES2219521T3; JP4939715B2; DE50102739D1; EP1267916B1; US20030195143A1; WO2001074380A3; ATE270110T1

Abstract

(57)【要約】本発明は、骨欠陥、骨疾患の治療のため、及び骨再生を向上するための薬剤として使用するための骨合成代謝活性ペプチドとしてのＴＩＭＰ−２に関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】本発明は、骨合成代謝活性な(osteoanabolically active)ペプチド調製物とし
ての、金属プロテイナーゼ(metalloproteinases)−２（ＴＩＭＰ−２）の組織阻
害剤を含む薬剤及び診断薬、並びにその使用に関する。

【０００２】ＴＩＭＰ−２は、異なる生物学的機能を有する４つの異なるペプチド（ＴＩＭ
Ｐ−２〜ＴＩＭＰ−４）が今まで知られていた、“金属プロテイナーゼの組織阻
害剤”の群に属する。

【０００３】ヒト（リオッタ(Liotta)ら、１９９１）、ラット(ロスウィット(Roswit)ら、
１９９２)、及びマウス（キシ(Kishi)ら、１９９１）のような様々な生物におい
て、ＴＩＭＰ−２の一次構造を解明することができた。ペプチドは、６個のシス
テインブリッジによってお互いに結合している、合計１２個のシステインを含ん
でいる。

【０００４】ＴＩＭＰ−２の生物学的機能は、特に、活性マトリックス金属プロテイナーゼ
（ＭＭＰｓ）の阻害を含む。ＭＭＰｓという語は、細胞外マトリックスを分解し
得る亜鉛依存性エンドプロテイナーゼの群を意味する。細胞外マトリックスは、
複雑な構造からなり、特に、コラーゲン、プロテオグリカン、糖蛋白質、及びグ
リコサミノグリカンから構成される。細胞外マトリックスの分解は、胚形成、形
態形成、並びに組織吸収及び再形成のような、多くの生物学的工程にとって、極
めて重要である。しかし、ＭＭＰｓの活性が制御できないため、リューマチ性関
節炎のような、多くの組織の破壊をもたらし得る（オカダ（Okada）ら、１９８
６）。

【０００５】ＴＩＭＰ−２の更なる生物学的機能は、特に、腫瘍細胞の成長の減少（ゴメス
(Gomez)ら、１９９７）、及び血管形成の阻害（バレンテ(Valente)ら、１９９８
）を含む、マトリックス金属プロテイナーゼの阻害に関する。

【０００６】これら機能のほかに、ＴＩＭＰ−２の固有の生物学的活性も記載されている。
これらは、赤血球の形成の増加（ステトラー−ステベンソン(Stetler-Stevenson
)ら、１９９２）、及び異なる細胞系における分裂促進(motogenic)効果（ハヤカ
ワ(Hayakawa)ら、１９９４）を含む。更に、骨培養液全体における骨吸収の阻害
（ヒル（Hill）ら、１９９３）、及び破骨細胞による骨吸収の刺激（シブタニ(S
hibutani)ら、１９９３）を、いずれもインビトロで示すことができた。

【０００７】図１：Ａ）〜Ｄ）骨増殖性(osteoproliferative)ＴＩＭＰ−２の精製のため
の異なるクロマトグラフィー段階。図２：Ａ）ラットの胎児の第一骨芽細胞における組み換え型ヒトＴＩＭＰ−
２の増殖効果。Ｂ）マウスの骨芽細胞系ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１における平均細胞直径に対する組
み換え型ヒトＴＩＭＰ−２の影響。

【０００８】驚くべきことに、アミノ酸配列

【数５】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体は、骨形成をもたらす骨芽細胞の刺激を引き起こ
し得る。ＴＩＭＰ−２は、胎児の骨芽細胞に対する、増殖及び保護効果を有する
。

【０００９】従って、本発明によれば、アミノ酸配列

【数６】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体を含む薬剤がクレームされる。

【００１０】本発明によれば、ヒトＴＩＭＰ−２（配列番号１）及びラットＴＩＭＰ−２（
配列番号２）を用いることが好ましい：

【数７】

【００１１】本発明は、アミノ酸配列

【数８】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体の、骨合成代謝(osteoanabolic)薬剤を調製する
ための使用にも関する。

【００１２】本発明によって使用され得るＴＩＭＰ−２誘導体は、ＴＩＭＰ−２の固有の配
列又は記載の変形と、少なくとも９０％の配列同一性を有することが好ましい。

【００１３】本発明によって使用されるべきＴＩＭＰ−２を、他の成長因子、及び／又は薬
剤と組み合わせて、かつ、医学的な補助、例えば、移植と(in grafts)組み合わ
せて使用することが、有用であり得る。

【００１４】ＴＩＭＰ−２の投与は、特に、注射、軟膏、徐放性カプセルの状態の製剤とし
て、及び類似の本草医学的製剤として行われる。

【００１５】本発明は、骨折、骨欠乏(osteopenia)、及び骨粗鬆症のような骨系の疾患を治
療するための薬剤を調製するための、骨細胞に対してＴＩＭＰ−２に匹敵する効
果を有する低分子量物質及び活性化合物の使用にも関する。

【００１６】更に、本発明は、骨折、骨欠乏、及び骨粗鬆症のような骨系の疾患のための薬
剤を調製するための、骨細胞において、その関連するアゴニスト及びアンタゴニ
ストと結合したＴＩＭＰ−２に対するレセプターの使用にも関する。

【００１７】本発明によって使用されるべきＴＩＭＰ−２は、特に、骨欠陥(bone defects)
を治療するための、かつ、特に骨折又は外科的介入(surgical intervention)後
の骨の再生を向上するための、かつ骨粗鬆症、骨欠乏、及び骨軟化症のような変
性的かつ代謝的な骨疾患(degenerative and metabolic bone diseases)、並びに
骨炎及び骨髄炎のような炎症性骨疾患の治療のための骨合成代謝薬剤を調製する
ために使用される。

【００１８】本発明は、アミノ酸配列

【数９】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体を含む、骨の機能障害のための診断薬にも関する
。

【００１９】骨合成代謝ペプチドとしてのＴＩＭＰ−２の同定の基礎は、生物の年齢に依存
して、骨欠陥の再生能力が異なるという観察結果である。成長した生物が、一般
に、新たな骨組織の形成によって主な骨欠陥を再生することができないのに対し
て、より若い生物では、同様の(comparable)骨欠陥の完全な再生が行われる。

【００２０】同様の観察結果は、インビトロの骨芽細胞の試験でも得られた：胎児段階の生
物から単離された骨芽細胞は、培養液中で、何ら問題なく成長し、数日後に鉱物
化(mineralize)し始める。それに対して、未成熟の動物及び成長した動物からの
骨芽細胞は、標準的な培養条件下では増殖することができず、結局死亡する。単
独では生存し得ないこれらの細胞に、胎児の骨芽細胞の上清が補充されると、そ
れらは胎児の細胞と同様に増殖して鉱物化する。

【００２１】胎児の骨芽細胞の細胞培養液の上清の明らかな再生能力が、インビボでも示さ
れ得た。よって、外部刺激なしで骨組織の形成によって治すことができない頭蓋
骨欠陥が、ラットにおいて外科的に引き起こされた。しかし、胎児の第一骨芽細
胞の細胞培養液の上清からのペプチド抽出物が、これら欠陥に投与されると、新
たな骨組織の形成によって、欠陥の完全な再生が起こる。

【００２２】上記の効果を引き起こす(responsible)物質を単離するために、胎児の骨芽細
胞の上清からのペプチド抽出が行われ、次いで、得られたペプチドの骨増殖能力
(osteoproliferative capabilities)がインビトロで試験された（実施例３参照
）。そのため、本発明によるペプチドは、その生物学的活性により、分離用(pre
parative)、半分離用(semipreparative)、及び分析用ＲＰクロマトグラフィーを
用いて精製され得た。

【００２３】本発明による精製されたペプチドの生化学的特徴付けは、質量分析法及びＮ−
末端配列決定によって行われた。エレクトロスプレー質量分析法による分子量決
定により、２１７１５Ｄａの分子量が得られた。エドマン(Edman)分解によるＮ
−末端配列分析により、以下の配列：

【数１０】が得られた。

【００２４】本発明による物質は、骨組織の成長の増強及び再生の向上を引き起こすために
用いられ得る。これは、特に、骨折又は外科的介入の後であると考えられ得るが
、全身的な(systemic)骨疾患におけるものとも考えられ得る。

【００２５】

【実施例】

以下の実施例により、本発明をより詳細に説明する：実施例１：細胞培養液の上清からのＴＩＭＰ−２の単離細胞培養液の上清が、胎児の第一骨芽細胞の１つにまとめた(confluent)培養
液から得られた。よって、コラゲナーゼ及びトリプシンによって逐次消化し、次
いでペニシリン／ストレプトマイシン及び１０％ウシ胎児血清(FCS)を含むイー
グル最小主要培地（Eagle's minimal essential medium）（MEM）において培養
することにより、骨芽細胞は、最初に、ラット胎児の頭蓋冠から単離された。１つにまとめられた
後(After confluency was reached)、細胞は、１０％ＦＣＳとともに２４時間維
持されるか、又は血清なしの状態で２４時間維持された。血清を含まない上清が
回収され、更なるペプチド単離のために使用された。

【００２６】ＴＩＭＰ−２の単離は、全ペプチド抽出物を分画するために役立つ、様々なそ
の後のＲＰ−ＨＰＬＣ段階によって行われた。フラクションのアリコートが、バ
イオアッセイにおいて試験された。フラクションは、−２０℃に保存された。

【００２７】骨増殖性ＴＩＭＰ−２の精製のための異なるクロマトグラフィー段階を、図１
Ａ−Ｄに示す。

【００２８】１．分離用クロマトグラフィー血清を含まない細胞培養液の上清を、ＨＣｌによってｐＨ２．５に調整し、か
つアセトニトリルを添加することにより、５％アセトニトリルに調整した。次い
で、それらを最初にグラスファイバーフィルター（ＧＦ６、シュライヒャー・ア
ンド・シュウェル(Schleicher & Schuell)）上で、次いでメンブレンフィルター
（ＯＥＧ７、４．４３μｍ、シュライヒャー・アンド・シュウェル(Schleiche
r & Schuell)）上で濾過した。こうして得られた材料を、４０〜５０ｍｌ／ｍｉ
ｎの流速で、１〜２リットルの量でＲＰカラムに充填した。

【００２９】クロマトグラフィー条件：カラム：ＹＭＣゲルベーシック(Gel Basic)（１５−３０μｍ、４７×３００
ｍｍ）流速：４０ｍｌ／ｍｉｎフラクション：５０ｍｌバッファーＡ：１０ｍＭＨＣｌバッファーＢ：８０％（ｗ／ｖ）アセトニトリル、１０ｍＭＨＣｌ勾配：４７．５分間５〜７５％５分間７５〜１００％次いで、得られたフラクションのアリコートをバイオアッセイにおいて試験し
た。

【００３０】２．半分離用分離アッセイ中で生物活性であったフラクション３７−４０を、更なるＲＰ段階に
よって分離した。クロマトグラフィー条件：カラム：バイオテク(Biotek)ＲＰシリカＣ４（１００Ａ、５μｍ、２０×１２
５ｍｍ）流速：５ｍｌ／ｍｉｎフラクション：５ｍｌバッファーＡ：０．１％ＴＦＡバッファーＢ：８０％（ｗ／ｖ）アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ勾配：１０分間５〜４０％６０分間４０〜１００％得られたフラクションのアリコートを、バイオアッセイにおいて再度試験した
。

【００３１】３．分析用クロマトグラフィー生物活性フラクション２２及び２３のその後の分画を、別のＲＰクロマトグラ
フィーによって行った。クロマトグラフィー条件：カラム：ＹＭＣＣ１８（１２０Ａ、５μｍ、４．６×２５０ｍｍ）流速：０．６ｍｌ／ｍｉｎフラクション：０．６ｍｌバッファーＡ：０．１％ＴＦＡバッファーＢ：８０％（ｗ／ｖ）アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ勾配：４分間５〜３０％５０分間３０〜５５％５分間５５〜１００％得られたフラクションのアリコートを、バイオアッセイにおいて再度試験した
。

【００３２】４．分析用クロマトグラフィー生物活性フラクション２７−２９を、ＲＰクロマトグラフィーによって再度分
離した。クロマトグラフィー条件：カラム：フェノメネクス(Phenomenex)Ｃ５（４．６×２５０ｍｍ）流速：０．６ｍｌ／ｍｉｎフラクション：０．６ｍｌバッファーＡ：０．１％ＴＦＡバッファーＢ：８０％（ｗ／ｖ）アセトニトリル、０．１％ＴＦＡ勾配：４分間５〜３８％６０分間３８〜５８％５分間５８〜１００％次のバイオテストにおいて、本発明によるペプチドを、フラクション２４中で
純粋な状態で得ることができた。

【００３３】実施例２：ＴＩＭＰ−２の生物化学的分析１．質量決定精製された固有のペプチドの質量決定を、ＥＳＩ質量分析法によって行った。
２７７１５Ｄａの分子量が得られた。これは、全てのシステインがシステインブ
リッジによって架橋しているＴＩＭＰ−２の酸化型の理論質量と非常に良好に一
致する。

【００３４】２．配列決定精製された固有のペプチドを、標準プログラムを用いてＡＢＩ４９４シーケン
サーにおいて、エドマン分解によって分析した。最初の２４分解段階により、以
下のＮ−末端配列：

【数１１】が得られた。Ｘは、配列決定によって検出できないシステイン残基である。検出
不可能な(non-detectable)システインを考慮すると、得られた配列は、ＴＩＭＰ
−２の既知の配列と正確に一致する。小さい(Minor)配列は得られなかった。

【００３５】３．データベース調査データベーススイスプロット(SwissProt)における次の列において、配列は、
ＴＩＭＰ−２の開始部分(beginning)と明らかに同定された。２７７１３Ｄａの
蛋白質の理論質量も、測定された質量である２７７１５Ｄａと一致する。よって
、精製されたペプチドを、ＴＩＭＰ−２と明らかに同定することができた。

【００３６】実施例３：ＴＩＭＰ−２の生物学的ペプチドの決定ＴＩＭＰ−２の単離が、その生物学的活性によって行われ、ラットの胎児の骨
芽細胞の増殖が測定された。よって、得られたペプチドフラクションのアリコートが凍結乾燥され、血清を
含まない培地中に再懸濁された。次いで、胎児の骨芽細胞に対するそれらの増殖
効果が試験された。次いで、増殖効果を示すフラクションが別のクロマトグラフ
ィー分離に付された。骨増殖性ＴＩＭＰ−２の精製のための異なるクロマトグラ
フィー段階を、図１Ａ−Ｄに示す。

【００３７】増殖測定のために、第一骨芽細胞をトリプシン化し、血清を含まない培地中で
、９６ウェルプレートにおいてウェル当たり５０００細胞の細胞密度で平板培養
した(plated)。次いで、試験されるべきフラクションを添加した。４８時間〜７
２時間のインキュベーション時間後、２つの異なる方法によって増殖を試験した
。プラスの(positive)対照として、異なる濃度のウシ胎児血清及びＴＧＦβ１を
使用した。刺激なく得られた細胞(Cells having obtained no stimulation)を、
マイナスの(negative)対照として用いた。

【００３８】一方、Ｗｓｔ−１基質によって、増殖測定を行った。この基質は、代謝活性細
胞中のミトコンドリア酵素によって、着色生成物に転化され、形成された色の濃
さは、細胞数に比例していた。色の濃さは、ＥＬＩＳＡリーダーにおいて、４０
５ｎｍの波長及び６００ｎｍ以上の対照波長で測定される。

【００３９】一方、増殖は、コールター(Coulter)カウンター（ＣＡＳＹ）における細胞数
の直接測定によって測定される。

【００４０】いずれの方法も、骨芽細胞において、組み換え型ヒトＴＩＭＰ−２の投与量に
依存する成長促進効果を示した（図２Ａ）。１００ｎｇ／ｍｌの濃度から、これ
らのインビトロ試験において、ＴＩＭＰ−２の顕著な骨増殖効果が検出され得る
。また、マウスの骨芽細胞系ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１において、平均細胞直径の減少が
、ヒトＴＩＭＰ−２によって引き起こされる（図２Ｂ）。

【００４１】１００ｎｇ／ｍｌの濃度から、このインビトロ試験において、ＴＩＭＰ−２の
顕著な効果が検出され得る。更に、顕微鏡法により、マウスの骨芽細胞系ＭＣ３
Ｔ３−Ｅ１における保護及び増殖効果が示され得た。

【００４２】これら細胞全ては、典型的な骨細胞であるので、ＴＩＭＰ−２は、骨合成代謝
因子であると考えられ得る。

【図面の簡単な説明】

【図１】骨増殖性ＴＩＭＰ−２の精製のための異なるクロマトグラフィー段階
である。

【図２】ラットの胎児の第一骨芽細胞における組み換え型ヒトＴＩＭＰ−２の
増殖効果（図２Ａ）、及びマウスの骨芽細胞系ＭＣ３Ｔ３−Ｅ１における平均細
胞直径に対する組み換え型ヒトＴＩＭＰ−２の影響（図２Ｂ）を示す。

【手続補正書】特許協力条約第３４条補正の翻訳文提出書

【提出日】平成１４年６月５日（２００２．６．５）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】特許請求の範囲

【補正方法】変更

【補正の内容】

【特許請求の範囲】

【数１】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体の、骨折又は外科的介入後に骨芽細胞を刺激する
ための薬剤を調製するための使用。

【請求項４】注射、軟膏、徐放性カプセル及び類似の本草医学的製剤のために
調製された請求項１〜３に記載のＴＩＭＰ−２の使用。

【手続補正書】

【提出日】平成１４年１２月１１日（２００２．１２．１１）

【手続補正１】

【補正対象書類名】明細書

【補正対象項目名】００１０

【補正方法】変更

【補正の内容】

【数７】

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 19/10 Ａ６１Ｋ 37/64 (81)指定国ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ，ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，ＩＴ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ，ＴＲ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ，ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，ＫＥ，ＬＳ，ＭＷ，ＭＺ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ)，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ，ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＢＺ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＭＺ，ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者マルクジルケドイツ連邦共和国 34587 フェルスベルクゲンズンゲンホッハッケルシュトラーセ５ (72)発明者シュテントカールートガードイツ連邦共和国 30625 ハノーファードーマイヤースヴェーク 25 (72)発明者フォルスマンヴォルフゲオルクドイツ連邦共和国 30175 ハノーファーブリュッヒェルシュトラーセ５Ｆターム(参考） 4C076 AA06 AA11 AA53 CC09 4C084 AA02 AA19 AA27 BA01 BA08 BA22 BA23 CA23 CA34 DC32 MA16 MA28 MA37 MA66 NA14 ZA962 ZA972

Claims

【特許請求の範囲】

【請求項１】アミノ酸配列【数１】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体を含む薬剤。
【請求項２】骨合成代謝薬剤を調製するための、アミノ酸配列【数２】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体の使用。
【請求項３】前記ＴＩＭＰ−２が、請求項１に記載の配列と少なくとも９０％
の配列同一性を有する請求項１に記載の使用。
【請求項４】他の成長因子及び／又は薬剤と組み合わせた、並びに医学的な補
助、例えば、移植と組み合わせた、請求項１〜３に記載のＴＩＭＰ−２の使用。
【請求項５】注射、軟膏、徐放性カプセル及び類似の本草医学的製剤のために
調製された請求項１〜４に記載のＴＩＭＰ−２の使用。
【請求項６】骨折、骨欠乏、及び骨粗鬆症のような骨系の疾患の治療のための
薬剤を調製するための、骨細胞に対してＴＩＭＰ−２に匹敵する効果を有する低
分子量物質及び活性化合物の使用。
【請求項７】骨折、骨欠乏、及び骨粗鬆症のような骨系の疾患の治療のための
薬剤を調製するための、骨細胞において、その関連するアゴニスト及びアンタゴ
ニストと結合したＴＩＭＰ−２に対するレセプターの使用。
【請求項８】骨欠陥を治療するための、かつ、特に骨折又は外科的介入後の骨
の再生を向上するための、かつ骨粗鬆症、骨欠乏、及び骨軟化症のような変性的
かつ代謝的な骨疾患、並びに骨炎及び骨髄炎のような炎症性骨疾患の治療のため
の骨合成代謝薬剤を調製するための請求項１〜７に記載の使用。
【請求項９】アミノ酸配列【数３】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体を含む、骨の機能障害のための診断薬。
【請求項１０】アミノ酸配列【数４】（ここで、Ｘ１は、アミノ酸Ｅ又はＤを表し；Ｘ２は、アミノ酸Ｔ又はＩを表し；Ｘ３は、アミノ酸Ｎ又はＳを表し；Ｚ¹は、−ＮＨ₂、置換されたアミン、又はアミノ酸を１０個まで有する任意の
ペプチドを表し；Ｚ²は、−ＣＯＯＨ、ＣＯＮＨ₂、置換されたアミド、又はアミノ酸を１０個ま
で有する任意のペプチドを表す）を有するＴＩＭＰ−２、並びにその生物学的に活性なフラグメント、並びに／又
はアミド化、アシル化、硫酸化、リン酸化、グリコシル化、及び／若しくはポリ
エチレングリコール変性誘導体の、骨の機能障害における診断薬としての使用。