JP2003235578A - 酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーター及びその遺伝子 - Google Patents
酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーター及びその遺伝子Info
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Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性
トランスポーター及びその遺伝子を提供する。 【解決手段】ラット由来の特定なアミノ酸配列を有する
酸性アミノ酸及びその類似物質をナトリウム非依存的に
輸送する能力を有するタンパク質、該タンパク質をコー
ドする遺伝子に関する。また、本発明前記該タンパク質
とその機能発現を可能とする補助因子との融合タンパク
質及びそれをコードする遺伝子、並びにそれを用いたト
ランスポーターの機能解析法、その用途に関する。
トランスポーター及びその遺伝子を提供する。 【解決手段】ラット由来の特定なアミノ酸配列を有する
酸性アミノ酸及びその類似物質をナトリウム非依存的に
輸送する能力を有するタンパク質、該タンパク質をコー
ドする遺伝子に関する。また、本発明前記該タンパク質
とその機能発現を可能とする補助因子との融合タンパク
質及びそれをコードする遺伝子、並びにそれを用いたト
ランスポーターの機能解析法、その用途に関する。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は酸性アミノ酸及びそ
の類似物質のナトリウム非依存的な輸送に関与するタン
パク質、その融合タンパク質、及びそれらのタンパク質
をコードする遺伝子に関する。また、本発明は、酸性ア
ミノ酸及びその類似物質のナトリウム非依存的な輸送に
関するタンパク質、その融合タンパク質、それらの特異
抗体、又はそれらの機能促進物質若しくは機能抑制物質
を用いて、該タンパク質が有する酸性アミノ酸及びその
類似物質を輸送する能力を変調させることにより、細胞
増殖を制御し、薬物や毒物や外来性の異物の体内動態を
変更させる方法、及びこれらの物質を含有してなる酸性
アミノ酸及びその類似物質の輸送能力制御剤に関する。
の類似物質のナトリウム非依存的な輸送に関与するタン
パク質、その融合タンパク質、及びそれらのタンパク質
をコードする遺伝子に関する。また、本発明は、酸性ア
ミノ酸及びその類似物質のナトリウム非依存的な輸送に
関するタンパク質、その融合タンパク質、それらの特異
抗体、又はそれらの機能促進物質若しくは機能抑制物質
を用いて、該タンパク質が有する酸性アミノ酸及びその
類似物質を輸送する能力を変調させることにより、細胞
増殖を制御し、薬物や毒物や外来性の異物の体内動態を
変更させる方法、及びこれらの物質を含有してなる酸性
アミノ酸及びその類似物質の輸送能力制御剤に関する。
【０００２】
【従来の技術】細胞は、栄養としてアミノ酸を常時取り
込むことを必要するが、この機能は細胞膜に存在する膜
タンパク質であるアミノ酸トランスポーターによって担
われている。また、アミノ酸トランスポーターは、多細
胞生物においては各組織の中で特定の部位に配置され、
各組織の特異機能の発現に重要な役割を果たしている。
例えば、腎尿細管や小腸では、管腔内のアミノ酸を経上
皮的に吸収する役割を果たし、神経組織では、神経伝達
に伴って放出される神経伝達物質としてのアミノ酸の回
収や、神経伝達物質の前駆物質としてのアミノ酸の神経
細胞への供給を担当してる。さらに、血液・脳関門や胎
盤関門に存在し、アミノ酸の関門透過を可能としてい
る。
込むことを必要するが、この機能は細胞膜に存在する膜
タンパク質であるアミノ酸トランスポーターによって担
われている。また、アミノ酸トランスポーターは、多細
胞生物においては各組織の中で特定の部位に配置され、
各組織の特異機能の発現に重要な役割を果たしている。
例えば、腎尿細管や小腸では、管腔内のアミノ酸を経上
皮的に吸収する役割を果たし、神経組織では、神経伝達
に伴って放出される神経伝達物質としてのアミノ酸の回
収や、神経伝達物質の前駆物質としてのアミノ酸の神経
細胞への供給を担当してる。さらに、血液・脳関門や胎
盤関門に存在し、アミノ酸の関門透過を可能としてい
る。
【０００３】アミノ酸輸送機構は、１９６０年代から培
養細胞や膜標本を用いて、その同定、分類がなされ、ア
ミノ酸分子の多様性を反映して多くの輸送系が記述され
てきた。しかし、個々のアミノ酸に対してそれぞれの独
立した輸送系が存在するのではなく、類似した側鎖を持
つ複数のアミノ酸を輸送する数種類の輸送系によってア
ミノ酸輸送の大部分が担われている。[Christensen、Ph
ysiol. Rev.、第70巻、43項、1990年]。酸性アミノ酸す
なわちグルタミン酸やアスパラギン酸のように側鎖にカ
ルボキシル基を持つ酸性アミノ酸の輸送は、ナトリウム
依存的な、すなわちその機能にナトリウムイオンを必要
とするトランスポーターと、ナトリウム非依存的な、す
なわちその機能にナトリウムイオンを必要としないトラ
ンスポーターの両者によって担われていると考えられて
きた。しかし、従来の方法では、酸性アミノ酸輸送系を
介するアミノ酸及びその類似物質の輸送の詳細や、生体
内での機能的役割を解析することは困難であり、酸性ア
ミノ酸輸送系の機能を担う酸性アミノ酸トランスポータ
ーの遺伝子を単離して詳細な機能解析を可能とすること
が望まれていた。
養細胞や膜標本を用いて、その同定、分類がなされ、ア
ミノ酸分子の多様性を反映して多くの輸送系が記述され
てきた。しかし、個々のアミノ酸に対してそれぞれの独
立した輸送系が存在するのではなく、類似した側鎖を持
つ複数のアミノ酸を輸送する数種類の輸送系によってア
ミノ酸輸送の大部分が担われている。[Christensen、Ph
ysiol. Rev.、第70巻、43項、1990年]。酸性アミノ酸す
なわちグルタミン酸やアスパラギン酸のように側鎖にカ
ルボキシル基を持つ酸性アミノ酸の輸送は、ナトリウム
依存的な、すなわちその機能にナトリウムイオンを必要
とするトランスポーターと、ナトリウム非依存的な、す
なわちその機能にナトリウムイオンを必要としないトラ
ンスポーターの両者によって担われていると考えられて
きた。しかし、従来の方法では、酸性アミノ酸輸送系を
介するアミノ酸及びその類似物質の輸送の詳細や、生体
内での機能的役割を解析することは困難であり、酸性ア
ミノ酸輸送系の機能を担う酸性アミノ酸トランスポータ
ーの遺伝子を単離して詳細な機能解析を可能とすること
が望まれていた。
【０００４】ナトリウム依存性酸性アミノ酸トランスポ
ーターとしては、ＥＡＡＣ１、ＧＬＴ−１、ＧＬＡＳ
Ｔ、ＥＡＡＴ４、ＥＡＡＴ５の５種のグルタミン酸トラ
ンスポーターがクローニングされている[Kanai、Curr.
Opin. Cell Biol、第9巻、565項、1997年; Kanai and E
ndou, Curr. Drug Metab.、第2巻、339項、2001年]。ナ
トリウム非依存性トランスポーターとしては、輸送系Ｌ
に相当する中性アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１[Kan
ai et al., J. Biol. Chem., 第273巻、23629-23632
項、1998年]及びＬＡＴ２[Segawa et al., J. Biol. Ch
em., 第274巻、19745-19751項、1999年]がクローニング
された。また、ＬＡＴ１及びＬＡＴ２は、１回膜貫通型
タンパク質である補助因子４Ｆ２ｈｃと共存することに
よってのみ機能することが示された。ＬＡＴ１はロイシ
ン、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、チロシ
ン、トリプトファン、メチオニン、ヒスチジンなど大型
の中性アミノ酸を輸送する交換輸送活性を示し、ＬＡＴ
２は、大型の中性アミノ酸に加えグリシン、アラニン、
セリン、システイン、スレオニンなどの小型の中性アミ
ノ酸も輸送とする広い基質選択性を有し、酸性アミノ酸
トランスポーターではない。
ーターとしては、ＥＡＡＣ１、ＧＬＴ−１、ＧＬＡＳ
Ｔ、ＥＡＡＴ４、ＥＡＡＴ５の５種のグルタミン酸トラ
ンスポーターがクローニングされている[Kanai、Curr.
Opin. Cell Biol、第9巻、565項、1997年; Kanai and E
ndou, Curr. Drug Metab.、第2巻、339項、2001年]。ナ
トリウム非依存性トランスポーターとしては、輸送系Ｌ
に相当する中性アミノ酸トランスポーターＬＡＴ１[Kan
ai et al., J. Biol. Chem., 第273巻、23629-23632
項、1998年]及びＬＡＴ２[Segawa et al., J. Biol. Ch
em., 第274巻、19745-19751項、1999年]がクローニング
された。また、ＬＡＴ１及びＬＡＴ２は、１回膜貫通型
タンパク質である補助因子４Ｆ２ｈｃと共存することに
よってのみ機能することが示された。ＬＡＴ１はロイシ
ン、イソロイシン、バリン、フェニルアラニン、チロシ
ン、トリプトファン、メチオニン、ヒスチジンなど大型
の中性アミノ酸を輸送する交換輸送活性を示し、ＬＡＴ
２は、大型の中性アミノ酸に加えグリシン、アラニン、
セリン、システイン、スレオニンなどの小型の中性アミ
ノ酸も輸送とする広い基質選択性を有し、酸性アミノ酸
トランスポーターではない。
【０００５】ＬＡＴ１及びＬＡＴ２の類似蛋白質とし
て、中性アミノ酸及び塩基性アミノ酸を輸送する輸送系
ｙ＋Ｌの機能を有する前記ｙ＋ＬＡＴ１とｙ＋ＬＡＴ２
がクローニングされた[Torrents et al., J. Biol. Che
m., 第273巻、32437-32445項、1998年]。また、ｙ＋Ｌ
ＡＴ１、ｙ＋ＬＡＴ２共に補助因子４Ｆ２ｈｃと共存す
ることによってのみ機能することが示された。ｙ＋ＬＡ
Ｔ１とｙ＋ＬＡＴ２は、中性アミノ酸としてはグルタミ
ン、ロイシン、イソロイシンを主に輸送し、酸性アミノ
酸は輸送しない。機能発現に補助因子４Ｆ２ｈｃを要求
するトランスポーターとして、ＬＡＴ１及びＬＡＴ２の
類似蛋白質であるＡｓｃ−１がクローニングされた[Fuk
asawa etal., J. Biol. Chem. 275: 9690-9698, 200
0]。Ａｓｃ−１は、アラニン、セリン、システイン、ス
レオニン、グリシン等を選択的に輸送し、アミノ酸輸送
系ａｓｃの基質選択性を示し、酸性アミノ酸は輸送しな
い。また、４Ｆ２ｈｃと類似構造を持つ他の補助因子ｒ
ＢＡＴを機能発現に要求するトランスポーターとして、
ＬＡＴ１及びＬＡＴ２の類似蛋白質であるＢＡＴ１がク
ローニングされた[Chairoungdua et al., J. Biol. Che
m. 274: 28845-28848, 1999]。ＢＡＴ１は、シスチン、
中性アミノ酸及び塩基性アミノ酸を輸送し、酸性アミノ
酸は輸送しない。
て、中性アミノ酸及び塩基性アミノ酸を輸送する輸送系
ｙ＋Ｌの機能を有する前記ｙ＋ＬＡＴ１とｙ＋ＬＡＴ２
がクローニングされた[Torrents et al., J. Biol. Che
m., 第273巻、32437-32445項、1998年]。また、ｙ＋Ｌ
ＡＴ１、ｙ＋ＬＡＴ２共に補助因子４Ｆ２ｈｃと共存す
ることによってのみ機能することが示された。ｙ＋ＬＡ
Ｔ１とｙ＋ＬＡＴ２は、中性アミノ酸としてはグルタミ
ン、ロイシン、イソロイシンを主に輸送し、酸性アミノ
酸は輸送しない。機能発現に補助因子４Ｆ２ｈｃを要求
するトランスポーターとして、ＬＡＴ１及びＬＡＴ２の
類似蛋白質であるＡｓｃ−１がクローニングされた[Fuk
asawa etal., J. Biol. Chem. 275: 9690-9698, 200
0]。Ａｓｃ−１は、アラニン、セリン、システイン、ス
レオニン、グリシン等を選択的に輸送し、アミノ酸輸送
系ａｓｃの基質選択性を示し、酸性アミノ酸は輸送しな
い。また、４Ｆ２ｈｃと類似構造を持つ他の補助因子ｒ
ＢＡＴを機能発現に要求するトランスポーターとして、
ＬＡＴ１及びＬＡＴ２の類似蛋白質であるＢＡＴ１がク
ローニングされた[Chairoungdua et al., J. Biol. Che
m. 274: 28845-28848, 1999]。ＢＡＴ１は、シスチン、
中性アミノ酸及び塩基性アミノ酸を輸送し、酸性アミノ
酸は輸送しない。
【０００６】以上のように、４Ｆ２ｈｃ及びｒＢＡＴと
連結することによって機能するトランスポーターの分子
的実体が明かにされ、１回膜貫通型タンパク質とヘテロ
二量体を形成を形成することによって輸送機能を発揮す
る一群のトランスポーターが存在することが示され、ヘ
テロ二量体型アミノ酸トランスポーターファミリーが確
立された。
連結することによって機能するトランスポーターの分子
的実体が明かにされ、１回膜貫通型タンパク質とヘテロ
二量体を形成を形成することによって輸送機能を発揮す
る一群のトランスポーターが存在することが示され、ヘ
テロ二量体型アミノ酸トランスポーターファミリーが確
立された。
【０００７】さらに、機能発現に補助因子４Ｆ２ｈｃを
要求するトランスポーターとして、ＬＡＴ１及びＬＡＴ
２の類似蛋白質であるｘＣＴがクローニングされた[Sat
o etal., J. Biol. Chem. 274: 11455-11458, 1999]。
ｘＣＴはシスチン、グルタミン酸及びアミノアジピン酸
をナトリウム非依存的に輸送し、アミノ酸輸送系ｘＣに
相当する。ｘＣＴは、アミノ酸側鎖の負電荷を基質認識
に必要とし、ナトリウム非依存性酸性アミノ酸トランス
ポーターに分類される[Kanai and Endou, Curr. Drug M
etab.、第2巻、339項、2001年]。ｘＣＴは、グルタミン
酸は輸送するが、アスパラギン酸は輸送せず、その輸送
はシスチンにより抑制される。さらにｘＣＴは、酸化ス
トレスによって発現が誘導されるトランスポーターであ
り、一部を除いて一般の正常組織には発現は検出されな
い。しかし、シスチンにより抑制されないナトリウム非
依存性のグルタミン酸及びアスパラギン酸のトランスポ
ーターが存在するとされており[Christensen、 Physio
l. Rev.、第70巻、43項、1990年]、ｘＣＴ以外の未同定
のナトリウム非依存性酸性アミノ酸トランスポーターの
存在が示唆されていた。また、ＬＡＴ１及びＬＡＴ２と
類似の構造を持つ蛋白質であるが、４Ｆ２ｈｃあるいは
ｒＢＡＴ以外の未同定のタンパク質と連結するとされる
Ａｓｃ−２がクローニングされた[Chairoungdua et a
l., J. Biol. Chem. 276: 49390-49399, 2001]。Ａｓｃ
−２は、単独では細胞膜に発現しないが、４Ｆ２ｈｃあ
るいはｒＢＡＴとの融合タンパク質を作製することによ
り、融合タンパク質として細胞膜に移行し、輸送活性を
検出できる。Ａｓｃ−２は、４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡ
Ｔとの融合タンパク質として細胞膜に発現させると、ナ
トリウム非依存性中性アミノ酸輸送系ａｓｃの特性を示
す。
要求するトランスポーターとして、ＬＡＴ１及びＬＡＴ
２の類似蛋白質であるｘＣＴがクローニングされた[Sat
o etal., J. Biol. Chem. 274: 11455-11458, 1999]。
ｘＣＴはシスチン、グルタミン酸及びアミノアジピン酸
をナトリウム非依存的に輸送し、アミノ酸輸送系ｘＣに
相当する。ｘＣＴは、アミノ酸側鎖の負電荷を基質認識
に必要とし、ナトリウム非依存性酸性アミノ酸トランス
ポーターに分類される[Kanai and Endou, Curr. Drug M
etab.、第2巻、339項、2001年]。ｘＣＴは、グルタミン
酸は輸送するが、アスパラギン酸は輸送せず、その輸送
はシスチンにより抑制される。さらにｘＣＴは、酸化ス
トレスによって発現が誘導されるトランスポーターであ
り、一部を除いて一般の正常組織には発現は検出されな
い。しかし、シスチンにより抑制されないナトリウム非
依存性のグルタミン酸及びアスパラギン酸のトランスポ
ーターが存在するとされており[Christensen、 Physio
l. Rev.、第70巻、43項、1990年]、ｘＣＴ以外の未同定
のナトリウム非依存性酸性アミノ酸トランスポーターの
存在が示唆されていた。また、ＬＡＴ１及びＬＡＴ２と
類似の構造を持つ蛋白質であるが、４Ｆ２ｈｃあるいは
ｒＢＡＴ以外の未同定のタンパク質と連結するとされる
Ａｓｃ−２がクローニングされた[Chairoungdua et a
l., J. Biol. Chem. 276: 49390-49399, 2001]。Ａｓｃ
−２は、単独では細胞膜に発現しないが、４Ｆ２ｈｃあ
るいはｒＢＡＴとの融合タンパク質を作製することによ
り、融合タンパク質として細胞膜に移行し、輸送活性を
検出できる。Ａｓｃ−２は、４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡ
Ｔとの融合タンパク質として細胞膜に発現させると、ナ
トリウム非依存性中性アミノ酸輸送系ａｓｃの特性を示
す。
【０００８】
【発明が解決しようとする課題】本発明の目的は、ナト
リウム非依存的にグルタミン酸、アスパラギン酸等の酸
性アミノ酸を輸送するトランスポーターの遺伝子及びそ
の遺伝子がコードするポリペプチドであるナトリウム非
依存性酸性アミノ酸トランスポーターを提供することに
ある。その他の目的については、以下の記載より明らか
である。
リウム非依存的にグルタミン酸、アスパラギン酸等の酸
性アミノ酸を輸送するトランスポーターの遺伝子及びそ
の遺伝子がコードするポリペプチドであるナトリウム非
依存性酸性アミノ酸トランスポーターを提供することに
ある。その他の目的については、以下の記載より明らか
である。
【０００９】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、ＢＡＴ１
のｃＤＮＡの翻訳領域の塩基配列を用いてＥＳＴ(expre
ssed sequence tag )データベースを検索し、ＢＡＴ１
と類似の塩基配列を同定した。それに相当するｃＤＮＡ
クローンの塩基配列を決定し、それが新規タンパク質を
コードすることを明らかにした。さらに、この遺伝子の
翻訳産物と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパ
ク質を作製し、アフリカツメガエルの卵母細胞の細胞膜
に発現させた。これにより、この遺伝子の翻訳産物の機
能は、グルタミン酸、アスパラギン酸等の酸性アミノ酸
を輸送するナトリウム非依存性トランスポーターである
ことを明らかにし、本発明を完成するにいたった。
のｃＤＮＡの翻訳領域の塩基配列を用いてＥＳＴ(expre
ssed sequence tag )データベースを検索し、ＢＡＴ１
と類似の塩基配列を同定した。それに相当するｃＤＮＡ
クローンの塩基配列を決定し、それが新規タンパク質を
コードすることを明らかにした。さらに、この遺伝子の
翻訳産物と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパ
ク質を作製し、アフリカツメガエルの卵母細胞の細胞膜
に発現させた。これにより、この遺伝子の翻訳産物の機
能は、グルタミン酸、アスパラギン酸等の酸性アミノ酸
を輸送するナトリウム非依存性トランスポーターである
ことを明らかにし、本発明を完成するにいたった。
【００１０】すなわち、本発明は、以下の（Ａ）及び
（Ｂ）から選択されるタンパク質である。 （Ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質。 （Ｂ）配列番号１で示されるアミノ酸配列において１も
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加された
アミノ酸配列からなり、かつナトリウム非依存的に酸性
アミノ酸及びその類似物質を輸送する能力を有するタン
パク質。
（Ｂ）から選択されるタンパク質である。 （Ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質。 （Ｂ）配列番号１で示されるアミノ酸配列において１も
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加された
アミノ酸配列からなり、かつナトリウム非依存的に酸性
アミノ酸及びその類似物質を輸送する能力を有するタン
パク質。
【００１１】また、本発明は、以下の（ａ）及び（ｂ）
から選択されるＤＮＡからなる遺伝子である。 （ａ）配列番号２で示される塩基配列からなるＤＮＡ。 （ｂ）配列番号２で示される塩基配列からなるＤＮＡと
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつナ
トリウム非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸
送する能力を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。
から選択されるＤＮＡからなる遺伝子である。 （ａ）配列番号２で示される塩基配列からなるＤＮＡ。 （ｂ）配列番号２で示される塩基配列からなるＤＮＡと
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、かつナ
トリウム非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸
送する能力を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。
【００１２】本発明のナトリウム非依存的に酸性アミノ
酸及びその類似物質を輸送する能力を有する新規タンパ
ク質、すなわちアミノ酸トランスポーターＡＧＴ１(asp
artate/glutamate transporter 1)は、４Ｆ２ｈｃある
いはｒＢＡＴとの融合タンパク質を作製することによ
り、細胞膜に発現し、グルタミン酸、アスパラギン酸等
の酸性アミノ酸を高親和性に輸送する（取り込む）能力
を有する。また、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナト
リウム非依存性トランスポーターＡＧＴ１は、生体内に
おいては腎臓に主に発現している。
酸及びその類似物質を輸送する能力を有する新規タンパ
ク質、すなわちアミノ酸トランスポーターＡＧＴ１(asp
artate/glutamate transporter 1)は、４Ｆ２ｈｃある
いはｒＢＡＴとの融合タンパク質を作製することによ
り、細胞膜に発現し、グルタミン酸、アスパラギン酸等
の酸性アミノ酸を高親和性に輸送する（取り込む）能力
を有する。また、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナト
リウム非依存性トランスポーターＡＧＴ１は、生体内に
おいては腎臓に主に発現している。
【００１３】
【発明の実施の形態】後記配列表の配列番号１は、マウ
ス由来の酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性ト
ランスポーター（マウスＡＧＴ１）のアミノ酸配列（４
７８アミノ酸）を表わし、配列番号２はその遺伝子の全
長ｃＤＮＡ塩基配列（約２．１ｋｂｐ）及びその翻訳領
域にコードされたタンパク質のアミノ酸配列（４７８ア
ミノ酸）を表わす。
ス由来の酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性ト
ランスポーター（マウスＡＧＴ１）のアミノ酸配列（４
７８アミノ酸）を表わし、配列番号２はその遺伝子の全
長ｃＤＮＡ塩基配列（約２．１ｋｂｐ）及びその翻訳領
域にコードされたタンパク質のアミノ酸配列（４７８ア
ミノ酸）を表わす。
【００１４】後記配列番号１に示されるアミノ酸配列も
しくは配列番号２に示される塩基配列について、既知プ
ロテインデータベース（ＮＢＲＦ及びＳＷＩＳＳ−ＰＲ
ＯＴ）及びＤＮＡデータベース（ＧｅｎＢａｎｋおよび
ＥＭＢＬ）に含まれるすべての配列に対してホモロジー
検索を行った結果、一致するものはなく、この配列は、
新規なものであると考えられる。
しくは配列番号２に示される塩基配列について、既知プ
ロテインデータベース（ＮＢＲＦ及びＳＷＩＳＳ−ＰＲ
ＯＴ）及びＤＮＡデータベース（ＧｅｎＢａｎｋおよび
ＥＭＢＬ）に含まれるすべての配列に対してホモロジー
検索を行った結果、一致するものはなく、この配列は、
新規なものであると考えられる。
【００１５】本発明のタンパク質としては、配列番号１
で示されたアミノ酸配列を有するもののほか、例えば配
列番号１で示されたアミノ酸配列において１もしくは数
個のアミノ酸の欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列を有するタンパク質が挙げられる。アミノ酸の欠
失、置換もしくは付加は、中性アミノ酸輸送活性が失わ
れない程度であればよく、通常１〜約９６個、好ましく
は１〜約４８個である。このようなタンパク質は、配列
番号１で示されたアミノ酸配列と通常、１〜８０％、好
ましくは１〜９０％のアミノ酸配列のホモロジーを有す
る。
で示されたアミノ酸配列を有するもののほか、例えば配
列番号１で示されたアミノ酸配列において１もしくは数
個のアミノ酸の欠失、置換もしくは付加されたアミノ酸
配列を有するタンパク質が挙げられる。アミノ酸の欠
失、置換もしくは付加は、中性アミノ酸輸送活性が失わ
れない程度であればよく、通常１〜約９６個、好ましく
は１〜約４８個である。このようなタンパク質は、配列
番号１で示されたアミノ酸配列と通常、１〜８０％、好
ましくは１〜９０％のアミノ酸配列のホモロジーを有す
る。
【００１６】また、本発明の遺伝子としては、配列番号
２で示された塩基配列を有するもののほか、配列番号２
で示された塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェント
な条件下でハイブリダイズし得るＤＮＡを含むものが挙
げられる。このようにハイブリダイズし得るＤＮＡは、
そのＤＮＡにコードされるタンパク質が中性アミノ酸を
輸送する能力を有するものであればよい。このようなＤ
ＮＡは配列番号２で示された塩基配列と通常、７０％以
上、好ましくは８０％以上の塩基配列のホモロジーを有
する。このようなＤＮＡとしては、自然界で発見される
変異型遺伝子、人為的に改変した変異型遺伝子、異種生
物由来の相同遺伝子等が含まれる。本発明において、ス
トリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション
は、通常、ハイブリダイゼーションを、５×ＳＳＣ又は
これと同等の塩濃度のハイブリダイゼーション溶液中、
３７〜４２℃の温度条件下、約１２時間行い、５×ＳＳ
Ｃ又はこれと同等の塩濃度の溶液などで必要に応じて予
備洗浄を行った後、１×ＳＳＣ又はこれと同等の塩濃度
の溶液中で洗浄を行うことにより実施できる。
２で示された塩基配列を有するもののほか、配列番号２
で示された塩基配列からなるＤＮＡとストリンジェント
な条件下でハイブリダイズし得るＤＮＡを含むものが挙
げられる。このようにハイブリダイズし得るＤＮＡは、
そのＤＮＡにコードされるタンパク質が中性アミノ酸を
輸送する能力を有するものであればよい。このようなＤ
ＮＡは配列番号２で示された塩基配列と通常、７０％以
上、好ましくは８０％以上の塩基配列のホモロジーを有
する。このようなＤＮＡとしては、自然界で発見される
変異型遺伝子、人為的に改変した変異型遺伝子、異種生
物由来の相同遺伝子等が含まれる。本発明において、ス
トリンジェントな条件下でのハイブリダイゼーション
は、通常、ハイブリダイゼーションを、５×ＳＳＣ又は
これと同等の塩濃度のハイブリダイゼーション溶液中、
３７〜４２℃の温度条件下、約１２時間行い、５×ＳＳ
Ｃ又はこれと同等の塩濃度の溶液などで必要に応じて予
備洗浄を行った後、１×ＳＳＣ又はこれと同等の塩濃度
の溶液中で洗浄を行うことにより実施できる。
【００１７】本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーター遺伝子は、適当な哺乳動物
の組織や細胞を遺伝子源として用いてスクリーニングを
行うことにより単離取得できる。哺乳動物としては、イ
ヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、サル、ブタ、ウサギ、
ラット及びマウスなどの非ヒト動物のほか、ヒトが挙げ
られる。遺伝子のスクリーニング及び単離は、ホモロジ
ークローニング法などにより好適に実施できる。例え
ば、マウスあるいはヒト腎を遺伝子源として用い、これ
からｍＲＮＡ（ポリ（Ａ）＋ＲＮＡ）を調製する。これ
からｃＤＮＡライブラリーを構築し、ＥＳＴ(expressed
sequence tag) データベースの検索によって得られる
ＢＡＴ１類似配列（例えば、GenBankＴＭ/EBI/DDBJ acc
ession No. AI314100) に相当するプローブを用いてｃ
ＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって
Ａｓｃ−２遺伝子のｃＤＮＡを含むクローンを得ること
ができる。得られたｃＤＮＡについては、常法により塩
基配列を決定し、翻訳領域を解析して、これにコードさ
れるタンパク質、すなわち、ＡＧＴ１のアミノ酸配列を
決定することができる得られたｃＤＮＡが、酸性アミノ
酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーター、す
なわちはｃＤＮＡにコードされた遺伝子産物が酸性アミ
ノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーターで
あることは、例えば次のようにして検証することができ
る。すなわち、得られたＡＧＴ１遺伝子のｃＤＮＡをも
とにして、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの
融合タンパク質をコードするｃＤＮＡを作製し、これか
ら調整した、これに相補的なＲＮＡ（ｃＲＮＡ）（キャ
プ化されたもの）を卵母細胞内に導入して発現させ、酸
性アミノ酸を細胞内へ輸送する（取り込む）能力を、適
当な酸性アミノ酸を基質とする通常の取り込み試験（Ka
nai and Hediger、Nature、第360巻、467-471貢、1992
年）により、細胞内への基質の取り込みを測定すること
により確認できる。
ム非依存性トランスポーター遺伝子は、適当な哺乳動物
の組織や細胞を遺伝子源として用いてスクリーニングを
行うことにより単離取得できる。哺乳動物としては、イ
ヌ、ウシ、ウマ、ヤギ、ヒツジ、サル、ブタ、ウサギ、
ラット及びマウスなどの非ヒト動物のほか、ヒトが挙げ
られる。遺伝子のスクリーニング及び単離は、ホモロジ
ークローニング法などにより好適に実施できる。例え
ば、マウスあるいはヒト腎を遺伝子源として用い、これ
からｍＲＮＡ（ポリ（Ａ）＋ＲＮＡ）を調製する。これ
からｃＤＮＡライブラリーを構築し、ＥＳＴ(expressed
sequence tag) データベースの検索によって得られる
ＢＡＴ１類似配列（例えば、GenBankＴＭ/EBI/DDBJ acc
ession No. AI314100) に相当するプローブを用いてｃ
ＤＮＡライブラリーをスクリーニングすることによって
Ａｓｃ−２遺伝子のｃＤＮＡを含むクローンを得ること
ができる。得られたｃＤＮＡについては、常法により塩
基配列を決定し、翻訳領域を解析して、これにコードさ
れるタンパク質、すなわち、ＡＧＴ１のアミノ酸配列を
決定することができる得られたｃＤＮＡが、酸性アミノ
酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーター、す
なわちはｃＤＮＡにコードされた遺伝子産物が酸性アミ
ノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーターで
あることは、例えば次のようにして検証することができ
る。すなわち、得られたＡＧＴ１遺伝子のｃＤＮＡをも
とにして、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの
融合タンパク質をコードするｃＤＮＡを作製し、これか
ら調整した、これに相補的なＲＮＡ（ｃＲＮＡ）（キャ
プ化されたもの）を卵母細胞内に導入して発現させ、酸
性アミノ酸を細胞内へ輸送する（取り込む）能力を、適
当な酸性アミノ酸を基質とする通常の取り込み試験（Ka
nai and Hediger、Nature、第360巻、467-471貢、1992
年）により、細胞内への基質の取り込みを測定すること
により確認できる。
【００１８】得られたＡＧＴ１遺伝子のｃＤＮＡから調
整した、これに相補的なＲＮＡ（ｃＲＮＡ）を用いて、
インビトロ翻訳法[Hedigerら、Biochim. Biophys. Act
a、第1064巻、360項、1991年]により、ＡＧＴ１タンパ
ク質を合成し、電気泳動によりタンパク質のサイズ、糖
付加の有無等を検討することができる。
整した、これに相補的なＲＮＡ（ｃＲＮＡ）を用いて、
インビトロ翻訳法[Hedigerら、Biochim. Biophys. Act
a、第1064巻、360項、1991年]により、ＡＧＴ１タンパ
ク質を合成し、電気泳動によりタンパク質のサイズ、糖
付加の有無等を検討することができる。
【００１９】４Ｆ２ｈｃの遺伝子のｃＤＮＡはすでに報
告されている[Fukasawa et al., J.Biol. Chem. 275: 9
690-9698, 2000]ので、この配列情報から、ＰＣＲ法な
どを用いて、容易に４Ｆ２ｈｃの遺伝子を得ることが可
能である。ｒＢＡＴの遺伝子のｃＤＮＡもすでに報告さ
れている[Segawa, H., et al., Biochem. J. 328: 657-
664, 2000]ので、この配列情報から、ＰＣＲ法などを用
いて、容易にｒＢＡＴの遺伝子を得ることが可能であ
る。ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タ
ンパク質をコードするｃＤＮＡは、ＡＧＴ１遺伝子のｃ
ＤＮＡ、４Ｆ２ｈｃ遺伝子のｃＤＮＡ、あるいはｒＢＡ
Ｔ遺伝子のｃＤＮＡをもとにして、ＰＣＲ法などを用い
て、容易に作製できる。
告されている[Fukasawa et al., J.Biol. Chem. 275: 9
690-9698, 2000]ので、この配列情報から、ＰＣＲ法な
どを用いて、容易に４Ｆ２ｈｃの遺伝子を得ることが可
能である。ｒＢＡＴの遺伝子のｃＤＮＡもすでに報告さ
れている[Segawa, H., et al., Biochem. J. 328: 657-
664, 2000]ので、この配列情報から、ＰＣＲ法などを用
いて、容易にｒＢＡＴの遺伝子を得ることが可能であ
る。ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タ
ンパク質をコードするｃＤＮＡは、ＡＧＴ１遺伝子のｃ
ＤＮＡ、４Ｆ２ｈｃ遺伝子のｃＤＮＡ、あるいはｒＢＡ
Ｔ遺伝子のｃＤＮＡをもとにして、ＰＣＲ法などを用い
て、容易に作製できる。
【００２０】また、発現細胞について、同様の取り込み
実験を応用して、ＡＧＴ１の特性、例えば、ＡＧＴ１の
基質選択性などを調べることができる。
実験を応用して、ＡＧＴ１の特性、例えば、ＡＧＴ１の
基質選択性などを調べることができる。
【００２１】得られたＡＧＴ１遺伝子のｃＤＮＡを用い
て、異なる遺伝子源で作製された適当なｃＤＮＡライブ
ラリー又はゲノミックＤＮＡライブラリーをスクリーニ
ングすることにより、異なる組織、異なる生物由来の相
同遺伝子や染色体遺伝子等を単離することができる。ま
た、開示された本発明の遺伝子の塩基配列（配列番号２
に示された塩基配列、もしくはその一部）の情報に基づ
いて設計された合成プライマーを用い、通常のＰＣＲ
（Polymerase Chain Reaction）法によりｃＤＮＡライ
ブラリー又はゲノミックＤＮＡライブラリーから遺伝子
を単離することができる。ｃＤＮＡライブラリー又はゲ
ノミックＤＮＡライブラリー等のＤＮＡライブラリー
は、例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ」
[Sambrook, J., Fritsh, E.F.及びManitis, T.著、Cold
Spring Harbor Pressより1989に発刊] に記載の方法
により調整することができる。あるいは、市販のライブ
ラリーがある場合はこれを用いてもよい。
て、異なる遺伝子源で作製された適当なｃＤＮＡライブ
ラリー又はゲノミックＤＮＡライブラリーをスクリーニ
ングすることにより、異なる組織、異なる生物由来の相
同遺伝子や染色体遺伝子等を単離することができる。ま
た、開示された本発明の遺伝子の塩基配列（配列番号２
に示された塩基配列、もしくはその一部）の情報に基づ
いて設計された合成プライマーを用い、通常のＰＣＲ
（Polymerase Chain Reaction）法によりｃＤＮＡライ
ブラリー又はゲノミックＤＮＡライブラリーから遺伝子
を単離することができる。ｃＤＮＡライブラリー又はゲ
ノミックＤＮＡライブラリー等のＤＮＡライブラリー
は、例えば、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ」
[Sambrook, J., Fritsh, E.F.及びManitis, T.著、Cold
Spring Harbor Pressより1989に発刊] に記載の方法
により調整することができる。あるいは、市販のライブ
ラリーがある場合はこれを用いてもよい。
【００２２】本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーター及びその遺伝子（ＡＧＴ
１）は、例えば、それをコードするｃＤＮＡを用い、遺
伝子組換え技術により生産することができる。例えば、
ＡＧＴ１をコードするＤＮＡ（ｃＤＮＡ等）を適当な発
現ベクターに組み込み、得られた組換えＤＮＡを適当な
宿主細胞に導入することができる。ポリペプチド生産す
るための発現系（宿主−ベクター系）としては、例え
ば、細菌、酵母、昆虫細胞及び哺乳類細胞の発現系等が
挙げられる。このうち、機能タンパクを得るためには、
昆虫細胞及び哺乳類細胞を用いることが好ましい。ま
た、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存
性トランスポーターと４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの
融合タンパク質及びその遺伝子（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ
あるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ）は、例えば、それをコー
ドするｃＤＮＡを用い、遺伝子組換え技術により生産す
ることができる。例えば、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃあるい
はＡＧＴ１−ｒＢＡＴをコードするＤＮＡ（ｃＤＮＡ
等）を適当な発現ベクターに組み込み、得られた組換え
ＤＮＡを適当な宿主細胞に導入することができる。ポリ
ペプチド生産するための発現系（宿主−ベクター系）と
しては、例えば、細菌、酵母、昆虫細胞及び哺乳類細胞
の発現系等が挙げられる。このうち、機能タンパクを得
るためには、昆虫細胞及び哺乳類細胞を用いることが好
ましい。例えば、ポリペプチドを哺乳類細胞で発現させ
る場合には、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーターＡＧＴ１、あるいはＡＧＴ
１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質を
コードするＤＮＡを、適当な発現ベクター（例えば、ア
デノウイルス系ベクター、レトロウイルス系ベクター、
パピローマウイルスベクター、ワクシニアウイルスベク
ター、ＳＶ４０系ベクター等）中の適当なプロモーター
（例えば、サイトメガロウイルスプロモーター、ＳＶ４
０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、エロンゲーショ
ン１ａプロモーター等）の下流に挿入して発現ベクター
を構築する。次に、得られた発現ベクターで適当な動物
細胞を形質転換し、形質転換体を適当な培地で培養する
ことによって、目的とするポリペプチドが生産される。
宿主とする哺乳動物細胞としては、サルＣＯＳ−７細
胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、又はヒトＨｅ
Ｌａ細胞などの細胞株などが挙げられる。
ム非依存性トランスポーター及びその遺伝子（ＡＧＴ
１）は、例えば、それをコードするｃＤＮＡを用い、遺
伝子組換え技術により生産することができる。例えば、
ＡＧＴ１をコードするＤＮＡ（ｃＤＮＡ等）を適当な発
現ベクターに組み込み、得られた組換えＤＮＡを適当な
宿主細胞に導入することができる。ポリペプチド生産す
るための発現系（宿主−ベクター系）としては、例え
ば、細菌、酵母、昆虫細胞及び哺乳類細胞の発現系等が
挙げられる。このうち、機能タンパクを得るためには、
昆虫細胞及び哺乳類細胞を用いることが好ましい。ま
た、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存
性トランスポーターと４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの
融合タンパク質及びその遺伝子（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ
あるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ）は、例えば、それをコー
ドするｃＤＮＡを用い、遺伝子組換え技術により生産す
ることができる。例えば、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃあるい
はＡＧＴ１−ｒＢＡＴをコードするＤＮＡ（ｃＤＮＡ
等）を適当な発現ベクターに組み込み、得られた組換え
ＤＮＡを適当な宿主細胞に導入することができる。ポリ
ペプチド生産するための発現系（宿主−ベクター系）と
しては、例えば、細菌、酵母、昆虫細胞及び哺乳類細胞
の発現系等が挙げられる。このうち、機能タンパクを得
るためには、昆虫細胞及び哺乳類細胞を用いることが好
ましい。例えば、ポリペプチドを哺乳類細胞で発現させ
る場合には、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーターＡＧＴ１、あるいはＡＧＴ
１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質を
コードするＤＮＡを、適当な発現ベクター（例えば、ア
デノウイルス系ベクター、レトロウイルス系ベクター、
パピローマウイルスベクター、ワクシニアウイルスベク
ター、ＳＶ４０系ベクター等）中の適当なプロモーター
（例えば、サイトメガロウイルスプロモーター、ＳＶ４
０プロモーター、ＬＴＲプロモーター、エロンゲーショ
ン１ａプロモーター等）の下流に挿入して発現ベクター
を構築する。次に、得られた発現ベクターで適当な動物
細胞を形質転換し、形質転換体を適当な培地で培養する
ことによって、目的とするポリペプチドが生産される。
宿主とする哺乳動物細胞としては、サルＣＯＳ−７細
胞、チャイニーズハムスターＣＨＯ細胞、又はヒトＨｅ
Ｌａ細胞などの細胞株などが挙げられる。
【００２３】したがって、本発明は、前記した本発明の
遺伝子もしくは該遺伝子の中のタンパク質をコードする
遺伝子を含むベクター、好ましくは発現ベクター、及び
当該ベクターを用いて形質転換された宿主細胞（形質転
換体）を提供する。
遺伝子もしくは該遺伝子の中のタンパク質をコードする
遺伝子を含むベクター、好ましくは発現ベクター、及び
当該ベクターを用いて形質転換された宿主細胞（形質転
換体）を提供する。
【００２４】酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存
性トランスポーターＡＧＴ１をコードするＤＮＡとして
は、例えば、配列番号２で示される塩基配列を有するｃ
ＤＮＡを用いることができるほか、前記のｃＤＮＡ配列
に限定されることなく、アミノ酸配列に対応するＤＮＡ
を設計し、ポリペプチドをコードするＤＮＡとして用い
ることもできる。この場合、ひとつのアミノ酸をコード
するコドンは各々１〜６種類知られており、用いるコド
ンの選択は任意で良いが、例えば発現に利用する宿主の
コドン使用頻度を考慮して、より発現効率の高い配列を
設計することができる。設計した塩基配列を持つＤＮＡ
は、ＤＮＡの化学合成、前記ｃＤＮＡの断片化と結合、
塩基配列の一部改変等によって取得できる。人為的な塩
基配列の一部改変、変異導入は、所望の改変をコードす
る合成オリゴヌクレオチドからなるプライマーを利用し
て部位特異的変異導入法（site specific mutagenesi
s）[Mark, D.F. et al.、Proceedings of National Aca
demy of Sciences、第81巻、第5662項（1984年）] 等に
よって実施できる。
性トランスポーターＡＧＴ１をコードするＤＮＡとして
は、例えば、配列番号２で示される塩基配列を有するｃ
ＤＮＡを用いることができるほか、前記のｃＤＮＡ配列
に限定されることなく、アミノ酸配列に対応するＤＮＡ
を設計し、ポリペプチドをコードするＤＮＡとして用い
ることもできる。この場合、ひとつのアミノ酸をコード
するコドンは各々１〜６種類知られており、用いるコド
ンの選択は任意で良いが、例えば発現に利用する宿主の
コドン使用頻度を考慮して、より発現効率の高い配列を
設計することができる。設計した塩基配列を持つＤＮＡ
は、ＤＮＡの化学合成、前記ｃＤＮＡの断片化と結合、
塩基配列の一部改変等によって取得できる。人為的な塩
基配列の一部改変、変異導入は、所望の改変をコードす
る合成オリゴヌクレオチドからなるプライマーを利用し
て部位特異的変異導入法（site specific mutagenesi
s）[Mark, D.F. et al.、Proceedings of National Aca
demy of Sciences、第81巻、第5662項（1984年）] 等に
よって実施できる。
【００２５】酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存
性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢ
ＡＴとの融合タンパク質及（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃある
いはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ）をコードするＤＮＡは、例え
ば、配列番号２で示される塩基配列及び配列番号４で示
される塩基配列あるいは配列番号６で示される塩基配列
を有するｃＤＮＡを用いて作製することができるほか、
前記のｃＤＮＡ配列に限定されることなく、アミノ酸配
列に対応するＤＮＡを設計し、ポリペプチドをコードす
るＤＮＡとして用いることもできる。この場合、ひとつ
のアミノ酸をコードするコドンは各々１〜６種類知られ
ており、用いるコドンの選択は任意で良いが、例えば発
現に利用する宿主のコドン使用頻度を考慮して、より発
現効率の高い配列を設計することができる。設計した塩
基配列を持つＤＮＡは、ＤＮＡの化学合成、前記ｃＤＮ
Ａの断片化と結合、塩基配列の一部改変等によって取得
できる。人為的な塩基配列の一部改変、変異導入は、所
望の改変をコードする合成オリゴヌクレオチドからなる
プライマーを利用して部位特異的変異導入法（sitespec
ific mutagenesis）[Mark, D.F. et al.、Proceedings
of National Academy of Sciences、第81巻、第5662項
（1984年）] 等によって実施できる。
性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢ
ＡＴとの融合タンパク質及（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃある
いはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ）をコードするＤＮＡは、例え
ば、配列番号２で示される塩基配列及び配列番号４で示
される塩基配列あるいは配列番号６で示される塩基配列
を有するｃＤＮＡを用いて作製することができるほか、
前記のｃＤＮＡ配列に限定されることなく、アミノ酸配
列に対応するＤＮＡを設計し、ポリペプチドをコードす
るＤＮＡとして用いることもできる。この場合、ひとつ
のアミノ酸をコードするコドンは各々１〜６種類知られ
ており、用いるコドンの選択は任意で良いが、例えば発
現に利用する宿主のコドン使用頻度を考慮して、より発
現効率の高い配列を設計することができる。設計した塩
基配列を持つＤＮＡは、ＤＮＡの化学合成、前記ｃＤＮ
Ａの断片化と結合、塩基配列の一部改変等によって取得
できる。人為的な塩基配列の一部改変、変異導入は、所
望の改変をコードする合成オリゴヌクレオチドからなる
プライマーを利用して部位特異的変異導入法（sitespec
ific mutagenesis）[Mark, D.F. et al.、Proceedings
of National Academy of Sciences、第81巻、第5662項
（1984年）] 等によって実施できる。
【００２６】本発明はまた、配列番号２で示される塩基
配列の中の連続する１４塩基以上、好ましくは２０塩基
以上の部分配列もしくはその相補的な配列を含むヌクレ
オチドを提供するものである。本発明のヌクレオチド
は、ナトリウム非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物
質を輸送する能力を有するタンパク質をコードする遺伝
子を検出するためのプローブとして使用することがで
き、また、当該タンパク質をコードする遺伝子やそれと
相同性の高いタンパク質をコードする遺伝子などを入手
する際のプライマーとして使用することができ、さら
に、そのアンチセンス鎖などによりナトリウム非依存的
に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送する能力を有す
るタンパク質をコードする遺伝子の発現を変調させるた
めに使用することもできる。
配列の中の連続する１４塩基以上、好ましくは２０塩基
以上の部分配列もしくはその相補的な配列を含むヌクレ
オチドを提供するものである。本発明のヌクレオチド
は、ナトリウム非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物
質を輸送する能力を有するタンパク質をコードする遺伝
子を検出するためのプローブとして使用することがで
き、また、当該タンパク質をコードする遺伝子やそれと
相同性の高いタンパク質をコードする遺伝子などを入手
する際のプライマーとして使用することができ、さら
に、そのアンチセンス鎖などによりナトリウム非依存的
に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送する能力を有す
るタンパク質をコードする遺伝子の発現を変調させるた
めに使用することもできる。
【００２７】本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーター又はこれと免疫学的同等性
を有するポリペプチドを用いて、その抗体を取得するこ
とができる。抗体は、酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーターの検出や精製などに利用で
きる。抗体は、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリ
ウム非依存性トランスポーター、その断片、またはその
部分配列を有する合成ペプチドなどを抗原として用いて
製造できる。ポリクロナール抗体は、宿主動物（例え
ば、ラットやウサギ等）に抗原を接種し、免疫血清を回
収する、通常の方法により製造することができ、モノク
ロナール抗体は、通常のハイブリドーマ法などの技術に
より製造できる。
ム非依存性トランスポーター又はこれと免疫学的同等性
を有するポリペプチドを用いて、その抗体を取得するこ
とができる。抗体は、酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーターの検出や精製などに利用で
きる。抗体は、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリ
ウム非依存性トランスポーター、その断片、またはその
部分配列を有する合成ペプチドなどを抗原として用いて
製造できる。ポリクロナール抗体は、宿主動物（例え
ば、ラットやウサギ等）に抗原を接種し、免疫血清を回
収する、通常の方法により製造することができ、モノク
ロナール抗体は、通常のハイブリドーマ法などの技術に
より製造できる。
【００２８】本発明のタンパク質は、ナトリウム非依存
的に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送する能力を有
するものであり、この能力は種々の物質の存在下に強い
影響を受ける。この能力を阻害する物質や、促進する物
質をスクリーニングすることにより、本発明のタンパク
質の物質の輸送の能力を制御することができる。したが
って、本発明は、前記した本発明のタンパク質を用い
て、該タンパク質の有するナトリウム非依存的に酸性ア
ミノ酸及びその類似物質を輸送する能力に対する被検物
質の基質としての作用を検出する方法を提供する。
的に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送する能力を有
するものであり、この能力は種々の物質の存在下に強い
影響を受ける。この能力を阻害する物質や、促進する物
質をスクリーニングすることにより、本発明のタンパク
質の物質の輸送の能力を制御することができる。したが
って、本発明は、前記した本発明のタンパク質を用い
て、該タンパク質の有するナトリウム非依存的に酸性ア
ミノ酸及びその類似物質を輸送する能力に対する被検物
質の基質としての作用を検出する方法を提供する。
【００２９】本発明のタンパク質により輸送されるアミ
ノ酸類は、細胞の増殖や成長、生命維持に不可欠の物質
であり、これらの物質の細胞内への取り込みを制御する
ことにより、細胞の増殖や成長などを制御することがで
きる。したがって、本発明は、前記した本発明のタンパ
ク質、その特異抗体、又はその機能促進物質若しくは機
能抑制物質を用いて、該タンパク質が有する酸性アミノ
酸及びその類似物質を輸送する能力を変調させることに
より、細胞増殖を制御する方法を提供するものである。
ノ酸類は、細胞の増殖や成長、生命維持に不可欠の物質
であり、これらの物質の細胞内への取り込みを制御する
ことにより、細胞の増殖や成長などを制御することがで
きる。したがって、本発明は、前記した本発明のタンパ
ク質、その特異抗体、又はその機能促進物質若しくは機
能抑制物質を用いて、該タンパク質が有する酸性アミノ
酸及びその類似物質を輸送する能力を変調させることに
より、細胞増殖を制御する方法を提供するものである。
【００３０】本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃある
いはｒＢＡＴとの融合タンパク質の遺伝子およびその発
現細胞は、ＡＧＴ１が存在する細胞膜や、ＡＧＴ１が存
在すると予想される部位での物質透過効率についての、
インビトロでの試験に使用できる。また、酸性アミノ酸
を輸送するナトリウム非依存性トランスポーターＡＧＴ
１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質の
遺伝子およびその発現細胞は、ＡＧＴ１が存在する細胞
膜や、ＡＧＴ１が存在すると予想される部位を効率良く
透過する化合物の開発に使用できる。さらに、酸性アミ
ノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーターＡ
ＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク
質の遺伝子およびその発現細胞は、ＡＧＴ１が存在する
細胞膜や、ＡＧＴ１が存在すると予想される部位での薬
物間相互作用のインビトロでの試験に使用できる。した
がって、本発明は、前記した本発明のタンパク質、その
特異抗体、又はその機能促進物質若しくは機能抑制物質
を用いて、該タンパク質が有する酸性アミノ酸及びその
類似物質を輸送する能力を変調させることにより、該タ
ンパク質によって輸送される薬物又は外来性異物の体内
動態を変更する方法を提供する。
ム非依存性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃある
いはｒＢＡＴとの融合タンパク質の遺伝子およびその発
現細胞は、ＡＧＴ１が存在する細胞膜や、ＡＧＴ１が存
在すると予想される部位での物質透過効率についての、
インビトロでの試験に使用できる。また、酸性アミノ酸
を輸送するナトリウム非依存性トランスポーターＡＧＴ
１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質の
遺伝子およびその発現細胞は、ＡＧＴ１が存在する細胞
膜や、ＡＧＴ１が存在すると予想される部位を効率良く
透過する化合物の開発に使用できる。さらに、酸性アミ
ノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーターＡ
ＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク
質の遺伝子およびその発現細胞は、ＡＧＴ１が存在する
細胞膜や、ＡＧＴ１が存在すると予想される部位での薬
物間相互作用のインビトロでの試験に使用できる。した
がって、本発明は、前記した本発明のタンパク質、その
特異抗体、又はその機能促進物質若しくは機能抑制物質
を用いて、該タンパク質が有する酸性アミノ酸及びその
類似物質を輸送する能力を変調させることにより、該タ
ンパク質によって輸送される薬物又は外来性異物の体内
動態を変更する方法を提供する。
【００３１】このように、本発明のタンパク質はナトリ
ウム非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送す
る能力を有するものであり、この能力は細胞に存在する
タンパク質の数によるだけでなく、各種の物質の存在下
で抑制（機能抑制物質などの存在下で）することもで
き、また促進（機能促進物質などの存在下で）させるこ
ともできることから、本発明は、前記した本発明のタン
パク質、その特異抗体、又はその機能促進物質若しくは
機能抑制物質を含有してなる、該タンパク質が有する酸
性アミノ酸及びその類似物質の輸送能力制御剤を提供す
るものである。本発明の輸送能力制御剤は、細胞の増殖
や成長などを制御できることから細胞増殖制御剤や、ま
た薬物、毒物又は外来性異物の体内動態を変調、制御す
ることができることから薬物、毒物又は外来性異物の体
内動態制御剤として使用することができる。
ウム非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送す
る能力を有するものであり、この能力は細胞に存在する
タンパク質の数によるだけでなく、各種の物質の存在下
で抑制（機能抑制物質などの存在下で）することもで
き、また促進（機能促進物質などの存在下で）させるこ
ともできることから、本発明は、前記した本発明のタン
パク質、その特異抗体、又はその機能促進物質若しくは
機能抑制物質を含有してなる、該タンパク質が有する酸
性アミノ酸及びその類似物質の輸送能力制御剤を提供す
るものである。本発明の輸送能力制御剤は、細胞の増殖
や成長などを制御できることから細胞増殖制御剤や、ま
た薬物、毒物又は外来性異物の体内動態を変調、制御す
ることができることから薬物、毒物又は外来性異物の体
内動態制御剤として使用することができる。
【００３２】本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリウ
ム非依存性トランスポーターＡＧＴ１を抑制することに
より、ＡＧＴ１を発現する細胞膜や、ＡＧＴ１が存在す
ると予想される部位の特定の化合物の透過を制限するこ
とができる。また、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナ
トリウム非依存性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈ
ｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質の遺伝子および
その発現細胞は、ＡＧＴ１により輸送される化合物の、
細胞膜通過や、ＡＧＴ１が存在すると予想される部位の
透過を制限する薬物（ＡＧＴ１の特異的なインヒビター
等）の開発に使用できる。
ム非依存性トランスポーターＡＧＴ１を抑制することに
より、ＡＧＴ１を発現する細胞膜や、ＡＧＴ１が存在す
ると予想される部位の特定の化合物の透過を制限するこ
とができる。また、本発明の酸性アミノ酸を輸送するナ
トリウム非依存性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈ
ｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質の遺伝子および
その発現細胞は、ＡＧＴ１により輸送される化合物の、
細胞膜通過や、ＡＧＴ１が存在すると予想される部位の
透過を制限する薬物（ＡＧＴ１の特異的なインヒビター
等）の開発に使用できる。
【００３３】また、本発明は、配列番号３若しくは５で
示されたアミノ酸配列を有するタンパク質が、ＡＧＴ１
の細胞膜移行推進作用を有することを見出したものであ
り、したがって本発明は、配列番号３若しくは５で示さ
れたアミノ酸配列を有するタンパク質、又はこれらのタ
ンパク質の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換もし
くは付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質を含有
してなる、ＡＧＴ１の細胞膜移行推進剤を提供するもの
である。
示されたアミノ酸配列を有するタンパク質が、ＡＧＴ１
の細胞膜移行推進作用を有することを見出したものであ
り、したがって本発明は、配列番号３若しくは５で示さ
れたアミノ酸配列を有するタンパク質、又はこれらのタ
ンパク質の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換もし
くは付加されたアミノ酸配列からなるタンパク質を含有
してなる、ＡＧＴ１の細胞膜移行推進剤を提供するもの
である。
【００３４】
【実施例】以下、実施例をもって本発明をさらに詳しく
説明するが、これらの実施例は本発明を制限するもので
はない。なお、下記実施例において、各操作は特に明示
がない限り、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ」
[Sambrook, J., Fritsh, E.F.及びManitis, T.著、Cold
Spring Harbor Pressより1989に発刊] に記載の方法に
より行うか、または、市販の試薬やキットを用いる場合
には市販品の指示書に従って使用した。
説明するが、これらの実施例は本発明を制限するもので
はない。なお、下記実施例において、各操作は特に明示
がない限り、「Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ ｃｌｏｎｉｎｇ」
[Sambrook, J., Fritsh, E.F.及びManitis, T.著、Cold
Spring Harbor Pressより1989に発刊] に記載の方法に
より行うか、または、市販の試薬やキットを用いる場合
には市販品の指示書に従って使用した。
【００３５】実施例１
酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポ
ーターのクローニングと発現解析 （１）酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トラ
ンスポーターのマウスｃＤＮＡの同定 ラットＢＡＴ１[Chairoungdua, et al., J. Biol. Che
m. 274, 28845-28848,1999]の翻訳領域の塩基配列を用
いたＥＳＴ(expressed sequence tag)データベースの検
索によって得られた、ラットＢＡＴ１と類似のマウス由
来の塩基配列GenBanskＴＭ/EBI/DDBJ accession No. AI
314100 に相当するｃＤＮＡクローンをＩＭＡＧＥ (Int
egrated and Molecular Analysis of Genomes and thei
r Expression)より購入し（IMAGE clone I.D.: 190780
7）、その制限酵素ＸｈｏＩ切断断片（１．８−ｋｂ）
を３２Ｐ−ｄＣＴＰでラベルしてプローブとして用い
て、マウス腎ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし
た。ｃＤＮＡライブラリーはマウス腎由来ポリ（Ａ）＋
ＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成用キット（商品名：Superscr
ipt Choice System、ギブコ社製）を使用して作製し、
ファージベクターλＺｉｐＬｏｘ（ギブコ社製）の制限
酵素ＥｃｏＲＩ切断部位に組み込んだ。３２Ｐ−ｄＣＴ
Ｐでラベルしてプローブによるハイブリダイゼーション
は、３７℃のハイブリダイゼーション用溶液中一晩行
い、フィルター膜は、３７℃で０．１×ＳＳＣ／０．１
％ＳＤＳで洗浄した。ハイブリダイゼーション用溶液と
しては、５×ＳＳＣ、３×デンハード液（Denhard's
液）０．２％ＳＤＳ、１０％硫酸デキストラン、５０％
ホルムアミド、０．０１％ＡｂｔｉｆｏｒｍＢ（商品
名、シグマ社）（消泡剤）、０．２ｍｇ／ｍｌサーモン
精子変性ＤＮＡ、２．５ｍＭピロリン酸ナトリウム、２
５ｍＭ ＭＥＳを含むｐＨ６．５の緩衝液を用いた。ｃ
ＤＮＡを組み込んだλＺｉｐＬｏｘファージのｃＤＮＡ
部分を、プラスミドｐＺＬ１に組み込み込んだ。得られ
たクローンのｃＤＮＡ挿入断片は、さらにプラスミドｐ
ｃＤＮＡ３．１（Invitrogen）のＮｏｔＩ切断部位に組
みこんだ。
ーターのクローニングと発現解析 （１）酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トラ
ンスポーターのマウスｃＤＮＡの同定 ラットＢＡＴ１[Chairoungdua, et al., J. Biol. Che
m. 274, 28845-28848,1999]の翻訳領域の塩基配列を用
いたＥＳＴ(expressed sequence tag)データベースの検
索によって得られた、ラットＢＡＴ１と類似のマウス由
来の塩基配列GenBanskＴＭ/EBI/DDBJ accession No. AI
314100 に相当するｃＤＮＡクローンをＩＭＡＧＥ (Int
egrated and Molecular Analysis of Genomes and thei
r Expression)より購入し（IMAGE clone I.D.: 190780
7）、その制限酵素ＸｈｏＩ切断断片（１．８−ｋｂ）
を３２Ｐ−ｄＣＴＰでラベルしてプローブとして用い
て、マウス腎ｃＤＮＡライブラリーをスクリーニングし
た。ｃＤＮＡライブラリーはマウス腎由来ポリ（Ａ）＋
ＲＮＡから、ｃＤＮＡ合成用キット（商品名：Superscr
ipt Choice System、ギブコ社製）を使用して作製し、
ファージベクターλＺｉｐＬｏｘ（ギブコ社製）の制限
酵素ＥｃｏＲＩ切断部位に組み込んだ。３２Ｐ−ｄＣＴ
Ｐでラベルしてプローブによるハイブリダイゼーション
は、３７℃のハイブリダイゼーション用溶液中一晩行
い、フィルター膜は、３７℃で０．１×ＳＳＣ／０．１
％ＳＤＳで洗浄した。ハイブリダイゼーション用溶液と
しては、５×ＳＳＣ、３×デンハード液（Denhard's
液）０．２％ＳＤＳ、１０％硫酸デキストラン、５０％
ホルムアミド、０．０１％ＡｂｔｉｆｏｒｍＢ（商品
名、シグマ社）（消泡剤）、０．２ｍｇ／ｍｌサーモン
精子変性ＤＮＡ、２．５ｍＭピロリン酸ナトリウム、２
５ｍＭ ＭＥＳを含むｐＨ６．５の緩衝液を用いた。ｃ
ＤＮＡを組み込んだλＺｉｐＬｏｘファージのｃＤＮＡ
部分を、プラスミドｐＺＬ１に組み込み込んだ。得られ
たクローンのｃＤＮＡ挿入断片は、さらにプラスミドｐ
ｃＤＮＡ３．１（Invitrogen）のＮｏｔＩ切断部位に組
みこんだ。
【００３６】塩基配列決定のための合成プライマーを用
いてダイターミネーターサイクルシーケンシング法（Ap
plied Biosystems社）により、ｃＤＮＡの全長の塩基配
列を決定した。また、ｃＤＮＡの塩基配列を常法により
解析して、ｃＤＮＡの翻訳領域とそこにコードされるタ
ンパク質のアミノ酸配列を決定した。これらの配列を、
後記配列表の配列番号１に示した。
いてダイターミネーターサイクルシーケンシング法（Ap
plied Biosystems社）により、ｃＤＮＡの全長の塩基配
列を決定した。また、ｃＤＮＡの塩基配列を常法により
解析して、ｃＤＮＡの翻訳領域とそこにコードされるタ
ンパク質のアミノ酸配列を決定した。これらの配列を、
後記配列表の配列番号１に示した。
【００３７】ＡＧＴ１は、中性アミノ酸輸送系ａｓｃに
相当するマウストランスポーターＡｓｃ−２と４８％の
相同性を有していた。また、ＡＧＴ１は、中性アミノ酸
輸送系Ｌに相当するラットトランスポーターＬＡＴ１と
３５％、ＬＡＴ２と３７％、中性および塩基性アミノ酸
輸送系ｙ＋Ｌに相当するラットトランスポーターｙ＋Ｌ
ＡＴ１と３７％、ヒトトランスポーターｙ＋ＬＡＴ２と
３６％の相同性を有していた。さらに、ＡＧＴ１は、中
性アミノ酸輸送系ａｓｃに相当するマウストランスポー
ターＡｓｃ−１と３７％シスチン及び酸性アミノ酸輸送
系ｘＣに相当するマウストランスポーターｘＣＴと３７
％、シスチン及び中性及び塩基性アミノ酸輸送系ｂ
０，＋に相当するラットトランスポーターＢＡＴ１と３
６％のアミノ酸配列の相同性を有していた。さらに、Ａ
ｓｃ−２は、塩基性アミノ酸輸送系ｙ ＋に相当するマウ
ス及びヒトトランスポーターＣＡＴ１〜４と３０％の相
同性を有していた。ＡＧＴ１とマウスＡｓｃ−２、ラッ
トＬＡＴ１、ラット ｙ＋ＬＡＴ１、マウスｘＣＴ及び
ラットＢＡＴ１のアミノ酸配列の比較を図１に示した。
相当するマウストランスポーターＡｓｃ−２と４８％の
相同性を有していた。また、ＡＧＴ１は、中性アミノ酸
輸送系Ｌに相当するラットトランスポーターＬＡＴ１と
３５％、ＬＡＴ２と３７％、中性および塩基性アミノ酸
輸送系ｙ＋Ｌに相当するラットトランスポーターｙ＋Ｌ
ＡＴ１と３７％、ヒトトランスポーターｙ＋ＬＡＴ２と
３６％の相同性を有していた。さらに、ＡＧＴ１は、中
性アミノ酸輸送系ａｓｃに相当するマウストランスポー
ターＡｓｃ−１と３７％シスチン及び酸性アミノ酸輸送
系ｘＣに相当するマウストランスポーターｘＣＴと３７
％、シスチン及び中性及び塩基性アミノ酸輸送系ｂ
０，＋に相当するラットトランスポーターＢＡＴ１と３
６％のアミノ酸配列の相同性を有していた。さらに、Ａ
ｓｃ−２は、塩基性アミノ酸輸送系ｙ ＋に相当するマウ
ス及びヒトトランスポーターＣＡＴ１〜４と３０％の相
同性を有していた。ＡＧＴ１とマウスＡｓｃ−２、ラッ
トＬＡＴ１、ラット ｙ＋ＬＡＴ１、マウスｘＣＴ及び
ラットＢＡＴ１のアミノ酸配列の比較を図１に示した。
【００３８】ＳＯＳＵＩアルゴリズム[Hirokawa, T. et
al.、Bioinformatics、第14巻、第378項（1998年)]に
より、ＡＧＴ１のアミノ酸配列を解析した結果、図１に
示したように、１２個の膜貫通領域（membrane-spannin
g domain）が予想された。第３の親水性ループに、Ａｓ
ｃ−２、ＬＡＴ１、Ａｓｃ−２、ｙ＋ＬＡＴ１、ｘＣＴ
及びＢＡＴ１との間に保存されたシステイン残基があっ
た。このシステイン残基を介して、Ａｓｃ−２は、未知
の補助因子とジスルフィド結合を介して連結することが
予想された。また、第８の親水性ループにｃＡＭＰ依存
性のリン酸化部位、Ｎ−末端細胞内領域と第６の親水性
ループにＣ−キナーゼ依存性のリン酸化部位、Ｎ−末端
細胞内領域にチロシンリン酸化部位と考えられる部位が
あった。
al.、Bioinformatics、第14巻、第378項（1998年)]に
より、ＡＧＴ１のアミノ酸配列を解析した結果、図１に
示したように、１２個の膜貫通領域（membrane-spannin
g domain）が予想された。第３の親水性ループに、Ａｓ
ｃ−２、ＬＡＴ１、Ａｓｃ−２、ｙ＋ＬＡＴ１、ｘＣＴ
及びＢＡＴ１との間に保存されたシステイン残基があっ
た。このシステイン残基を介して、Ａｓｃ−２は、未知
の補助因子とジスルフィド結合を介して連結することが
予想された。また、第８の親水性ループにｃＡＭＰ依存
性のリン酸化部位、Ｎ−末端細胞内領域と第６の親水性
ループにＣ−キナーゼ依存性のリン酸化部位、Ｎ−末端
細胞内領域にチロシンリン酸化部位と考えられる部位が
あった。
【００３９】（２）マウスの種々の組織におけるＡＧＴ
１遺伝子の発現（ノーザンブロッティングによる解析） ＡＧＴ１遺伝子の第４３〜１８３６塩基対に相当するｃ
ＤＮＡ断片をＰＣＲで増幅し、３２Ｐ−ｄＣＴＰでラベ
ルしてプローブとして用いて、マウスの種々の組織から
抽出したＲＮＡに対してノーザンブロッティングを以下
のようにして行った。３μｇのポリ（Ａ）＋ＲＮＡを１
％アガロース／ホルムアルデヒドゲルで電気泳動したの
ち、ニトロセルロースフィルターにトランスファーし
た。このフィルターを４２℃で、３２Ｐ−ｄＣＴＰでラ
ベルしたＡｓｃ−２ ｃＤＮＡ断片を含んだハイブリダ
イゼーション液で１晩ハイブリダイゼーションを行っ
た。フィルターを、６５℃にて、０．１％ＳＤＳを含む
０．１×ＳＳＣで洗浄した。ノーザンブロッティングの
結果（図２）、腎において２．２ｋｂ付近にバンドが検
出された。
１遺伝子の発現（ノーザンブロッティングによる解析） ＡＧＴ１遺伝子の第４３〜１８３６塩基対に相当するｃ
ＤＮＡ断片をＰＣＲで増幅し、３２Ｐ−ｄＣＴＰでラベ
ルしてプローブとして用いて、マウスの種々の組織から
抽出したＲＮＡに対してノーザンブロッティングを以下
のようにして行った。３μｇのポリ（Ａ）＋ＲＮＡを１
％アガロース／ホルムアルデヒドゲルで電気泳動したの
ち、ニトロセルロースフィルターにトランスファーし
た。このフィルターを４２℃で、３２Ｐ−ｄＣＴＰでラ
ベルしたＡｓｃ−２ ｃＤＮＡ断片を含んだハイブリダ
イゼーション液で１晩ハイブリダイゼーションを行っ
た。フィルターを、６５℃にて、０．１％ＳＤＳを含む
０．１×ＳＳＣで洗浄した。ノーザンブロッティングの
結果（図２）、腎において２．２ｋｂ付近にバンドが検
出された。
【００４０】（３）マウス腎におけるＡＧＴ１蛋白の発
現 マウスＡＧＴ１の４６５−４７８に相当する合成オリゴ
ペプチド［ＣＩＰＤＶＳＤＤＨＩＨＥＥＳ］（配列表の
配列番号７に記載）に対する特異抗体をＡｌｔｍａｎら
の方法に準じて作製した[Altman et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A. 第81巻、2176-2180項、1984年]。マ
ウス腎の膜画分をＴｈｏｒｅｎｓらの方法[Thorens et
al. Cell 第55巻、281-290項、1988]に従って調整し
た。タンパク試料は、５％の２−メルカプトエタノール
存在下（還元条件下）あるいは非存在下（非還元条件
下）で１００℃で５分間処理後、ＳＤＳ−ポリアクリル
アミドゲルで電気泳動し、Hybond-P PVDVトランスファ
ー膜にブロッティングし、抗ＡＧＴ１抗血清（１：１
０，０００）で処理した。その結果、マウス腎では、抗
ＡＧＴ１抗体によって図３に示すように、非還元条件下
において２５０ｋＤａ付近にバンドが検出された。還元
条件下では、４０ｋＤａ付近にバンドが検出された。こ
の結果より、ＡＧＴ１は、何らかのタンパク質とジスル
フィド結合により連結していることが示唆される。
現 マウスＡＧＴ１の４６５−４７８に相当する合成オリゴ
ペプチド［ＣＩＰＤＶＳＤＤＨＩＨＥＥＳ］（配列表の
配列番号７に記載）に対する特異抗体をＡｌｔｍａｎら
の方法に準じて作製した[Altman et al., Proc. Natl.
Acad. Sci. U.S.A. 第81巻、2176-2180項、1984年]。マ
ウス腎の膜画分をＴｈｏｒｅｎｓらの方法[Thorens et
al. Cell 第55巻、281-290項、1988]に従って調整し
た。タンパク試料は、５％の２−メルカプトエタノール
存在下（還元条件下）あるいは非存在下（非還元条件
下）で１００℃で５分間処理後、ＳＤＳ−ポリアクリル
アミドゲルで電気泳動し、Hybond-P PVDVトランスファ
ー膜にブロッティングし、抗ＡＧＴ１抗血清（１：１
０，０００）で処理した。その結果、マウス腎では、抗
ＡＧＴ１抗体によって図３に示すように、非還元条件下
において２５０ｋＤａ付近にバンドが検出された。還元
条件下では、４０ｋＤａ付近にバンドが検出された。こ
の結果より、ＡＧＴ１は、何らかのタンパク質とジスル
フィド結合により連結していることが示唆される。
【００４１】（４）マウス腎におけるＡＧＴ１蛋白の免
疫組織化学的解析 常法に従い、マウスの腎パラフィン切片を抗ＡＧＴ１抗
血清（１：１，０００）で処理後、ジアミノベンチジン
で発色した。また、染色の特異性を検討する目的で、５
０ｍｇ／ｍｌの抗原ペプチドの存在下で抗ＡＧＴ１抗血
清（１：１，０００）で処理する実験も行った。その結
果、図４ａに示すように、マウス腎では、髄質外層の近
位尿細管と皮質の遠位尿細管に染色が見られた。この染
色は、抗原ペプチドの存在下で抗ＡＧＴ１抗血清を作用
させた場合には検出されず、染色の特異性が示された
（図４ｂ）。さらに強拡大で観察することにより、近位
尿細管（図４ｃ）及び遠位尿細管（図４ｄ）の側基底側
膜にＡＧＴ１タンパク質が存在することが明らかになっ
た。
疫組織化学的解析 常法に従い、マウスの腎パラフィン切片を抗ＡＧＴ１抗
血清（１：１，０００）で処理後、ジアミノベンチジン
で発色した。また、染色の特異性を検討する目的で、５
０ｍｇ／ｍｌの抗原ペプチドの存在下で抗ＡＧＴ１抗血
清（１：１，０００）で処理する実験も行った。その結
果、図４ａに示すように、マウス腎では、髄質外層の近
位尿細管と皮質の遠位尿細管に染色が見られた。この染
色は、抗原ペプチドの存在下で抗ＡＧＴ１抗血清を作用
させた場合には検出されず、染色の特異性が示された
（図４ｂ）。さらに強拡大で観察することにより、近位
尿細管（図４ｃ）及び遠位尿細管（図４ｄ）の側基底側
膜にＡＧＴ１タンパク質が存在することが明らかになっ
た。
【００４２】実施例２
酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポ
ーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合
タンパク質の作製とその機能の解析 （１）酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トラ
ンスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴと
の融合タンパク質の作製 ＡＧＴ１とｒＢＡＴの融合タンパク質（ＡＧＴ１−ｒＢ
ＡＴ）を作製するために、合成オリゴＤＮＡプライマー
５’−ＧＣＧＣＧＡＡＧＣＴＴＡＣＣＴＡＴＡＧＧＣＡ
ＧＡＡＡＣＡＴＴＣ−３’（ＡＧＴ１ ｃＤＮＡの第４
〜２３塩基対に相当する配列に、ＨｉｎｄＩＩＩ切断部
位に相当する配列と５’−側にＧＣＧＣを加えたもの。
配列表の配列番号８に記載）及び５’−ＡＴＡＴＧＣＧ
ＧＣＣＧＣＡＣＴＴＴＣＴＴＣＡＴＧＴＡＴＧＴＧＧＴ
−３’（ＡＧＴ１ ｃＤＮＡの第１４７３−１４９２塩
基対に相当する配列に、ＮｏｔＩ切断部位に相当する配
列と５’−側にＡＴＡＴを加えたもの。配列表の配列番
号９に記載）を用いて、ＡＧＴ１ ｃＤＮＡを鋳型とし
て、ＰＣＲを行った。得られたＰＣＲ産物は、Ｈｉｎｄ
IIIとＮｏｔＩで切断し、哺乳類細胞発現ベクターｐｃ
ＤＮＡ３．１（＋）（Invitrogen社）のＨｉｎｄIII及
びＮｏｔＩ部位にライゲーションした。さらに、合成オ
リゴＤＮＡプライマー５’−ＡＴＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣ
ＡＧＡＴＧＡＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＡＡＧＡＧ−３’
（配列番号６で示されるマウスｒＢＡＴの翻訳開始コド
ンＡＴＧの直後より２１塩基対に相当する配列に、Ｎｏ
ｔＩ切断部位に相当する配列と５’−側にＡＴＡＴを加
えたもの。配列表の配列番号１０に記載）及び５’−Ｇ
ＣＧＣＧＣＴＣＴＡＧＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＡＴＴ
ＴＧＧＣＡＴＡＡＴＣ−３’（配列番号６で示されるマ
ウスｒＢＡＴの２２２８〜２２５１塩基対に相当する配
列に、ＸｂａＩ切断部位に相当する配列と５’−側にＧ
ＣＧＣを加えたもの配列表の配列番号１１に記載）を用
いて、ｒＢＡＴ ｃＤＮＡを鋳型として、ＰＣＲを行っ
た。得られたＰＣＲ産物は、ＮｏｔＩとＸｂａＩで切断
し、上記ＡＧＴ１ ＰＣＲ産物を組み込んだ哺乳類細胞
発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）のＮｏｔＩ及びＸ
ｂａＩ部位へライゲーションすることにより、ＡＧＴ１
とｒＢＡＴの融合タンパク質をコードするｃＤＮＡを得
た（図５）。
ーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合
タンパク質の作製とその機能の解析 （１）酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トラ
ンスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴと
の融合タンパク質の作製 ＡＧＴ１とｒＢＡＴの融合タンパク質（ＡＧＴ１−ｒＢ
ＡＴ）を作製するために、合成オリゴＤＮＡプライマー
５’−ＧＣＧＣＧＡＡＧＣＴＴＡＣＣＴＡＴＡＧＧＣＡ
ＧＡＡＡＣＡＴＴＣ−３’（ＡＧＴ１ ｃＤＮＡの第４
〜２３塩基対に相当する配列に、ＨｉｎｄＩＩＩ切断部
位に相当する配列と５’−側にＧＣＧＣを加えたもの。
配列表の配列番号８に記載）及び５’−ＡＴＡＴＧＣＧ
ＧＣＣＧＣＡＣＴＴＴＣＴＴＣＡＴＧＴＡＴＧＴＧＧＴ
−３’（ＡＧＴ１ ｃＤＮＡの第１４７３−１４９２塩
基対に相当する配列に、ＮｏｔＩ切断部位に相当する配
列と５’−側にＡＴＡＴを加えたもの。配列表の配列番
号９に記載）を用いて、ＡＧＴ１ ｃＤＮＡを鋳型とし
て、ＰＣＲを行った。得られたＰＣＲ産物は、Ｈｉｎｄ
IIIとＮｏｔＩで切断し、哺乳類細胞発現ベクターｐｃ
ＤＮＡ３．１（＋）（Invitrogen社）のＨｉｎｄIII及
びＮｏｔＩ部位にライゲーションした。さらに、合成オ
リゴＤＮＡプライマー５’−ＡＴＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣ
ＡＧＡＴＧＡＧＧＡＣＡＡＡＧＧＣＡＡＧＡＧ−３’
（配列番号６で示されるマウスｒＢＡＴの翻訳開始コド
ンＡＴＧの直後より２１塩基対に相当する配列に、Ｎｏ
ｔＩ切断部位に相当する配列と５’−側にＡＴＡＴを加
えたもの。配列表の配列番号１０に記載）及び５’−Ｇ
ＣＧＣＧＣＴＣＴＡＧＡＡＡＴＧＣＴＴＴＡＧＴＡＴＴ
ＴＧＧＣＡＴＡＡＴＣ−３’（配列番号６で示されるマ
ウスｒＢＡＴの２２２８〜２２５１塩基対に相当する配
列に、ＸｂａＩ切断部位に相当する配列と５’−側にＧ
ＣＧＣを加えたもの配列表の配列番号１１に記載）を用
いて、ｒＢＡＴ ｃＤＮＡを鋳型として、ＰＣＲを行っ
た。得られたＰＣＲ産物は、ＮｏｔＩとＸｂａＩで切断
し、上記ＡＧＴ１ ＰＣＲ産物を組み込んだ哺乳類細胞
発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）のＮｏｔＩ及びＸ
ｂａＩ部位へライゲーションすることにより、ＡＧＴ１
とｒＢＡＴの融合タンパク質をコードするｃＤＮＡを得
た（図５）。
【００４３】ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）を作製するために、合成オリ
ゴＤＮＡプライマー５’−ＧＣＧＣＧＡＡＧＣＴＴＡＣ
ＣＴＡＴＡＧＧＣＡＧＡＡＡＣＡＴＴＣ−３’（ＡＧＴ
１ ｃＤＮＡの第４〜２３塩基対に相当する配列に、Ｈ
ｉｎｄIII切断部位に相当する配列と５’−側にＧＣＧ
Ｃを加えたもの。配列表の配列番号８に記載）及び５’
−ＡＴＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＴＴＴＣＴＴＣＡＴＧ
ＴＡＴＧＴＧＧＴ−３’（ＡＧＴ１ ｃＤＮＡの第１４
７３〜１４９２塩基対に相当する配列に、ＮｏｔＩ切断
部位に相当する配列と５’−側にＡＴＡＴを加えたも
の。配列表の配列番号９に記載）を用いて、ＡＧＴ１
ｃＤＮＡを鋳型として、ＰＣＲを行った。得られたＰＣ
Ｒ産物は、ＨｉｎｄIIIとＮｏｔＩで切断し、哺乳類細
胞発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（Invitrogen
社）のＨｉｎｄIII及びＮｏｔＩ部位にライゲーション
した。さらに、合成オリゴＤＮＡプライマー５’−ＡＴ
ＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧＡ
ＡＧＴＧＧＡ−３’（配列番号４で示されるマウス４Ｆ
２ｈｃの翻訳開始コドンＡＴＧの直後より２１塩基対に
相当する配列に、ＮｏｔＩ切断部位に相当する配列と
５’−側にＡＴＡＴを加えたもの。配列表の配列番号１
２に記載）及び５５’−ＧＣＧＣＴＣＴＡＧＡＣＡＴＧ
ＡＧＧＣＡＧＧＧＧＴＧＡＴＧＴＴＴＴ−３’（配列番
号４で示されるマウス４Ｆ２ｈｃの１８２０〜１８３８
塩基対に相当する配列に、ＸｂａＩ切断部位に相当する
配列と５’−側にＧＣＧＣを加えたもの。配列表の配列
番号１３に記載）を用いて、４Ｆ２ｈｃｃＤＮＡを鋳型
として、ＰＣＲを行った。得られたＰＣＲ産物は、Ｎｏ
ｔＩとＸｂａＩで切断し、上記ＡＧＴ１ ＰＣＲ産物を
組み込んだ哺乳類細胞発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１
（＋）のＮｏｔＩ及びＸｂａＩ部位へライゲーションす
ることにより、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質
をコードするｃＤＮＡを得た（図５）。
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）を作製するために、合成オリ
ゴＤＮＡプライマー５’−ＧＣＧＣＧＡＡＧＣＴＴＡＣ
ＣＴＡＴＡＧＧＣＡＧＡＡＡＣＡＴＴＣ−３’（ＡＧＴ
１ ｃＤＮＡの第４〜２３塩基対に相当する配列に、Ｈ
ｉｎｄIII切断部位に相当する配列と５’−側にＧＣＧ
Ｃを加えたもの。配列表の配列番号８に記載）及び５’
−ＡＴＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＣＴＴＴＣＴＴＣＡＴＧ
ＴＡＴＧＴＧＧＴ−３’（ＡＧＴ１ ｃＤＮＡの第１４
７３〜１４９２塩基対に相当する配列に、ＮｏｔＩ切断
部位に相当する配列と５’−側にＡＴＡＴを加えたも
の。配列表の配列番号９に記載）を用いて、ＡＧＴ１
ｃＤＮＡを鋳型として、ＰＣＲを行った。得られたＰＣ
Ｒ産物は、ＨｉｎｄIIIとＮｏｔＩで切断し、哺乳類細
胞発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１（＋）（Invitrogen
社）のＨｉｎｄIII及びＮｏｔＩ部位にライゲーション
した。さらに、合成オリゴＤＮＡプライマー５’−ＡＴ
ＡＴＧＣＧＧＣＣＧＣＡＡＧＣＣＡＧＧＡＣＡＣＣＧＡ
ＡＧＴＧＧＡ−３’（配列番号４で示されるマウス４Ｆ
２ｈｃの翻訳開始コドンＡＴＧの直後より２１塩基対に
相当する配列に、ＮｏｔＩ切断部位に相当する配列と
５’−側にＡＴＡＴを加えたもの。配列表の配列番号１
２に記載）及び５５’−ＧＣＧＣＴＣＴＡＧＡＣＡＴＧ
ＡＧＧＣＡＧＧＧＧＴＧＡＴＧＴＴＴＴ−３’（配列番
号４で示されるマウス４Ｆ２ｈｃの１８２０〜１８３８
塩基対に相当する配列に、ＸｂａＩ切断部位に相当する
配列と５’−側にＧＣＧＣを加えたもの。配列表の配列
番号１３に記載）を用いて、４Ｆ２ｈｃｃＤＮＡを鋳型
として、ＰＣＲを行った。得られたＰＣＲ産物は、Ｎｏ
ｔＩとＸｂａＩで切断し、上記ＡＧＴ１ ＰＣＲ産物を
組み込んだ哺乳類細胞発現ベクターｐｃＤＮＡ３．１
（＋）のＮｏｔＩ及びＸｂａＩ部位へライゲーションす
ることにより、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質
をコードするｃＤＮＡを得た（図５）。
【００４４】（２）酸性アミノ酸を輸送するナトリウム
非依存性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるい
はｒＢＡＴとの融合タンパク質の機能発現 マウスＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡを卵母細胞に発現させた
場合、マウスＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡとマウス４Ｆ２ｈ
ｃ遺伝子ｃＲＮＡを卵母細胞に発現させた場合、ＡＧＴ
１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質を
卵母細胞に発現させた場合のアスパラギン酸の取り込み
を比較した。マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎ
ｇ、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇ、ＡＧＴ１遺伝
子ｃＲＮＡ １２．５ｎｇ／マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝子ｃ
ＲＮＡ１２．５ｎｇ、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ融合タンパ
ク質遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇ、あるいはＡＧＴ１−ｒ
ＢＡＴ融合タンパク質遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇを卵母
細胞に注入することによって発現させ３日間培養した。
マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲ
ＮＡ、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ／マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝
子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ融合タンパク質遺伝
子ｃＲＮＡ、あるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ融合タンパク
質遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞について、基質と
してアスパラギン酸を用い、基質の取り込み実験を金井
らの方法（Kanai and Hediger、Nature、第360巻、467-
471貢、1992年）に準じて、以下のように行った。基質
として１４Ｃ−アスパラギン酸（２０ｍＭ）を含むナト
リウムフリー取り込み溶液［１００ｍＭ 塩化コリン、
２ｍＭ 塩化カリウム、１．８ｍＭ 塩化カルシウム、
１ｍＭ 塩化マグネシウム、５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐ
Ｈ７．４］中にて卵母細胞を３０分間放置して、細胞内
に取り込まれた放射能のカウントで基質の取り込み率を
測定した。その結果（図６）、アスパラギン酸の取り込
みは、４Ｆ２ｈｃのみを発現させた卵母細胞、ＡＧＴ１
のみを発現させた卵母細胞、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃを共
発現させた卵母細胞では、対照として水を注入した卵母
細胞と同レベルであったが、ＡＧＴ１−ｒＢＡＴあるい
はＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃを発現させた卵母細胞ではおお
きなアスパラギン酸の取り込みを示した。
非依存性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるい
はｒＢＡＴとの融合タンパク質の機能発現 マウスＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡを卵母細胞に発現させた
場合、マウスＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡとマウス４Ｆ２ｈ
ｃ遺伝子ｃＲＮＡを卵母細胞に発現させた場合、ＡＧＴ
１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質を
卵母細胞に発現させた場合のアスパラギン酸の取り込み
を比較した。マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎ
ｇ、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇ、ＡＧＴ１遺伝
子ｃＲＮＡ １２．５ｎｇ／マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝子ｃ
ＲＮＡ１２．５ｎｇ、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ融合タンパ
ク質遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇ、あるいはＡＧＴ１−ｒ
ＢＡＴ融合タンパク質遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇを卵母
細胞に注入することによって発現させ３日間培養した。
マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲ
ＮＡ、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ／マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝
子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ融合タンパク質遺伝
子ｃＲＮＡ、あるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ融合タンパク
質遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞について、基質と
してアスパラギン酸を用い、基質の取り込み実験を金井
らの方法（Kanai and Hediger、Nature、第360巻、467-
471貢、1992年）に準じて、以下のように行った。基質
として１４Ｃ−アスパラギン酸（２０ｍＭ）を含むナト
リウムフリー取り込み溶液［１００ｍＭ 塩化コリン、
２ｍＭ 塩化カリウム、１．８ｍＭ 塩化カルシウム、
１ｍＭ 塩化マグネシウム、５ｍＭ ＨＥＰＥＳ、ｐ
Ｈ７．４］中にて卵母細胞を３０分間放置して、細胞内
に取り込まれた放射能のカウントで基質の取り込み率を
測定した。その結果（図６）、アスパラギン酸の取り込
みは、４Ｆ２ｈｃのみを発現させた卵母細胞、ＡＧＴ１
のみを発現させた卵母細胞、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃを共
発現させた卵母細胞では、対照として水を注入した卵母
細胞と同レベルであったが、ＡＧＴ１−ｒＢＡＴあるい
はＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃを発現させた卵母細胞ではおお
きなアスパラギン酸の取り込みを示した。
【００４５】ｒＢＡＴあるいは４Ｆ２ｈｃが、ＡＧＴ１
の直接の補助因子とはならないことを、ＣＯＳ−７細胞
を用いて検討した。ＡＧＴ１ ｃＤＮＡ、ｒＢＡＴ ｃＤ
ＮＡあるいは４Ｆ２ｈｃ ｃＤＮＡを含むプラスミドＤ
ＮＡ（各１ｍｇ）を、[Mizoguchi et al.: Kidney Int.
59: 1821-1833, 2001]の方法に従って、ＬＩＰＯＦＥ
ＣＴＡＭＩＮＥ ２０００ Ｒｅａｇｅｎｔ (life Tec
hnologies) を用いてＣＯＳ−７細胞に導入した。導入
後、細胞は２４穴プレートで２日間培養し、１４Ｃ−ア
スパラギン酸（２０ｍＭ）の取り込みを測定した。取り
込み測定は、[Mizoguchi et al.: Kidney Int. 59: 182
1-1833, 2001]の方法に従い、培養液を取り除き、１４
Ｃ−アスパラギン酸を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢ
Ｓ（Gibco社製）を添加することにより開始し、それを
取り除き氷冷Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＰＢＳにより洗浄す
ることにより終了した。洗浄後、０．１Ｎ ＮａＯＨで
溶解し、液体シンチレーションカウンターにより放射活
性を測定した。その結果（図７）、アスパラギン酸の取
り込みは、４Ｆ２ｈｃのみを発現させた卵母細胞、ｒＢ
ＡＴのみを発現させた卵母細胞、ＡＧＴ１のみを発現さ
せた卵母細胞、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃを共発現させた卵
母細胞及びＡＧＴ１とｒＢＡＴを共発現させた卵母細胞
では、対照として挿入ｃＤＮＡを含まないｐｃＤＮＡ
３．１プラスミドを注入した卵母細胞と同レベルであ
り、ｒＢＡＴあるいは４Ｆ２ｈｃが、ＡＧＴ１の直接の
補助因子とはならないことが確認された。
の直接の補助因子とはならないことを、ＣＯＳ−７細胞
を用いて検討した。ＡＧＴ１ ｃＤＮＡ、ｒＢＡＴ ｃＤ
ＮＡあるいは４Ｆ２ｈｃ ｃＤＮＡを含むプラスミドＤ
ＮＡ（各１ｍｇ）を、[Mizoguchi et al.: Kidney Int.
59: 1821-1833, 2001]の方法に従って、ＬＩＰＯＦＥ
ＣＴＡＭＩＮＥ ２０００ Ｒｅａｇｅｎｔ (life Tec
hnologies) を用いてＣＯＳ−７細胞に導入した。導入
後、細胞は２４穴プレートで２日間培養し、１４Ｃ−ア
スパラギン酸（２０ｍＭ）の取り込みを測定した。取り
込み測定は、[Mizoguchi et al.: Kidney Int. 59: 182
1-1833, 2001]の方法に従い、培養液を取り除き、１４
Ｃ−アスパラギン酸を含むＤｕｌｂｅｃｃｏ’ｓ ＰＢ
Ｓ（Gibco社製）を添加することにより開始し、それを
取り除き氷冷Ｄｕｌｂｅｃｃｏ’ｓＰＢＳにより洗浄す
ることにより終了した。洗浄後、０．１Ｎ ＮａＯＨで
溶解し、液体シンチレーションカウンターにより放射活
性を測定した。その結果（図７）、アスパラギン酸の取
り込みは、４Ｆ２ｈｃのみを発現させた卵母細胞、ｒＢ
ＡＴのみを発現させた卵母細胞、ＡＧＴ１のみを発現さ
せた卵母細胞、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃを共発現させた卵
母細胞及びＡＧＴ１とｒＢＡＴを共発現させた卵母細胞
では、対照として挿入ｃＤＮＡを含まないｐｃＤＮＡ
３．１プラスミドを注入した卵母細胞と同レベルであ
り、ｒＢＡＴあるいは４Ｆ２ｈｃが、ＡＧＴ１の直接の
補助因子とはならないことが確認された。
【００４６】（３）酸性アミノ酸を輸送するナトリウム
非依存性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合
タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）の卵母細胞細胞膜
への発現の蛍光免疫法による同定 卵母細胞にＡＧＴ１を発現させた場合は機能しないが、
ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４
Ｆ２ｈｃ）は機能活性を示したが、これは、ＡＧＴ１は
細胞膜へ輸送されないが、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃは細胞
膜に輸送されるためであるかどうかを、蛍光免疫法によ
って検討した。ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇある
いはＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃとの融合タンパク質（ＡＧＴ
１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇを卵母細胞
に注入することによって発現させ３日間培養後、卵母細
胞を４％パラホルムアルデヒド−リン酸緩衝液で固定
し、常法に従いパラフィン切片（３ｍｍ）を作製した。
脱パラフィン後、切片を０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含
む０．０５Ｍトリス緩衝生食液中で、５％ヤギ血清でブ
ロッキングし、アフィニティー精製した抗Ａｓｃ−２抗
体、あるいはアフィニティー精製した抗４Ｆ２ｈｃ抗体
[Fukasawa et al.,J. Biol. Chem. 275: 9690-9698, 20
00]で処理した。その後、切片は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏ
ｒ ４８８−標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Molecular Prob
e, Inc.）で処理し、０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含む
０．０５Ｍトリス緩衝生食液で洗浄後、Ｏｌｙｍｐｕｓ
Ｆｌｕｏｖｉｅｗ（ＦＶ５００）共焦点レーザー顕微
鏡（オリンパス）を用いて観察した。アルゴンレーザー
により４８８ｎｍで励起し、ＢＡ５０５ＩＦフィルター
を用いてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８からの蛍光を検
出した。
非依存性トランスポーターＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合
タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）の卵母細胞細胞膜
への発現の蛍光免疫法による同定 卵母細胞にＡＧＴ１を発現させた場合は機能しないが、
ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４
Ｆ２ｈｃ）は機能活性を示したが、これは、ＡＧＴ１は
細胞膜へ輸送されないが、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃは細胞
膜に輸送されるためであるかどうかを、蛍光免疫法によ
って検討した。ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇある
いはＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃとの融合タンパク質（ＡＧＴ
１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡ ２５ｎｇを卵母細胞
に注入することによって発現させ３日間培養後、卵母細
胞を４％パラホルムアルデヒド−リン酸緩衝液で固定
し、常法に従いパラフィン切片（３ｍｍ）を作製した。
脱パラフィン後、切片を０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含
む０．０５Ｍトリス緩衝生食液中で、５％ヤギ血清でブ
ロッキングし、アフィニティー精製した抗Ａｓｃ−２抗
体、あるいはアフィニティー精製した抗４Ｆ２ｈｃ抗体
[Fukasawa et al.,J. Biol. Chem. 275: 9690-9698, 20
00]で処理した。その後、切片は、Ａｌｅｘａ Ｆｌｕｏ
ｒ ４８８−標識ヤギ抗ウサギＩｇＧ（Molecular Prob
e, Inc.）で処理し、０．１％のＴｗｅｅｎ２０を含む
０．０５Ｍトリス緩衝生食液で洗浄後、Ｏｌｙｍｐｕｓ
Ｆｌｕｏｖｉｅｗ（ＦＶ５００）共焦点レーザー顕微
鏡（オリンパス）を用いて観察した。アルゴンレーザー
により４８８ｎｍで励起し、ＢＡ５０５ＩＦフィルター
を用いてＡｌｅｘａ Ｆｌｕｏｒ ４８８からの蛍光を検
出した。
【００４７】その結果（図８）、ＡＧＴ１を発現させた
卵母細胞では、抗ＡＧＴ１抗体で検出されるＡＧＴ１タ
ンパク質は細胞膜には存在せず、細胞質内に留まってい
る（図８ｄ）が、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク
質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）を発現させた卵母細胞で
は、抗４Ｆ２ｈｃ抗体（図８ｅ）、抗ＡＧＴ１抗体（図
８ｆ）ともに細胞膜に発現したＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ融
合タンパク質を検出した。対照として水を注入した卵母
細胞では、抗４Ｆ２ｈｃ抗体（図８ａ）あるいは抗ＡＧ
Ｔ１抗体（図８ｂ）による特異的な発色は見られなかっ
た。従って、卵母細胞にＡＧＴ１を発現させた場合は機
能せず、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧ
Ｔ１−４Ｆ２ｈｃ）が機能活性を示したことは、ＡＧＴ
１は単独では細胞膜へ輸送されないが、４Ｆ２ｈｃとの
融合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）は細胞膜に輸
送されるためであることが確認された。
卵母細胞では、抗ＡＧＴ１抗体で検出されるＡＧＴ１タ
ンパク質は細胞膜には存在せず、細胞質内に留まってい
る（図８ｄ）が、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク
質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）を発現させた卵母細胞で
は、抗４Ｆ２ｈｃ抗体（図８ｅ）、抗ＡＧＴ１抗体（図
８ｆ）ともに細胞膜に発現したＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ融
合タンパク質を検出した。対照として水を注入した卵母
細胞では、抗４Ｆ２ｈｃ抗体（図８ａ）あるいは抗ＡＧ
Ｔ１抗体（図８ｂ）による特異的な発色は見られなかっ
た。従って、卵母細胞にＡＧＴ１を発現させた場合は機
能せず、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧ
Ｔ１−４Ｆ２ｈｃ）が機能活性を示したことは、ＡＧＴ
１は単独では細胞膜へ輸送されないが、４Ｆ２ｈｃとの
融合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）は細胞膜に輸
送されるためであることが確認された。
【００４８】（４）ＡＧＴ１の輸送活性の塩依存性
ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃ あるいはｒＢＡＴとの融合タン
パク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃあるいはＡＧＴ１−ｒＢ
ＡＴ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞によるアスパ
ラギン酸取り込み実験において培地に添加する塩の影響
を調べた。アスパラギン酸の取り込み実験は、ＡＧＴ１
と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質（Ａ
ＧＴ１−４Ｆ２ｈｃあるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ）遺伝
子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞を用い、前記実施例２
（２）記載方法に準じて実施した。但し、取り込み用溶
液は、ナトリウムイオンの影響をみる場合は、ナトリウ
ムフリー取り込み溶液にかえて、標準取り込み溶液（１
００ｍＭ 塩化コリンを１００ｍＭ 塩化ナトリウムに
変えたもの）を用いた。塩素イオンの影響をみる場合
は、標準取り込み溶液にかえて、グルコン酸取り込み溶
液（１００ｍＭ塩化ナトリウムを１００ｍＭグルコン酸
ナトリウムに変えたもの）を用いた。その結果（図
９）、細胞外のコリンをナトリウムに変えても、細胞外
の塩素イオンをグルコン酸イオンに変えても、アスパラ
ギン酸取り込みに何ら影響を与えなかった。このことか
ら、Ａｓｃ−２はナトリウムイオン及び塩素イオンに非
依存的に働くトランスポーターであることが示された。
パク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃあるいはＡＧＴ１−ｒＢ
ＡＴ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞によるアスパ
ラギン酸取り込み実験において培地に添加する塩の影響
を調べた。アスパラギン酸の取り込み実験は、ＡＧＴ１
と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タンパク質（Ａ
ＧＴ１−４Ｆ２ｈｃあるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ）遺伝
子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞を用い、前記実施例２
（２）記載方法に準じて実施した。但し、取り込み用溶
液は、ナトリウムイオンの影響をみる場合は、ナトリウ
ムフリー取り込み溶液にかえて、標準取り込み溶液（１
００ｍＭ 塩化コリンを１００ｍＭ 塩化ナトリウムに
変えたもの）を用いた。塩素イオンの影響をみる場合
は、標準取り込み溶液にかえて、グルコン酸取り込み溶
液（１００ｍＭ塩化ナトリウムを１００ｍＭグルコン酸
ナトリウムに変えたもの）を用いた。その結果（図
９）、細胞外のコリンをナトリウムに変えても、細胞外
の塩素イオンをグルコン酸イオンに変えても、アスパラ
ギン酸取り込みに何ら影響を与えなかった。このことか
ら、Ａｓｃ−２はナトリウムイオン及び塩素イオンに非
依存的に働くトランスポーターであることが示された。
【００４９】（５）ＡＧＴ１のミカエリス−メンテン動
力学試験 酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポ
ーターＡＧＴ１のミカエリス−メンテン動力学試験を行
った。基質アスパラギン酸の濃度の違いによるアスパラ
ギン酸取り込み率の変化を調べることにより、ＡＧＴ１
のミカエリス−メンテン動力学試験を行った。アスパラ
ギン酸の取り込み実験は、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるい
はｒＢＡＴとの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ
あるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ）遺伝子ｃＲＮＡを注入し
た卵母細胞を用い、前記実施例２（２）記載方法に準じ
て実施した。その結果（図１０）、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈ
ｃのアスパラギン酸輸送のＫｍ値は２５．５＋５．９ｍ
Ｍ（平均＋標準誤差）であった。ＡＧＴ１−ｒＢＡＴの
アスパラギン酸輸送のＫｍ値は２０．１＋６．１であっ
た。グルタミン酸においてもＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融
合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）において同様に
ミカエリス−メンテン動力学試験を行い、Ｋｍ値とＶｍ
ａｘ値を算出した。以上の結果を次の表１に示した。
力学試験 酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポ
ーターＡＧＴ１のミカエリス−メンテン動力学試験を行
った。基質アスパラギン酸の濃度の違いによるアスパラ
ギン酸取り込み率の変化を調べることにより、ＡＧＴ１
のミカエリス−メンテン動力学試験を行った。アスパラ
ギン酸の取り込み実験は、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるい
はｒＢＡＴとの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ
あるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ）遺伝子ｃＲＮＡを注入し
た卵母細胞を用い、前記実施例２（２）記載方法に準じ
て実施した。その結果（図１０）、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈ
ｃのアスパラギン酸輸送のＫｍ値は２５．５＋５．９ｍ
Ｍ（平均＋標準誤差）であった。ＡＧＴ１−ｒＢＡＴの
アスパラギン酸輸送のＫｍ値は２０．１＋６．１であっ
た。グルタミン酸においてもＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融
合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）において同様に
ミカエリス−メンテン動力学試験を行い、Ｋｍ値とＶｍ
ａｘ値を算出した。以上の結果を次の表１に示した。
【００５０】
【００５１】（６）ＡＧＴ１の基質選択性（アミノ酸及
びその類似物質添加による阻害実験） ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４
Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞によるア
スパラギン酸の取り込み実験において、系への各種アミ
ノ酸及びその類似物質添加の影響を調べた。アスパラギ
ン酸の取り込み実験は、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タ
ンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注
入した卵母細胞を用い、前記実施例２（２）記載方法に
準じて実施した。但し、ナトリウムフリー取り込み溶液
を用い、２ｍＭの各種化合物（非標識）の存在下及び非
存在下で、１４Ｃ−アスパラギン酸（２０ｍＭ）の取り
込みを測定した。その結果（図１１）、アスパラギン
酸、グルタミン酸及びシステインで、有意なｃｉｓ−阻
害効果が観察された。塩基性アミノ酸、システイン以外
の中性アミノ酸、シスチン、輸送系Ｌ特異的抑制薬２−
アミノ−２−ノルボルナンカルボン酸（2-amino-2-norb
ornane-carboxylic acid (BCH)）、γ−アミノイソブチ
ル酸、及びα−アミノメチルイソブチル酸、Ｄ−アスパ
ラギン酸、Ｄ−グルタミン酸は、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ
を介した１４Ｃ−アスパラギン酸の取り込みに影響を与
えなかった（図１１）。
びその類似物質添加による阻害実験） ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４
Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞によるア
スパラギン酸の取り込み実験において、系への各種アミ
ノ酸及びその類似物質添加の影響を調べた。アスパラギ
ン酸の取り込み実験は、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タ
ンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注
入した卵母細胞を用い、前記実施例２（２）記載方法に
準じて実施した。但し、ナトリウムフリー取り込み溶液
を用い、２ｍＭの各種化合物（非標識）の存在下及び非
存在下で、１４Ｃ−アスパラギン酸（２０ｍＭ）の取り
込みを測定した。その結果（図１１）、アスパラギン
酸、グルタミン酸及びシステインで、有意なｃｉｓ−阻
害効果が観察された。塩基性アミノ酸、システイン以外
の中性アミノ酸、シスチン、輸送系Ｌ特異的抑制薬２−
アミノ−２−ノルボルナンカルボン酸（2-amino-2-norb
ornane-carboxylic acid (BCH)）、γ−アミノイソブチ
ル酸、及びα−アミノメチルイソブチル酸、Ｄ−アスパ
ラギン酸、Ｄ−グルタミン酸は、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ
を介した１４Ｃ−アスパラギン酸の取り込みに影響を与
えなかった（図１１）。
【００５２】ＡＧＴ１とｒＢＡＴの融合タンパク質（Ａ
ＧＴ１−ｒＢＡＴ）遺伝子ｃＲＮＡを共に注入した卵母
細胞においても、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃの場合と同様に
して、卵母細胞によるアスパラギン酸の取り込み実験に
おいて、系への各種アミノ酸及びその類似物質添加の影
響を調べた。その結果、ＡＧＴ１−ｒＢＡＴにおいて
も、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃの場合と同様な結果が得ら
れ、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タ
ンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃあるいはＡＧＴ１−ｒ
ＢＡＴ）においては、４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴの部
分は基質結合部位の特性には影響せず、融合タンパク質
で得られた基質選択性に関する情報は、ＡＧＴ１そのも
のも輸送特性を反映することが示唆された。酸性アミノ
酸類似物質のうち、トレオ−β−ヒドロキシアスパラギ
ン酸(threo-b-hydroxyaspartate(THA))、Ｌ−セリン−
Ｏ−硫酸(L-serine-O-sulfate(SOS))、Ｌ−システイン
硫酸(L-cysteine sulfinate)及びＬ−システイン酸(L-c
ysteate)は、ＡＧＴ１を介した１４Ｃ−アスパラギン酸
の取り込みを強く阻害した。これに対して、Ｌ−α−ア
ミノアジピン酸(L-α-aminoadipate)、Ｌ−ホモシステ
イン酸(L-homocysteate)、Ｌ−トランス−ピロリジン−
２，４ジカルボン酸(L-trans-pyrrolidine-2,4-dicarbo
xylate(PDC))及びジヒドロカイニン酸(dihydrokainate
(DHK)には、ＡＧＴ１を介した１４Ｃ−アスパラギン酸
の取り込みへの阻害効果は見られなかった（図１２）。
ＧＴ１−ｒＢＡＴ）遺伝子ｃＲＮＡを共に注入した卵母
細胞においても、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃの場合と同様に
して、卵母細胞によるアスパラギン酸の取り込み実験に
おいて、系への各種アミノ酸及びその類似物質添加の影
響を調べた。その結果、ＡＧＴ１−ｒＢＡＴにおいて
も、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃの場合と同様な結果が得ら
れ、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴとの融合タ
ンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃあるいはＡＧＴ１−ｒ
ＢＡＴ）においては、４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴの部
分は基質結合部位の特性には影響せず、融合タンパク質
で得られた基質選択性に関する情報は、ＡＧＴ１そのも
のも輸送特性を反映することが示唆された。酸性アミノ
酸類似物質のうち、トレオ−β−ヒドロキシアスパラギ
ン酸(threo-b-hydroxyaspartate(THA))、Ｌ−セリン−
Ｏ−硫酸(L-serine-O-sulfate(SOS))、Ｌ−システイン
硫酸(L-cysteine sulfinate)及びＬ−システイン酸(L-c
ysteate)は、ＡＧＴ１を介した１４Ｃ−アスパラギン酸
の取り込みを強く阻害した。これに対して、Ｌ−α−ア
ミノアジピン酸(L-α-aminoadipate)、Ｌ−ホモシステ
イン酸(L-homocysteate)、Ｌ−トランス−ピロリジン−
２，４ジカルボン酸(L-trans-pyrrolidine-2,4-dicarbo
xylate(PDC))及びジヒドロカイニン酸(dihydrokainate
(DHK)には、ＡＧＴ１を介した１４Ｃ−アスパラギン酸
の取り込みへの阻害効果は見られなかった（図１２）。
【００５３】（７）ＡＧＴ１の基質選択性（各種アミノ
酸及びその類似物質を基質とする取り込み試験） 各種アミノ酸及びその類似物質を基質として、ＡＧＴ１
と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈ
ｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞による取り込み
を調べた。各種アミノ酸及びその類似物質の取り込み実
験は、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ
１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞を
用い、前記実施例２（２）記載方法に準じて実施した。
但し、基質としては、１４Ｃ−アスパラギン酸に変え
て、放射能ラベルされた各種の化合物を用いた。その結
果、Ｌ−アスパラギン酸（１４Ｃ化合物）に加えてＬ−
グルタミン酸（ １４Ｃ化合物）（以上図１３）を基質と
した場合に、卵母細胞への大きな取り込みが認められ
た。
酸及びその類似物質を基質とする取り込み試験） 各種アミノ酸及びその類似物質を基質として、ＡＧＴ１
と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈ
ｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞による取り込み
を調べた。各種アミノ酸及びその類似物質の取り込み実
験は、ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ
１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞を
用い、前記実施例２（２）記載方法に準じて実施した。
但し、基質としては、１４Ｃ−アスパラギン酸に変え
て、放射能ラベルされた各種の化合物を用いた。その結
果、Ｌ−アスパラギン酸（１４Ｃ化合物）に加えてＬ−
グルタミン酸（ １４Ｃ化合物）（以上図１３）を基質と
した場合に、卵母細胞への大きな取り込みが認められ
た。
【００５４】
【発明の効果】本発明の酸性アミノ酸を輸送するナトリ
ウム非依存性トランスポーター及びその遺伝子は、当該
トランスポーターの発現箇所での酸性アミノ酸の及び外
来性異物も含めたアミノ酸類似化合物の輸送のインビト
ロでの検討や、それを基にしたそれら化合物の体内動態
のインビトロでの予測を可能とする。さらに、当該トラ
ンスポーターの発現箇所を効率良く透過する薬物の開発
に有用と考えられる。また、当該トランスポーターの有
する酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送する能力を変
調させることにより、細胞増殖を制御する方法の開発に
利用できる。
ウム非依存性トランスポーター及びその遺伝子は、当該
トランスポーターの発現箇所での酸性アミノ酸の及び外
来性異物も含めたアミノ酸類似化合物の輸送のインビト
ロでの検討や、それを基にしたそれら化合物の体内動態
のインビトロでの予測を可能とする。さらに、当該トラ
ンスポーターの発現箇所を効率良く透過する薬物の開発
に有用と考えられる。また、当該トランスポーターの有
する酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送する能力を変
調させることにより、細胞増殖を制御する方法の開発に
利用できる。
【００５５】
【配列表】
SEQUENCE LISTING
<110> Japan Science and Tecchnology Corporation
<120> Na+ independent acidic amino acid transporter and its
gene
<130> PA900314
<140>
<141>
<160> 16
<170> PatentIn Ver. 2.1
<210> 1
<211> 478
<212> PRT
<213> mouse
<220>
<223> AGT1
<400> 1
Met Ala Met Asp Ser Lys Lys Glu Ile Arg Leu Lys Arg Glu Leu Gly
1 5 10 15
Tyr Phe Trp Gly Thr Asn Phe Leu Ile Ile Asn Ile Ile Gly Ala Gly
20 25 30
Ile Phe Val Ser Pro Lys Gly Val Leu Gln His Ser Ser Met Asn Val
35 40 45
Gly Val Ser Leu Cys Val Trp Ala Val Cys Ala Val Leu Thr Leu Thr
50 55 60
Ser Ala Leu Cys Ser Ala Glu Ile Gly Ile Thr Phe Pro Tyr Ser Gly
65 70 75 80
Ala His Tyr Tyr Phe Leu Lys Arg Cys Phe Gly Pro Leu Val Ala Phe
85 90 95
Leu Arg Leu Trp Thr Ser Leu Phe Leu Gly Pro Gly Leu Ile Ala Ser
100 105 110
Gln Ala Leu Leu Leu Ala Glu Tyr Gly Val Gln Pro Phe Tyr Pro Ser
115 120 125
Cys Ser Ala Pro Ile Leu Pro Arg Lys Cys Leu Ala Leu Ala Met Leu
130 135 140
Trp Ile Val Gly Ile Leu Asn Ser Arg Gly Val Lys Glu Leu Ser Trp
145 150 155 160
Leu Gln Thr Val Ser Ser Val Leu Lys Val Gly Ile Leu Gly Val Ile
165 170 175
Ser Leu Ser Gly Leu Phe Leu Leu Val Arg Gly Lys Lys Glu Asn Val
180 185 190
Gln Arg Leu Gln Asn Ala Phe Asp Ala Glu Phe Pro Glu Val Ser Gln
195 200 205
Leu Ile Glu Ala Ile Phe Gln Gly Tyr Phe Ala Phe Ser Gly Gly Gly
210 215 220
Cys Phe Thr Cys Ile Ala Gly Glu Leu Lys Lys Pro Ser Lys Thr Ile
225 230 235 240
Pro Arg Cys Ile Phe Thr Gly Leu Pro Leu Val Thr Val Val Tyr Leu
245 250 255
Leu Ala Asn Ile Ser Tyr Leu Thr Val Leu Thr Pro Gln Glu Met Leu
260 265 270
Ser Ser Asp Ala Val Ala Leu Thr Trp Thr Asp Arg Val Ile Pro Gln
275 280 285
Phe Thr Trp Thr Val Pro Phe Ala Ile Ser Ala Ser Leu Phe Ile Asn
290 295 300
Leu Val Ile Asn Val Leu Glu Thr Ser Arg Val Leu Tyr Ile Ala Ser
305 310 315 320
Glu Asn Gly Gln Leu Pro Leu Leu Phe Cys Ala Leu Asn Val His Ser
325 330 335
Ser Pro Phe Ile Ala Val Leu Leu Ile Ile Ser Met Ala Ser Ile Leu
340 345 350
Ile Val Leu Thr Asn Leu Ile Asp Leu Ile Asn Tyr Leu Tyr Phe Val
355 360 365
Val Ser Ile Trp Thr Ala Leu Ser Ile Ile Gly Ile Leu Lys Leu Arg
370 375 380
Tyr Gln Glu Pro Asn Leu His Arg Pro Tyr Lys Val Phe Leu Pro Phe
385 390 395 400
Thr Phe Ile Ala Leu Gly Ile Thr Leu Ser Leu Val Leu Ile Pro Leu
405 410 415
Val Lys Ser Pro Lys Leu His Tyr Ile Tyr Val Phe Leu Phe Leu Leu
420 425 430
Ser Gly Leu Val Phe Tyr Val Pro Leu Ile His Phe Lys Val Lys Phe
435 440 445
Val Trp Phe Gln Lys Leu Thr Cys Tyr Leu Gln Leu Leu Phe Asn Ile
450 455 460
Cys Ile Pro Asp Val Ser Asp Asp His Ile His Glu Glu Ser
465 470 475
<210> 2
<211> 2141
<212> DNA
<213> mouse
<220>
<221> CDS
<222> (59)..(1492)
<220>
<223> AGT1
<400> 2
caaacctata ggcagaaaca ttcacagagt acaattttgt gaatgtaaac ttctctca 58
atg gca atg gat tca aag aag gaa atc cgt ctt aag aga gaa ctt gga 106
Met Ala Met Asp Ser Lys Lys Glu Ile Arg Leu Lys Arg Glu Leu Gly
1 5 10 15
tat ttc tgg ggg aca aac ttt tta att att aat ata att ggt gca gga 154
Tyr Phe Trp Gly Thr Asn Phe Leu Ile Ile Asn Ile Ile Gly Ala Gly
20 25 30
ata ttt gtg tcc ccc aag gga gtg ctc cag cac tct tcc atg aat gtt 202
Ile Phe Val Ser Pro Lys Gly Val Leu Gln His Ser Ser Met Asn Val
35 40 45
gga gtc tcc ttg tgt gtt tgg gct gtc tgt gca gtg ctg acc ttg acc 250
Gly Val Ser Leu Cys Val Trp Ala Val Cys Ala Val Leu Thr Leu Thr
50 55 60
agt gct ctc tgc tct gca gag atc ggg ata acc ttc cca tac agt ggg 298
Ser Ala Leu Cys Ser Ala Glu Ile Gly Ile Thr Phe Pro Tyr Ser Gly
65 70 75 80
gct cac tat tat ttt tta aag cga tgc ttc ggc cct ctc gtg gca ttc 346
Ala His Tyr Tyr Phe Leu Lys Arg Cys Phe Gly Pro Leu Val Ala Phe
85 90 95
ctg agg ctt tgg act agc ttg ttt ctc ggc cca ggc tta att gct agc 394
Leu Arg Leu Trp Thr Ser Leu Phe Leu Gly Pro Gly Leu Ile Ala Ser
100 105 110
caa gct ctg cta ctg gct gag tat ggc gtt cag cct ttt tat ccc agc 442
Gln Ala Leu Leu Leu Ala Glu Tyr Gly Val Gln Pro Phe Tyr Pro Ser
115 120 125
tgc tct gcc ccg att cta cca aga aaa tgt ctg gcc ctg gcg atg ctg 490
Cys Ser Ala Pro Ile Leu Pro Arg Lys Cys Leu Ala Leu Ala Met Leu
130 135 140
tgg att gtg gga att ctg aat tct cgt ggt gta aaa gag ctg tca tgg 538
Trp Ile Val Gly Ile Leu Asn Ser Arg Gly Val Lys Glu Leu Ser Trp
145 150 155 160
ctt cag aca gtg agc tca gtg ctg aag gtg ggc ata ctc ggt gtc att 586
Leu Gln Thr Val Ser Ser Val Leu Lys Val Gly Ile Leu Gly Val Ile
165 170 175
tcc ctc agc ggc ctg ttc ttg ctg gtg aga ggg aag aag gag aat gta 634
Ser Leu Ser Gly Leu Phe Leu Leu Val Arg Gly Lys Lys Glu Asn Val
180 185 190
caa agg ctt cag aat gcg ttt gat gcc gag ttc cca gag gtc tct cag 682
Gln Arg Leu Gln Asn Ala Phe Asp Ala Glu Phe Pro Glu Val Ser Gln
195 200 205
tta ata gaa gct att ttc caa gga tac ttt gcg ttt tct ggc ggg gga 730
Leu Ile Glu Ala Ile Phe Gln Gly Tyr Phe Ala Phe Ser Gly Gly Gly 210
215 220 tgc ttt aca tgt ata gca ggg gag ctg aag aaa ccc agt aaa aca att 778 Cys Phe Thr Cys Ile Ala Gly Glu Leu Lys Lys Pro Ser Lys Thr Ile 225 230 235 240 cct aga tgc atc ttt aca gga ctg cct ctg gta act gtc gtg tac tta 826 Pro Arg Cys Ile Phe Thr Gly Leu Pro Leu Val Thr Val Val Tyr Leu 245 250 255 ctg gct aat att tcc tac ctg aca gtt ctg aca ccc cag gaa atg ctc 874 Leu Ala Asn Ile Ser Tyr Leu Thr Val Leu Thr Pro Gln Glu Met Leu 260 265 270 tct tca gat gct gtt gct ctt aca tgg aca gac agg gtc att ccc caa 922 Ser Ser Asp Ala Val Ala Leu Thr Trp Thr Asp Arg Val Ile Pro Gln 275 280 285 ttc aca tgg act gtt cct ttt gct att tct gct tca ctg ttt atc aac 970 Phe Thr Trp Thr Val Pro Phe Ala Ile Ser Ala Ser Leu Phe Ile Asn 290 295 300 ctt gtg att aat gta ctt gag aca tca aga gtg tta tat att gca agt 1018 Leu Val Ile Asn Val Leu Glu Thr Ser Arg Val Leu Tyr Ile Ala Ser 305 310 315 320 gag aat ggc cag ctg cct ttg ttg ttt tgt gcc ctg aat gtc cat tcc 1066 Glu Asn Gly Gln Leu Pro Leu Leu Phe Cys Ala Leu Asn Val His Ser 325 330 335 ｔｃｔ ｃｃｃ ｔｔｔ ａｔａ ｇｃｔ ｇｔｇ ｃｔａ ｃｔａ ａｔｔ
ａｔｃ ａｇｔ ａｔｇ ｇｃａ ｔｃｃ ａｔｔ ｔｔａ 1114 Ser Pro Phe Ile Ala Val Leu Leu Ile Ile Ser Met Ala Ser Ile Leu 340 345 350 att gtc tta aca aac cta att gat ctg ata aac tat ctc tat ttt gtt 1162 Ile Val Leu Thr Asn Leu Ile Asp Leu Ile Asn Tyr Leu Tyr Phe Val 355 360 365 gtt tcc att tgg act gcc tta tca ata ata gga atc ttg aaa ctg agg 1210 Val Ser Ile Trp Thr Ala Leu Ser Ile Ile Gly Ile Leu Lys Leu Arg 370 375 380 tac caa gag ccc aat cta cac aga cca tat aag gtg ttt tta ccg ttc 1258 Tyr Gln Glu Pro Asn Leu His Arg Pro Tyr Lys Val Phe Leu Pro Phe 385 390 395 400 aca ttc ata gcg ttg ggc atc acc ctg agc ttg gtt ttg atc ccg ctt 1306 Thr Phe Ile Ala Leu Gly Ile Thr Leu Ser Leu Val Leu Ile Pro Leu 405 410 415 gtc aag tct cca aag ttg cat tat atc tat gtg ttc ctc ttc ctt ctc 1354 Val Lys Ser Pro Lys Leu His Tyr Ile Tyr Val Phe Leu Phe Leu Leu 420 425 430 agt ggg ctg gtg ttt tac gtg cca ttg ata cac ttt aaa gtg aag ttc 1402 Ser Gly Leu Val Phe Tyr Val Pro Leu Ile His Phe Lys Val Lys Phe 435 440 445 gtt tgg ttt cag aag ttg act tgc tat ctg cag tta ctg ttt aat att 1450 Val Trp Phe Gln Lys Leu Thr Cys Tyr Leu Gln Leu Leu Phe Asn Ile 450 455 460 tgc atc cct gat gtg tct gat gac cac ata cat gaa gaa agt 1492 Cys Ile Pro Asp Val Ser Asp Asp His Ile His Glu Glu Ser 465 470 475 tgaggaagaa tagcctttgt agccatactg tgttccagat aaaggttaag tgtaagctaa 1552 aatagtaatg atggcaatgc tataaactga aatggtatat agaaaagtac ccaggaaatt 1612 cctagttttt aaaatatcaa aggaaatggc tgggtagatg actgtgctgt taagggcacc 1672 agatgtcctt ccaggggact gaagttcaat tcacaggccc cacttagaag ttcataacta 1732 tctgtaattc tagtcacaga ggatccaata tcctctactg gattctacca gcactgcatg 1792 catctggagt agagacatac atgtaggcac ccatgcacat ttacaagaag aaagaaagag 1852 agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag aaagggagag 1912 ggagagagga aggaaggaag gaaataagga aagaaggaag gaggaaagaa agacagtaaa 1972 gaaagtattt cacataacta aactgttttt attaaaaata aaatttctag cttgtatagc 2032 ttcatgtagt aagaatatct ttctcattct tctgtttatc tcatcgattt tctactgaat 2092 gtattcttat aataaaagtt actgatggaa attaaaaaaa aaaaaaaaa 2141 <210> 3 <211> 526 <212> PRT <213> mouse <220> <223> 4F2hc <400> 3 Met Ser Gln Asp Thr Glu Val Asp Met Lys Asp Val Glu Leu Asn Glu 1 5 10 15 Leu Glu Pro Glu Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala Asp Gly Ala Ala Ala 20 25 30 Gly Glu Lys Asn Gly Leu Val Lys Ile Lys Val Ala Glu Asp Glu Thr 35 40 45 Glu Ala Gly Val Lys Phe Thr Gly Leu Ser Lys Glu Glu Leu Leu Lys 50 55 60 Val Ala Gly Ser Pro Gly Trp Val Arg Thr Arg Trp Ala Leu Leu Leu 65 70 75 80 Leu Phe Trp Leu Gly Trp Leu Gly Met Leu Ala Gly Ala Val Val Ile 85 90 95 Ile Val Arg Ala Pro Arg Cys Arg Glu Leu Pro Val Gln Arg Trp Trp 100 105 110 His Lys Gly Ala Leu Tyr Arg Ile Gly Asp Leu Gln Ala Phe Val Gly 115 120 125 Arg Asp Ala Gly Gly Ile Ala Gly Leu Lys Ser His Leu Glu Tyr Leu 130 135 140 Ser Thr Leu Lys Val Lys Gly Leu Val Leu Gly Pro Ile His Lys Asn 145 150 155 160 Gln Lys Asp Glu Ile Asn Glu Thr Asp Leu Lys Gln Ile Asn Pro Thr 165 170 175 Leu Gly Ser Gln Glu Asp Phe Lys Asp Leu Leu Gln Ser Ala Lys Lys 180 185 190 Lys Ser Ile His Ile Ile Leu Asp Leu Thr Pro Asn Tyr Gln Gly Gln 195 200 205 Asn Ala Trp Phe Leu Pro Ala Gln Ala Asp Ile Val Ala Thr Lys Met 210 215 220 Lys Glu Ala Leu Ser Ser Trp Leu Gln Asp Gly Val Asp Gly Phe Gln 225 230 235 240 Phe Arg Asp Val Gly Lys Leu Met Asn Ala Pro Leu Tyr Leu Ala Glu 245 250 255 Trp Gln Asn Ile Thr Lys Asn Leu Ser Glu Asp Arg Leu Leu Ile Ala 260 265 270 Gly Thr Glu Ser Ser Asp Leu Gln Gln Ile Val Asn Ile Leu Glu Ser 275 280 285 Thr Ser Asp Leu Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu Ser Asn Ser Thr Phe 290 295 300 Thr Gly Glu Arg Thr Glu Ser Leu Val Thr Arg Phe Leu Asn Ala Thr 305 310 315 320 Gly Ser Gln Trp Cys Ser Trp Ser Val Ser Gln Ala Gly Leu Leu Ala 325 330 335 Asp Phe Ile Pro Asp His Leu Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Leu Leu Phe 340 345 350 Thr Leu Pro Gly Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Leu Gly Leu 355 360 365 Gln Gly Ala Leu Pro Gly Gln Pro Ala Lys Ala Pro Leu Met Pro Trp 370 375 380 Asn Glu Ser Ser Ile Phe His Ile Pro Arg Pro Val Ser Leu Asn Met 385 390 395 400 Thr Val Lys Gly Gln Asn Glu Asp Pro Gly Ser Leu Leu Thr Gln Phe 405 410 415 Arg Arg Leu Ser Asp Leu Arg Gly Lys Glu Arg Ser Leu Leu His Gly 420 425 430 Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ａｒｇ 435 440 445 His Trp Asp Gln Asn Glu Arg Tyr Leu Val Val Leu Asn Phe Arg Asp 450 455 460 Ser Gly Arg Ser Ala Arg Leu Gly Ala Ser Asn Leu Pro Ala Gly Ile 465 470 475 480 Ser Leu Pro Ala Ser Ala Lys Leu Leu Leu Ser Thr Asp Ser Ala Arg 485 490 495 Gln Ser Arg Glu Glu Asp Thr Ser Leu Lys Leu Glu Asn Leu Ser Leu 500 505 510 Asn Pro Tyr Glu Gly Leu Leu Leu Gln Phe Pro Phe Val Ala 515 520 525 <210> 4 <211> 1852 <212> DNA <213> mouse <220> <221> CDS <222> (106)..(1683) <220> <223> 4F2hc <400> 4 gctagcctca cggccacggg acgcctctct gaacggggat ccaggcagga ttagagctgc 60 ctcactgact acaggccgtg tcgtgtcacc gtttctgcag gcacc atg agc cag gac 117 Met Ser Gln Asp 1 acc gaa gtg gac atg aaa gat gtg gag ctg aac gag cta gaa ccg gag 165 Thr Glu Val Asp Met Lys Asp Val Glu Leu Asn Glu Leu Glu Pro Glu 5 10 15 20 aag cag ccc atg aat gca gcg gac ggg gcg gcg gcc ggg gag aag aac 213 Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala Asp Gly Ala Ala Ala Gly Glu Lys Asn 25 30 35 ggt ctg gtg aag atc aag gtg gcg gag gac gag acg gag gcc ggg gtc 261 Gly Leu Val Lys Ile Lys Val Ala Glu Asp Glu Thr Glu Ala Gly Val 40 45 50 aag ttc acc ggc tta tcc aag gag gag cta ctg aag gta gcg ggc agc 309 Lys Phe Thr Gly Leu Ser Lys Glu Glu Leu Leu Lys Val Ala Gly Ser 55 60 65 cct ggc tgg gtg cgc acc cgc tgg gcg ctg ctg ctg ctc ttc tgg ctc 357 Pro Gly Trp Val Arg Thr Arg Trp Ala Leu Leu Leu Leu Phe Trp Leu 70 75 80 ggt tgg ctg ggc atg ctg gcg ggc gcc gtg gtt atc atc gtt cgg gcg 405 Gly Trp Leu Gly Met Leu Ala Gly Ala Val Val Ile Ile Val Arg Ala 85 90 95 100 ccg cgc tgc cgt gag ctg cct gta cag agg tgg tgg cac aag ggc gcc 453 Pro Arg Cys Arg Glu Leu Pro Val Gln Arg Trp Trp His Lys Gly Ala 105 110 115 ctc tac cgc atc ggc gac ctt cag gcc ttt gta ggc cgg gat gcg gga 501 Leu Tyr Arg Ile Gly Asp Leu Gln Ala Phe Val Gly Arg Asp Ala Gly 120 125 130 ggc ata gct ggt ctg aag agc cat ctg gag tac ttg agc acc ctg aag 549 Gly Ile Ala Gly Leu Lys Ser His Leu Glu Tyr Leu Ser Thr Leu Lys 135 140 145 gtg aag ggc ctg gtg tta ggc cca att cac aag aac cag aag gat gaa 597 Val Lys Gly Leu Val Leu Gly Pro Ile His Lys Asn Gln Lys Asp Glu 150 155 160 atc aat gaa acc gac ctg aaa cag att aat ccc act ttg ggc tcc cag 645 Ile Asn Glu Thr Asp Leu Lys Gln Ile Asn Pro Thr Leu Gly Ser Gln 165 170 175 180 gaa gat ttt aaa gac ctt cta caa agt gcc aag aaa aag agc att cac 693 Glu Asp Phe Lys Asp Leu Leu Gln Ser Ala Lys Lys Lys Ser Ile His 185 190 195 atc att ttg gac ctc act ccc aac tac cag ggc cag aat gcg tgg ttc 741 Ile Ile Leu Asp Leu Thr Pro Asn Tyr Gln Gly Gln Asn Ala Trp Phe 200 205 210 ctc cct gct cag gct gac att gta gcc acc aaa atg aag gaa gct ctg 789 Leu Pro Ala Gln Ala Asp Ile Val Ala Thr Lys Met Lys Glu Ala Leu
215 220 225 agt tct tgg ttg cag gac ggt gtg gat ggt ttc caa ttc cgg gat gtg 837 Ser Ser Trp Leu Gln Asp Gly Val Asp Gly Phe Gln Phe Arg Asp Val 230 235 240 gga aag ctg atg aat gca ccc ttg tac ttg gct gag tgg cag aat atc 885 Gly Lys Leu Met Asn Ala Pro Leu Tyr Leu Ala Glu Trp Gln Asn Ile 245 250 255 260 acc aag aac tta agt gag gac agg ctt ttg att gca ggg act gag tcc 933 Thr Lys Asn Leu Ser Glu Asp Arg Leu Leu Ile Ala Gly Thr Glu Ser 265 270 275 tct gac ctg cag caa att gtc aac ata ctt gaa tcc acc agc gac ctg 981 Ser Asp Leu Gln Gln Ile Val Asn Ile Leu Glu Ser Thr Ser Asp Leu 280 285 290 ctg ttg acc agc tcc tac ctg tca aat tcc act ttc act ggg gag cgt 1029 Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu Ser Asn Ser Thr Phe Thr Gly Glu Arg 295 300 305 act gaa tcc cta gtc act agg ttt ttg aat gcc act ggc agc caa tgg 1077 Thr Glu Ser Leu Val Thr Arg Phe Leu Asn Ala Thr Gly Ser Gln Trp 310 315 320 tgc agc tgg agt gtg tcg caa gca gga ctc ctc gca gac ttt ata ccg 1125 Cys Ser Trp Ser Val Ser Gln Ala Gly Leu Leu Ala Asp Phe Ile Pro 325 330 335 340 gac cat ctt ctc cga ctc tac cag ctg ctg ctc ttc act ctg cca ggg 1173 Asp His Leu Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Leu Leu Phe Thr Leu Pro Gly 345 350 355 act cct gtt ttt agc tac ggg gat gag ctt ggc ctt cag ggt gcc ctt 1221 Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Leu Gly Leu Gln Gly Ala Leu 360 365 370 cct gga cag cct gcg aag gcc cca ctc atg ccg tgg aat gag tcc agc 1269 Pro Gly Gln Pro Ala Lys Ala Pro Leu Met Pro Trp Asn Glu Ser Ser 375 380 385 atc ttt cac atc cca aga cct gta agc ctc aac atg aca gtg aag ggc 1317 Ile Phe His Ile Pro Arg Pro Val Ser Leu Asn Met Thr Val Lys Gly 390 395 400 cag aat gaa gac cct ggc tcc ctt ctt acc cag ttc cgg cgg ctg agt 1365 Gln Asn Glu Asp Pro Gly Ser Leu Leu Thr Gln Phe Arg Arg Leu Ser 405 410 415 420 gac ctt cgg ggt aag gag cgc tct ctg ttg cac ggt gac ttc cat gca 1413 Asp Leu Arg Gly Lys Glu Arg Ser Leu Leu His Gly Asp Phe His Ala 425 430 435 ctg tct tcc tca cct gac ctc ttc tcc tac ata cga cac tgg gac cag 1461 Leu Ser Ser Ser Pro Asp Leu Phe Ser Tyr Ile Arg His Trp Asp Gln 440 445 450 aat gag cgt tac ctg gtg gtg ctc aac ttc cga gat tcg ggc cgg tca 1509
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｐｈｅ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｓｅｒ 455 460 465 gcc agg cta ggg gcc tcc aac ctc cct gct ggc ata agc ctg cca gcc 1557 Ala Arg Leu Gly Ala Ser Asn Leu Pro Ala Gly Ile Ser Leu Pro Ala 470 475 480 agc gct aaa ctt ttg ctt agt acc gac agt gcc cgg caa agc cgt gag 1605 Ser Ala Lys Leu Leu Leu Ser Thr Asp Ser Ala Arg Gln Ser Arg Glu 485 490 495 500 gag gac acc tcc ctg aag ctg gaa aac ctg agc ctg aat cct tat gag 1653 Glu Asp Thr Ser Leu Lys Leu Glu Asn Leu Ser Leu Asn Pro Tyr Glu 505 510 515 ggc ttg ctg tta cag ttc ccc ttt gtg gcc tgatccttcc tatgcagaac 1703 Gly Leu Leu Leu Gln Phe Pro Phe Val Ala 520 525 ctaccaccct cctttgttct ccccaggcct tttggattct agtcttcctc tccttgtttt 1763 taaacttttg cagattacat acgaattctt atactgggtg tttttgtctt caaataaaaa 1823 catcacccct gcctcaaaaa aaaaaaaaa 1852 <210> 5 <211> 685 <212> PRT <213> mouse <220> <223> rBAT <400> 5 Met Asp Glu Asp Lys Gly Lys Arg Asp Pro Ile Gln Met Ser Met Lys 1 5 10 15 Gly Cys Arg Thr Asn Asn Gly Phe Val Gln Asn Glu Asp Ile Pro Glu 20 25 30 Gln Asp Pro Asp Pro Gly Ser Arg Asp Thr Pro Gln Pro Asn Ala Val 35 40 45 Ser Ile Pro Ala Pro Glu Glu Pro His Leu Lys Ala Val Arg Pro Tyr 50 55 60 Ala Gly Met Pro Lys Glu Val Leu Phe Gln Phe Ser Gly Gln Ala Arg 65 70 75 80 Tyr Arg Val Pro Arg Glu Ile Leu Phe Trp Leu Thr Val Val Ser Val 85 90 95 Phe Leu Leu Ile Gly Ala Thr Ile Ala Ile Ile Val Ile Ser Pro Lys 100 105 110 Cys Leu Asp Trp Trp Gln Ala Gly Pro Ile Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg 115 120 125 Ser Phe Lys Asp Ser Asp Lys Asp Gly Asn Gly Asp Leu Lys Gly Ile 130 135 140 Gln Glu Lys Leu Asp Tyr Ile Thr Ala Leu Asn Ile Lys Thr Leu Trp Ile Thr Ser Phe Tyr Lys Ser Ile Phe Glu Asp Phe Arg Tyr Ala Val 165 170 175 Glu Asp Ile Lys Glu Ile Asp Pro Ile Phe Gly Thr Met Lys Asp Phe 180 185 190 Glu Asn Leu Val Ala Ala Ile His Asp Lys Gly Leu Lys Leu Ile Ile 195 200 205 Asp Phe Ile Pro Asn His Thr Ser Asp Lys His Pro Trp Phe Gln Ser 210 215 220 Ser Arg Thr Arg Ser Gly Lys Tyr Thr Asp Tyr Tyr Ile Trp His Asn 225 230 235 240 Cys Thr His Cys Gln Arg Val Pro Thr Pro Pro Asn Asn Trp Leu Ser 245 250 255 Val Tyr Gly His Ser Ser Trp His Phe Asp Glu Val Arg Glu Gln Cys 260 265 270 Tyr Phe His Gln Phe Leu Arg Glu Gln Pro Asp Leu Tyr Phe Arg Asn 275 280 285 Pro Ala Val Gln Glu Glu Ile Lys Glu Ile Ile Thr Phe Trp Leu Ser 290 295 300 Lys Gly Val Asp Gly Phe Ser Phe Asp Ala Val Lys Phe Leu Leu Glu 305 310 315 320 Ala Lys Asp Leu Arg Asn Glu Ile Gln Val Asn Thr Ser Gln Ile Pro 325 330 335 Asp Thr Val Thr His Tyr Ser Glu Leu Tyr His Asp Phe Thr Thr Thr 340 345 350 Gln Val Gly Met His Asp Ile Val Arg Asp Phe Arg Gln Thr Met Asn 355 360 365 Gln Tyr Ser Arg Glu Pro Gly Arg Tyr Arg Phe Met Gly Ala Glu Ala 370 375 380 Ser Ala Glu Ser Ile Glu Arg Thr Met Met Tyr Tyr Gly Leu Pro Phe 385 390 395 400 Ile Gln Glu Ala Asp Phe Pro Phe Asn Lys Tyr Phe Thr Thr Ile Gly 405 410 415 Thr Leu Ser Gly His Thr Val Tyr Glu Val Ile Thr Ser Trp Met Glu 420 425 430 Asn Met Pro Glu Gly Lys Trp Pro Asn Trp Met Thr Gly Gly Pro Glu 435 440 445 Thr Pro Arg Leu Thr Ser Arg Val Gly Ser Glu Tyr Val Asn Ala Met 450 455 460 His Met Leu Leu Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro Ile Thr Tyr Tyr Gly 465 470 475 480 Glu Glu Ile Gly Met Gly Asp Ile Ser Val Thr Asn Phe Asn Glu Ser 485 490 495 Tyr Asp Ser Thr Thr Leu Val Ser Lys Ser Pro Met Gln Trp Asp Asn 500 505 510 Ser Ser Asn Ala Gly Phe Thr Glu Ala Asn His Thr Trp Leu Pro Pro 515 520 525 Asn Ser Asp Tyr His Thr Val Asn Val Asp Val Gln Lys Thr Gln Pro 530 535 540 Ser Ser Ala Leu Arg Leu Tyr Gln Asp Leu Ser Leu Leu His Ala Thr 545 550 555 560 Glu Leu Val Leu Ser Arg Gly Trp Phe Cys Leu Leu Arg Asp Asp Ser 565 570 575 His Ser Val Val Tyr Thr Arg Glu Leu Asp Gly Ile Asp Asn Val Phe 580 585 590 Leu Val Val Leu Asn Phe Gly Glu Ser Ser Thr Val Leu Asn Leu Gln 595 600 605 Gly Ile Ile Ser Asp Leu Pro Pro Glu Leu Arg Ile Arg Leu Ser Thr 610 615 620 Asn Ser Ala Ser Lys Gly Ser Ala Val Asp Thr Arg Ala Ile Ser Leu 625 630 635 640 Glu Lys Gly Glu Gly Leu Val Leu Glu His Ser Thr Lys Ala Pro Leu 645 650 655 His Gln Gln Ala Ala Phe Arg Asp Arg Cys Phe Val Ser Ser Arg Ala 660 665 670 Cys Tyr Ser Ser Ala Leu Asp Ile Leu Tyr Ser Ser Cys 675 680 685 <210> 6 <211> 2287 <212> DNA <213> mouse <220> <221> CDS <222> (46)..(2100) <220> <223> rBAT <400> 6 Met Asp Glu Asp 1 aaa ggc aag aga gac ccc atc caa atg agt atg aag gga tgc cga acc 105 Lys Gly Lys Arg Asp Pro Ile Gln Met Ser Met Lys Gly Cys Arg Thr 5 10 15 20 aat aac ggg ttt gtc caa aat gaa gac att ccg gag cag gac cca gac 153 Asn Asn Gly Phe Val Gln Asn Glu Asp Ile Pro Glu Gln Asp Pro Asp 25 30 35 cca ggc tcc agg gac acc cca cag ccc aac gcc gtg agt atc cct gct 201
Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｐｒｏ
Ａｓｎ Ａｌａ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ａｌａ 40 45 50 cca gag gag cct cac cta aag gcg gtg cgg ccc tat gca ggg atg ccc 249 Pro Glu Glu Pro His Leu Lys Ala Val Arg Pro Tyr Ala Gly Met Pro 55 60 65 aag gaa gta ctc ttc cag ttc tcc ggc cag gct cgc tac cgg gtg ccc 297 Lys Glu Val Leu Phe Gln Phe Ser Gly Gln Ala Arg Tyr Arg Val Pro 70 75 80 cga gag atc ctc ttc tgg ctc acc gtg gtt tcc gtg ttc ctg ctc att 345 Arg Glu Ile Leu Phe Trp Leu Thr Val Val Ser Val Phe Leu Leu Ile 85 90 95 100 gga gcc acc ata gcc atc atc gtc atc tct cca aaa tgc ctt gac tgg 393 Gly Ala Thr Ile Ala Ile Ile Val Ile Ser Pro Lys Cys Leu Asp Trp 105 110 115 tgg caa gca ggt ccc ata tac cag atc tac ccg agg tct ttt aag gac 441 Trp Gln Ala Gly Pro Ile Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp 120 125 130 agt gac aag gat ggg aat gga gac ctg aaa ggt atc cag gag aag ctg 489 Ser Asp Lys Asp Gly Asn Gly Asp Leu Lys Gly Ile Gln Glu Lys Leu 135 140 145 gac tat atc act gct tta aac ata aag act ctt tgg atc act tcc ttt 537 Asp Tyr Ile Thr Ala Leu Asn Ile Lys Thr Leu Trp Ile Thr Ser Phe 150 155 160 tat aaa tcg atc ttt gaa gac ttc aga tac gct gtt gag gat atc aaa 585 Tyr Lys Ser Ile Phe Glu Asp Phe Arg Tyr Ala Val Glu Asp Ile Lys 165 170 175 180 gaa att gac cct att ttt gga aca atg aaa gat ttt gag aat ttg gtt 633 Glu Ile Asp Pro Ile Phe Gly Thr Met Lys Asp Phe Glu Asn Leu Val 185 190 195 ｇｃｔ ｇｃｃ ａｔｃ ｃａｔ ｇａｃ ａａａ ｇｇｔ ｔｔａ ａａａ
ｔｔａ ａｔａ ａｔｔ ｇａｔ ｔｔｃ ａｔａ ｃｃａ 681 Ala Ala Ile His Asp Lys Gly Leu Lys Leu Ile Ile Asp Phe Ile Pro 200 205 210 aac cac act agt gac aaa cat cct tgg ttc caa tcg agt agg aca cgg 729 Asn His Thr Ser Asp Lys His Pro Trp Phe Gln Ser Ser Arg Thr Arg 215 220 225 agc gga aaa tac acc gat tac tac atc tgg cac aac tgt acc cat tgt 777 Ser Gly Lys Tyr Thr Asp Tyr Tyr Ile Trp His Asn Cys Thr His Cys 230 235 240 caa cgt gta ccc acc cct ccc aac aac tgg ctg agt gtg tat gga cac 825 Gln Arg Val Pro Thr Pro Pro Asn Asn Trp Leu Ser Val Tyr Gly His 245 250 255 260 tcc agc tgg cac ttt gat gaa gta cga gag caa tgt tat ttt cac cag 873 Ser Ser Trp His Phe Asp Glu Val Arg Glu Gln Cys Tyr Phe His Gln 265 270 275 ttt ttg aga gag caa cca gat tta tat ttc cga aat cct gct gtt caa 921 Phe Leu Arg Glu Gln Pro Asp Leu Tyr Phe Arg Asn Pro Ala Val Gln 280 285 290 gag gaa ata aag gaa ata ata acg ttc tgg ctc tcg aag ggt gtt gat 969 Glu Glu Ile Lys Glu Ile Ile Thr Phe Trp Leu Ser Lys Gly Val Asp 295 300 305 ggg ttt agt ttt gat gca gtt aaa ttt ctt ctg gaa gcg aag gat ctg 1017 Gly Phe Ser Phe Asp Ala Val Lys Phe Leu Leu Glu Ala Lys Asp Leu 310 315 320 aga aat gaa atc caa gtg aat aca tcc caa att ccg gac acg gtc acc 1065 Arg Asn Glu Ile Gln Val Asn Thr Ser Gln Ile Pro Asp Thr Val Thr 325 330 335 340 cac tac tca gag ctg tac cat gac ttc acc aca act cag gtg gga atg 1113 His Tyr Ser Glu Leu Tyr His Asp Phe Thr Thr Thr Gln Val Gly Met 345 350 355 cat gac atc gtc cga gac ttc cgg cag acc atg aac cag tac agc agg 1161 His Asp Ile Val Arg Asp Phe Arg Gln Thr Met Asn Gln Tyr Ser Arg 360 365 370 gag cct ggc aga tac cgg ttc atg ggg gcc gaa gcc tca gct gag agc 1209 Glu Pro Gly Arg Tyr Arg Phe Met Gly Ala Glu Ala Ser Ala Glu Ser 375 380 385 atc gag agg acc atg atg tac tat ggc ttg cca ttt atc cag gaa gcc 1257 Ile Glu Arg Thr Met Met Tyr Tyr Gly Leu Pro Phe Ile Gln Glu Ala 390 395 400 gac ttt cct ttc aac aag tac ttc acc aca ata ggc act ctc tct ggg 1305 Asp Phe Pro Phe Asn Lys Tyr Phe Thr Thr Ile Gly Thr Leu Ser Gly 405 410 415 420 cat act gtc tat gaa gtt atc aca tcc tgg atg gaa aac atg cct gaa 1353 His Thr Val Tyr Glu Val Ile Thr Ser Trp Met Glu Asn Met Pro Glu 425 430 435 gga aaa tgg ccc aat tgg atg act ggc gga ccg gag act cct cgg ctg 1401 Gly Lys Trp Pro Asn Trp Met Thr Gly Gly Pro Glu Thr Pro Arg Leu 440 445 450 act tct cga gta ggg agt gag tat gtc aac gcc atg cac atg ctc ctg 1449 Thr Ser Arg Val Gly Ser Glu Tyr Val Asn Ala Met His Met Leu Leu 455 460 465 ttc aca ctc ccg gga acg ccc atc act tac tat gga gag gaa atc ggg 1497 Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro Ile Thr Tyr Tyr Gly Glu Glu Ile Gly 470 475 480 atg gga gac att tcc gtt aca aat ttc aac gag agc tat gat agt act 1545 Met Gly Asp Ile Ser Val Thr Asn Phe Asn Glu Ser Tyr Asp Ser Thr 485 490 495 500 ａｃｃ ｃｔｔ ｇｔｃ ｔｃｃ ａａｇ ｔｃａ ｃｃｇ ａｔｇ ｃａｇ
ｔｇｇ ｇａｃ ａａｔ ａｇｔ ｔｃｃ ａａｔ ｇｃｔ 1593 Thr Leu Val Ser Lys Ser Pro Met Gln Trp Asp Asn Ser Ser Asn Ala 505 510 515 ggg ttt act gag gcc aac cac acc tgg cta cca cca aac tct gac tac 1641 Gly Phe Thr Glu Ala Asn His Thr Trp Leu Pro Pro Asn Ser Asp Tyr 520 525 530 cac acc gtc aat gtg gat gtc caa aag acc cag ccg agc tcc gca ctg 1689 His Thr Val Asn Val Asp Val Gln Lys Thr Gln Pro Ser Ser Ala Leu
535 540 545 agg ctg tat cag gat ctg agt cta ctc cat gcc aca gag ctg gtc ctc 1737 Arg Leu Tyr Gln Asp Leu Ser Leu Leu His Ala Thr Glu Leu Val Leu 550 555 560 agc cgg ggc tgg ttt tgc ctc ttg aga gac gac agt cac tct gtg gtg 1785 Ser Arg Gly Trp Phe Cys Leu Leu Arg Asp Asp Ser His Ser Val Val 565 570 575 580 tac aca aga gag ctg gac ggc ata gat aac gtc ttc ctc gtg gtt ctg 1833 Tyr Thr Arg Glu Leu Asp Gly Ile Asp Asn Val Phe Leu Val Val Leu 585 590 595 aat ttt gga gaa tca tca act gtg cta aat cta cag ggg atc att tca 1881 Asn Phe Gly Glu Ser Ser Thr Val Leu Asn Leu Gln Gly Ile Ile Ser 600 605 610 gat ctt cct cca gag ctg aga ata agg tta agt acc aac tca gcc tcc 1929 Asp Leu Pro Pro Glu Leu Arg Ile Arg Leu Ser Thr Asn Ser Ala Ser 615 620 625 aaa ggc agt gct gtt gac acc cgt gcc att tct ctg gag aag gga gag 1977 Lys Gly Ser Ala Val Asp Thr Arg Ala Ile Ser Leu Glu Lys Gly Glu 630 635 640 ggc ctg gtc ttg gag cac agc acg aag gct ccc ctc cat cag cag gcc 2025 Gly Leu Val Leu Glu His Ser Thr Lys Ala Pro Leu His Gln Gln Ala 645 650 655 660 ｇｃｔ ｔｔｃ ａｇａ ｇａｃ ａｇａ ｔｇｃ ｔｔｔ ｇｔｔ ｔｃｃ
ａｇｔ ｃｇｇ ｇｃｇ ｔｇｃ ｔａｃ ｔｃｃ ａｇｔ 2073 Ala Phe Arg Asp Arg Cys Phe Val Ser Ser Arg Ala Cys Tyr Ser Ser 665 670 675 gca ctg gac atc ctc tat agc tcg tgt tagggaggaa gctccctaag 2120 Ala Leu Asp Ile Leu Tyr Ser Ser Cys agatggccac ccagaacatc acgtacgcac aggctgagca gactcatgaa tggcatcaat 2180 tcttagatat ttctgtagca cgatgcacgt tttttaaagt gtttaaagat tatgccaaat 2240 actaaagcat ttaaatatga aaaaaaaaaa aaaaaagcgg cgcgccg 2287 <210> 7 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: partial peptide <220> <223> partial peptide of AGT1(465-478) <400> 7 Cys Ile Pro Asp Val Ser Asp Asp His Ile His Glu Glu Ser 1 5 10 ＜２１０＞ ８ <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> sense primer for amplification of AGT1 <400> 8 gcgcgaagct tacctatagg cagaaacatt c 31 <210> 9 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> antisense primer for amplification of AGT1 <400> 9 atatgcggcc gcactttctt catgtatgtg gt 32 <210> 10 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> sense primer for amplification of rBAT <400> 10 atatgcggcc gcagatgagg acaaaggcaa gag 33 <210> 11 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> antisense primer for amplification of rBAT <400> 11 gcgcgctcta gaaatgcttt agtatttggc ataatc 36 <210> 12 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> sense primer for amplification of 4F2hc <400> 12 atatgcggcc gcaagccagg acaccgaagt gga 33 <210> 13 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> antisense primer for amplification of 4F2hc <400> 13 gcgctctaga catgaggcag gggtgatgtt tt 32
215 220 tgc ttt aca tgt ata gca ggg gag ctg aag aaa ccc agt aaa aca att 778 Cys Phe Thr Cys Ile Ala Gly Glu Leu Lys Lys Pro Ser Lys Thr Ile 225 230 235 240 cct aga tgc atc ttt aca gga ctg cct ctg gta act gtc gtg tac tta 826 Pro Arg Cys Ile Phe Thr Gly Leu Pro Leu Val Thr Val Val Tyr Leu 245 250 255 ctg gct aat att tcc tac ctg aca gtt ctg aca ccc cag gaa atg ctc 874 Leu Ala Asn Ile Ser Tyr Leu Thr Val Leu Thr Pro Gln Glu Met Leu 260 265 270 tct tca gat gct gtt gct ctt aca tgg aca gac agg gtc att ccc caa 922 Ser Ser Asp Ala Val Ala Leu Thr Trp Thr Asp Arg Val Ile Pro Gln 275 280 285 ttc aca tgg act gtt cct ttt gct att tct gct tca ctg ttt atc aac 970 Phe Thr Trp Thr Val Pro Phe Ala Ile Ser Ala Ser Leu Phe Ile Asn 290 295 300 ctt gtg att aat gta ctt gag aca tca aga gtg tta tat att gca agt 1018 Leu Val Ile Asn Val Leu Glu Thr Ser Arg Val Leu Tyr Ile Ala Ser 305 310 315 320 gag aat ggc cag ctg cct ttg ttg ttt tgt gcc ctg aat gtc cat tcc 1066 Glu Asn Gly Gln Leu Pro Leu Leu Phe Cys Ala Leu Asn Val His Ser 325 330 335 ｔｃｔ ｃｃｃ ｔｔｔ ａｔａ ｇｃｔ ｇｔｇ ｃｔａ ｃｔａ ａｔｔ
ａｔｃ ａｇｔ ａｔｇ ｇｃａ ｔｃｃ ａｔｔ ｔｔａ 1114 Ser Pro Phe Ile Ala Val Leu Leu Ile Ile Ser Met Ala Ser Ile Leu 340 345 350 att gtc tta aca aac cta att gat ctg ata aac tat ctc tat ttt gtt 1162 Ile Val Leu Thr Asn Leu Ile Asp Leu Ile Asn Tyr Leu Tyr Phe Val 355 360 365 gtt tcc att tgg act gcc tta tca ata ata gga atc ttg aaa ctg agg 1210 Val Ser Ile Trp Thr Ala Leu Ser Ile Ile Gly Ile Leu Lys Leu Arg 370 375 380 tac caa gag ccc aat cta cac aga cca tat aag gtg ttt tta ccg ttc 1258 Tyr Gln Glu Pro Asn Leu His Arg Pro Tyr Lys Val Phe Leu Pro Phe 385 390 395 400 aca ttc ata gcg ttg ggc atc acc ctg agc ttg gtt ttg atc ccg ctt 1306 Thr Phe Ile Ala Leu Gly Ile Thr Leu Ser Leu Val Leu Ile Pro Leu 405 410 415 gtc aag tct cca aag ttg cat tat atc tat gtg ttc ctc ttc ctt ctc 1354 Val Lys Ser Pro Lys Leu His Tyr Ile Tyr Val Phe Leu Phe Leu Leu 420 425 430 agt ggg ctg gtg ttt tac gtg cca ttg ata cac ttt aaa gtg aag ttc 1402 Ser Gly Leu Val Phe Tyr Val Pro Leu Ile His Phe Lys Val Lys Phe 435 440 445 gtt tgg ttt cag aag ttg act tgc tat ctg cag tta ctg ttt aat att 1450 Val Trp Phe Gln Lys Leu Thr Cys Tyr Leu Gln Leu Leu Phe Asn Ile 450 455 460 tgc atc cct gat gtg tct gat gac cac ata cat gaa gaa agt 1492 Cys Ile Pro Asp Val Ser Asp Asp His Ile His Glu Glu Ser 465 470 475 tgaggaagaa tagcctttgt agccatactg tgttccagat aaaggttaag tgtaagctaa 1552 aatagtaatg atggcaatgc tataaactga aatggtatat agaaaagtac ccaggaaatt 1612 cctagttttt aaaatatcaa aggaaatggc tgggtagatg actgtgctgt taagggcacc 1672 agatgtcctt ccaggggact gaagttcaat tcacaggccc cacttagaag ttcataacta 1732 tctgtaattc tagtcacaga ggatccaata tcctctactg gattctacca gcactgcatg 1792 catctggagt agagacatac atgtaggcac ccatgcacat ttacaagaag aaagaaagag 1852 agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag aaagaaagaa agaaagaaag aaagggagag 1912 ggagagagga aggaaggaag gaaataagga aagaaggaag gaggaaagaa agacagtaaa 1972 gaaagtattt cacataacta aactgttttt attaaaaata aaatttctag cttgtatagc 2032 ttcatgtagt aagaatatct ttctcattct tctgtttatc tcatcgattt tctactgaat 2092 gtattcttat aataaaagtt actgatggaa attaaaaaaa aaaaaaaaa 2141 <210> 3 <211> 526 <212> PRT <213> mouse <220> <223> 4F2hc <400> 3 Met Ser Gln Asp Thr Glu Val Asp Met Lys Asp Val Glu Leu Asn Glu 1 5 10 15 Leu Glu Pro Glu Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala Asp Gly Ala Ala Ala 20 25 30 Gly Glu Lys Asn Gly Leu Val Lys Ile Lys Val Ala Glu Asp Glu Thr 35 40 45 Glu Ala Gly Val Lys Phe Thr Gly Leu Ser Lys Glu Glu Leu Leu Lys 50 55 60 Val Ala Gly Ser Pro Gly Trp Val Arg Thr Arg Trp Ala Leu Leu Leu 65 70 75 80 Leu Phe Trp Leu Gly Trp Leu Gly Met Leu Ala Gly Ala Val Val Ile 85 90 95 Ile Val Arg Ala Pro Arg Cys Arg Glu Leu Pro Val Gln Arg Trp Trp 100 105 110 His Lys Gly Ala Leu Tyr Arg Ile Gly Asp Leu Gln Ala Phe Val Gly 115 120 125 Arg Asp Ala Gly Gly Ile Ala Gly Leu Lys Ser His Leu Glu Tyr Leu 130 135 140 Ser Thr Leu Lys Val Lys Gly Leu Val Leu Gly Pro Ile His Lys Asn 145 150 155 160 Gln Lys Asp Glu Ile Asn Glu Thr Asp Leu Lys Gln Ile Asn Pro Thr 165 170 175 Leu Gly Ser Gln Glu Asp Phe Lys Asp Leu Leu Gln Ser Ala Lys Lys 180 185 190 Lys Ser Ile His Ile Ile Leu Asp Leu Thr Pro Asn Tyr Gln Gly Gln 195 200 205 Asn Ala Trp Phe Leu Pro Ala Gln Ala Asp Ile Val Ala Thr Lys Met 210 215 220 Lys Glu Ala Leu Ser Ser Trp Leu Gln Asp Gly Val Asp Gly Phe Gln 225 230 235 240 Phe Arg Asp Val Gly Lys Leu Met Asn Ala Pro Leu Tyr Leu Ala Glu 245 250 255 Trp Gln Asn Ile Thr Lys Asn Leu Ser Glu Asp Arg Leu Leu Ile Ala 260 265 270 Gly Thr Glu Ser Ser Asp Leu Gln Gln Ile Val Asn Ile Leu Glu Ser 275 280 285 Thr Ser Asp Leu Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu Ser Asn Ser Thr Phe 290 295 300 Thr Gly Glu Arg Thr Glu Ser Leu Val Thr Arg Phe Leu Asn Ala Thr 305 310 315 320 Gly Ser Gln Trp Cys Ser Trp Ser Val Ser Gln Ala Gly Leu Leu Ala 325 330 335 Asp Phe Ile Pro Asp His Leu Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Leu Leu Phe 340 345 350 Thr Leu Pro Gly Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Leu Gly Leu 355 360 365 Gln Gly Ala Leu Pro Gly Gln Pro Ala Lys Ala Pro Leu Met Pro Trp 370 375 380 Asn Glu Ser Ser Ile Phe His Ile Pro Arg Pro Val Ser Leu Asn Met 385 390 395 400 Thr Val Lys Gly Gln Asn Glu Asp Pro Gly Ser Leu Leu Thr Gln Phe 405 410 415 Arg Arg Leu Ser Asp Leu Arg Gly Lys Glu Arg Ser Leu Leu His Gly 420 425 430 Ａｓｐ Ｐｈｅ Ｈｉｓ Ａｌａ Ｌｅｕ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｓｅｒ Ｐｒｏ
Ａｓｐ Ｌｅｕ Ｐｈｅ Ｓｅｒ Ｔｙｒ Ｉｌｅ Ａｒｇ 435 440 445 His Trp Asp Gln Asn Glu Arg Tyr Leu Val Val Leu Asn Phe Arg Asp 450 455 460 Ser Gly Arg Ser Ala Arg Leu Gly Ala Ser Asn Leu Pro Ala Gly Ile 465 470 475 480 Ser Leu Pro Ala Ser Ala Lys Leu Leu Leu Ser Thr Asp Ser Ala Arg 485 490 495 Gln Ser Arg Glu Glu Asp Thr Ser Leu Lys Leu Glu Asn Leu Ser Leu 500 505 510 Asn Pro Tyr Glu Gly Leu Leu Leu Gln Phe Pro Phe Val Ala 515 520 525 <210> 4 <211> 1852 <212> DNA <213> mouse <220> <221> CDS <222> (106)..(1683) <220> <223> 4F2hc <400> 4 gctagcctca cggccacggg acgcctctct gaacggggat ccaggcagga ttagagctgc 60 ctcactgact acaggccgtg tcgtgtcacc gtttctgcag gcacc atg agc cag gac 117 Met Ser Gln Asp 1 acc gaa gtg gac atg aaa gat gtg gag ctg aac gag cta gaa ccg gag 165 Thr Glu Val Asp Met Lys Asp Val Glu Leu Asn Glu Leu Glu Pro Glu 5 10 15 20 aag cag ccc atg aat gca gcg gac ggg gcg gcg gcc ggg gag aag aac 213 Lys Gln Pro Met Asn Ala Ala Asp Gly Ala Ala Ala Gly Glu Lys Asn 25 30 35 ggt ctg gtg aag atc aag gtg gcg gag gac gag acg gag gcc ggg gtc 261 Gly Leu Val Lys Ile Lys Val Ala Glu Asp Glu Thr Glu Ala Gly Val 40 45 50 aag ttc acc ggc tta tcc aag gag gag cta ctg aag gta gcg ggc agc 309 Lys Phe Thr Gly Leu Ser Lys Glu Glu Leu Leu Lys Val Ala Gly Ser 55 60 65 cct ggc tgg gtg cgc acc cgc tgg gcg ctg ctg ctg ctc ttc tgg ctc 357 Pro Gly Trp Val Arg Thr Arg Trp Ala Leu Leu Leu Leu Phe Trp Leu 70 75 80 ggt tgg ctg ggc atg ctg gcg ggc gcc gtg gtt atc atc gtt cgg gcg 405 Gly Trp Leu Gly Met Leu Ala Gly Ala Val Val Ile Ile Val Arg Ala 85 90 95 100 ccg cgc tgc cgt gag ctg cct gta cag agg tgg tgg cac aag ggc gcc 453 Pro Arg Cys Arg Glu Leu Pro Val Gln Arg Trp Trp His Lys Gly Ala 105 110 115 ctc tac cgc atc ggc gac ctt cag gcc ttt gta ggc cgg gat gcg gga 501 Leu Tyr Arg Ile Gly Asp Leu Gln Ala Phe Val Gly Arg Asp Ala Gly 120 125 130 ggc ata gct ggt ctg aag agc cat ctg gag tac ttg agc acc ctg aag 549 Gly Ile Ala Gly Leu Lys Ser His Leu Glu Tyr Leu Ser Thr Leu Lys 135 140 145 gtg aag ggc ctg gtg tta ggc cca att cac aag aac cag aag gat gaa 597 Val Lys Gly Leu Val Leu Gly Pro Ile His Lys Asn Gln Lys Asp Glu 150 155 160 atc aat gaa acc gac ctg aaa cag att aat ccc act ttg ggc tcc cag 645 Ile Asn Glu Thr Asp Leu Lys Gln Ile Asn Pro Thr Leu Gly Ser Gln 165 170 175 180 gaa gat ttt aaa gac ctt cta caa agt gcc aag aaa aag agc att cac 693 Glu Asp Phe Lys Asp Leu Leu Gln Ser Ala Lys Lys Lys Ser Ile His 185 190 195 atc att ttg gac ctc act ccc aac tac cag ggc cag aat gcg tgg ttc 741 Ile Ile Leu Asp Leu Thr Pro Asn Tyr Gln Gly Gln Asn Ala Trp Phe 200 205 210 ctc cct gct cag gct gac att gta gcc acc aaa atg aag gaa gct ctg 789 Leu Pro Ala Gln Ala Asp Ile Val Ala Thr Lys Met Lys Glu Ala Leu
215 220 225 agt tct tgg ttg cag gac ggt gtg gat ggt ttc caa ttc cgg gat gtg 837 Ser Ser Trp Leu Gln Asp Gly Val Asp Gly Phe Gln Phe Arg Asp Val 230 235 240 gga aag ctg atg aat gca ccc ttg tac ttg gct gag tgg cag aat atc 885 Gly Lys Leu Met Asn Ala Pro Leu Tyr Leu Ala Glu Trp Gln Asn Ile 245 250 255 260 acc aag aac tta agt gag gac agg ctt ttg att gca ggg act gag tcc 933 Thr Lys Asn Leu Ser Glu Asp Arg Leu Leu Ile Ala Gly Thr Glu Ser 265 270 275 tct gac ctg cag caa att gtc aac ata ctt gaa tcc acc agc gac ctg 981 Ser Asp Leu Gln Gln Ile Val Asn Ile Leu Glu Ser Thr Ser Asp Leu 280 285 290 ctg ttg acc agc tcc tac ctg tca aat tcc act ttc act ggg gag cgt 1029 Leu Leu Thr Ser Ser Tyr Leu Ser Asn Ser Thr Phe Thr Gly Glu Arg 295 300 305 act gaa tcc cta gtc act agg ttt ttg aat gcc act ggc agc caa tgg 1077 Thr Glu Ser Leu Val Thr Arg Phe Leu Asn Ala Thr Gly Ser Gln Trp 310 315 320 tgc agc tgg agt gtg tcg caa gca gga ctc ctc gca gac ttt ata ccg 1125 Cys Ser Trp Ser Val Ser Gln Ala Gly Leu Leu Ala Asp Phe Ile Pro 325 330 335 340 gac cat ctt ctc cga ctc tac cag ctg ctg ctc ttc act ctg cca ggg 1173 Asp His Leu Leu Arg Leu Tyr Gln Leu Leu Leu Phe Thr Leu Pro Gly 345 350 355 act cct gtt ttt agc tac ggg gat gag ctt ggc ctt cag ggt gcc ctt 1221 Thr Pro Val Phe Ser Tyr Gly Asp Glu Leu Gly Leu Gln Gly Ala Leu 360 365 370 cct gga cag cct gcg aag gcc cca ctc atg ccg tgg aat gag tcc agc 1269 Pro Gly Gln Pro Ala Lys Ala Pro Leu Met Pro Trp Asn Glu Ser Ser 375 380 385 atc ttt cac atc cca aga cct gta agc ctc aac atg aca gtg aag ggc 1317 Ile Phe His Ile Pro Arg Pro Val Ser Leu Asn Met Thr Val Lys Gly 390 395 400 cag aat gaa gac cct ggc tcc ctt ctt acc cag ttc cgg cgg ctg agt 1365 Gln Asn Glu Asp Pro Gly Ser Leu Leu Thr Gln Phe Arg Arg Leu Ser 405 410 415 420 gac ctt cgg ggt aag gag cgc tct ctg ttg cac ggt gac ttc cat gca 1413 Asp Leu Arg Gly Lys Glu Arg Ser Leu Leu His Gly Asp Phe His Ala 425 430 435 ctg tct tcc tca cct gac ctc ttc tcc tac ata cga cac tgg gac cag 1461 Leu Ser Ser Ser Pro Asp Leu Phe Ser Tyr Ile Arg His Trp Asp Gln 440 445 450 aat gag cgt tac ctg gtg gtg ctc aac ttc cga gat tcg ggc cgg tca 1509
Ａｓｎ Ｇｌｕ Ａｒｇ Ｔｙｒ Ｌｅｕ Ｖａｌ Ｖａｌ Ｌｅｕ Ａｓｎ
Ｐｈｅ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｓｅｒ Ｇｌｙ Ａｒｇ Ｓｅｒ 455 460 465 gcc agg cta ggg gcc tcc aac ctc cct gct ggc ata agc ctg cca gcc 1557 Ala Arg Leu Gly Ala Ser Asn Leu Pro Ala Gly Ile Ser Leu Pro Ala 470 475 480 agc gct aaa ctt ttg ctt agt acc gac agt gcc cgg caa agc cgt gag 1605 Ser Ala Lys Leu Leu Leu Ser Thr Asp Ser Ala Arg Gln Ser Arg Glu 485 490 495 500 gag gac acc tcc ctg aag ctg gaa aac ctg agc ctg aat cct tat gag 1653 Glu Asp Thr Ser Leu Lys Leu Glu Asn Leu Ser Leu Asn Pro Tyr Glu 505 510 515 ggc ttg ctg tta cag ttc ccc ttt gtg gcc tgatccttcc tatgcagaac 1703 Gly Leu Leu Leu Gln Phe Pro Phe Val Ala 520 525 ctaccaccct cctttgttct ccccaggcct tttggattct agtcttcctc tccttgtttt 1763 taaacttttg cagattacat acgaattctt atactgggtg tttttgtctt caaataaaaa 1823 catcacccct gcctcaaaaa aaaaaaaaa 1852 <210> 5 <211> 685 <212> PRT <213> mouse <220> <223> rBAT <400> 5 Met Asp Glu Asp Lys Gly Lys Arg Asp Pro Ile Gln Met Ser Met Lys 1 5 10 15 Gly Cys Arg Thr Asn Asn Gly Phe Val Gln Asn Glu Asp Ile Pro Glu 20 25 30 Gln Asp Pro Asp Pro Gly Ser Arg Asp Thr Pro Gln Pro Asn Ala Val 35 40 45 Ser Ile Pro Ala Pro Glu Glu Pro His Leu Lys Ala Val Arg Pro Tyr 50 55 60 Ala Gly Met Pro Lys Glu Val Leu Phe Gln Phe Ser Gly Gln Ala Arg 65 70 75 80 Tyr Arg Val Pro Arg Glu Ile Leu Phe Trp Leu Thr Val Val Ser Val 85 90 95 Phe Leu Leu Ile Gly Ala Thr Ile Ala Ile Ile Val Ile Ser Pro Lys 100 105 110 Cys Leu Asp Trp Trp Gln Ala Gly Pro Ile Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg 115 120 125 Ser Phe Lys Asp Ser Asp Lys Asp Gly Asn Gly Asp Leu Lys Gly Ile 130 135 140 Gln Glu Lys Leu Asp Tyr Ile Thr Ala Leu Asn Ile Lys Thr Leu Trp Ile Thr Ser Phe Tyr Lys Ser Ile Phe Glu Asp Phe Arg Tyr Ala Val 165 170 175 Glu Asp Ile Lys Glu Ile Asp Pro Ile Phe Gly Thr Met Lys Asp Phe 180 185 190 Glu Asn Leu Val Ala Ala Ile His Asp Lys Gly Leu Lys Leu Ile Ile 195 200 205 Asp Phe Ile Pro Asn His Thr Ser Asp Lys His Pro Trp Phe Gln Ser 210 215 220 Ser Arg Thr Arg Ser Gly Lys Tyr Thr Asp Tyr Tyr Ile Trp His Asn 225 230 235 240 Cys Thr His Cys Gln Arg Val Pro Thr Pro Pro Asn Asn Trp Leu Ser 245 250 255 Val Tyr Gly His Ser Ser Trp His Phe Asp Glu Val Arg Glu Gln Cys 260 265 270 Tyr Phe His Gln Phe Leu Arg Glu Gln Pro Asp Leu Tyr Phe Arg Asn 275 280 285 Pro Ala Val Gln Glu Glu Ile Lys Glu Ile Ile Thr Phe Trp Leu Ser 290 295 300 Lys Gly Val Asp Gly Phe Ser Phe Asp Ala Val Lys Phe Leu Leu Glu 305 310 315 320 Ala Lys Asp Leu Arg Asn Glu Ile Gln Val Asn Thr Ser Gln Ile Pro 325 330 335 Asp Thr Val Thr His Tyr Ser Glu Leu Tyr His Asp Phe Thr Thr Thr 340 345 350 Gln Val Gly Met His Asp Ile Val Arg Asp Phe Arg Gln Thr Met Asn 355 360 365 Gln Tyr Ser Arg Glu Pro Gly Arg Tyr Arg Phe Met Gly Ala Glu Ala 370 375 380 Ser Ala Glu Ser Ile Glu Arg Thr Met Met Tyr Tyr Gly Leu Pro Phe 385 390 395 400 Ile Gln Glu Ala Asp Phe Pro Phe Asn Lys Tyr Phe Thr Thr Ile Gly 405 410 415 Thr Leu Ser Gly His Thr Val Tyr Glu Val Ile Thr Ser Trp Met Glu 420 425 430 Asn Met Pro Glu Gly Lys Trp Pro Asn Trp Met Thr Gly Gly Pro Glu 435 440 445 Thr Pro Arg Leu Thr Ser Arg Val Gly Ser Glu Tyr Val Asn Ala Met 450 455 460 His Met Leu Leu Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro Ile Thr Tyr Tyr Gly 465 470 475 480 Glu Glu Ile Gly Met Gly Asp Ile Ser Val Thr Asn Phe Asn Glu Ser 485 490 495 Tyr Asp Ser Thr Thr Leu Val Ser Lys Ser Pro Met Gln Trp Asp Asn 500 505 510 Ser Ser Asn Ala Gly Phe Thr Glu Ala Asn His Thr Trp Leu Pro Pro 515 520 525 Asn Ser Asp Tyr His Thr Val Asn Val Asp Val Gln Lys Thr Gln Pro 530 535 540 Ser Ser Ala Leu Arg Leu Tyr Gln Asp Leu Ser Leu Leu His Ala Thr 545 550 555 560 Glu Leu Val Leu Ser Arg Gly Trp Phe Cys Leu Leu Arg Asp Asp Ser 565 570 575 His Ser Val Val Tyr Thr Arg Glu Leu Asp Gly Ile Asp Asn Val Phe 580 585 590 Leu Val Val Leu Asn Phe Gly Glu Ser Ser Thr Val Leu Asn Leu Gln 595 600 605 Gly Ile Ile Ser Asp Leu Pro Pro Glu Leu Arg Ile Arg Leu Ser Thr 610 615 620 Asn Ser Ala Ser Lys Gly Ser Ala Val Asp Thr Arg Ala Ile Ser Leu 625 630 635 640 Glu Lys Gly Glu Gly Leu Val Leu Glu His Ser Thr Lys Ala Pro Leu 645 650 655 His Gln Gln Ala Ala Phe Arg Asp Arg Cys Phe Val Ser Ser Arg Ala 660 665 670 Cys Tyr Ser Ser Ala Leu Asp Ile Leu Tyr Ser Ser Cys 675 680 685 <210> 6 <211> 2287 <212> DNA <213> mouse <220> <221> CDS <222> (46)..(2100) <220> <223> rBAT <400> 6 Met Asp Glu Asp 1 aaa ggc aag aga gac ccc atc caa atg agt atg aag gga tgc cga acc 105 Lys Gly Lys Arg Asp Pro Ile Gln Met Ser Met Lys Gly Cys Arg Thr 5 10 15 20 aat aac ggg ttt gtc caa aat gaa gac att ccg gag cag gac cca gac 153 Asn Asn Gly Phe Val Gln Asn Glu Asp Ile Pro Glu Gln Asp Pro Asp 25 30 35 cca ggc tcc agg gac acc cca cag ccc aac gcc gtg agt atc cct gct 201
Ｐｒｏ Ｇｌｙ Ｓｅｒ Ａｒｇ Ａｓｐ Ｔｈｒ Ｐｒｏ Ｇｌｎ Ｐｒｏ
Ａｓｎ Ａｌａ Ｖａｌ Ｓｅｒ Ｉｌｅ Ｐｒｏ Ａｌａ 40 45 50 cca gag gag cct cac cta aag gcg gtg cgg ccc tat gca ggg atg ccc 249 Pro Glu Glu Pro His Leu Lys Ala Val Arg Pro Tyr Ala Gly Met Pro 55 60 65 aag gaa gta ctc ttc cag ttc tcc ggc cag gct cgc tac cgg gtg ccc 297 Lys Glu Val Leu Phe Gln Phe Ser Gly Gln Ala Arg Tyr Arg Val Pro 70 75 80 cga gag atc ctc ttc tgg ctc acc gtg gtt tcc gtg ttc ctg ctc att 345 Arg Glu Ile Leu Phe Trp Leu Thr Val Val Ser Val Phe Leu Leu Ile 85 90 95 100 gga gcc acc ata gcc atc atc gtc atc tct cca aaa tgc ctt gac tgg 393 Gly Ala Thr Ile Ala Ile Ile Val Ile Ser Pro Lys Cys Leu Asp Trp 105 110 115 tgg caa gca ggt ccc ata tac cag atc tac ccg agg tct ttt aag gac 441 Trp Gln Ala Gly Pro Ile Tyr Gln Ile Tyr Pro Arg Ser Phe Lys Asp 120 125 130 agt gac aag gat ggg aat gga gac ctg aaa ggt atc cag gag aag ctg 489 Ser Asp Lys Asp Gly Asn Gly Asp Leu Lys Gly Ile Gln Glu Lys Leu 135 140 145 gac tat atc act gct tta aac ata aag act ctt tgg atc act tcc ttt 537 Asp Tyr Ile Thr Ala Leu Asn Ile Lys Thr Leu Trp Ile Thr Ser Phe 150 155 160 tat aaa tcg atc ttt gaa gac ttc aga tac gct gtt gag gat atc aaa 585 Tyr Lys Ser Ile Phe Glu Asp Phe Arg Tyr Ala Val Glu Asp Ile Lys 165 170 175 180 gaa att gac cct att ttt gga aca atg aaa gat ttt gag aat ttg gtt 633 Glu Ile Asp Pro Ile Phe Gly Thr Met Lys Asp Phe Glu Asn Leu Val 185 190 195 ｇｃｔ ｇｃｃ ａｔｃ ｃａｔ ｇａｃ ａａａ ｇｇｔ ｔｔａ ａａａ
ｔｔａ ａｔａ ａｔｔ ｇａｔ ｔｔｃ ａｔａ ｃｃａ 681 Ala Ala Ile His Asp Lys Gly Leu Lys Leu Ile Ile Asp Phe Ile Pro 200 205 210 aac cac act agt gac aaa cat cct tgg ttc caa tcg agt agg aca cgg 729 Asn His Thr Ser Asp Lys His Pro Trp Phe Gln Ser Ser Arg Thr Arg 215 220 225 agc gga aaa tac acc gat tac tac atc tgg cac aac tgt acc cat tgt 777 Ser Gly Lys Tyr Thr Asp Tyr Tyr Ile Trp His Asn Cys Thr His Cys 230 235 240 caa cgt gta ccc acc cct ccc aac aac tgg ctg agt gtg tat gga cac 825 Gln Arg Val Pro Thr Pro Pro Asn Asn Trp Leu Ser Val Tyr Gly His 245 250 255 260 tcc agc tgg cac ttt gat gaa gta cga gag caa tgt tat ttt cac cag 873 Ser Ser Trp His Phe Asp Glu Val Arg Glu Gln Cys Tyr Phe His Gln 265 270 275 ttt ttg aga gag caa cca gat tta tat ttc cga aat cct gct gtt caa 921 Phe Leu Arg Glu Gln Pro Asp Leu Tyr Phe Arg Asn Pro Ala Val Gln 280 285 290 gag gaa ata aag gaa ata ata acg ttc tgg ctc tcg aag ggt gtt gat 969 Glu Glu Ile Lys Glu Ile Ile Thr Phe Trp Leu Ser Lys Gly Val Asp 295 300 305 ggg ttt agt ttt gat gca gtt aaa ttt ctt ctg gaa gcg aag gat ctg 1017 Gly Phe Ser Phe Asp Ala Val Lys Phe Leu Leu Glu Ala Lys Asp Leu 310 315 320 aga aat gaa atc caa gtg aat aca tcc caa att ccg gac acg gtc acc 1065 Arg Asn Glu Ile Gln Val Asn Thr Ser Gln Ile Pro Asp Thr Val Thr 325 330 335 340 cac tac tca gag ctg tac cat gac ttc acc aca act cag gtg gga atg 1113 His Tyr Ser Glu Leu Tyr His Asp Phe Thr Thr Thr Gln Val Gly Met 345 350 355 cat gac atc gtc cga gac ttc cgg cag acc atg aac cag tac agc agg 1161 His Asp Ile Val Arg Asp Phe Arg Gln Thr Met Asn Gln Tyr Ser Arg 360 365 370 gag cct ggc aga tac cgg ttc atg ggg gcc gaa gcc tca gct gag agc 1209 Glu Pro Gly Arg Tyr Arg Phe Met Gly Ala Glu Ala Ser Ala Glu Ser 375 380 385 atc gag agg acc atg atg tac tat ggc ttg cca ttt atc cag gaa gcc 1257 Ile Glu Arg Thr Met Met Tyr Tyr Gly Leu Pro Phe Ile Gln Glu Ala 390 395 400 gac ttt cct ttc aac aag tac ttc acc aca ata ggc act ctc tct ggg 1305 Asp Phe Pro Phe Asn Lys Tyr Phe Thr Thr Ile Gly Thr Leu Ser Gly 405 410 415 420 cat act gtc tat gaa gtt atc aca tcc tgg atg gaa aac atg cct gaa 1353 His Thr Val Tyr Glu Val Ile Thr Ser Trp Met Glu Asn Met Pro Glu 425 430 435 gga aaa tgg ccc aat tgg atg act ggc gga ccg gag act cct cgg ctg 1401 Gly Lys Trp Pro Asn Trp Met Thr Gly Gly Pro Glu Thr Pro Arg Leu 440 445 450 act tct cga gta ggg agt gag tat gtc aac gcc atg cac atg ctc ctg 1449 Thr Ser Arg Val Gly Ser Glu Tyr Val Asn Ala Met His Met Leu Leu 455 460 465 ttc aca ctc ccg gga acg ccc atc act tac tat gga gag gaa atc ggg 1497 Phe Thr Leu Pro Gly Thr Pro Ile Thr Tyr Tyr Gly Glu Glu Ile Gly 470 475 480 atg gga gac att tcc gtt aca aat ttc aac gag agc tat gat agt act 1545 Met Gly Asp Ile Ser Val Thr Asn Phe Asn Glu Ser Tyr Asp Ser Thr 485 490 495 500 ａｃｃ ｃｔｔ ｇｔｃ ｔｃｃ ａａｇ ｔｃａ ｃｃｇ ａｔｇ ｃａｇ
ｔｇｇ ｇａｃ ａａｔ ａｇｔ ｔｃｃ ａａｔ ｇｃｔ 1593 Thr Leu Val Ser Lys Ser Pro Met Gln Trp Asp Asn Ser Ser Asn Ala 505 510 515 ggg ttt act gag gcc aac cac acc tgg cta cca cca aac tct gac tac 1641 Gly Phe Thr Glu Ala Asn His Thr Trp Leu Pro Pro Asn Ser Asp Tyr 520 525 530 cac acc gtc aat gtg gat gtc caa aag acc cag ccg agc tcc gca ctg 1689 His Thr Val Asn Val Asp Val Gln Lys Thr Gln Pro Ser Ser Ala Leu
535 540 545 agg ctg tat cag gat ctg agt cta ctc cat gcc aca gag ctg gtc ctc 1737 Arg Leu Tyr Gln Asp Leu Ser Leu Leu His Ala Thr Glu Leu Val Leu 550 555 560 agc cgg ggc tgg ttt tgc ctc ttg aga gac gac agt cac tct gtg gtg 1785 Ser Arg Gly Trp Phe Cys Leu Leu Arg Asp Asp Ser His Ser Val Val 565 570 575 580 tac aca aga gag ctg gac ggc ata gat aac gtc ttc ctc gtg gtt ctg 1833 Tyr Thr Arg Glu Leu Asp Gly Ile Asp Asn Val Phe Leu Val Val Leu 585 590 595 aat ttt gga gaa tca tca act gtg cta aat cta cag ggg atc att tca 1881 Asn Phe Gly Glu Ser Ser Thr Val Leu Asn Leu Gln Gly Ile Ile Ser 600 605 610 gat ctt cct cca gag ctg aga ata agg tta agt acc aac tca gcc tcc 1929 Asp Leu Pro Pro Glu Leu Arg Ile Arg Leu Ser Thr Asn Ser Ala Ser 615 620 625 aaa ggc agt gct gtt gac acc cgt gcc att tct ctg gag aag gga gag 1977 Lys Gly Ser Ala Val Asp Thr Arg Ala Ile Ser Leu Glu Lys Gly Glu 630 635 640 ggc ctg gtc ttg gag cac agc acg aag gct ccc ctc cat cag cag gcc 2025 Gly Leu Val Leu Glu His Ser Thr Lys Ala Pro Leu His Gln Gln Ala 645 650 655 660 ｇｃｔ ｔｔｃ ａｇａ ｇａｃ ａｇａ ｔｇｃ ｔｔｔ ｇｔｔ ｔｃｃ
ａｇｔ ｃｇｇ ｇｃｇ ｔｇｃ ｔａｃ ｔｃｃ ａｇｔ 2073 Ala Phe Arg Asp Arg Cys Phe Val Ser Ser Arg Ala Cys Tyr Ser Ser 665 670 675 gca ctg gac atc ctc tat agc tcg tgt tagggaggaa gctccctaag 2120 Ala Leu Asp Ile Leu Tyr Ser Ser Cys agatggccac ccagaacatc acgtacgcac aggctgagca gactcatgaa tggcatcaat 2180 tcttagatat ttctgtagca cgatgcacgt tttttaaagt gtttaaagat tatgccaaat 2240 actaaagcat ttaaatatga aaaaaaaaaa aaaaaagcgg cgcgccg 2287 <210> 7 <211> 14 <212> PRT <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence: partial peptide <220> <223> partial peptide of AGT1(465-478) <400> 7 Cys Ile Pro Asp Val Ser Asp Asp His Ile His Glu Glu Ser 1 5 10 ＜２１０＞ ８ <211> 31 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> sense primer for amplification of AGT1 <400> 8 gcgcgaagct tacctatagg cagaaacatt c 31 <210> 9 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> antisense primer for amplification of AGT1 <400> 9 atatgcggcc gcactttctt catgtatgtg gt 32 <210> 10 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> sense primer for amplification of rBAT <400> 10 atatgcggcc gcagatgagg acaaaggcaa gag 33 <210> 11 <211> 36 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> antisense primer for amplification of rBAT <400> 11 gcgcgctcta gaaatgcttt agtatttggc ataatc 36 <210> 12 <211> 33 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> sense primer for amplification of 4F2hc <400> 12 atatgcggcc gcaagccagg acaccgaagt gga 33 <210> 13 <211> 32 <212> DNA <213> Artificial Sequence <220> <223> Description of Artificial Sequence:primer <220> <223> antisense primer for amplification of 4F2hc <400> 13 gcgctctaga catgaggcag gggtgatgtt tt 32
【図１】 マウスＡＧＴ１とマウスＡｓｃ-２、ラット
ＬＡＴ１、ラットｙ＋ＬＡＴ１、マウスｘＣＴ及びラッ
トＢＡＴ１のアミノ酸配列の比較をを示す図。予想され
る膜貫通部位を付線で示した。保存されているシスチン
残基を＊で、予想されるｃＡＭＰ依存性のリン酸化部位
を＃、予想されるＣ-キナーゼ依存性のリン酸化部位を
＋、予想されるチロシンリン酸化部位を＆で示した。
ＬＡＴ１、ラットｙ＋ＬＡＴ１、マウスｘＣＴ及びラッ
トＢＡＴ１のアミノ酸配列の比較をを示す図。予想され
る膜貫通部位を付線で示した。保存されているシスチン
残基を＊で、予想されるｃＡＭＰ依存性のリン酸化部位
を＃、予想されるＣ-キナーゼ依存性のリン酸化部位を
＋、予想されるチロシンリン酸化部位を＆で示した。
【図２】 マウスの各臓器組織におけるＡＧＴ１遺伝子
ｍＲＮＡの発現をノーザンブロッティングにより解析し
た結果を示した写真。
ｍＲＮＡの発現をノーザンブロッティングにより解析し
た結果を示した写真。
【図３】 抗ＡＧＴ１抗体によるウェスタンブロット解
析の結果を示した写真。マウス腎膜標本において、非還
元条件下（−）及び還元条件下（＋）で行った。
析の結果を示した写真。マウス腎膜標本において、非還
元条件下（−）及び還元条件下（＋）で行った。
【図４】 マウスの腎における抗ＡＧＴ１抗体によるＡ
ＧＴ１の免疫組織化学的解析の結果を示した写真。ａ．
弱拡大像。髄質外層の近位尿細管と皮質の遠位尿細管に
染色が見られる。ｂ．抗原ペプチドによる吸収実験。ａ
で検出された染色は消失し、染色の特異性が示された。
ｃ、ｄ．近位尿細管（ｃ）及び遠位尿細管（ｄ）の強拡
大像。側基底側膜に染色が見られる。
ＧＴ１の免疫組織化学的解析の結果を示した写真。ａ．
弱拡大像。髄質外層の近位尿細管と皮質の遠位尿細管に
染色が見られる。ｂ．抗原ペプチドによる吸収実験。ａ
で検出された染色は消失し、染色の特異性が示された。
ｃ、ｄ．近位尿細管（ｃ）及び遠位尿細管（ｄ）の強拡
大像。側基底側膜に染色が見られる。
【図５】 ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃあるいはｒＢＡＴを連
結させて作製した融合タンパク質の模式図。ＡＧＴ１-
４Ｆ２ｈｃ融合タンパク質及びＡＧＴ１−ｒＢＡＴ融合
タンパク質の連結部分のアミノ酸配列及び遺伝子塩基配
列を図下に示した。
結させて作製した融合タンパク質の模式図。ＡＧＴ１-
４Ｆ２ｈｃ融合タンパク質及びＡＧＴ１−ｒＢＡＴ融合
タンパク質の連結部分のアミノ酸配列及び遺伝子塩基配
列を図下に示した。
【図６】 マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１
遺伝子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ／マウス４Ｆ
２ｈｃ遺伝子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ融合タン
パク質遺伝子ｃＲＮＡ、あるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ融
合タンパク質遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞による
アスパラギン酸取り込み実験の結果を示す図。
遺伝子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ／マウス４Ｆ
２ｈｃ遺伝子ｃＲＮＡ、ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ融合タン
パク質遺伝子ｃＲＮＡ、あるいはＡＧＴ１−ｒＢＡＴ融
合タンパク質遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細胞による
アスパラギン酸取り込み実験の結果を示す図。
【図７】 マウス４Ｆ２ｈｃ遺伝子、マウスｒＢＡＴ遺
伝子、ＡＧＴ１遺伝子、ＡＧＴ１遺伝子／マウス４Ｆ２
ｈｃ遺伝子、あるいはＡＧＴ１遺伝子／マウスｒＢＡＴ
遺伝子を導入したＣＯＳ−７細胞によるアスパラギン酸
取り込み実験の結果を示す図。
伝子、ＡＧＴ１遺伝子、ＡＧＴ１遺伝子／マウス４Ｆ２
ｈｃ遺伝子、あるいはＡＧＴ１遺伝子／マウスｒＢＡＴ
遺伝子を導入したＣＯＳ−７細胞によるアスパラギン酸
取り込み実験の結果を示す図。
【図８】 ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（Ａ
ＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）の卵母細胞細胞膜への発現の蛍光
免疫法による検討の結果を示した図。対照として水を注
入した卵母細胞（ａ及びｂ）、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ
を注入して発現させた卵母細胞（ｃ及びｄ）、ＡＧＴ１
と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈ
ｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入して発現させた卵母細胞（ｅ
及びｆ）において、抗４Ｆ２ｈｃ抗体（ａ、ｃ、及び
ｅ）、あるいは抗ＡＧＴ１抗体を用いた蛍光免疫法によ
る検討を行った。
ＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）の卵母細胞細胞膜への発現の蛍光
免疫法による検討の結果を示した図。対照として水を注
入した卵母細胞（ａ及びｂ）、ＡＧＴ１遺伝子ｃＲＮＡ
を注入して発現させた卵母細胞（ｃ及びｄ）、ＡＧＴ１
と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈ
ｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入して発現させた卵母細胞（ｅ
及びｆ）において、抗４Ｆ２ｈｃ抗体（ａ、ｃ、及び
ｅ）、あるいは抗ＡＧＴ１抗体を用いた蛍光免疫法によ
る検討を行った。
【図９】 ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質（Ａ
ＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細
胞によるアスパラギン酸取り込み実験において添加する
塩の影響を調べた結果を示す図。
ＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵母細
胞によるアスパラギン酸取り込み実験において添加する
塩の影響を調べた結果を示す図。
【図１０】 ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵
母細胞によるアスパラギン酸取り込み実験において基質
アスパラギン酸の濃度の影響を調べた結果を示す図。
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵
母細胞によるアスパラギン酸取り込み実験において基質
アスパラギン酸の濃度の影響を調べた結果を示す図。
【図１１】 ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵
母細胞によるアスパラギン酸取り込み実験において、系
への各種アミノ酸もしくはその類似化合物添加の影響を
調べた結果を示す図。
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵
母細胞によるアスパラギン酸取り込み実験において、系
への各種アミノ酸もしくはその類似化合物添加の影響を
調べた結果を示す図。
【図１２】 ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵
母細胞によるアスパラギン酸取り込み実験において、系
への各種酸性アミノ酸もしくはその類似化合物添加の影
響を調べた結果を示す図。ＰＤＣ，Ｌ−トランス−ピロ
リジン−２，４ジカルボン酸(L-trans-pyrrolidine-2,4
-dicarboxylate)： ＤＨＫ，ジヒドロカイニン酸(dihy
drokainate)：＊＊、対になっていないデータに対する
スチューデントのｔ検定でｐ＜０．０１のものを示す。
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵
母細胞によるアスパラギン酸取り込み実験において、系
への各種酸性アミノ酸もしくはその類似化合物添加の影
響を調べた結果を示す図。ＰＤＣ，Ｌ−トランス−ピロ
リジン−２，４ジカルボン酸(L-trans-pyrrolidine-2,4
-dicarboxylate)： ＤＨＫ，ジヒドロカイニン酸(dihy
drokainate)：＊＊、対になっていないデータに対する
スチューデントのｔ検定でｐ＜０．０１のものを示す。
【図１３】 ＡＧＴ１と４Ｆ２ｈｃの融合タンパク質
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵
母細胞による放射能標識アミノ酸の取り込みを調べた結
果を示す図。
（ＡＧＴ１−４Ｆ２ｈｃ）遺伝子ｃＲＮＡを注入した卵
母細胞による放射能標識アミノ酸の取り込みを調べた結
果を示す図。
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(51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考）
Ａ６１Ｐ 39/02 Ａ６１Ｐ 43/00 １１１ ４Ｈ０４５
43/00 １０５ Ｃ０７Ｋ 14/47
１１１ 16/18
Ｃ０７Ｋ 14/47 Ｃ１２Ｎ 1/15
16/18 1/19
Ｃ１２Ｎ 1/15 1/21
1/19 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ
1/21 33/50 Ｚ
5/10 Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ
Ｇ０１Ｎ 33/15 5/00 Ａ
33/50 Ｃ
Ａ６１Ｋ 37/02
Ｆターム(参考） 2G045 AA40 BA13 BB03 BB20 CB01
CB21 DA12 DA13 DA14 DA36
FB04
4B024 AA01 AA11 BA43 BA80 CA04
CA07 DA02 EA04 GA11 HA12
HA15
4B065 AA91X AA91Y AB01 AC14
BA02 CA24 CA44 CA46
4C084 AA02 AA07 AA17 BA01 BA08
BA22 BA23 BA41 CA23 CA25
CA56 DC50 NA05 NA13 NA14
ZB212 ZC372 ZC392
4C085 AA13 BB11 CC05 CC26 CC29
4H045 AA10 AA11 BA10 BA41 CA40
DA76 DA86 EA21 EA27 EA50
FA72 FA74
Claims (28)
- 【請求項１】 以下の（Ａ）及び（Ｂ）からなる群から
選択されるタンパク質。 （Ａ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質。 （Ｂ）配列番号１で示されるアミノ酸配列において１も
しくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加された
アミノ酸配列からなり、Ｎａ＋非依存的に酸性アミノ酸
及びその類似物質を輸送する能力を有するタンパク質。 - 【請求項２】 以下の（Ｃ）及び（Ｄ）からなる群から
選択されるタンパク質。 （Ｃ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質と配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質の融合タンパク質。 （Ｄ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質と配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質の融合タンパク質のアミノ酸配列において、１
もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加され
たアミノ酸配列からなり、Ｎａ＋非依存的に酸性アミノ
酸及びその類似物質を輸送する能力を有するタンパク
質。 - 【請求項３】 以下の（Ｅ）及び（Ｆ）からなる群から
選択されるタンパク質。 （Ｅ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質と配列番号５で示されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質の融合タンパク質。 （Ｆ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質と配列番号５で示されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質の融合タンパク質のアミノ酸配列において、１
もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加され
たアミノ酸配列からなり、Ｎａ＋非依存的に酸性アミノ
酸及びその類似物質を輸送する能力を有するタンパク
質。 - 【請求項４】 マウス由来である請求項１〜３のいずれ
かの項に記載のタンパク質。 - 【請求項５】 臓器、組織、もしくは培養細胞由来であ
る請求項１〜４のいずれかの項に記載のタンパク質。 - 【請求項６】 請求項１〜５のいずれかの項に記載のタ
ンパク質をコードする遺伝子。 - 【請求項７】 以下の（ａ）及び（ｂ）からなる群から
選択されるＤＮＡからなる遺伝子。 （ａ）配列番号２で示される塩基配列からなるＤＮＡ。 （ｂ）配列番号２で示される塩基配列からなるＤＮＡと
ストリンジェントな条件下でハイブリダイズし、ナトリ
ウム非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送す
る能力を有するタンパク質をコードするＤＮＡ。 - 【請求項８】 以下の（ｃ）及び（ｄ）からなる群から
選択されるＤＮＡからなる遺伝子。 （ｃ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質と配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質の融合タンパク質をコードするＤＮＡ。 （ｄ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質と配列番号３で示されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質の融合タンパク質のアミノ酸配列において、１
もしくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加され
たアミノ酸配列からなり、Ｎａ＋非依存的に酸性アミノ
酸及びその類似物質を輸送する能力を有するタンパク質
をコードするＤＮＡ。 - 【請求項９】 以下の（ｅ）及び（ｆ）からなる群から
選択されるＤＮＡからなる遺伝子。 （ｅ）配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタン
パク質と配列番号５で示されるアミノ酸配列からなるタ
ンパク質の融合タンパク質をコードするＤＮＡ。（ｆ）
配列番号１で示されるアミノ酸配列からなるタンパク質
と配列番号５で示されるアミノ酸配列からなるタンパク
質の融合タンパク質のアミノ酸配列において、１もしく
は数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加されたアミ
ノ酸配列からなり、Ｎａ＋非依存的に酸性アミノ酸及び
その類似物質を輸送する能力を有するタンパク質をコー
ドするＤＮＡ。 - 【請求項１０】 マウス由来である請求項７〜９のいず
れかの項に記載の遺伝子。 - 【請求項１１】 臓器、組織、もしくは培養細胞由来で
ある請求項７〜１０のいずれかの項に記載の遺伝子。 - 【請求項１２】 請求項７〜１１のいずれかの項に記載
の遺伝子もしくは該遺伝子の中のタンパク質をコードす
る遺伝子を含むベクター。 - 【請求項１３】 発現プラスミドである請求項１２に記
載のベクター。 - 【請求項１４】 請求項１２又は１３に記載のベクター
で形質転換された形質転換体。 - 【請求項１５】 配列番号２で示される塩基配列の中の
連続する１４塩基以上の部分配列もしくはその相補的な
配列を含むヌクレオチド。 - 【請求項１６】 ナトリウム非依存的に酸性アミノ酸及
びその類似物質を輸送する能力を有するタンパク質をコ
ードする遺伝子を検出するためのプローブとして使用す
るものである請求項１５に記載のヌクレオチド。 - 【請求項１７】 ナトリウム非依存的に酸性アミノ酸及
びその類似物質を輸送する能力を有するタンパク質をコ
ードする遺伝子の発現を変調させるために使用するもの
である請求項１５に記載のヌクレオチド。 - 【請求項１８】 請求項１〜５のいずれかの項に記載の
タンパク質に対する抗体。 - 【請求項１９】 請求項１〜５のいずれかの項に記載の
タンパク質を用いて、該タンパク質の有するナトリウム
非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物質を輸送する能
力に対する被検物質の基質としての作用を検出する方
法。 - 【請求項２０】 請求項１〜５のいずれかの項に記載の
タンパク質を用いて、該タンパク質の有する酸性アミノ
酸及びその類似物質を輸送する能力を変調させる物質を
スクリーニングする方法。 - 【請求項２１】 請求項１〜５のいずれかの項に記載の
タンパク質、その特異抗体、その機能促進物質あるいは
機能抑制物質を用いて、該タンパク質の有する酸性アミ
ノ酸及びその類似物質を輸送する能力を変調させること
により、細胞増殖を制御する方法。 - 【請求項２２】 請求項１〜５のいずれかの項に記載の
タンパク質、その特異抗体、その機能促進物質あるいは
機能抑制物質を用いて、該タンパク質の有する酸性アミ
ノ酸及びその類似物質を輸送する能力を変調させること
により、該タンパク質によって輸送される薬物の体内動
態を変更する方法。 - 【請求項２３】 請求項１〜５のいずれかの項に記載の
タンパク質、その特異抗体、その機能促進物質あるいは
機能抑制物質を用いて、該タンパク質の有する酸性アミ
ノ酸及びその類似物質を輸送する能力を変調させること
により、該タンパク質によって輸送される毒物あるいは
外来性異物の体内動態を変更する方法。 - 【請求項２４】 請求項１〜５のいずれかの項に記載の
タンパク質、その特異抗体、又はその機能促進物質若し
くは機能抑制物質を含有してなる、該タンパク質が有す
る酸性アミノ酸及びその類似物質の輸送能力制御剤。 - 【請求項２５】 タンパク質の有する酸性アミノ酸及び
その類似物質の輸送能力制御剤が、細胞増殖制御剤であ
る請求項２４に記載の輸送能力制御剤。 - 【請求項２６】 タンパク質の有する酸性アミノ酸及び
その類似物質の輸送能力制御剤が、薬物の体内動態制御
剤である請求項２４に記載の輸送能力制御剤。 - 【請求項２７】 タンパク質の有する酸性アミノ酸及び
その類似物質の輸送能力制御剤が、毒物あるいは外来性
異物の体内動態制御剤である請求項２４に記載の輸送能
力制御剤。 - 【請求項２８】 配列番号３若しくは５で示されたアミ
ノ酸配列を有するタンパク質、又はこれらのタンパク質
の１若しくは数個のアミノ酸が欠失、置換もしくは付加
されたアミノ酸配列からなるタンパク質を含有してな
る、ナトリウム非依存的に酸性アミノ酸及びその類似物
質を輸送する能力を有するタンパク質の細胞膜移行推進
剤。
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|---|---|---|---|
| JP2002040608A JP4278906B2 (ja) | 2002-02-18 | 2002-02-18 | 酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーター及びその遺伝子 |
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|---|---|---|---|
| JP2002040608A JP4278906B2 (ja) | 2002-02-18 | 2002-02-18 | 酸性アミノ酸を輸送するナトリウム非依存性トランスポーター及びその遺伝子 |
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|---|---|---|---|
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| EP (1) | EP1484400A4 (ja) |
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- 2003-02-17 WO PCT/JP2003/001614 patent/WO2003068970A1/ja active Application Filing
-
2004
- 2004-08-18 US US10/921,772 patent/US7419790B2/en not_active Expired - Fee Related
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- 2008-08-15 US US12/228,769 patent/US20100216976A1/en not_active Abandoned
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| EP1484400A1 (en) | 2004-12-08 |
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