JP2002542385A - シュードモナス種により産生するヘテロ多糖類 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 本発明は、少なくとも１種のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２２９５）菌株、その組換え型の一つ又はその変異体の一つと、該菌株、その組換え型の一つ又は変異体の一つにより同化できる炭素源とを含む培地を発酵させることによって得ることができることを特徴とするヘテロ多糖類（ＨＰ）に関する。また、本発明は、このヘテロ多糖類を製造する方法並びにこれを増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用することに関する。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本発明は、新規なヘテロ多糖類（ＨＰ）、これをシュードモナス（Ｐｓｅｕｄ
ｏｍｏｎａｓ） ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２２９５）菌株を発酵さ
せることにより製造するための方法、並びにこのヘテロ多糖類を増粘剤及び（又
は）ゲル化剤として使用することに関する。

【０００２】 多くの産業分野において、 ・改善された流動学的性質、ゲルを形成できること、 ・混合する媒体との増大された相溶性、 ・広範な温度及びｐＨ範囲内で大きな安定性 を特徴とする新規な化合物が常に求められている。 細菌発酵の結果として得られる化合物の場合には、その化合物が良好な生産性
を有することも重要である。

【０００３】 ゲル化能力は非常に有益である。何故ならば、そのような系は、それらの用途
が見出される分野が多様であるために特に魅力的であり、そのいくつかの用途は
ゲルの使用を要求するからである。 しかして、例えば、農業関連産業は広範なゲル製品（クリームデザート、ヨー
グルト、種々のゼリー、アイスなど）を提供し、また製薬産業は活性成分のため
のビヒクルとして又は増粘剤としてゲルを使用する。

【０００４】 全く異なった分野では、いくつかの塗料は、静止状態でゲル特性を持つために
滴下しないが、ブラシの作用で容易に拡散する（剪断減粘性プロフィル）。 また、水性ゲルはクロマトグラフィーの支持体として又はコンタクトレンズの
開発のために使用される。

【０００５】 例えば、キサンタンガムのような細菌起源のヘテロ多糖類が既に文献に記載さ
れ、極限温度及びｐＨ条件下でその有効な流動学的性質のために使用されている
。しかし、溶液状での用途において好適であるこれらのヘテロ多糖類は、常にゲ
ルを生成しない。

【０００６】 媒質のゲル化は、該媒質の成分の架橋に続いて三次元網状構造が形成されたと
きに起こることが知られている。 一般には、このゲル化は、媒質に追加の陽イオン、特にアルカリ金属又はアル
カリ土類金属（例えば、カルシウム及び（又は）マグネシウム）型の陽イオンを
添加することによって、ｐＨを酸性又は塩基性の値に切り替えることによって、
別の化合物、特に別の多糖類（例えば、キサンタンとカロブとの組合せ）を添加
することによって、又は温度を変更することによってもたらされる。

【０００７】 想定される用途が何であれ、上記のゲル化条件は、 ・ゲルを得るために導入しなければならない追加の陽イオン又は補助添加剤と該
組成物中に存在するその他の成分との間の相互作用のために最終ゲルの安定性及
び相溶性を害するか、又は ・高温及び（又は）ｐＨ変化のために該組成物中に存在するヘテロ多糖類及び（
又は）その他の成分を変性させる かもしれない。

【０００８】 本発明との関係で、用語“ゲル”とは、液体に分散されたヘテロ多糖類鎖の少
なくとも部分的な会合から生じた疑似固体（固体と非常に類似した挙動をする）
を意味する。応力周波数範囲ω内では、疑似固体ゲルは、一般に、その固体成分
に関しては弾性モジュラスＧ’（ω）（貯蔵モジュラスとも称される）によって
、またその液状又は粘性の成分に関しては粘性モジュラスＧ”（ω）（損失モジ
ュラスとも称される）によって特徴づけられる。

【０００９】 機械的な値Ｇ’（ω）及びＧ”（ω）は、振動様式で作働する制御された歪流
動計を使用して測定することができる。例示すれば、例えば、Ｒｈｅｏ−Ｆｌｕ
ｉｄ Ｓｐｅｃｔｒｏｍｅｔｅｒ（登録商標）流動計が挙げられる。 また、Ｇ’及びＧ”は、振動様式で作働する制御された応力流動計で測定する
ことができる。例示すれば、例えば、ＣＡＲＲＩＭＥＤ（登録商標）流動計が挙
げられる。

【００１０】 測定の原理は、第一に、可逆的な機械的歪みの範囲であってゲルの機械的応力
に対する応答が該歪みの関数として直線的である歪みの範囲を決定することから
なる。第二に、ゲルが上で決定した直線的な範囲内に含まれる一定の値の機械的
歪みに付される。次いで、流動計が範囲ωで走査を実行する。

【００１１】 歪みの相内に存在するゲルの応力応答は、弾性モジュラスＧ’（ω）に接近さ
せる。Ｇ’（ω）は、弾性形態のゲルによって貯蔵されるエネルギーに相当し、
回復性である。 歪みにより９０°の角度だけ相の外に存在するゲルの応力応答は、粘性モジュ
ラスＧ”（ω）に接近させる。Ｇ”（ω）は、粘性流れによって散逸したエネル
ギーに相当し、回復性ではない。

【００１２】 ゲルは、走査した応力周波数範囲（ω）の全体にわたって、Ｇ’／Ｇ”の比が
１０以上であるとき、即ち、ゲルの弾性が高いままであり且つＧ’（ω）の値が
１０Ｐａ以上であるときに強い又は真のゲルであると言われる。

【００１３】 本発明の特定の目的は、非常に良好な流動学的性質、特に増粘性及び擬塑性(
剪断減粘性)と、また媒質に追加の陽イオンを添加したりｐＨを切り替えたりす
ることなく真のゲルを与え且つ４０℃以下でそのようにさせる能力を持ったヘテ
ロ多糖類を提供することである。

【００１４】 本発明の他の目的は、低濃度で非常に良好な流動学的性質を有するヘテロ多糖
類を提供することである。

【００１５】 まず、本発明は、少なくとも１種のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
） ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２２９５）菌株、その組換え型の一つ
又はその変異体の一つと、該菌株、その組換え型の一つ又は変異体の一つにより
同化できる炭素源とを含む培地を発酵させることにより得ることができることを
特徴とするヘテロ多糖類（ＨＰ）を提供する。

【００１６】 シュードモナス種菌株は、ブタペスト条約に従って１９９８年７月２２日に微
生物培養物の国内収集機関（ＣＮＣＭ）に寄託されており、そこでこのものは番
号Ｉ−２０５４として公的に利用することができる。また、それは、１９９８年
７月１３日に微生物及び細胞培養物のドイツ国収集機関（ＤＳＭＺ）に寄託され
ており、そこでこのもは番号ＤＳＭ １２２９５として公的に利用することがで
きる。この菌株は、本発明の目的の一つを構成する。

【００１７】 シュードモナス ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２２９５）の純粋培養
は、本発明の別の観点をなすものであるが、２５℃〜３０℃、特に２５℃〜２８
℃の温度でほぼ２４時間温置したペトリ皿で実施することができる。

【００１８】 シュードモナス ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２２９５）により同化
できる窒素源及び炭素源は、グルコース、フルクトース、ガラクトース、トレハ
ロース、マンノース、メロビオース、シュクロース、ラフィノース、マルトトリ
オース、マルトース、ラクトース、ラクツロース、メチル−β−ガラクトピラノ
シド、メチル−α−ガラクトピラノシド、セロビオース、ゲントビオース、メチ
ル−β−Ｄ−グルコピラノシド、メチル−α−Ｄ−グルコピラノシド、エスクリ
ン、リボース、アラビノース、キシロース、パラチノース、ラムノース、フコー
ス、メレジトース、Ｄ（＋）−アラビット、Ｌ（−）−アラビット、キシリット
、ズルシット、タガトース、グリセリン、ミオイノシット、マンニット、マルチ
ット、ツラノース、ソルビット、アドニット、リキソース、エリトリット、Ｄ（
−）−タータレート、Ｄ（＋）−マレート、Ｌ（−）−マレート、ｃｉｓ−アコ
ニテート、ｔｒａｎｓ−アコニテート、２−ケト−Ｄ−グルコネート、Ｎ−アセ
チルグルコサミン、キネート、ベタイン、スクシンネート、フマレート、グリセ
レート、グルコサミンから選択される。

【００１９】 菌株のための可能な維持培地のうちでは、Ｄｉｆｃｏ ＭＹ寒天型の維持培地
（参照番号０７１２−０１−８）が特に有益であると思われる。このＤｉｆｃｏ ＭＹ寒天型培地は、次の組成： バクト−酵母抽出物 ３ｇ 麦芽抽出物 ３ｇ バクト−ペプトン ５ｇ バクト−デキストロース １０ｇ バクト−寒天 ２０ｇ を有する。

【００２０】 菌株を保存するためには、少なくとも一つの予備培養工程を提供することが好
ましい。予備培養工程とは、菌株を多糖類を産生させることなく成長させ増殖さ
せることからなる工程を意味する。

【００２１】 一般に、ヘテロ多糖類は、グルコース及び（又は）その誘導体、ガラクトース
及び（又は）その誘導体、マンヌロン酸及び（又は）その塩類、そして酢酸及び
（又は）その塩類の単位を含むことが証明できた。 ヘテロ多糖類（ＨＰ）の構成単位は、一般に、参照物としてのガラクトースを
１に等しいものとして、次のモル割合： ・グルコース及び（又は）その誘導体：０．２〜５、 ・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．２〜５、 ・酢酸及び（又は）その塩類：０〜１０ で存在する。

【００２２】 更に特定すれば、該単位は、参照物としてのガラクトースを１に等しいものと
して、次のモル割合： ・グルコース及び（又は）その誘導体：０．５〜４、好ましくは０．８〜２、 ・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．５〜４、好ましくは０．８〜２、 ・酢酸及び（又は）その塩類：０〜８、好ましくは０〜６ で存在する。 マンヌロン酸及び酢酸は、塩類の形で存在し得る。塩類としては、ナトリウム
、カリウム、カルシウム又はアンモニウム塩が挙げられる。

【００２３】 上で特記したようにヘテロ多糖類（ＨＰ）の実験式を決定するのを可能にさせ
たそれの分析方法の原理は、該ヘテロ多糖類（ＨＰ）の加水分解後の構成要素（
単糖類及び酸）の決定並びに内部又は外部較正をしたクロマトグラフィー検定で
ある。 しかして、クロマトグラフィー検定は、以下のように実施された。 １００ｍｇのヘテロ多糖類（ＨＰ）を密閉チューブにおいて５ｍＬの１モルト
リフルオル酢酸と共に１０５℃で３〜６時間加水分解する。 この操作に続いて蒸発させ、乾燥残留物を内部標準としての１５ｍｇのソルビ
ットを含有する５ｍＬのピリジンに溶解させ、次いで１ｍＬのピリジン溶液につ
いて０．９ｍＬのヘキサメチルジシラザンによりシリル化する。シリル化は０．
１ｍＬのトリフルオル酢酸により接触させる。

【００２４】 次いで、単糖類が、長さが２５ｍで直径が０．２５ｍｍで、０．１４μの膜厚
を有するメチルシリコーン相を充填してあるガラス毛細管でＦＩＤ（炎イオン化
検出）付きのガスクロマトグラフィーにより検定される。使用されるキャリアー
ガスは２ｍＬ／分の流量の水素である。

【００２５】 酢酸は、１００ｍｇのヘテロ多糖類（ＨＰ）を５ｍＬの２Ｎ塩酸により１０５
℃で１時間加水分解した後に検定される。次いで、５ｍＬのプロピン酸溶液（５
ｍｇ／ｍＬ）が内部標準として添加され、混合物が１５ｍＬの脱塩水により作ら
れる。検定は、長さが２５０ｃｍで直径が４．６ｍｍである５μのＣ−１８グラ
フト化シリカカラムを使用するＨＰＬＣにより実施する。溶離剤は、１．２ｍＬ
／分の流量の０．０２モル／Ｌの燐酸水溶液である。検出は屈折計法により行な
う。

【００２６】 マンヌロン酸は、「食品化学処方集」第４版第７６８頁に記載された方法に従
ってガム質を塩酸により熱処理した後に脱炭酸することにより放出されたＣＯ₂
によって検定される。

【００２７】 重量分子量は、連続したＴＳＫ ＰＷ４０００及び６０００カラム（長さが３
０ｃｍで直径が７ｍｍのカラム）での排除クロマトグラフィーによって、屈折計
法による検出を用いて検定される。溶離剤は０．１モル／Ｌの硝酸ナトリウム溶
液である。溶離剤中のヘテロ多糖類の濃度はほぼ０．０１５重量％である。較正
は、プルランを使用して行なうが、後者は１０⁷ｇ／モルまで外挿して５×１０³ 〜１．６×１０⁶ｇ／モルの分子量を持つ単分散多糖類である。 重量平均分子量（Ｍｗ）は、クロマトグラムから得られる分子量分布曲線から
得られる。それは、一般に、１×１０⁵〜８×１０⁶モル、好ましくはほぼ８×１
０⁵〜５×１０⁶ｇ／モルである。 更に特定すれば、（ＨＰ）は、ほぼ２．５×１０⁶〜４×１０⁶ｇ／モルの重量
平均分子量を有する。

【００２８】 既に述べたように、（ＨＰ）は溶液状で、特に蒸留水又は水道水中で非常に良
好な流動学的性質を有する。 しかして、例えば、（Ｈｐ）を蒸留水に溶解してなる０．５％重量／重量溶液
は２３℃で１Ｈｚの周波数で０．１〜２００ＰａのＧ’値及び０．１〜２０Ｐａ
のＧ”値を与えることが分かった。

【００２９】 （ＨＰ）は、Ｇ’及びＧ”値がＧ’については２０〜２００Ｐａであり、Ｇ”
については０．５〜１５Ｐａであるときに強いゲル又は真のゲルを与える。さら
に有利には、Ｇ’は２０〜１５０Ｐａであり、Ｇ”は０．５〜１０Ｐａである。
特に好ましい一具体例では、Ｇ’の値はほぼ１００Ｐａであり、Ｇ”の値はほぼ
５Ｐａである（蒸留水中）。

【００３０】 （ＨＰ）は、流れの流動学により評価される水性媒質粘度を与える。流れ粘度
の流動学的測定は、制御された応力流動計又は制御された剪断速度流動計、例え
ば、それぞれＲＨＥＯＭＡＴ（登録商標）又はＣＡＲＲＩＭＥＤ（登録商標）型
の粘度計を使用して実施される。 いずれの場合も、装置は、（ＨＰ）＋水の混合物の流れの下でこの混合物が可
逆的に歪みを受けているときに応力を測定する。流れ粘度は応力から計算される
。 従って、この装置は、所定の剪断速度で粘度レベルを定量するのを可能にさせ
る。 流れ粘度は、ブルックフィールド粘度計によって一層簡単に評価することがで
きる。 更に、これらの（ＨＰ）の流れ粘度の流動学的測定は、（ＨＰ）を含む（ＨＰ
）溶液及び（又は）処方物の流れ閾値を評価するのを可能にさせる。該閾値は、
媒質の構造を破壊してそれを流れさせるために与えねばならない力を表わしてい
る。 また、流れの流動学は、（ＨＰ）を含む（ＨＰ）溶液及び（又は）処方物が制
御された剪断が増大する（擬塑性又は剪断減粘性の挙動）ときに流れる容易さを
定量するのを可能にさせる。

【００３１】 例えば、（ＨＰ）を０．５％重量／重量のＮａＣｌを含有する蒸留水に溶解し
てなる１％重量／重量溶液が２３℃で０．１ｓ^-1の剪断速度で１００〜５０００
Ｐａ・ｓ、特に２００〜２０００Ｐａ・ｓの流れ粘度値を与えることが見出され
た。 類似の条件下で、１０ｓ^-1の剪断速度で、０．５〜３００Ｐａ・ｓ、特に５〜
１５０Ｐａ・ｓである。 これらの流れの流動学データは、処方物が混練りされているとき、一つの容器
から別の容器に移送されるとき、膨張されるときなどにおける該処方物の挙動を
表わしている。

【００３２】 （ＨＰ）を媒質に混入することによって得られたゲルは、自己回復性のゲルで
ある。換言すれば、剪断後に、強い剪断でさえも、“破壊された”ゲルは矯正し
てその初期の性質を回復する能力を有する。 （ＨＰ）から得られたゲルの自己回復能力は、例えば、直径が１２．７ｍｍの
円筒状測定本体からなるＥＴＩＡ Ｔ２テクスチャライザーで、０．０５ｍｍ／
ｓ及び１５ｍｍの浸透高さでもって実施される圧縮測定を使用して評価される。
プランジャーがゲルに同じ箇所で多数回、異なった時間間隔で押し当てられ、圧
縮力が記録される。ゲルの弾性の表わしている原点での傾斜（ｍＮ／ｍｍで表わ
される）が決定される。

【００３３】 例えば、（ＨＰ）を蒸留水に溶解してなる０．５％重量／重量溶液によりゲル
が調製される。次いで、このゲルは２４時間貯蔵されてから、圧縮測定が室温（
ほぼ２５℃）か又は低温で、ほぼ６℃で実施される。 圧縮測定は、種々の時間間隔：０分、５分、１５分及び２４時間で、それぞれ
の測定の間に５分間あけて、実施される。 しかして、一定に留まる傾斜は、測定時間にかかわらず（ｔ＝０．５分、１５
分及び２４時間）、４５±１ｍＮ／ｍｍにほぼ等しい。 このことは、ゲルの弾性が安定であること、ゲルがずっと連続して何度も自己
回復する能力を有すると共に同じゲル強度を維持することを示している。

【００３４】 また、本発明は、上記したヘテロ多糖類（ＨＰ）を製造するための方法を提供
する。 この製造方法は、まず、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） ｓｐ
Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２２９５）菌株、その組換え型の一つ又はその変
異体の一つにより同化できる炭素源を含む培地を発酵させることにからなる。 該同化性炭素源以外に、発酵培地は、少なくとも１種の有機又は無機窒素源及
び要すれば１種以上の無機塩類を含有することができる。 培地は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） ｓｐ Ｉ−２０５４（
又はＤＳＭ １２２９５）菌株により慣用的な態様で接種される。

【００３５】 発酵培地の一成分である有機炭素源としては、上記の糖以外に、でんぷん（有
利には、加水分解されたもの）、でんぷん加水分解産物、これらの糖の混合物、
これらの糖の少なくとも１種を含む混合物が挙げられる。 更に詳しくは、グルコース、スクロース、でんぷん（有利には加水分解された
もの）、でんぷん加水分解産物、ラクトース、これらの糖の混合物、これらの糖
の少なくとも１種を含む混合物が挙げられる。グルコース及びスクロースが、更
に好ましい糖である。 発酵培地中の炭素源の濃度は、１〜１００ｇ／Ｌ、好ましくは１５〜６０ｇ／
Ｌであってよい。

【００３６】 有機窒素源としては、カゼイン及びカゼイン酸塩、魚の加水分解産物、小麦、
トウモロコシ又は大豆の粉末、酵母エキス（べーカーズ酵母、ビール酵母、乳酸
酵母など）、トウモロコシ浸漬液（ＣＳＬ）、尿素及びジャガイモ蛋白が挙げら
れる。 無機窒素源としては、硝酸アンモニウム若しくはナトリウム、燐酸アンモニウ
ム又は硫酸アンモニウムが挙げられる。 また、発酵は、有機窒素源と無機窒素源との混合物により行なうことができる
。 発酵培地中の窒素源濃度（有機、無機、又は両者の混合物）は、１〜８０ｇ／
Ｌ、好ましくは３〜５０ｇ／Ｌであってよい。

【００３７】 発酵培地は、有利に、カルシウムを単独で或いは、要すれば、鉄、マンガン及
び（又は）マグネシウムのようなその他の微量元素との混合物で、またビタミン
及びヌクレオチドも含む。 カルシウムは、培地中に、無機又は有機性である組成物又は化合物、例えばＣ
ＳＬ、大豆粉末、又は燐酸塩、硝酸塩、炭酸塩又は硫酸塩の形で導入することが
できる。

【００３８】 発酵は、１〜４バールの圧力下に２５℃〜３５℃、好ましくは２５℃〜３０℃
の温度で好気性条件下に実施することができる。 発酵培地のｐＨは５〜９、好ましくは６〜８であることができる。ｐＨは、要
すれば、水酸化ナトリウム、水酸化カリウム若しくはアンモニア水のような塩基
により、又は硫酸、燐酸、塩酸若しくは硝酸のような酸により調節することがで
きる。

【００３９】 発酵培地は、発酵タンク又は容器に入れて、遊離に撹拌に付することができる
。この撹拌は、例えば、往復振盪機、回転振盪機、撹拌スピンドル又は気泡カラ
ムを使用して実施することができる。発酵時間は、慣用的には３０時間よりも長
いが、一般に４０〜１００時間である。

【００４０】 発酵収率は、一般に、使用した炭素源に関して、４０重量％以上、好ましくは
５５〜７５重量％、最も好ましくは６０〜７５重量％のヘテロ多糖類（ＨＰ）を
生じる。 発酵後、ヘテロ多糖類（ＨＰ）は、発酵液から次の工程： （ｉ）発酵終了後の液を８０℃〜１２０℃でほぼ１０〜６０分間熱処理に付し、
（ii）ヘテロ多糖類（ＨＰ）を少なくとも部分的に水混和性の有機溶媒によって
沈殿させ、 （iii）ヘテロ多糖類（ＨＰ）を有機液体から分離する によって分離することができる。

【００４１】 工程（ｉ）において、ヘテロ多糖類（ＨＰ）を含有する発酵液は、８０℃〜１
２０℃の温度に１０〜６０分間、好ましくは１５〜４５分間有利に加熱される。 熱処理に付される発酵液は、有利には６〜８のｐＨを有する。 しかし、このｐＨは、必要ならば、塩基又は酸によって調節することができる
。 後者は、発酵培地のｐＨを調節するのに使用される上記の塩基又は酸から選択
できる。

【００４２】 本発明の好ましい別法の一つによれば、工程（ｉ）から得られた液は、熱処理
温度と同じ温度に保持される。 工程（ii）で、ヘテロ多糖類（ＨＰ）が工程（ｉ）で得られた液から、有利に
は、少なくとも部分的に水混和性であり且つヘテロ多糖類（ＨＰ）が不溶である
か又は実質的に不溶である有機液体を使用する沈殿によって、回収される。 本発明に従って好適である液体としては、アセトン又は１〜６個の炭素原子を
含有するアルコール、例えば、エタノール、プロパノール、イソプロパノール、
ブタノール、ｔ−ブタノール又はそれらの混合物が挙げられる。 特に、（ＨＰ）の沈殿は、イソプロパノールにより実施される。 使用される有機液体の容積は、一般に、処理しようとする液の容積の少なくと
も２倍である。

【００４３】 有機液体によるヘテロ多糖類（ＨＰ）の沈殿は、塩類、例えば、ナトリウム、
カリウム又はカルシウムの硫酸塩、塩化物又は燐酸塩の存在下に達成することが
できる。 特定の一具体例によれば、沈殿は、４０〜６０℃の温度で行なうことができる
。

【００４４】 ヘテロ多糖類（ＨＰ）は、沈殿したならば、次いで、工程（iii）で有機液体
から分離することができる。 分離方法は、それ自体重要ではなく、通常知られた分離方法、例えば、ろ過、
遠心分離又は吸引ろ過から任意に選択することができる。 得られた繊維は、例えば、アセトン又はエタノール、プロパノール若しくはイ
ソプロパノールのようなアルコールを使用して随意に脱水することができる。 この脱水操作を実施するのに必要なアルコールの重量は、一般に、処理しよう
とする繊維の重量の１〜１０倍である。 脱水された繊維は、更にろ過、遠心分離又は吸引ろ過操作を受けることができ
る。 適当ならば、繊維は、ヘテロ多糖類（ＨＰ）粉末を与えるようにろ過し、粉砕
し及び（又は）篩い分けすることができる。 一層純粋な粉末を得たいと望むならば、発酵液か又は上記の方法により得た粉
末から再構成された水溶液を１種以上の酵素を使用して処理することが可能であ
る。 この目的に好適である酵素としては、プロテアーゼ、ムタナーゼ、リポプロテ
アーゼ、セルラーゼ及びキチナーゼが挙げられる。 酵素による精製は、物理的な精製方法、例えば種々のろ過、遠心分離又は透析
法或いは種々のクロマトグラフィー技術と併用し或いはこれらで代えることがで
きる。

【００４５】 発酵液及びヘテロ多糖類（ＨＰ）の再構成溶液は、精製処理を受け又は受けず
に、濃縮することができる。 濃縮は、ある場合に、特に、輸送コストがそれにより削減できるときには、有
益である。更に、濃縮溶液は、ヘテロ多糖類（ＨＰ）粉末よりも更に迅速に使用
することができる。 濃縮は、当業者に知られた全ての技術、例えば蒸発、限外濾過又は透析ろ過に
より実施することができる。

【００４６】 本発明においては、ヘテロ多糖類（ＨＰ）は、繊維又は粉末型の固体の形態で
有利に存在する。 既に述べたように、（ＨＰ）は、非常に良好な流動学的性質、特に真のゲルを
形成する能力を有する。発酵条件、特に、培地中の成分やそれらの濃度に応じて
及び（又は）本方法の工程（ii）における沈殿条件（特に、沈殿が塩類の存在下
に起こるかどうか）に応じて、（ＨＰ）は、増粘剤として、ゲル化剤として又は
それらの両方として使用できるという利点を有する。

【００４７】 しかして、本発明は、前記した又は蒸気の方法により得られたヘテロ多糖類（
ＨＰ）を増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用することに関する。 例えば、（ＨＰ）は、石油、農薬、食品、化粧品、製紙及び繊維産業に、更に
、塗料、コンタクトレンズ、糊料、インキ及び住宅用又は産業用クリーナーにお
いて増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用することができる。

【００４８】 化粧品組成物に使用できる本発明のヘテロ多糖類（ＨＰ）の量は、増粘させ及
び（又は）ゲル化させようとする水性媒質に依存する。この量は、増粘され又は
ゲル化された水性媒質の重量のほぼ０．０１％〜５％、好ましくは０．１％〜０
．３％程度を占めよう。 用語“化粧品組成物又は処方物”とは、化粧品指令と称される１９７６年７月
２７日付けヨーロッパ指令Ｎｏ．７６／７６８／ＥＥＣの貼付物１（“化粧品の
カテゴリーによる例示リスト”）に記載されたタイプの化粧品又は製剤の全てを
意味するものとする。

【００４９】 化粧品組成物は、多数のタイプの皮膚及び（又は）毛髪用製品、例えばムース
、ジェル（特に、整髪用ジェル）、コンディショナー、毛髪を整え又は毛髪をす
くのを容易にさせるための処方物、リンス処方物、ハンドローション、ボデーロ
ーション、皮膚への加湿を調節させる製品、クレンジングミルク、メイキャップ
除去用組成物、日光及び紫外線保護のためのクリーム又はローション、ビューテ
ィクリーム、抗ニキビ製剤、局所用鎮痛剤、マスカラ、唇又はその他の粘膜に適
用するための製品、口紅、同様のタイプのその他の組成物に処方することができ
る。

【００５０】 これらの化粧品組成物は、ほぼ０．５％〜９９．５％、一般にほぼ５〜９０％
の濃度で該組成物中に存在するビヒクル又は２種以上のビヒクルの混合物を使用
する。 適切なビヒクルの選定は、使用された成分の種類及び該組成物の用途に依存し
、処方された製品が適用された表面に残っている（例えば、スプレー、ムース、
トニックローション又はジェル）か又は他方では使用後にすすぎ落とされる（例
えば、シャンプー、コンディショナー、リンスローションなど）かどうかに依存
する。

【００５１】 また、化粧品組成物中に存在する水性ビヒクルは、Ｃ₁〜Ｃ₆アルコール、特に
メタノール、エタノール及びイソプロパノールを含むことができる。また、該組
成物に使用された種々の成分を水性媒質中に可溶化させ又は分散させるのを可能
にさせる他の溶媒も含むことができる。 しかして、該ビヒクルは、広範な種類の他の溶媒、例えばアセトン、炭化水素
、ハロ炭化水素、リナロール、揮発性シリコーン及びエステル類も含むことがで
きる。水性ビヒクルに使用できる種々の溶媒は、それぞれ互いに混和性又は不混
和性であることができる。

【００５２】 化粧品組成物がスプレー、トニックローション、ジェル又はムースの形態にあ
るときは、好ましいビヒクルは、水以外に、エタノール、シリコーンの揮発性誘
導体及びそれらの混合物を含む。 エーロゾルスプレー及びムース用の処方物は、製品をムース又は微細な均一噴
霧の形態で発生させることができる発射剤も含むことができる。例えば、トリク
ロルフルオルメタン、ジクロルジフルオルメタン、ジフルオルエタン、ジメチル
エーテル、プロパン、ｎ−ブタン又はイソブタンが挙げられる。

【００５３】 該水性ビヒクルは、多くの形態、特に、水中油型エマルジョン、油中水型エマ
ルジョン及びマルチエマルジョンを含めてエマルジョンの形態を取ることができ
、その所望の粘度は２，０００，０００ｍＰａ・ｓまでであることができる。

【００５４】 化粧品組成物は、水性ビヒクル以外に、使用された種々の化合物を分散させ、
乳化させ、可溶化させ及び安定化させるのに、特に緩和性又は湿潤性を付与する
ために使用される界面活性剤を含むことができる。それらは、陰イオン性、非イ
オン性、陽イオン性、双性イオン性又は両性型のものであってよい。例えば、下
記のものが挙げられる。 ・３％〜５０％、好ましくは５％〜２０％の範囲である量での陰イオン性界面活
性剤、例えば、 アルキルスルホン酸エステル塩、 アルキル硫酸塩、 アルキルアミド硫酸塩、 飽和又は不飽和脂肪酸の塩類。 ・０．１％〜３０％、好ましくは２％〜１０％の範囲である量での非イオン性界
面活性剤、例えば、 ポリオキシアルキレン化アルキルフェノール、 グルコサミド、グルカミド、 Ｎ−アルキルアミンから誘導されるグリセリンアミド、 ポリオキシアルキレン化Ｃ₈〜Ｃ₂₂脂肪族アルコール、 プロピレンオキシドとプロピレングリコールとの縮合から生じる疎水性化合物
とエチレンオキシドとの縮合から生じる生成物、 アミンオキシド、 アルキルポリグリコシド及びそれらのポリオキシアルキレン化誘導体、 Ｃ₈〜Ｃ₂₀脂肪酸のアミド、 エトキシル化脂肪酸、 エトキシル化アミドアミン、アミン及びアミド。 ・０．１％〜３０％、好ましくは１％〜１０％の範囲である量での両性及び双性
イオン性界面活性剤、例えば、 ベタイン型のもの、例えば、ベタイン、スルホベタイン、アミドアルキルベタ
イン及びスルホベタイン、 アルキルスルタイン、 脂肪酸と蛋白質加水分解産物との縮合生成物、 ココアンフォ酢酸塩及びココアンフォ二酢酸塩、 アルキルアンフォ−プロピオン酸塩及び−ジプロピオン酸塩 アルキルポリアイミンの両性誘導体。

【００５５】 また、コンディショナーも０．０５％〜５％、好ましくは０．１％〜１％の範
囲である量で存在できる。これらのうちでは、ポリクォーターニウム、例えばポ
リクォーターニウム−２、−７及び−１０として周知の合成起源のもの、多糖類
の陽イオン性誘導体、例えばヒドロキシエチルココジモニウムセルロース、グア
ーヒドロキシプロピルトリモニウムクロリド、ヒドロキシプロピルグアーヒドロ
キシプロピルトリモニウムクロリド、シリコーンの不揮発性誘導体、例えばアモ
ジメチコーン、シクロメチコーン、非水溶性で不揮発性のオルガノポリシロキサ
ン、例えばシロキサンオイル、樹脂又はガム質、例えばジフェニルジメチコーン
ガムが挙げられる。

【００５６】 また、化粧品組成物は、固定機能を与えるように使用できる皮膜形成性の重合
体を含むこともきる。これらの重合体は、一般に０．０１〜１０％、好ましくは
０．５〜５％の濃度で存在する。それらは、好ましくはポリビニルピロリドン、
ポリビニルピロリドンとメタクリル酸メチルとの共重合体、ポリビニルピロリド
ンと酢酸ビニルとの共重合体、ポリエチレングリコールテレフタレート／ポリエ
チレングリコール共重合体及びスルホン化テレフタル酸コポリエステル重合体型
のものである。

【００５７】 また、化粧品組成物は、０．０１〜１０％程度、好ましくは０．１〜５重量％
の量で保護機能を果たす重合体物質を含むことができる。例えば、下記の誘導体
である。 セルロース誘導体、 ポリアルキレン主鎖にグラフト化したポリビニルエステル、 ポリビニルアルコール、 スルホン化テレフタル酸コポリエステル重合体、 エトキシル化モノアミン又はポリアミン、エトキシル化アミンの重合体。

【００５８】 また、化粧品組成物の性能は、可塑剤を、処方物の０．１〜２０％、好ましく
は１〜１５％の量で使用することによって改善することができる。これらの可塑
剤のうちでは、アジピン酸エステル、フタル酸エステル、イソフタル酸エステル
、アゼライン酸エステル、ステアリン酸エステル、シリコンコポリオール、グリ
コール類、ひまし油又はこれらの混合物が挙げられる。

【００５９】 また、これらの組成物に金属イオン封鎖剤、特に、カルシウムを封鎖するもの
、例えばくえん酸イオン又は重合体分散剤を０．１〜７重量％程度の量で添加し
てカルシウム及びマグネシウム硬度を制御することが可能である。例えば、下記
の封鎖剤である。 ポリカルボン酸の水溶性の塩類、 １，０００〜５０，０００程度の分子量のポリエチレングリコール。

【００６０】 また、化粧品組成物に湿潤剤を配合することが可能である。グリセリン、ソル
ビット、尿素、コラーゲン、ゼラチン、そして一般にアルキルモノグリセリド及
びアルキルジグリセリド、植物から抽出される油及び動物起源の油のようなトリ
グリセリド又はその水素化誘導体、鉱油又は液状パラフィン、ジオール類、脂肪
エステル及びシリコーンから選択される緩和剤が挙げられる。

【００６１】 これらの配合物には、無機粒子又は粉末、例えば、炭酸カルシウム、粉末状又
はコロイド状の無機酸化物、例えば二酸化チタン、シリカ、アルミニウム塩、カ
オリン、タルク、クレー及びそれらの誘導体を組合わせて添加することが可能で
ある。

【００６２】 一般に、１種以上の香料、着色剤及び（又は）顔料のような乳白剤がこれらの
成分に添加される。

【００６３】 皮膚及び（又は）毛髪を日光及び紫外線からの攻撃より保護するためには、こ
れらの処方物に、紫外線を強く吸収する化学物質か又は酸化亜鉛、二酸化チタン
若しくは酸化セリウムのような無機粒子のいずれかである日焼け止め剤を添加す
ることが可能である。

【００６４】 ｐ−ヒドロキシ安息香酸エステル、安息香酸ナトリウムのような保存剤、又は
細菌の増殖又若しくは黴の増殖を防止しかつ化粧品組成物に慣用されている任意
の薬剤がこれらの組成物に一般に０．０１〜３重量％の量で導入される。 水の活性を変性させ且つ浸透圧を大きく増大させる物質、例えば炭水化物又は
塩類を時として使用することができる。

【００６５】 また、化粧品組成物は、その他の粘度変性用及び（又は）ゲル化用重合体、例
えば、架橋ポリアクリル酸エステル、キサンタンガム及びレオザン（登録商標）
のような発酵により得られるヒドロコロイド、ヒドロキシプロピルセルロース又
はカルボキシメチルセルロースのようなセルロース誘導体、グアーガム及びその
誘導体などを単独で又は組合わせて含むことができる。

【００６６】 本発明は、特に、ヘテロ多糖類を食品処方物における増粘剤及び（又は）ゲル
化剤として使用することを提供する。 ヘテロ多糖類（ＨＰ）が添加される食品処方物は、慣例的に単純な又は複数の
液体のエマルジョン、複雑なガスと液体のエマルジョン、液体と固体の懸濁液（
膨張系）、又はこれらの可能性を併有する任意のその他の系である。 これらの処方物において、液体は有利には水であるか又は水を少なくとも一部
含む液体である。

【００６７】 食品処方物は、それらをそのタイプに従って製造するための慣用的方法を実行
することによって得られる。しかして、（ＨＰ）は、有利には繊維又は粉末型の
固体の形態で、処方物に要求されるその他の成分と混合される。混合物全体は適
当ならば均質化することができる。 処方物を製造する温度は、それ自体臨界的ではない。（ＨＰ）を含む処方物は
、それらの有用性を害することなく滅菌することができる。（ＨＰ）の他の利点
は、成分を予め加熱することなく食品処方物を製造することを可能にさせること
である。 （ＨＰ）は、食品処方物の多様性（ｐＨ、イオン強度、組成）にかかわらず相
溶性のままであり、その性質を実質的に留めている。

【００６８】 本発明の主題であるヘテロ多糖類（ＨＰ）と関連した有益な流動学的性質と、
このものが４０℃以下の温度で真のゲルを与え且つ広いｐＨ範囲内でそうのよう
にする能力とは、それが単独で又は他の添加剤と組み合わせて使用される処方物
に、該添加剤を専ら含む処方物の感触に近い感触を付与することを可能にさせる
。

【００６９】 食品処方物の感触又は口当たりを特徴づけるための測定できるパラメーターは
、その性質上流動学的であり、弾性モジュラス（Ｇ’）及び粘性モジュラス（Ｇ
”）並びに所定の剪断速度での流れ粘度を測定することから本質的になる。Ｇ’
及びＧ”並びに粘度は上で定義した。 これらの流動学的特徴の目的は、処方物を互いに比較するためにそれらの粘弾
性及び（又は）擬塑性的挙動を立証することである。

【００７０】 （ＨＰ）は、有利には繊維又は粉末型の固体の形態で、それを含む処方物に剪
断減粘性プロフィルを付与する能力を有する。 また、同様に、（ＨＰ）は、機械的応力の適用後に自己回復できる真のゲルを
与える能力を有する。

【００７１】 処方物のために測定されたＧ’及びＧ”モジュラス並びに粘度は、蒸留水中の
（ＨＰ）について測定されたものとは異なることがあることに留意すべきある。

【００７２】 ミルクをベースにしゲル化したデザート、例えばフランにおいては、通常のゲ
ル化剤、特にゼラチンを少なくとも部分的に（ＨＰ）で有利に置き換えることが
可能である。 ヴィネグレットのような塩気のある酸性媒質においては、存在する水性媒質は
、少量の（Ｐ）を添加することによって構成することができる。 製菓業の分野、特にＨＡＲＩＢＯ（登録商標）型のゼリーキャンディでは、例
えばゼラチンのようなゲル化剤を少なくとも部分的に（ＨＰ）で有利に置き換え
ることが可能である。

【００７３】 高いイオン強度の媒質、特に豚肉製品においては、（ＨＰ）は、表面感触、特
に例えばソーセージの弾性外観を強化させるためにカラジーナンに添加すること
ができる。 シャンティイークリーム、トッピング又はアイスクリームのような膨張させる
処方物においては、（ＨＰ）は増粘剤及び（又は）ゲル化剤として使用すること
ができる。 同様に、（ＨＰ）は、マヨネーズ、野菜ムース又は蛋白質を含有するムース、
例えばミート又はフィッシュムース、又はアルブミンを含有するムース、例えば
メレンゲに使用することができる。 増粘剤及び（又は）ゲル化剤として、（ＨＰ）はヨーグルトの組成の一部であ
ることができる。

【００７４】 上記した食品処方物においては、一般に、ヘテロ多糖類を含む組成物又は処方
物の重量に関して０．０１〜５重量％、好ましくは０．５〜２重量％のヘテロ多
糖類（ＨＰ）が使用される。更に好ましくは、組成物又は処方物の重量に対して
０．１〜１重量％のヘテロ多糖類（ＨＰ）が使用される。

【００７５】 ヘテロ多糖類（ＨＰ）は、これが導入される食品の味覚を何ら変化させないこ
とに留意すべきである。 本発明は、最後に、上で定義したようなヘテロ多糖類（ＨＰ）を含む食品組成
物又は処方物を提供する。

【００７６】 以下の実施例は、本発明を例示するものであって、それを限定するものではな
い。 実施例例１ この例は、シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） ｓｐ Ｉ−２０５４
（又はＤＳＭ １２２９５）の純粋培養並びにこの菌株を保存する条件を説明す
る。シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２２９５）の純粋培養 シュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ） ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳ
Ｍ １２２９５）菌株を保持するための培地は、Ｄｉｆｃｏ ＭＹ寒天培地（参
照番号０７１２−０１−８）である。既に作ってあるこの培地の組成は以下の通
りである。 バクト酵母エキス ３ｇ 麦芽エキス ３ｇ バクトペプトン ５ｇ バクトデキストロース １０ｇ バクト寒天 ２０ｇ この培地の２１ｇを１Ｌの蒸留水により希釈する。溶解後に、培地をオートク
レーブで１２１℃で１５分間滅菌する。次いで、培地をペトリ皿に分配する。 ２５℃〜３０℃、好ましくは２５℃〜２８℃で最低２４時間温置したペトリ皿
で培養を実施する。

【００７７】予備培養−保存 次いで、菌株を液体窒素冷凍法（ＬＮＦ）により−１９６℃で冷凍した試験管
の形で保存する。 液体窒素冷凍（ＬＮＦ）のために、以下の組成を有するＰＹＧ１０培地上で予
備培養物を調製する。 麦芽エキス ３ｇ（オキソイド社から得た） 酵母エキス ３ｇ（オキソイド社製） 大豆ペプトン ５ｇ（オキソイド社製） グルコース １０ｇ（プロラボ社から得た） ミネラルウオーター １Ｌとするのに要する量 培地を調製するために、成分の全部をミネラルウオーターに分散させる。ｐＨ
を１０％Ｈ₂ＳＯ₄により６．５に調節する。この培地をオートクレーブで１２０
℃で２０分間滅菌する。 ２２０ｒｐｍで振幅＝５０ｍｍの回転振盪機上で２８℃で２４時間温置した後
、１０容量％の純粋無菌グリセリンを培養物に添加する。次いで、この培養物を
１ｍＬ〜１０ｍＬ、好ましくは２ｍＬ〜４ｍＬの範囲の容量を持つ低温試験管に
分配する。 これらの試験管を液体窒素中に保存する。

【００７８】例２ この例は、二つの発酵方法、即ち、一つは有機窒素源、他方は無機窒素源によ
るヘテロ多糖類の製造及び産生を説明する。 この例には、二つの“予備培養”工程が含まれる。これらの工程は５００ｍＬ
の丸底フラスコにおいて行なわれ、これは１００ｍＬの培地に相当する。 産生工程は、菌株が多糖類を産生させる工程に相当し、１５Ｌの有効容量を有
する２０Ｌの発酵器で行なわれる。 回転振盪機の撹拌条件は、速度＝２２０ｒｐｍ及び振幅＝５０ｍｍである。

【００７９】予備培養工程１ ： 予備培養工程１を下記の組成のＰＹＧ１０培地で実施する。 麦芽エキス ３ｇ（オキソイド社製） 酵母エキス ３ｇ（オキソイド社製） バクトペプトン ５ｇ（オキソイド社製） グルコース １０ｇ（プロラボ社製） 蒸留水 １Ｌとするのに要する量 成分の全部を１Ｌとするのに十分なの量の蒸留水に分散させる。滅菌前に、ｐ
Ｈを１０％Ｈ₂ＳＯ₄により６．５に調節する。培地をオートクレーブで１２０℃
で２０分間滅菌する。 滅菌後及び低温試験管（ｑｓ）による接種前のｐＨは７．３３である。 各丸底フラスコに十分な量のＬＮＦにより接種する。 回転振盪機（２２０ｒｐｍ、Ａ＝５０ｍｍ）上で２８℃で２４時間温置した後
、培地は下記の特性を有する。 ｐＨ＝６．５０、 粘度＜１０ｍＰａ・ｓ、 ＭＹ寒天（Ｄｉｆｃｏ培地、参照番号０７１２−０１−８）上で２８℃で７２
時間後に読んだ集団＝１．７×１０⁵ｃｆｕ／ｍＬ。 ２４時間温置した後に、予備培養物１を使用して予備培養物２に接種する。

【００８０】予備培養工程２ ： 予備培養工程２を下記の組成を有する培地で実施する。 酵母エキス ４ｇ（オキソイド社製） ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．８ｇ（プロラボ社製） ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．０１ｇ（プロラボ社製） ＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ ５ｐｐｍＭｎ²⁺（プロラボ社製） Ｋ₂ＨＰＯ₄ ４ｇ（プロラボ社製） 又はＮａ₂ＨＰＯ₄ ３ｇ（プロラボ社製） グルコース １０ｇ（プロラボ社製） 脱イオン水 １Ｌとするのに要する量 １００ｇ／Ｌのグルコース溶液を蒸留水で調製し、次いで中性ｐＨで１２１℃
で１５分間滅菌する。 成分の残余を９００ｍＬとするのに十分な量の脱イオン水に分散させ、次いで
ｐＨ６．８に調節してから１２１℃で１５分間滅菌する。 滅菌後、各丸底フラスコに１０ｍＬのグルコース溶液を添加する。 滅菌後及び接種前のｐＨは６．８８である。 各丸底フラスコに予備培養物１を十分な量で接種する。 回転振盪機（２２０ｒｐｍ、Ａ＝５０ｍｍ）上で２８℃で２４時間温置した後
、培地は下記の特性を有する。 ｐＨ＝６．８２、 粘度＝５０〜１００ｍＰａ・ｓ、 ＭＹ寒天（Ｄｉｆｃｏ培地、参照番号０７１２−０１−８）上で２８℃で７２
時間後に読んだ集団＝１．６×１０⁹ｃｆｕ／ｍＬ。 ２４時間温置した後に、産生工程において予備培養物２を使用して二つの発酵
培地（発酵器１及び２）に接種する。

【００８１】産生工程 ： 最終工程は、ヘテロ多糖類（ＨＰ）の産生工程である。 発酵器１の培地は、下記の組成を有する。 グルコース ２０ｇ（プロラボ社製） ＣＳＬ（コーン浸漬液） ６ｇ（プロラボ社製） ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．８ｇ（プロラボ社製） ＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ ５ｐｐｍＭｎ²⁺（プロラボ社製） Ｋ₂ＨＰＯ₄ １ｇ（プロラボ社製） 消泡剤 ０．２ｍＬ 脱イオン水 １Ｌとするのに要する量 グルコース→ 十分なｇ数のグルコースを３Ｌとするのに十分な量の脱イオン
水に溶解する。ｐＨを１０％Ｈ₂ＳＯ₄により５まで低下させる。この溶液をオー
トクレーブでマリオッテフラスコ中で１２０℃で３０分間滅菌する。 窒素＋塩類→ 十分なｇ数のコーン浸漬液（ＣＳＬ）、１５ｇのＫ₂ＨＰＯ₄、
１２ｇのＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ、２３ｍＬのＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ溶液（１０ｇ／Ｌ）
及び３ｍＬの消泡剤を７Ｌとするのに十分な量の脱イオン水に溶解する。ｐＨを
１０％Ｈ₂ＳＯ₄により６．５まで低下させる。この溶液をその場で１２０℃で３
０分間滅菌する。 １Ｎ水酸化ナトリウム→ ４０ｇのＮａＯＨペレットを１Ｌとするのに十分な
量の蒸留水に溶解する。この溶液をオートクレーブにおいてマリオッテフラスコ
で１２０℃で３０分間滅菌する。 全ての成分が２８℃にあるときに、それらを発酵器において混合する。次いで
、発酵器に十分な量の予備培養物２を接種する。 発酵器１における発酵条件は、下記の通りである。 撹拌→ ０〜２０時間は２００ｒｐｍ、次いで発酵の終了までは４００ｒｐｍ
。 曝気→ ０〜１８時間は４００Ｌ／時間、次いで２４時間から発酵の終了まで
は８２５Ｌ／時間。 温度は２８℃に調節する。 ｐＨは１ＮのＮａＯＨにより６．８に調節する。 圧力は大気圧である。

【００８２】 発酵器２の培地は下記の組成を有する。 ＮａＮＯ₃ １．２ｇ（プロラボ社製） ＮＨ₄ＮＯ₃ ０．２５ｇ（プロラボ社製） ＣａＳＯ₄・２Ｈ₂Ｏ ０．３ｇ（プロラボ社製） ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．８ｇ（プロラボ社製） ＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ ５ｐｐｍＭｎ²⁺（プロラボ社製） ＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ ０．０１ｇ（プロラボ社製） Ｎａ₂ＨＰＯ₄ ３ｇ（プロラボ社製） グルコース ４５ｇ（プロラボ社製） 消泡剤 ０．２ｍｌ 脱塩水 １Ｌとするのに要する量 グルコース→ 十分なｇ数のグルコースを３Ｌとするのに十分な量の脱イオン
水に溶解する。ｐＨを１０％Ｈ₂ＳＯ₄により５に調節する。この溶液をオートク
レーブでマリオッテフラスコ中で１２０℃で３０分間滅菌する。 窒素＋塩類→ １８ｇのＮａＮＯ₃、３．７５ｇのＮＨ₄ＮＯ₃、４．５ｇのＣ
ａＳＯ₄・２Ｈ₂Ｏ、２３ｍＬのＭｎＳＯ₄・Ｈ₂Ｏ溶液（１０ｇ／Ｌ）、１２ｇの
ＭｇＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ、７５ｍＬのＦｅＳＯ₄・７Ｈ₂Ｏ溶液（２ｇ／Ｌ）、４．５
ｇのＮａ₂ＨＰＯ₄及び３ｍＬの消泡剤を７Ｌとするのに十分な量の脱イオン水に
溶解する。ｐＨを１０％Ｈ₂ＳＯ₄により６に調節する。この混合物をその場で１
２０℃で３０分間滅菌する。 １Ｎ水酸化ナトリウム→ ４０ｇのＮａＯＨペレットを１Ｌとするのに十分な
量の蒸留水に溶解する。この溶液をオートクレーブにおいてマリオッテフラスコ
で１２０℃で３０分間滅菌する。 全ての成分が２８℃にあるときに、それらを発酵器で混合する。次いで、発酵
器に十分な量の予備培養物２を接種する。 発酵器２における発酵条件は、下記の通りである。 撹拌→ ０〜２０時間は２００ｒｐｍ、次いで発酵の終了までは４００ｒｐｍ
。 曝気→ ０〜２４時間は４００Ｌ／時間、次いで２４時間から発酵の終了まで
は８２５Ｌ／時間。 温度は２８℃に調節する。 ｐＨは１ＮのＮａＯＨにより６．８に調節する。 圧力は大気圧である。

【００８３】発酵結果 ： 研究した培地によるが、発酵時間は６０〜１１５時間であり、イソプロパノー
ルにより沈殿し得る固体は１０〜１８ｇ／ｋｇの範囲にあり、使用した炭素源に
関しての重量収率は４４〜７０％である。

【００８４】抽出及び精製 ： 発酵終了後の液を１０％（重量／重量）の純ＩＰＡにより安定化させる。次い
で、これをｐＨ７で１００〜１１０℃で２０分間熱処理する。熱処理中のｐＨは
変わらない。 熱処理から出たならば、液を熱い（温度＞７０℃）内に抽出する。 沈殿条件は、４．５ｋｇの純ＩＰＡ中で１７ｋｇの熱い液（ほぼ５０℃）であ
る。 沈殿させた後、繊維を切断し、次いで洗浄し、７０％の純度を有するＩＰＡに
より脱水する。 次いで、繊維を換気オーブンにおいてほぼ８５℃で、ほぼ１０重量％の水分を
有する生成物が得られるまで、乾燥する。 次いで、繊維を粉砕し、篩い分けする。

【００８５】 発酵器１の培地（有機培地）で得られたヘテロ多糖類の単位の分析はモル割合
（重量％）で下記の通りである。 ガラクトース １（１３％） グルコース １．０８（１４％） マンヌロン酸 １．１（１７％） 酢酸 ４．３（１８．６％） 発酵器２の培地（無機培地）で得られたヘテロ多糖類の単位の分析はモル割合
（重量％）で下記の通りである。 ガラクトース （２２．５％） グルコース （２１．７％） マンヌロン酸 （２６％） 酢酸 （３１％）

【００８６】例３ この例の主題は、例２で得られた（ＨＰ）をトッピング用食品処方物に使用す
ることである。 下記の例において、流れ粘度（ｍＰＡ・ｓで表わす）をブルックフィールドＲ
ＶＴ２０−２粘度計を室温で使用して測定した。 ＣＡＲＲＩＭＥＤ ＣＳＬ１００の制御された応力流動計を使用して、弾性モ
ジュラス（Ｐａで表わす）値を生じさせた。これらは振動装置系で０．０１〜１
０Ｈｚの周波数で測定された。 膨張度（％で表わす）の測定は下記のように実施した。 ・ムースを既知の容積（Ｖ）及び既知の重量のビーカーに導入し、ビーカーを３
回強くたたき、ムースの高さを測る。 ・ビーカーを秤量して中に入っているムースの重量（Ｍ）を決定する。 ・膨張度＝［Ｍ（ｇ）／Ｖ（ｍＬ）］×１００。 二つの処方物を調製した。 処方物３．１：本発明に従うヘテロ多糖類（ＨＰ）を含む。 処方物３．２（比較）：カゼイン酸ナトリウム及びアルギン酸ナトリウムを含む
。 これらの処方物の組成を表Ｉに要約する。

【００８７】

【表１】

【００８８】水性相 ： デフロキュレーション用パドルを備えたビーカーに必要量の水を秤量し、上記
の表に記載した粉末の混合物を激しく撹拌（５００ｒｐｍ）しながら分散させる
。 撹拌は、該粉末を導入した後、５分間維持する。

【００８９】油性相 ： ビーカーに入れた脂肪物質及び乳化剤を水浴において７０℃に加熱する。 次いで、油性相を水性相に１０００ｒｐｍで撹拌しながら添加する。 撹拌は、油性相を導入した後、５分間維持する。この操作の間、水の蒸発を補
う。 次いで、混合物全体をＵｌｔｒａ−Ｔｕｒｒａｘを使用して２０，０００ｒｐ
ｍで２分間均質化する。 この混合物を１０℃以下の温度に冷却してから、膨張させる。これは、ＫＥＮ
ＷＯＯＤ ＣＨＥＦ型の実験室用ミキサーを使用して、最高速度で５℃付近の温
度で３分間行なう。 結果を表IIに要約する。

【００９０】

【表２】

【００９１】 これらの結果は、本発明に従う（ＨＰ）を使用する処方物３．１が比較処方物
３．２の粘度よりも低い粘度を有し、その故に容易に膨張することを示す。 更に、処方物３．１（本発明に従う）は、最初に多くゲル化し（高い周波数で
高いＧ’）、従って向上した膨張度を有する。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） //(Ｃ１２Ｎ 1/20 Ａ２３Ｌ 1/04 Ｃ１２Ｒ 1:38） (Ｃ１２Ｐ 19/04 Ｃ１２Ｒ 1:38） (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＧ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ， ＡＺ，ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，Ｃ Ｎ，ＣＲ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＤＺ，ＥＥ ，ＥＳ，ＦＩ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ， ＨＵ，ＩＤ，ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，Ｋ Ｐ，ＫＲ，ＫＺ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ ，ＬＶ，ＭＡ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ， ＮＯ，ＮＺ，ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，Ｓ Ｇ，ＳＩ，ＳＫ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ ，ＵＡ，ＵＧ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ポール シェヴァレルー フランス国 エフ79500 メル、リュ エ ルワ リカール (72)発明者 ジャンリュック シモン フランス国 エフ79500 メル、ルート ド リモ−ジュ、４ (72)発明者 ロベール カンティアニ フランス国 エフ60996 リヨン、リュ モリエール、７ Ｆターム(参考） 4B041 LC03 LD01 LH16 LK08 LK42 LP15 4B064 AF17 BA13 BA14 BA15 CA02 CE04 DA10 DA16 4B065 AA41X AC14 BA22 BD14 BD22 CA22 CA41 4C090 AA01 AA04 AA08 BA61 BA64 BB12 BB13 BB23 BC20 CA42 DA03

Claims (22)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 少なくとも１種のシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
   ） ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２２９５）菌株、その組換え型の一つ
   又はその変異体の一つと、該菌株、その組換え型の一つ又は変異体の一つにより
   同化できる炭素源とを含む培地を発酵させることによって得ることができること
   を特徴とするヘテロ多糖類（ＨＰ）。
2. 【請求項２】 グルコース、ガラクトース及び（又は）それらの誘導体、マ
   ンヌロン酸、酢酸及び（又は）それらの塩類の単位を含むことを特徴とする請求
   項１に記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
3. 【請求項３】 該単位を、参照物としてのガラクトースを１に等しいものと
   して、次のモル割合： ・グルコース及び（又は）その誘導体：０．２〜５、 ・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．２〜５、 ・酢酸及び（又は）その塩類：０〜１０ で含むことを特徴とする請求項１又は２に記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
4. 【請求項４】 該単位を、参照物としてのガラクトースを１に等しいものと
   して、次のモル割合： ・グルコース及び（又は）その誘導体：０．５〜４、好ましくは０．８〜２、 ・マンヌロン酸及び（又は）その塩類：０．５〜４、好ましくは０．８〜２、 ・酢酸及び（又は）その塩類：０〜８、好ましくは０〜６ で含むことを特徴とする請求項１〜３のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）
   。
5. 【請求項５】 マンヌロン酸及び酢酸が塩の形で存在することを特徴とする
   請求項１〜４のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
6. 【請求項６】 １×１０⁵〜８×１０⁶ｇ／モル、好ましくはほぼ８×１０⁵
   〜５×１０⁶ｇ／モルの重量平均分子量（Ｍｗ）を有することを特徴とする請求
   項１〜５のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
7. 【請求項７】 ほぼ２．５×１０⁶〜４×１０⁶ｇ／モルの重量平均分子量（
   Ｍｗ）を有することを特徴とする請求項１〜６のいずれかに記載のヘテロ多糖類
   （ＨＰ）。
8. 【請求項８】 該ヘテロ多糖類（ＨＰ）を蒸留水に溶解してなる０．５％重
   量／重量溶液が２３℃及び１Ｈｚの周波数で０．１〜２００ＰａのＧ’値及び０
   ．１〜２０ＰａのＧ”値を与えることを特徴とする請求項１〜７のいずれかに記
   載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
9. 【請求項９】 該ヘテロ多糖類（ＨＰ）を蒸留水に溶解してなる０．５％重
   量／重量溶液が２３℃及び１Ｈｚの周波数で２０〜２００ＰａのＧ’値及び０．
   ５〜１５ＰａのＧ”値を示すことを特徴とする請求項１〜８のいずれかに記載の
   ヘテロ多糖類（ＨＰ）。
10. 【請求項１０】 該（ＨＰ）を０．５％重量／重量のＮａＣｌを含有する１
    ％重量／重量溶液が２３℃で０．１ｓ^-1の剪断速度で１００〜５０００Ｐａ・ｓ
    、特に２００〜２０００Ｐａ・ｓの流れ粘度値を示すことを特徴とする請求項１
    〜９のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
11. 【請求項１１】 該（ＨＰ）を０．５％重量／重量のＮａＣｌを含有する１
    ％重量／重量溶液が２３℃で１０ｓ^-1の剪断速度で０．５〜３００Ｐａ・ｓ、特
    に５〜１５０Ｐａ・ｓの流れ粘度値を示すことを特徴とする請求項１〜１０のい
    ずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）。
12. 【請求項１２】 ヘテロ多糖類（ＨＰ）が発酵液から次の工程： （ｉ）発酵終了後の液を８０℃〜１２０℃でほぼ１０〜６０分間熱処理に付し、
    （ii）ヘテロ多糖類（ＨＰ）を少なくとも部分的に水混和性の有機溶媒によって
    沈殿させ、 （iii）ヘテロ多糖類（ＨＰ）を有機液体から分離する によって分離される請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）を
    製造する方法。
13. 【請求項１３】 工程（ｉ）において、熱処理に付される液が６〜８のｐＨ
    を有することを特徴とする請求項１２に記載の方法。
14. 【請求項１４】 工程（Ｉ）から得られた液が熱処理の温度と同じ温度に保
    持されることを特徴とする請求項１２又は１３に記載の方法。
15. 【請求項１５】 工程（ii）において、有機液体によるヘテロ多糖類（ＨＰ
    ）の沈殿がナトリウム、カリウム又はカルシウムの硫酸塩、塩化物又は燐酸塩の
    ような塩類の存在下に達成されることを特徴とする請求項１２〜１４のいずれか
    に記載の方法。
16. 【請求項１６】 工程（ii）において、沈殿が４０〜６０℃の温度で行なわ
    れることを特徴とする請求項１２〜１５のいずれかに記載の方法。
17. 【請求項１７】 ＣＮＣＭに番号Ｉ−２０５４として、またＤＳＭＺに番号
    ＤＳＭ １２２９５として寄託されたシュードモナス（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ
    ） ｓｐ菌株。
18. 【請求項１８】 シュードモナス ｓｐ Ｉ−２０５４（又はＤＳＭ １２
    ２９５）の純粋培養物。
19. 【請求項１９】 請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）
    よりなる増粘剤及び（又は）ゲル化剤。
20. 【請求項２０】 食品組成物又は処方物の重量に対して０．０１〜５重量％
    、好ましくは０．０５〜２重量％の請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多
    糖類（ＨＰ）の量で使用される食品処方物用の増粘剤及び（又は）ゲル化剤。
21. 【請求項２１】 請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）
    よりなる、培地に追加の陽イオンを添加することなくゲルを与えるためのゲル化
    剤。
22. 【請求項２２】 請求項１〜１１のいずれかに記載のヘテロ多糖類（ＨＰ）
    を含む組成物又は処方物。