JP2002537353A - ＣＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを用いるＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原殺菌活性の増強 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 以下：（ａ）Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原（好ましくはＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ 血清型Ｂ）；および（ｂ）免疫を刺激する量の、少なくとも１つのＣＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含むアジュバント組成物、を含む免疫原性組成物（例えば、ワクチン）が、提供される。成分（ａ）は、種々の抗原から選択され得る。少なくとも１つのＣＧモチーフを有するオリゴヌクレオチドを含むアジュバント組成物、および完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）もまた、地峡される。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】 本明細書中に引用されるすべての文書は、その全体が参考として本明細書によ
り援用される。

【０００２】 （技術分野） 本発明は、一般には免疫応答の分野に関し、そして詳細には、Ｎｅｉｓｓｅｒ
ｉａ抗原およびＣＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む、治療投与および
予防投与のための免疫原性組成物に関する。

【０００３】 （背景技術） Ｎｅｉｓｓｅｒｉａは、グラム陰性球菌であり、直径０．６〜１．０μｍであ
る。以下の２種のＮｅｉｓｓｅｒｉａ：Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅ（淋病の原
因因子）およびＮ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（細菌性髄膜炎の原因因子）が、
主に医学的に重要である。ヒトは、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ属のメンバーの唯一公知
の貯蔵庫（ｒｅｓｅｒｖｏｉｒ）である。Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓまたは
Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに対するワクチンが有効であるために、補体の存在
下でその細菌を殺傷し得る殺菌性抗体が惹起されなければならないことが、十分
認識される。例えば、髄膜炎菌Ｂ株に対する現在のワクチン処方物は、多糖類お
よび外膜タンパク質に焦点を合わせている。この外膜タンパク質は、株間で交差
反応性がほとんどないかまたは全くない、非常に変わりやすいタンパク質である
。さらに、淋菌株についてのワクチンは現在存在しない。従って、Ｎｅｉｓｓｅ
ｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏａｅおよびＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉ
ｄｉｓの両方についての改良された免疫原性組成物（これらは、ワクチン組成物
において使用され得る）が、非常に所望される。さらに、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔ
ｉｄｉｓおよびＮ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに対する抗殺菌性応答を惹起し得る
アジュバントを含む、免疫原性組成物もまた、非常に所望される。

【０００４】 アジュバントとは、抗原に対する免疫応答を増強し得る化合物である。アジュ
バントは、体液性免疫および細胞性免疫の両方を増強し得る。しかし、特定の病
原体について、細胞性免疫、実際にはＴ細胞を刺激することが、好ましい。現在
使用されるアジュバントは、Ｔ細胞応答を十分には誘導せず、そして／または有
害な副作用を有する。

【０００５】 現在、米国においてヒトでの使用を認可されている唯一のアジュバントは、ア
ルミニウム塩（ミョウバン）である。これらのアジュバントは、Ｂ型肝炎、ジフ
テリア、ポリオ、狂犬病、およびインフルエンザを含むいくつかのワクチンに有
用であるが、その他のワクチンには、特に、細胞媒介性免疫の刺激が防御に必要
な場合に、有用ではないかもしれない。例えば、報告によると、ミョウバンが百
日咳ワクチンおよび腸チフスワクチンの有効性を改良しなかったこと、およびア
デノウイルスワクチンとともにはわずかな効果しか提供しなかったことが、示さ
れる。さらに、注射部位での肉芽腫の誘導およびミョウバン調製物のロット間で
の変動のような問題が、経験されている。

【０００６】 完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）は、実験的根拠に基づいて、特に動物
研究のために、多くの抗原とともに首尾良く用いられている、強力な免疫刺激剤
である。ＣＦＡは、以下の３つの成分：鉱物油、乳化剤（例えば、Ａｒｌａｃｅ
ｌ Ａ）および殺傷されたミコバクテリア（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉｕ
ｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）、から構成される。水性抗原溶液が、これらの
成分と混合されて、油中水エマルジョンが生成される。しかし、ＣＦＡは、重篤
な副作用（痛み、膿瘍、および熱を含む）を引き起こし、これら副作用により、
ヒトワクチンまたは脊椎動物ワクチンのいずれかにおけるＣＦＡの使用が、妨げ
られる。これらの副作用は、主に、ＣＦＡのミコバクテリア成分に対する宿主の
反応に起因する。不完全フロイントアジュバント（ＩＦＡ）は、この細菌成分を
含まないＣＦＡと類似する。米国における使用は未だに認可されていないが、Ｉ
ＦＡは、他の国において、いくつかの型のワクチンに有用である。ＩＦＡは、イ
ンフルエンザワクチンおよびポリオワクチンとともにヒトにおいて、そしていく
つかの動物ワクチン（狂犬病、イヌジステンバー、および口蹄疫を含む）ととも
に、首尾良く使用されている。しかし、ＩＦＡにおいて使用される油および乳化
剤の両方が、マウスにおいて腫瘍を引き起こし得るという実験が示された。この
ことは、代替のアジュバントが、ヒトでの使用のためにより良い選択であること
を示す。

【０００７】 ムラミルジペプチド（ＭＤＰ）は、ＣＦＡとともに観察されたアジュバント活
性を生じる、ミコバクテリア細胞壁複合体の最小単位を示す。Ｅｌｌｏｕｚら、
Ｂｉｏｃｈｅｍ．Ｂｉｏｐｈｙｓ．Ｒｅｓ．Ｃｏｍｍ．１９７４、５９、１３１
７。広範なアジュバント能力および副作用を示す、ＭＤＰの多くの合成アナログ
が生成されている。Ｃｈｅｄｉｄら、Ｐｒｏｇ．Ａｌｌｅｒｇｙ、１９７８、２
５、６３。ＭＤＰの３つのアナログ−−ＭＤＰのスレオニル誘導体（Ｂｙａｒｓ
ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９８７、５，２２３）；ＭＤＰのｎ−ブチル誘導体（Ｃ
ｈｅｄｉｄら、Ｉｎｆｅｃｔ．Ｉｍｍｕｎ．１９８２、３５、４１７）；および
ムラミルトリペプチドの脂肪親和性誘導体（Ｇｉｓｌｅｒら、Ｉｍｍｕｎｏｍｏ
ｄｕｌａｔｉｏｎｓ ｏｆ Ｍｉｃｒｏｂｉａｌ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ ａｎｄ
Ｒｅｌａｔｅｄ Ｓｙｎｔｈｅｔｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ、Ｙ．Ｙａｍａｍｕ
ｒａおよびＳ．Ｋｏｔａｎｉ編、Ｅｘｃｅｒｐｔａ Ｍｅｄｉｃａ、Ａｍｓｔｅ
ｒｄａｍ、１６７頁）−−が、体液媒介性免疫および細胞媒介性免疫を刺激し、
そして低レベルの毒性を示すことが示されている。ＭＤＰの別の誘導体（Ｎ−ア
セチルムラミル−Ｌ−アラニル−Ｄ−イソグルタミニル−Ｌ−アラニン−２−［
１，２−ジパルミトイル−ｓｎ−グリセロ−３−３（ヒドロキシホスホリル−オ
キシ）］エチルアミド（ＭＴＰ−ＰＥ））は、脂肪親和性である。ＭＴＰ−ＰＥ
は、リン脂質テールを有し、このテールが、脂質環境とその分子の疎水性部分の
会合を可能にしつつ、そのムラミルペプチド部分が、水性環境と会合する。従っ
て、ＭＴＰ−ＰＥ自体は、安定な水中油エマルジョンを生じるための乳化剤とし
て作用し得る。

【０００８】 レバミゾールおよびイソプリノシンは、宿主免疫を増加する他の合成アジュバ
ントである。レバミゾールは、テトラミゾールの左旋性異性体であり、そしてＴ
細胞依存性機構を介して、体液性免疫および細胞性免疫を増強する。イソプリノ
シンは、イノシン、アデノシンのプリン前駆体およびグアノシンを含む複合体で
あり、Ｔ細胞有糸分裂誘発を促進する。ツフシンは、免疫グロブリン（Ｉｇ）重
鎖中の配列と相同な４アミノ酸ペプチド（Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ）で
あり、主に、マクロファージを刺激する。

【０００９】 生分解性および生体適合性ポリマーから調製された微粒子は、ポリ（ラクチド
−グリコシド共重合体）（ＰＬＧ）として公知であり、多数の抗原についての有
効なアジュバントであることが示されている。さらに、ＰＬＧ微粒子は、捕捉さ
れた抗原の放出速度を制御し得、従って、単一用量ワクチンの可能性を与える。
さらに、捕捉された抗原との生分解性ポリマーの投与は、強力な免疫応答を誘導
することが、一定範囲の動物モデルにて示されている。Ｏ’Ｈａｇａｎら、Ａｄ
ｃａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．１９９８、３２、２２５〜２４
６およびＳｉｎｇｈら、Ａｄｖａｎｃｅｄ Ｄｒｕｇ Ｄｅｌｉｖ．Ｒｅｖ．１
９９８、３４、２８５〜３０４。

【００１０】 均一なサイズの微小液滴を提供するようにミクロな流体にされた、スクアレン
、ソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ８３^TM）、およびポリソルビタン８０（
Ｔｗｅｅｎ ８０^TM）を含むエマルジョン（すなわち、ＭＦ５９）もまた、強力
な免疫応答を誘導することが示されている。ＭＦ５９処方物は、アルミニウム塩
アジュバントとともに得られる抗体力価よりも５〜１００倍大きい抗体力価を誘
導することが示されている。ＭＦ５９は、多数の供給源（例えば、単純ヘルペス
ウイルス（ＨＳＶ）、ヒト免疫不全ウイルス（ＨＩＶ）、インフルエンザウイル
ス、Ｃ型肝炎ウイルス（ＨＣＶ）、サイトメガロウイルス（ＣＭＶ）、Ｂ型肝炎
ウイルス（ＨＢＶ）、ヒトパピローマウイルス（ＨＰＶ）およびマラリアを含む
）由来の抗原に対する免疫応答を増強することが示されている。Ｏｔｔら、Ｖａ
ｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ Ａｎｄ Ａｄｊｕｖａｎ
ｔ Ａｐｐｒｏａｃｈ、１９９５、Ｍ．Ｆ．ＰｏｗｅｌｌおよびＭ．Ｊ．Ｎｅｗ
ｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ、Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ、２７７〜２９６頁：
Ｓｉｎｇｈら、Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９８、１６、１８２２〜１８２７；Ｏｔｔ
ら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９９５、１３、１５５７〜１５６２；Ｏ’Ｈａｇａｎら
、Ｍｏｌ．Ｍｅｄｉｃｉｎｅ Ｔｏｄａｙ、１９９７、Ｆｅｂｕｒｕａｒｙ、６
９〜７５；およびＴｒａｑｕｉｎａら、Ｊ．Ｉｎｆｅｃｔ．Ｄｉｓ．１９９６、
１７４、１１６８〜７５（これらの開示は、本明細書中にその全体が参考として
援用される）。ＭＦ５９は、１９９５年５月４日出願の、米国特許出願０８／４
３４，５１２に記載され、この出願の開示は、その全体が本明細書中に参考とし
て援用される。ＭＦ５９アジュバントは、サブユニット抗原の免疫原性を改善し
つつ、ミョウバンアジュバントの安全性および耐性のプロフィールを維持する。
Ｖａｎ Ｎｅｓｔら、Ｖａｃｃｉｎｅｓ ９２、１９９２、Ｃｏｌｄ Ｓｐｒｉ
ｎｇ Ｈａｒｂｏｒ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ Ｐｒｅｓｓ、５７〜６２およびＶ
ａｌｅｎｓｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９４、１５３、４０２９〜３９（こ
れらの開示は、その全体が本明細書中に参考として援用される）。動物研究にお
いて、ＭＦ５９は、遺伝子毒性、催奇性であることも、感作を引き起こすことも
、見出されなかった。ＭＦ５９の作用機構は、強力なＣＤ４＋Ｔ細胞の生成（す
なわち、Ｔｈ２細胞応答）に依存するようである。しかし、ＭＦ５９アジュバン
トは、Ｔｈ１応答または細胞傷害性Ｔリンパ球（ＣＴＬ）応答を、ほとんど（あ
ったとしても）惹起しない。

【００１１】 抗原と混合されたＣｐＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドは、強力なＴｈ１
免疫応答を誘導することが示された。Ｒｏｍａｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．１９９７
、３、８４９〜８５４；Ｗｅｉｎｅｒら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃ
ｉ．ＵＳＡ、１９９７、９４、１０８３３〜１０８３７；Ｄａｖｉｓら、Ｊ．Ｉ
ｍｍｕｎｏｌ．１９９８、１６０、８７０〜８７６；Ｃｈｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍ
ｅｄ．１９９７、１８６、１６２３〜１６３１；Ｌｉｐｆｏｒｄら、Ｅｕｒ．Ｊ
．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９７、２７、２３４０〜２３４４；ならびにＭｏｌｄｏ
ｖｅａｎｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ，１９８８、１６、１２１６〜１２２４（これら
の開示は、その全体が参考として本明細書中に援用される）。非メチル化ＣｐＧ
ジヌクレオチドは、細菌ＤＮＡにおいて比較的一般的であるが、脊椎動物ＤＮＡ
においては、少ない比率で示され、そしてメチル化されている。Ｂｉｒｄ、Ｔｒ
ｅｎｄｓ Ｇｅｎｅｔ．１９８７、３、３４２〜３４７。非メチル化ＣｐＧモチ
ーフを含む細菌ＤＮＡまたは合成ＤＮＡもまた、例えば以下を含む、免疫応答を
誘導することが公知である：Ｂ細胞増殖、インターロイキン−６および免疫グロ
ブリンの分泌、およびアポトーシス耐性。Ｋｒｉｅｇら、Ｎａｔｕｒｅ、１９９
５、３７４、５４６〜５４９；Ｋｌｉｎｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａ
ｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９６、９３、２８７９〜２８８３；Ｂａｌｌａｓら、
Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６、１５７、１８４０〜１８４５；Ｃｏｗｄｅｒｙ
ら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６、１５６、４５７０〜４５７５；Ｈａｌｐｅ
ｒｎら、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６、１６７、７２〜７８；Ｙａｍａ
ｍｏｔｏら、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．１９８８、７９、８６６〜８
７３；Ｓｔａｃｅｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６、１５７、２１１６〜２
１２２；Ｍｅｓｓｉｎａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９１、１４７、１７５９
〜１７６４；Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６、１５７、４９１８〜４９
２５；Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９６、１５７、５３４９〜５４０２；
Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８、１６０、４７５５〜４７６１；ならび
にＹｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．１９９８、１６０、５８９８〜５９０６；ＰＣ
Ｔ公報ＷＯ９６／０２５５５、ＷＯ９８／１６２４７、ＷＯ９８／１８８１０、
ＷＯ９８／４０１００、ＷＯ９８／５５４９５、ＷＯ９８／３７９１９およびＷ
Ｏ９８／５２５８１（これらの開示は、その全体が参考として本明細書中に援用
される）。しかし、ＣｐＧオリゴヌクレオチドは、殺菌性抗体応答を誘導すると
示されていない。

【００１２】 殺菌性抗体を誘導しかつ研究のための動物における予防処置および治療処置に
使用され得る、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原と組み合わせてアジュバントを含む有効
な免疫原性組成物が、非常に所望される。さらに、殺菌性抗体を誘導しかつヒト
における予防処置および治療処置に使用され得る、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原と組
み合わせてアジュバントを含む有効な免疫原性組成物もまた、なお所望される。
このような応答は、例えば、髄膜炎菌感染または淋菌感染の処置において、なら
びに髄膜炎菌感染または淋菌感染に対して感受性である個体を免疫するために、
有用である。

【００１３】 （発明の開示） 本発明は、少なくとも１つのＣＧモチーフ、および完全フロイントアジュバン
ト（ＣＦＡ）を含むオリゴヌクレオチドを含む、アジュバント組成物に関する。
好ましくは、このオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つのホスホロチオエート
結合を含む。このオリゴヌクレオチドは、好ましくは、以下からなる群より選択
されるヌクレオチド配列を含む：配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番
号４、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番
号１０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号
１５、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２
０、配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５
、配列番号２６、および配列番号２７。本発明のいくつかの実施形態において、
このオリゴヌクレオチドは、ＣＧモチーフを含み、そのＣＧモチーフは、その５
’側ですぐに２つのプリンに隣接し、そしてその３’側ですぐに２つのピリミジ
ンに隣接する。本発明の好ましい実施形態において、このオリゴヌクレオチドは
、以下からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む：配列番号１、配列番
号２、配列番号３、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１２、配列
番号１３、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列番号２２、配列番
号２３、配列番号２４、および配列番号２５。

【００１４】 本発明はまた、免疫を刺激する量のＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原、および少なくと
も１つのＣＧモチーフを含む少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む、免疫
を刺激する量のアジュバント組成物を含む、免疫原性組成物に関する。好ましく
は、このアジュバント組成物は、少なくとも１つのＣＧモチーフを第２のアジュ
バントとともに含む、少なくとも１つのオリゴヌクレオチドを含む。好ましくは
、このＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原は、以下からなる群より選択される：タンパク質
、タンパク質−多糖類、タンパク質−リポ多糖類、多糖類、およびリポ多糖類。
好ましくは、このＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎ
ｇｉｔｉｄｉｓまたはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに由来する
。本発明の好ましい実施形態において、このＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原は、Ｎｅｉ
ｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｂ群ペプチドであり、好ましくは、
これは、配列番号３１を含む。本発明のいくつかの実施形態において、このアジ
ュバント組成物は、第２のアジュバント（例えば、ミョウバン、完全フロイント
アジュバント、または完全フロイントアジュバントなど）を含む。本発明の他の
実施形態において、このアジュバント組成物は、油性液滴エマルジョンを第２の
アジュバントとして含み、これは好ましくは、代謝可能な油および乳化剤を含む
。好ましくは、この油および乳化剤は、油性液滴を有する水中油エマルジョンの
形態で存在し、その油性液滴の実質的にすべてが、１ミクロン未満の直径であり
、そしてそのエマルジョンは、全くポリオキシプロピレン−ポリオキシエチレン
コポリマーの非存在下で存在する。好ましくは、この油は、動物油または植物油
であり、より好ましくは、不飽和炭化水素、より好ましくは、テルペノイド(例
えば、スクアレン）である。好ましい実施形態において、この組成物は、０．５
〜２０体積％の油を水性媒体中に含む。好ましくは、この乳化剤は、非イオン性
洗剤を含む。好ましくは、この乳化剤はポリオキシエチレンソルビタンモノエス
テル、ポリオキシエチレンソルビタンジエステル、もしくはポリオキシエチレン
ソルビタントリエステルまたはソルビタンモノエステル、ソルビタンジエステル
、もしくはソルビタントリエステルを含む。本発明のいくつかの実施形態におい
て、この組成物は、０．０１〜０．５重量％のこの乳化剤を含む。

【００１５】 本発明の組成物はまた、別個の免疫刺激剤（例えば、細菌細胞壁成分およびム
ラミルペプチド）も含み得る。本発明の好ましい実施形態において、この組成物
は、本明細書中に記載される少なくとも１つのＣＧモチーフを含むオリゴヌクレ
オチドのいずれかを含む。

【００１６】 本発明はまた、本明細書中に記載されるような、免疫を刺激する量のＮｅｉｓ
ｓｅｒｉａ抗原、および本明細書中に記載されるような、免疫を刺激する量のア
ジュバント組成物を含む、ワクチンに関し、このアジュバント組成物は、本明細
書中に記載されるような、少なくとも１つのＣＧモチーフを含むオリゴヌクレオ
チドを含む。

【００１７】 本発明はまた、宿主動物において免疫応答を刺激する方法に関し、この方法は
、その動物に、本明細書中に記載されるような免疫原性組成物を、免疫応答を誘
導するに有効な量で投与する工程を包含する。好ましくは、その宿主動物は、哺
乳動物である。

【００１８】 本発明はまた、宿主動物をＮｅｉｓｓｅｒｉａ感染に対して免疫する方法に関
し、この方法は、その動物に、本明細書中に記載されるようなワクチン組成物を
、防御応答を誘導するに有効な量で投与する工程を包含する。好ましくは、その
宿主動物は、哺乳動物であり、より好ましくは、ヒトである。

【００１９】 本発明はまた、宿主動物をＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ感
染に対して免疫する方法に関し、この方法は、その動物に、本明細書中に記載さ
れるようなワクチン組成物を、防御応答を誘導するに有効な量で投与する工程を
包含し、そのワクチン組成物において、抗原は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉ
ｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｂ群ペプチドであり、好ましくは、配列番号３１を含む。好
ましくは、その宿主動物は、哺乳動物であり、より好ましくは、ヒトである。

【００２０】 本発明の実施は、他のように示さない限り、当業者の範囲内にある、ウイルス
学、免疫学、微生物学、分子生物学および組換えＤＮＡ技術の従来の方法を使用
する。このような技術は、文献に完全に説明されている。例えば、Ｓａｍｂｒｏ
ｏｋ、ら、Ｍｏｌｅｃｕｌａｒ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ
Ｍａｎｕａｌ（第２版、１９８９）；ＤＮＡ Ｃｌｏｎｉｎｇ：Ａ Ｐｒａｃｔ
ｉｃａｌ Ａｐｐｒｏａｃｈ、第Ｉ巻および第ＩＩ巻（Ｄ．Ｇｌｏｖｅｒ編）；
Ｍｅｔｈｏｄｓ Ｉｎ Ｅｎｚｙｍｏｌｏｇｙ（Ｓ．ＣｏｌｏｗｉｃｋおよびＮ
．Ｋａｐｌａｎ編、Ａｃａｄｅｍｉｃ Ｐｒｅｓｓ、Ｉｎｃ．）；Ｈａｎｄｂｏ
ｏｋ ｏｆ Ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｉｍｍｕｎｏｌｏｇｙ、第Ｉ−ＩＶ巻
（Ｄ．Ｍ．ＷｅｉｒおよびＣ．Ｃ．Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ編、Ｂｌａｃｋｗｅｌｌ
Ｓｃｉｅｎｔｉｆｉｃ Ｐｕｂｌｉｃａｔｉｏｎｓ）；ならびにＦｕｎｄａｍ
ｅｎｔａｌ Ｖｉｒｏｌｏｇｙ、第２版、第Ｉ巻および第ＩＩ巻（Ｂ．Ｎ．Ｆｉ
ｅｌｄｓおよびＤ．Ｍ．Ｋｎｉｐｅ編）を参照のこと。

【００２１】 本発明は、部分的に、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原、アジュバント、および少なく
とも１つのＣＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む免疫原性組成物に関す
る。本発明の免疫原性組成物は、抗体力価で判断した場合に、ほぼ１０倍その抗
原の免疫原性を増加した。驚くべきことに、免疫された動物由来の血清が、Ｍｅ
ｎＢ殺菌アッセイにおいて試験された場合に、ＭｅｎＢ細胞を殺傷する能力の２
倍の増加が観察された。

【００２２】 本明細書中で使用される場合、句「核酸」とは、ＤＮＡ、ＲＮＡ、またはそれ
らから形成されるキメラをいう。

【００２３】 本明細書中で使用される場合、句「少なくとも１つのＣＧモチーフを含むオリ
ゴヌクレオチド」とは、少なくとも１つのＣＧジヌクレオチドを含むポリヌクレ
オチドをいう。少なくとも１つのＣＧモチーフを含むオリゴヌクレオチドは、複
数のＣＧモチーフを含み得る。これらのオリゴヌクレオチドはまた、当該分野に
おける「ＣｐＧ」オリゴヌクレオチドとしても当該分野において公知である。本
明細書中で使用される場合、句「ＣＧモチーフ」とは、シトシンヌクレオチドに
続いてグアノシンヌクレオチドを含む、オリゴヌクレオチドのジヌクレオチド部
分をいう。５−メチルシトシンもまた、シトシンの代わりに使用され得る。

【００２４】 本明細書中で使用される場合、句「油性液滴エマルジョン」とは、代謝可能な
油および乳化剤を含むエマルジョンをいう。

【００２５】 本明細書中で使用される場合、用語「約」とは、その用語が修飾する値の±１
０％を意味する。

【００２６】 本明細書中で使用される場合、句「Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原」とは、Ｎｅｉｓ
ｓｅｒｉａ細菌に由来する、任意のタンパク質、ペプチド、タンパク質−多糖類
、タンパク質−リポ多糖類、ペプチド−多糖類、ペプチド−リポ多糖類、多糖類
、またはリポ多糖類を意味する。好ましくは、このＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原は、
特異的抗体の形成を刺激し、そしてそして相同抗体とインビボまたはインビトロ
で特異的に反応し、そして／または細胞性Ｔ細胞応答を刺激する。このＮｅｉｓ
ｓｅｒｉａ抗原は、任意のＮｅｉｓｓｅｒｉａ種に由来し得るが、好ましくは、
Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓまたはＮ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅのいずれかに
由来する。当業者は、多数のＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原を容易に同定し得かつ調製
し得る。

【００２７】 本明細書中で使用される場合、用語「ワクチン」とは、殺菌性免疫応答を誘導
し得る、免疫原性組成物を意味する。好ましくは、本発明のワクチン組成物は、
殺菌性抗体応答を惹起する。

【００２８】 本発明によると、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染に対して宿主動物を予防的および／
または治療的に、免疫または処置する、組成物および方法が提供される。本発明
の方法は、哺乳動物、好ましくはヒトに対して、予防的免疫および治療的免疫を
付与するために有用である。本発明の方法はまた、ヒト以外の哺乳動物に対して
、生物医学的研究のために、実施され得る。

【００２９】 本発明の１つの実施形態において、少なくとも１つのＣＧモチーフを含むオリ
ゴヌクレオチドが、ＣＦＡと混合されて、アジュバント組成物が形成され、この
アジュバント組成物は、任意の抗原と使用され得る。少なくとも１つのＣＧモチ
ーフを含むオリゴヌクレオチドは、当業者に周知の従来のオリゴヌクレオチド合
成を使用して調製され得る。好ましくは、本発明のオリゴヌクレオチドは、改変
された骨格（例えば、ホスホロチオエートまたはペプチド核酸）を含み、このオ
リゴヌクレオチドにヌクレアーゼ耐性を付与する。本発明において使用され得る
さらなる骨格は、当業者に周知である。さらに、このオリゴヌクレオチドは、好
ましくは、約６個と約１００個との間のヌクレオチド、より好ましくは、約８個
と約５０個との間のヌクレオチド、最も好ましくは、約１０個と約４０個との間
のヌクレオチドを含む。さらに、本発明のオリゴヌクレオチドは、当業者に周知
である、糖部分および窒素性塩基部分の置換を含み得る。少なくとも１つのＣＧ
モチーフを含む好ましいオリゴヌクレオチドは、例えば、以下に開示される：Ｋ
ｒｉｅｇら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９８，９５
，１２６３１−１２６３６、Ｋｌｉｎｍａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ，１９９６，９３，２８７９−２８８３、Ｗｅｉｎｅｒら、Ｐ
ｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９７、９４、１０８３３〜
１０８３７、Ｃｈｕら、Ｊ．Ｅｘｐ．Ｍｅｄ．，１９９７，１８６，１６２３−
１６３１、Ｂｒａｚｏｌｏｔ−Ｍｉｌｌａｎら、Ｐｒｏｃ．Ｎａｔｌ．Ａｃａｄ
．Ｓｃｉ．ＵＳＡ、１９９８、９５、１５５５３〜１５５５８、Ｂａｌｌａｓら
、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５７、１８４０〜１８４５、Ｃｏｗｄｅ
ｒｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５６、４５７０〜４５７５、Ｈａ
ｌｐｅｒｎら、Ｃｅｌｌ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１６７、７２〜７８、
Ｙａｍａｍｏｔｏら、Ｊｐｎ．Ｊ．Ｃａｎｃｅｒ Ｒｅｓ．，１９８８，７９，
８６６〜８７３、Ｓｔａｃｅｙら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５７、
２１１６〜２１２２、Ｍｅｓｓｉｎａら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９１，１
４７，１７５９−１７６４、Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９６、１５７
．４９１８〜４９２５、Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９６，１５７，５
３９４−５４０２、Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９８、１６０、４７５
５｜４７６１、Ｒｏｍａｎら、Ｎａｔ．Ｍｅｄ．，１９９７，３，８４９−８５
４、Ｄａｖｉｓら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．、１９９８、１６０、８７０〜８７６
、Ｌｉｐｆｏｒｄら、Ｅｕｒ．Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９７，２７，２３４
０−２３４４、Ｍｏｌｄｏｖｅａｎｕら、Ｖａｃｃｉｎｅ、１９８８、１６、１
２１６〜１２２４、Ｙｉら、Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９８，１６０，５８９
８−５９０６、ＰＣＴ公報Ｗ０９６／０２５５５、ＷＯ ９８／１６２４７、Ｗ
０９８／１８８１０、Ｗ０９８／４０１００、Ｗ０９８／５５４９５、Ｗ０９８
／３７９１９、Ｗ０９８／５２５８１（これらの開示は、その全体が本明細書中
に参考として援用される）。本発明のオリゴヌクレオチドは、少なくとも１つの
ＣＧモチーフを含むが、複数のＣＧモチーフを含み得ることが、理解されるべき
である。

【００３０】 好ましいオリゴヌクレオチドは、例えば、以下のヌクレオチド配列を含む：ｔ
ｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇａｃｇｔｔ（配列番号１）、ａｔａａｔｃｇａｃ
ｇｔｔｃａａｇｃａａｇ（配列番号２）、ｇｇｇｇｔｃａａｃｇｔｔｇａｇｇｇ
ｇｇｇ（配列番号３）、ｔｃｔｃｃｃａｇｃｇｔｇｃｇｃｃａｔ（配列番号４）
、ｇａｇａａｃｇｃｔｃｇａｃｃｔｔｃｇａｔ（配列番号５）、ｔｃｃａｔｇｔ
ｃｇｔｔｃｃｔｇａｔｇｃｔ（配列番号６）、ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃｃｔｇ
ａｔｇｃｔ（配列番号７）、ｇｃｔａｇａｃｇｔｔａｇｃｇｔ（配列番号８）、
ａｔｃｇａｃｔｃｔｃｇａｇｃｇｔｔｃｔｃ（配列番号９）、ｇａａｃｃｔｔｃ
ｃａｔｇｃｔｇｔｔｃｃｇ（配列番号１０）、ｇｃｔａｇａｔｇｔｔａｇｃｇｔ
（配列番号１１）、ｔｃａａｃｇｔｔ（配列番号１２）、ｇｃａａｃｇｔｔ（配
列番号１３）、ｔｃｇａｃｇｔｃ（配列番号１４）、ｔｃａｇｃｇｃｔ（配列番
号１５）、ｔｃａａｃｇｃｔ（配列番号１６）、ｔｃａｔｃｇａｔ（配列番号１
７）、ｔｃｔｔｃｇａａ（配列番号１８）、ｔｇａｃｔｇｔｇａａｃｇｔｔｃｇ
ａｇａｔｇａ（配列番号１９）、ｔｇａｃｔｇｔｇａａｃｇｔｔａｇｃｇａｔｇ
ａ（配列番号２０）、ｔｇａｃｔｇｔｇａａｃｇｔｔａｇａｇｃｇｇａ（配列番
号２１）、ｇｔｔｔｇｃｇｃａａｃｇｔｔｇｔｔｇｃｃａｔ（配列番号２２）、
ａｔｇｇｃａａｃａａｃｇｔｔｇｃｇｃａａａｃ（配列番号２３）、ｃａｔｔｇ
ｇａａａａｃｇｔｔｃｔｔｃｇｇｇｇ（配列番号２４）、ｃｃｃｃｇａａｇａａ
ｃｇｔｔｔｔｃｃａａｔｇ（配列番号２５）、ａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔ（配列
番号２６）、およびｃｔｔｔｃｃａｔｔｇａｃｇｔｃａａｔｇｇｇｔ（配列番号
２７）。本発明の好ましい実施形態において、このオリゴヌクレオチドは、ＣＧ
モチーフを含み、このモチーフは、その５’側で２つのプリンに隣接し、そして
その３’側で２つのピリミジンに隣接する。しかし、ＣＧモチーフを含む任意の
オリゴヌクレオチドが、そのオリゴヌクレオチドが免疫応答の増加を誘導する限
り、本発明において使用され得ることが理解されるべきである。

【００３１】 本発明はまた、上記のような少なくとも１つのＣＧオリゴヌクレオチド、およ
びアジュバントを少なくとも１つのＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原と組み合わせて含む
、免疫原性組成物に関する。本発明のいくつかの実施形態において、このアジュ
バントは、ミョウバン、完全フロイントアジュバント、または不完全フロイント
アジュバントである。本発明の他の実施形態において、このアジュバントは、免
疫原性の量の油性液滴エマルジョンを含む。このアジュバント組成物は、免疫原
性組成物において使用される抗原とアジュバントを混合する前に、下記の成分か
ら一般的に調製される。

【００３２】 本発明のいくつかの実施形態において、その抗原は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｇ
ｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに由来する。本発明の他の実施形態において、その抗原は
、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに由来する。好ましくは、そ
の抗原は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｂ群ペプチドであ
る。好ましくは、そのペプチドのヌクレオチド配列およびアミノ酸配列は、それ
ぞれ、（配列番号３０）および（配列番号３１）を含む。しかし、任意のＮｅｉ
ｓｓｅｒｉａ抗原が、本発明において使用され得る。さらなるＮｅｉｓｓｅｒｉ
ａ抗原は、下記に、実施例において記載される。さらに、本発明のＮｅｉｓｓｅ
ｒｉａ抗原として役立ち得るペプチドは、以下の同時係属中の出願に開示される
：米国特許出願番号６０／０８３７５８、６０／０９４６８９、６０／０９８、
９９４、６０／１０３、７４９、６０／１０３、７９４、６０／０９９、０６２
、６０／１２１、５２８および６０／１０３、７９６、そしてＷ０９９／２４５
７８、Ｗ０９９／３６５４４およびＷ０９９／５７２８０（これらの開示は、そ
の全体が参考として本明細書中に援用される）。単一または複数の、保存的アミ
ノ酸置換が、本発明の抗原の免疫原性を変化することを伴ってなされ得ることが
、理解されるべきである。さらに、細菌株におけるバリエーションもまた、本明
細書中に開示されるヌクレオチド配列およびアミノ酸排列内に包含される。例え
ば、いくつかの株は、アミノ酸１１位においてＣではなくＹを、４８位にてＤで
はなくＡを、５５位にてＧではなくＡを、２０７位にてＲではなくＱを、３１２
位にてＳではなくＡを、３３８位にてＡではなくＴを、そして３４１位にてＳで
はなくＧを含み得る。

【００３３】 抗原は、調製後にアジュバント組成物に添加され得る。この抗原およびエマル
ジョンは、振盪により混合され得る。ＣＦＡおよびＩＦＡを使用する場合、ＰＢ
Ｓ中の抗原が、等量のＣＦＡまたはＩＦＡのいずれかと混合され得る。その混合
物は、濃いエマルジョンが達成されるまで、皮下注射針を通すことによって、乳
化され得る。

【００３４】 本発明の好ましい実施形態において、免疫を刺激する量の、少なくとも１つの
ＣＧモチーフを含む少なくとも１つのオリゴヌクレオチド、および少なくとも１
つのＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原が、油性液滴エマルジョンを含むアジュバントと混
合される。この油性液滴エマルジョンは、好ましくは、代謝可能な油および乳化
剤を含み、この油および乳化剤は、油性液滴を有する水中油エマルジョンの形態
で存在し、この液滴の実質的にすべては、直径が１ミクロン未満である。このよ
うな液滴は、油性液滴が本発明により提供されるものより有意に大きい油および
乳化剤を含むアジュバント組成物に対して、驚くべき優位性を示す。

【００３５】 本発明の個々の成分は、両方とも一般的にそして好ましい実施形態においてい
くらか詳細に、下記に示されるが、当該分野で周知であり、そして本明細書中で
使用される用語、例えば、代謝可能な油、乳化剤、免疫刺激剤、ムラミルペプチ
ド、および脂肪親和性ムラミルペプチドは、これらの化合物を記載することが、
さらなる説明なしに、当業者に十分に周知である。

【００３６】 これらの組成物の１つの成分は、代謝可能な、非毒性の油であり、好ましくは
、６〜３０個の炭素原子であり、アルカン、アルケン、アルキン、およびそれら
の対応する酸およびアルコール、それらのエーテルおよびエステル、ならびにそ
れらの混合物を含むがこれらに限定されない。この油は、任意の植物油、魚油、
動物油、または合成して調製された油であり得、それらは、免疫原性組成物が投
与される宿主動物の身体により代謝され得、そしてその被検体に対して非毒性で
ある。その宿主動物は、代表的には、哺乳動物であり、そして好ましくはヒトで
ある。鉱物油および類似の毒性石油留出油は、本発明から明らかに除外される。

【００３７】 本発明の油成分はまた、任意の長鎖のアルカン、アルケン、またはアルキン、
あるいはそれらの酸またはアルコール誘導体であり得、遊離酸としてか、その塩
としてか、またはエステル（例えば、モノエステル、またはジエステル、または
トリエステル（例えば、トリグリセリドおよび１，２−プロパンジオールまたは
類似のポリヒドロキシアルコールのエステル））としてかのいずれかであり得る
。アルコールは、アミノ官能化酸またはポリ官能化酸（ａｍｉｎｏ− ｏｒ ｐ
ｏｌｙ−ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ ａｃｉｄ）（例えば、酢酸、プロピオン酸、ク
エン酸など）を使用してアシル化され得る。油でありかつ本明細書中に示される
他の基準を満たす長さアルコールから誘導されたエーテルもまた、使用され得る
。

【００３８】 この個々のアルカン、アルケン、またはアルキンの部分、およびその酸誘導体
またはアルコール誘導体は、一般的に、約６〜約３０個の炭素原子を有する。こ
の部分は、直鎖構造または分子鎖構造を有し得る。その部分は、完全に飽和して
いてもよいし、あるいは１つ以上の二重結合または三重結合を有してもよい。モ
ノエステルまたはポリエステルまたはエーテルベースの油が使用される場合、約
６〜約３０個の炭素という限定が、その個々の脂肪酸部分または脂肪アルコール
部分に適用され、全体の炭素数には適用されない。

【００３９】 任意の代謝可能な油（特に、動物供給源、魚供給源または植物供給源由来）が
、本明細書中で使用され得る。その油が、投与される宿主により代謝されること
が必須であり、さもなければ、その油の成分が、膿瘍、肉芽種または癌腫さえ引
き起こし得るか、または（獣医学の実施にて使用される場合）その油の成分が、
代謝されない油が消費者に対して有し得る有害な効果に起因して、ワクチンされ
たトリおよび動物の肉をヒトでの消費のために受容不可能にし得る。

【００４０】 植物油の例示的供給源としては、堅果、種子、および穀物が挙げられる。ラッ
カセイ油、ダイズ油、ココナッツ油、およびオリーブ油であり、堅果油が最も一
般的に利用可能であることを示す。種子油としては、ベニバナ油、綿実油、ヒマ
ワリ種子油、ゴマ種子油などが、挙げられる。穀物群においては、トウモロコシ
油が、最も容易に利用可能であるが、他の穀物（例えば、コムギ、オーツ麦、ラ
イ麦、イネ、テフ、ライコムギなど）の油もまた、使用され得る。

【００４１】 植物油を入手するための技術は、十分に発達しており、かつ周知である。これ
らの油および他の類似の油の組成は、例えば、Ｍｅｒｃｋ Ｉｎｄｅｘ、ならび
に食物、栄養および食物技術に関する原資料にて見出され得る。

【００４２】 グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの６〜１０個の炭素脂肪酸のエ
ステル（種子油に天然には存在しないが）が、堅果油および種子油から開始する
適切な材料の加水分解、分離およびエステル化によって調製され得る。これらの
産物は、ＰＶＯ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ，Ｉｎｃ．、Ｃｈｅｍｉｃａｌ
Ｓｐｅｃｉａｌｉｔｉｅｓ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ，４１６ Ｄｉｖｉｓｉｏｎ Ｓ
ｔｒｅｅｔ，Ｂｏｏｎｇｏｎ，ＮＪなどから、名称ＮＥＯＢＥＥ（登録商標）の
下で市販されている。

【００４３】 任意の動物供給源由来の油もまた、本発明の免疫原性組成物に用いられ得る。
動物油および動物脂肪は、通常、それらがトリグリセリドとして存在し、そして
魚類または植物由来の油よりも高い飽和度を有するという事実に起因して体温で
固体である。しかし、脂肪酸は、遊離脂肪酸を提供する、部分的または完全なト
リグリセリドのけん化によって動物脂肪から入手可能である。哺乳動物のミルク
由来の脂肪および油は、代謝可能であり、従って、本発明の実施に使用され得る
。動物供給源から分離、精製、けん化および純粋な油を得るために必要な他の手
段についての手順は、当該分野において周知である。

【００４４】 ほとんどの魚類は、容易に回収され得る代謝可能な油を含む。例えば、タラ肝
油、サメ肝油、およびクジラ油（例えば、鯨蝋）が、本明細書中に使用され得る
いくつかの魚油の例である。多くの分岐鎖油が、５個の炭素のイソプレン単位に
おいて生化学的に合成され、そして一般に、テルペノイドといわれる。サメ肝油
は、スクアレンとして公知の分岐した不飽和のテルペノイド（２，６，１０，１
５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサ
ヘキサエン）（これは、本明細書中で特に好ましい）を含む。スクアラン（ｓｑ
ｕａｌａｎｅ）（スクアレンに対する飽和アナログ）もまた、特に好ましい油で
ある。魚油（スクアレンおよびスクアランを含む）は、市販の供給元から容易に
入手可能であるか、または当該分野において公知の方法によって得られ得る。

【００４５】 これらの免疫原性組成物の油成分は、約０．５体積％〜約２０体積％、ただし
好ましくは約１５％以下の量において、特に約１％〜約１２％の量において存在
する。約１％〜約４％の油を使用することが、最も好ましい。

【００４６】 これらの免疫原性組成物の水性部分は、好ましくは緩衝化生理食塩水であるか
、またはより好ましくは不純物が混入していない水である。これらの組成物は非
経口投与が意図されるので、組成物と生理学的流体との間の示差的イオン濃度の
ために、組成物の投与後の膨張または迅速な吸収を予防するために、張度（すな
わち、重量オスモル濃度）が通常の生理学的流体と本質的に同じであるように、
免疫原性組成物として使用される最終緩衝化溶液を作製することが好ましい。通
常の生理学的条件と適合するｐＨを維持するために、生理学的食塩水を緩衝化す
ることもまた、好ましい。また、特定の例において、特定の組成物成分（例えば
、糖ペプチド）の安定性を保証するために、特定のレベルにｐＨを維持すること
が、必要であり得る。

【００４７】 任意の生理学的に受容可能な緩衝液が、本明細書中で使用され得るが、リン酸
緩衝液が好ましい。他の受容可能な緩衝液（例えば、酢酸塩、トリス（ｔｒｉｓ
）、炭酸水素塩、炭酸塩など）が、リン酸緩衝液に対する代替物として使用され
得る。水性成分のｐＨは、好ましくは、約６．０〜８．０の間である。

【００４８】 しかし、免疫原性組成物が最初に調製される場合、不純物が混入していない水
が、エマルジョンの水性成分として好ましい。塩濃度を増加させると、所望の小
さな液滴サイズを達成することがより困難になる。最終免疫原性組成物が、油液
滴アジュバントから調製される場合、抗原性物質が、緩衝液に適切な重量オスモ
ル濃度にて加えられて、所望の免疫原性組成物を提供し得る。

【００４９】 これらの組成物に用いられる水性成分の量は、組成物の値を単一にするに必要
な量である。すなわち、１００％になるに十分な水性成分の量が、組成物を容量
調整にするために、上記の他の成分とともに混合される。

【００５０】 かなりの乳化剤または懸濁剤が、一般に、薬学科学において使用され得る。乳
化剤は、本明細書中で使用される場合、代謝可能な油ではない。乳化剤としては
、天然に由来する物質（樹木由来のゴム）、植物性タンパク質、糖ベースのポリ
マー（例えば、アルギネートおよびセルロース）などが挙げられる。炭素骨格上
に水酸化物または他の親水性置換基を有する、特定のオキシポリマーまたはポリ
マー（例えば、ポビドン、ポリビニルアルコール、およびグルコールエーテルベ
ースの一官能基および多官能基化合物）は、界面活性剤活性を有する。長鎖脂肪
酸由来の化合物は、本発明に使用され得る乳化剤および懸濁剤の実質的に第３の
群を形成する。任意の前述の界面活性剤は、それらが非毒性である限り有用であ
る。

【００５１】 本発明に従って使用され得る適切な乳化剤（界面活性剤または洗剤ともいわれ
る）の特定の例は、以下を含む： １．水溶性石けん（例えば、高級脂肪酸（Ｃ₁₀〜Ｃ₂₂）のナトリウム、カリウ
ム、アンモニウムおよびアルカノールアンモニウム塩、ならびに特に、ナトリウ
ムおよびカリウムの獣脂およびココナツ石けん）。

【００５２】 ２．陰イオン性合成非石けん洗剤（これは、約８〜２２個の炭素原子を含むア
ルキルラジカルをそれらの分子構造において有する有機硫酸反応生成物の水溶性
塩によって示され得、そしてラジカルは、硫酸および硫酸エステルラジカルから
なる群より選択される）。これらの例は、以下である：獣脂またはココナツ油か
ら誘導されるアルキル硫酸ナトリウムまたはカリウム；アルキルベンゼンスルホ
ン酸ナトリウムまたはカリウム；アルキルグリセリルエーテルスルホン酸ナトリ
ウム；ココナツ油脂肪酸モノグリセリドのスルホン酸ナトリウムおよび硫酸ナト
リウム；１モルの高級脂肪アルコールと約１〜６モルのエチレンオキシドとの反
応生成物の硫酸エステルのナトリウムまたはカリウム塩；１分子あたり１〜１０
単位のエチレンオキシドを有し、その中でアルキルラジカルが８〜１２個の炭素
原子を含む、アルキルフェノールエチレンオキシドエーテルスルホン酸ナトリウ
ムまたはカリウム；イセチオン酸でエステル化され、そして水酸化ナトリウムで
中和された、脂肪酸の反応生成物；メチルタウリド（ｔａｕｒｉｄｅ）の脂肪酸
アミドでのナトリウムまたはカリウム塩；ならびにＳＯ₃−スルホン酸化Ｃ₁₀〜
Ｃ₂₄α−オレフィンのナトリウムおよびカリウム塩。

【００５３】 ３．有機疎水性化合物とのアルキレンオキシド基の縮合によって作製された非
イオン性合成洗剤。代表的な疎水性基としては、プロピレングリコールとのプロ
ピレンオキシドの縮合生成物、アルキルフェノール、エチレンジアミンとのプロ
ピレンオキシドの縮合生成物、８〜２２個の炭素原子を有する脂肪族アルコール
、ならびに脂肪酸のアミドが挙げられる。

【００５４】 ４．非イオン性洗剤（例えば、半極性の特徴を有する、アミンオキシド、ホス
フィンオキシドおよびスルホキシド）。長鎖３級アミンオキシドの特定の例とし
ては、ジメチルドデシルアミンオキシドおよびビス（２−ヒドロキシエチル）ド
デシルアミンが挙げられる。ホスフィンオキシドの特定の例は、米国特許第３．
３０４，２６３号（１９６７年２月１４日発行）に見出され、そしてジメチルド
デシルホスフィンオキシドおよびジメチル−（２−ヒドロキシドデシル）ホスフ
ィンオキシドが挙げられる。

【００５５】 ５．長鎖スルホキシド（式Ｒ¹−ＳＯ−Ｒ²であって、ここでＲ¹およびＲ²が、
置換または非置換アルキルラジカルであり、前者が、約１０〜約２８個の炭素原
子を含み、一方、Ｒ²が、約１〜３個の炭素原子を含む、長鎖スルホキシドを含
む）。これらのスルホキシドの特定の例としては、ドデシルメチルスルホキシド
および３−ヒドロキシトリデシルメチルスルホキシドが挙げられる。

【００５６】 ６．両性合成洗剤（例えば、３−ドデシルアミノプロピオン酸ナトリウムおよ
び３−ドデシルアミノプロピオンスルホン酸ナトリウム）。

【００５７】 ７．両性イオン性合成洗剤（例えば、３−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−Ｎ−ヘキサデ
シルアンモニオ）プロパン−１−スルホネートおよび３−（Ｎ，Ｎ−ジメチル−
Ｎ−ヘキサデシルアンモニオ）２ヒドロキシプロパン−１−スルホネート）。

【００５８】 さらに、以下の型の乳化剤の全てが、本発明の組成物に使用され得る：（ａ）
脂肪酸、ロジン酸（ｒｏｓｉｎ ａｃｉｄ）およびトール油（ｔａｌｌ ｏｉｌ
）の石けん（すなわち、アルカリ塩）；（ｂ）アルキルアレーンスルホネート；
（ｃ）スルホン酸アルキル（分岐鎖および直鎖の両方の疎水性基、ならびに一級
および二級の硫酸基を有する界面活性剤を含む）；（ｄ）疎水性基と親水性基と
の間の中間結合を含むサルフェートおよびスルホネート（例えば、脂肪酸アシル
化メチルタウリドおよび硫酸化脂肪モノグリセリド）（ｅ）ポリエチレングリコ
ールの長鎖酸エステル、特にトール油エステル；（ｆ）アルキルフェノールのポ
リエチレングリコールエーテル；（ｇ）長鎖アルコールおよびメルカプタンのポ
リエチレングリコールエーテル；ならびに（ｈ）脂肪アシルジエタノールアミド
。界面活性剤は、１つより多くの様式で分類され得るので、この段落に示される
界面活性剤の多数のクラスが、以前に記載された界面活性剤のクラスと重複する
。

【００５９】 生物学的状況のために特異的に設計されかつ一般的に使用される多くの乳化剤
が、存在する。例えば、多くの生物学的洗剤（界面活性剤）がそれ自体、Ｓｉｇ
ｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏｍｐａｎｙの１９８７ Ｃａｔａｌｏｇ ｏｆ
Ｂｉｏｃｈｅｍｉｃａｌ ａｎｄ Ｏｒｇａｎｉｃ Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓの３１
０〜３１６頁に列挙されている。このような界面活性剤は、４つの基本的な型（
陰イオン性、陽イオン性、両性イオン性、非イオン性）に分けられる。陰イオン
性洗剤の例としては、アルギン酸、カプリル酸、コール酸、１−デカンスルホン
酸、デオキシコール酸、１−ドデカンスルホン酸、Ｎ−ラウロイルサルコシン、
およびタウロコール酸が挙げられる。陽イオン性洗剤としては、ドデシルトリメ
チルアンモニウムブロミド、ベンズアルコニウムクロリド、ベンジルジメチルヘ
キサデシルアンモニウムクロリド、セチルピリジニウムクロリド、メチルベンズ
エトニウムクロリド、および４−ピコリンドデシルサルフェートが挙げられる。
両性イオン性洗剤の例としては、３−［（３−コールアミドプロピル）−ジメチ
ルアンモニオ］−１−プロパンスルホネート（一般に、ＣＨＡＰＳと略される）
、３−［（コールアミドプロピル）−ジメチルアンモニオ］−２−ヒドロキシ−
１−プロパンスルホネート（一般に、ＣＨＡＰＳＯと略される）、Ｎ−ドデシル
−Ｎ，Ｎ−ジメチル−３−アンモニオ−１−プロパンスルホネート、およびｌｙ
ｓｏ−α−ホスファチジルコリンが挙げられる。非イオン性洗剤の例としては、
デカノイル−Ｎ−メチルグルカミド、ジエチレングリコールモノペンチルエーテ
ル、ｎ−ドデシルβ−Ｄ−グルコピラノシド、脂肪アルコールのエチレンオキシ
ド縮合物（例えば、商標名Ｌｕｂｒｏｌの下で販売）、脂肪酸（特に、Ｃ₁₂〜Ｃ ₂₀ 脂肪酸）のポリオキシエチレンエーテル、ポリオキシエチレンソルビタン脂肪
酸エステル（例えば、商標名Ｔｗｅｅｎの下で販売）、ならびにソルビタン脂肪
酸エーテル（例えば、商標名Ｓｐａｎの下で販売）が挙げられる。

【００６０】 界面活性剤の特に有用な群は、ソルビタンベースの非イオン性界面活性剤であ
る。これらの界面活性剤は、ソルビトールの脱水によって調製され、１．４−ソ
ルビタンを生じ、次いでこれは、１当量以上の脂肪酸と反応される。脂肪酸で置
換された部分はさらに、エチレンオキシドと反応されて、界面活性剤の第２の群
を生じ得る。

【００６１】 脂肪酸で置換されたソルビタン界面活性剤は、１，４−ソルビタンと脂肪酸（
例えば、ラウリン酸、パルミチン酸、ステアリン酸、オレイン酸または同様の長
鎖脂肪酸）とを反応させることによって作製されて、１，４−ソルビタンモノエ
ステル、１，ｇ−ソルビタンセスキエステルまたは１，４−ソルビタントリエス
テルを生じる。これらの界面活性剤についての一般名としては、例えば、ソルビ
タンモノラウレート、ソルビタンモノパルミテート、ソルビタンモノステアレー
ト、ソルビタンモノオレート、ソルビタンセスキオレート、およびソルビタント
リオレートが挙げられる。これらの界面活性剤は、通常、種々の一置換、二置換
および三置換ソルビタンの間を区別する文字または番号の命名を用いて、ＳＰＡ
Ｎ（登録商標）またはＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）の名前の下で市販されている
。

【００６２】 ＳＰＡＮ（登録商標）およびＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）の界面活性剤は、親
水性であり、そして一般に、油に可溶性であるか、または分散可能である。それ
らはまた、ほとんどの有機溶媒に可溶性である。水中で、それらは、一般に、不
溶性であるが分散可能である。一般に、これらの界面活性剤は、１．８〜８．６
の間の親水性−疎水性バランス（ＨＬＢ）数を有する。このような界面活性剤は
、当該分野において公知の手段によって容易に作製され得るか、または例えば、
ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃ．，Ｗｉｌｍｉｎｇｔｏｎ，ＤＥから登録
印ＡＴＬＡＳ（登録商標）の下で市販されている。

【００６３】 界面活性剤の関連する群としては、ポリオキシエチレンソルビタンモノエステ
ルおよびポリオキシエチレンソルビタントリエステルが挙げられる。これらの物
質は、１，４−ソルビタンモノエステルまたはトリエステルにエチレンオキシド
を添加することによって調製され得る。ポリオキシエチレンの添加は、脂溶性ソ
ルビタンモノエステルまたはトリエステル界面活性剤を、一般に水中で分散可能
な油に溶解性でありかつ有機液体に種々の程度に溶解性である、親水性界面活性
剤に変換する。

【００６４】 商標ＴＷＥＥＮ（登録商標）の下で市販されているこれらの物質は、水中油エ
マルジョンおよび分散剤を調製するために、または油を可溶化するために、なら
びに水溶性または洗浄性の無水軟膏を作製するために有用である。ＴＷＥＥＮ（
登録商標）界面活性剤は、関連するソルビタンモノエステルまたはトリエステル
界面活性剤と組み合わされて、エマルジョンの安定性を促進し得る。ＴＷＥＥＮ
（登録商標）界面活性剤は、一般に、９．６〜１６．７の間に入るＨＬＢ値を有
する。

【００６５】 単独でまたはＳＰＡＮ（登録商標）、ＡＲＬＡＣＥＬ（登録商標）およびＴＷ
ＥＥＮ（登録商標）の界面活性剤と組み合わされて使用され得る非イオン性界面
活性剤の第３の群は、エチレンオキシドと長鎖脂肪酸との反応によって作製され
るポリオキシエチレン脂肪酸である。この型の最も一般的に利用可能な界面活性
剤は、名称ＭＹＲＪ（登録商標）の下で販売されており、そしてステアリン酸の
ポリオキシエチレン誘導体である。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤は、ＴＷＥ
ＥＮ（登録商標）界面活性剤のように親水性かつ可溶性であるかまたは分散可能
である。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤は、ＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性
剤と、またはＴＷＥＥＮ（登録商標）／ＳＰＡＮ（登録商標）と、もしくはＡＲ
ＬＡＣＥＬ（登録商標）界面活性剤混合物と、エマルジョンを形成する使用のた
めに混和され得る。ＭＹＲＪ（登録商標）界面活性剤は、当該分野において公知
の方法によって作製され得るか、またはＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ Ｉｎｃ．
から市販されている。

【００６６】 ポリオキシエチレンベースの非イオン性界面活性剤の第４の群は、ラウリルア
ルコール、アセチルアルコール、ステアリルアルコールおよびオレイルアルコー
ルから誘導されるポリオキシエチレン脂肪酸エーテルである。これらの物質は、
エチレンオキシドを脂肪アルコールに添加することによって上記のように調製さ
れる。これらの界面活性剤についての市販名は、ＢＲＩＪ（登録商標）である。
ＢＲＩＪ（登録商標）界面活性剤は、界面活性剤中のポリオキシエチレン部分の
サイズに依存して親水性または脂溶性であり得る。これらの化合物の調製物は技
術水準から入手可能であり、一方、それらはまた、ＩＣＩ Ａｍｅｒｉｃａ’ｓ
Ｉｎｃ．のような市販の供給源から容易に入手可能である。

【００６７】 本発明の実施に潜在的に使用され得る他の非イオン性界面活性剤は、例えば、
以下である：ポリオキシエチレン、ポリオール脂肪酸エステル、ポリオキシエチ
レンエーテル、ポリオキシプロピレン脂肪エーテル、ポリオキシエチレンを含む
みつろう誘導体、ポリオキシエチレンラノリン誘導体、ポリオキシエチレン脂肪
グリセリド、グリセロール脂肪酸エステル、または他のポリオキシエチレン酸ア
ルコール、または１２〜２２個の炭素原子の長鎖脂肪酸のエーテル誘導体。

【００６８】 本発明の免疫原性組成物は多相系であることが意図されるので、約７〜１６の
範囲のＨＬＢ値を有するエマルジョン形成非イオン性界面活性剤を選択すること
が好ましい。この値は、単一の非イオン性界面活性剤（例えば、ＴＷＥＥＮ（登
録商標）界面活性剤）の使用を通して得られ得るか、あるいは例えば、ソルビタ
ンモノエステル、ジエステルもしくはトリエステルベースの界面活性剤；ソルビ
タンエステルポリオキシエチレン脂肪酸；ポリオキシエチレンラノリン誘導体化
界面活性剤と組み合わされたソルビタンエステル；高いＨＬＢのポリオキシエチ
レン脂肪エーテル界面活性剤と組み合わせたソルビタンエステル界面活性剤；ま
たはポリエチレン脂肪エーテル界面活性剤もしくはポリオキシエチレンソルビタ
ン脂肪酸と、界面活性剤との混和物の使用によって達成され得る。

【００６９】 単一の非イオン性界面活性剤、最も詳細にはＴＷＥＥＮ（登録商標）界面活性
剤を、本発明の実施においてエマルジョン安定化非イオン性界面活性剤として使
用することがより好ましい。ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０という名称の界面活性
剤（それ以外では、ポリオキシエチレン２０ソルビタンモノオレートについての
ポリソルベート８０として公知）が、前述の界面活性剤のうち最も好ましい。

【００７０】 十分な液滴サイズの減少は、通常、０．０２重量％〜２．５重量％（ｗ／ｗ）
の量で存在する界面活性剤を含めることによってもたらされ得る。０．０５％〜
１％の量が好ましく、ここで０．０１〜０．５％が特に好ましい。

【００７１】 本発明の液滴サイズが到達する様式は、本発明の実施に重要ではない。ミクロ
ン未満の油性液滴が得られ得る１つの様式は、商業的な乳化器（例えば、Ｍｉｃ
ｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡから入手可能なモデル番号１１０Ｙ
）の使用によってである。他の商業的な乳化器の例としては、Ｇａｕｌｉｎ Ｍ
ｏｄｅｌ ３０ＣＤ（Ｇａｕｌｉｎ，Ｉｎｃ．，Ｅｖｅｒｅｔｔ，ＭＡ）および
Ｒａｉｎｎｉｅ Ｍｉｎｉｌａｂ Ｔｙｐｅ８．３０Ｈ（Ｍｉｒｏ Ａｔｏｍｉ
ｚｅｒ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ｄａｉｒｙ，Ｉｎｃ．，Ｈｕｄｓｏｎ，ＷＩ）が挙
げられる。これらの乳化器は、高圧下で小さな開口部を通して流体を押し込むこ
とによって開発された高剪断力の原理によって作動する。モデル１１０Ｙが、５
，０００〜３０，０００ｐｓｉで作動される場合、１００〜７５０ｎｍの直径を
有する油性液滴が、提供される。

【００７２】 油性液滴のサイズは、油に対する洗剤の比率（比率を増加させると、液滴のサ
イズが減少する）、作動圧力（作動圧力を増加させると、液滴のサイズが減少す
る）、温度（温度を増加させると、液滴のサイズが減少する）を変化させること
によって、および両親媒性免疫刺激剤を加えること（このような因子を加えると
、液滴のサイズが減少する）によって変動され得る。実際の液滴サイズは、特定
の洗剤、油、および免疫刺激剤（もしあれば）、ならびに選択される特定の作動
条件により変動する。液滴のサイズは、サイズ測定（ｓｉｚｉｎｇ）機器（例え
ば、Ｃｏｕｌｔｅｒ Ｃｏｒｐｏｒａｉｏｎにより製造される、商業的なＳｕｂ
−Ｍｉｃｒｏｎ Ｐａｒｔｉｃｌｅ Ａｎａｌｙｚｅｒ（Ｍｏｄｅｌ Ｎ４ＭＤ
）の使用によって検証され得、そしてパラメータは、実質的に全ての液滴が直径
１ミクロン未満、好ましくは直径０．８ミクロン未満、および最も好ましくは直
径０．５ミクロン未満であるまで、上記の指針を使用して変動され得る。実質的
に全てとは、少なくとも約８０％（数による）、好ましくは少なくとも約９０％
、より好ましくは少なくとも約９５％、および最も好ましくは少なくとも約９８
％を意味する。粒子サイズの分布は、代表的には、Ｇａｕｓｓｉａｎであり、そ
の結果、平均直径は、上記の限界よりも小さい。

【００７３】 本発明は、満足のいく免疫原性のためにミクロン未満のエマルジョンで使用さ
れ得る先行技術において以前に教示された他の成分（すなわち、ポリオキシロピ
レン（ｐｏｌｙｏｘｙｌｒｏｐｙｌｅｎｅ）−ポリオキシエチレンブロックポリ
マー（例えば、米国特許第４，７７２，４６６号および同第４，７７０，８７４
号ならびにＥＰ−Ａ２−０３１５１５３におけるアジュバントを用いる使用につ
いて記載されるもの））の非存在下で油性エマルジョンを調製することによって
実施され得る。

【００７４】 本発明の免疫原性組成物は、ＰＯＰ−ＰＯＥコポリマー以外の代謝可能な水中
油の乳化剤を含む。乳化剤は、任意の特定の免疫刺激活性を有する必要がない。
なぜなら、油性組成物はそれ自体、油性液滴がミクロン未満の範囲にある場合に
、アジュバントとして機能し得るからである。しかし、免疫刺激活性の増加は、
組成物中に任意の既知の免疫刺激剤を含めることによって提供され得る。これら
の免疫刺激剤は、乳化剤および油または免疫刺激剤から分離され得るかのいずれ
かであり、そしてこの乳化剤は、１つでありかつ同じ分子であり得る。前者の状
況の例としては、殺滅されたミコバクテリア（例えば、Ｍｙｃｏｂａｃｔｅｒｉ
ｕｍ ｔｕｂｅｒｃｕｌｏｓｉｓ）およびその細胞性成分と混合された代謝可能
な油が挙げられる。さらなる免疫刺激物質としては、このような細菌の細胞壁の
成分であるムラミルペプチドが挙げられ、そしてその誘導体が挙げられる。関節
乳化剤／免疫刺激剤の例は、Ｓａｎｃｈｅｚ−Ｐｅｓｃａｄｏｒら、Ｊ．Ｉｍｍ
ｕｎｏｌ．，１９８８，１４１，１７２０〜１７２７（この開示は、その全体に
おいて本明細書中に参考として援用される）に記載される脂溶性ムラミルペプチ
ドである。これらの物質としては、免疫刺激群である塩基性Ｎ−アセチルムラミ
ルペプチド（親水性部分）が挙げられるが、得られた化合物に表面活性特性を提
供する脂溶性部分もまた挙げられる。このような化合物、および他の型の両親媒
性免疫刺激物質は、免疫刺激剤および乳化剤の両方として作用し、そして本発明
の実施に好ましい。さらに、両親媒性ではない第２の免疫刺激物質と組み合わせ
て、両親媒性免疫刺激物質を使用することによって本発明を実施することもまた
、可能である。例は、本質的に非置換（すなわち、本質的に親水性）のムラミル
ジペプチドと組み合わせた、脂溶性ムラミルペプチドの使用である。

【００７５】 好ましい油性液滴エマルジョンは、ＭＦ５９である。ＭＦ５９は、例えば、Ｏ
ｔｔら，Ｖａｃｃｉｎｅ Ｄｅｓｉｇｎ：Ｔｈｅ Ｓｕｂｕｎｉｔ Ａｎｄ Ａ
ｄｊｕｖａｎｔ Ａｐｒｏａｃｈ，１９９５，Ｍ．Ｆ．ＰｏｗｅｌｌおよびＭ．
Ｊ．Ｎｅｗｍａｎ編、Ｐｌｅｎｕｍ Ｐｒｅｓｓ，Ｎｅｗ Ｙｏｒｋ，２７７〜
２９６頁；Ｓｉｎｇｈら，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９８，１６，１８２２〜１８２
７；Ｏｔｔら，Ｖａｃｃｉｎｅ，１９９５，１３，１５５７〜１５６２；ならび
にＶａｌｅｎｓｉら，Ｊ．Ｉｍｍｕｎｏｌ．，１９９４，１５３，４０２９〜３
９（これらの開示は、それらの全体において本明細書中に参考として援用される
）に記載される手順に従って作製され得る。

【００７６】 動物は、腹腔、筋肉内または皮下の経路によって、種々のアジュバント／免疫
原性組成物を投与され得る。

【００７７】 本発明の免疫原性組成物の組成は、有効量の抗原を用いる。すなわち、Ｎｅｉ
ｓｓｅｒｉａにその後に曝されることから被験体を保護するために、被験体が特
異的かつ十分な免疫学的応答、好ましくはＴリンパ球応答を生成する量の抗原を
、アジュバントと組み合わせて含む。

【００７８】 本発明に用いられ得る各々のかつ全ての抗原に関する詳細な指針を提供する単
回用量の指定は、割り当てられ得ない。有効量の抗原は、その固有の活性および
純度の関数であり、そして慣用的な実験を通じて、当業者に経験的に決定される
。本発明のアジュバント組成物は、細胞全体またはウイルス全体の免疫原性組成
物、および組換えＤＮＡ技術または合成により調製された精製抗原またはタンパ
ク質サブユニットもしくはペプチド免疫原性組成物と組み合わせて使用され得る
ことが意図される。本発明のアジュバント組成物は、安定であることから、抗原
およびエマルジョンは、単に振盪することによって混合され得る。他の技術（例
えば、アジュバントおよび抗原の溶液または懸濁液の混合物を、小さな開口部（
例えば、皮下針）に迅速に通すこと）は、有用な免疫原性組成物を容易に提供す
る。

【００７９】 本発明に従うアジュバントおよび免疫原性組成物は、約１ナノグラム〜約１０
００マイクログラムの核酸、好ましくはＤＮＡ（例えば、ＣＧオリゴヌクレオチ
ドなど）を含む。いくつかの好ましい実施形態において、免疫原性組成物は、約
１０ナノグラム〜約８００マイクログラムの核酸を含む。いくつかの好ましい実
施形態において、免疫原性組成物は、約０．１〜約５００マイクログラムの核酸
を含む。いくつかの好ましい実施形態において、免疫原性組成物は、約１〜約３
５０マイクログラムの核酸を含む。いくつかの好ましい実施形態において、免疫
原性組成物は、約２５〜約２５０マイクログラムの核酸を含む。いくつかの好ま
しい実施形態において、免疫原性組成物は、約１００マイクログラムの核酸を含
む。当業者は、任意の所望の量の核酸を含む免疫原性組成物を容易に処方し得る
。本発明に従う免疫原性組成物は、無菌かつ発熱性物質陰性で提供される。免疫
原性組成物は、単位投薬形態において従来通りに投与され得、そして薬学分野に
おいて周知の任意の方法（例えば、Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅ
ｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ，Ｐ
Ａ，１９８０に記載される）（この開示は、その全体において本明細書中に参考
として援用される）によって調製され得る。

【００８０】 本発明に従う免疫原性組成物は、免疫刺激量のＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原を含む
。免疫刺激量は、測定可能な体液性または細胞性免疫応答を誘導するに十分な量
である。例えば、本発明の免疫原性組成物は、約１ナノグラム〜約１０００マイ
クログラムの抗原または約１０ナノグラム〜約８００マイクログラムの抗原を含
む。いくつかの実施形態において、免疫原性組成物は、約０．１〜約５００マイ
クログラムの抗原を含む。いくつかの好ましい実施形態において、免疫原性組成
物は、約１〜約３５０マイクログラムの抗原を含む。いくつかの好ましい実施形
態において、免疫原性組成物は、約２５〜約２５０マイクログラムの抗原を含む
。いくつかの好ましい実施形態において、免疫原性組成物は、約１００マイクロ
グラムの抗原を含む。当業者は、慣用的な実験を通じて当業者により経験的に決
定され得る、任意の所望の量の抗原を含む免疫原性組成物を容易に処方する。免
疫原性組成物は、単位投薬形態において従来通りに投与され得、そして例えば、
Ｒｅｍｉｎｇｔｏｎ’ｓ Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅｓ（
Ｍａｃｋ Ｐｕｂ．Ｃｏ．Ｅａｓｔｏｎ，ＰＡ，１９８０）（この開示は、その
全体において本明細書中に参考として援用される）に記載されるように、薬学分
野で周知の任意の方法によって調製され得る。

【００８１】 本発明はまた、本明細書中に記載されるようなＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原と組み
合わせて、本明細書中に記載されるようなＣＧオリゴヌクレオチドとともに、本
明細書中に記載されるようなアジュバントを含むワクチン組成物に関する。この
ようなワクチン組成物（例えば、実施例に示されるワクチン組成物）は、殺菌性
である体液性免疫応答を誘発する。

【００８２】 本発明はまた、宿主動物において免疫応答を刺激する方法に関する。この方法
は、免疫応答を誘導するに有効な量において上記の免疫原性組成物を動物に投与
する工程を包含する。この宿主動物は、好ましくは哺乳動物であり、より好まし
くはヒトである。投与に好ましい経路としては、筋肉内、腹腔内、皮内、皮下、
静脈内、動脈内、眼内および経口、ならびに経皮または吸入もしくは坐剤によっ
てが挙げられるがこれらに限定されない。最も好ましい投与経路としては、筋肉
内、腹腔内、皮内および皮下の注射が挙げられる。本発明のいくつかの実施形態
に従うと、免疫原性組成物は、無針注射デバイス（これは周知であり、そして広
範に利用可能である）を使用して、宿主動物に投与される。当業者は、本明細書
中の教示に従って、無針注射デバイスを使用して、個体の細胞に免疫原性組成物
を送達し得る。

【００８３】 本発明はまた、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染に対して宿主動物を免疫する方法また
はＮｅｉｓｓｅｒｉａに感染した宿主動物を処置する方法に関する。この方法は
、防御応答を誘導するに有効な量において、本明細書中に記載される免疫原性組
成物またはワクチン組成物を動物に投与する工程を包含する。宿主動物は、好ま
しくは哺乳動物であり、より好ましくはヒトである。好ましい投与経路は、本明
細書中に記載されている。

【００８４】 （発明を実施するための様式） 本発明はさらに、本発明を明解にすることが意図される以下の実施例によって
例示される。前述の例は、本発明を例示することを意味し、そして本発明をいか
なる様式にも限定すると解釈されるべきではない。当業者は、本発明の精神およ
び範囲内にある改変を認識する。

【００８５】 （実施例１：アジュバント組成物の調製） ＭＴＰ−ＰＥは、ＣＩＢＡ−ＧＥＩＧＹ（Ｂａｓａｌ，Ｓｗｉｔｚｅｒｌａｎ
ｄ）によって提供された。スクアレンおよびＴＷＥＥＮ（登録商標）８０を、Ｓ
ｉｇｍａ Ｃｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｓｔ．Ｌｏｕｉｓ，ＭＯ）から入手した
。ＣＦＡおよびＩＦＡを、Ｇｉｂｃｏ（Ｇｒａｎｄ Ｉｓｌａｎｄ，ＮＹ）から
入手した。水酸化アンモニウム（Ｒｅｈｓｏｒｐｔａｒ）を、Ｒｅｈｅｉｓ Ｃ
ｈｅｍｉｃａｌ Ｃｏ．（Ｂｅｒｋｅｌｅｙ Ｈｅｉｇｈｔｓ ＮＪ）から入手
した。

【００８６】 油性液滴エマルジョンの調製物を、多くの方法によって作製した。第１の方法
において、リン酸緩衝化生理食塩水（ＰＢＳ）中の４％スクアレン、０．００８
％ ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０、２５０μｇ／ｍｌ ＭＴＰ−ＰＥおよび抗原
からなる混合物を、２３ゲージの針に６回通した。このエマルジョンは、１０ミ
クロンの範囲内の油性液滴サイズからなり、そしてＭＴＰ−ＰＥ−ＬＯと呼ばれ
る。第２の方法は、上記の混合物を、Ｋｉｒｋｌａｎｄ乳化器に５回通す工程を
含む。このエマルジョンは、主に１〜２ミクロンの油性液滴からなった。そして
これは、ＭＴＰ−ＰＥ−ＬＯ−ＫＥと呼ばれる。Ｋｉｒｋｌａｎｄ乳化器（Ｋｉ
ｒｋｌａｎｄ Ｐｒｏｄｕｃｔｓ，Ｗａｌｎｕｔ Ｃｒｅｅｋ，ＣＡ）は、作動
チャンバー中で約１０００ｐｓｉで生成する、商業的なナイフ刃のホモジナイザ
ー（例えば、Ｇａｕｌｉｎ Ｍｏｄｅｌ ３０ＣＤおよびＲａｉｎｎｉｅ Ｍｉ
ｎｉｌａｂ Ｔｙｐｅ ８．３０Ｈ）の小規模バージョンである。第３の方法に
おいて、ＴＷＥＥＮ（登録商標）８０とともに、または、ＴＷＥＥＮ（登録商標
）８０なしで、０．３〜１８％スクアレンおよび０．２〜１．０ｍｇ／ｍｌのＭ
ＴＰ−ＰＥを含む混合物を、５，０００〜３０，０００ｐｓｉにて、Ｍｉｃｒｏ
ｆｌｕｉｄｉｚｅｒ（Ｍｏｄｅｌ番号１１０Ｙ Ｍｉｃｒｏｆｌｕｉｄｉｃｓ，
Ｎｅｗｔｏｎ，ＭＡ）に通した。代表的には、マイクロフルイダイザー（ｍｉｃ
ｒｏｆｌｕｉｄｉｚｅｒ）中で、５０ｍｌのエマルジョンを５分間混合するか、
または１００ｍｌを１０分間混合した。得られたエマルジョンは、スクアレン、
ＭＴＰ−ＰＥ、ならびに洗剤濃度およびマイクロフルイダイザー作動圧力および
温度に依存して、１００〜７５０ｎｍの油性液滴からなった。この組成物は、Ｍ
ＴＰ−ＰＥ−ＬＯ−ＭＦと呼ばれる。

【００８７】 （実施例２：抗原調製物） ＭｅｍＢ抗原９１９をコードする遺伝子を、以下のプライマーを使用してＭｅ
ｎＢ染色体ＤＮＡから増幅した：正方向プライマー５’−ｃｇｃｇｇａｔｃｃｃ
ａｔａｔｇｔｇｃｃａａａｇｃａａｇａｇｃａｔｃ−３’（配列番号２８）、逆
方向プライマー５’−ｃｃｃｇｃｔｃｇａｇｃｇｇｇｃｇｇｔａｔｔｃｇｇｇ−
３’（配列番号２９）。

【００８８】 増幅後に、ＰＣＲ産物をアガロースゲルから溶出し、そして１μｇのＤＮＡを
、増幅されたフラグメントの５’端および３’端でそれぞれ切断する、制限酵素
ＮｄｅＩおよびＸｈｏＩで消化した。消化後に、このフラグメントを、ＱＩＡｑ
ｕｉｃｋ Ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ Ｋｉｔ（Ｑｉａｇｅｎ）を使用して精製
して、そして予めＮｄｅＩおよびＸｈｏＩで切断したプラスミドｐＥＴ（Ｎｏｖ
ａｇｅｎ）に連結した。この連結混合物を使用して、Ｅ．ｃｏｌｉ ＤＨ５細胞
を形質転換して、そして組換えプラスミドを保有するコロニーを、アンピシリン
含有プレート上で選択した。１つの陽性クローンから、ｐＥＴ−９１９と命名さ
れたプラスミドを、Ｑｉａｇｅｎからのプラスミド調製キットを使用して調製し
、そしてこのプラスミドを使用して、Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１−ＤＥ３細胞を形
質転換した。

【００８９】 Ｅ．ｃｏｌｉ ＢＬ２１−ＤＥ３（ｐＧＥＸ−９１９）株を、１００μｇのア
ンピシリンを補充した５００ｍｌのＬＢ中で３０℃で増殖させた。ＯＤ₆₀₀値が
０．５に達したときに、この培養物に、１ｍＭ ＩＰＴＧを補充して、そしてさ
らに３時間培養した。細胞を遠心分離によって収集し、そして７．５ｍｌの氷冷
イミダゾール緩衝液（３００ｍＭ ＮａＣｌ、５０ｍＭ リン酸緩衝液、１０ｍ
Ｍ イミダゾール（ｐＨ８））中で、Ｂｒａｎｓｏｎ超音波破砕器Ｂ−１５を使
用する氷上での超音波破砕によって破壊した。遠心分離による細胞片の分離の後
に、この上清を、１ｍｌのＮｉ²⁺樹脂（Ｐｈａｒｍａｃｉａ）とともに混合して
、そして室温で３０分間維持した。この樹脂を遠心分離によって収集し、１０ｍ
ｌの氷冷１０ｍＭイミダゾール緩衝液を用いて洗浄し、そして小さな使い捨てカ
ラムにロードした。次いで、このカラムを、１０ｍｌの２０ｍＭイミダゾール緩
衝液で洗浄して、そして最終的に、このタンパク質を、２５０ｍＭイミダゾール
緩衝液を用いて溶出させた。このタンパク質を、ＰＢＳ中で透析して、そして−
２０℃で保存した。

【００９０】 ＭｅｎＢ９１９のヌクレオチド配列（配列番号３０）を、以下に示す：

【００９１】

【化１】 「ｙ」は、「ｃ」または「ｔ」のいずれかであると理解されるべきである。 ＭｅｎＢ９１９ペプチドのアミノ酸配列（配列番号３１）を、以下に示す：

【００９２】

【化２】 。

【００９３】 （実施例３：免疫化） ４匹のＣＤ１マウスの群に、５個のワクチン処方物（以下の表１に示される）
の１つを与えた。このワクチンを、７５μｌのタンパク質調製物（２０μｇのタ
ンパク質）と７５μｌの特定のアジュバントとを混合することによって処方した
。ミョウバンを使用したときは、２０μｇのタンパク質および１ｍｇ/ｍｌの最
終濃度でミョウバンを含む１５０μｌの溶液を使用した。最終的に、９１９−Ｃ
ｐＧオリゴ−ＣＦＡ処方物の場合には、配列：５’−ｔｃｃａｔｇａｃｇｔｔｃ
ｃｔｇａｃｇｔｔ−３’（配列番号１）を有する２０μｇのホスホロチオエート
オリゴデオキシヌクレオチド（Ｏｌｉｇｏｓ，Ｅｔｃｄ．ＵＳＡ）を、免疫前に
、７５μｌの最終容量のＣＦＡ中で、２０μｇのタンパク質とともに混合した。
このワクチンを、１日目および２１日目に腹腔内に投与して、そして血清サンプ
ルを、各注射の１５日後に採取した。

【００９４】 （実施例４：ＥＬＩＳＡアッセイ） ＭｅｎＢ Ｍ７細胞を、０．４のＯＤ₆₂₀値を有する７ｍｌの液体培養物から
遠心分離によって収集した。細胞をＰＢＳ中で１回洗浄し、次いで０．０２５％
ホルムアルデヒドを含むＰＢＳ中に再懸濁した。２時間の室温でのインキュベー
ションおよび４℃で一晩のさらなるインキュベーションの後に、細胞を９６ウェ
ルのＧｒａｉｎｅｒプレート（１００μｌ／ウェル）に分配し、そして４℃で一
晩維持した。次いでこのウェルを、ＰＢＴ（０．１％ Ｔｗｅｅｎ−２０のＰＢ
Ｓ）で三回洗浄して、その後に２００μｌの飽和緩衝液（２．７％ポリビニルピ
ロリドン１０の水）を加えた。ＰＢＴでの洗浄の後に、２００μｌの希釈した血
清（希釈緩衝液：１％ ＢＳＡ、０．１％ Ｔｗｅｅｎ−２０、０．１％ Ｎａ
Ｎ₃のＰＢＳ）を、各ウェルに加えて、そしてプレートを３７℃で９０分間イン
キュベートした。洗浄後に、希釈緩衝液で１：２０００に希釈された１００μｌ
のＨＲＰ結合体化ウサギ抗マウス（Ｄａｋｏ）血清を、各ウェルに加えて、そし
てこのプレートを３７℃で９０分間インキュベートした。ウェルをＰＢＴ緩衝液
で三回洗浄した。ＨＲＰに対する１００μｌの基質緩衝液（２５ｍｌクエン酸緩
衝液（ｐＨ５．０）、１０ｍｇ Ｏ−フェニルジアミン、１０μｌのＨ₂Ｏ₂）を
、各ウェルに加えて、そしてプレートを室温で２０分間維持した。最終的に、１
００μｌのＨ₂ＳＯ₂を各ウェルに加えて、そしてＯＤ₄₉₀値を計測した。ＥＬＩ
ＳＡ力価を、０．４のＯ．Ｄ．を与える血清の希釈としてだいたい決定した。各
免疫スケジュールからの血清のプールのＥＬＩＳＡ力価を、以下の表１に報告す
る。示されるように、１用量のワクチン後の最高の抗体力価は、９１９−ＩＦＡ
および９１９−ＣＦＡ−オリゴであった。９１９−ＣＦＡ−オリゴは、９１９−
ＩＦＡの２倍高い力価を与えた。さらに、９１９−ＣＦＡ−オリゴは、９１９−
ＣＦＡとの応答および９１９−ＣＦＡ単独よりも大きな応答を生じた。抗体力価
は測定されることから、応答は同様に、９１９−オリゴ単独よりも大きいことが
予測される。第２の用量の後に、９１９−ＣＦＡ−オリゴは、最高の処方物であ
ることがわかった。これは、使用されたいずれの他の処方物よりも、ほとんど１
オーダー高い強度の抗体力価を生じた。

【００９５】 表１：異なるアジュバント処方物とともに９１９抗原を使用したＥＬＩＳＡ力
価

【００９６】

【表１】 （実施例５：殺菌アッセイ） ＭｅｎＢ２９９６株を、ＯＤ₆₂₀値０．５〜０．８に達するまで、液体培養物
（Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎブロス）中で増殖させた。次いで、この細胞を遠
心分離によって収集して、そしてＧｅｙ緩衝液１％ ＢＳＡ（Ｇｉｂｃｏ）中に
再懸濁して、ＯＤ₆₂₀が０．５の懸濁液を得た。最終的に、この懸濁液を、Ｇｅ
ｙ緩衝液１％ ＢＳＡで１：２０，０００に希釈して、そして２５℃で保存した
。殺菌アッセイについては、１％ ＢＳＡを含む５０μｌのＧｅｙ緩衝液を、２
５μｌの希釈したマウス血清（希釈緩衝液：１％ ＢＳＡを含むＧｅｙ緩衝液）
、２５μｌの細菌懸濁液およびμｌの熱非働化（５６℃で３０分間）または通常
の仔ウサギ補体のいずれかに加えて、各ウェルに添加した。仔ウサギ補体の添加
の直後に、２２μｌの各サンプルを、Ｍｕｌｌｅｒ−Ｈｉｎｔｏｎアガープレー
ト上にプレートして、次いで９６ウェルプレートを、回転下で３７℃でインキュ
ベートした。各ウェルからの２２μｌのサンプルを、１時間のインキュベーショ
ンの後に以前に述べたようにプレートした。ＭｅｎＢの増殖速度は、２時間でお
よそ２倍である。

【００９７】 各群からの血清のプールの殺菌活性を、表２に示す。プレートをコロニーが目
に見えるようになるまで３７℃で維持した。ＭｅｎＢ細菌コロニーの数を、時間
０および１時間後に計数した。最高の殺菌活性は、９１９−ＣＦＡ−オリゴ処方
物で免疫されたマウス由来の血清で見出された。これは、９１９−ＣＦＡを含む
使用された他の処方物よりも少なくとも２倍高い殺菌活性を示した。さらに、９
１９−ＣＦＡ−オリゴは、９１９−ＣＦＡとの応答および９１９−ＣＦＡ単独で
の応答よりも高い応答を生じた。抗体力価が測定されているように、この応答は
同様に、９１９−オリゴ単独よりも大きいことが期待される。 表２：異なるアジュバント処方物を使用しての９１９抗原の殺菌活性

【００９８】

【表２】 。

【００９９】 （実施例６：さらなる抗原） 上記の実施例にて使用された抗原「９１９」に加えて、またはこの抗原の代わ
りに、本発明の組成物は、以下の１以上のタンパク質抗原を含み得る： ・ＷＯ９９／５７２８０に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント； ・ＷＯ９９／３６５４４に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント； ・ＷＯ９９／２４５７８に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント； ・ＷＯ９９／２８２７３に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント； ・ＷＯ９９／２９４１２に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント； ・ＷＯ９９／０３４１３に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント； ・ＷＯ９９／３１１３２に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント； ・ＷＯ９９／５８６８３に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント； ・ＷＯ９９／５５８７３に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグメ
ント；および／または ・ＧＢ−９９２８１９７．４に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラ
グメント。

【０１００】 組成物がＷＯ９９／２４５７８に開示されるタンパク質を含む場合、上記のタ
ンパク質は、好ましくは、ＷＯ９９／２４５７８に開示されるように、以下の配
列番号からなる群より選択されるアミノ酸配列（あるいは、これらの配列番号の
１以上の免疫原性フラグメントを含むタンパク質、またはこれらの配列番号のう
ちの１つに配列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％
、８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有する配列を含むタンパク質）を
含む：

【０１０１】

【化３】 この組成物がＷＯ９９／３６５４４に開示されるタンパク質を含む場合、上記
のタンパク質は、好ましくは、以下のＷＯ９９／３６５４４に開示されるような
、配列番号からなる群より選択されるアミノ酸配列（あるいは１以上のこれらの
配列番号の免疫原性フラグメントを含むタンパク質、またはこれらの配列番号の
うちの１つに配列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０
％、８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有する配列を含むタンパク質）
を含む：

【０１０２】

【化４】 組成物がＷＯ９９／５７２８０に開示されるタンパク質を含む場合、上記のタ
ンパク質は、好ましくは、ＷＯ９９／５７２８０に開示されるような、以下の配
列番号からなる群より選択されるアミノ酸配列（あるいは１以上のこれらの配列
番号の免疫原性フラグメントを含むタンパク質、またはこれらの配列番号のうち
の１つに配列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％、
８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有する配列同一性を有する配列を含
むタンパク質）を含む：

【０１０３】

【化５】 組成物が、ＷＯ９９／２８２７３に開示されるタンパク質を含む場合、上記の
タンパク質は、好ましくは、ＷＯ９７／２８２７３の図４または図１３に開示さ
れるタンパク質（あるいは、その免疫原性フラグメントを含むタンパク質、また
はこのタンパク質に対して配列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、
６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有する配列を含む
タンパク質）を含む。

【０１０４】 組成物がＷＯ９６／２９４１２に開示されるタンパク質を含む場合、上記のタ
ンパク質は、好ましくは、ＷＯ９６／２９４１２に開示される配列番号１〜８か
らなる群より選択されるアミノ酸配列（あるいは１以上のこれらの配列番号から
なる群より選択される免疫原性フラグメントを含むタンパク質、またはこれらの
配列番号のうちの１つに配列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６
０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有する配列同一性を
含むタンパク質）を含む。

【０１０５】 組成物が、ＷＯ９５／０３４１３に開示されるタンパク質を含む場合、上記の
タンパク質は、好ましくは、ＷＯ９５／０３４１３に開示される配列番号１〜２
３からなる群より選択されるアミノ酸配列（あるいは１以上のこれらの配列番号
からなる群より選択される免疫原性フラグメントを含むタンパク質、またはこれ
らの配列番号のうちの１つに配列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば
、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有する配列同一
性を含むタンパク質）を含む。

【０１０６】 組成物が、ＷＯ９９／３１１３２に開示されるタンパク質を含む場合、上記の
タンパク質は、好ましくは、ＷＯ９９／３１１３２に開示される配列番号２から
なる群より選択されるアミノ酸配列（あるいは配列番号２の免疫原性フラグメン
トを含むタンパク質、または配列番号２に配列同一性（好ましくは、５０％を超
える（例えば、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有
する配列同一性を含むタンパク質）を含む。

【０１０７】 組成物が、ＷＯ９９／５８６８３に開示されるタンパク質を含む場合、上記の
タンパク質は、好ましくは、ＷＯ９９／５８６８３に開示される配列番号２もし
くは配列番号４からなる群より選択されるアミノ酸配列（あるいは配列番号２も
しくは配列番号４の免疫原性フラグメントを含むタンパク質、または配列番号２
もしくは配列番号４に配列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６０
％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有する配列同一性を含
むタンパク質）を含む。

【０１０８】 組成物が、ＷＯ９９／５５８７３に開示されるタンパク質を含む場合、上記の
タンパク質は、好ましくは、ＷＯ９９／５５８７３に開示される配列番号２もし
くは配列番号４からなる群より選択されるアミノ酸配列（あるいは配列番号２も
しくは配列番号４の免疫原性フラグメントを含むタンパク質、または配列番号２
もしくは配列番号４に配列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６０
％、７０％、８０％、９０％、９５％、９９％以上））を有する配列同一性を含
むタンパク質）を含む。

【０１０９】 組成物がＧＢ−９９２８１９７．４に開示されるタンパク質を含む場合、上記
のタンパク質は、好ましくは、以下の（ｉ）、（ｉｉ）または（ｉｉｉ）のうち
の１つを含む： （ｉ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群（ｓｅｒｏｇｒｏｕｐ）Ｂアミノ
酸配列：

【０１１０】

【化６】 あるいはその免疫原性フラグメントを含むタンパク質、またはこれらに対して配
列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％、８０％、９
０％、９５％、９９％以上））を有する配列を含むタンパク質。このタンパク質
は、そのシグナルペプチドＭＫＬＫＱＩＡＳＡＬＭＭＬＧＩＳＰＬＡＬＡを欠損
し得る； （ｉｉ）Ｎ．ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅアミノ酸配列：

【０１１１】

【化７】 あるいはその免疫原性フラグメントを含むタンパク質、またはこれらに対して配
列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％、８０％、９
０％、９５％、９９％以上））を有する配列を含むタンパク質。このタンパク質
は、そのシグナルペプチドＭＫＬＫＱＩＡＳＡＬＭＭＬＧＩＳＰＬＡＦＡを欠損
し得る； （ｉｉｉ）Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ血清群Ａアミノ酸配列：

【０１１２】

【化８】 あるいはその免疫原性フラグメントを含むタンパク質、またはこれらに対して配
列同一性（好ましくは、５０％を超える（例えば、６０％、７０％、８０％、９
０％、９５％、９９％以上））を有する配列を含むタンパク質。このタンパク質
は、そのシグナルペプチドＭＫＬＫＱＩＡＳＡＬＭＶＬＧＩＳＰＬＡＬＡを欠損
し得る。

【０１１３】 Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原としての使用に好ましいタンパク質は、以下である：
・ＷＯ９９／５７２８０の配列番号３０６９〜３０７４および３２０７〜３２４
１によって示されるタンパク質「９１９」（その中の図２３および実施例１５も
また参照のこと）。 ・ＷＯ９９／５７２８０の配列番号８６９〜８７４および３１４９〜３１７８に
よって示されるタンパク質「２３５」（その中の図２０および実施例１２もまた
参照のこと）。 ・ＷＯ９９／５７２８０の配列番号３０４５〜３０５６および３１８５〜３２０
６によって示されるタンパク質「５１９」（その中の図２２および実施例１４も
また参照のこと）。 ・ＷＯ９９／５７２８０の配列番号７９３〜８０４および３１１５〜３１４８に
よって示されるタンパク質「２２５」（その中の図１９および実施例１１もまた
参照のこと）。 ・ＷＯ９９／３６５４４の実施例１（配列番号１〜６）によって示されるタンパ
ク質「ＯＲＦ４０」（ＧＢ−９９１０１６８．５の図１もまた参照のこと；ＷＯ
９９／３１１３２およびＷＯ９９／５８６８３もまた参照のこと）。 ・ＷＯ９９／２４５７８の実施例２６（配列番号２１５〜２２６）によって示さ
れるタンパク質「ＯＲＦ４」（ＧＢ−９９１０１６８．５の図２もまた参照のこ
と）。

【０１１４】 本出願は例示の目的のみで本発明を記載し、そして改変は本発明の精神および
範囲内に留まるようになされ得ることが理解される。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｎ 15/00 ＺＮＡＡ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ (72)発明者 ラップオーリ， リノ イタリア国 イ−53100 シエナ， １， ビア フィオレンティーナ， インステ ィテュート リサーチェ イムノビオロジ ーチェ， カイロン エセ．ピー．アー． (72)発明者 ジウリアーニ， マルツィア モニカ イタリア国 イ−53100 シエナ， １， ビア フィオレンティーナ， インステ ィテュート リサーチェ イムノビオロジ ーチェ， カイロン エセ．ピー．アー． (72)発明者 ピッツァ， マリアグラツィア イタリア国 イ−53100 シエナ， １， ビア フィオレンティーナ， インステ ィテュート リサーチェ イムノビオロジ ーチェ， カイロン エセ．ピー．アー． Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA31 CA01 4C085 AA02 AA03 BA16 CC07 DD86 EE01 EE06 FF12 FF18 FF19 FF20 GG03 GG04 GG06 4C086 EA16 MA05 MA23 MA56 MA65 MA66 NA14 ZB35 4H045 AA11 AA30 EA31

Claims (42)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 免疫原性組成物であって、以下： （ａ）免疫を刺激する量のＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原；および （ｂ）免疫を刺激する量のアジュバント組成物であって、少なくとも１つのＣ
   Ｇモチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む、組成物、 を含む、組成物。
2. 【請求項２】 請求項１に記載の組成物であって、前記Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ
   抗原が、タンパク質、タンパク質−多糖類、タンパク質−リポ多糖類、多糖類、
   およびリポ多糖類からなる群より選択される、組成物。
3. 【請求項３】 請求項１〜２のいずれか１項に記載の組成物であって、前記
   Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ抗原が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに
   かまたはＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｇｏｎｏｒｒｈｏｅａｅに由来する、組成物。
4. 【請求項４】 請求項３に記載の組成物であって、前記Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ
   抗原が、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ 血清型Ｂペプチドで
   ある、組成物。
5. 【請求項５】 請求項４に記載の組成物であって、前記ペプチドが配列番号
   ３１を含む、組成物。
6. 【請求項６】 請求項１〜５のいずれか１項に記載の組成物であって、成分
   （ｂ）がさらに第２のアジュバントを含む、組成物。
7. 【請求項７】 請求項６に記載の組成物であって、前記第２のアジュバント
   が油性液滴エマルジョンを含む、組成物。
8. 【請求項８】 請求項７に記載の組成物であって、前記油性液滴エマルジョ
   ンが、代謝可能な油および乳化剤を含む、組成物。
9. 【請求項９】 請求項８に記載の組成物であって、全くポリオキシプロピレ
   ン−ポリオキシエチレンブロックコポリマーの非存在下で存在し、前記油および
   前記乳化剤が、油性液滴を有する水中油エマルジョンの形態で存在し、その油性
   液滴の実質的にすべてが直径１ミクロン未満である、組成物。
10. 【請求項１０】 請求項９に記載の組成物であって、前記油が、動物油、不
    飽和炭化水素、植物油、またはテルペノイドである、組成物。
11. 【請求項１１】 請求項１０に記載の組成物であって、前記テルペノイドが
    スクアレンである、組成物。
12. 【請求項１２】 請求項８〜１１のいずれか１項に記載の組成物であって、
    水性媒体中に０．５〜２０体積％の前記油を含む、組成物。
13. 【請求項１３】 請求項８〜１２のいずれか１項に記載の組成物であって、
    前記乳化剤が、非イオン性洗剤、あるいはポリオキシエチレンソルビタンモノエ
    ステル、ポリオキシエチレンソルビタンジエステル、もしくはポリオキシエチレ
    ンソルビタントリエステル、またはソルビタンモノエステル、ソルビタンジエス
    テル、もしくはソルビタントリエステルを含む、組成物。
14. 【請求項１４】 請求項８〜１３のいずれか１項に記載の組成物であって、
    ０．０１〜０．５重量％の前記乳化剤を含む、組成物。
15. 【請求項１５】 請求項１〜１４のいずれか１項に記載の組成物であって、
    別個の免疫刺激剤をさらに含む、組成物。
16. 【請求項１６】 請求項１５に記載の組成物であって、前記免疫刺激剤が、
    細菌細胞壁成分およびムラミルペプチドからなる群より選択される、組成物。
17. 【請求項１７】 請求項６〜１６のいずれか１項に記載の組成物であって、
    前記第２のアジュバントが、ミョウバン、不完全フロイントアジュバント（ＩＦ
    Ａ）、または完全フロイントアジュバント（ＣＦＡ）を含む、組成物。
18. 【請求項１８】 請求項１〜１７のいずれか１項に記載の組成物であって、
    前記オリゴヌクレオチドが、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む、
    組成物。
19. 【請求項１９】 請求項１〜１８のいずれか１項に記載の組成物であって、
    前記オリゴヌクレオチドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４
    、配列番号５、配列番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１
    ０、配列番号１１、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５
    、配列番号１６、配列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、
    配列番号２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配
    列番号２６、および配列番号２７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を
    含む、組成物。
20. 【請求項２０】 請求項１〜１９のいずれか１項に記載の組成物であって、
    前記オリゴヌクレオチドが、ＣＧモチーフを含み、該モチーフが、５’側ですぐ
    に２つのプリンと隣接し、そして３’側ですぐにピリミジンと隣接する、組成物
    。
21. 【請求項２１】 請求項２０に記載の組成物であって、前記オリゴヌクレオ
    チドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号７、配列番号８、配列
    番号９、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２０、配列番号
    ２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５からな
    る群より選択されるヌクレオチド配列を含む、組成物。
22. 【請求項２２】 請求項１〜２１のいずれか１項に記載の組成物であって、
    以下のタンパク質： ・ＷＯ９９／５７２８０に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント； ・ＷＯ９９／３６５４４に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント； ・ＷＯ９９／２４５７８に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント； ・ＷＯ９７／２８２７３に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント； ・ＷＯ９６／２９４１２に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント； ・ＷＯ９５／０３４１３に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント； ・ＷＯ９９／３１１３２に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント； ・ＷＯ９９／５８６８３に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント； ・ＷＯ９９／５５８７３に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フラグ
    メント；ならびに／あるいは ・ＧＢ−９９２８１９７．４に開示されるタンパク質、またはその免疫原性フ
    ラグメント、 のうちの１つ以上をさらに含む、組成物。
23. 【請求項２３】 ワクチン組成物であって、以下： ａ）免疫を刺激する量のＮｅｉｓｓｅｒｉａ抗原；および ｂ）免疫を刺激する量のアジュバント組成物であって、少なくとも１つのＣＧ
    モチーフを含むオリゴヌクレオチドを含む、組成物、 を含む、ワクチン組成物。
24. 【請求項２４】 請求項２３に記載のワクチン組成物であって、成分（ｂ）
    が、第２のアジュバントをさらに含む、ワクチン組成物。
25. 【請求項２５】 請求項２３または請求項２４に記載のワクチン組成物であ
    って、前記ペプチドが配列番号３１を含む、ワクチン組成物。
26. 【請求項２６】 請求項２３〜２５のいずれか１項に記載のワクチン組成物
    であって、請求項２〜２１のいずれか１項においてさらに規定されるような、ワ
    クチン組成物。
27. 【請求項２７】 アジュバント組成物であって、以下： ａ）オリゴヌクレオチドであって、少なくとも１つのＣＧモチーフを含む、オ
    リゴヌクレオチド；および ｂ）完全フロイントアジュバント、 を含む、組成物。
28. 【請求項２８】 請求項２７に記載の組成物であって、前記オリゴヌクレオ
    チドが、少なくとも１つのホスホロチオエート結合を含む、組成物。
29. 【請求項２９】 請求項２７に記載の組成物であって、前記オリゴヌクレオ
    チドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号４、配列番号５、配列
    番号６、配列番号７、配列番号８、配列番号９、配列番号１０、配列番号１１、
    配列番号１２、配列番号１３、配列番号１４、配列番号１５、配列番号１６、配
    列番号１７、配列番号１８、配列番号１９、配列番号２０、配列番号２１、配列
    番号２２、配列番号２３、配列番号２４、配列番号２５、配列番号２６、および
    配列番号２７からなる群より選択されるヌクレオチド配列を含む、組成物。
30. 【請求項３０】 請求項２７に記載の組成物であって、前記オリゴヌクレオ
    チドがＣＧモチーフを含み、該モチーフが、５’側ですぐ２つのプリンと隣接し
    、そして３’側ですぐ２つのピリミジンと隣接する、組成物。
31. 【請求項３１】 請求項３０に記載の組成物であって、前記オリゴヌクレオ
    チドが、配列番号１、配列番号２、配列番号３、配列番号７、配列番号８、配列
    番号９、配列番号１２、配列番号１３、配列番号１９、配列番号２０、配列番号
    ２１、配列番号２２、配列番号２３、配列番号２４、および配列番号２５からな
    る群より選択されるヌクレオチド配列を含む、組成物。
32. 【請求項３２】 宿主動物において免疫応答を刺激する方法であって、該動
    物に、免疫応答を誘導するに有効な量の請求項１〜２２のいずれか１項に記載の
    組成物を投与する工程を包含する、方法。
33. 【請求項３３】 請求項３２に記載の方法であって、前記宿主動物が哺乳動
    物である、方法。
34. 【請求項３４】 Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ感染に対して宿主動物を免疫する方法
    であって、該動物に、防御応答を誘導するに有効な量の請求項２３〜２６のいず
    れか１項に記載の組成物を投与する工程を包含する、方法。
35. 【請求項３５】 請求項３４に記載の方法であって、前記宿主動物が哺乳動
    物である、方法。
36. 【請求項３６】 請求項３５に記載の方法であって、前記哺乳動物がヒトで
    ある、方法。
37. 【請求項３７】 Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓに対して
    宿主動物を免疫する方法であって、該動物に、防御応答を誘導するに有効な量の
    請求項２３〜２６のいずれか１項に記載の組成物を投与する工程を包含し、前記
    抗原がＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ Ｂ群ペプチドである、
    方法。
38. 【請求項３８】 請求項３７に記載の方法であって、前記ペプチドが配列番
    号３１を含む、方法。
39. 【請求項３９】 請求項３８に記載の方法であって、前記宿主動物がヒトで
    ある、方法。
40. 【請求項４０】 薬剤における使用のための、請求項１〜２９のいずれか１
    項に規定されるような組成物。
41. 【請求項４１】 動物において免疫応答を誘導するための医薬の製造におけ
    る、請求項１〜３１のいずれか１項に規定されるような組成物の使用。
42. 【請求項４２】 請求項４１に記載の使用であって、前記組成物が請求項１
    に規定されるような組成物であり、そして前記医薬が動物における防御免疫応答
    を誘導するためのものである、使用。