JP2002533695A - スライド上で生物学的試料を効率的に処理する装置および方法 - Google Patents
スライド上で生物学的試料を効率的に処理する装置および方法Info
- Publication number
- JP2002533695A JP2002533695A JP2000590782A JP2000590782A JP2002533695A JP 2002533695 A JP2002533695 A JP 2002533695A JP 2000590782 A JP2000590782 A JP 2000590782A JP 2000590782 A JP2000590782 A JP 2000590782A JP 2002533695 A JP2002533695 A JP 2002533695A
- Authority
- JP
- Japan
- Prior art keywords
- slide
- well
- tray
- reagents
- biological sample
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 title claims abstract description 98
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 66
- 238000012545 processing Methods 0.000 title claims abstract description 42
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 178
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 78
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 69
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims abstract description 33
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims description 49
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 34
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 30
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 29
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 29
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 19
- 238000007901 in situ hybridization Methods 0.000 claims description 15
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 15
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims description 12
- 230000003321 amplification Effects 0.000 claims description 11
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 claims description 11
- 238000001035 drying Methods 0.000 claims description 8
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 8
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 7
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 7
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 7
- 230000008569 process Effects 0.000 claims description 6
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims description 6
- 239000013068 control sample Substances 0.000 claims description 5
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 claims description 5
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 5
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 claims description 3
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 claims description 3
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 claims description 3
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 2
- 230000001351 cycling effect Effects 0.000 claims 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 claims 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 abstract description 41
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 abstract description 31
- 238000004040 coloring Methods 0.000 abstract description 7
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 59
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 50
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 43
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 31
- 239000006059 cover glass Substances 0.000 description 30
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 28
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 28
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 23
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 17
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 16
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 15
- WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N Formaldehyde Chemical compound O=C WSFSSNUMVMOOMR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N [4-(4-hydrazinylphenyl)phenyl]hydrazine Chemical compound C1=CC(NN)=CC=C1C1=CC=C(NN)C=C1 SXEHKFHPFVVDIR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 13
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 12
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 11
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 11
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N O-Xylene Chemical compound CC1=CC=CC=C1C CTQNGGLPUBDAKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 238000007850 in situ PCR Methods 0.000 description 10
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 10
- 239000008096 xylene Substances 0.000 description 10
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 9
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 8
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 8
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 8
- SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N Digoxigenin Natural products C1CC(C2C(C3(C)CCC(O)CC3CC2)CC2O)(O)C2(C)C1C1=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- 230000009471 action Effects 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N digitoxigenin Natural products CC12CCC(C3(CCC(O)CC3CC3)C)C3C11OC1CC2C1=CC(=O)OC1 QONQRTHLHBTMGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 7
- SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N digoxigenin Chemical compound C1([C@@H]2[C@@]3([C@@](CC2)(O)[C@H]2[C@@H]([C@@]4(C)CC[C@H](O)C[C@H]4CC2)C[C@H]3O)C)=CC(=O)OC1 SHIBSTMRCDJXLN-KCZCNTNESA-N 0.000 description 7
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 7
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 7
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 6
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 6
- 102000016911 Deoxyribonucleases Human genes 0.000 description 6
- 108010053770 Deoxyribonucleases Proteins 0.000 description 6
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 6
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 6
- 239000008367 deionised water Substances 0.000 description 6
- 229910021641 deionized water Inorganic materials 0.000 description 6
- 238000011161 development Methods 0.000 description 6
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 6
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 6
- 238000002509 fluorescent in situ hybridization Methods 0.000 description 6
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 6
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 6
- 239000012188 paraffin wax Substances 0.000 description 6
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 6
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 6
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 5
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 5
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 5
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 5
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 5
- 108091006146 Channels Proteins 0.000 description 4
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 description 4
- 102000006382 Ribonucleases Human genes 0.000 description 4
- 108010083644 Ribonucleases Proteins 0.000 description 4
- PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N Sodium azide Chemical compound [Na+].[N-]=[N+]=[N-] PXIPVTKHYLBLMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N diethyl pyrocarbonate Chemical compound CCOC(=O)OC(=O)OCC FFYPMLJYZAEMQB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 4
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 4
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 4
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 4
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 4
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 description 4
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 4
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 3
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 208000017604 Hodgkin disease Diseases 0.000 description 3
- 208000010747 Hodgkins lymphoma Diseases 0.000 description 3
- 102100023974 Keratin, type II cytoskeletal 7 Human genes 0.000 description 3
- 108010070507 Keratin-7 Proteins 0.000 description 3
- 230000001745 anti-biotin effect Effects 0.000 description 3
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 3
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 3
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 3
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 3
- 238000012864 cross contamination Methods 0.000 description 3
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 3
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 3
- 238000007598 dipping method Methods 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 210000003917 human chromosome Anatomy 0.000 description 3
- 238000003365 immunocytochemistry Methods 0.000 description 3
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 3
- 229920000936 Agarose Polymers 0.000 description 2
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010067770 Endopeptidase K Proteins 0.000 description 2
- YCAGGFXSFQFVQL-UHFFFAOYSA-N Endothion Chemical compound COC1=COC(CSP(=O)(OC)OC)=CC1=O YCAGGFXSFQFVQL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 2
- 102000018071 Immunoglobulin Fc Fragments Human genes 0.000 description 2
- 108010091135 Immunoglobulin Fc Fragments Proteins 0.000 description 2
- 206010025323 Lymphomas Diseases 0.000 description 2
- 101710130181 Protochlorophyllide reductase A, chloroplastic Proteins 0.000 description 2
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 2
- 239000012491 analyte Substances 0.000 description 2
- 238000005452 bending Methods 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 2
- 231100000357 carcinogen Toxicity 0.000 description 2
- 239000003183 carcinogenic agent Substances 0.000 description 2
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 2
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 description 2
- 238000013461 design Methods 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 2
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 2
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 2
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- 230000031864 metaphase Effects 0.000 description 2
- 238000012775 microarray technology Methods 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 2
- 210000002307 prostate Anatomy 0.000 description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 description 2
- 230000002829 reductive effect Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 230000000284 resting effect Effects 0.000 description 2
- 238000007789 sealing Methods 0.000 description 2
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 2
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 2
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 2
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 2
- 239000002699 waste material Substances 0.000 description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- 108091093088 Amplicon Proteins 0.000 description 1
- 206010004593 Bile duct cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 description 1
- 101100314454 Caenorhabditis elegans tra-1 gene Proteins 0.000 description 1
- 102100033029 Carbonic anhydrase-related protein 11 Human genes 0.000 description 1
- 102000003908 Cathepsin D Human genes 0.000 description 1
- 108090000258 Cathepsin D Proteins 0.000 description 1
- 208000031404 Chromosome Aberrations Diseases 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000033616 DNA repair Effects 0.000 description 1
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 description 1
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 description 1
- 206010053717 Fibrous histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 102100022626 Glutamate receptor ionotropic, NMDA 2D Human genes 0.000 description 1
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- 101000867841 Homo sapiens Carbonic anhydrase-related protein 11 Proteins 0.000 description 1
- 101001075218 Homo sapiens Gastrokine-1 Proteins 0.000 description 1
- 101000972840 Homo sapiens Glutamate receptor ionotropic, NMDA 2D Proteins 0.000 description 1
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 1
- 101000878605 Homo sapiens Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Proteins 0.000 description 1
- 101000934341 Homo sapiens T-cell surface glycoprotein CD5 Proteins 0.000 description 1
- 101000759926 Homo sapiens Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1 Proteins 0.000 description 1
- 206010020880 Hypertrophy Diseases 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- 102100032700 Keratin, type I cytoskeletal 20 Human genes 0.000 description 1
- 108010066370 Keratin-20 Proteins 0.000 description 1
- 102100038007 Low affinity immunoglobulin epsilon Fc receptor Human genes 0.000 description 1
- -1 Lyso Proteins 0.000 description 1
- 229910021380 Manganese Chloride Inorganic materials 0.000 description 1
- GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L Manganese chloride Chemical compound Cl[Mn]Cl GLFNIEUTAYBVOC-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 206010027406 Mesothelioma Diseases 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 208000034176 Neoplasms, Germ Cell and Embryonal Diseases 0.000 description 1
- 102000003729 Neprilysin Human genes 0.000 description 1
- 108090000028 Neprilysin Proteins 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 108091005461 Nucleic proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004677 Nylon Substances 0.000 description 1
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 1
- 208000010191 Osteitis Deformans Diseases 0.000 description 1
- 239000012807 PCR reagent Substances 0.000 description 1
- 208000027868 Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 241000219000 Populus Species 0.000 description 1
- 206010060862 Prostate cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000000236 Prostatic Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010066717 Q beta Replicase Proteins 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100030086 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Human genes 0.000 description 1
- 101710100968 Receptor tyrosine-protein kinase erbB-2 Proteins 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 102100025244 T-cell surface glycoprotein CD5 Human genes 0.000 description 1
- 108010006785 Taq Polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102100025038 Ubiquitin carboxyl-terminal hydrolase isozyme L1 Human genes 0.000 description 1
- 230000005856 abnormality Effects 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 239000012042 active reagent Substances 0.000 description 1
- 208000009956 adenocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 1
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 1
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 1
- 208000001119 benign fibrous histiocytoma Diseases 0.000 description 1
- 208000026900 bile duct neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000012620 biological material Substances 0.000 description 1
- 239000002981 blocking agent Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 208000006990 cholangiocarcinoma Diseases 0.000 description 1
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 1
- 239000004020 conductor Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000037029 cross reaction Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 1
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003111 delayed effect Effects 0.000 description 1
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 description 1
- 238000011049 filling Methods 0.000 description 1
- 239000003292 glue Substances 0.000 description 1
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 description 1
- 238000007490 hematoxylin and eosin (H&E) staining Methods 0.000 description 1
- 206010073071 hepatocellular carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012760 immunocytochemical staining Methods 0.000 description 1
- 238000003364 immunohistochemistry Methods 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000007689 inspection Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000007834 ligase chain reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 208000014018 liver neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 208000027202 mammary Paget disease Diseases 0.000 description 1
- 235000002867 manganese chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000011565 manganese chloride Substances 0.000 description 1
- 229940099607 manganese chloride Drugs 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 208000037819 metastatic cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000011575 metastatic malignant neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000002715 modification method Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000003541 multi-stage reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000955 neuroendocrine Effects 0.000 description 1
- 238000007826 nucleic acid assay Methods 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 229920001778 nylon Polymers 0.000 description 1
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 1
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 1
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 230000001817 pituitary effect Effects 0.000 description 1
- 210000004180 plasmocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000012805 post-processing Methods 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 238000005086 pumping Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 238000004064 recycling Methods 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 1
- 238000002791 soaking Methods 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 206010041823 squamous cell carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000007447 staining method Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 230000005945 translocation Effects 0.000 description 1
- 238000009827 uniform distribution Methods 0.000 description 1
- 210000003932 urinary bladder Anatomy 0.000 description 1
- 229920002554 vinyl polymer Polymers 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000010626 work up procedure Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N1/00—Sampling; Preparing specimens for investigation
- G01N1/28—Preparing specimens for investigation including physical details of (bio-)chemical methods covered elsewhere, e.g. G01N33/50, C12Q
- G01N1/30—Staining; Impregnating ; Fixation; Dehydration; Multistep processes for preparing samples of tissue, cell or nucleic acid material and the like for analysis
- G01N1/31—Apparatus therefor
- G01N1/312—Apparatus therefor for samples mounted on planar substrates
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
- Y10T436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10T436/14—Heterocyclic carbon compound [i.e., O, S, N, Se, Te, as only ring hetero atom]
- Y10T436/142222—Hetero-O [e.g., ascorbic acid, etc.]
- Y10T436/143333—Saccharide [e.g., DNA, etc.]
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Immunology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Sampling And Sample Adjustment (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)
- Microscoopes, Condenser (AREA)
Abstract
(57)【要約】
顕微鏡スライド(７０)上の生物学的サンプルの処理方法を記述する。本発明の一態様は、その上にスライドを配置したトレイ(９０)上のウエル(２４)中で前乾燥した試薬を使用すること、特に、逐次的に溶解する前乾燥した複数試薬を使用することである。本発明の他の態様は、アッセイする生物学的サンプルと併せて、顕微鏡スライド(７０)上に直接配置した外部対照(２３０)を使用することである。外部対照(２３０)を、スライドに貼り付け得る膜上に、都合良いように配置することができる。本発明のさらなる態様は、単一スライド上で、細胞サンプルの全染色体の全体染色体彩色を可能とするように、特別に設計されたトレイ(９０)である。本発明は、スライド(７０)に対向してに配置し緩衝液で満たした場合に反応チャンバーとして役立つ、凹形ウエル群を有するカバースリップ(５００)も示す。好ましくは、試薬をウェル(２４)内で前乾燥する。本発明のさらなる態様は、表面に前乾燥した試薬を有するカバースリップ(５００)と一緒に、複数のスライド(７０)を反応チャンバー(２８０)内に配置して、それらの上でサンプルを反応させる方法である。
Description
【０００１】 （発明の背景） 本発明は、多様な目的のためにスライド上で生物学的試料を処理する装置に関
する。生物学的試料は多くの目的のために異種多様なアッセイを用いて分析され
る。病理学者はしばしば生物学的試料を分析するために組織化学または免疫細胞
化学を用い、分子生物学者は生物学的試料などにin situハイブリダイゼーショ
ンまたはin situポリメラーゼ連鎖反応法を行うことがある。分析される試料は
しばしば、パラフィン中に埋め込まれて顕微鏡スライドに取り付けられる。
する。生物学的試料は多くの目的のために異種多様なアッセイを用いて分析され
る。病理学者はしばしば生物学的試料を分析するために組織化学または免疫細胞
化学を用い、分子生物学者は生物学的試料などにin situハイブリダイゼーショ
ンまたはin situポリメラーゼ連鎖反応法を行うことがある。分析される試料は
しばしば、パラフィン中に埋め込まれて顕微鏡スライドに取り付けられる。
【０００２】 アッセイは通常、抗体、酵素および他の高価な試薬の使用を伴うので、試薬の
使用量を最小にしてコストを下げるのが望ましい。現在いくつかの自動化システ
ム（例えば、Ventana ESIHC Staining System, the Shandon Lipshaw Cadenza A
utomated Immunostainer; 参照、Brigati et al. (1988)）があるが、これらの
アッセイはまた非常に労働集約的である。本発明の背景を説明し、実施に関する
さらなる詳細を提供するために、本明細書に用いられる公報および他の文献を出
典明示により本明細書の一部とし、便宜上、付属の参考文献リストに各々まとめ
た。大部分の自動化システムは１回の運転で４０〜４８のスライドを操作し得る
だけである。Fisher自動化システムは１回の運転で１２０のスライドを操作し得
る。免疫細胞化学を行うだけの大部分の自動化システムは、脱パラフィン処理（
deparaffinize）、組織化学（例えばヘマトキシリンおよびエオシン染色）およ
びカバースリップ取付けを行わないので、結果としてこれらは手作業により別々
に行われなければならず、時間および労働集約的である。自動化システムは、ス
ライドを準備し、分析する全工程のごく一部を行うにすぎない。自動化部分の前
に依然手作業で行われる段階には、ケースおよびスライドの分類、スライドの標
識化、自動化装備のプログラミング、毎日の抗体および試薬の製造、スライドに
取り付けられる対照組織の製造およびマイクロ波抗原回復が含まれる。自動化段
階後に依然手作業で行われる処理は、脱水、カバースリップ取付け、スライド標
識化およびスライドとケースの分類である。さらに、多くの市販の既製試薬は、
特別に設計された試薬の使用を必要とする自動化システムには適していない。多
数の試料を処理する製造所は、これらの自動化システムの購入に関連する高いコ
ストおよびアッセイを行うための使い捨て付属品および試薬の使用に関連する高
いコストの支払いをいとわないであろうが、中小規模の製造所は、手作業により
試料を処理しつづけるほうがより費用効果が高い。
使用量を最小にしてコストを下げるのが望ましい。現在いくつかの自動化システ
ム（例えば、Ventana ESIHC Staining System, the Shandon Lipshaw Cadenza A
utomated Immunostainer; 参照、Brigati et al. (1988)）があるが、これらの
アッセイはまた非常に労働集約的である。本発明の背景を説明し、実施に関する
さらなる詳細を提供するために、本明細書に用いられる公報および他の文献を出
典明示により本明細書の一部とし、便宜上、付属の参考文献リストに各々まとめ
た。大部分の自動化システムは１回の運転で４０〜４８のスライドを操作し得る
だけである。Fisher自動化システムは１回の運転で１２０のスライドを操作し得
る。免疫細胞化学を行うだけの大部分の自動化システムは、脱パラフィン処理（
deparaffinize）、組織化学（例えばヘマトキシリンおよびエオシン染色）およ
びカバースリップ取付けを行わないので、結果としてこれらは手作業により別々
に行われなければならず、時間および労働集約的である。自動化システムは、ス
ライドを準備し、分析する全工程のごく一部を行うにすぎない。自動化部分の前
に依然手作業で行われる段階には、ケースおよびスライドの分類、スライドの標
識化、自動化装備のプログラミング、毎日の抗体および試薬の製造、スライドに
取り付けられる対照組織の製造およびマイクロ波抗原回復が含まれる。自動化段
階後に依然手作業で行われる処理は、脱水、カバースリップ取付け、スライド標
識化およびスライドとケースの分類である。さらに、多くの市販の既製試薬は、
特別に設計された試薬の使用を必要とする自動化システムには適していない。多
数の試料を処理する製造所は、これらの自動化システムの購入に関連する高いコ
ストおよびアッセイを行うための使い捨て付属品および試薬の使用に関連する高
いコストの支払いをいとわないであろうが、中小規模の製造所は、手作業により
試料を処理しつづけるほうがより費用効果が高い。
【０００３】 典型的な免疫細胞化学アッセイは一連の多くの段階を要する。これらには：生
検標本（biopsy）からなどの生物学的試料を得ること、試料をホルマリン固定す
ること、試料を一夜処理すること、試料をパラフィンに埋め込むこと、連続切片
を切り出して顕微鏡スライドに取り付けることおよび乾燥させることが含まれる
。これらの段階の後に脱パラフィン処理（deparaffinize）する（キシレン、エ
タノールおよび水における処理）段階が続き、最後にスライドに取り付けられた
試料において反応が行われ得る。典型的には、酵素、一次抗体、二次抗体、検出
試薬、色素原、対比染色などの試薬類を含む一連の溶液を、スライドに滴下し、
インキュベートして、洗浄する。最後に試料を顕微鏡下で観察し得る。明らかに
多くの個別の段階が必要とされ、スライド上の各試料は個別に処理されなければ
ならない。さらに非常に労働集約的であるので、顕微鏡スライド上に取り付けら
れた試料の上部に溶液を単に滴下する通常の使用方法には欠点がある。溶液は生
物学的試料そのものの領域に単に制限されず、溶液は薄い層というより比較的深
い層であり得る。これらの特徴は、非常に高価な試薬の余分な使用を必要とする
。試料を長時間インキュベートしなければならない場合、溶液をスライド上に置
いて、空気中に開放すると、蒸発がおこり得る。蒸発により試薬の濃縮または乾
燥が引き起こされ、高濃度は明らかに望ましくない背景レベルの増加をもたらし
得る。溶液が全体的に蒸発する場合、アッセイは失敗する。カバーを有する湿室
で試料をインキュベートすると蒸発の問題は防ぎ得るが、湿室のカバー上で液化
する水滴がスライド上に落下することもあるのでアッセイが台無しとなる。
検標本（biopsy）からなどの生物学的試料を得ること、試料をホルマリン固定す
ること、試料を一夜処理すること、試料をパラフィンに埋め込むこと、連続切片
を切り出して顕微鏡スライドに取り付けることおよび乾燥させることが含まれる
。これらの段階の後に脱パラフィン処理（deparaffinize）する（キシレン、エ
タノールおよび水における処理）段階が続き、最後にスライドに取り付けられた
試料において反応が行われ得る。典型的には、酵素、一次抗体、二次抗体、検出
試薬、色素原、対比染色などの試薬類を含む一連の溶液を、スライドに滴下し、
インキュベートして、洗浄する。最後に試料を顕微鏡下で観察し得る。明らかに
多くの個別の段階が必要とされ、スライド上の各試料は個別に処理されなければ
ならない。さらに非常に労働集約的であるので、顕微鏡スライド上に取り付けら
れた試料の上部に溶液を単に滴下する通常の使用方法には欠点がある。溶液は生
物学的試料そのものの領域に単に制限されず、溶液は薄い層というより比較的深
い層であり得る。これらの特徴は、非常に高価な試薬の余分な使用を必要とする
。試料を長時間インキュベートしなければならない場合、溶液をスライド上に置
いて、空気中に開放すると、蒸発がおこり得る。蒸発により試薬の濃縮または乾
燥が引き起こされ、高濃度は明らかに望ましくない背景レベルの増加をもたらし
得る。溶液が全体的に蒸発する場合、アッセイは失敗する。カバーを有する湿室
で試料をインキュベートすると蒸発の問題は防ぎ得るが、湿室のカバー上で液化
する水滴がスライド上に落下することもあるのでアッセイが台無しとなる。
【０００４】 ハイコストの自動化システムを用いずに、いくつかの試料を一度により迅速に
アッセイする改良方法は、中小規模の製造所にとって喜ばしいものである。さら
に、試薬の使用をより少量にし、大気中に開放されたスライド上の試料を処理す
ることに関する欠点を克服する方法は、喜ばしい進歩となる。
アッセイする改良方法は、中小規模の製造所にとって喜ばしいものである。さら
に、試薬の使用をより少量にし、大気中に開放されたスライド上の試料を処理す
ることに関する欠点を克服する方法は、喜ばしい進歩となる。
【０００５】 （発明の要約） 本発明は、顕微鏡スライド上に取り付けた（マウントした）生物学的試料につ
いてアッセイを行う装置および方法に関する。この装置および／または方法の使
用は、アッセイをより迅速および好都合に行うのに役立つ。本発明の一態様は、
試薬をトレイの複数ウエル内で予乾燥して使用することであり、それによって単
にアッセイ時にウエルに水または緩衝液を添加するだけでよく、試薬を添加する
必要がないようにすることである。次いで、生物学的試料を予め取りつけたスラ
イドでウエルを覆う。複数ウエルトレイの種々のウエルを、各ウエル内で種々の
試薬を乾燥させて前処理し得る。多段階のアッセイは、複数ウエルトレイの各ウ
エル内で所望の試薬を予乾燥してある一つの複数ウエルトレイからその隣へスラ
イドを装着したスライドホルダーを移動させることにより行い得る。この変形は
、第１セットの試薬が迅速に溶解して生物学的試料に作用し、次いで、第二層が
溶解して第二段階のための試薬を放出するようなやり方で、より少数のトレイ、
うまくゆけば単一トレイの使用のみですむように、各ウエル内で試薬の多層コー
ティングを使用することである。
いてアッセイを行う装置および方法に関する。この装置および／または方法の使
用は、アッセイをより迅速および好都合に行うのに役立つ。本発明の一態様は、
試薬をトレイの複数ウエル内で予乾燥して使用することであり、それによって単
にアッセイ時にウエルに水または緩衝液を添加するだけでよく、試薬を添加する
必要がないようにすることである。次いで、生物学的試料を予め取りつけたスラ
イドでウエルを覆う。複数ウエルトレイの種々のウエルを、各ウエル内で種々の
試薬を乾燥させて前処理し得る。多段階のアッセイは、複数ウエルトレイの各ウ
エル内で所望の試薬を予乾燥してある一つの複数ウエルトレイからその隣へスラ
イドを装着したスライドホルダーを移動させることにより行い得る。この変形は
、第１セットの試薬が迅速に溶解して生物学的試料に作用し、次いで、第二層が
溶解して第二段階のための試薬を放出するようなやり方で、より少数のトレイ、
うまくゆけば単一トレイの使用のみですむように、各ウエル内で試薬の多層コー
ティングを使用することである。
【０００６】 本発明の別の態様は、各スライドに対照をビルトインすることである。これは
そこに陽性対照および陰性対照を取り付けたスライドの一部である。これらの対
照により、各スライドが各自で対照のセットを有するので、各個別のスライドに
ついてアッセイが適切に作動しているか否かを判断し、各スライドについてどれ
が標識として同時に作用しているかを決定することを可能にする。
そこに陽性対照および陰性対照を取り付けたスライドの一部である。これらの対
照により、各スライドが各自で対照のセットを有するので、各個別のスライドに
ついてアッセイが適切に作動しているか否かを判断し、各スライドについてどれ
が標識として同時に作用しているかを決定することを可能にする。
【０００７】 本発明はまた、試薬を保有するための凹面ウエルを有するカバースリップに関
する。このカバースリップは、分析を行うための試薬を保持するが、スライドを
洗浄するために容易に取り外せるように、スライド上に取り付けられ得る。カバ
ースリップはアッセイのためにそこで予乾燥した対照を含み得る。
する。このカバースリップは、分析を行うための試薬を保持するが、スライドを
洗浄するために容易に取り外せるように、スライド上に取り付けられ得る。カバ
ースリップはアッセイのためにそこで予乾燥した対照を含み得る。
【０００８】 本発明の別の態様は、カバースリップを連結した反応室において生物学的試料
を自動処理することであり、該カバースリップにはその上で試薬を予乾燥し、か
つその上に対照の試料を場合により予めスポットしておくこともできる。
を自動処理することであり、該カバースリップにはその上で試薬を予乾燥し、か
つその上に対照の試料を場合により予めスポットしておくこともできる。
【０００９】 図１は、複数のスライド７０を有するスライドホルダー１を例示する。スライ
ドホルダー１は穴１１を設けたハンドル５を含む。スライドホルダーの各開口部
７により、各スライド７０の標識が見える。標識はまたスライドホルダー１の領
域１５に直接添付してもよい。各スライド７０はスライドホルダー１の各スロッ
ト５６に挿入してある。
ドホルダー１は穴１１を設けたハンドル５を含む。スライドホルダーの各開口部
７により、各スライド７０の標識が見える。標識はまたスライドホルダー１の領
域１５に直接添付してもよい。各スライド７０はスライドホルダー１の各スロッ
ト５６に挿入してある。
【００１０】 図２Ａ−Ｂは、トレイ１４およびスライド７０を例示する。図２Ａは、トレイ
１４の正面立面図である。ウエル２４は溝３８によって分けられている。ウエル
２４の境界４４は平らで、ウエル２４の内部より隆起している。溝９０は溝３８
に隣接している。図２Ｂは、図２Ａのライン５４−５４により切断したトレイ１
４の断面図である。この図はウエル２４、溝３８およびウエルの境界４４を示す
。スライド７０は一つのウエル２４上に置かれているところを示す。
１４の正面立面図である。ウエル２４は溝３８によって分けられている。ウエル
２４の境界４４は平らで、ウエル２４の内部より隆起している。溝９０は溝３８
に隣接している。図２Ｂは、図２Ａのライン５４−５４により切断したトレイ１
４の断面図である。この図はウエル２４、溝３８およびウエルの境界４４を示す
。スライド７０は一つのウエル２４上に置かれているところを示す。
【００１１】 図３は、生物学的試料２２０とスタンプ２３０を有するスライド７０を例示す
る。図示したスタンプは、試薬Ａ−Ｆを含有する。
る。図示したスタンプは、試薬Ａ−Ｆを含有する。
【００１２】 図４は、ウエル２４を例示し、該ウエル内には３種の試薬（２５０、２６０お
よび２７０で示される）が乾燥させてあり、該ウエル上には生物学的試料２２０
を取り付けたスライド７０を置いてある。試薬の層を互いに分ける非活性物質の
層は図示していない。
よび２７０で示される）が乾燥させてあり、該ウエル上には生物学的試料２２０
を取り付けたスライド７０を置いてある。試薬の層を互いに分ける非活性物質の
層は図示していない。
【００１３】 図５Ａ−Ｂは、熱サイクラー、ポンプおよび中央処理ユニットと共に、生物学
的試料をアッセイする数段階の自動化処理に用いる多数ウエルのトレイ３３０の
一つのウエルを例示する。図５Ａは、取り付けた生物学的試料２２０がウエルま
たは反応室２８０に置かれているスライド７０を示す。反応室２８０と連結して
いる入口３００および３０２、および出口２９４および２９６を図示している。
反応室２８０の底部を形成するトレイ３３０の一部を２８２として図示している
。反応室の底部２８２が試料２２０を押し付けるのを防ぐ任意の歯止め２８１を
図示している。図５Ａの図は、“開”状態にある反応室の底部２８２を示し、こ
の状態によって反応室２８０は大容量を有する。図５Ｂは、他の任意の装備に連
結している図５Ａのトレイおよびスライドを示す。図５Ｂにおいて、反応室の底
部２８２は“閉”状態にあるので、反応室２８０は図５Ａで示されたのよりも少
ない容量を包含する。反応室の底部２８２を動かすピストン２８４を図示する。
ピストン２８４は中央処理ユニット２８６により制御する。スライド７０に押し
付けられている熱サイクラー２８８を図示する。熱サイクラーはまた中央処理ユ
ニット２８６により制御し得る。管材料は入口３００および３０２、および出口
２９４および２９６に取り付け得る。管材料に取り付けられたポンプ２９０を図
示し、ポンプはタンク２９１または２９２へ、またはタンク２９１または２９２
から、またはゲル２９８へ液体を押し出す。
的試料をアッセイする数段階の自動化処理に用いる多数ウエルのトレイ３３０の
一つのウエルを例示する。図５Ａは、取り付けた生物学的試料２２０がウエルま
たは反応室２８０に置かれているスライド７０を示す。反応室２８０と連結して
いる入口３００および３０２、および出口２９４および２９６を図示している。
反応室２８０の底部を形成するトレイ３３０の一部を２８２として図示している
。反応室の底部２８２が試料２２０を押し付けるのを防ぐ任意の歯止め２８１を
図示している。図５Ａの図は、“開”状態にある反応室の底部２８２を示し、こ
の状態によって反応室２８０は大容量を有する。図５Ｂは、他の任意の装備に連
結している図５Ａのトレイおよびスライドを示す。図５Ｂにおいて、反応室の底
部２８２は“閉”状態にあるので、反応室２８０は図５Ａで示されたのよりも少
ない容量を包含する。反応室の底部２８２を動かすピストン２８４を図示する。
ピストン２８４は中央処理ユニット２８６により制御する。スライド７０に押し
付けられている熱サイクラー２８８を図示する。熱サイクラーはまた中央処理ユ
ニット２８６により制御し得る。管材料は入口３００および３０２、および出口
２９４および２９６に取り付け得る。管材料に取り付けられたポンプ２９０を図
示し、ポンプはタンク２９１または２９２へ、またはタンク２９１または２９２
から、またはゲル２９８へ液体を押し出す。
【００１４】 図６Ａ−Ｅは、単一のスライド上で細胞の多数の染色体の全染色体彩色を行う
ために使用するか、または生物学的試料にin situハイブリダイゼーションまた
はＦＩＳＨを行うために使用し得るトレイを例示する。図６Ａは各ウエル４１０
を有する８ウエルトレイ４００を例示する。各ウエルは隣接のウエルと溝４２０
で分けられている。各ウエル４１０は開口部またはチャネル４３０を有し、そこ
から液体をピペットで採取し得る。図６Ｂは図６Ａに示した８ウエルトレイ４０
０の側面図である。スライド７０はトレイ４００上に示してある。４つのウエル
４１０を図示しているが、そのうちの３つのウエルは空であり、１つは液体で満
たされている。開口部４３０および溝４２０も図示してある。図６Ｃは図６Ａお
よび６Ｂのスライドおよびトレイの正面図である。溝４２０を２つのウエル４１
０の間に示す。ウエル４１０への開口部４３０を図示してある。スライド７０は
トレイ４００の上方に置かれているところを示してあり、スライド７０をトレイ
４００に保持するための任意のクリップ４０２を示してある。図６Ｄは、８ウエ
ル４１０の各々に接触しているスライドの８領域４４０を示しているスライド７
０の概略図である。これは例示にすぎず、実際使用されるスライドにこれらの領
域４４０を実際に表示する必要はない。図６Ｅは、１つの領域４４０の拡大図を
示して、スライド７０上にビルトインした対照を設計する一つの方法を示す。各
領域４４０は核酸４４２を有し、該核酸はアッセイで使用されるプローブをハイ
ブリダイズし、領域４４０の周辺部に配置される。これらの対照はハイブリダイ
ゼーションの間プローブと接触している。
ために使用するか、または生物学的試料にin situハイブリダイゼーションまた
はＦＩＳＨを行うために使用し得るトレイを例示する。図６Ａは各ウエル４１０
を有する８ウエルトレイ４００を例示する。各ウエルは隣接のウエルと溝４２０
で分けられている。各ウエル４１０は開口部またはチャネル４３０を有し、そこ
から液体をピペットで採取し得る。図６Ｂは図６Ａに示した８ウエルトレイ４０
０の側面図である。スライド７０はトレイ４００上に示してある。４つのウエル
４１０を図示しているが、そのうちの３つのウエルは空であり、１つは液体で満
たされている。開口部４３０および溝４２０も図示してある。図６Ｃは図６Ａお
よび６Ｂのスライドおよびトレイの正面図である。溝４２０を２つのウエル４１
０の間に示す。ウエル４１０への開口部４３０を図示してある。スライド７０は
トレイ４００の上方に置かれているところを示してあり、スライド７０をトレイ
４００に保持するための任意のクリップ４０２を示してある。図６Ｄは、８ウエ
ル４１０の各々に接触しているスライドの８領域４４０を示しているスライド７
０の概略図である。これは例示にすぎず、実際使用されるスライドにこれらの領
域４４０を実際に表示する必要はない。図６Ｅは、１つの領域４４０の拡大図を
示して、スライド７０上にビルトインした対照を設計する一つの方法を示す。各
領域４４０は核酸４４２を有し、該核酸はアッセイで使用されるプローブをハイ
ブリダイズし、領域４４０の周辺部に配置される。これらの対照はハイブリダイ
ゼーションの間プローブと接触している。
【００１５】 図７Ａ−Ｈは、凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【００１６】 図８Ａ−Ｄは、カバースリップと連結している顕微鏡スライド上での生物学的
試料の処理を例示する。
試料の処理を例示する。
【００１７】 （技術分野） 本発明は、複数の生物学的試料（生物学的サンプル）を顕微鏡スライド上にお
いて、通常方式より一層迅速かつ効果的なしかもより低コストな方式で、処理す
るための集積システムである。本発明の開示の背景技術は、その多くが米国特許
第5958341号(W.-S. Chu; September 28,1999 付)に記載されており、それらは参
照して本明細書の一部とする。本書の開示中で使用する各部品の付与番号は、も
し本書中に記載がなければ、米国特許第5958341号(W.-S. Chu）に示されている
番号を参照するものである。
いて、通常方式より一層迅速かつ効果的なしかもより低コストな方式で、処理す
るための集積システムである。本発明の開示の背景技術は、その多くが米国特許
第5958341号(W.-S. Chu; September 28,1999 付)に記載されており、それらは参
照して本明細書の一部とする。本書の開示中で使用する各部品の付与番号は、も
し本書中に記載がなければ、米国特許第5958341号(W.-S. Chu）に示されている
番号を参照するものである。
【００１８】 （発明の開示） 生物学的試料とは、組織切片、生検標本(biopsy)、細胞塗布標本(cell smear)
、核酸、タンパク質またはペプチド、染色体、体液またはその他の一般的に顕微
鏡下で観察される生物学的材料、などを意味する。図１および２Ａ−Ｂに例示説
明したシステムは、スライドホルダーとトレイまたはカバースリップ（図７Ａ−
Ｈおよび８Ａ−Ｄ参照）とからなり、同時に多数の、好ましくは６つまでの、顕
微鏡スライドを保持し、多数のスライドの同時処理を可能とするものである。こ
のスライドホルダーは再使用してもよい。
、核酸、タンパク質またはペプチド、染色体、体液またはその他の一般的に顕微
鏡下で観察される生物学的材料、などを意味する。図１および２Ａ−Ｂに例示説
明したシステムは、スライドホルダーとトレイまたはカバースリップ（図７Ａ−
Ｈおよび８Ａ−Ｄ参照）とからなり、同時に多数の、好ましくは６つまでの、顕
微鏡スライドを保持し、多数のスライドの同時処理を可能とするものである。こ
のスライドホルダーは再使用してもよい。
【００１９】 実際では、生物学的試料を分析しようとする各スライド上にマウントする。こ
れはしばしば生物学的試料をホルマリン中で固定させ、該試料をパラフィン中に
埋め込み、薄く連続した切片を該パラフィンまたは凍結した組織から切り出し、
該切片を顕微鏡スライド上にマウントする各段階を含む。これらは室温で一夜乾
燥させる。マウントした生物学的試料は、ある種のアッセイ例えば、染色工程に
付される。このためマウントした各試料は、洗浄段階では試薬を変えて処理する
間一連の異種溶液といつも接触しているように置かれねばならない。本発明では
、各試薬をトレイ１４中の各ウエル２４中に秤り込みまたは予乾燥する。充分な
試薬と緩衝剤をウエル２４に加えて完全に満たし、該ウエル中の溶液が、該ウエ
ル２４の上部に置かれることとなる顕微鏡スライド７０と接触するようにする。
ウエル２４中の溶液と顕微鏡スライド７０との間には気泡が存在してはならない
。正確にウエル２４を満たすか、またはやや多めにウエル２４を満たすようにす
ると、スライド７０をウエル２４の上部に置いたときに軽度のオーバーフローが
生じるようになる（表面張力がウエル２４中の溶液をスライド７０がその上部に
置かれるまで保持している）ので、気泡生成の問題は全くない。ウエル２４中の
スライド７０と接触している液体の毛管作用が、生物学的試料と試薬との横ざま
での良好な接触をウエル２４の全領域で可能とし、かつウエル２４の封止を助け
る。トレイ１４は、ウエルの境界４４の一端にあるフックを含むように設計し得
る。これは、米国特許第5958341号(W.-S. Chu）の図４Ｃおよび４Ｆに示されて
いる。全スライド７０をこのフックに押しつけることにより、全スライドをウエ
ルの境界４４に対して保持させ、各ウエル２４内で試薬との良好な接触を確実に
することができる。
れはしばしば生物学的試料をホルマリン中で固定させ、該試料をパラフィン中に
埋め込み、薄く連続した切片を該パラフィンまたは凍結した組織から切り出し、
該切片を顕微鏡スライド上にマウントする各段階を含む。これらは室温で一夜乾
燥させる。マウントした生物学的試料は、ある種のアッセイ例えば、染色工程に
付される。このためマウントした各試料は、洗浄段階では試薬を変えて処理する
間一連の異種溶液といつも接触しているように置かれねばならない。本発明では
、各試薬をトレイ１４中の各ウエル２４中に秤り込みまたは予乾燥する。充分な
試薬と緩衝剤をウエル２４に加えて完全に満たし、該ウエル中の溶液が、該ウエ
ル２４の上部に置かれることとなる顕微鏡スライド７０と接触するようにする。
ウエル２４中の溶液と顕微鏡スライド７０との間には気泡が存在してはならない
。正確にウエル２４を満たすか、またはやや多めにウエル２４を満たすようにす
ると、スライド７０をウエル２４の上部に置いたときに軽度のオーバーフローが
生じるようになる（表面張力がウエル２４中の溶液をスライド７０がその上部に
置かれるまで保持している）ので、気泡生成の問題は全くない。ウエル２４中の
スライド７０と接触している液体の毛管作用が、生物学的試料と試薬との横ざま
での良好な接触をウエル２４の全領域で可能とし、かつウエル２４の封止を助け
る。トレイ１４は、ウエルの境界４４の一端にあるフックを含むように設計し得
る。これは、米国特許第5958341号(W.-S. Chu）の図４Ｃおよび４Ｆに示されて
いる。全スライド７０をこのフックに押しつけることにより、全スライドをウエ
ルの境界４４に対して保持させ、各ウエル２４内で試薬との良好な接触を確実に
することができる。
【００２０】 上記の要領で各スライド７０をトレイ１４上に置くことにより、マウントした
生物学的試料はウエル２４中で下向きになり、かつ空気に触れないようになる。
このことは、インキュベーションの間中、無関係の物質が試薬中にまたは生物学
的試料上に落ち込むのを防ぐ。さらに、スライド７０はウエル２４を覆い、イン
キュベーションの間中、ウエル２４内の試薬溶液が蒸発することも防ぐ。蒸発は
極めて悪い背景シグナルをもたらし得る。本発明はこの問題の克服にも役立つ。 各試薬とインキュベーションの後、スライドホルダー１とトレイ１４とを摘ま
み上げ、500ml のリン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)を入れた標準的染色皿中に入
れる。ＰＢＳ中に入れると、スライド７０とトレイ１４との間の表面張力は消滅
し、各スライドは極めて容易にトレイから除去できるようになる。次いで各スラ
イドは適当な洗浄段階を経由させる。６つのスライド７０を一回で摘まみ上げる
ことは、それらが全部単一のホルダー１に着いているので簡単なことである。実
験室内の標準的染色皿は、６つのスライド７０を横ざまにして（単一のホルダー
１に着いている場合）収容するのに充分な大きさがあり、また２０のスライドホ
ルダー１を含有し得る。それ故、１２０のスライド７０を同時に洗浄し、処理で
きる。
生物学的試料はウエル２４中で下向きになり、かつ空気に触れないようになる。
このことは、インキュベーションの間中、無関係の物質が試薬中にまたは生物学
的試料上に落ち込むのを防ぐ。さらに、スライド７０はウエル２４を覆い、イン
キュベーションの間中、ウエル２４内の試薬溶液が蒸発することも防ぐ。蒸発は
極めて悪い背景シグナルをもたらし得る。本発明はこの問題の克服にも役立つ。 各試薬とインキュベーションの後、スライドホルダー１とトレイ１４とを摘ま
み上げ、500ml のリン酸塩緩衝生理食塩水(ＰＢＳ)を入れた標準的染色皿中に入
れる。ＰＢＳ中に入れると、スライド７０とトレイ１４との間の表面張力は消滅
し、各スライドは極めて容易にトレイから除去できるようになる。次いで各スラ
イドは適当な洗浄段階を経由させる。６つのスライド７０を一回で摘まみ上げる
ことは、それらが全部単一のホルダー１に着いているので簡単なことである。実
験室内の標準的染色皿は、６つのスライド７０を横ざまにして（単一のホルダー
１に着いている場合）収容するのに充分な大きさがあり、また２０のスライドホ
ルダー１を含有し得る。それ故、１２０のスライド７０を同時に洗浄し、処理で
きる。
【００２１】 上記方法は、汚染を防ぐのに役立つ包み込まれたアッセイシステムとなるので
改良である。また、この包み込まれたシステムは、蒸発を防いで試薬の存在量を
一定にし、その結果、試薬の量が分かっており一定濃度にあるようにする。これ
らの特徴は、単に試薬類をスライド上にマウントした組織試料の上に滴加する、
従ってそれが周囲の雰囲気に開放されており汚染および蒸発が起こり得る従来技
術より、一層良好かつより首尾一貫した結果をもたらす。
改良である。また、この包み込まれたシステムは、蒸発を防いで試薬の存在量を
一定にし、その結果、試薬の量が分かっており一定濃度にあるようにする。これ
らの特徴は、単に試薬類をスライド上にマウントした組織試料の上に滴加する、
従ってそれが周囲の雰囲気に開放されており汚染および蒸発が起こり得る従来技
術より、一層良好かつより首尾一貫した結果をもたらす。
【００２２】 本発明の他の態様は、トレイ１４の複数のウエル２４内で試薬類を前乾燥する
ことであり、その結果、アッセイに際して、該トレイ１４と各スライド７０とを
水または緩衝液に単に浸漬するか、または水または緩衝液をピペットで各ウエル
２４に掛けるだけでよいようにすることである。このトレイ１４は、例えば多数
のウエルを有するトレイ１４の各ウエル２４内に前乾燥した異種試薬類のセット
を有し得る複数ウエルのトレイ１４のような、多数のウエルを有するトレイ１４
の各ウエル２４内に前乾燥した一連の試薬類を含むのもとして製作できる。アッ
セイに際し、各スライド７０は、それらの上に単一の患者由来のまたは異なる患
者群由来の生物学的試料をマウントし、そして単一のトレイ１４上に置いて一度
に多数のアッセイを実施することができる。前乾燥した試薬類を有するそのよう
なトレイ１４は、事前に製作しておき使用時点まで貯蔵することができる。近時
実用されている生物学的試料についての実施アッセイは、試料をスライド上にマ
ウントし、次いで試薬を該試料上に滴加して実施する。そのような方法は、試薬
類が予め測定されており、前乾燥してあるため、水または緩衝液を添加するだけ
で済むというような利点は有し得ない。本明細書中に開示する本発明では、試薬
類はトレイ１４上のウエル２４内で前乾燥しておくことができ、水または緩衝液
をウエル２４に添加し、生物学的試料をそれにマウントしてあるスライド７０を
該ウエル２４上に置き、試料側を下向きにする。水または緩衝液は、スライド７
０をウエル２４の上部に置いてからチューブを経由してウエル２４に加えるよう
にしてもよい。スライド７０をウエル２４上に置くことは、包み込んだ反応室を
形成し、汚染並びに蒸発を防ぐとともに、現時一般的に実施されているようなス
ライド上に溶液を滴加するのと比較して試薬類の均一な分布を確実にする。
ことであり、その結果、アッセイに際して、該トレイ１４と各スライド７０とを
水または緩衝液に単に浸漬するか、または水または緩衝液をピペットで各ウエル
２４に掛けるだけでよいようにすることである。このトレイ１４は、例えば多数
のウエルを有するトレイ１４の各ウエル２４内に前乾燥した異種試薬類のセット
を有し得る複数ウエルのトレイ１４のような、多数のウエルを有するトレイ１４
の各ウエル２４内に前乾燥した一連の試薬類を含むのもとして製作できる。アッ
セイに際し、各スライド７０は、それらの上に単一の患者由来のまたは異なる患
者群由来の生物学的試料をマウントし、そして単一のトレイ１４上に置いて一度
に多数のアッセイを実施することができる。前乾燥した試薬類を有するそのよう
なトレイ１４は、事前に製作しておき使用時点まで貯蔵することができる。近時
実用されている生物学的試料についての実施アッセイは、試料をスライド上にマ
ウントし、次いで試薬を該試料上に滴加して実施する。そのような方法は、試薬
類が予め測定されており、前乾燥してあるため、水または緩衝液を添加するだけ
で済むというような利点は有し得ない。本明細書中に開示する本発明では、試薬
類はトレイ１４上のウエル２４内で前乾燥しておくことができ、水または緩衝液
をウエル２４に添加し、生物学的試料をそれにマウントしてあるスライド７０を
該ウエル２４上に置き、試料側を下向きにする。水または緩衝液は、スライド７
０をウエル２４の上部に置いてからチューブを経由してウエル２４に加えるよう
にしてもよい。スライド７０をウエル２４上に置くことは、包み込んだ反応室を
形成し、汚染並びに蒸発を防ぐとともに、現時一般的に実施されているようなス
ライド上に溶液を滴加するのと比較して試薬類の均一な分布を確実にする。
【００２３】 さらに本発明の別の態様は、各スライド上に、対照および／または標識をビル
トインすることである。既知の対照は、生物学的試料から離れた領域に固定化さ
れたものである。例えば、この対照は、生物学的試料中で検査されようとしてい
る抗原、ペプチド、タンパク質または細胞であることができ、あるいはもしハイ
ブリダイゼーションアッセイが実施されようとしているなら既知配列の核酸でも
あり得る。これらは、アッセイが適切に機能するなら、シグナルを出すかまたは
呈色するような陽性対照として作用する。陰性対照、例えば、タンパク質または
抗原または核酸もスライド上に設けることができるが、ウエル中の試薬類と反応
しないものでなければならない。例えば、６つの抗原性測定物Ａ−Ｆの存在につ
いて検査されると仮定する。各ウエルが異なる抗体Ａ’−Ｆ’を有する１枚の６
ウエルトレイ使用することができる。この６種の異なる抗原性測定物を全６スラ
イド上にスポットしておくことができる。すべての場合に、これらの対照の中で
一つだけが、各スライド上で陽性を示すものであるべきである。例えば、スライ
ドＡは抗原性測定物Ａだけが陽性のシグナルを示すべきであり、スライドＢは抗
原性測定物Ｂだけが陽性のシグナルを示すべきである。これらは外部対照として
働くものである。もし、１以上の対照が陽性を示すならば、これは抗体交叉反応
が起こったことを示す。もし、どの対照も陽性を示さないならば、右反応が起こ
らなかったこと、即ち、その試薬がなくなっていることを示す。検査する生物学
的試料は、内部対照として働く。
トインすることである。既知の対照は、生物学的試料から離れた領域に固定化さ
れたものである。例えば、この対照は、生物学的試料中で検査されようとしてい
る抗原、ペプチド、タンパク質または細胞であることができ、あるいはもしハイ
ブリダイゼーションアッセイが実施されようとしているなら既知配列の核酸でも
あり得る。これらは、アッセイが適切に機能するなら、シグナルを出すかまたは
呈色するような陽性対照として作用する。陰性対照、例えば、タンパク質または
抗原または核酸もスライド上に設けることができるが、ウエル中の試薬類と反応
しないものでなければならない。例えば、６つの抗原性測定物Ａ−Ｆの存在につ
いて検査されると仮定する。各ウエルが異なる抗体Ａ’−Ｆ’を有する１枚の６
ウエルトレイ使用することができる。この６種の異なる抗原性測定物を全６スラ
イド上にスポットしておくことができる。すべての場合に、これらの対照の中で
一つだけが、各スライド上で陽性を示すものであるべきである。例えば、スライ
ドＡは抗原性測定物Ａだけが陽性のシグナルを示すべきであり、スライドＢは抗
原性測定物Ｂだけが陽性のシグナルを示すべきである。これらは外部対照として
働くものである。もし、１以上の対照が陽性を示すならば、これは抗体交叉反応
が起こったことを示す。もし、どの対照も陽性を示さないならば、右反応が起こ
らなかったこと、即ち、その試薬がなくなっていることを示す。検査する生物学
的試料は、内部対照として働く。
【００２４】 外部対照は、各種の手段で各スライド上に置くことができる。好ましいやり方
は、キシレンまたはアルコールに抵抗性の糊を使用する、スタンプやスティッカ
ーと均等な物の上に試薬をスポットすることであり、それは、次いで各スライド
上に糊付けする。それらのスタンプやスティッカーは、それにタンパク質、ペプ
チド、細胞または核酸が緊密に結着する任意の適した材料で製造できる。これに
は、それらに限定されないが、常用の例えば、ニトロセルロース、プラスチック
、ガラスまたはナイロン製膜類が含まれる。そのような膜様材料の具体的な例は
、ニトロセルロースそれ自体、Immobilon-P (Millipore), Hybond-N, Hybond-N+ およびHybond C-extra ニトロセルロース(Amersham), Genescreen および Genes
creen Plus (Du Pont), Clearblot-P (ATTO Co.) およびポリビニルジフルオリ
ド膜類 (Millipore or BioRad)などである。これらのスタンプやスティッカーは
、図３中に示す領域Ａ−Ｆを有し得る。これらのスタンプやスティッカーは、予
め製造しておき、該スタンプやスティッカー上に抗原性測定物である、タンパク
質、ペプチド、細胞または核酸を乾燥させるのにすぐ使用できるよう貯蔵してお
くことができる。これらのスタンプやスティッカー上には、抗原、タンパク質、
細胞、などの名称を印刷しておくことができる。これは大量生産の場合には特に
適している。乳癌検査用パネルまたはホジキンス病検査用パネルのような、アッ
セイの標準的セットを予製しておくことができるが、所望に応じて外部対照とし
て任意の試薬組合わせを設計することも勿論できる。対照のスタンプはスライド
に生物学的試料を置く前にスライドに取付けておいてもよいが、スライドに生物
学的試料をマウントし、その対照に適合する反応を実施するよう処理する時点ま
で対照のスタンプの取付けを遅らせてもよい。
は、キシレンまたはアルコールに抵抗性の糊を使用する、スタンプやスティッカ
ーと均等な物の上に試薬をスポットすることであり、それは、次いで各スライド
上に糊付けする。それらのスタンプやスティッカーは、それにタンパク質、ペプ
チド、細胞または核酸が緊密に結着する任意の適した材料で製造できる。これに
は、それらに限定されないが、常用の例えば、ニトロセルロース、プラスチック
、ガラスまたはナイロン製膜類が含まれる。そのような膜様材料の具体的な例は
、ニトロセルロースそれ自体、Immobilon-P (Millipore), Hybond-N, Hybond-N+ およびHybond C-extra ニトロセルロース(Amersham), Genescreen および Genes
creen Plus (Du Pont), Clearblot-P (ATTO Co.) およびポリビニルジフルオリ
ド膜類 (Millipore or BioRad)などである。これらのスタンプやスティッカーは
、図３中に示す領域Ａ−Ｆを有し得る。これらのスタンプやスティッカーは、予
め製造しておき、該スタンプやスティッカー上に抗原性測定物である、タンパク
質、ペプチド、細胞または核酸を乾燥させるのにすぐ使用できるよう貯蔵してお
くことができる。これらのスタンプやスティッカー上には、抗原、タンパク質、
細胞、などの名称を印刷しておくことができる。これは大量生産の場合には特に
適している。乳癌検査用パネルまたはホジキンス病検査用パネルのような、アッ
セイの標準的セットを予製しておくことができるが、所望に応じて外部対照とし
て任意の試薬組合わせを設計することも勿論できる。対照のスタンプはスライド
に生物学的試料を置く前にスライドに取付けておいてもよいが、スライドに生物
学的試料をマウントし、その対照に適合する反応を実施するよう処理する時点ま
で対照のスタンプの取付けを遅らせてもよい。
【００２５】 このスタンプ類は、実施しようとする特定の検査用パネルを指示する着色コー
ドまたは番号を付しておくことができる。同様にしてトレイ１４も、実施しよう
とする検査用パネルを指示する着色コードまたは番号を付すかその他の標識を付
しておくことができ、それはトレイ１４のウエル２４中で前乾燥する試薬に応ず
るものとする。スタンプとトレイとは、色または番号あるいは他の標識がマッチ
するようにすべきである。 本発明のさらなる態様は、ウエル２４中で乾燥させる試薬類を、それらが働く
順序と逆の各層中で乾燥させ得ることである。緩衝液を加えたとき最後に加えた
試薬がまず溶けて活性となり、続いてその前の最後に加えた試薬が順に活性とな
るような具合にである。このようにして、２またはそれ以上の試薬を単一のウエ
ル２４に加えることができ、その結果、スライド７０を第１のトレイ１４から第
２のトレイ１４へ移動させる要なく、連続的な試薬群の作用を可能とする。多段
階反応の場合、これは必要なトレイ１４の数を減少させ、また、関与する労力を
も減少させる。
ドまたは番号を付しておくことができる。同様にしてトレイ１４も、実施しよう
とする検査用パネルを指示する着色コードまたは番号を付すかその他の標識を付
しておくことができ、それはトレイ１４のウエル２４中で前乾燥する試薬に応ず
るものとする。スタンプとトレイとは、色または番号あるいは他の標識がマッチ
するようにすべきである。 本発明のさらなる態様は、ウエル２４中で乾燥させる試薬類を、それらが働く
順序と逆の各層中で乾燥させ得ることである。緩衝液を加えたとき最後に加えた
試薬がまず溶けて活性となり、続いてその前の最後に加えた試薬が順に活性とな
るような具合にである。このようにして、２またはそれ以上の試薬を単一のウエ
ル２４に加えることができ、その結果、スライド７０を第１のトレイ１４から第
２のトレイ１４へ移動させる要なく、連続的な試薬群の作用を可能とする。多段
階反応の場合、これは必要なトレイ１４の数を減少させ、また、関与する労力を
も減少させる。
【００２６】 本発明の他の態様は、単一スライド上の各セル上で、２４ヒト染色体のすべて
の全染色体描出を実施可能とするように特に設計したトレイまたはチップである
。 本発明のさらなる態様は、トレイのウエル内空間容積を調節して、ＰＣＲのよ
うな反応を実施できる小容積を存在可能とし、そして該空間容積を次いで増加さ
せ、液体が該ウエルを通ってポンプ可能なように調節可能とした、トレイとスラ
イドとの組合せ構成物である。 当業者は、スライド上の検査しようとするタンパク質、ペプチド、ＤＮＡ、Ｒ
ＮＡまたは細胞を含有する試料、あるいは、スタンプ上の対照タンパク質、ペプ
チド、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは細胞は、アッセイの間中解放しないよう固定化して
おくべきことを理解するはずである。タンパク質、ペプチド、核酸、などを含み
得る、トレイ内で前乾燥し得る試薬類は、しかしながら、もし多層化してあるも
のであれば、水または緩衝液を加えたとき、プログラムした順序で解放されなけ
ればならない。
の全染色体描出を実施可能とするように特に設計したトレイまたはチップである
。 本発明のさらなる態様は、トレイのウエル内空間容積を調節して、ＰＣＲのよ
うな反応を実施できる小容積を存在可能とし、そして該空間容積を次いで増加さ
せ、液体が該ウエルを通ってポンプ可能なように調節可能とした、トレイとスラ
イドとの組合せ構成物である。 当業者は、スライド上の検査しようとするタンパク質、ペプチド、ＤＮＡ、Ｒ
ＮＡまたは細胞を含有する試料、あるいは、スタンプ上の対照タンパク質、ペプ
チド、ＤＮＡ、ＲＮＡまたは細胞は、アッセイの間中解放しないよう固定化して
おくべきことを理解するはずである。タンパク質、ペプチド、核酸、などを含み
得る、トレイ内で前乾燥し得る試薬類は、しかしながら、もし多層化してあるも
のであれば、水または緩衝液を加えたとき、プログラムした順序で解放されなけ
ればならない。
【００２７】実施例 各実施例では、生物学的サンプルを顕微鏡スライド７０上に最初にマウントし
、次いでアッセイする。種々の器官(リンパ節、肝臓、腎臓、肺、乳房、皮膚、
前立腺)由来の、外科的および解剖学的なヒトの生物学的サンプルを、１０％中
性緩衝性ホルマリン中で通常通り固定し、組織プロセッサー上で一晩処理し、パ
ラフィン中に埋め込んだ。連続切片を４−５ミクロン厚に切り出し、Probe-On-P
lus Slides(#15-188-52; Fisher Scientific)上にマウントし、室温で一晩乾燥
させた。次いで、スライド７０を、再利用可能なスライドホルダー１中に挿入す
る。この時点で、単一ホルダー１中のすべてのスライド７０(６つまでのスライ
ド)を同時に取り扱うことが出来る。スライド７０は、キシレンを入れ、それぞ
れ５分間づつ４回取りかえた染色皿中にスライド７０を置き、１００％エタノー
ルでそれぞれ１分間づつ２回処理し、そして９５％エタノールでそれぞれ１分間
づつ２回処理し、脱パラフィン化する。各脱パラフィン化組織切片スライド７０
を綺麗にし、脱イオン水で洗浄する。
、次いでアッセイする。種々の器官(リンパ節、肝臓、腎臓、肺、乳房、皮膚、
前立腺)由来の、外科的および解剖学的なヒトの生物学的サンプルを、１０％中
性緩衝性ホルマリン中で通常通り固定し、組織プロセッサー上で一晩処理し、パ
ラフィン中に埋め込んだ。連続切片を４−５ミクロン厚に切り出し、Probe-On-P
lus Slides(#15-188-52; Fisher Scientific)上にマウントし、室温で一晩乾燥
させた。次いで、スライド７０を、再利用可能なスライドホルダー１中に挿入す
る。この時点で、単一ホルダー１中のすべてのスライド７０(６つまでのスライ
ド)を同時に取り扱うことが出来る。スライド７０は、キシレンを入れ、それぞ
れ５分間づつ４回取りかえた染色皿中にスライド７０を置き、１００％エタノー
ルでそれぞれ１分間づつ２回処理し、そして９５％エタノールでそれぞれ１分間
づつ２回処理し、脱パラフィン化する。各脱パラフィン化組織切片スライド７０
を綺麗にし、脱イオン水で洗浄する。
【００２８】 本発明は、更に下記実施例において詳細に説明するが、それは、例示説明のた
めに提供するものであって、いかなる意味においても本発明を制限することを意
図するものではない。当分野に既知の標準的な技術または特に以下に述べる技術
を用いる。
めに提供するものであって、いかなる意味においても本発明を制限することを意
図するものではない。当分野に既知の標準的な技術または特に以下に述べる技術
を用いる。
【００２９】実施例１ 免疫細胞化学 この実施例では、生物学的サンプルは、抗体(一次および二次)で処理し、クロ
モゲンカラー顕色処理し、最終的に対比染色する。
モゲンカラー顕色処理し、最終的に対比染色する。
【００３０】 Ａ．マウントした組織サンプルのタンパク質分解性前処理 当分野では、免疫細胞化学染色用の特定の抗体を用いるとき０．４％ペプシン
、ｐＨ２．０のようなタンパク質分解性酵素によりホルマリン固定した組織切片
を前処理する必要があることが知られている。これが必要であるとき下記のステ
ップが有用となり得る。数滴(150-200μL)のタンパク質分解性消化溶液を３また
は６ウェルトレイ１４の各ウェル２４に置く。スライド７０の組織スライドを下
に向けてウェル２４に合せる。スライド７０を伴うスライドホルダー１をゆっく
りと下し、トレイ１４のウェル２４上に置く。気泡が、スライド７０の組織側と
トレイ１４のウェル２４中の溶液との間に残らないようにすべきである。スライ
ド７０、スライドホルダー１および溶液を有するトレイ１４を１５分間４０℃で
インキュベーションする。
、ｐＨ２．０のようなタンパク質分解性酵素によりホルマリン固定した組織切片
を前処理する必要があることが知られている。これが必要であるとき下記のステ
ップが有用となり得る。数滴(150-200μL)のタンパク質分解性消化溶液を３また
は６ウェルトレイ１４の各ウェル２４に置く。スライド７０の組織スライドを下
に向けてウェル２４に合せる。スライド７０を伴うスライドホルダー１をゆっく
りと下し、トレイ１４のウェル２４上に置く。気泡が、スライド７０の組織側と
トレイ１４のウェル２４中の溶液との間に残らないようにすべきである。スライ
ド７０、スライドホルダー１および溶液を有するトレイ１４を１５分間４０℃で
インキュベーションする。
【００３１】 多くのサンプルを一度に処理しようとするならば、このタンパク質分解性前処
理ステップの間はトレイ１４の使用を差し控えるとより効率的である。まだ、ス
ライド７０は、一つのホルダー１あたり６つのスライドホルダー１中に置いてお
く。次いで、スライドホルダー１およびスライド７０をタンパク質分解性消化溶
液(再利用し得る)５００ｍＬの入った染色皿中に垂直に入れ、水浴中で２０分間
４０℃でインキュベーションする。この前処理ステップで２０までのスライドホ
ルダー１(１２０スライド)を染色皿中に同時に入れることができる。
理ステップの間はトレイ１４の使用を差し控えるとより効率的である。まだ、ス
ライド７０は、一つのホルダー１あたり６つのスライドホルダー１中に置いてお
く。次いで、スライドホルダー１およびスライド７０をタンパク質分解性消化溶
液(再利用し得る)５００ｍＬの入った染色皿中に垂直に入れ、水浴中で２０分間
４０℃でインキュベーションする。この前処理ステップで２０までのスライドホ
ルダー１(１２０スライド)を染色皿中に同時に入れることができる。
【００３２】 ある種の抗体では、組織切片がマイクロ波抗原修復で前処理する必要がある。
スライド７０を有するスライド１(２０まで)を０．０１Ｍ クエン酸緩衝液５０
０ｍＬの入った染色皿中に垂直に入れ、その染色皿をマイクロ波オーブンの中央
に置き、そして当該オーブンで、ハイパワー(800-850ワット)で７−８分間、溶
液を高速沸騰させる。当該オーブンのスイッチを切り、そのパワーレベルを４０
０ワットにセットし、そのオーブンで再び７−８分間、溶液を加熱する。
スライド７０を有するスライド１(２０まで)を０．０１Ｍ クエン酸緩衝液５０
０ｍＬの入った染色皿中に垂直に入れ、その染色皿をマイクロ波オーブンの中央
に置き、そして当該オーブンで、ハイパワー(800-850ワット)で７−８分間、溶
液を高速沸騰させる。当該オーブンのスイッチを切り、そのパワーレベルを４０
０ワットにセットし、そのオーブンで再び７−８分間、溶液を加熱する。
【００３３】 タンパク質分解性消化およびマイクロ波処理後、組織切片をリン酸塩緩衝性生
理食塩水(ＰＢＳ)各５００ｍＬで３回、染色皿中で洗浄する。
理食塩水(ＰＢＳ)各５００ｍＬで３回、染色皿中で洗浄する。
【００３４】 Ｂ．ヤギおよびウマ血清による組織切片の処理 タンパク質分解性消化およびマイクロ波処理をするにしろ、しないにせよ、室
温で２０−３０分間、５％混合の通常のヤギおよびウマの血清と共にインキュベ
ーションする。トレイ１４の各ウェル２４(約150-200μl)を混合したヤギおよび
ウマ血清で満たす。スライド７０の組織側を下向けてウェル２４上に置き血清と
接触させる。スライドホルダー１を、スライド７０とウェル２４の間に気泡が入
らないようにゆっくりと下す。さらに、多くのサンプルを同時に処理しようとす
るならば、２０までのスライドホルダー１を５％混合の通常のヤギおよびウマ血
清５００ｍＬの入った染色皿中に２０−３０分間、垂直に入れることにより一度
にこのステップを行うことがより効率的である。
温で２０−３０分間、５％混合の通常のヤギおよびウマの血清と共にインキュベ
ーションする。トレイ１４の各ウェル２４(約150-200μl)を混合したヤギおよび
ウマ血清で満たす。スライド７０の組織側を下向けてウェル２４上に置き血清と
接触させる。スライドホルダー１を、スライド７０とウェル２４の間に気泡が入
らないようにゆっくりと下す。さらに、多くのサンプルを同時に処理しようとす
るならば、２０までのスライドホルダー１を５％混合の通常のヤギおよびウマ血
清５００ｍＬの入った染色皿中に２０−３０分間、垂直に入れることにより一度
にこのステップを行うことがより効率的である。
【００３５】 Ｃ．一次抗血清または抗体の適用 血清とのインキュベーション後、スライドホルダー１およびスライド７０なら
びにトレイ１４をＰＢＳの入った染色皿中に入れる。トレイ１４をスライドホル
ダーから離し、両方をＰＢＳで一度洗浄する。洗浄したトレイ１４を次のステッ
プに再利用する。前希釈した一次抗血清または抗体(約150-200μl)をトレイ１４
の各ウェル２４に適用する。まだスライド１内にある洗浄したスライド７０を組
織側を下にウェル２４上にのせる。いつものように、スライド７０とウェル２４
中の試薬溶液との間に気泡が入るのを避けるよう注意しなければならない。当該
サンプルは、室温で２−４時間抗血清または抗体と共にインキュベーションする
か、４０℃２時間、湿チャンバー内でインキュベーションするか、または室温で
一夜、湿チャンバー内でインキュベーションし得る。インキュベーション後、ス
ライドホルダー１および付着スライド７０をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで
３回染色皿中で洗浄する。
びにトレイ１４をＰＢＳの入った染色皿中に入れる。トレイ１４をスライドホル
ダーから離し、両方をＰＢＳで一度洗浄する。洗浄したトレイ１４を次のステッ
プに再利用する。前希釈した一次抗血清または抗体(約150-200μl)をトレイ１４
の各ウェル２４に適用する。まだスライド１内にある洗浄したスライド７０を組
織側を下にウェル２４上にのせる。いつものように、スライド７０とウェル２４
中の試薬溶液との間に気泡が入るのを避けるよう注意しなければならない。当該
サンプルは、室温で２−４時間抗血清または抗体と共にインキュベーションする
か、４０℃２時間、湿チャンバー内でインキュベーションするか、または室温で
一夜、湿チャンバー内でインキュベーションし得る。インキュベーション後、ス
ライドホルダー１および付着スライド７０をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで
３回染色皿中で洗浄する。
【００３６】 Ｄ．二次抗体の適用 前希釈した二次抗体(約150−200μl)を新しいトレイ１４の各ウェル２４中に
適用する。スライドホルダー１のスライド７０を、気泡を注意深く避けながら組
織側を下向けにしてウェル２４上に置く。これを３０分間４０℃、湿チャンバー
内でインキュベーションする。インキュベーション後スライドホルダー１および
付着スライド７０をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで３回、染色皿中で洗浄す
る。
適用する。スライドホルダー１のスライド７０を、気泡を注意深く避けながら組
織側を下向けにしてウェル２４上に置く。これを３０分間４０℃、湿チャンバー
内でインキュベーションする。インキュベーション後スライドホルダー１および
付着スライド７０をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで３回、染色皿中で洗浄す
る。
【００３７】 Ｅ．内因性ペルオキシダーゼ活性除去のための処置 付着スライド７０を有するすべてのスライドホルダー１を３％過酸化水素およ
び０．１％アジド化ナトリウムを有するＰＢＳ５００ｍＬの入った染色皿に入れ
、室温で１５分間インキュベーションする。過酸化水素ＰＢＳとのインキュベー
ション後、スライドホルダー１および付着スライド７０をＰＢＳで３回、染色皿
中で洗浄する。
び０．１％アジド化ナトリウムを有するＰＢＳ５００ｍＬの入った染色皿に入れ
、室温で１５分間インキュベーションする。過酸化水素ＰＢＳとのインキュベー
ション後、スライドホルダー１および付着スライド７０をＰＢＳで３回、染色皿
中で洗浄する。
【００３８】 Ｆ．ＡＢＣ複合体“ＥＬＩＴＥ”の適用 ＡＢＣ複合体(Vector Laboratories Inc., Burlingame, CA)を、ＰＢＳを用い
作業濃度にまで希釈する。作業濃度(約150-200μL)を新しいトレイ１４の各ウェ
ル２４に適用する。スライド７０を付着スライドホルダー１とともに、溶液とス
ライド７０との間に気泡が入らないようにトレイ１４上に組織側を下に注意深く
置く。スライド７０およびＡＢＣ溶液を有するトレイ１４を４０℃３０分間、湿
チャンバー内でインキュベーションする。インキュベーション後、付着スライド
７０を有するスライドホルダー１をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで３回、染
色皿中で洗浄する。
作業濃度にまで希釈する。作業濃度(約150-200μL)を新しいトレイ１４の各ウェ
ル２４に適用する。スライド７０を付着スライドホルダー１とともに、溶液とス
ライド７０との間に気泡が入らないようにトレイ１４上に組織側を下に注意深く
置く。スライド７０およびＡＢＣ溶液を有するトレイ１４を４０℃３０分間、湿
チャンバー内でインキュベーションする。インキュベーション後、付着スライド
７０を有するスライドホルダー１をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで３回、染
色皿中で洗浄する。
【００３９】 Ｇ．ジアミノベンジジン(ＤＡＢ)を用いるクロモゲンカラー顕色 ＤＡＢ溶液を、ＰＢＳ１００ｍＬにＤＡＢ１００ｍｇを添加し、３０％Ｈ２Ｏ ２ ５０μＬを加えることにより調製する。約１５０−２００μＬのＤＡＢ溶液を
、各ウェル２４を完全に満たすように新しいトレイ１４の各ウェル２４に加える
。スライド７０を付着スライドホルダー１とともに気泡が入らないように注意深
く各ウェル２４上に組織側を下向に置く。顕微鏡で、ＤＡＢを有するスライドホ
ルダー１およびトレイ１４を観察することにより色顕色をモニターし得る。着色
沈殿が、陽性細胞の部分において生成する。色は、２−５分後現われ始め、通常
、１０分以内に充分な顕色に到達するが、２０−３０分のインキュベーションが
、染色の弱いサンプルには必要であり得る。顕色を停止するために、スライド７
０を有するすべてのスライドホルダー１をトレイ１４から取り出し、脱イオン水
で３回、染色皿中で洗浄する。
、各ウェル２４を完全に満たすように新しいトレイ１４の各ウェル２４に加える
。スライド７０を付着スライドホルダー１とともに気泡が入らないように注意深
く各ウェル２４上に組織側を下向に置く。顕微鏡で、ＤＡＢを有するスライドホ
ルダー１およびトレイ１４を観察することにより色顕色をモニターし得る。着色
沈殿が、陽性細胞の部分において生成する。色は、２−５分後現われ始め、通常
、１０分以内に充分な顕色に到達するが、２０−３０分のインキュベーションが
、染色の弱いサンプルには必要であり得る。顕色を停止するために、スライド７
０を有するすべてのスライドホルダー１をトレイ１４から取り出し、脱イオン水
で３回、染色皿中で洗浄する。
【００４０】 Ｈ．対比染色 スライドホルダー１および付着スライド７０を１０−５０秒間、Harris's ヘ
マトキシリン中に浸漬し、脱イオン水中に３回くぐらせて洗浄する。次いで、全
てのスライド７０を３０秒間、０．２％水酸化アンモニウム中に浸し、脱イオン
水中に３回くぐらせて洗浄する。スライド７０を９５％エタノール中に２回、そ
れぞれ２分間、少し浸し、その後、１００％エタノール中に２回、それぞれ２分
間、少し浸し、そして、最終的にスライド７０をキシレン中に２回、それぞれ２
分間、少し浸すことにより綺麗にする。
マトキシリン中に浸漬し、脱イオン水中に３回くぐらせて洗浄する。次いで、全
てのスライド７０を３０秒間、０．２％水酸化アンモニウム中に浸し、脱イオン
水中に３回くぐらせて洗浄する。スライド７０を９５％エタノール中に２回、そ
れぞれ２分間、少し浸し、その後、１００％エタノール中に２回、それぞれ２分
間、少し浸し、そして、最終的にスライド７０をキシレン中に２回、それぞれ２
分間、少し浸すことにより綺麗にする。
【００４１】 Ｉ．カバースリップの取付け スライドホルダー１にまだ装着してあるスライド７０について各スライドの組
織片側にCytoseal 60を一滴たらすか該側をプレマウントする。カバーガラスを
各スライド７０上に置く。これは、1つずつ行い得るが、適当に間を空けて整列
させた実際には６つ(または３つ)のカバーガラスを６つ(または３つ)のスライド
７０と対応するように、特に設計したカバーガラスを用いるのがより効率的であ
る。この特別なカバーガラスを用い、６つまでの個々のカバーガラスを実際に整
列させ、同時にスライド７０上に置く。当該カバーガラスは、それらを保持して
いるプラスチックのストリップから、スライド７０と結合したままのカバーガラ
スからストリップをポキッと折れるように予め刻目を付けてあるカバーガラスを
単に曲げることにより、一緒に、容易に分離される。この時点で、各スライド７
０を、個々に取り扱うためにスライドホルダー１から取り出し得るが、あるいは
輸送容易とするためにスライドホルダー１に装着させたままとしてもよい。
織片側にCytoseal 60を一滴たらすか該側をプレマウントする。カバーガラスを
各スライド７０上に置く。これは、1つずつ行い得るが、適当に間を空けて整列
させた実際には６つ(または３つ)のカバーガラスを６つ(または３つ)のスライド
７０と対応するように、特に設計したカバーガラスを用いるのがより効率的であ
る。この特別なカバーガラスを用い、６つまでの個々のカバーガラスを実際に整
列させ、同時にスライド７０上に置く。当該カバーガラスは、それらを保持して
いるプラスチックのストリップから、スライド７０と結合したままのカバーガラ
スからストリップをポキッと折れるように予め刻目を付けてあるカバーガラスを
単に曲げることにより、一緒に、容易に分離される。この時点で、各スライド７
０を、個々に取り扱うためにスライドホルダー１から取り出し得るが、あるいは
輸送容易とするためにスライドホルダー１に装着させたままとしてもよい。
【００４２】 米国特許５,９５８,３４１(W.-S. Chu)の図１０−１２は、本発明の使用と、
スライドにマウントした組織サンプルの表面上に試薬を滴下する標準手動方法を
単に用い、インキュベーションの間中、大気に試薬を開放したままとする、染色
方法と比較する研究の結果について示す。これらの図は、当該２つの方法で得ら
れる結果が、従来の方法を用いて得られる結果と少なくとも同程度およびそれよ
りも良好となる本発明を用いて得られる結果とよく匹敵することを示している。
しかし、本発明では、これらの結果を少ない労力およびより少量の試薬の使用で
得ることを可能とする。
スライドにマウントした組織サンプルの表面上に試薬を滴下する標準手動方法を
単に用い、インキュベーションの間中、大気に試薬を開放したままとする、染色
方法と比較する研究の結果について示す。これらの図は、当該２つの方法で得ら
れる結果が、従来の方法を用いて得られる結果と少なくとも同程度およびそれよ
りも良好となる本発明を用いて得られる結果とよく匹敵することを示している。
しかし、本発明では、これらの結果を少ない労力およびより少量の試薬の使用で
得ることを可能とする。
【００４３】 ２つの方法を比較すると、バックグラウンドの染色は、本発明を使用すること
により、特にポリクローナル抗体(抗κ軽鎖抗体および抗λ軽鎖抗体)を用いると
きに、有意に減少する。本発明は、バックグラウンドを減少することにより、染
色結果を有意に改善する。バックグラウンドは、重力により沈殿し、組織に非特
異的に結合する遊離ＦＣフラグメントに部分的に起因する。本発明の方法は、ス
ライドを逆さまにして当該組織を上記溶液上に位置させ、そのため遊離ＦＣフラ
グメントが重力により組織上に沈殿出来ないようにする。
により、特にポリクローナル抗体(抗κ軽鎖抗体および抗λ軽鎖抗体)を用いると
きに、有意に減少する。本発明は、バックグラウンドを減少することにより、染
色結果を有意に改善する。バックグラウンドは、重力により沈殿し、組織に非特
異的に結合する遊離ＦＣフラグメントに部分的に起因する。本発明の方法は、ス
ライドを逆さまにして当該組織を上記溶液上に位置させ、そのため遊離ＦＣフラ
グメントが重力により組織上に沈殿出来ないようにする。
【００４４】実施例２ in situ ハイブリダイゼーション この実施例では、生物学的サンプルをスライド７０上にマウントし、ビオチン
またはジゴキシゲニン標識プローブでハイブリダイズし、抗ビオチンまたは抗ジ
ゴキシゲニン抗体と反応させる。次いで、当該サンプルを染色する。
またはジゴキシゲニン標識プローブでハイブリダイズし、抗ビオチンまたは抗ジ
ゴキシゲニン抗体と反応させる。次いで、当該サンプルを染色する。
【００４５】 Ａ．組織サンプルの調製および取付け 組織サンプルを、核酸崩壊を防止する余分の手段以外は、上記と同様にして調
製する。組織サンプルを１０％中性緩衝性ホルマリン中で固定し、組織プロセッ
サー上で一夜処理し、パラフィンに埋め込み、４−５ミクロンの連続切片に切り
出し、Probe-On-Plus Slides(#15-188-52; Fisher Scientific)上にマウントし
、室温で一夜乾燥させる。スライド７０をスライドホルダー１に挿入し、染色皿
中に入れることにより脱パラフィン化する。スライド７０をキシレンでそれぞれ
５分間づつ４回処置し、１００％エタノールでそれぞれ１分間づつ２回処置し、
そして、９５％エタノールでそれぞれ１分間づつ２回処置する。次いで、当該脱
パラフィン化組織切片スライドを綺麗にし、RNase Block(BioGenex, San Ramon,
CA)を有する脱イオン水で洗浄する。
製する。組織サンプルを１０％中性緩衝性ホルマリン中で固定し、組織プロセッ
サー上で一夜処理し、パラフィンに埋め込み、４−５ミクロンの連続切片に切り
出し、Probe-On-Plus Slides(#15-188-52; Fisher Scientific)上にマウントし
、室温で一夜乾燥させる。スライド７０をスライドホルダー１に挿入し、染色皿
中に入れることにより脱パラフィン化する。スライド７０をキシレンでそれぞれ
５分間づつ４回処置し、１００％エタノールでそれぞれ１分間づつ２回処置し、
そして、９５％エタノールでそれぞれ１分間づつ２回処置する。次いで、当該脱
パラフィン化組織切片スライドを綺麗にし、RNase Block(BioGenex, San Ramon,
CA)を有する脱イオン水で洗浄する。
【００４６】 Ｂ．マウントした組織サンプルのプロテイナーゼＫ処理 約１５０−２００μＬの新しい希釈プロテイナーゼＫ溶液をトレイ１４の各ウ
ェル２４内に入れ、各ウェル２４を完全に満たす。各顕微鏡スライド７０(まだ
スライドホルダー１にある)を組織側を下向きに各ウェル２４上に置く。スライ
ド７０をウェル２４中の溶液とスライド７０との間に気泡が入らないように注意
深くウェル２４上にのせる。これを１５分間室温でインキュベーションする。
ェル２４内に入れ、各ウェル２４を完全に満たす。各顕微鏡スライド７０(まだ
スライドホルダー１にある)を組織側を下向きに各ウェル２４上に置く。スライ
ド７０をウェル２４中の溶液とスライド７０との間に気泡が入らないように注意
深くウェル２４上にのせる。これを１５分間室温でインキュベーションする。
【００４７】 消化後、スライド７０を装着したスライドホルダー１をトレイ１４から取り出
し、染色皿中、RNase Blockを含有するＰＢＳ５００ｍＬで５分間洗浄する。当
該組織切片スライド７０を、染色皿中の以下の溶液中に連続的に浸漬することに
より、脱水する：RNase Blockを加えた蒸留水５００ｍＬに１０秒間、RNase Blo
ckを加えた５０％エタノール５００ｍＬに１０秒間、９５％エタノール５００ｍ
Ｌに１０秒間、そして１００％エタノール５００ｍＬに１０秒間。当該スライド
７０を室温で５分間乾燥する。
し、染色皿中、RNase Blockを含有するＰＢＳ５００ｍＬで５分間洗浄する。当
該組織切片スライド７０を、染色皿中の以下の溶液中に連続的に浸漬することに
より、脱水する：RNase Blockを加えた蒸留水５００ｍＬに１０秒間、RNase Blo
ckを加えた５０％エタノール５００ｍＬに１０秒間、９５％エタノール５００ｍ
Ｌに１０秒間、そして１００％エタノール５００ｍＬに１０秒間。当該スライド
７０を室温で５分間乾燥する。
【００４８】 Ｃ．ビオチニル化またはジゴキシゲニン標識プローブによるハイブリダイゼーシ
ョン ここでは、浅いウェル２４(深さ０．０２−０．０８)を有するトレイ１４を材
料保持に用い得る。ビオチニル化またはジゴキシゲニン標識オリゴヌクレオチド
プローブを含むハイブリダイゼーション溶液をトレイ１４の各ウェル２４に入れ
る。十分量の溶液を、各ウェル２４に添加してウェル２４を完全に満たす。これ
は、約５０−１００μＬの溶液を必要とする。各スライド７０を、気泡が入らな
いように注意深く各ウェル２４の上部に置く(この時はまだ３または６つをスラ
イドホルダー１に装着させたままである)。スライドホルダー１を有するトレイ
１４およびスライド７０を９５℃のオーブンまたはヒートブロックに８−１０分
間置き、核酸を変性させる。このステップは、ｍＲＮＡ配列のヘアピン構造また
は再度の折畳みを取り除く。当該変性後、スライド７０を湿チャンバー中４５℃
で一夜インキュベーションする。ハイブリダイゼーションステップ後、スライド
７０を、トレイ１４からスライド７０を装着したスライドホルダー１を取り出し
、スライド７０を、染色皿中、２×ＳＳＣ(標準クエン酸生理食塩水)で、３７℃
、５分間洗浄し、その後、１×ＳＳＣで３７℃、５分間洗浄することにより洗浄
する。この後、０．２×ＳＳＣ中で３０分間６０℃で洗浄する。最終的に、スラ
イド７０をＰＢＳで２回、それぞれ２−５分間、洗浄する。
ョン ここでは、浅いウェル２４(深さ０．０２−０．０８)を有するトレイ１４を材
料保持に用い得る。ビオチニル化またはジゴキシゲニン標識オリゴヌクレオチド
プローブを含むハイブリダイゼーション溶液をトレイ１４の各ウェル２４に入れ
る。十分量の溶液を、各ウェル２４に添加してウェル２４を完全に満たす。これ
は、約５０−１００μＬの溶液を必要とする。各スライド７０を、気泡が入らな
いように注意深く各ウェル２４の上部に置く(この時はまだ３または６つをスラ
イドホルダー１に装着させたままである)。スライドホルダー１を有するトレイ
１４およびスライド７０を９５℃のオーブンまたはヒートブロックに８−１０分
間置き、核酸を変性させる。このステップは、ｍＲＮＡ配列のヘアピン構造また
は再度の折畳みを取り除く。当該変性後、スライド７０を湿チャンバー中４５℃
で一夜インキュベーションする。ハイブリダイゼーションステップ後、スライド
７０を、トレイ１４からスライド７０を装着したスライドホルダー１を取り出し
、スライド７０を、染色皿中、２×ＳＳＣ(標準クエン酸生理食塩水)で、３７℃
、５分間洗浄し、その後、１×ＳＳＣで３７℃、５分間洗浄することにより洗浄
する。この後、０．２×ＳＳＣ中で３０分間６０℃で洗浄する。最終的に、スラ
イド７０をＰＢＳで２回、それぞれ２−５分間、洗浄する。
【００４９】 Ｄ．シグナル検出 スライド７０を装着したスライドホルダー１を、５％混合の通常のヤギおよび
ウマ血清５００ｍＬの入った染色皿中に垂直に室温で２０分間入れる。前希釈し
たマウス抗ビオチンまたはマウス抗ジゴキシゲニン抗体(150-200μL)を新しいト
レイ１４の各ウェル２４に適用する。当該スライド７０を、気泡が入らないよう
に注意してトレイ１４のウェル２４上に置く。当該スライド７０および抗体を有
するトレイ１４は湿チャンバー内で４０℃、２時間インキュベーションする。
ウマ血清５００ｍＬの入った染色皿中に垂直に室温で２０分間入れる。前希釈し
たマウス抗ビオチンまたはマウス抗ジゴキシゲニン抗体(150-200μL)を新しいト
レイ１４の各ウェル２４に適用する。当該スライド７０を、気泡が入らないよう
に注意してトレイ１４のウェル２４上に置く。当該スライド７０および抗体を有
するトレイ１４は湿チャンバー内で４０℃、２時間インキュベーションする。
【００５０】 抗ビオチンまたは抗ジゴキシゲニン抗体によるインキュベーション後、スライ
ド７０を有するスライドホルダー１をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで３回、
染色皿中で洗浄する。
ド７０を有するスライドホルダー１をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで３回、
染色皿中で洗浄する。
【００５１】 Ｅ．二次抗体の適用 前希釈二次抗体(約150-200μL)を新しいトレイ１４の各ウェル２４中に適用す
る。スライドホルダー１中の当該スライド７０を、気泡が入らないよう注意深く
組織側を下向にウェル２４上に置く。これを、湿チャンバー中、４０℃、３０分
間インキュベーションする。インキュベーション後、スライドホルダー１および
装着スライド７０をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで３回、染色皿中で洗浄す
る。
る。スライドホルダー１中の当該スライド７０を、気泡が入らないよう注意深く
組織側を下向にウェル２４上に置く。これを、湿チャンバー中、４０℃、３０分
間インキュベーションする。インキュベーション後、スライドホルダー１および
装着スライド７０をトレイ１４から取り出し、ＰＢＳで３回、染色皿中で洗浄す
る。
【００５２】 Ｆ．内因性ペルオキシダーゼ活性の除去処理 スライド７０を装着したすべてのスライドホルダー１を、３％過酸化水素およ
び０．１％アジド化ナトリウムを有するＰＢＳ５００ｍＬの入った染色皿に入れ
、室温で１５分間インキュベーションする。過酸化水素ＰＢＳとのインキュベー
ション後、スライド１および装着スライド７０をＰＢＳで３回、染色皿中で洗浄
する。
び０．１％アジド化ナトリウムを有するＰＢＳ５００ｍＬの入った染色皿に入れ
、室温で１５分間インキュベーションする。過酸化水素ＰＢＳとのインキュベー
ション後、スライド１および装着スライド７０をＰＢＳで３回、染色皿中で洗浄
する。
【００５３】 Ｇ．ＡＢＣ複合体“ＥＬＴＥ”の適用 ＡＢＣ複合体を、ＰＢＳを用い作業濃度にまで希釈する。作業濃度(約150-200
μL)を新しいトレイ１４の各ウェル２４に適用する。装着スライドホルダー１に
装着したスライド７０を、溶液とスライド７０との間に気泡が入らないようにト
レイ１４上に組織側を下向に注意深く置く。スライド７０およびＡＢＣ溶液を有
するトレイ１４を４０℃３０分間、湿チャンバー内でインキュベーションする。
インキュベーション後、スライド７０を装着したスライドホルダー１をトレイ１
４から取り出し、ＰＢＳで３回、染色皿中で洗浄する。
μL)を新しいトレイ１４の各ウェル２４に適用する。装着スライドホルダー１に
装着したスライド７０を、溶液とスライド７０との間に気泡が入らないようにト
レイ１４上に組織側を下向に注意深く置く。スライド７０およびＡＢＣ溶液を有
するトレイ１４を４０℃３０分間、湿チャンバー内でインキュベーションする。
インキュベーション後、スライド７０を装着したスライドホルダー１をトレイ１
４から取り出し、ＰＢＳで３回、染色皿中で洗浄する。
【００５４】 Ｈ．ジアミノベンジジン(ＤＡＢ)を用いるクロモゲンカラー顕色 ＤＡＢ溶液を、ＰＢＳ１００ｍＬにＤＡＢ１００ｍｇを添加し、３０％Ｈ２Ｏ ２ ５０μＬを加えることにより調製する。約１５０−２００μＬのＤＡＢ溶液を
、各ウェル２４を完全に満たすように新しいトレイ１４の各ウェル２４に加える
。スライドホルダー１に装着したスライド７０を、気泡が入らないように注意深
く各ウェル２４上に組織側を下向に置く。カラー顕色を、顕微鏡で、ＤＡＢを有
するスライドホルダー１およびトレイ１４を観察することによりモニターし得る
。着色した沈殿は、陽性細胞の部分において生成する。色は、２−５分後現われ
始め、通常、１０分以内に充分顕色するが、２０−３０分のインキュベーション
が、染色の弱いサンプルには必要であり得る。顕色を停止するために、スライド
７０を有するすべてのスライドホルダー１をトレイ１４から取り出し、脱イオン
水で３回、染色皿中で洗浄する。
、各ウェル２４を完全に満たすように新しいトレイ１４の各ウェル２４に加える
。スライドホルダー１に装着したスライド７０を、気泡が入らないように注意深
く各ウェル２４上に組織側を下向に置く。カラー顕色を、顕微鏡で、ＤＡＢを有
するスライドホルダー１およびトレイ１４を観察することによりモニターし得る
。着色した沈殿は、陽性細胞の部分において生成する。色は、２−５分後現われ
始め、通常、１０分以内に充分顕色するが、２０−３０分のインキュベーション
が、染色の弱いサンプルには必要であり得る。顕色を停止するために、スライド
７０を有するすべてのスライドホルダー１をトレイ１４から取り出し、脱イオン
水で３回、染色皿中で洗浄する。
【００５５】 Ｉ．対比染色 スライドホルダー１および付着スライド７０を１０−５０秒間、Harris's ヘ
マトキシリン中に浸漬し、脱イオン水中に３回くぐらせることにより洗浄する。
全てのスライド７０を３０秒間、０．２％水酸化アンモニウム中に浸し、脱イオ
ン水中に３回くぐらせることにより洗浄する。次いで、スライド７０を９５％エ
タノール中に２回、それぞれ２分間、くぐらせ、その後、１００％エタノール中
に２回、それぞれ２分間、くぐらせ、そして、最終的にスライド７０をキシレン
中に２回、それぞれ２分間、くぐらせることにより綺麗にする。
マトキシリン中に浸漬し、脱イオン水中に３回くぐらせることにより洗浄する。
全てのスライド７０を３０秒間、０．２％水酸化アンモニウム中に浸し、脱イオ
ン水中に３回くぐらせることにより洗浄する。次いで、スライド７０を９５％エ
タノール中に２回、それぞれ２分間、くぐらせ、その後、１００％エタノール中
に２回、それぞれ２分間、くぐらせ、そして、最終的にスライド７０をキシレン
中に２回、それぞれ２分間、くぐらせることにより綺麗にする。
【００５６】 Ｊ．カバースリップの取付け スライドホルダー１にまだ装着してあるスライド７０について、各スライドの
組織片側にCytoseal 60を一滴たらすか該側をプレマウントする。カバーガラス
を各スライド７０上に置く。これは、1つずつ行い得るが、適当に間を空けて一
列に並べた実際には６つ(または３つ)のカバーガラスを６つ(または３つ)のスラ
イド７０と対応するように、特に設計したカバーガラスを用いるのがより効率的
である。この特別なカバーガラスを用い、６つまでの個々のカバーガラスを実際
に整列させ、同時にスライド７０上に置く。当該カバーガラスは、それらを保持
しているプラスチックのストリップから、スライド７０と結合したままのカバー
ガラスからストリップをポキッと折れるように予め刻目を付けてあるストリップ
を単に曲げることにより、一緒に、容易に分離される。この時点で、各スライド
７０を、個々に取り扱うためにスライドホルダー１から取り出し得るが、あるい
は輸送容易とするためにスライドホルダー１に装着させたままとしてもよい。
組織片側にCytoseal 60を一滴たらすか該側をプレマウントする。カバーガラス
を各スライド７０上に置く。これは、1つずつ行い得るが、適当に間を空けて一
列に並べた実際には６つ(または３つ)のカバーガラスを６つ(または３つ)のスラ
イド７０と対応するように、特に設計したカバーガラスを用いるのがより効率的
である。この特別なカバーガラスを用い、６つまでの個々のカバーガラスを実際
に整列させ、同時にスライド７０上に置く。当該カバーガラスは、それらを保持
しているプラスチックのストリップから、スライド７０と結合したままのカバー
ガラスからストリップをポキッと折れるように予め刻目を付けてあるストリップ
を単に曲げることにより、一緒に、容易に分離される。この時点で、各スライド
７０を、個々に取り扱うためにスライドホルダー１から取り出し得るが、あるい
は輸送容易とするためにスライドホルダー１に装着させたままとしてもよい。
【００５７】実施例３ PCRによるin situ ハイブリダイゼーション ポリメラーゼ連鎖反応（PCR）をインビトロ法として核酸の特定の断片少量を
増幅するために行った。これは、後に組織切片内にある核酸の増幅を起すように
in situ での研究に適応させた。本発明の装置はこれらをin situ PCRで行うた
めに適切である。in situ PCRハイブリッド形成用プロトコルの一例はNuovo （1
994） に記載されている。
増幅するために行った。これは、後に組織切片内にある核酸の増幅を起すように
in situ での研究に適応させた。本発明の装置はこれらをin situ PCRで行うた
めに適切である。in situ PCRハイブリッド形成用プロトコルの一例はNuovo （1
994） に記載されている。
【００５８】 Ａ．in situ PCR 一連の組織断片を４〜５ミクロンの厚さに薄切りにし、Probe−on−Plusスラ
イド７０に装着し、室温で一夜乾燥する。装着した組織切片を脱パラフィンし、
ペプシンを用い、ホルマリン中での固定時間の長さに応じて４０℃で１５〜９０
分間消化する。ピロ炭酸ジエチル（DEPC）で処理した水でスライド７０を１分間
洗浄してペプシンを不活性化し、続いて１００％エタノールで１分間洗浄する。
次にスライド７０を風乾する。
イド７０に装着し、室温で一夜乾燥する。装着した組織切片を脱パラフィンし、
ペプシンを用い、ホルマリン中での固定時間の長さに応じて４０℃で１５〜９０
分間消化する。ピロ炭酸ジエチル（DEPC）で処理した水でスライド７０を１分間
洗浄してペプシンを不活性化し、続いて１００％エタノールで１分間洗浄する。
次にスライド７０を風乾する。
【００５９】 ポリメラーゼ連鎖反応溶液はいずれかの標準的な操作法に従って作製する。た
とえば、K.B,Mullis et al., 米国特許第4,800,159号を参照。緩衝液、５’−プ
ライマー、３‘’−プライマー、水、Taq ポリメラーゼ（AmpliTaq, Perkin Elm
er） （またはその他の好熱性ポリメラーゼ）およびセルフシール試薬（MJ Rese
arch, Inc.）を混合して全容２０〜５０μLとする。この溶液２０〜５０μLを特
別に設計したin situ PCRアルミニウム製トレー１４のウェル２４に入れる。実
施例１で使用するためのトレー１４は好ましくは使い捨てのプラスチック材料で
製造するが、PCR研究用のトレー１４は９５℃〜１００℃に達することもある一
連の温度を経過して循環して使用されることができなければならない。それ故、
このトレー１４は熱抵抗性である必要があり（すなわち、高温によって溶融また
は破壊されてはならない）、また、熱の良導体である必要がある。アルミニウム
はトレー１４を製造するために好適な材料である。これらアルミニウムトレー１
４は深さ0.005〜0.03mmで、溶液約20〜50μLを保持できるウェル２４を有する。
とえば、K.B,Mullis et al., 米国特許第4,800,159号を参照。緩衝液、５’−プ
ライマー、３‘’−プライマー、水、Taq ポリメラーゼ（AmpliTaq, Perkin Elm
er） （またはその他の好熱性ポリメラーゼ）およびセルフシール試薬（MJ Rese
arch, Inc.）を混合して全容２０〜５０μLとする。この溶液２０〜５０μLを特
別に設計したin situ PCRアルミニウム製トレー１４のウェル２４に入れる。実
施例１で使用するためのトレー１４は好ましくは使い捨てのプラスチック材料で
製造するが、PCR研究用のトレー１４は９５℃〜１００℃に達することもある一
連の温度を経過して循環して使用されることができなければならない。それ故、
このトレー１４は熱抵抗性である必要があり（すなわち、高温によって溶融また
は破壊されてはならない）、また、熱の良導体である必要がある。アルミニウム
はトレー１４を製造するために好適な材料である。これらアルミニウムトレー１
４は深さ0.005〜0.03mmで、溶液約20〜50μLを保持できるウェル２４を有する。
【００６０】 アルミニウムトレー１４の各ウェル２４の全てに注入した後に、スライドホル
ダー１および装着したスライド７０をトレー１４の上部に置いて、組織切片を持
つ表面を下向きにして、置かれた位置の下にあるウェル２４の中にある溶液と接
触させる。溶液とスライドとの間に気泡が存在しないように注意しなければなら
ない。スライドホルダー１、スライド７０、およびアルミニウムトレー１４を次
にサーマルサイクラーのブロック上に９５℃で３〜５分間置いて、組織内の核酸
を変性させる。次に６０℃で２分間と９４℃で１分間との間での２０〜３０サイ
クルを行う。
ダー１および装着したスライド７０をトレー１４の上部に置いて、組織切片を持
つ表面を下向きにして、置かれた位置の下にあるウェル２４の中にある溶液と接
触させる。溶液とスライドとの間に気泡が存在しないように注意しなければなら
ない。スライドホルダー１、スライド７０、およびアルミニウムトレー１４を次
にサーマルサイクラーのブロック上に９５℃で３〜５分間置いて、組織内の核酸
を変性させる。次に６０℃で２分間と９４℃で１分間との間での２０〜３０サイ
クルを行う。
【００６１】 サイクル段階に続いて、２ｘSSCを入れた染色皿にスライドホルダー１、スラ
イド７０、およびアルミニウムトレー１４を垂直に入れて３５℃で５分間保持す
る。アルミニウムトレー１４からスライドホルダー１を外し、０.５〜１ｘSSCを
用いて３７〜６０℃で１０〜３０分間（バックグラウンドに応じて）洗浄する。
in situ ハイブリダイゼーションをプライマー内部に選択されたビオチン化プロ
ーブまたはジゴキシゲニン標識プローブを用いて実施例２に記載した通りに実行
する。
イド７０、およびアルミニウムトレー１４を垂直に入れて３５℃で５分間保持す
る。アルミニウムトレー１４からスライドホルダー１を外し、０.５〜１ｘSSCを
用いて３７〜６０℃で１０〜３０分間（バックグラウンドに応じて）洗浄する。
in situ ハイブリダイゼーションをプライマー内部に選択されたビオチン化プロ
ーブまたはジゴキシゲニン標識プローブを用いて実施例２に記載した通りに実行
する。
【００６２】 B．逆転写酵素in situ PCR 一連の組織断片を４〜５ミクロンの厚さに薄切りにし、Probe−on−Plusスラ
イド７０に装着し、室温で一夜乾燥する。RTin situ PCRではネガティブおよび
ポジティブ対照の双方を試験することが重要であり、また、これらを同じスライ
ドグラス上で行うことが好適である。ポジティブ対照はDNアーゼ消化段階を省略
するものであって、標的とする特異的な増幅、DNA修復およびミスプライミング
、からの強い核シグナルを発生させるべきものである。ネガティブ対照にはDNア
ーゼ処理に加えて細胞内の標的に対応しないプライマーを使用する。被検検体で
はDNアーゼ処理を進行させるが、所望の標的核酸に特異的なプライマーを使用す
る。装着した組織断片を脱パラフィンし、ペプシンを用い、ホルマリン中での固
定時間の長さに応じて４０℃で１５〜９０分間消化する。ピロ炭酸ジエチル（DE
PC）で処理した水でスライド７０を１分間洗浄してペプシンを不活性化し、続い
て１００％エタノールで１分間洗浄する。次にスライド７０を風乾する。
イド７０に装着し、室温で一夜乾燥する。RTin situ PCRではネガティブおよび
ポジティブ対照の双方を試験することが重要であり、また、これらを同じスライ
ドグラス上で行うことが好適である。ポジティブ対照はDNアーゼ消化段階を省略
するものであって、標的とする特異的な増幅、DNA修復およびミスプライミング
、からの強い核シグナルを発生させるべきものである。ネガティブ対照にはDNア
ーゼ処理に加えて細胞内の標的に対応しないプライマーを使用する。被検検体で
はDNアーゼ処理を進行させるが、所望の標的核酸に特異的なプライマーを使用す
る。装着した組織断片を脱パラフィンし、ペプシンを用い、ホルマリン中での固
定時間の長さに応じて４０℃で１５〜９０分間消化する。ピロ炭酸ジエチル（DE
PC）で処理した水でスライド７０を１分間洗浄してペプシンを不活性化し、続い
て１００％エタノールで１分間洗浄する。次にスライド７０を風乾する。
【００６３】 予め希釈したRNアーゼ不含のDNアーゼ（約１５０〜２００μLを要する）でプ
ラスチックトレー１４の各ウェル２４を満たし、スライド７０（スライドホルダ
ー１に装着した）の組織側を下向きにしてウェル２４の上に位置させることによ
って装着した組織断片3個の中の2個をRNアーゼ不含のDNアーゼで消化する。この
際、気泡が捕捉されないように、また、ウェル２４の中の溶液と組織検体との間
が接触するように注意する。一夜３７℃でインキュベーションする。DEPC水で１
分間洗浄し、続いて１００％エタノールで１分間洗浄してRNアーゼ不含のDNアー
ゼを不活性化する。スライド７０を風乾する。
ラスチックトレー１４の各ウェル２４を満たし、スライド７０（スライドホルダ
ー１に装着した）の組織側を下向きにしてウェル２４の上に位置させることによ
って装着した組織断片3個の中の2個をRNアーゼ不含のDNアーゼで消化する。この
際、気泡が捕捉されないように、また、ウェル２４の中の溶液と組織検体との間
が接触するように注意する。一夜３７℃でインキュベーションする。DEPC水で１
分間洗浄し、続いて１００％エタノールで１分間洗浄してRNアーゼ不含のDNアー
ゼを不活性化する。スライド７０を風乾する。
【００６４】 逆転写はEZ RT PCRシステム（Perkin−Elmer）を用いて行う。RT/増幅（RT-PC
R）溶液はEZ rTth緩衝液、各２００μMのd ATP、ｄCTP、ｄGTPおよびｄTTP、４
００μg／mlのウシ血清アルブミン、４０単位のRNasin、0.8μMの５’−および
３’−プライマー、2.5ｍM−塩化マンガン、5単位のrTthおよび２x濃セルフシー
ル試薬（MJ Research, Inc.）を含有する。RT-PCR混合物２０μLから５０μLを
特別に設計したin situ PCRアルミニウムトレー１４の３個のウェル２４の中を
満たす（ウェル２４の深さは約0.005〜0.03mmである）。スライド７０を注意深
くウェル２４の上に置いて、組織をウェル２４の中にある溶液と接触させる。ス
ライド７０、スライドホルダー１およびアルミニウムトレー１４を６５℃のサー
マルサイクラーのブロック上に３０分間置き、続いて９４℃で３分間変性段階に
置く。各サイクルを６０℃で２分間と９４℃で１分間との間に設定して２０〜３
０サイクルを行う。
R）溶液はEZ rTth緩衝液、各２００μMのd ATP、ｄCTP、ｄGTPおよびｄTTP、４
００μg／mlのウシ血清アルブミン、４０単位のRNasin、0.8μMの５’−および
３’−プライマー、2.5ｍM−塩化マンガン、5単位のrTthおよび２x濃セルフシー
ル試薬（MJ Research, Inc.）を含有する。RT-PCR混合物２０μLから５０μLを
特別に設計したin situ PCRアルミニウムトレー１４の３個のウェル２４の中を
満たす（ウェル２４の深さは約0.005〜0.03mmである）。スライド７０を注意深
くウェル２４の上に置いて、組織をウェル２４の中にある溶液と接触させる。ス
ライド７０、スライドホルダー１およびアルミニウムトレー１４を６５℃のサー
マルサイクラーのブロック上に３０分間置き、続いて９４℃で３分間変性段階に
置く。各サイクルを６０℃で２分間と９４℃で１分間との間に設定して２０〜３
０サイクルを行う。
【００６５】 循環段階の後に、スライドホルダー１、スライド７０およびアルミニウムトレ
ー１４を２ｘSSCを入れた染色皿に垂直に入れて３７℃に５分間保持する。スラ
イドホルダー１をアルミニウムトレー１４から外し、０.５〜１ｘSSCにより３７
〜６０℃で１０〜３０分間（バックグラウンドに応じて）洗浄する。in situ ハ
イブリダイゼーションをプライマー内部に選択されたビオチン化プローブまたは
ジゴキシゲニン標識プローブを用いて実施例２に記載した通りに実行する。
ー１４を２ｘSSCを入れた染色皿に垂直に入れて３７℃に５分間保持する。スラ
イドホルダー１をアルミニウムトレー１４から外し、０.５〜１ｘSSCにより３７
〜６０℃で１０〜３０分間（バックグラウンドに応じて）洗浄する。in situ ハ
イブリダイゼーションをプライマー内部に選択されたビオチン化プローブまたは
ジゴキシゲニン標識プローブを用いて実施例２に記載した通りに実行する。
【００６６】 当業者が認識するようにPCR以外の増幅方式も今ではよく知られており、PCRの
代わりに広範に使用されている。これらには連結増幅（またはリガーゼ連鎖反応
、LCR）およびQ−β−レプリカーゼの使用に基づく増幅法を包含する。また、鎖
置換増幅法（SDA）、好熱SDA、および核酸配列に基づく増幅法（３SRまたはNASB
A）も有用である。たとえば、PCRについては米国特許第4,683,195 および 4,683
,202号および Innis et al. (1990)；LCR についてはWuとWallace (1989)；SDA
については米国特許第5,270,184 および 5,455,166号および Walker et al. (19
92)；好熱SDAについては Spargo et al. (1996)；および3SR および NASBAにつ
いては米国特許第5,409,818号、Fahy et al. (1991) およびCompton (1991)を参
照。
代わりに広範に使用されている。これらには連結増幅（またはリガーゼ連鎖反応
、LCR）およびQ−β−レプリカーゼの使用に基づく増幅法を包含する。また、鎖
置換増幅法（SDA）、好熱SDA、および核酸配列に基づく増幅法（３SRまたはNASB
A）も有用である。たとえば、PCRについては米国特許第4,683,195 および 4,683
,202号および Innis et al. (1990)；LCR についてはWuとWallace (1989)；SDA
については米国特許第5,270,184 および 5,455,166号および Walker et al. (19
92)；好熱SDAについては Spargo et al. (1996)；および3SR および NASBAにつ
いては米国特許第5,409,818号、Fahy et al. (1991) およびCompton (1991)を参
照。
【００６７】実施例４ 多層乾燥試薬入りのウェル アッセイはウェル２４の中で予め乾燥した単一の試薬を用いて行うことができ
る。また、数種の試薬が必要なら、生物学的検体を載せたスライド７０を第一の
試薬を入れた第一ウェル２４から第二の試薬を入れた第二ウェル２４に移動させ
ることができるなどでるが、この様々なウェル２４は同一または別々のトレー１
４上のいずれにあってもよい。あるいは、1種を超える試薬をウェル２４の中で
予め乾燥しておいてもよい。これらの試薬は最も外側の層を使用すべき最初の試
薬の層とする、数層として乾燥することもできる。これを図４に示すが、そこで
のスライド７０は細胞または組織の切片２２０を載せてある。これはウェル２４
の上に置いてあるが、このウェルには第二の抗体２７０、第一の抗体２６０およ
びプロテイン遮断剤２５０の順序で予め乾燥してある。このようにして様々な試
薬を分離し、乾燥し、保存して、ウェルに水または緩衝液を加えるまで反応を防
止する。ウェルに水（塩がウェル中で予め乾燥してあれば）または緩衝液を加え
ると、ウェル２４中の最終層の中に乾燥してあるプロテイン遮断剤２５０が最初
に溶解する。次に第一の抗体２６０が溶解し、最後に第二の抗体２７０が溶解し
て反応が可能になる。このような系では、スライド７０をトレー１４から別のト
レー１４に、またはウェル２４から別のウェル２４に、移動させる必要なしに、
3段階の全てを行うことが可能になる。例えば一連の試薬4種が必要なものなど、
別型のアッセイには、単一のウェル２４中で反応とは逆の順序で試薬4種を予め
乾燥しておくか、または各々が試薬２種を持つトレー2枚を使用するか、一方の
トレーには試薬３種を入れ、第二のトレーには第一のまたは第四の試薬を入れて
おいてもよい。例えば、第一トレーの操作と第二トレーの操作の間に洗浄が必要
な場合など、有効に作用するようにすることがよい。これらの方式に関するその
他の変形は当業者には自明なものである。このような組合せでは、いずれも別々
にトレー４枚を使用するよりも必要とする取扱いの数が少なくて楽である。実施
すべきアッセイの型が十分に標準化されている、特に病理学の分野では、このよ
うな系は予め乾燥した試薬を有し、次に使用するまで貯蔵できるトレーを大量生
産するのによく適している。この系は抗原／抗体反応の使用に限定するものでは
なく、他種の反応にも使用できるものであって、たとえば、酵素をウェル中で乾
燥でき；核酸のハイブリッド形成をウェル中で乾燥した様々なプローブを用いて
実施でき；蛍光プローブが乾燥試薬であることができ；ビオチンがウェル中で乾
燥でき；その他がある。
る。また、数種の試薬が必要なら、生物学的検体を載せたスライド７０を第一の
試薬を入れた第一ウェル２４から第二の試薬を入れた第二ウェル２４に移動させ
ることができるなどでるが、この様々なウェル２４は同一または別々のトレー１
４上のいずれにあってもよい。あるいは、1種を超える試薬をウェル２４の中で
予め乾燥しておいてもよい。これらの試薬は最も外側の層を使用すべき最初の試
薬の層とする、数層として乾燥することもできる。これを図４に示すが、そこで
のスライド７０は細胞または組織の切片２２０を載せてある。これはウェル２４
の上に置いてあるが、このウェルには第二の抗体２７０、第一の抗体２６０およ
びプロテイン遮断剤２５０の順序で予め乾燥してある。このようにして様々な試
薬を分離し、乾燥し、保存して、ウェルに水または緩衝液を加えるまで反応を防
止する。ウェルに水（塩がウェル中で予め乾燥してあれば）または緩衝液を加え
ると、ウェル２４中の最終層の中に乾燥してあるプロテイン遮断剤２５０が最初
に溶解する。次に第一の抗体２６０が溶解し、最後に第二の抗体２７０が溶解し
て反応が可能になる。このような系では、スライド７０をトレー１４から別のト
レー１４に、またはウェル２４から別のウェル２４に、移動させる必要なしに、
3段階の全てを行うことが可能になる。例えば一連の試薬4種が必要なものなど、
別型のアッセイには、単一のウェル２４中で反応とは逆の順序で試薬4種を予め
乾燥しておくか、または各々が試薬２種を持つトレー2枚を使用するか、一方の
トレーには試薬３種を入れ、第二のトレーには第一のまたは第四の試薬を入れて
おいてもよい。例えば、第一トレーの操作と第二トレーの操作の間に洗浄が必要
な場合など、有効に作用するようにすることがよい。これらの方式に関するその
他の変形は当業者には自明なものである。このような組合せでは、いずれも別々
にトレー４枚を使用するよりも必要とする取扱いの数が少なくて楽である。実施
すべきアッセイの型が十分に標準化されている、特に病理学の分野では、このよ
うな系は予め乾燥した試薬を有し、次に使用するまで貯蔵できるトレーを大量生
産するのによく適している。この系は抗原／抗体反応の使用に限定するものでは
なく、他種の反応にも使用できるものであって、たとえば、酵素をウェル中で乾
燥でき；核酸のハイブリッド形成をウェル中で乾燥した様々なプローブを用いて
実施でき；蛍光プローブが乾燥試薬であることができ；ビオチンがウェル中で乾
燥でき；その他がある。
【００６８】 様々な試薬の多重層を有するウェルを製造するためには、試薬層の間に不活性
材料層を挟むことが好適である。例えば、各ウェルは次のようにして試薬で被覆
してもよい。第二の抗体をウェル上に被覆し、乾燥させる。この表面を、高濃度
の不活性材料（すなわち、反応のいずれにも必要ではなく、かつ、反応を妨害し
ない材料）たとえば、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、蔗糖、ウシ胎児血清、澱
粉、アガロースまたはその他の不活性材料のようなもので被覆する。これを乾燥
させる。たとえば、ゼラチン溶液を加え、乾燥させ、次にゼラチン溶液を追加し
、乾燥する、など、不活性材料を数層として加えることは好適である。これは所
望の回数行うことができるが、層の数は第二抗体の放出に至る時間の延長に影響
を与える。第二抗体の表面上のこのような被覆５層は、この不活性層が溶解し始
めた時間から第二抗体の放出までに約１５〜２0分間の遅延を示す良好な結果が
見出されている。不活性材料のこの第一層（または多層）の上に第一抗体を被覆
して乾燥させる。第一抗体の上は不活性材料の第二層または多層で被覆する。こ
れは低濃度のウシ血清アルブミン、ゼラチン、ウシ胎児血清、澱粉、アガロース
、またはその他の不活性材料であることができる。第二不活性層のこのような被
覆３層は、第二不活性層が溶解し始める時間から第一の放出まで約１0分間の遅
延を示す良好な結果が見出されている。第二不活性層の上を、たとえばウマおよ
びヤギの血清のようなプロテイン遮断剤で被覆する。プロテイン遮断剤を風乾す
る。不活性材料の多層は溶解に時間がかかるので、活性試薬の次の層が溶解する
前に、各反応を進行させるために十分な時間が与えられる。
材料層を挟むことが好適である。例えば、各ウェルは次のようにして試薬で被覆
してもよい。第二の抗体をウェル上に被覆し、乾燥させる。この表面を、高濃度
の不活性材料（すなわち、反応のいずれにも必要ではなく、かつ、反応を妨害し
ない材料）たとえば、ウシ血清アルブミン、ゼラチン、蔗糖、ウシ胎児血清、澱
粉、アガロースまたはその他の不活性材料のようなもので被覆する。これを乾燥
させる。たとえば、ゼラチン溶液を加え、乾燥させ、次にゼラチン溶液を追加し
、乾燥する、など、不活性材料を数層として加えることは好適である。これは所
望の回数行うことができるが、層の数は第二抗体の放出に至る時間の延長に影響
を与える。第二抗体の表面上のこのような被覆５層は、この不活性層が溶解し始
めた時間から第二抗体の放出までに約１５〜２0分間の遅延を示す良好な結果が
見出されている。不活性材料のこの第一層（または多層）の上に第一抗体を被覆
して乾燥させる。第一抗体の上は不活性材料の第二層または多層で被覆する。こ
れは低濃度のウシ血清アルブミン、ゼラチン、ウシ胎児血清、澱粉、アガロース
、またはその他の不活性材料であることができる。第二不活性層のこのような被
覆３層は、第二不活性層が溶解し始める時間から第一の放出まで約１0分間の遅
延を示す良好な結果が見出されている。第二不活性層の上を、たとえばウマおよ
びヤギの血清のようなプロテイン遮断剤で被覆する。プロテイン遮断剤を風乾す
る。不活性材料の多層は溶解に時間がかかるので、活性試薬の次の層が溶解する
前に、各反応を進行させるために十分な時間が与えられる。
【００６９】 この系の限界は一連の段階の間に洗浄段階が不要なときにのみ使用できる点に
ある。例えば、第一抗体の反応に第二抗体の反応を続けるならば、第二抗体は検
出操作の前に洗い流さなければならない。それ故、検出試薬は第二抗体のウェル
と同じウェル内で予め乾燥しておくことはできない。同様に、ある段階が加熱を
要するなら（たとえば、核酸プローブの変性など）、熱で不活性化または分解さ
れる試薬と組み合わせることはできない。
ある。例えば、第一抗体の反応に第二抗体の反応を続けるならば、第二抗体は検
出操作の前に洗い流さなければならない。それ故、検出試薬は第二抗体のウェル
と同じウェル内で予め乾燥しておくことはできない。同様に、ある段階が加熱を
要するなら（たとえば、核酸プローブの変性など）、熱で不活性化または分解さ
れる試薬と組み合わせることはできない。
【００７０】実施例５ ビルトインした対照および自動ラベル-イムノアッセイまたはISH/FISH アッセイを臨床的条件で行なう場合、米国食品医薬品局により、対照を必要と
される。アッセイしようとするスライドそのものの上にビルトインした対照があ
るようにすることは、対照の試験に非常によい方法である。対照が完全に別のス
ライド上にある場合は、問題として、対照または実際の試験サンプル上の何れか
で生物学的サンプルに接触しない試薬があったのかどうか、あるいは対照または
試験サンプルの何れかに試薬を加える工程が欠けていたのか示され得ないので、
その対照はよくない。また、とりわけ幾つかの試験を同時に行なう場合、対照サ
ンプル上に滴下する試薬が、ヒトまたは装置の過誤による事故で、試験サンプル
上に滴下される試薬と異なっているかもしれない。対照が試験サンプルと同じス
ライド上にある場合、このような問題は対照によって示されるであろうが、しか
し対照が標準または悪性腫瘍組織の切片である場合は、対照サンプルの調製に非
常に苦労し、時間がかかる。
される。アッセイしようとするスライドそのものの上にビルトインした対照があ
るようにすることは、対照の試験に非常によい方法である。対照が完全に別のス
ライド上にある場合は、問題として、対照または実際の試験サンプル上の何れか
で生物学的サンプルに接触しない試薬があったのかどうか、あるいは対照または
試験サンプルの何れかに試薬を加える工程が欠けていたのか示され得ないので、
その対照はよくない。また、とりわけ幾つかの試験を同時に行なう場合、対照サ
ンプル上に滴下する試薬が、ヒトまたは装置の過誤による事故で、試験サンプル
上に滴下される試薬と異なっているかもしれない。対照が試験サンプルと同じス
ライド上にある場合、このような問題は対照によって示されるであろうが、しか
し対照が標準または悪性腫瘍組織の切片である場合は、対照サンプルの調製に非
常に苦労し、時間がかかる。
【００７１】 図３は、組織スライス２２０をその上に固定したスライド７０を例示説明して
おり、そしてスタンプまたは展着剤２３０(例えば、ニトロセルロースまたは他
の膜の一片、あるいはスライド７０上に接着したプラスティックまたはガラス型
の基質)その上に付け、６つの別個の領域Ａ-Ｆを有するスライド７０の別の領域
を例示説明しているが、しかしスタンプまたは展着剤の使用は必須なものではな
く、例えば対照をスライド７０上に直接被覆することもできる。Ａ-Ｆの各領域
に、例えば明確な抗原性物質または核酸を、実施するアッセイの形式に応じてス
ポットしてもよいが、スタンプまたは展着剤２３０を使用する代わりに、これら
の物質をスライド７０の領域に直接適用することもできる。６つの分離アッセイ
を、６ウェルのトレイを使用して行なうことができる。各ウェル２４は、それぞ
れＡ-Ｆと反応する試薬 Ａ'-Ｆ'を有している。対照Ａは、試薬Ａ'をウェル２４
上に配置したスライド７０上でのみ陽性であり、そして残りの５つのウェルに対
しては陰性であろう。対照Ｂは、スライド７０上では、試薬Ｂ'をウェル２４上
に配置した場合のみ陽性であり、他の５つのウェルに対しては陰性であろう。等
。これらの外部対照を有するスタンプまたは展着剤２３０を市販大量販売用に、
または購入者側で調製できるように、前もって調製することができる。一般の臨
床的アッセイパネル用のスタンプまたは展着剤２３０がカラーコードしたもので
あるか、または他の方式でラベリングされているこのであれば、一目でアッセイ
が行なわれたか表示されるので有用である。このカラーコードまたは他のラベリ
ングを、トレイ１４のカラーコードまたは他のラベリングと一致させて、スタン
プと併せて使用することができる。例えば、緑色スタンプは、その上に抗原性決
定子Ａ-Ｆを有し、そして緑色トレイは、抗体Ａ'-Ｆ'を有する。カラーコード化
スキームの代わりにナンバリングまたはレタリングシステムを使用することもで
きる。これらを乳癌の一連の試験に使用して、赤色スタンプおよび赤色トレイは
ホジキン病のアッセイに用いられるよう示すことも可能であろう。何れの型のカ
ラーコード化(一連の色のストライプなど)を使用することもできる。このような
カラーコード化は、臨床的実験での誤用を少なくするであろう。陽性外部対照は
そのスライドで行なわれるアッセイを表示するので、各スライド上の陽性対照を
使用するとスライドに対して自動ラベリングシステムとして作用する。所望によ
り、スタンプを対応するトレイとともに包装し、さらにスタンプを包装するとき
に各トレイ上に置いて、その後使用するときにトレイから引き剥がし、そしてス
ライド上に置くことができる。このような、対照を有するスタンプまたは展着剤
を使用することは非常に簡便であり、対照生物学的サンプル(例えば、対照とし
て使用する、正常または悪性腫瘍組織の組織切片)を調製するよりも時間がかか
らない。
おり、そしてスタンプまたは展着剤２３０(例えば、ニトロセルロースまたは他
の膜の一片、あるいはスライド７０上に接着したプラスティックまたはガラス型
の基質)その上に付け、６つの別個の領域Ａ-Ｆを有するスライド７０の別の領域
を例示説明しているが、しかしスタンプまたは展着剤の使用は必須なものではな
く、例えば対照をスライド７０上に直接被覆することもできる。Ａ-Ｆの各領域
に、例えば明確な抗原性物質または核酸を、実施するアッセイの形式に応じてス
ポットしてもよいが、スタンプまたは展着剤２３０を使用する代わりに、これら
の物質をスライド７０の領域に直接適用することもできる。６つの分離アッセイ
を、６ウェルのトレイを使用して行なうことができる。各ウェル２４は、それぞ
れＡ-Ｆと反応する試薬 Ａ'-Ｆ'を有している。対照Ａは、試薬Ａ'をウェル２４
上に配置したスライド７０上でのみ陽性であり、そして残りの５つのウェルに対
しては陰性であろう。対照Ｂは、スライド７０上では、試薬Ｂ'をウェル２４上
に配置した場合のみ陽性であり、他の５つのウェルに対しては陰性であろう。等
。これらの外部対照を有するスタンプまたは展着剤２３０を市販大量販売用に、
または購入者側で調製できるように、前もって調製することができる。一般の臨
床的アッセイパネル用のスタンプまたは展着剤２３０がカラーコードしたもので
あるか、または他の方式でラベリングされているこのであれば、一目でアッセイ
が行なわれたか表示されるので有用である。このカラーコードまたは他のラベリ
ングを、トレイ１４のカラーコードまたは他のラベリングと一致させて、スタン
プと併せて使用することができる。例えば、緑色スタンプは、その上に抗原性決
定子Ａ-Ｆを有し、そして緑色トレイは、抗体Ａ'-Ｆ'を有する。カラーコード化
スキームの代わりにナンバリングまたはレタリングシステムを使用することもで
きる。これらを乳癌の一連の試験に使用して、赤色スタンプおよび赤色トレイは
ホジキン病のアッセイに用いられるよう示すことも可能であろう。何れの型のカ
ラーコード化(一連の色のストライプなど)を使用することもできる。このような
カラーコード化は、臨床的実験での誤用を少なくするであろう。陽性外部対照は
そのスライドで行なわれるアッセイを表示するので、各スライド上の陽性対照を
使用するとスライドに対して自動ラベリングシステムとして作用する。所望によ
り、スタンプを対応するトレイとともに包装し、さらにスタンプを包装するとき
に各トレイ上に置いて、その後使用するときにトレイから引き剥がし、そしてス
ライド上に置くことができる。このような、対照を有するスタンプまたは展着剤
を使用することは非常に簡便であり、対照生物学的サンプル(例えば、対照とし
て使用する、正常または悪性腫瘍組織の組織切片)を調製するよりも時間がかか
らない。
【００７２】 一例として、胸部のアッセイパネルを、６つの別個の診断用マーカーを使用し
て実施することができる。これらの診断用マーカーは、サイトケラチン 7、サイ
トケラチン 20、ER、Bc1-2、PR、およびカテプシン Dであり得る。これらの抗原
性決定因子をそれぞれスタンプまたは展着剤上に被覆して対照として使用たり、
対応する抗体を6ウェルトレイの分離ウェル上で前乾燥することができる。もし
サイトケラチン 7 または均等な抗原性決定因子をスタンプまたは展着剤のポジ
ションＡ上に置くならば、サイトケラチン 7に対する抗体をウェルＡ'中に置く
こととなる。スタンプまたは展着剤の切片Ａは、ウェルＡ'上に配置されたスラ
イドで陽性であるが、しかし他の 5 ウェルでは陰性であろう。また、スタンプ
の切片Ａのみ、ウェルＡ'に配置されたスライド７０で陽性であるが、スタンプ
または展着剤の切片 B-Fは陰性であろう。これは、ビルトインした対照によるス
ライドの自動ラベリングをもたらす。切片Ａが陽性でなく、また切片Ｂ-Ｆがこ
のスライド上で陽性である場合は、問題が生じており、この試験を信頼してはな
らないことを意味している。
て実施することができる。これらの診断用マーカーは、サイトケラチン 7、サイ
トケラチン 20、ER、Bc1-2、PR、およびカテプシン Dであり得る。これらの抗原
性決定因子をそれぞれスタンプまたは展着剤上に被覆して対照として使用たり、
対応する抗体を6ウェルトレイの分離ウェル上で前乾燥することができる。もし
サイトケラチン 7 または均等な抗原性決定因子をスタンプまたは展着剤のポジ
ションＡ上に置くならば、サイトケラチン 7に対する抗体をウェルＡ'中に置く
こととなる。スタンプまたは展着剤の切片Ａは、ウェルＡ'上に配置されたスラ
イドで陽性であるが、しかし他の 5 ウェルでは陰性であろう。また、スタンプ
の切片Ａのみ、ウェルＡ'に配置されたスライド７０で陽性であるが、スタンプ
または展着剤の切片 B-Fは陰性であろう。これは、ビルトインした対照によるス
ライドの自動ラベリングをもたらす。切片Ａが陽性でなく、また切片Ｂ-Ｆがこ
のスライド上で陽性である場合は、問題が生じており、この試験を信頼してはな
らないことを意味している。
【００７３】 使用し得るパネルの他の実施例は、Ki-67、Her-2/neu (c-erbB-2)、P53、pS2
、EGFK、および因子 VIIIなどの、乳癌用の予想マーカーのパネルである。他の
腫瘍(例えば、前立腺、膀胱、および大腸)も、同一の予後パネルトレイを使用す
ることができる。一般的な病理学的業務では、４種のパネルトレイで、全造血性
疾患の診断の90-95%をカバーすることができる；1)ホジキン病のパネルに、マー
カー LCA (CD45)、L26 (CD20)、CD3、Leu-M1 (CD15)、Ki-1 (CD30)、およびLMP
が含まれてもよい。2)ホジキンでないパネルに、L26 (CD20)、CD3、MT1、Bcl-1
、Bc1-2、Ki-1(CD30)が含まれ得る。3)別のホジキンでないパネルに、カッパー
、ラムダ、UCHL-1 (CD45RO)、CD5、CD23、およびCD10が含まれ得る。4)白血病パ
ネルに、L26 (CD20)、CD34、MPO、Lyso、TdT、およびDBA44が含まれ得る。他の
所望試験パネルで同様に実施することができる；例えば限定するものではないが
、知られていない第１次部位の未分化型腫瘍用のパネル、肉腫分類、リンパ腫
対 癌 対 黒色腫、腺癌 対 中皮腫、肝細胞性/胆管癌 対 転移性癌、下垂体パネ
ル、パジェット病 対 黒色腫 対 扁平上皮癌 対 線維性組織球腫、乳房パネル、
および膀胱 対 前立腺癌。さらに他の可能なパネルは、神経内分泌パネル、 小
円形細胞腫瘍、生殖細胞腫瘍、ホジキン 対 ホジキンでないリンパ腫、リンパ腫 対 反応性肥大、形質細胞血液疾患、白血病パネルおよびウイルスパネルである
。
、EGFK、および因子 VIIIなどの、乳癌用の予想マーカーのパネルである。他の
腫瘍(例えば、前立腺、膀胱、および大腸)も、同一の予後パネルトレイを使用す
ることができる。一般的な病理学的業務では、４種のパネルトレイで、全造血性
疾患の診断の90-95%をカバーすることができる；1)ホジキン病のパネルに、マー
カー LCA (CD45)、L26 (CD20)、CD3、Leu-M1 (CD15)、Ki-1 (CD30)、およびLMP
が含まれてもよい。2)ホジキンでないパネルに、L26 (CD20)、CD3、MT1、Bcl-1
、Bc1-2、Ki-1(CD30)が含まれ得る。3)別のホジキンでないパネルに、カッパー
、ラムダ、UCHL-1 (CD45RO)、CD5、CD23、およびCD10が含まれ得る。4)白血病パ
ネルに、L26 (CD20)、CD34、MPO、Lyso、TdT、およびDBA44が含まれ得る。他の
所望試験パネルで同様に実施することができる；例えば限定するものではないが
、知られていない第１次部位の未分化型腫瘍用のパネル、肉腫分類、リンパ腫
対 癌 対 黒色腫、腺癌 対 中皮腫、肝細胞性/胆管癌 対 転移性癌、下垂体パネ
ル、パジェット病 対 黒色腫 対 扁平上皮癌 対 線維性組織球腫、乳房パネル、
および膀胱 対 前立腺癌。さらに他の可能なパネルは、神経内分泌パネル、 小
円形細胞腫瘍、生殖細胞腫瘍、ホジキン 対 ホジキンでないリンパ腫、リンパ腫 対 反応性肥大、形質細胞血液疾患、白血病パネルおよびウイルスパネルである
。
【００７４】 各研究所は、人員、および実施するアッセイ数およびタイプに対して最も適切
である、独自のシステムを工夫することができる。例えば、あるアッセイで、抗
体の第１セットの使用、次いで第２次抗体が全てのサンプルに対して同一である
第２次抗体との反応を必要とする場合、それから少数のアッセイを行なわなけれ
ばならない場合は、トレイ１４上でこれらの反応を行なうことができるが、多数
のアッセイを行なわなければならない以外は、全スライドを、第２次抗体および
/または検出システムとともに大型タンク中に配置して行なうようにしてもよい(
"バッチ"または"バルク"インキュベーション方法)。あるいは、少量のアッセイ
を実施する研究室用、フィルターペーパー片で第２次抗体および/または検出シ
ステムを被覆し、全スライドをフィルターペーパー上に置き、そして使用時にフ
ィルターペーパーを湿らすこともできる。これはトレイを使用するよりも安価で
あり得る。同様に、核酸プローブをフィルターペーパー上に置いてもよい。
である、独自のシステムを工夫することができる。例えば、あるアッセイで、抗
体の第１セットの使用、次いで第２次抗体が全てのサンプルに対して同一である
第２次抗体との反応を必要とする場合、それから少数のアッセイを行なわなけれ
ばならない場合は、トレイ１４上でこれらの反応を行なうことができるが、多数
のアッセイを行なわなければならない以外は、全スライドを、第２次抗体および
/または検出システムとともに大型タンク中に配置して行なうようにしてもよい(
"バッチ"または"バルク"インキュベーション方法)。あるいは、少量のアッセイ
を実施する研究室用、フィルターペーパー片で第２次抗体および/または検出シ
ステムを被覆し、全スライドをフィルターペーパー上に置き、そして使用時にフ
ィルターペーパーを湿らすこともできる。これはトレイを使用するよりも安価で
あり得る。同様に、核酸プローブをフィルターペーパー上に置いてもよい。
【００７５】実施例６ ビルトインした対照−核酸ハイブリダイゼーション 実施例５のイムノアッセイについての記載と同様の方法で、ビルトインした対
照を、核酸アッセイ(ISHまたは蛍光in situ ハイブリダイゼーション(FISH)など
)に使用することができる。FISHの一例として、蛍光プローブを使用して染色体
の大部分を照射する。これは全体染色体彩色(WCP)といわれる。この技術は、転
移などの総染色体異常の観測出に有用である。使用プローブを、種々の異なる色
のフルオロフォアと併せて使用することもできる。例えば、染色体 1に対するプ
ローブは橙色の蛍光を発することができ、染色体 2に対するプローブは緑色の蛍
光を発するようにすることができ、そして染色体 3に対するプローブは赤色の蛍
光を発するフルオロフォアを使用することができる。こうして、３つの染色体全
てを同時に染色することが可能となり、相互を容易に区別することができる。ヒ
ト細胞では、24までの別個の核染色体、染色体 1-22、ＸおよびＹ、がある。３
つの異なるフルオロフォアを使用する場合、全24染色体を、たった8つの異なる
組織切片または8つの異なる細胞セットを使用して研究することができる。 これらは、8つの分離スライドで研究をすることができ、または所望により、
幾つかの組織切片または細胞セットを、単一スライドの別の区域上に配置するこ
とができる。単一スライド上に8つの組織区域を配置することができ、その結果
、単一スライド上で全24染色体を、３種混合プローブの異なる８セットを使用し
て全ての反応を同時に実行して研究することができる。スライドを8つの分離ウ
ェル(各ウェルはその中に前乾燥した3つのプローブの異なるセットを有する)を
有するトレイまたはチップ上に配置して、これらを単一の細胞塗抹標本スライド
上で試験することができる。ミクロアレイ技術を使用して24のビルトインした対
照をスライド上で直接被覆し、内部の輪郭内で、各ウェル領域を包囲するように
してもよい(図６Ｅ参照)。当業者が認識するように、３つのプローブの８セット
を使用することは必須ではない。４種の異なる標識を付したプローブの６セット
など、他の変形も可能である。前乾燥した試薬を有するトレイを使用することも
必須ではなく、むしろ試薬は液体形態でトレイに加えることもできる。同様に、
ウェルの内部輪郭をとりまく領域中でスライド上に直接被覆した所望の数の対照
を使用して、他の技術(in situ ハイブリダイゼーションなど)を実施することも
できる。対照をウェルの端を包囲するようにスライド上に配置して示しているが
、これらのパターンは必須ではなく、それらがウェル中で対照が試薬と接触する
領域内にある限り、対照をアレンジする他のパターンを使用することもできる。
照を、核酸アッセイ(ISHまたは蛍光in situ ハイブリダイゼーション(FISH)など
)に使用することができる。FISHの一例として、蛍光プローブを使用して染色体
の大部分を照射する。これは全体染色体彩色(WCP)といわれる。この技術は、転
移などの総染色体異常の観測出に有用である。使用プローブを、種々の異なる色
のフルオロフォアと併せて使用することもできる。例えば、染色体 1に対するプ
ローブは橙色の蛍光を発することができ、染色体 2に対するプローブは緑色の蛍
光を発するようにすることができ、そして染色体 3に対するプローブは赤色の蛍
光を発するフルオロフォアを使用することができる。こうして、３つの染色体全
てを同時に染色することが可能となり、相互を容易に区別することができる。ヒ
ト細胞では、24までの別個の核染色体、染色体 1-22、ＸおよびＹ、がある。３
つの異なるフルオロフォアを使用する場合、全24染色体を、たった8つの異なる
組織切片または8つの異なる細胞セットを使用して研究することができる。 これらは、8つの分離スライドで研究をすることができ、または所望により、
幾つかの組織切片または細胞セットを、単一スライドの別の区域上に配置するこ
とができる。単一スライド上に8つの組織区域を配置することができ、その結果
、単一スライド上で全24染色体を、３種混合プローブの異なる８セットを使用し
て全ての反応を同時に実行して研究することができる。スライドを8つの分離ウ
ェル(各ウェルはその中に前乾燥した3つのプローブの異なるセットを有する)を
有するトレイまたはチップ上に配置して、これらを単一の細胞塗抹標本スライド
上で試験することができる。ミクロアレイ技術を使用して24のビルトインした対
照をスライド上で直接被覆し、内部の輪郭内で、各ウェル領域を包囲するように
してもよい(図６Ｅ参照)。当業者が認識するように、３つのプローブの８セット
を使用することは必須ではない。４種の異なる標識を付したプローブの６セット
など、他の変形も可能である。前乾燥した試薬を有するトレイを使用することも
必須ではなく、むしろ試薬は液体形態でトレイに加えることもできる。同様に、
ウェルの内部輪郭をとりまく領域中でスライド上に直接被覆した所望の数の対照
を使用して、他の技術(in situ ハイブリダイゼーションなど)を実施することも
できる。対照をウェルの端を包囲するようにスライド上に配置して示しているが
、これらのパターンは必須ではなく、それらがウェル中で対照が試薬と接触する
領域内にある限り、対照をアレンジする他のパターンを使用することもできる。
【００７６】実施例７ 自動化マルチウエルトレイおよび装置 たとえ自動化システムを用いても、その自動化システムがなお手動で操作すべ
き幾つかのステップを必要とするので、生物試料の分析は非常に労働集約型であ
る。配管および一つもしくは複数のポンプに取り付けるかまたは自動化プロセッ
シング装置に接続したマルチウエルトレイもしくは予め乾燥した試薬を持つマル
チウエルトレイを用いて、生物試料のプロセッシングを部分的にもしくは完全に
自動化することができる。そのようなマルチウエルトレイは、先に議論したトレ
イ１４とデザイン的に同様であり得る。しかし、自動化マルチウエルトレイ３３
０(図５Ａ〜Ｂ参照)は、洗浄もしくは大量に用い得る高価でない試薬を用いるよ
うなステップに使用される。自動化マルチウエルトレイ３３０の反応チャンバー
２８０は、０.０１〜１ｍＬのような容量を保持するようにデザインされている
が、この量は重大ではなくこれより多くても少なくてもよい。ウェルは一つもし
くはそれ以上の注入口および一つもしくはそれ以上の排出口を含んで配管を収容
する。注入口に入る配管はポンプに取り付けられている。取り付けたスライド７
０を持つスライドホルダー１は自動化マルチウエルトレイ３３０の上部に置かれ
、そして液体を３００もしくは３０２のような注入口を通して反応チャンバー２
８０中に注入することができる。試薬は反応時間の間は再循環し、所望により、
ポンプ２９０ならびに排出口に通じる配管３１０と共同で注入口３０２に通じる
配管２９５を使用することにより(例えば、図５Ｂに示すように)再使用し得る。
この代わりに、使用した材料を直接に廃液容器２９１もしくは流しに送るか、ま
たは排出口２９６を経由して、ゲル上でもしくは他の機器により分析されること
ができる。循環する試薬は、培養もしくは反応時間を減少させそしてバックグラ
ウンドを減少させ得る。循環する試薬の濃度はまた、特にマルチプルプローブを
使用するときに、段階的に増加もしくは減少させたりして最適反応条件に達する
ことができる。これは特に、種々の濃度の使用を可能にする柔らかい底のトレイ
を用いるときには、適用可能である。
き幾つかのステップを必要とするので、生物試料の分析は非常に労働集約型であ
る。配管および一つもしくは複数のポンプに取り付けるかまたは自動化プロセッ
シング装置に接続したマルチウエルトレイもしくは予め乾燥した試薬を持つマル
チウエルトレイを用いて、生物試料のプロセッシングを部分的にもしくは完全に
自動化することができる。そのようなマルチウエルトレイは、先に議論したトレ
イ１４とデザイン的に同様であり得る。しかし、自動化マルチウエルトレイ３３
０(図５Ａ〜Ｂ参照)は、洗浄もしくは大量に用い得る高価でない試薬を用いるよ
うなステップに使用される。自動化マルチウエルトレイ３３０の反応チャンバー
２８０は、０.０１〜１ｍＬのような容量を保持するようにデザインされている
が、この量は重大ではなくこれより多くても少なくてもよい。ウェルは一つもし
くはそれ以上の注入口および一つもしくはそれ以上の排出口を含んで配管を収容
する。注入口に入る配管はポンプに取り付けられている。取り付けたスライド７
０を持つスライドホルダー１は自動化マルチウエルトレイ３３０の上部に置かれ
、そして液体を３００もしくは３０２のような注入口を通して反応チャンバー２
８０中に注入することができる。試薬は反応時間の間は再循環し、所望により、
ポンプ２９０ならびに排出口に通じる配管３１０と共同で注入口３０２に通じる
配管２９５を使用することにより(例えば、図５Ｂに示すように)再使用し得る。
この代わりに、使用した材料を直接に廃液容器２９１もしくは流しに送るか、ま
たは排出口２９６を経由して、ゲル上でもしくは他の機器により分析されること
ができる。循環する試薬は、培養もしくは反応時間を減少させそしてバックグラ
ウンドを減少させ得る。循環する試薬の濃度はまた、特にマルチプルプローブを
使用するときに、段階的に増加もしくは減少させたりして最適反応条件に達する
ことができる。これは特に、種々の濃度の使用を可能にする柔らかい底のトレイ
を用いるときには、適用可能である。
【００７７】 中央プロセッシングユニット２８６は試薬の注入を制御し、そして、一つのポ
ンプが幾つかの異なった試薬を制御するか、もしくは、その代わりに複数のポン
プを全て中央プロセッシングユニットで制御して使用し得るように、ポンプに取
り付けた配管の色々な部品上のバルブを開閉することができる。このセットアッ
プで、スライドおよびのせられた生物試料を持つスライドホルダーをマルチウエ
ルトレイ上に置くことができ、中央プロセッシングユニットを作動させ得て所望
の液体および試薬を反応チャンバーに注入して、液体を再循環させるかまたは液
体を直接に廃棄する。人がスライドを一つのトレイからもう一つのトレイに移す
必要なしに、異なった試薬を反応チャンバーに順次注入することができる。例え
ば、生物試料を持つスライドを自動化マルチウエルトレイ上に置くことができ、
そしてシステムが以下の試薬を注入することができる： キシレン、１００％エ
タノール、９０％エタノール、過酸化水素、２次抗体、検出試薬(ＡＢＣ)、ジア
ミノベンジジン、ヘマトキシリン、各ステップ間のＰＢＳ洗浄溶液、および、更
に９０％エタノール、１００％エタノールおよびキシレン、ならびにカバーグラ
ス用溶液。先に説明したように、その間は反応を普通のマルチウエルトレイ１４
上で行わせるのが望ましいところの適切な中間ステップのどれについても、スラ
イドを自動化マルチウエルトレイから取り外すことができる。
ンプが幾つかの異なった試薬を制御するか、もしくは、その代わりに複数のポン
プを全て中央プロセッシングユニットで制御して使用し得るように、ポンプに取
り付けた配管の色々な部品上のバルブを開閉することができる。このセットアッ
プで、スライドおよびのせられた生物試料を持つスライドホルダーをマルチウエ
ルトレイ上に置くことができ、中央プロセッシングユニットを作動させ得て所望
の液体および試薬を反応チャンバーに注入して、液体を再循環させるかまたは液
体を直接に廃棄する。人がスライドを一つのトレイからもう一つのトレイに移す
必要なしに、異なった試薬を反応チャンバーに順次注入することができる。例え
ば、生物試料を持つスライドを自動化マルチウエルトレイ上に置くことができ、
そしてシステムが以下の試薬を注入することができる： キシレン、１００％エ
タノール、９０％エタノール、過酸化水素、２次抗体、検出試薬(ＡＢＣ)、ジア
ミノベンジジン、ヘマトキシリン、各ステップ間のＰＢＳ洗浄溶液、および、更
に９０％エタノール、１００％エタノールおよびキシレン、ならびにカバーグラ
ス用溶液。先に説明したように、その間は反応を普通のマルチウエルトレイ１４
上で行わせるのが望ましいところの適切な中間ステップのどれについても、スラ
イドを自動化マルチウエルトレイから取り外すことができる。
【００７８】 もう一つの例として、のせられた組織切片を持つスライドを脱パラフィンして
別個に処理し、そしてそれから、予め乾燥した試薬を有するマルチウエルトレイ
上に置き、そしてそれから、自動化プロセッシング装置に取り付けることができ
るが、その装置は、例えば、２次抗体、検出試薬(ＡＢＣ)、ジアミノベンジジン
およびヘマトキシリン、ならびに、各々のステップ間のＰＢＳ洗浄緩衝液、ひき
続いて９０％エタノール、１００％エタノール、キシレンおよびカバーグラス溶
液のような望ましい試薬を注入するであろう。
別個に処理し、そしてそれから、予め乾燥した試薬を有するマルチウエルトレイ
上に置き、そしてそれから、自動化プロセッシング装置に取り付けることができ
るが、その装置は、例えば、２次抗体、検出試薬(ＡＢＣ)、ジアミノベンジジン
およびヘマトキシリン、ならびに、各々のステップ間のＰＢＳ洗浄緩衝液、ひき
続いて９０％エタノール、１００％エタノール、キシレンおよびカバーグラス溶
液のような望ましい試薬を注入するであろう。
【００７９】 自動化マルチウエルトレイの使用は幾つかの利点を有する。それは数個のステ
ップを、各ステップにおいて手動労力を必要としないで、連続して行うことを可
能にする。それはまたより安全であるが、その理由は、例えば発がん物質である
キシレンやジアミノベンジジンのような幾らかの危険な化学薬品を容器から直接
に反応チャンバーに注入したり、そこから廃液容器中にもしくは別の容器に注入
し得るが、その別の容器からは、人がこれらの試薬をウェルにピペッティングし
たりこれらの発がん物質をのせたトレイを取り扱う必要なしに、試薬を再使用す
ることができるからである。スライドにのせられた生物試料の上部に単に試薬を
滴下する従来の技術方法を用いるそんな試薬のリサイクリングは実用的でない。
それ故に、自動化マルチウエルトレイは有害な化学薬品への露出を減少し、有害
な化学薬品を廃棄することを容易にし、そしてまた、再使用してリサイクルし得
るので、そのような化学薬品の使用を減少させる。
ップを、各ステップにおいて手動労力を必要としないで、連続して行うことを可
能にする。それはまたより安全であるが、その理由は、例えば発がん物質である
キシレンやジアミノベンジジンのような幾らかの危険な化学薬品を容器から直接
に反応チャンバーに注入したり、そこから廃液容器中にもしくは別の容器に注入
し得るが、その別の容器からは、人がこれらの試薬をウェルにピペッティングし
たりこれらの発がん物質をのせたトレイを取り扱う必要なしに、試薬を再使用す
ることができるからである。スライドにのせられた生物試料の上部に単に試薬を
滴下する従来の技術方法を用いるそんな試薬のリサイクリングは実用的でない。
それ故に、自動化マルチウエルトレイは有害な化学薬品への露出を減少し、有害
な化学薬品を廃棄することを容易にし、そしてまた、再使用してリサイクルし得
るので、そのような化学薬品の使用を減少させる。
【００８０】 中央プロセッシングユニット２８６はまた加熱ブロック２８８の加熱および冷
却を制御して、ｉｎ ｓｉｔｕ ＰＣＲを自動で実施しもしくはｉｎ ｓｉｔｕ
ハイブリダイゼーションに用いられるプローブを変性させることができる。所望
によりビオチンもしくはジゴキシゲニンを含むＰＣＲ試薬およびプライマーセッ
トは、トレイ３３０のウェルの上で被膜させたり乾燥させたりし得る。試料２２
０を持つスライド７０をトレイ３３０の上に置いて、そして水もしくは緩衝液を
加える。加熱ブロック２８８は、スライド７０(図５Ｂに示すように)もしくはト
レイ３３０を背にして置いてもよく、またはスライドプラストレイの両面に接触
させるようにデザインしたものでもよく、そして中央プロセッシングユニット２
８６によって制御させることができる。各々のウェル４１０から２つの結果を得
ることができる。第一に、ウェル４１０からの液体を取り出してゲル２９８上で
アッセイしてＤＮＡのバンドが見られるかどうか決定することができる。そのよ
うなどのバンドのサイズもまたゲル２９８上で測定することができる。これは、
ＰＣＲがうまく作動しているかどうかを見るためのコントロールとしての役割を
果たす。このことが可能であるのは、増幅されたＤＮＡの大部分は試料の細胞中
に残らないでウェル中の液体に漏れ出すからである。第二に、わずかなＤＮＡは
試料の細胞中に残り、そしてこれは当業者によく知られた方法によりビオチンも
しくはジゴキシゲニンを検出することによって観察し得る。かくして、ｉｎ ｓ
ｉｔｕ ＰＣＲは、どの細胞がアッセイにより検出されるかを示す。
却を制御して、ｉｎ ｓｉｔｕ ＰＣＲを自動で実施しもしくはｉｎ ｓｉｔｕ
ハイブリダイゼーションに用いられるプローブを変性させることができる。所望
によりビオチンもしくはジゴキシゲニンを含むＰＣＲ試薬およびプライマーセッ
トは、トレイ３３０のウェルの上で被膜させたり乾燥させたりし得る。試料２２
０を持つスライド７０をトレイ３３０の上に置いて、そして水もしくは緩衝液を
加える。加熱ブロック２８８は、スライド７０(図５Ｂに示すように)もしくはト
レイ３３０を背にして置いてもよく、またはスライドプラストレイの両面に接触
させるようにデザインしたものでもよく、そして中央プロセッシングユニット２
８６によって制御させることができる。各々のウェル４１０から２つの結果を得
ることができる。第一に、ウェル４１０からの液体を取り出してゲル２９８上で
アッセイしてＤＮＡのバンドが見られるかどうか決定することができる。そのよ
うなどのバンドのサイズもまたゲル２９８上で測定することができる。これは、
ＰＣＲがうまく作動しているかどうかを見るためのコントロールとしての役割を
果たす。このことが可能であるのは、増幅されたＤＮＡの大部分は試料の細胞中
に残らないでウェル中の液体に漏れ出すからである。第二に、わずかなＤＮＡは
試料の細胞中に残り、そしてこれは当業者によく知られた方法によりビオチンも
しくはジゴキシゲニンを検出することによって観察し得る。かくして、ｉｎ ｓ
ｉｔｕ ＰＣＲは、どの細胞がアッセイにより検出されるかを示す。
【００８１】 本発明はまた新規な修飾法を用い、それは、組織試料の後処理を続ける前に、
反応液体を回収しそしてこの液体をアッセイしてＰＣＲが適切に作動しているか
もしくは汚染されているかどうかを決定することを可能にする。このアッセイは
非常に迅速そして簡単であり、例えば、単に反応液体をアガロースゲル上で展開
しそして特定のバンドサイズを探索する。ＰＣＲが適切に作動したことを決定し
た場合には、組織試料の後処理を続ける価値がある。然しながら、もしＰＣＲが
失敗したことを決定されたならば、その特定の試料でもって続ける労力と費用に
値しないことを知ることになる。
反応液体を回収しそしてこの液体をアッセイしてＰＣＲが適切に作動しているか
もしくは汚染されているかどうかを決定することを可能にする。このアッセイは
非常に迅速そして簡単であり、例えば、単に反応液体をアガロースゲル上で展開
しそして特定のバンドサイズを探索する。ＰＣＲが適切に作動したことを決定し
た場合には、組織試料の後処理を続ける価値がある。然しながら、もしＰＣＲが
失敗したことを決定されたならば、その特定の試料でもって続ける労力と費用に
値しないことを知ることになる。
【００８２】 反応液体をアッセイする上述の能力は、その特定の試料の後処理を続ける価値
があるかどうかを決定するのに有用であるだけでなく、その能力はまた、組織内
におけるｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの結果のみを見ることから得ら
れないデータを与える。ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを実施するとき
に、残りが溶液中で完了する間に、アンプリコンの多少の部分が増幅された所で
残存する。溶液中のこの部分をアッセイすることにより、核酸の相対的な量を測
定し得るだけでなく、増幅された核酸のサイズもまた測定することができる。単
に組織試料を見るときには、生成されたサイズ生成物を測定し得ず、単に多少の
核酸が増幅されたことを知り、そしてまた,どの細胞が核酸を発現していたかを
知ることになる。これら二つのセットのデータは相補的である。本発明は両方が
相補的であるデータと共に両方のセットの結果を見ることを可能にすることは明
らかである。単一のポリメラーゼ連鎖反応から両方のタイプのデータを得ること
を可能にするところの装置は現在まで入手可能ではない。
があるかどうかを決定するのに有用であるだけでなく、その能力はまた、組織内
におけるｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションの結果のみを見ることから得ら
れないデータを与える。ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーションを実施するとき
に、残りが溶液中で完了する間に、アンプリコンの多少の部分が増幅された所で
残存する。溶液中のこの部分をアッセイすることにより、核酸の相対的な量を測
定し得るだけでなく、増幅された核酸のサイズもまた測定することができる。単
に組織試料を見るときには、生成されたサイズ生成物を測定し得ず、単に多少の
核酸が増幅されたことを知り、そしてまた,どの細胞が核酸を発現していたかを
知ることになる。これら二つのセットのデータは相補的である。本発明は両方が
相補的であるデータと共に両方のセットの結果を見ることを可能にすることは明
らかである。単一のポリメラーゼ連鎖反応から両方のタイプのデータを得ること
を可能にするところの装置は現在まで入手可能ではない。
【００８３】 この発明の更なる態様は、反応チャンバー２８０の容量が調節可能であること
である。好ましくは中央プロセッシングユニット２８６は、フレキシブルもしく
は可動性のどちらかである反応チャンバーの底２８２に対して押しているところ
のピストン２８４を制御する。この動きは反応チャンバー２８０中のスペースの
容量を調節する。例えば、ｉｎ ｓｉｔｕ ＰＣＲを実施するとき、反応容量を
非常に少量に、例えば１０〜５０μＬに保つことが望ましい。ＰＣＲ反応後には
、反応液体を反応チャンバーからくみ出すことが望まれるであろう。然しながら
、そのような小容量の液体はスライド７０と反応チャンバーの底２８２との間に
毛管作用により保持されるであろう。より多くの液体を含むように反応チャンバ
ーを拡大させることにより、望ましいポンピングを達成することが容易になる。
当業者は、種々の手段を用いて反応チャンバー２８０の容量を調節できることを
認識している。中央プロセッシングユニットにより制御されるピストンを用いる
必要はない。例えば、ねじ用具を反応チャンバーの底の背に置いてもよく、その
ねじ用具を回すことによりねじ用具はトレイの底を反対方向に押して反応チャン
バーの底を顕微鏡のスライドの方に押すことで、反応チャンバー２８０の容量を
減少させるであろう。このプロセスの逆転は容量を再び拡大する。
である。好ましくは中央プロセッシングユニット２８６は、フレキシブルもしく
は可動性のどちらかである反応チャンバーの底２８２に対して押しているところ
のピストン２８４を制御する。この動きは反応チャンバー２８０中のスペースの
容量を調節する。例えば、ｉｎ ｓｉｔｕ ＰＣＲを実施するとき、反応容量を
非常に少量に、例えば１０〜５０μＬに保つことが望ましい。ＰＣＲ反応後には
、反応液体を反応チャンバーからくみ出すことが望まれるであろう。然しながら
、そのような小容量の液体はスライド７０と反応チャンバーの底２８２との間に
毛管作用により保持されるであろう。より多くの液体を含むように反応チャンバ
ーを拡大させることにより、望ましいポンピングを達成することが容易になる。
当業者は、種々の手段を用いて反応チャンバー２８０の容量を調節できることを
認識している。中央プロセッシングユニットにより制御されるピストンを用いる
必要はない。例えば、ねじ用具を反応チャンバーの底の背に置いてもよく、その
ねじ用具を回すことによりねじ用具はトレイの底を反対方向に押して反応チャン
バーの底を顕微鏡のスライドの方に押すことで、反応チャンバー２８０の容量を
減少させるであろう。このプロセスの逆転は容量を再び拡大する。
【００８４】実施例８ 全染色体画法 染色体は、全染色体画法として知られる技法により転座のような著しい異常を
検査することができる。この方法は、染色体に結合して効果的に全染色体を「ラ
イトアップする」ところの数多くの蛍光的に標識したプローブを用いる。各染色
体に対して特異的なプローブのセットを用いてどんな所望の染色体も研究できる
。人間は全体で２４の核染色体を有し、これらは染色体１−２２、ＸおよびＹで
ある。一度に多数の染色体を描くことは一般的である。異なった色の蛍光プロー
ブを用いることにより染色体は容易に識別される。例えば、染色体１，２および
３は、一つの染色体に対してオレンジ色に蛍光発光するプローブを、第二の染色
体に対して緑色に蛍光発光するプローブを、そして第三の染色体に対して赤色に
蛍光発光するプローブを用いることにより同時に着色させることができる。その
ようなシステムを用いると、一つの試験が典型的には８スライドの細胞を用いて
人間の完全核ゲノムを検査するであろう。この試験は、トレイの８ウェルの上に
８スライドを置くことを含むであろう。アッセイされるべき組織の一例は血液も
しくは骨髄スミアである。プローブは、所望により、ウェル中で予め乾燥するこ
とができる。
検査することができる。この方法は、染色体に結合して効果的に全染色体を「ラ
イトアップする」ところの数多くの蛍光的に標識したプローブを用いる。各染色
体に対して特異的なプローブのセットを用いてどんな所望の染色体も研究できる
。人間は全体で２４の核染色体を有し、これらは染色体１−２２、ＸおよびＹで
ある。一度に多数の染色体を描くことは一般的である。異なった色の蛍光プロー
ブを用いることにより染色体は容易に識別される。例えば、染色体１，２および
３は、一つの染色体に対してオレンジ色に蛍光発光するプローブを、第二の染色
体に対して緑色に蛍光発光するプローブを、そして第三の染色体に対して赤色に
蛍光発光するプローブを用いることにより同時に着色させることができる。その
ようなシステムを用いると、一つの試験が典型的には８スライドの細胞を用いて
人間の完全核ゲノムを検査するであろう。この試験は、トレイの８ウェルの上に
８スライドを置くことを含むであろう。アッセイされるべき組織の一例は血液も
しくは骨髄スミアである。プローブは、所望により、ウェル中で予め乾燥するこ
とができる。
【００８５】 単一のスライド７０上で全ての２４染色体の分析を可能にするようにデザイン
されたチップもしくはトレイ４００をここで提示する。このトレイ４００は顕微
鏡スライド７０にパチンと止めるか他の方法で取り付けることができるものであ
る。このチップもしくはトレイ４００は、各ウェル４１０が隣接するウェル４１
０から隙間もしくは溝４２０により分離された８つのウェル４１０を含む。その
ようなトレイ４００は図６Ａに図示されている。トレイ４００中の各ウェル４１
０は、それを通して試薬をウェル４１０に添加できる狭い開口部４３０を有して
いる。
されたチップもしくはトレイ４００をここで提示する。このトレイ４００は顕微
鏡スライド７０にパチンと止めるか他の方法で取り付けることができるものであ
る。このチップもしくはトレイ４００は、各ウェル４１０が隣接するウェル４１
０から隙間もしくは溝４２０により分離された８つのウェル４１０を含む。その
ようなトレイ４００は図６Ａに図示されている。トレイ４００中の各ウェル４１
０は、それを通して試薬をウェル４１０に添加できる狭い開口部４３０を有して
いる。
【００８６】 実用的には、検査すべき細胞は顕微鏡スライド７０の端から端まで滴下される
かもしくは広げられる。それからスライド７０は、細胞がトレイ４００のウェル
４１０に面するようにトレイ４００に取り付けられる。それから試薬は、トレイ
中で各ウェル４１０への開口部４３０を通じて個別にウェル４１０ヘ加えられる
。試薬は毛管作用によりウェル４１０およびスライド７０の間に広がるであろう
。種々の染色体に特異的な異なる試薬が各ウェル４１０に加えられる。ウェル４
１０の間の隙間もしくは溝４２０は、試薬が一つのウェル４１０から隣接するウ
ェル４１０に広がるのを防ぎ、それにより相互汚染を防止する。ウェル４１０は
予め決められた量、例えば各々１０〜２０μＬの液体を保持し、そして毛管作用
が、過剰のオーバーフロウを引き起こすことなくウェル４１０を満たすのに十分
なだけの緩衝液が加えられることを可能にする。これは相互汚染の防止を手助け
する。三つの異なる染色体を、例えば、オレンジ色、緑色および赤色の蛍光プロ
ーブを用いて、各ウェル４１０中でアッセイさせることができ、それにより単一
のスライド７０上で全て２４の人間の染色体アッセイすることを可能にする。
かもしくは広げられる。それからスライド７０は、細胞がトレイ４００のウェル
４１０に面するようにトレイ４００に取り付けられる。それから試薬は、トレイ
中で各ウェル４１０への開口部４３０を通じて個別にウェル４１０ヘ加えられる
。試薬は毛管作用によりウェル４１０およびスライド７０の間に広がるであろう
。種々の染色体に特異的な異なる試薬が各ウェル４１０に加えられる。ウェル４
１０の間の隙間もしくは溝４２０は、試薬が一つのウェル４１０から隣接するウ
ェル４１０に広がるのを防ぎ、それにより相互汚染を防止する。ウェル４１０は
予め決められた量、例えば各々１０〜２０μＬの液体を保持し、そして毛管作用
が、過剰のオーバーフロウを引き起こすことなくウェル４１０を満たすのに十分
なだけの緩衝液が加えられることを可能にする。これは相互汚染の防止を手助け
する。三つの異なる染色体を、例えば、オレンジ色、緑色および赤色の蛍光プロ
ーブを用いて、各ウェル４１０中でアッセイさせることができ、それにより単一
のスライド７０上で全て２４の人間の染色体アッセイすることを可能にする。
【００８７】 好ましい実施態様において、各ウェル４１０中に三つの異なる染色体に対する
プローブを持つトレイ４００の８つのウェル４１０上でプローブが予め乾燥され
る。所望であれば、塩類のような他の試薬もまた各ウェル４１０の中で予め乾燥
し得る。分裂中期もしくは中間期の細胞はスライド７０の端から端までに固定さ
れ、そしてスライド７０はトレイ４００と接触して置かれる。それから緩衝液を
開口部４３０から各ウェル４１０に加える。この方法では、異なる試薬を各ウェ
ル４１０の中にピペッティングする必要はなく、むしろ同じ緩衝液が全てのウェ
ル４１０に加えられ、そのために間違った試薬(人的エラー)をウェル４１０の中
にピペッティングする可能性を防止する。予め乾燥したプローブと塩類は緩衝液
をウェル４１０に添加すると溶解し、そしてハイブリダイゼーションを起こさせ
る。典型的な培養は、プローブを変性するために７０〜９０℃で１〜２分間であ
ってもよく同様に細胞のＤＮＡは引き続いて３７〜４５℃で約２時間の培養でよ
いが、どこについての培養でも３０分から終夜で実施するのが一般的である。ハ
イブリダイゼーション緩衝液は、技術上一般的に使用される幾つかの緩衝システ
ムでもって望みどおりに選択され得る。例えば２ＸＳＳＣが一般的に用いられる
。フォルムアミドが時には緩衝液に加えられる。好ましい実施態様において、培
養後にトレイ４００をブロッティング材料、例えばペーパータオル、の上に置い
てもよく、そしてウェル４１０中の反応液体は毛管作用により物理的にウェル４
１０から除去されて、ブロッティング材料がハイブリダイゼーション液体を吸い
取る。これは、スライド７０をトレイ４００から分離するときに、ウェル４１０
の間における交差汚染を防止する。
プローブを持つトレイ４００の８つのウェル４１０上でプローブが予め乾燥され
る。所望であれば、塩類のような他の試薬もまた各ウェル４１０の中で予め乾燥
し得る。分裂中期もしくは中間期の細胞はスライド７０の端から端までに固定さ
れ、そしてスライド７０はトレイ４００と接触して置かれる。それから緩衝液を
開口部４３０から各ウェル４１０に加える。この方法では、異なる試薬を各ウェ
ル４１０の中にピペッティングする必要はなく、むしろ同じ緩衝液が全てのウェ
ル４１０に加えられ、そのために間違った試薬(人的エラー)をウェル４１０の中
にピペッティングする可能性を防止する。予め乾燥したプローブと塩類は緩衝液
をウェル４１０に添加すると溶解し、そしてハイブリダイゼーションを起こさせ
る。典型的な培養は、プローブを変性するために７０〜９０℃で１〜２分間であ
ってもよく同様に細胞のＤＮＡは引き続いて３７〜４５℃で約２時間の培養でよ
いが、どこについての培養でも３０分から終夜で実施するのが一般的である。ハ
イブリダイゼーション緩衝液は、技術上一般的に使用される幾つかの緩衝システ
ムでもって望みどおりに選択され得る。例えば２ＸＳＳＣが一般的に用いられる
。フォルムアミドが時には緩衝液に加えられる。好ましい実施態様において、培
養後にトレイ４００をブロッティング材料、例えばペーパータオル、の上に置い
てもよく、そしてウェル４１０中の反応液体は毛管作用により物理的にウェル４
１０から除去されて、ブロッティング材料がハイブリダイゼーション液体を吸い
取る。これは、スライド７０をトレイ４００から分離するときに、ウェル４１０
の間における交差汚染を防止する。
【００８８】 更に好ましい実施態様において、スライド７０はポジティブおよびネガティブ
コントロールを区画４４０中に含み、それらは８つのウェル４１０の各々の中に
おいてハイブリダイゼーション液体と接触するところのものである。最近全くポ
プラーになっているミクロアレイ技術を用いて、染色体を描くために用いられる
プローブに相補的であるところの核酸が、好ましくはスライド７０の上に細胞を
置く前に、被膜されてスライド７０の上で固定化される。これは工業的条件下に
最善に実施され、そしてコントロールを組込んでスライド７０を販売することが
できる。２４のコントロール４４２は、ハイブリダイゼーション緩衝液と接触す
べきである全て８つの区画において各スライド７０の上に置かれることが好まし
い。アレイの一例が図６Ｅに示されていて、そこでは２４全ての核酸が、８つの
ウェル４１０の各々に接触するであろう各区画４４０の縁の周りに配置されてい
る。もし例えば、最初の区画４４０が染色体１,２および３に対するプローブを
含むウェル４１０と接触するであろうものであるならば、これらの染色体に対す
るコントロール核酸は着色後にライトアップ(各々が単一の色を示して)する筈で
あるが、一方において残りの２１のコントロールはハイブリダイズしないでそし
て蛍光発光もしないはずである。このようにして、８つのウェル４１０の各々に
対して両方のポジティブおよびネガティブコントロールがある。
コントロールを区画４４０中に含み、それらは８つのウェル４１０の各々の中に
おいてハイブリダイゼーション液体と接触するところのものである。最近全くポ
プラーになっているミクロアレイ技術を用いて、染色体を描くために用いられる
プローブに相補的であるところの核酸が、好ましくはスライド７０の上に細胞を
置く前に、被膜されてスライド７０の上で固定化される。これは工業的条件下に
最善に実施され、そしてコントロールを組込んでスライド７０を販売することが
できる。２４のコントロール４４２は、ハイブリダイゼーション緩衝液と接触す
べきである全て８つの区画において各スライド７０の上に置かれることが好まし
い。アレイの一例が図６Ｅに示されていて、そこでは２４全ての核酸が、８つの
ウェル４１０の各々に接触するであろう各区画４４０の縁の周りに配置されてい
る。もし例えば、最初の区画４４０が染色体１,２および３に対するプローブを
含むウェル４１０と接触するであろうものであるならば、これらの染色体に対す
るコントロール核酸は着色後にライトアップ(各々が単一の色を示して)する筈で
あるが、一方において残りの２１のコントロールはハイブリダイズしないでそし
て蛍光発光もしないはずである。このようにして、８つのウェル４１０の各々に
対して両方のポジティブおよびネガティブコントロールがある。
【００８９】 当業者は、他の同様にデザインされたトレイが利用され得ることを認識してい
る。８つのウェルトレイのためである必要はない。例えば、もし４つの異なって
発色する蛍光プローブが用いられるならば、同じ結果が６つのウェルトレイでも
って得られ得るであろう。更に、この発明は人の染色体の分析に限定されるもの
ではない。他の生物からの染色体は同様に検査され、そしてトレイ上のウェルの
数は個人的な選択の事項であって、しばしば検査されるべき染色体もしくはプロ
ーブの数により決定される。当業者はまた、多数の細胞試料が一度にアッセイさ
れ得るように単一以上のスライドを保持するようにトレイをデザインできて、多
数のスライドが数個の別々のスライドより容易に一緒に取り扱えることを認識し
ている。
る。８つのウェルトレイのためである必要はない。例えば、もし４つの異なって
発色する蛍光プローブが用いられるならば、同じ結果が６つのウェルトレイでも
って得られ得るであろう。更に、この発明は人の染色体の分析に限定されるもの
ではない。他の生物からの染色体は同様に検査され、そしてトレイ上のウェルの
数は個人的な選択の事項であって、しばしば検査されるべき染色体もしくはプロ
ーブの数により決定される。当業者はまた、多数の細胞試料が一度にアッセイさ
れ得るように単一以上のスライドを保持するようにトレイをデザインできて、多
数のスライドが数個の別々のスライドより容易に一緒に取り扱えることを認識し
ている。
【００９０】実施例９ 凹形のウェルを有するカバーグラス スライドの上にのせられた生物試料の上に試薬を単に滴下したりもしくは試薬
を満たしたウェルを持つトレイの上にスライドを置く方法を用いるよりむしろ、
スライドもしくは一連の取り付けられたスライドをカバーグラスでカバーするこ
とができるが、そこではこのカバーグラスは凹形であり、それにより一つもしく
はそれ以上のウェルから成っている。これは、６つのスライド上で同時に分析さ
れている試料を示すところの図７Ａ〜Ｅで図示されている。図７Ａは、スライド
ホルダー５１５中に保持されているところの、のせられた生物試料５２０を持つ
スライド５１０を図示している。図７Ｂは、図７Ａのスライド５１０の真上にフ
ィットすべきところのカバーグラス５００を図示している。下記に議論するイン
サート５４０は、情報を提示し得る書き込み５０１を含んでもよい。区分５０２
および５０３はそれぞれポジティブおよびネガティブコントロールである。コン
トロール５０２および５０３は実施されるアッセイの特異的なタイプ次第で、例
えば、タンパク質、核酸もしくは細胞系であってもよい。液体の入り口および空
気の出口となるチャネルは５０４および５０５として示されている。ウェル５３
０もまた図示されている。カバーグラス５００はまた、図７Ｂに５０６として示
すバーコードでラベルされてもよくもしくはそれらの上に文字を書かせてもよい
。
を満たしたウェルを持つトレイの上にスライドを置く方法を用いるよりむしろ、
スライドもしくは一連の取り付けられたスライドをカバーグラスでカバーするこ
とができるが、そこではこのカバーグラスは凹形であり、それにより一つもしく
はそれ以上のウェルから成っている。これは、６つのスライド上で同時に分析さ
れている試料を示すところの図７Ａ〜Ｅで図示されている。図７Ａは、スライド
ホルダー５１５中に保持されているところの、のせられた生物試料５２０を持つ
スライド５１０を図示している。図７Ｂは、図７Ａのスライド５１０の真上にフ
ィットすべきところのカバーグラス５００を図示している。下記に議論するイン
サート５４０は、情報を提示し得る書き込み５０１を含んでもよい。区分５０２
および５０３はそれぞれポジティブおよびネガティブコントロールである。コン
トロール５０２および５０３は実施されるアッセイの特異的なタイプ次第で、例
えば、タンパク質、核酸もしくは細胞系であってもよい。液体の入り口および空
気の出口となるチャネルは５０４および５０５として示されている。ウェル５３
０もまた図示されている。カバーグラス５００はまた、図７Ｂに５０６として示
すバーコードでラベルされてもよくもしくはそれらの上に文字を書かせてもよい
。
【００９１】 図７Ｃはスライド５１０上に置かれたカバーグラス５００を示す。カバーグラ
ス５００は、のせられた生物試料５２０持つスライド５１０上に置かれ、そして
カバーグラス５００の上部の部分においてスライド５１０に付けられている。ス
ライド５１０およびカバーグラス５００はそれから水、緩衝液もしくは試薬の中
に浸漬される。毛管作用が液体をカバーグラス５００のウェル５３０の中に押し
上げるであろう。表面張力はカバーグラス５００をしっかりとスライド５１０に
保持するであろう。これは既知の容量および濃度の試薬を持つ密閉されたシステ
ムもたらす。
ス５００は、のせられた生物試料５２０持つスライド５１０上に置かれ、そして
カバーグラス５００の上部の部分においてスライド５１０に付けられている。ス
ライド５１０およびカバーグラス５００はそれから水、緩衝液もしくは試薬の中
に浸漬される。毛管作用が液体をカバーグラス５００のウェル５３０の中に押し
上げるであろう。表面張力はカバーグラス５００をしっかりとスライド５１０に
保持するであろう。これは既知の容量および濃度の試薬を持つ密閉されたシステ
ムもたらす。
【００９２】 図７Ｄは、反応が起こりカバーグラス５００が取り除かれた後の結果を図示し
ている。生物試料５２０およびポジティブコントロール５０２が着色されて示さ
れている。
ている。生物試料５２０およびポジティブコントロール５０２が着色されて示さ
れている。
【００９３】 発明の好ましい態様において、カバーグラス５００はその上に予め乾燥された
試薬もしくは試薬類を有している。予め乾燥された試薬を持つカバーグラス５０
０が生物試料５２０を持つスライド５１０顕微鏡の上に置かれるときに、スライ
ド５１０およびカバーグラス５００が水もしくは緩衝液にちょっと浸漬され、そ
れにより液体がカバーグラス５００のウェル５３０を満たしそして乾燥された試
薬を溶かすようになる。スライド５１０およびカバーグラス５００をそれから水
もしくは緩衝液から取り出し、そして反応を進行させる。既知量の試薬もしくは
試薬類が予め乾燥され、それによりウェル５３０内において正確に既知量の試薬
類および生物試料５２０の接触をもたらす。ウェル５３０の容量がまた既知であ
り、それにより既知の濃度の試薬をもたらす。
試薬もしくは試薬類を有している。予め乾燥された試薬を持つカバーグラス５０
０が生物試料５２０を持つスライド５１０顕微鏡の上に置かれるときに、スライ
ド５１０およびカバーグラス５００が水もしくは緩衝液にちょっと浸漬され、そ
れにより液体がカバーグラス５００のウェル５３０を満たしそして乾燥された試
薬を溶かすようになる。スライド５１０およびカバーグラス５００をそれから水
もしくは緩衝液から取り出し、そして反応を進行させる。既知量の試薬もしくは
試薬類が予め乾燥され、それによりウェル５３０内において正確に既知量の試薬
類および生物試料５２０の接触をもたらす。ウェル５３０の容量がまた既知であ
り、それにより既知の濃度の試薬をもたらす。
【００９４】 発明のもうひとつの好ましい態様において、カバーグラス５００は、インサー
ト５４０、例えばガラスもしくはプラスチック、を有機性および水性の液体の両
方に耐性である接着剤を用いてスライド５１０に貼り付けることによりスライド
５１０に取り付けられる。図７Ｅ〜Ｈはこれを、単一のスライドに対する単一の
スライドおよびカバーグラスについて図示している。チャネル５０４および５０
５を持つウェル５３０を含むカバーグラス５００はインサート５４０の上に置か
れる。図７Ｆは、ポジティブ５０２および５０３ネガティブコントロール、イン
サート５４０を確認する書き込み５０１ならびに水溶性接着剤５４２の区分を含
むインサート５４０を図示している。カバーグラス５００の上部はそのために、
水溶性である接着剤を用いてインサート５４０に貼り付けられる。コントロール
５０２および５０３は、それらがカバーグラス５００のウェル５３０区画内にあ
るように位置している。インサート５４０の背面は、有機性および水性の液体の
両方に耐性である接着剤のような手段によりスライド５１０に対して置かれそし
て付けられている。スライド５１０プラスカバーグラス５００は緩衝液中に浸漬
してから取り出して、そして反応を進行させる。それからスライド５１０プラス
カバーグラス５００は、試薬もしくは洗浄液のタンクの中に置くことによりプロ
セッシングすることができる。水溶液が水溶性接着剤を溶解することによりカバ
ーグラス５００を放すがインサート５４０を放さない。カバーグラス５００はこ
の時点で容易に取り除かれる。インサート５４０はスライド５１０上にコントロ
ールおよびラベルとして残る。
ト５４０、例えばガラスもしくはプラスチック、を有機性および水性の液体の両
方に耐性である接着剤を用いてスライド５１０に貼り付けることによりスライド
５１０に取り付けられる。図７Ｅ〜Ｈはこれを、単一のスライドに対する単一の
スライドおよびカバーグラスについて図示している。チャネル５０４および５０
５を持つウェル５３０を含むカバーグラス５００はインサート５４０の上に置か
れる。図７Ｆは、ポジティブ５０２および５０３ネガティブコントロール、イン
サート５４０を確認する書き込み５０１ならびに水溶性接着剤５４２の区分を含
むインサート５４０を図示している。カバーグラス５００の上部はそのために、
水溶性である接着剤を用いてインサート５４０に貼り付けられる。コントロール
５０２および５０３は、それらがカバーグラス５００のウェル５３０区画内にあ
るように位置している。インサート５４０の背面は、有機性および水性の液体の
両方に耐性である接着剤のような手段によりスライド５１０に対して置かれそし
て付けられている。スライド５１０プラスカバーグラス５００は緩衝液中に浸漬
してから取り出して、そして反応を進行させる。それからスライド５１０プラス
カバーグラス５００は、試薬もしくは洗浄液のタンクの中に置くことによりプロ
セッシングすることができる。水溶液が水溶性接着剤を溶解することによりカバ
ーグラス５００を放すがインサート５４０を放さない。カバーグラス５００はこ
の時点で容易に取り除かれる。インサート５４０はスライド５１０上にコントロ
ールおよびラベルとして残る。
【００９５】 発明の更にひとつの好ましい態様において、スライド５１０は、それらに付け
られたコントロール試料５０２および５０３を有する。コントロール５０２およ
び５０３は、スライド５１０の上にかスライド５１０に貼り付けられた紙もしく
はスタンプの切片上のどちらかにスポットしてもよく、またはインサート５４０
上にスポットしてもよい。ポジティブコントロール、ネガティブコントロール、
もしくは両方(別々のスポットとして付けられた)でもよいこれらのコントロール
試料は、反応が適切に作動していることを決定するために使用される。もしもコ
ントロール５０２および５０３がインサート５４０に付けられているならば、そ
れらは、コントロール試料５０２および５０３が緩衝液および試薬と接触するよ
うに、接着剤によりカバーされないであろうようなそしてカバーグラス５００の
ウェル５３０と重なるような点で付けられる。
られたコントロール試料５０２および５０３を有する。コントロール５０２およ
び５０３は、スライド５１０の上にかスライド５１０に貼り付けられた紙もしく
はスタンプの切片上のどちらかにスポットしてもよく、またはインサート５４０
上にスポットしてもよい。ポジティブコントロール、ネガティブコントロール、
もしくは両方(別々のスポットとして付けられた)でもよいこれらのコントロール
試料は、反応が適切に作動していることを決定するために使用される。もしもコ
ントロール５０２および５０３がインサート５４０に付けられているならば、そ
れらは、コントロール試料５０２および５０３が緩衝液および試薬と接触するよ
うに、接着剤によりカバーされないであろうようなそしてカバーグラス５００の
ウェル５３０と重なるような点で付けられる。
【００９６】 インサート５４０はコントロール５０２および５０３と共に予め作成し必要な
ときに使用することができる。インサート５４０は更に、コントロール５０２お
よび５０３の名称およびポジティブもしくはネガティブかどうかを示す書き込み
を含んでもよい。
ときに使用することができる。インサート５４０は更に、コントロール５０２お
よび５０３の名称およびポジティブもしくはネガティブかどうかを示す書き込み
を含んでもよい。
【００９７】 カバーグラス５００はまたラベルを貼られてもよくそして容易なもしくは自動
的な読み取りのためのバーコード５６０を含んでもよい。予め乾燥した試薬を持
つカバーグラス５００は容易に保管されそしていつでも使用されて、それらの使
用を非常に便利にしている。予め乾燥した試薬を持つカバーグラス５００の使用
は、小量で、正確な量の試薬のピペッティングは分析時点では必要でなくて、そ
のために生物試料のより迅速な分析を可能にすることを更に意味する。
的な読み取りのためのバーコード５６０を含んでもよい。予め乾燥した試薬を持
つカバーグラス５００は容易に保管されそしていつでも使用されて、それらの使
用を非常に便利にしている。予め乾燥した試薬を持つカバーグラス５００の使用
は、小量で、正確な量の試薬のピペッティングは分析時点では必要でなくて、そ
のために生物試料のより迅速な分析を可能にすることを更に意味する。
【００９８】実施例１０ スライド上で生物試料をプロセッシングする自動化法 実施例９のものと同様な方法は、図５Ａ〜Ｂに図示されているような反応チャ
ンバーを用いるようにして自動化することができる。一つの相違は、自動化操作
で用いるべきカバーグラスはウェルを含む必要がなくて平坦であり得ることであ
る。図８Ａ〜Ｄはこの方法を図示している。生物試料６１０を持つスライド６０
０はスライドホールダー６２０の中に置かれる。カバーグラス６３０は書かれた
情報を含み得る区分６４０を含む。コントロール試料６５０および６６０はカバ
ーグラス６３０上に含まれ得る。カバーグラス６３０はまた、バーコード６７０
を含み得るかもしくはその上に書かれた文字を含み得る。生物試料６１０を持つ
スライド６００は、有機試薬とプロセッシングして試料６１０を脱パラフィン化
するための反応チャンバーに、例えば図５Ａ〜Ｂに示すように、置かれる。好ま
しい実施態様において、幾つかのスライド６００が単一のスライドホールダー６
２０の中に図８Ａに示すように置かれる。試料６１０を脱パラフィン化して洗浄
後、試薬を反応チャンバーに加えることができる。好ましい実施態様において、
カバーグラス６３０はスライド６００と一緒に反応チャンバーの中に置かれる。
これは図８Ｃに図示されていて、この図は、反応チャンバーは図示されていない
が、カバーグラス６３０およびスライド６００を持つライドホールダー６２０の
両方を示している。好ましくはカバーグラス６３０は、その上で予め乾燥された
試薬を、好ましくは区画６８０中に、有する。水もしくは緩衝液の添加はこの試
薬を溶解し、これがそれから生物試料６１０ならびにコントロール試料６５０お
よび６６０と反応する。反応後、洗浄液を反応チャンバーに通すことができる。
洗浄が完了すると、カバーグラス６３０をスライド６００に対して押し付け得る
が、これらは一緒に反応チャンバーから取り除かれて一緒に保存される、すなわ
ち、カバーグラス６３０は、実施例９におけるカバーグラス５００と異なり、恒
久的なカバーグラスとしての役割をする。図８Ｄは、生物試料６１０およびポジ
ティブであるポジティブコントロール６５０を持つスライド６００の上にのせら
れたカバーグラス６３０を示している。
ンバーを用いるようにして自動化することができる。一つの相違は、自動化操作
で用いるべきカバーグラスはウェルを含む必要がなくて平坦であり得ることであ
る。図８Ａ〜Ｄはこの方法を図示している。生物試料６１０を持つスライド６０
０はスライドホールダー６２０の中に置かれる。カバーグラス６３０は書かれた
情報を含み得る区分６４０を含む。コントロール試料６５０および６６０はカバ
ーグラス６３０上に含まれ得る。カバーグラス６３０はまた、バーコード６７０
を含み得るかもしくはその上に書かれた文字を含み得る。生物試料６１０を持つ
スライド６００は、有機試薬とプロセッシングして試料６１０を脱パラフィン化
するための反応チャンバーに、例えば図５Ａ〜Ｂに示すように、置かれる。好ま
しい実施態様において、幾つかのスライド６００が単一のスライドホールダー６
２０の中に図８Ａに示すように置かれる。試料６１０を脱パラフィン化して洗浄
後、試薬を反応チャンバーに加えることができる。好ましい実施態様において、
カバーグラス６３０はスライド６００と一緒に反応チャンバーの中に置かれる。
これは図８Ｃに図示されていて、この図は、反応チャンバーは図示されていない
が、カバーグラス６３０およびスライド６００を持つライドホールダー６２０の
両方を示している。好ましくはカバーグラス６３０は、その上で予め乾燥された
試薬を、好ましくは区画６８０中に、有する。水もしくは緩衝液の添加はこの試
薬を溶解し、これがそれから生物試料６１０ならびにコントロール試料６５０お
よび６６０と反応する。反応後、洗浄液を反応チャンバーに通すことができる。
洗浄が完了すると、カバーグラス６３０をスライド６００に対して押し付け得る
が、これらは一緒に反応チャンバーから取り除かれて一緒に保存される、すなわ
ち、カバーグラス６３０は、実施例９におけるカバーグラス５００と異なり、恒
久的なカバーグラスとしての役割をする。図８Ｄは、生物試料６１０およびポジ
ティブであるポジティブコントロール６５０を持つスライド６００の上にのせら
れたカバーグラス６３０を示している。
【００９９】 カバーグラス６３０の上で既知量の試薬を予め乾燥する好ましい方法は臨床検
査室において非常に迅速で容易な使用を可能にする。試薬を量ったりピペッティ
ングする必要は無い。代わりに、カバーグラス６３０を生物試料６１０を持つス
ライド６００と共に反応チャンバーの中に単に落として反応を進行させる。更に
、カバーグラス６３０は、その上に予めスポットされたポジティブおよびネガテ
ィブコントロールを含むことができて、それにより反応が適切に作動しているか
どうかについて簡単な分析を可能にする。 ＊＊＊
査室において非常に迅速で容易な使用を可能にする。試薬を量ったりピペッティ
ングする必要は無い。代わりに、カバーグラス６３０を生物試料６１０を持つス
ライド６００と共に反応チャンバーの中に単に落として反応を進行させる。更に
、カバーグラス６３０は、その上に予めスポットされたポジティブおよびネガテ
ィブコントロールを含むことができて、それにより反応が適切に作動しているか
どうかについて簡単な分析を可能にする。 ＊＊＊
【０１００】 上記の方法の使用は、パネル全体のマーカーの結果を１５〜３０分という短時
間で得ることを可能にする。かくして、患者が未だ手術室にいる間に結果を得る
ことができる。病理学者および外科医は、更に手術を行うべきかまたは化学療法
もしくは放射線治療が必要かどうかについて直ちに決定することができる。この
ことで外科医は後日に更に手術を行うことよりむしろ直ぐに手術することが可能
になる。もしこのすばやい発明の方法の代わりに現在販売されている自動化シス
テムを用いるならば、結果を受け取るのにより長時間を取るであろうが、その部
分的な理由は、現在販売されている自動化システムは一人の患者について一回に
アッセイするのではなく、むしろ多くの試料を一度に自動化機器に充てんしそし
てそれらが全て充てんされプロセッシングされる間待つ必要があるためである。
現在販売されている自動化システムは試薬をススライドの上部に滴下しそして生
物試料は必ずしも完全にカバーされないが、一方において、試薬を満たしたウェ
ルの上部に生物試料を置く本方法は全体の試料が試薬と接触することを保証する
。
間で得ることを可能にする。かくして、患者が未だ手術室にいる間に結果を得る
ことができる。病理学者および外科医は、更に手術を行うべきかまたは化学療法
もしくは放射線治療が必要かどうかについて直ちに決定することができる。この
ことで外科医は後日に更に手術を行うことよりむしろ直ぐに手術することが可能
になる。もしこのすばやい発明の方法の代わりに現在販売されている自動化シス
テムを用いるならば、結果を受け取るのにより長時間を取るであろうが、その部
分的な理由は、現在販売されている自動化システムは一人の患者について一回に
アッセイするのではなく、むしろ多くの試料を一度に自動化機器に充てんしそし
てそれらが全て充てんされプロセッシングされる間待つ必要があるためである。
現在販売されている自動化システムは試薬をススライドの上部に滴下しそして生
物試料は必ずしも完全にカバーされないが、一方において、試薬を満たしたウェ
ルの上部に生物試料を置く本方法は全体の試料が試薬と接触することを保証する
。
【０１０１】 上の実施例は単に例示的なものでありそして本発明により規定される装置を用
いて実施してもよい技法を限定することを意味していない。この発明は、免疫組
織化学、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ｉｎ ｓｉｔｕＰＣＲ、およ
び蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション(ＦＩＳＨ)に適用可能でるが、そ
れらに限定されるものではない。正確な測定は重大ではなくそして変更してもな
お好結果を与えることは当業者にとって明白であるので、記述した測定もまた例
示的なものでありそして限定的であることを意味していない。当業者は本発明の
ための他の応用に容易に気づくであろう。
いて実施してもよい技法を限定することを意味していない。この発明は、免疫組
織化学、ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション、ｉｎ ｓｉｔｕＰＣＲ、およ
び蛍光ｉｎ ｓｉｔｕハイブリダイゼーション(ＦＩＳＨ)に適用可能でるが、そ
れらに限定されるものではない。正確な測定は重大ではなくそして変更してもな
お好結果を与えることは当業者にとって明白であるので、記述した測定もまた例
示的なものでありそして限定的であることを意味していない。当業者は本発明の
ための他の応用に容易に気づくであろう。
【０１０２】参照文献 Bngati DJ, et al. (1988). J Histotechnology 11 :165-183. Compton J (1991). Nature 350:91-92. Fahy E, et al. (1991). PCR Methods Appl. 1:25-33. Innis MA, et al. (1990). PCR Protocols: A Guide to Methods and Applicati
ons (Academic Press, San Diego). Nuovo GJ (1994). J. Histotechnology 17:235 242. Spargo CA, et al. (1996). Mol. Cell Proves 10:247-256. Walker GT, et al. (1992). Nucl Acids Res. 20: 1691-1696. Wu DY and Wal1ace RB (1989). Genomics 4:560-569. 米国特許第4,683,195号 米国特許第4,683,202号 米国特許第5,270,184号 米国特許第5,409,818号 米国特許第5,455,166号 米国特許第5,958,341号
ons (Academic Press, San Diego). Nuovo GJ (1994). J. Histotechnology 17:235 242. Spargo CA, et al. (1996). Mol. Cell Proves 10:247-256. Walker GT, et al. (1992). Nucl Acids Res. 20: 1691-1696. Wu DY and Wal1ace RB (1989). Genomics 4:560-569. 米国特許第4,683,195号 米国特許第4,683,202号 米国特許第5,270,184号 米国特許第5,409,818号 米国特許第5,455,166号 米国特許第5,958,341号
【図１】 複数のスライド７０を有するスライドホルダー１を例示する。
【図２Ａ】 トレイ１４の正面立面図である。
【図２Ｂ】 図２Ａのライン５４−５４により切断したトレイ１４の断面図
である。
である。
【図３】 生物学的試料２２０とスタンプ２３０を有するスライド７０を例
示する。
示する。
【図４】 ウエル２４を例示し、該ウエル内には３種の試薬（２５０、２６
０および２７０で示される）が乾燥させてあり、該ウエル上には生物学的試料２
２０を取り付けたスライド７０を置いてある。
０および２７０で示される）が乾燥させてあり、該ウエル上には生物学的試料２
２０を取り付けたスライド７０を置いてある。
【図５Ａ】 取り付けた生物学的試料２２０がウエルまたは反応室２８０に
置かれているスライド７０を示す。
置かれているスライド７０を示す。
【図５Ｂ】 他の任意の装備に連結している図５Ａのトレイおよびスライド
を示す。
を示す。
【図６Ａ】 各ウエル４１０を有する８ウエルトレイ４００を例示する。
【図６Ｂ】 図６Ａに示した８ウエルトレイ４００の側面図である。
【図６Ｃ】 図６Ａおよび６Ｂのスライドおよびトレイの正面図である。
【図６Ｄ】 ８ウエル４１０の各々に接触しているスライドの８領域４４０
を示しているスライド７０の概略図である。
を示しているスライド７０の概略図である。
【図６Ｅ】 １つの領域４４０の拡大図を示して、スライド７０上にビルト
インした対照を設計する一つの方法を示す。
インした対照を設計する一つの方法を示す。
【図７Ａ】 凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【図７Ｂ】 凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【図７Ｃ】 凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【図７Ｄ】 凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【図７Ｅ】 凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【図７Ｆ】 凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【図７Ｇ】 凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【図７Ｈ】 凹面ウエルを有するカバースリップと連結しているスライド上
での生物学的試料の処理を例示する。
での生物学的試料の処理を例示する。
【図８Ａ】 カバースリップと連結している顕微鏡スライド上での生物学的
試料の処理を例示する。
試料の処理を例示する。
【図８Ｂ】 カバースリップと連結している顕微鏡スライド上での生物学的
試料の処理を例示する。
試料の処理を例示する。
【図８Ｃ】 カバースリップと連結している顕微鏡スライド上での生物学的
試料の処理を例示する。
試料の処理を例示する。
【図８Ｄ】 カバースリップと連結している顕微鏡スライド上での生物学的
試料の処理を例示する。
試料の処理を例示する。
１：スライドホルダー、５：ハンドル、７：開口部、１１：穴、１４：トレイ、
１５：領域、２４：ウエル、３８：溝、４４：境界、５６：スロット、７０：ス
ライド、９０：溝、２２０：生物学的試料、２３０：スタンプ、２５０：試薬、
２６０：試薬、２７０：試薬、２８０：反応室、２８１：歯止め、２８２：反応
室の底部、２８４：ピストン、２８６：中央処理ユニット、２８８：熱サイクラ
ー、２９０：ポンプ、２９１：タンク、２９２：タンク、２９４：出口、２９６
：出口、２９８：ゲル、３００：入口、３０２：入口、３３０：トレイ、４００
：８ウエルトレイ、４０２：クリップ、４１０：ウエル、４２０：溝、４３０：
チャネル、４３０：開口部、４４０：領域、４４２：核酸。
１５：領域、２４：ウエル、３８：溝、４４：境界、５６：スロット、７０：ス
ライド、９０：溝、２２０：生物学的試料、２３０：スタンプ、２５０：試薬、
２６０：試薬、２７０：試薬、２８０：反応室、２８１：歯止め、２８２：反応
室の底部、２８４：ピストン、２８６：中央処理ユニット、２８８：熱サイクラ
ー、２９０：ポンプ、２９１：タンク、２９２：タンク、２９４：出口、２９６
：出口、２９８：ゲル、３００：入口、３０２：入口、３３０：トレイ、４００
：８ウエルトレイ、４０２：クリップ、４１０：ウエル、４２０：溝、４３０：
チャネル、４３０：開口部、４４０：領域、４４２：核酸。
【手続補正書】
【提出日】平成１３年８月２７日（２００１．８．２７）
【手続補正１】
【補正対象書類名】明細書
【補正対象項目名】特許請求の範囲
【補正方法】変更
【補正の内容】
【特許請求の範囲】
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｇ０１Ｎ 33/53 Ｇ０２Ｂ 21/34 ４Ｂ０６３ 33/566 Ｇ０１Ｎ 1/28 Ｆ Ｇ０２Ｂ 21/34 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ａ (81)指定国 ＥＰ(ＡＴ，ＢＥ，ＣＨ，ＣＹ， ＤＥ，ＤＫ，ＥＳ，ＦＩ，ＦＲ，ＧＢ，ＧＲ，ＩＥ，Ｉ Ｔ，ＬＵ，ＭＣ，ＮＬ，ＰＴ，ＳＥ)，ＯＡ(ＢＦ，ＢＪ ，ＣＦ，ＣＧ，ＣＩ，ＣＭ，ＧＡ，ＧＮ，ＧＷ，ＭＬ， ＭＲ，ＮＥ，ＳＮ，ＴＤ，ＴＧ)，ＡＰ(ＧＨ，ＧＭ，Ｋ Ｅ，ＬＳ，ＭＷ，ＳＤ，ＳＬ，ＳＺ，ＴＺ，ＵＧ，ＺＷ )，ＥＡ(ＡＭ，ＡＺ，ＢＹ，ＫＧ，ＫＺ，ＭＤ，ＲＵ， ＴＪ，ＴＭ)，ＡＥ，ＡＬ，ＡＭ，ＡＴ，ＡＵ，ＡＺ， ＢＡ，ＢＢ，ＢＧ，ＢＲ，ＢＹ，ＣＡ，ＣＨ，ＣＮ，Ｃ Ｒ，ＣＵ，ＣＺ，ＤＥ，ＤＫ，ＤＭ，ＥＥ，ＥＳ，ＦＩ ，ＧＢ，ＧＤ，ＧＥ，ＧＨ，ＧＭ，ＨＲ，ＨＵ，ＩＤ， ＩＬ，ＩＮ，ＩＳ，ＪＰ，ＫＥ，ＫＧ，ＫＰ，ＫＲ，Ｋ Ｚ，ＬＣ，ＬＫ，ＬＲ，ＬＳ，ＬＴ，ＬＵ，ＬＶ，ＭＡ ，ＭＤ，ＭＧ，ＭＫ，ＭＮ，ＭＷ，ＭＸ，ＮＯ，ＮＺ， ＰＬ，ＰＴ，ＲＯ，ＲＵ，ＳＤ，ＳＥ，ＳＧ，ＳＩ，Ｓ Ｋ，ＳＬ，ＴＪ，ＴＭ，ＴＲ，ＴＴ，ＴＺ，ＵＡ，ＵＧ ，ＵＳ，ＵＺ，ＶＮ，ＹＵ，ＺＡ，ＺＷ Ｆターム(参考） 2G045 BB22 BB24 DA12 DA13 DA36 FA16 FB02 FB03 FB07 HA12 HA16 2G052 AA28 AA33 AB16 AB20 AD32 AD52 CA03 DA06 DA07 EB11 EC03 FA09 FA10 FD18 GA30 GA32 HB02 JA06 JA07 2H052 AE00 4B024 AA11 BA80 CA01 CA11 HA12 HA14 4B029 AA07 BB20 CC03 FA12 4B063 QA01 QQ01 QQ42 QQ52 QR08 QR42 QR56 QR62 QS25 QS34 QS36 QX02 【要約の続き】 である。
Claims (42)
- 【請求項１】 生物学的試料を試薬群で処理する方法であって： （ａ）該生物学的試料を顕微鏡スライド上にマウントする段階、 （ｂ）該顕微鏡スライドをスライドホルダー中に装着する段階、但し該スライド
ホルダーは複数のスライドを保持し得るものである、 （ｃ）トレイ上のウエル内で少なくとも１種の試薬を予乾燥する段階、 （ｄ）該スライドホルダー内の該顕微鏡スライドを該ウエルの上方に置き、該生
物学的試料が該ウエル内の試薬と接触可能にする段階、および、 （ｅ）水または緩衝液を該ウエルに加え該試薬群を溶解させる段階、 の各段階を含んでなる方法。 - 【請求項２】 該ウエル内で１以上の試薬を予乾燥し、かつ、該１以上の試
薬が水または緩衝液の添加により溶解する、請求項１に記載の方法。 - 【請求項３】 試薬群を、作用順とは逆順に配列して乾燥させる、請求項２
に記載の方法。 - 【請求項４】 該試薬群が不活性材料で相互に分離されている、請求項３に
記載の方法。 - 【請求項５】 スライド上の生物学的試料をアッセイする方法であって、該
スライド上に１またはそれ以上の外部対照が置かれてあり、該生物学的試料につ
いて１またはそれ以上の上記段階を同時に処理する方法。 - 【請求項６】 該外部対照が、該スライド上に置いた膜上にある、請求項５
に記載の方法。 - 【請求項７】 該スライドが、該生物学的試料と反応する１またはそれ以上
の試薬を含有するウエル上に置かれる、請求項５に記載の方法。 - 【請求項８】 生物学的試料と外部対照とを含んでなるスライド。
- 【請求項９】 複数の対照物質を含んでなる膜。
- 【請求項１０】 該対照物質が、抗原、ペプチド、タンパク質、核酸および
細胞からなる群から選択される、請求項９に記載の膜。 - 【請求項１１】 該膜が、該膜の第１面上に上記外部対照を、そして該膜の
第２面上にスライドと接触したとき該膜を該スライドに付着させる物質を含む、
請求項９に記載の膜。 - 【請求項１２】 該膜がスライドに付着している、請求項９に記載の膜。
- 【請求項１３】 請求項９に記載の膜を、多数ウエルのトレイと組合わせて
含んでなるキット。 - 【請求項１４】 該多数ウエルトレイが、予乾燥した試薬類を含むものであ
る、請求項１３に記載のキット。 - 【請求項１５】 該多数ウエルトレイのウエルに加えた試薬が、該膜上の対
照物質と反応するものである、請求項１３に記載のキット。 - 【請求項１６】 該ウエルが、生物学的試料のアッセイに使用しようとする
試薬を含んでおり、該試薬は該アッセイの実施に先立って該ウエル内で乾燥させ
てある、ウエルを含んでなるトレイ。 - 【請求項１７】 １またはそれ以上の試薬を該ウエル内で乾燥させてある、
請求項１６に記載のトレイ。 - 【請求項１８】 異なる試薬群が、水または緩衝液を該ウエルに加えた後、
そこで最初に作用する試薬が２番目に作用する試薬の溶解に先立って溶解するよ
うに、順番に溶解してゆくような様式で、該ウエル内で乾燥させてある、請求項
１７に記載のトレイ。 - 【請求項１９】該試薬群が不活性層で相互に分離されている、請求項１８に
記載のトレイ。 - 【請求項２０】 該カバースリップの一部が凹面であり、顕微鏡スライド
上に置いたとき既知容積を囲みこむようになる、顕微鏡スライド用カバースリッ
プ。 - 【請求項２１】 さらにその中に乾燥させた試薬群を含有する、請求項２０
に記載のカバースリップ。 - 【請求項２２】 請求項２０に記載のカバースリップ、顕微鏡スライド、お
よび該カバースリップの一部と該顕微鏡スライドとの間に挟み込まれた挿入物、
の組合わせ。 - 【請求項２３】 該挿入物が対照試料を含むものである、請求項２２に記載
の組合わせ。 - 【請求項２４】 該カバースリップが、バーコードまたはテキストで標識さ
れている、請求項２０に記載のカバースリップ。 - 【請求項２５】 生物学的試料について顕微鏡スライド上でアッセイを実施
する方法であって： （ａ）生物学的試料を顕微鏡スライド上に置く段階、 （ｂ）該顕微鏡スライド上に請求項２０に記載のカバースリップを置く段階、 （ｃ）水、緩衝液または試薬を、該顕微鏡スライドと該カバースリップとの間の
既知容積内に流入させる段階、および、 （ｄ）反応を生起させる段階、 の各段階を含んでなる方法。 - 【請求項２６】 該カバースリップがその上に予乾燥した試薬を含むもので
ある、請求項２５に記載の方法。 - 【請求項２７】 生物学的試料について顕微鏡スライド上でアッセイを実施
する方法であって： （ａ）生物学的試料を顕微鏡スライド上に置く段階、 （ｂ）段階（ａ）の該顕微鏡スライドを、処理するために反応室内に入れる段階
、 （ｃ）カバースリップを該反応室内に入れる段階、および、 （ｄ）反応を生起させる段階、 の各段階を含んでなる方法。 - 【請求項２８】 該カバースリップが、該カバースリップを該反応室内に入
れるに先立って、その中に乾燥した試薬を含むものである、請求項２７に記載の
方法。 - 【請求項２９】 該カバースリップが、該反応を生起させるに先立って、そ
の上に置かれた対照試料を含むものである、請求項２７に記載の方法。 - 【請求項３０】 該カバースリップが、バーコードまたはテキストを含むも
のである、請求項２７に記載の方法。 - 【請求項３１】 該装置の各反応室内への１またはそれ以上の流入口および
１またはそれ以上の流出口を含んでなる、多数反応室装置。 - 【請求項３２】 加熱用ブロックと組み合わせた、請求項３１に記載の多数
反応室装置。 - 【請求項３３】 管部が該流入口へのポンプと連結している該ポンプと組み
合わせた、請求項３１に記載の多数反応室装置。 - 【請求項３４】 該ポンプを制御する中央処理ユニットと組合わせた、請求
項３３に記載の多数反応室装置。 - 【請求項３５】 該装置の１またはそれ以上の反応室内の空間容積を変える
手段と組み合わせた、請求項３１に記載の多数反応室装置。 - 【請求項３６】 該手段が中央処理ユニットを含むものである、請求項３５
に記載の多数反応室装置。 - 【請求項３７】 生物学的試料について、in situ 核酸増幅と組合わせてin situ ハイブリダイゼーションを実施する方法であって、 該生物学的試料を、核酸増幅を実施するための試薬群を含有する溶液と接触させ
、必要なら該溶液を核酸増幅の生起に充分な熱循環させ、次いで該生物学的試料
をin situ ハイブリダイゼーションのために分析し、さらに該溶液の試料を増幅
させた核酸について分析すること、を含む方法。 - 【請求項３８】 試薬を有するスライド上で生物学的試料を処理する方法で
あって、 ｉ）該試薬がフィルターペーパーの切片上に被覆してあり、そして、 ii）該スライド上の該生物学的試料を該フィルターペーパーと接触するように置
く、方法。 - 【請求項３９】 スライドに接触させるトレイであって、該トレイが多数の
ウエルを含むものであり、各ウエルが該スライドの一部とのみ接触しており、か
つ各ウエルが隙間または溝により隣接ウエル群と分離されている、トレイ。 - 【請求項４０】 請求項３９に記載のトレイを使用する、in situ ハイブリ
ダイゼーション実施方法。 - 【請求項４１】 核酸プローブを該トレイのウエル内で予乾燥してある、請
求項４０に記載の方法。 - 【請求項４２】 該スライドが、該スライド上に予めアレンジしてある対照
核酸を含むものである、請求項４０に記載の方法。
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/219,443 | 1998-12-23 | ||
| US09/219,443 US6703247B1 (en) | 1996-12-23 | 1998-12-23 | Apparatus and methods for efficient processing of biological samples on slides |
| PCT/US1999/030519 WO2000038838A1 (en) | 1998-12-23 | 1999-12-22 | Apparatus and methods for efficient processing of biological samples on slides |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2002533695A true JP2002533695A (ja) | 2002-10-08 |
Family
ID=22819279
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP2000590782A Pending JP2002533695A (ja) | 1998-12-23 | 1999-12-22 | スライド上で生物学的試料を効率的に処理する装置および方法 |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7598036B2 (ja) |
| EP (1) | EP1154858A1 (ja) |
| JP (1) | JP2002533695A (ja) |
| CN (1) | CN1195585C (ja) |
| AU (1) | AU2483700A (ja) |
| CA (1) | CA2356354A1 (ja) |
| WO (1) | WO2000038838A1 (ja) |
Cited By (10)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005075680A1 (ja) * | 2004-02-09 | 2005-08-18 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | 核酸検出方法およびその利用 |
| JP2006308575A (ja) * | 2005-04-27 | 2006-11-09 | Ventana Medical Systems Inc | スライド大量自動処理システム |
| JP2008203276A (ja) * | 2005-02-11 | 2008-09-04 | Sakura Finetex Usa Inc | 試薬コンテナ、そしてスライド反応トレイおよび保持トレイ、ならびに操作の方法 |
| JP2016520814A (ja) * | 2013-03-30 | 2016-07-14 | クラリエント ダイアグノスティック サービシーズ， インコーポレイテッド | 品質対照をその上に有する顕微鏡スライド |
| JP2016164515A (ja) * | 2015-03-06 | 2016-09-08 | 株式会社森永生科学研究所 | コントロールスライド及びコントロール実験の方法 |
| JP2016197134A (ja) * | 2015-04-02 | 2016-11-24 | コニカミノルタ株式会社 | 工程処理実施の有無を判別する手段を有するスライドグラス、組織切片スライド、組織切片用処理容器、および工程処理実施の有無の判別方法 |
| WO2018181483A1 (ja) * | 2017-03-31 | 2018-10-04 | 松浪硝子工業株式会社 | スライドグラス及びスライドグラスの製造のための溶液 |
| JP2019194576A (ja) * | 2018-04-24 | 2019-11-07 | サクラ ファインテック ユー．エス．エー．， インコーポレイテッド | 幾つかのバーコードを有する標本スライド |
| JP2020514705A (ja) * | 2016-12-21 | 2020-05-21 | ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． | 試薬送達のための方法、システム、及び固体組成物 |
| WO2025105081A1 (ja) * | 2023-11-13 | 2025-05-22 | 株式会社日立ハイテク | 試料処理装置 |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR100916074B1 (ko) | 2001-03-09 | 2009-09-08 | 바이오마이크로 시스템즈, 인크. | 어레이에 대한 마이크로유체 인터페이스 방법 및인터페이스용 시스템 |
| US11249095B2 (en) * | 2002-04-15 | 2022-02-15 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated high volume slide processing system |
| AU2003224987B2 (en) * | 2002-04-15 | 2009-09-10 | Ventana Medical Systems, Inc. | Automated high volume slide staining system |
| DE102005052713A1 (de) * | 2005-11-04 | 2007-05-16 | Clondiag Chip Tech Gmbh | Vorrichtung und Verfahren zum Nachweis von molekularen Wechselwirkungen |
| US20100110541A1 (en) * | 2005-10-26 | 2010-05-06 | Angros Lee H | Microscope slide coverslip and uses thereof |
| US20100073766A1 (en) * | 2005-10-26 | 2010-03-25 | Angros Lee H | Microscope slide testing and identification assembly |
| US20100072272A1 (en) * | 2005-10-26 | 2010-03-25 | Angros Lee H | Microscope slide coverslip and uses thereof |
| EP2223179A1 (en) * | 2007-12-19 | 2010-09-01 | DSM IP Assets B.V. | Method for taking a plurality of samples |
| JP5474080B2 (ja) | 2008-11-12 | 2014-04-16 | ヴェンタナ メディカル システムズ， インコーポレイテッド | 標本担持スライドを加熱するための装置 |
| WO2011008415A2 (en) * | 2009-07-17 | 2011-01-20 | Ventana Medical Systems, Inc. | Cover tile for treating a substrate with a fluid |
| WO2012057801A1 (en) * | 2010-10-29 | 2012-05-03 | Feng Tian | Apparatus for processing biological samples and method thereof |
| CN103347574B (zh) * | 2010-12-07 | 2016-04-20 | 朱伟星 | 病理学形态分析的细胞阵列质量控制装置 |
| WO2013111025A1 (en) * | 2012-01-24 | 2013-08-01 | Koninklijke Philips N.V. | Flow through device for staining and/or analyzing a biological sample |
| WO2014059011A1 (en) | 2012-10-09 | 2014-04-17 | Advandx, Inc. | Devices, compositions and methods pertaining to microscopic analysis of microorganisms and other analytes of interest |
| CN102879557A (zh) * | 2012-10-11 | 2013-01-16 | 南京大学 | 一种植物电生理实验用显微样品固定装置 |
| ES2927378T3 (es) | 2013-12-13 | 2022-11-04 | Ventana Med Syst Inc | Aparato de procesamiento de portaobjetos automatizado |
| CN104849121A (zh) * | 2015-02-06 | 2015-08-19 | 上海乐辰生物科技有限公司 | 生物样品处理仪器 |
| ES2901298T3 (es) | 2016-04-29 | 2022-03-22 | Biocare Medical Llc | Sistemas y métodos de procesamiento de muestras biológicas |
| US11471891B2 (en) | 2016-06-06 | 2022-10-18 | SciTech Consultants, LLC | Benchtop incubator |
| JP6208301B1 (ja) | 2016-07-29 | 2017-10-04 | シスメックス株式会社 | 標本搬送装置、塗抹標本システム及び塗抹標本作製装置 |
| EP3559627A1 (en) * | 2016-12-20 | 2019-10-30 | Diapath S.p.A. | Disposable container for stains or reagents for staining machines of biological material and staining system comprising said container |
| KR102378095B1 (ko) * | 2017-06-15 | 2022-03-23 | 션전 피알에스 리미티드 | 특수 착색용 공정 기록 슬라이드 |
| CN107817143A (zh) * | 2017-10-20 | 2018-03-20 | 杭州依美洛克医学科技有限公司 | 用于免疫组化物检测配合显微镜载物片的生物盖片 |
| US11293004B2 (en) | 2018-01-09 | 2022-04-05 | SciTech Consultants, LLC | Benchtop incubator including multiple temperature monitors |
| CN111426823B (zh) * | 2020-04-30 | 2024-08-20 | 益善生物技术股份有限公司 | 检测用反应盒及检测操作方法 |
Family Cites Families (29)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4957858A (en) * | 1986-04-16 | 1990-09-18 | The Salk Instute For Biological Studies | Replicative RNA reporter systems |
| US4814269A (en) * | 1985-03-29 | 1989-03-21 | Cenfold Holdings S.A. | Diagnostic testing for antibodies against microorganisms |
| US4731335A (en) | 1985-09-13 | 1988-03-15 | Fisher Scientific Company | Method for treating thin samples on a surface employing capillary flow |
| US5023187A (en) | 1985-09-13 | 1991-06-11 | Fisher Scientific Company | Method and device for accelerated treatment of thin sample on surface |
| US4800159A (en) | 1986-02-07 | 1989-01-24 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences |
| US5002736A (en) | 1987-03-31 | 1991-03-26 | Fisher Scientific Co. | Microscope slide and slide assembly |
| US4849340A (en) * | 1987-04-03 | 1989-07-18 | Cardiovascular Diagnostics, Inc. | Reaction system element and method for performing prothrombin time assay |
| GB8722902D0 (en) | 1987-09-30 | 1987-11-04 | Shandon Southern Prod | Tissue &c processing |
| US5188963A (en) * | 1989-11-17 | 1993-02-23 | Gene Tec Corporation | Device for processing biological specimens for analysis of nucleic acids |
| US4975250A (en) | 1989-08-21 | 1990-12-04 | Fisher Scientific Co. | Aligned slideholder and assembly |
| US5346672A (en) * | 1989-11-17 | 1994-09-13 | Gene Tec Corporation | Devices for containing biological specimens for thermal processing |
| US5021218A (en) * | 1990-01-19 | 1991-06-04 | Dlp, Inc. | Apparatus for transporting specimen slides |
| US5192503A (en) * | 1990-05-23 | 1993-03-09 | Mcgrath Charles M | Probe clip in situ assay apparatus |
| US5955377A (en) * | 1991-02-11 | 1999-09-21 | Biostar, Inc. | Methods and kits for the amplification of thin film based assays |
| US5273905A (en) * | 1991-02-22 | 1993-12-28 | Amoco Corporation | Processing of slide mounted material |
| AU645915B2 (en) * | 1991-07-23 | 1994-01-27 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Improvements in the in situ PCR |
| US5498392A (en) | 1992-05-01 | 1996-03-12 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | Mesoscale polynucleotide amplification device and method |
| US5364790A (en) * | 1993-02-16 | 1994-11-15 | The Perkin-Elmer Corporation | In situ PCR amplification system |
| US5556773A (en) | 1993-08-06 | 1996-09-17 | Yourno; Joseph | Method and apparatus for nested polymerase chain reaction (PCR) with single closed reaction tubes |
| US5439649A (en) * | 1993-09-29 | 1995-08-08 | Biogenex Laboratories | Automated staining apparatus |
| US5415839A (en) * | 1993-10-21 | 1995-05-16 | Abbott Laboratories | Apparatus and method for amplifying and detecting target nucleic acids |
| GB9506312D0 (en) * | 1995-03-28 | 1995-05-17 | Medical Res Council | Improvements in or relating to sample processing |
| GB9516636D0 (en) | 1995-08-14 | 1995-10-18 | Univ London | In-situ nucleic acid amplification and detection |
| DE69724515T2 (de) * | 1996-06-07 | 2004-04-01 | Oxoid Ltd., Basingstoke | Vorrichtung und Testsatz zum Test von Serum und dergleichen |
| US5958341A (en) * | 1996-12-23 | 1999-09-28 | American Registry Of Pathology | Apparatus for efficient processing of tissue samples on slides |
| US6143496A (en) | 1997-04-17 | 2000-11-07 | Cytonix Corporation | Method of sampling, amplifying and quantifying segment of nucleic acid, polymerase chain reaction assembly having nanoliter-sized sample chambers, and method of filling assembly |
| US6465178B2 (en) * | 1997-09-30 | 2002-10-15 | Surmodics, Inc. | Target molecule attachment to surfaces |
| US6087102A (en) * | 1998-01-07 | 2000-07-11 | Clontech Laboratories, Inc. | Polymeric arrays and methods for their use in binding assays |
| US6181811B1 (en) | 1998-01-13 | 2001-01-30 | Neopath, Inc. | Method and apparatus for optimizing biological and cytological specimen screening and diagnosis |
-
1999
- 1999-12-22 EP EP99968163A patent/EP1154858A1/en not_active Withdrawn
- 1999-12-22 AU AU24837/00A patent/AU2483700A/en not_active Abandoned
- 1999-12-22 WO PCT/US1999/030519 patent/WO2000038838A1/en not_active Application Discontinuation
- 1999-12-22 JP JP2000590782A patent/JP2002533695A/ja active Pending
- 1999-12-22 CN CNB998163074A patent/CN1195585C/zh not_active Expired - Fee Related
- 1999-12-22 CA CA002356354A patent/CA2356354A1/en not_active Abandoned
-
2005
- 2005-06-22 US US11/157,922 patent/US7598036B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2009
- 2009-10-06 US US12/574,468 patent/US20100112577A1/en not_active Abandoned
Cited By (15)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2005075680A1 (ja) * | 2004-02-09 | 2005-08-18 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | 核酸検出方法およびその利用 |
| JP2008203276A (ja) * | 2005-02-11 | 2008-09-04 | Sakura Finetex Usa Inc | 試薬コンテナ、そしてスライド反応トレイおよび保持トレイ、ならびに操作の方法 |
| JP2006308575A (ja) * | 2005-04-27 | 2006-11-09 | Ventana Medical Systems Inc | スライド大量自動処理システム |
| JP2013092532A (ja) * | 2005-04-27 | 2013-05-16 | Ventana Medical Syst Inc | スライド大量自動処理システム |
| JP2016520814A (ja) * | 2013-03-30 | 2016-07-14 | クラリエント ダイアグノスティック サービシーズ， インコーポレイテッド | 品質対照をその上に有する顕微鏡スライド |
| WO2016143717A1 (ja) * | 2015-03-06 | 2016-09-15 | 株式会社森永生科学研究所 | コントロールスライド及びコントロール実験の方法 |
| JP2016164515A (ja) * | 2015-03-06 | 2016-09-08 | 株式会社森永生科学研究所 | コントロールスライド及びコントロール実験の方法 |
| JP2016197134A (ja) * | 2015-04-02 | 2016-11-24 | コニカミノルタ株式会社 | 工程処理実施の有無を判別する手段を有するスライドグラス、組織切片スライド、組織切片用処理容器、および工程処理実施の有無の判別方法 |
| JP2020514705A (ja) * | 2016-12-21 | 2020-05-21 | ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． | 試薬送達のための方法、システム、及び固体組成物 |
| JP7025430B2 (ja) | 2016-12-21 | 2022-02-24 | ヴェンタナ メディカル システムズ， インク． | 試薬送達のための方法、システム、及び固体組成物 |
| US11686738B2 (en) | 2016-12-21 | 2023-06-27 | Ventana Medical Systems, Inc. | Methods, systems and solid compositions for reagent delivery |
| WO2018181483A1 (ja) * | 2017-03-31 | 2018-10-04 | 松浪硝子工業株式会社 | スライドグラス及びスライドグラスの製造のための溶液 |
| JP2019194576A (ja) * | 2018-04-24 | 2019-11-07 | サクラ ファインテック ユー．エス．エー．， インコーポレイテッド | 幾つかのバーコードを有する標本スライド |
| US10877054B2 (en) | 2018-04-24 | 2020-12-29 | Sakura Finetek U.S.A., Inc. | Specimen slide having several barcodes |
| WO2025105081A1 (ja) * | 2023-11-13 | 2025-05-22 | 株式会社日立ハイテク | 試料処理装置 |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20050238534A1 (en) | 2005-10-27 |
| EP1154858A1 (en) | 2001-11-21 |
| AU2483700A (en) | 2000-07-31 |
| WO2000038838A8 (en) | 2000-08-17 |
| CN1335789A (zh) | 2002-02-13 |
| US20100112577A1 (en) | 2010-05-06 |
| US7598036B2 (en) | 2009-10-06 |
| WO2000038838A1 (en) | 2000-07-06 |
| CA2356354A1 (en) | 2000-07-06 |
| CN1195585C (zh) | 2005-04-06 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2002533695A (ja) | スライド上で生物学的試料を効率的に処理する装置および方法 | |
| US6703247B1 (en) | Apparatus and methods for efficient processing of biological samples on slides | |
| Zollinger et al. | GeoMx™ RNA assay: high multiplex, digital, spatial analysis of RNA in FFPE tissue | |
| US20060216744A1 (en) | Apparatus and methods for efficient processing of biological samples on slides | |
| US4731335A (en) | Method for treating thin samples on a surface employing capillary flow | |
| AU756731B2 (en) | Cellular arrays for rapid molecular profiling | |
| US20140273088A1 (en) | Method, apparatus and system for staining of biological samples | |
| JP6021898B2 (ja) | 液体試料中の細胞の検出方法およびこの方法を実施するための装置 | |
| CN110461244A (zh) | 用于处理、检测和多重分析完整固定的石蜡或塑料包埋（ifpe）的生物材料的多孔装置 | |
| WO2001022086A1 (en) | A high-throughput system for evaluating the clinical utility of molecular targets in tissue samples | |
| US20210011023A1 (en) | Multiplex her2 and estrogen receptor co-staining assays for detecting tumor heterogeneity | |
| JP6626097B2 (ja) | 乳がんにおける腫瘍内ｈｅｒ２不均質性の意義及びそのための使用 | |
| JP6877550B2 (ja) | 組織試料用の全自動核酸抽出方法 | |
| US20050287578A1 (en) | Methods for RNA fluorescence in situ hybridization | |
| Abati et al. | If cells could talk: the application of new techniques to cytopathology | |
| Press et al. | Characterization of HER2 status by fluorescence in situ hybridization (FISH) and immunohistochemistry (IHC) | |
| AU2004205218A1 (en) | Apparatus and methods for efficient processing of biological samples on slides | |
| JP2004132838A (ja) | 被検生物学的試料の新規染色方法およびそれに使用されるアッセイ用キット | |
| CN119375472A (zh) | 一种鸡尾酒样免疫组化检测方法 | |
| Reichard et al. | Detection of genetic translocations in lymphoma using fluorescence in situ hybridization | |
| CA1336653C (en) | Method and apparatus for treating thin sample on a surface employing capillary flow | |
| Dandachi et al. | Detection of HER-2 Oncogene in Chromogenic Human Breast in Carcinoma situ Hybridization | |
| JP2000217574A (ja) | 固定された生物学的物質上に試薬を標的化して適用する方法 |