JP2002326931A - アンドロゲン受容体作用阻害剤 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】 【課題】 高い抗アンドロゲン活性と安定性および安全
性を有する、新規なアンドロゲン受容体作用阻害剤を提
供すること。 【解決手段】 5-ヒドロキシフラボンを有効成分として
含有するアンドロゲン受容体作用阻害剤を提供した。 【効果】 本発明のアンドロゲン受容体作用阻害剤の有
効成分である5-ヒドロキシフラボンは非常に高いアンド
ロゲン受容体作用阻害活性を示す。また、5-ヒドロキシ
フラボンを包含するフラボノイド類は、食用に供される
植物の組織中にも広範囲に含まれており、本発明のアン
ドロゲン受容体作用阻害剤は安全性が高い。このため、
本発明のアンドロゲン受容体作用阻害剤は安全性が高
く、多毛症、ニキビ（尋常性ざ瘡）、男性型脱毛症等の
アンドロゲン依存性疾患の予防および/または治療に有
用である。

Description

【発明の詳細な説明】

【０００１】

【発明の属する技術分野】本発明は、アンドロゲン受容
体作用阻害剤に関する。本発明のアンドロゲン受容体作
用阻害剤は、アンドロゲン依存性疾患、例えば、多毛
症、ニキビ（尋常性ざ瘡）、男性型脱毛症等の予防およ
び/または治療に有用である。

【０００２】

【従来の技術】アンドロゲン依存性疾患は、テストステ
ロン等の男性ホルモン（5-αジヒドロテストステロン
（5α-DHT））の過剰分泌が発症原因の一つとして知ら
れている。したがって、男性ホルモンの過剰な作用を抑
制することで、アンドロゲン依存性疾患を予防および/
または治療できる。

【０００３】5α-DHTの過剰な作用を抑制する方法の一
つとして、テストステロンを活性型の5α-DHTに変換す
る酵素である５α-リダクターゼを阻害する物質の検討
がなされてきた。その様な阻害剤としては、アンドロス
タノン誘導体、ジクロヘプテノン誘導体、フェノキシブ
タン誘導体、トコフェリルキノン誘導体、トロポロン誘
導体、ユビキノン等の他シソ科植物、キク科植物をはじ
め多くの植物の抽出物が知られている。また、フラボン
類に５α-リダクターゼ阻害作用があることも公知（特
開平1-96126）である。

【０００４】また、5α-DHTのアンドロゲン受容体への
結合阻害剤としては、シプロテロン酢酸やスピロノラク
トンが挙げられる。

【０００５】しかしながら、上記の５α-リダクターゼ
阻害剤やアンドロゲン受容体結合阻害剤の多くは、副作
用が懸念されたり、製剤基剤中での安定性が悪かった
り、作用が不充分であったりして、十分な抗アンドロゲ
ン活性と安定性および安全性を充足するものは少なかっ
た。

【０００６】

【発明が解決しようとする課題】従って、本発明の目的
は、高い抗アンドロゲン活性と安定性および安全性を有
する、新規なアンドロゲン受容体作用阻害剤を提供する
ことである。

【０００７】

【課題を解決するための手段】本発明者らは、鋭意検討
した結果、5-ヒドロキシフラボンが高いアンドロゲン受
容体作用阻害活性を有することを見出し、本発明を完成
した。

【０００８】すなわち、本発明は、5-ヒドロキシフラボ
ンを有効成分として含有するアンドロゲン受容体作用阻
害剤を提供する。また、本発明は、上記本発明のアンド
ロゲン受容体作用阻害剤を有効成分として含有する化粧
料組成物を提供する。さらに、本発明は、上記本発明の
アンドロゲン受容体作用阻害剤を有効成分として含有す
る外用剤を提供する。さらに、本発明は、上記本発明の
アンドロゲン受容体作用阻害剤を有効成分として含有す
るアンドロゲン依存疾患治療剤を提供する。

【０００９】

【発明の実施の形態】上記の通り、本発明のアンドロゲ
ン受容体作用阻害剤は、5-ヒドロキシフラボン（別名プ
リムレチン）を有効成分として含有するものである。

【００１０】5-ヒドロキシフラボン自体は周知であり、
その製造方法も周知であり、市販もされている（例え
ば、Sigma社よりProduct No. H4280として市販）。本発
明においては、このような市販品を用いることもでき
る。

【００１１】本発明において、アンドロゲン受容体作用
阻害とは、アンドロゲン受容体のリガンドである５α-
ＤＨＴ、またはメチルトリエノロン（R1881）によるア
ンドロゲン受容体を介した転写を阻害するものを意味
し、その阻害メカニズムはいかなるものであってもよ
い。阻害メカニズムとしては、例えば、阻害剤が5α-Ｄ
ＨＴやＲ1881よりも先にアンドロゲン受容体に結合す
る、阻害剤が5α-ＤＨＴやＲ1881に結合することでアン
ドロゲン受容体に5α-ＤＨＴやＲ1881が結合できなくな
る等が考えられ、具体的には、競合的拮抗阻害薬、非競
合的拮抗阻害薬といったアンタゴニストが考えられる。
結果として、アンドロゲンの過剰なアンドロゲン受容体
への作用が軽減されるようであれば良い。アンドロゲン
受容体作用阻害剤は、アンドロゲン受容体のリガンドで
ある5α-ＤＨＴやＲ1881のアンドロゲン受容体への作用
を阻害することで、アンドロゲン依存性疾患の予防およ
び/または治療剤になり得る。

【００１２】本発明のアンドロゲン受容体作用阻害剤
は、アンドロゲン依存性疾患の予防および/または治療
剤として有用である。本発明のアンドロゲン受容体作用
阻害剤により予防及び／又は治療が可能なアンドロゲン
依存性疾患の例としては、多毛症、ニキビ（尋常性ざ
瘡）、男性型脱毛症等を挙げることができるがこれらに
限定されるものではなく、アンドロゲン受容体の作用の
過剰発現により引き起こされるいずれの疾患も包含され
る。

【００１３】本発明において、アンドロゲン受容体作用
阻害剤は、経口または非経口に投与することができる。
例えば、多毛症、ニキビ（尋常性ざ瘡）、男性型脱毛症
等を予防および/または治療する場合には、非経口的に
投与することが好ましい。製剤としては外用剤が好まし
く、具体的な外用剤の製剤としては、エキス剤、硬膏
剤、酒精剤、座剤、懸濁剤、チンキ剤、軟膏剤、パップ
剤、リニメント剤、ローション剤、エアゾール剤等を挙
げることが出来る。また、経口的に投与する製剤として
は、錠剤、カプセル剤、散剤、細粒剤、顆粒剤、内服液
剤等の剤形を挙げる事が出来る。これらの製剤は、患者
の年齢、症状等に応じて適当量を患部等に塗布または、
噴霧すれば良い。また、シャンプー、リンス、コンデシ
ョナー、ヘアトニック、ヘアクリーム、ヘアリキッド等
の化粧料組成物に本発明のアンドロゲン受容体作用阻害
剤を配合しても良い。

【００１４】製剤化は、公知の製剤技術により行うこと
ができ、製剤中には適当な製剤添加物を加えることが出
来る。製剤添加物としては、賦形剤、懸濁化剤、乳化
剤、保存剤および香料等を挙げることができる。以下に
好ましい製剤例の組成及び調製方法を示す。

【００１５】 製剤例１ 化粧水 （Ａ）精製水 ７８．９８重量部 グリセリン ５．０重量部 プロピレングリコール ４．０重量部 （Ｂ）ＰＯＥ（２０）ソルビタンモノラウリン酸エステル １．５重量部 ＰＯＥ（２０）ラウリルエーテル ０．５重量部 エタノール １０．０重量部 5-ヒドロキシフラボン ０．０２重量部 （調製方法）（Ａ）の各成分を合わせ、室温下に溶解す
る。一方、（Ｂ）の各成分も室温下に溶解し、これを
（Ａ）処方分に加えて溶解する。

【００１６】 製剤例２ 塗布剤 （Ａ）ワセリン １８．０重量部 セタノール ８．０重量部 ＰＯＥ（２０）オレイルエーテル １．４重量部 モノステアリン酸ソルビタン ０．８重量部 5-ヒドロキシフラボン ０．５重量部 （Ｂ）防腐剤 ０．３重量部 精製水 ７１．０重量部 （調製方法）（Ａ）の各成分を合わせ、加熱混合し７０
℃とする。（Ｂ）の各成分を合わせ、７０℃にて加熱混
合し、これに（Ａ）処方分を加え混合し、混合しながら
冷却する。

【００１７】製剤中における各成分の配合量は、適宜、
使用目的、性別、症状等を考慮して検討すれば良いが、
通常は１日1〜1000 mgを一回または、数回に分けて投与
するのが好ましい。

【００１８】以下に実施例等を挙げて本発明をさらに詳
細に説明するが、本発明はこれらのみに限定されるべき
ものではない。

【００１９】

【実施例】実施例1 アンドロゲン受容体作用阻害 （１） ヒトアンドロゲン受容体作用安定発現株の取得 CV-1細胞にレポーター遺伝子発現ユニットを２個含有す
るレポータープラスミドpGL2-(GRE3-bG-luc)x2-Hyg(re
v)(図１)とhAR発現プラスミドpCI-neo-BamX-AR（Gly2
3）(図２)を導入して、ヒトアンドロゲン受容体作用評
価系に使用する安定発現株を作製した。

【００２０】まず、pGL2-(GRE3-bG-luc)x2-Hyg(rev)とp
CI-neo-BamX-AR（Gly23）を、細胞導入用に、Qiagen P
lasmid Maxi Kit(Qiagen社、 Cat. No. 1263)を用い
て調製した。CV-1細胞は、ダルベッコ改変イーグル培地
（DMEM；日水製薬）に牛胎児血清（Intergen 社、カタ
ログNo. 1020-90）を終濃度10%になるように添加し、さ
らに終濃度50 U/mlのペニシリンGと50 μg/mlの硫酸ス
トレプトマイシンを加えた培地（以下増殖用培地と称
す）を用いて37℃にて5% CO₂存在下で培養し、1.5ｘ10⁶
の細胞を直径約10 cmのシャーレに播種した。2日後、こ
の細胞にリポフェクション法でpGL2-(GRE3-bG-luc)x2-H
yg(rev)とpCI-neo-BamX-AR（Gly23）を導入した。リポ
フェクション法の条件は、リポフェクトアミン（GIBCOB
RL社、Cat.No. 26300-61）に添付されたマニュアルに従
って、3 μg/シャーレのpGL2-(GRE3-bG-luc)x2-Hyg(re
v)と3 μg/シャーレのpCI-neo-BamX-AR（Gly23）を添加
し、16時間処理した後、増殖用培地に戻した。プラスミ
ドを導入して2日後に、トリプシン処理により細胞をシ
ャーレから剥がして回収し、増殖用培地の入ったシャー
レに移した。プラスミドを導入して5日後に、終濃度500
μg/mlのG418(CalBiochem社、Cat.No.345810)と終濃度4
00μg/mlハイグロマイシンB（和光純薬Cat.No.085-0615
3）が添加された増殖用培地の入ったシャーレに移し、
培地を3から4日毎に新しい培地（終濃度500μg/mlのG41
8と終濃度400μg/mlハイグロマイシンBが添加された増
殖用培地）に交換しながら約1ヶ月間培養した。細胞が1
〜数mmのコロニーを形成した時点で、終濃度500μg/ml
のG418と終濃度400μg/mlハイグロマイシンBが添加され
た増殖用培地の入った24ウエルプレートにコロニーを移
し、更に培養した。細胞がほぼウエルの全面を占めるま
で増殖したら、トリプシン処理により、細胞を剥がし
て、測定用に4/5の細胞を新しい24ウエルプレートの2ウ
エルに均等に移し、残り1/5の細胞を別の新しい24ウエ
ルプレートに移し、マスタープレートとして培養を継続
した。測定用の細胞は細胞がウエルの全面を占めるまで
培養し、2ウエルのうち一方にはDMSOに溶解させた5α-
ジヒドロテストステロン（5α-DHT; 和光純薬、Cat.No.
045-26701）を終濃度が100 nM（DMSOの終濃度は0.1%）
になるように添加したフェノールレッドフリーDMEM（GI
BCOBRL社、Cat.No.11054-620）-10%活性炭・デキストラ
ン処理牛胎児血清（HyClone社、Cat.No.SH30068.03)培
地（以下測定用培地と称す）に、もう一方には終濃度が
0.1％になるようDMSOを添加した測定用培地に置換し、3
7℃で24時間培養、細胞をPBSで洗浄した後、Reporter
Lysis Buffer（Promega社、Cat.No.E3971）をウエル
当たり100 μlずつ加えて室温で30分震盪した。細胞溶
解液25μlを96ウエルプレート移し、100μlの基質液（P
romega社、Cat.No.E1483）を自動分注し、ルミノメータ
ーCT-9000D (Dia-iatron社）で、ルシフェラーゼ活性を
測定した。薬剤耐性株125クローンの活性を測定し、5α
-DHT添加系の方が、DHT非添加系よりも2倍以上高いルシ
フェラーゼ活性を示す細胞を選択した。

【００２１】選択した細胞は、さらに、稀釈限界法によ
りリクローニングを行い、5α-DHT添加により高い誘導
倍率を示し、かつ高いルシフェラーゼ活性を示す細胞を
AR1047-3と名づけた。AR1047-3は受託番号ＦＥＲＭ Ｐ
−１８０６３として、茨城県つくば市東１丁目１番３号
の経済産業省産業技術総合研究所生命工学工業技術研究
所に平成１２年９月２９日より寄託されている。

【００２２】（２） アンドロゲン受容体作用阻害は、
上記（１）で得られたヒトアンドロゲン受容体作用安定
発現株AR1047-3を用いたレポータージーンアッセイ法に
よってフラボン類の抗アンドロゲン受容体作用を調べ
た。

【００２３】即ち、AR1047-3をダルベッコ改変イーグル
培地（DMEM；日水製薬）に牛胎児血清（Intergen 社、
カタログNo. 1020-90）を終濃度10%になるように添加
し、さらに終濃度50 U/mlのペニシリンG、50 μg/mlの
硫酸ストレプトマイシン、500μg/mlのG418(CalBiochem
社、Cat.No.345810)、400μg/mlハイグロマイシンB（和
光純薬、Cat.No.085-06153）を加えた培地を用いて37℃
にて5% CO₂存在下で培養後、約1.0 x 10⁵細胞/ウエルず
つ24ウエルプレートに播種した。翌日、ARのアゴニスト
R1881（NEN社、Cat.No.NLP-005：終濃度100 pM）に各サ
ンプル（DMSOの終濃度は0.1%）を添加したフェノールレ
ッドフリーDMEM（GIBCOBRL社、Cat.No.11054-620）-10%
活性炭・デキストラン処理牛胎児血清（HyClone社、Ca
t.No.SH30068.03)培地（以下測定用培地と称す）に置換
し、コントロールとしては、終濃度が0.1％になるようD
MSOを添加した測定用培地に置換し、37℃で24時間培
養、細胞をPBSで洗浄した後、Repoter Lysis Buffer
（Promega社、Cat.No.E3971）をウエル当たり100 μlず
つ加えて室温で30分震盪した。細胞溶解液25μlを96ウ
エルプレートに移し、100μlの基質液（Promega社、Ca
t.No.E1483）を自動分注し、ルミノメーターCT-9000D(D
ia-iatron社）で、ルシフェラーゼ活性を測定した。阻
害活性の結果を表1に示した。尚、阻害活性は、以下の
計算により求めた。

【００２４】 阻害活性（％）＝（1−（A−B）/（C−B））ｘ100 ：A=100ｐM R1881と化合物添加時の活性、B=DMSOのみ添
加時の活性）、C=100ｐMR1881添加時の活性

【００２５】

【表１】表1 ＊ (1) フラボン (2) プリムレチン(5-ヒドロキシフラボン） (3) フラボノール（3-ヒドロキシフラボン） (4) クリシン（5,7-ジヒドロキシフラボン） (5) アピゲニン（4',5,7-トリヒドロキシフラボン） (6) ケンフェロール（3,4',5,7-テトラヒドロキシフラ
ボン） (7) 7,8-ジヒドロキシフラボン (8) 7,8-ジメトキシフラボン

【００２６】表1に示した様に、5-ヒドロキシフラボン
（化合物（2））は、アンドロゲン受容体作用阻害活性
が報告されている、シプロテロン酢酸やスピロノラクト
ンを大きく上回る阻害活性を示した。

【００２７】

【発明の効果】本発明のアンドロゲン受容体作用阻害剤
の有効成分である5-ヒドロキシフラボンは非常に高いア
ンドロゲン受容体作用阻害活性を示す。また、5-ヒドロ
キシフラボンを包含するフラボノイド類は、食用に供さ
れる植物の組織中にも広範囲に含まれており、本発明の
アンドロゲン受容体作用阻害剤は安全性が高い。このた
め、本発明のアンドロゲン受容体作用阻害剤は安全性が
高く、多毛症、ニキビ（尋常性ざ瘡）、男性型脱毛症等
のアンドロゲン依存性疾患の予防および/または治療に
有用である。

【図面の簡単な説明】

【図１】本発明の実施例において、アンドロゲン受容体
作用阻害活性の評価に用いたアンドロゲン受容体作用安
定発現株の作出に用いた、レポーター遺伝子発現ユニッ
トを2個とハイグロマイシン耐性遺伝子を含有するプラ
スミドpGL2-(GRE3-bG-luc)x2-hyg(rev)のマップを示
す。GRE3はアンドロゲン応答性領域GREが3個連結してい
ることを表し、また、bGは、ラビットβグロビンプロモ
ーター、lucはルシフェラーゼ遺伝子、Ampはアンピシリ
ン耐性遺伝子、Hygrはハイグロマイシン耐性遺伝子を示
す。

【図２】本発明の実施例において、アンドロゲン受容体
作用阻害活性の評価に用いたアンドロゲン受容体作用安
定発現株の作出に用いた、ポリGly数が23からなるhAR発
現プラスミドpCI-neo-BamX-AR(Gly23)のマップを示す。
CMV I.E. Enhancer/Promoterは、サイトメガロウイルス
極初期エンハンサー(Cytomegarovirus immediate-early
enhancer)とプロモーター、AR(Gly23)はGly数が23から
なるヒトアンドロゲン遺伝子、Neoはネオマイシン耐性
遺伝子、Ampはアンピシリン耐性遺伝子を示す。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ａ６１Ｋ 7/48 Ａ６１Ｋ 7/48 Ａ６１Ｐ 5/28 Ａ６１Ｐ 5/28 17/10 17/10 17/14 17/14 43/00 １１１ 43/00 １１１ Ｃ０７Ｄ 311/30 Ｃ０７Ｄ 311/30 Ｆターム(参考） 4C062 EE50 4C083 AC841 AC842 CC02 CC37 EE14 EE22 4C086 AA01 AA02 BA08 MA01 MA04 MA63 NA14 ZA89 ZA92 ZC02 ZC10 ZC42

Claims (4)

【特許請求の範囲】
1. 【請求項１】 5-ヒドロキシフラボンを有効成分として
   含有するアンドロゲン受容体作用阻害剤。
2. 【請求項２】 請求項1記載のアンドロゲン受容体作用
   阻害剤を有効成分として含有する化粧料組成物。
3. 【請求項３】 請求項1記載のアンドロゲン受容体作用
   阻害剤を有効成分として含有する外用剤。
4. 【請求項４】 請求項1記載のアンドロゲン受容体作用
   阻害剤を有効成分として含有するアンドロゲン依存疾患
   予防及び／又は治療剤。