JP2000516594A

JP2000516594A - 免疫細胞介在全身性疾患の改良された治療法

Info

Publication number: JP2000516594A
Application number: JP10508892A
Authority: JP
Inventors: デイビス，チャールズ・ボールドウィン; バジェルスキー，ピーター・ジョン; マクドナルド，ブライアン・リチャード
Original assignee: SmithKline Beecham Corp
Current assignee: SmithKline Beecham Corp
Priority date: 1996-07-26
Filing date: 1997-07-25
Publication date: 2000-12-12
Also published as: EP0938334A4; WO1998004281A1; EP0938334A1

Abstract

(57)【要約】免疫細胞介在全身性疾患、特にＴおよびＢ細胞介在疾患の治療の改良法は、治療用タンパク質の全身性暴露、または生物利用性を増加させることにより提供される。このような治療用タンパク質は、モノクローナル抗体、可溶性レセプターおよび免疫細胞の表面上に発現された抗原と結合する可溶性リガンドからなる群より選択される。

Description

【発明の詳細な説明】免疫細胞介在全身性疾患の改良された治療法発明の分野本発明は、一般に、モノクローナル抗体、投与経路、および免疫細胞介在疾患の治療分野に関する。発明の背景最近、臨床試験または種々の妊娠試験、敗血症の診断などのインビボ用途、臓器移植、自己免疫疾患、再狭窄症、ある種の癌の治療などの治療的用途、ならびに予防的用途、例えば抗ウイルス剤としてのモノクローナル抗体が多数ある。典型的には、このような抗体を静脈内（ｉｖ）または皮下（ｓｃ）のいずれかで投与するが、例えば筋肉内（ｉｍ）および鼻内などの他の投与経路も可能である。一般に、ｉｖ投与は家庭での投与にはカテーテル法を必要とし、診療所または医院において投与する場合、医療を必要とし、またより極端な状況では、入院加療を必要とするので、ｓｃ投与がｉｖ投与より好ましい。加えて、ｉｖ投与される治療薬はｓｃ投与と比較した場合に、投与により長い時間を要し、その結果、より高価な治療となる。しかしながら、ｓｃ投与は欠点がないわけではない。例えば、注射部位で投与可能な最大投与量に関して物理的限度がある。大型ポリペプチド、例えば抗体は、皮下投与された場合に、まず注射部位からリンパ系中に吸収され、続いて血流中に移動することも観察されている［Weinst einら、Science，222:423-426(1983);Weinsteinら、Cancer Invest.，3:85-95(1 985);Supersaxoら、Pharm Res.，7:167-169(1990)］。リンパ系中に位置しない抗原標的、例えば呼吸器合胞体ウイルスに関して、ｓｃ投与された抗体の全身性暴露はｉｖ投与されたものに匹敵する［Davisら、Drug Met．Disp.，23:1028-10 36(1995)］。しかしながら、本出願者らは、抗体が免疫細胞、例えばＴ（またはＢ）細胞の表面上に発現された抗原を標的とするかまたは結合する場合、吸収の程度（すなわち、全身性暴露）は、リンパ系におけるこのような抗原との抗体の結合により制限され、すなわち、抗体が血流中に侵入することが妨げられることを見出した。したがって、全身性免疫細胞介在疾患、例えば慢性関節リウマチの治療には、抗体が有効量で最終の作用部位に到達するのが望ましい。皮下投与経路の場合、抗体が血流中に侵入し、リンパ節またはリンパ系の他の領域に残留しないことが重要である。したがって、全身性免疫細胞介在（例えばＴまたはＢ−細胞介在）疾患を治療するためには、効率的に抗体、および他の治療用タンパク質を投与する必要が存在する。本明細書において記載した方法は、この明細書を読むと当業者には明らかになるであろう。発明の要約本発明は、免疫細胞の表面上の選択された抗原と結合する治療用タンパク質の全身性暴露を増加させることによる、免疫細胞介在疾患の改良された治療法を提供するものである。このような治療用タンパク質の全身性暴露は、まず飽和量の治療用タンパク質を提供（または投与）し、つづいてこのような治療用タンパク質を皮下投与する二次投与に付すことで増大させ、これにより二次投与の全身性暴露は飽和量の利益を得ることなく投与した等しい皮下投与量よりも少なくとも５０％大きくなる。好ましくは、このような治療用タンパク質の全身性暴露は少なくとも２倍増加し、より好ましくは、少なくとも４倍増加する。好ましい具体例において、免疫細胞はＴ（細胞）リンパ球である。別の好ましい具体例において、免疫細胞はＢ（細胞）リンパ球である。図面の簡単な記載図１は、［³Ｈ］ＣＥ９.１をＣＤ４＋（〇）およびＣＤ４−（□）トランスジェニックマウスにｉｖ投与（０.４ｍｇ／ｋｇ）した後の、投与量％で表した血漿放射活性を示す。白抜きの記号は全放射活性を表し、黒塗り記号は、セファロース−接合可溶性ＣＤ４と結合した放射活性を表す。２４および４８時［２匹のマウスを使用（２４および４８時について平均％）］以外の各時点について、１匹のオスマウスを採用した。図２は、脾臓（○）および胸腺（□）における、［³Ｈ］ＣＥ９.１をＣＤ４＋（黒塗り）およびＣＤ４−（白抜き）トランスジェニックマウスにｉｖ投与（０ .４ｍｇ／ｋｇ）した後の、投与量％で表した全放射活性を示す。ＣＤ４＋マウスにおける脾臓放射活性は、２時間で投与量の２０％に近づき、一方、ＣＤ４−マウスの脾臓、またはＣＤ４＋またはＣＤ４−マウスの胸腺では吸収は観察されなかった。図３は、肝臓（○）、腎臓（□）および肺（△）における、［³Ｈ］ＣＥ９.１をＣＤ４＋（黒塗り）およびＣＤ４−（白抜き）トランスジェニックマウスにｉｖ投与（０．４ｍｇ／ｋｇ）した後の、投与量％で表した全放射活性を示す。脾臓との比較によると、肝臓、腎臓および肺におけるＣＤ４レセプター媒介吸収は有意でなかった。図４は、脾臓（Ａ）および肝臓（Ｂ）における、［³Ｈ］ＣＥ９.１をＣＤ４＋またはＣＤ４−トランスジェニックマウスにｉｖ投与した後の、投与された放射活性％の用量依存性を示す。○は０.４ｍｇ／ｋｇの用量を表し、一方□は１００ｍｇ／ｋｇの用量を表す。黒塗りの記号はノックアウト（ＣＤ４−）からのデータを表し、白抜き記号はＣＤ４＋トランスジェニックマウスからのデータを表す。用量が増加するにつれて、肝臓放射活性は比例して増加し、脾臓放射活性は増加しなかった。高用量でのＣＤ４＋マウスの脾臓における放射標識特性は、低用量でのＣＤ４−マウスの特性と類似していた。図５は、［³Ｈ］ＣＥ９.１をＣＤ４＋（○）およびＣＤ４−（□）トランスジェニックマウスにｓｃ投与（０.４ｍｇ／ｋｇ）した後の、投与量％で表した血漿放射活性を示す。白抜き記号は全放射活性を表し、黒塗り記号は、セファロース−接合可溶性ＣＤ４と結合した放射活性を表す。各時点について１匹の実験動物を採用した。生物学的に活性な抗−ＣＤ４ｍＡｂは数週間ＣＤ４−マウスの血漿中に残存するが、ヒトレセプターを有する動物において、ｓｃ投与後活性なｍＡｂは全く観察されなかった（血漿ＣＥ９.１濃度はずっと定量不可であった、ＬＬＱ＝１０ｎｇ／ｍｌ）。発明の詳細な記載本発明は全身性免疫細胞介在疾患、例えば自己免疫疾患の、免疫細胞の表面上に発現された抗原を認識する治療用タンパク質を用いる改良された治療法に関する。本出願者らは、免疫細胞抗原を、飽和量の治療用タンパク質、例えばモノクローナル抗体、または他の結合タンパク質、例えば可溶性レセプター（または可溶性リガンド）と結合させることにより、次に、それに続く治療用タンパク質の皮下投与の結果、１回の等しいｓｃ用量単独から観察されるものと比較して、全身性暴露が、好ましくは少なくとも２倍増加することを見いだした。定義「免疫細胞」は、個体における免疫応答に関して重要な細胞であって、一般にリンパ系、および特にリンパ節において見られる細胞をいう。このような細胞は、Ｔ細胞（またはＴリンパ球）、Ｂ細胞（またはＢリンパ球）、マクロファージおよび樹状突起細胞を包含する。「飽和量」は、リンパ系において選択された免疫細胞抗原を完全に結合させて、その後の治療用タンパク質の投与に際して治療用タンパク質の免疫細胞抗原との確認可能な結合が起こらないようにするのに必要な治療用タンパク質の量をいう。必要とされる治療用タンパク質の量は、リンパ系中に存在する免疫細胞抗原の量、このような抗原に対する治療用タンパク質の親和力、および治療用タンパク質のインビボでの半減期に応じて変化する。当業者は、治療用タンパク質の適量を確認できるであろう。例えば、ヒト抗ＣＤ４モノクローナル抗体に関して、飽和量は典型的には０.５ないし５ｍｇ／ｋｇの範囲内である。「確認可能な結合がない」とは、飽和量投薬後の皮下量投薬と飽和量投薬が先行しない皮下量投薬（同じ投薬量）間の血漿ＡＵＣ（血漿濃度対時間曲線の下の面積）間の差が少なくとも２倍であることを意味する。「選択されたＴ（またはＢ）細胞抗原」は、ＴまたはＢリンパ球上で発現された細胞表面タンパク質を意味する。このようなタンパク質は典型的にはレセプターであり、あるいはレセプターのリガンド（カウンターレセプターとも称する）であり、Ｔ（またはＢ）細胞介在疾患に関与する。このような抗原は、これに限定されないが、ＣＤ３、ＣＤ４、ＣＤ８、ＣＤ１１、ＣＤ１８、ＣＤ２０、ＣＤ２３、ＣＤ２８、ｇｐ３９（ＣＤ４０リガンド、ＣＤ４０カウンターレセプターまたはＴ−ＢＡＭとも称する）、ＣＤ４０、ＣＤ８０、ＣＤ８６ならびにＣＤ科の他の要素を包含する。「治療用タンパク質」はモノクローナル抗体であり得るか、または選択された免疫細胞「標的」抗原に結合する他のタンパク質であり得る。このようなタンパク質は前記の抗原のナチュラルリガンドに対抗でき、あるいはそうでない場合には免疫細胞間の相互作用、例えばＴ細胞とＢ細胞間の相互作用を抑制する。治療用タンパク質は、モノクローナル抗体または可溶性レセプターまたは可溶性リガンド（すなわち、可溶性カウンターレセプター）などの他の結合タンパク質であり得る。可溶性レセプター（またはカウンターレセプター）は、トランスメンブランおよび／または細胞質領域が欠失しているタンパク質を含む。所望により、可溶性レセプター（またはカウンターレセプター）は他のタンパク質と融合して、望ましい性質を向上させるかまたは創造することができる。例えば、可溶性レセプター（またはカウンターレセプター）は免疫グロブリンＦｃ領域と融合して、インビボでの循環半減期を増加させることができる。「治療用タンパク質の全身性暴露」は、ＡＵＣにより測定される、血流中の治療用タンパク質のレベル（生体利用性）である。特徴本発明は、全身性免疫細胞介在疾患、例えば自己免疫疾患の、免疫細胞の表面上に発現された抗原を認識する治療用タンパク質を用いた、改良された治療法に関する。この改良は、免疫細胞抗原に結合する治療用タンパク質の全身性暴露は、投与経路ならびにこのような抗原のリンパ系中での存在および分布に高度に依存するという観察に基づく。本出願者らは、一次または初期投薬が皮下投与された場合、このような治療用タンパク質は非常に高用量で投与されなければ全身性循環（血流）中で検出されないという予想外の知見を得、これはおそらくはリンパ系中の抗原および治療用タンパク質複合体が血流中への移行を防止するためと思われる。本発明にしたがって治療用タンパク質を投与することにより、皮下投薬の全身性暴露（すなわち、血漿ＡＵＳ）は劇的に増加する。すなわち、この全身性暴露は２またはそれ以上のファクター（１００％以上）で増加し得る。好ましくは、皮下投薬からの全身性暴露は４またはそれ以上のファクターで増加する。より好ましくは、これは１０またはそれ以上のファクターで増加する。このように、免疫細胞介在疾患の治療法は、治療用タンパク質の全身性暴露を増加させることにより向上する。好ましくは、治療用タンパク質は、モノクローナル抗体であるが、これに限定されない。より好ましくは、抗体はヒトモノクローナル抗体［例えば、ＷＯ94/0 6448“Human Neutralizing Monoclonal Antibodies to RSV”;Barbasら、Method s a Companion to Methods in Enzymol.,2(2):119-124(1991)およびBurtonら、P roc.Nat'l.Acad.Sci ，88:10134-10137(1991)］であるか、または変更された免疫グロブリンコーディング領域によりコードされ、選択された宿主細胞中で発現されたタンパク質である修飾抗体である。このような修飾抗体は、処理された抗体（例えば、キメラまたはヒト化抗体）または免疫グロブリン不変領域の全部または一部が欠けた抗体フラグメント、例えば、Ｆｖ、Ｆａｂ、Ｆ（ａｂ）₂などのいずれかである。繰り返しまたは長期にわたる投薬に関して、モノクローナル抗体はヒトまたは処理された抗体のいずれかであるのが好ましい。このような処理された抗体は、選択されたアクセプター抗体の軽および／または重鎖可変領域の一部が、免疫細胞抗原の選択されたエピトープについて特異性を有する１またはそれ以上のドナー抗体からの類似部分で置換されている完全長合成抗体（例えば、抗体フラグメントに対するものとして、キメラまたはヒト化抗体）を含む。例えば、このような分子は、非修飾軽鎖（またはキメラ軽鎖）と結合したヒト化重鎖（またはその逆）により特徴付けられる。処理された抗体は、さらに、ドナー抗体結合特異性を保持するためのアクセプター抗体軽および／または重可変領域フレームワーク領域をコードする核酸配列の変更を特徴とする。これらの抗体は、アクセプター抗体からの１またはそれ以上のＣＤＲ（好ましくは全部）の、本明細書に記載するドナー抗体からのＣＤＲでの置換を含みうる。処理された抗体の構築に関する技術は、当業界では公知である［例えば、Queenら、Proc ．Natl Acad Sci USA，86 :10029-10032(1989);Hodgson、Bio/Technology，9:421(1991)を参照のこと］。好ましくは、本発明にしたがって投与されたモノクローナル抗体は、選択されたＴ（またはＢ）細胞抗原を認識する。好ましい一具体例は、Ｔリンパ球上のヒトＣＤ４レセプタータンパク質（抗原）に対する抗体である。このような抗体は、抗原性を最小にするためにキメラ、ヒトまたはヒト化であり得る。例示の目的のために、ヒト抗−ＣＤ４抗体はprimatized（登録商標）抗体、例えば、ＣＥ９ .１［例えば霊長類−ヒトキメラ抗体、すなわちprimatized(登録商標)を記載したWO93/02108 、ＣＥ９.１を記載したNewmanら、Bio/Technology,10,1455−1460（1990）である。他の好ましい抗原は、ＣＤ３、ＣＤ８、ＣＤＩ１、ＣＤ１８、ＣＤ２０、ＣＤ２８、ｇｐ３９（ＣＤ４０リガンドとしても公知）、ＣＤ４０、ＣＤ８０およびＣＤ８６を包含する。投与経路一般に、皮下投与は医者および患者にとって静脈内投与よりも望ましい。ｓｃ投与は、ｉｖ注入に対する数時間というよりもむしろ、数分で完了可能である。さらに、ｉｖ注入は、（ｉ）病院；（ii）医院；または（iii）自宅のいずれかで、カテーテルを用いて投与されるが、ｓｃ投与はカテーテル法を用いずに実用的にどこでも行うことができる。ｓｃ投与はさらに、典型的には、筋肉内（ｉｍ）注射に伴うことが多い痛みおよび傷跡を回避する点でも有利である。これは、毎日、または他に高い頻度（例えば、毎週、週二回など）で治療薬を服用する人にとっては有意に有利な点とすることができる。ｓｃ投与は、ｉｖ投与と比較した場合に、治療用タンパク質に関してより長い循環半減期をもたらし得るとも考えられる。例えば、溶解性形態のＣＤ４レセプタータンパク質ｓＣＤ４［またはｓＴ４；Deenら、Nature,331： 82-84（1988）を参照のこと］の循環半減期は、ｉｖ投与した場合約６分であるが、ｓｃ投与した場合約１時間である。皮下投薬の欠点は、投与することができる治療用タンパク質の量である。すなわち、ｓｃ投与経路により治療用タンパク質を投与するのは、投与できる治療用タンパク質の総量に制限があるので、必ずしも実行可能でない。これは、順次、患者に投与できる溶液の量および治療剤の溶解性により決定される。一般則として、投与できる溶液の上限容量は約２ｍｌである。容量は１.５ｍｌを越えないことが好ましく、１.３ｍｌを越えないことがより好ましい。皮下投薬の別の欠点は、リンパ中で安定でない治療用タンパク質もあることである。すなわち、場合によっては、皮下投与後に分解が起こる場合もある。しかしながら、Ｔ（またはＢ）細胞抗原などの免疫細胞抗原の、飽和量のモノクローナル抗体などの治療用タンパク質との結合は、その後の皮下投与を可能にし、治療用タンパク質の全身性暴露の増加を達成し、好ましくは、増加は、１回の等量（一次）ｓｃ投薬から観察されるものと比較して少なくとも２倍である。全身性疾患、例えば慢性関節リウマチの場合、リンパ系を通過する際に、相当量の喪失（および分解）することなく全身性循環中に入ることが有利である。本発明はこの事象の促進を助成し、かくして皮下投与経路を臨床的により実行可能な方法とするものである。このように、本発明の利点は、慢性的にｉｖ投与することなく匹敵する治療用タンパク質の全身性暴露を得ることができることである。さらに、本発明は治療用タンパク質（例えば、ｍＡｂ）の慢性的投与に関してより簡便な方法を可能にし、従って、より実用的な治療法を可能にする。もう一つ別の特徴は、初期投与を行うことによって、リンパ系の免疫細胞抗原が、目的とする治療用タンパク質で飽和され、その後の投薬量に関して全身性暴露がより大きくなり、従って、より少ない薬剤の投与が可能になるか、あるいは、そうしない場合よりもより長い間隔で投薬でき、その結果、投薬の回数を少なくでき、全体としての治療用タンパク質の使用を少なくできる。好ましくは、皮下注射部位は、胸管、または右リンパ管に侵入する前に治療用タンパク質が接近しうるリンパ腺または節の数を最小にするように選択される。（胸管および右リンパ管はリンパ液を血液、すなわち、全身性循環中に運搬する主要な管である。）例えば、上腕への注射は、一般に、表面腋窩節を標的とする。これらの節からの導出リンパ液は、次に胸管または右リンパ管に侵入する。鎖骨上および肩甲骨上領域への皮下注射は、これらの領域からのリンパ液は、腋窩節を迂回し、血液中へと移動する途中で鎖骨または肩甲骨節のみを横切るので、いっそう有利である。他の潜在的に有利な注射部位は、腹壁および上大腿である。腹壁に注射することで、モノクローナル抗体が表面腰椎腺に供給され、これらの節からの導出リンパ液は、胸管へと導かれる。上大腿に皮下注射することで、表面鼠蹊節が標的となる。これらの節からの導出リンパ液は、最終的に腰椎節により受容され、次に胸管へと流れる。本発明の飽和用量は、投与される薬剤、典型的には抗生物質がその最適な定常状態レベルに抗生物質のレベルを迅速に上昇させるためにｉｖ投与される負荷量と等しくないことは注意しなければならない。本発明に関して、反応速度は非線形であり、飽和量は完全に異なる目的のために投与される。すなわち、初期または飽和量は、皮下投与される治療用タンパク質の二次投与により、作用の最終的部位（例えば、慢性関節リウマチの場合には、肥大した関節）に到達し、その最大治療効果が得られるように、リンパ系中の内因性標的抗原と結合することを意図する。症状本発明は免疫細胞介在症状、例えばＴ（またはＢ）細胞により媒介される症状の有効な治療法を提供する。このような症状として、リンパ腫（ＴおよびＢ細胞）、種々の白血病、感染性疾患（例えば、ＡＩＤＳ）、移植、自己免疫および炎症性疾患が挙げられる。免疫抑制を誘発させるための手段として、治療用タンパク質は、移植臓器拒絶反応（例えば、心臓、肺、腎臓、角膜、骨髄、皮膚など）の治療または予防的用途、自己免疫または炎症性疾患（例えば、慢性関節リウマチ、乾癬、紅斑性狼蒼、全身性紅斑性狼瘡、多発性硬化症、炎症性腸疾患、ハシモト甲状腺炎、重症筋無力症、１型糖尿病、ブドウ膜炎、ネフローゼ症候群、アトピー性皮膚炎など）の治療または予防のための、逆流性閉塞性気道疾患、腸炎およびアレルギー（例えば、喘息、小児脂肪便症、直腸炎、好酸性胃腸炎、肥満細胞症、クローン病、潰瘍性大腸炎など）、およびさらに食物性アレルギー（例えば、片頭痛、鼻炎、および湿疹など）の治療に関して有用である。好ましくは、治療される症状は、慢性関節リウマチ、喘息および／または乾癬である。他の好ましい具体例は、移植臓器拒絶反応における治療または予防的用途におけるような免疫抑制を誘発するための手段である。投薬治療用タンパク質のｓｃ投与の量および頻度は、免疫細胞標的抗原（例えば、ＣＤ４レセプター）、かかる標的の患者におけるレベル、治療用タンパク質の半減期、および症状の改善が観察されるような有効な治療に必要な治療用タンパク質の全身性暴露に依存する。このようなパラメータは当業者により決定できる。例えば、慢性関節リウマチを治療するために有効な投与量は、圧痛関節数（ＴＪＣ）、膨化関節数(ＳＪＣ)の評価などの当業者に周知の手段[すなわち、Ritchie Articul ar Index、Ritchieら、Q.J ．Med.，37.:393-406(1968)を参照のこと］により決定できるが、ＡＣＲ（American College of Rheumatology）応答指数、および／または早朝硬直の時間が、数少ないが、有効な治療法を評価する手段である。投薬法の例として、飽和量の抗−ＣＤ４抗体を第１週に８０ないし２８０ｍｇの範囲の量でｉｖ投与する。別法として、抗−ＣＤ４抗体は第１週に二回投与できる（すなわち、４０、８０、１００、１２０または１４０ｍｇ／週二回）。その後の用量を次に皮下投与する。このような皮下投薬は、約３週間行う（例えば、表５参照）。繰り返し投薬を必要に応じて、症状が観察された場合（すなわち、関節炎については拡大）または所定の間隔をおいて（例えば、３、６または９ヶ月）のいずれかで行う。好ましくは、投与量は週二回を基準として８０−１２０ｍｇである。しかしながら、当業者はより頻繁な投薬（例えば、毎日、１日おき）またはより頻繁でない投薬（例えば、毎週）もまた適当でありえることは理解できる。投与される治療用タンパク質の量は適宜調節できる。加えて、他の治療組成物を本発明の治療用タンパク質と同時投与してもよい。例えば、慢性関節リウマチの治療として、ＤＭＡＲＤ（疾患修飾抗リウマチ薬）を同時投与してもよい。ＤＭＡＲＤは当業界で周知であり、メトトレキサート( ｍｔｘ)、アザチオプリン、ペニシラミン、ヒドロキシクロロキン、ＩＭゴールド、オーラルゴールド、スルファサラジン、シクロスポリンおよびクロランブシルを包含する。医薬組成物本発明の治療用タンパク質を、医薬上許容される担体中に活性成分としてこのようなタンパク質を有効量含有する医薬組成物として調製する。本発明の予防または治療薬として、治療用タンパク質、例えばモノクローナル抗体を含有する水性懸濁液または溶液で、好ましくは生理学的ｐＨに緩衝剤処理され、すぐ注射できる形態であるものが好ましい。非経口投与用組成物は、通常、抗体またはそのカクテルを医薬上許容される担体、好ましくは水性担体中に溶解させた溶液を有してなる。種々の水性担体、例えば０.４％セイライン、０.３％グリシンなどを用いてもよい。これらの溶液は滅菌であり、一般に微粒子を含まない。これらの溶液を伝統的で周知の滅菌技術（例えば、濾過）により滅菌してもよい。組成物は、ｐＨ調節剤および緩衝剤などの生理学的条件を近づけるために必要な医薬上許容される助剤を含有してもよい。このような医薬製剤中の本発明の抗体の濃度は広範囲にわたって、すなわち０.５％未満から通常約１％または少なくとも約１％から、１５または２０重量％まで変化し得、選択された特定の投与方法に応じて、流体容積、粘度などに主に基づいて選択される。本発明において用いるために適した非イオン性界面活性剤は、好ましくはヒトに対する毒性をほとんど有しないで、適切な濃度で重大な範囲までの赤血球の溶血を起こさない。適当な非イオン性界面活性剤は、これに限定されないが、ポリソルベート２０（モノラウレート）、ポリソルベート６０（モノステアレート）およびポリソルベート８０（モノオレアート）などのポリソルベート（またはポリオキシエチレンソルビタン）を包含する。好ましい非イオン性界面活性剤はポリソルベート８０である。ポリソルベート８０は、一般に、Tween（登録商標）８０の商品名で販売されている。非イオン性界面活性剤は、好ましくは、約０. ０１％ないし約０.６％、好ましくは約０.０２％の量で医薬組成物にされる。本発明の医薬組成物において有用な糖は、膨張剤および張度調節剤として働く。適当な糖は、マンニトール、シュークロース、トレハロースおよびソルビトールなどの糖を包含する。好ましい糖はシュークロースである。糖は医薬組成物中約３％ないし約８％w／wの量で配合できる。モノクローナル抗体および緩衝液に加えて、本発明の医薬組成物は所望により非経口投与に適した他の薬剤、例えば静菌剤、張度調節剤、および耐冷却剤などを含有してもよい。適当な静菌剤は、ベンジルアルコールおよびメチルおよびプロピルパラベンを包含する。親水性ポリマー耐冷却剤、例えばヒドロキシアルキルセルロース、ゼラチン、アカシアゴム、ポリビニルピロリドン（例えば、分子量１００００ないし６００００）およびポリアルキレングリコール、例えばポリエチレンClycols（例えば、分子量４０００ないし４００００）は、本発明の医薬組成物中に包含される。このような薬剤の使用は、凍結乾燥に際して、および凍結乾燥後の復元の際の溶液中の安定性を増加させる（すなわち、活性の損失およびタンパク質分解を最小にする）。本発明の医薬組成物の安定性は低温で増加する。従って、これらは好ましくは −７０℃ないし１５℃の範囲の温度、好ましくは約−４０℃ないし約８℃、より好ましくは約４℃ないし約８℃で貯蔵する。凍結乾燥された組成物は好ましくは復元後８時間以内に投与し、好ましくは復元後４℃ないし８℃に保持する。本発明の医薬組成物は、これを必要とする患者、特にヒト患者に、有効量を静脈内、皮下、および筋肉内のいずれかで投与されるように調製した医薬投与単位、すなわち滅菌容器、例えばアンプル、シリンジ、バイアル、ビンまたは袋内に包装できる。医薬投与単位中のｍＡｂの正確な濃度ならびに特定の用量の正確な投与体積は、治療される病状、症状の重さおよび患者の体重などの要因に依存する。本発明の医薬組成物の所定の用量の最適化は、標準的調剤および医学実施例にしたがって行うことができる。各医薬投与単位中のモノクローナル抗体の濃度は、８０ｍｇ／ｍｌを越えうる。好ましくは、モノクローナル抗体の濃度は、約４０ないし約８０ｍｇ／ｍｌの範囲である。患者は、典型的には１.０ないし４.０ｍｇ／ｋｇ／週のｍＡｂの投与量を受ける。この治療を約４週間行い、次に繰り返し投与が必要な場合に［すなわち、患者が再び症状（慢性関節リウマチについては拡大）を示した場合、またはその後に一定の間隔で、例えば３、６または９ヶ月間隔で］投与する。筋肉内投与（すなわち、初期または飽和用量として）の場合、本発明の医薬組成物を前大腿などの大筋肉中に注射により投与する。投薬の合計体積が約５ｍｌを越える場合、用量を分割し、２ヶ所またはそれ以上に注射してもよい。本発明の好ましい具体例において、滅菌水または６％滅菌水中シュークロースなどの最終的復元溶液用に医薬組成物を凍結乾燥形態で貯蔵する。凍結乾燥した医薬組成物は、水性形態の医薬組成物を通常の技術を用いて凍結乾燥することにより調製する。凍結乾燥した医薬組成物は、好ましくは投与の簡便性のために単一投与単位で貯蔵されるが、凍結乾燥形態でより大量に貯蔵してもよい。凍結乾燥した組成物は、滅菌バイアルまたは他の容器中で復元し、最終的にまたは即座に非経口投与するまで貯蔵できる。凍結乾燥用医薬製剤の調製において、水溶液は、最終復元医薬組成物よりも希薄であり得る。例えば、４０ｍｇ／ｍｌのｍＡｂを有する１ｍｌの水溶液を凍結乾燥し、その後に０.５ｍｌの滅菌水で復元して、８０ｍｇ／ｍｌのｍＡｂを有する溶液を得る。本発明の別の好ましい具体例において、本発明は１またはそれ以上の凍結乾燥形態の医薬組成物の滅菌容器と復元用溶液の１またはそれ以上の別個の滅菌容器を含むキットを提供する。復元溶液はさらに多区画容器、例えば、簡便な混合および投与用に設計された２室シリンジの異なる区画中に含まれていてもよい。このようなシリンジまたは他の２室容器中で、凍結乾燥されたｍＡｂおよび復元用溶液は、例えばシリンジまたは容器を押しつぶすことにより破ることができ、それによりｍＡｂと復元用溶液が混合されるような膜壁により分離される。単一キット中の復元用溶液、ｍＡｂの量および復元用溶液の量は、本発明にしたがって選択されたｐＨで、約４０ないし約８０ｍｇ／ｍｌのｍＡｂを有する最終復元製品が得られるように選択する。復元に関して好ましい溶液は、滅菌水である。復元用溶液は、さらに静菌剤または非経口投与に適した他の物質を含有してもよい。ＴおよびＢ細胞抗原ＣＤ４レセプタータンパク質に加え、Ｔ細胞上で発現され、治療目的に関して「標的」としても用いることができ、本発明にしたがって投与される分子［Will iamsら、Annu ．Rev．Immunol.，6:381-405(1988)］の免疫グロブリンスーパーファミリーの他の要素がある。このような分子は、これに限定されないが、ＣＤ３、ＣＤ８（ＣＤ４およびＣＤ８）、ＣＤ１１／ＣＤ１８（例えば、Xieら、J ．Im munol .，155:3619-28(1995))、ＣＤ２８（Aruffoら、Proc.Natl.Acad.Sci.，84: 8573-7(1987))、ＣＴＬＡ−４、活性化ＣＤ８＋およびＣＤ４＋Ｔ細胞上で低レセプター密度で一時的に発現されたＣＤ２８のホモログ（Brunetら、Nature，32 8 :267-270(1987)）、およびｇｐ３９（ＣＤ４０リガンド、Ｔ−ＢＡＭ、およびＴＲＡＰとしても知られる）［Noelleら、Proc.Natl.Acad.Sci.，89:6550-6554( 1992)、Foyら、J ．Exp.Med.，178:1567-1575(1993)、Banchereauら、Annu ．Rev ．Immunol .，12:881-922 (1994)］を包含する。治療用タンパク質は、モノクローナル抗体であり得るが、またはおそらくは可溶性リガンド（すなわち、細胞質およびトランスメンブラン領域を含まず、所望により免疫グロブリンの不変領域、例えばＦｃ領域と融合した天然のリガンド）である。他の適当な「標的」分子は、Ｂ細胞上で見られるＣＤ２８、ＣＴＬＡ−４、およびｇｐ３９に対するリガンドまたはカウンターレセプターである。このようなリガンドまたはカウンターレセプターは、ＣＤ８６(Ｂ７.１としても知られる)( Linsleyら、Proc ．Natl．Acad．Sci.，87 ：5031-5035(1990)、Freemanら、J ．Ex p．Med .，174：625-631(1991))、ＣＤ８６(Ｂ７.２およびＢ７０としても知られる)(Freemanら、J.Exp.Med.，178:2185-2192(1993)、Freemanら、Science，262: 909-911(1993))およびＣＤ４０（Stamenkovicら、EMBO J.，8:1403(1989)）を包含する。ＣＤ４０と結合する抗体に関して、このような抗体はＢ細胞に対して非増殖性または非刺激性でなければならない［例えば、ＷＯ94/01547(Cetus Oncol ogy)およびＷＯ95/09653（Immunex）を参照のこと］。ヒトＢ細胞上の他の適当な「標的」分子は、ＣＤ２０抗原である。以下の実施例は、本発明の種々の態様を説明し、範囲を限定するものではないと考えられる。試薬および物質は、特記しないかぎり、商業的供給源から入手した。実施例物質および方法化学物質ヒトＴ細胞レセプターＣＤ４と結合するオナガザル／ヒトキメラ抗体（ｍＡｂＣＥ９.１［Newmanら、Bio/Technology 10，1455-1460(1992))を以下の実験で用いた。ヒトＣＤ４に対する他のモノクローナル抗体も同様に用いることができると理解される。ＣＥ９.１（未標識−参照標準）を５ｍｇ／ｍｌ溶液または安定性増進賦形剤（復元に際して５０ｍｇ／ｍｌ）を有する親液物質として供給した。可溶性ＣＤ４（ｓＣＤ４、ｓＴ４とも称する、Deenら、Nature，331:82-84(19 88)）を親液物質（復元に際して１０ｍｇ／ｍｌ）として得た。ＣＥ９.１およびｓＣＤ４はチャイニーズハムスター卵巣細胞中で発現された組換えタンパク質である。タンパク質Ａ Sepharoseは、Sigma（St.Louis、ＭＯ）から購入した。ホースラディッシュペルオキシダーゼ接合マウス抗ヒトＩｇＧ１ｍＡｂ（クローンＨＰ６０６９）は、Zyme Laboratories Inc．（San Fransisco、ＣＡ）から購入した。すべての他の化学物質は、試薬グレードまたはそれ以上であった。［³Ｈ］ＣＥ９.１ＣＥ９.１を、基本的に、Davisら（Drug Metab．Dispos．20，695-705(1992) ）に記載されているようにしてチャイニーズハムスター卵巣細胞において三重水素化ロイシンで代謝標識した。抗体を濃縮培養上清からタンパク質Ａクロマトグラフィーにより精製した（タンパク質総回収率約７０％）。４００μＣｉ以上の精製された代謝標識［³Ｈ］ＣＥ９.１を５ｍＣｉ［³Ｈ］ロイシン（Dupont／NEN 、１４４Ｃｉ／ｍｍｏｌ）から調製した。比放射活性は約１μＣｉ／μｇ（２０００ＤＰＭ／ｎｇ）であった。純粋な［³Ｈ］ＣＥ９.１は典型的には９９％以上の沈降性トリクロロ酢酸アミドであり、９８％の放射標識は抗原結合（Sepharos e−ｓＴ４結合、以下参照）に関して生物学的に活性であった。放射化学的純度（ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより評価）は典型的には９０％を上回った。動物育種オスＣＤ４＋およびＣＤ４−トランスジェニックマウス（体重約２６ないし４３ｇ）をこの実験に用い、The Regents of the University of California（Kil leenら、EMBO J12，1547-1553(1993)）より入手した。動物をウッドチップを敷いたポリカーボネートケージ中にグループ(最高５匹)で、制御された環境(２５ ±２℃；５０±１０％相対湿度)下で、１２時間の明／暗サイクルで収容した。食餌(Purina Certified rodent chow、Purina Mills，Inc.，St．Louis，ＭＯ) およびろ過した水道水は任意に摂取できるようにした。［³Ｈ］ＣＥ９.１のｉｖまたはｓｃ投与実験動物に、尾静脈中への注射によるｉｖ投薬または背中の皮膚下への注射によるｓｃ投薬を施した。薬物溶液は、０.４ｍｇ／ｋｇ投薬群に関して、約０.１ｍｇ／ｍｌ［³Ｈ］ＣＥ９.１および１００μＣｉ／ｍｌであった。１００ｍｇ／ｋｇ群に関して、薬物溶液は約１４ｍｇ／ｍｌＣＥ９.１であり、ｉｖ群のみに関して、９μＣｉ／ｍｌであった。実験動物に、１００μｌ（低用量）または２００μ ｌ（高用量）の目的薬物を投与した。ビヒクルはリン酸−グリシン緩衝液またはこれとＰＢＳの混合物であった。正確な投薬体積は、投薬前後のシリンジを秤量して測定した。正確な、ＣＥ９.１の投与された総放射活性および用量は、薬物溶液量の分析により測定した（以下の酸化／シンチレーション計測およびＥＬＩＳＡによる）。投薬後の選択された時間で、実験動物を屠殺した（複合サンプリング、ｎ＝１／記載した以外の時点）。低用量実験において、ＣＤ４＋ｉｖおよびｓｃ群に関して、１０、３０、６０、１２０、２４０、４８０分および２４時間および４８時間の表示時間を採用した。ＣＤ４−ｉｖおよびｓｃ群に関して、１０、１２０、４８０分および２４および４８時間の表示時間を採用した。０.４ｍｇ／ｋｇｓｃ群(ＣＤ４＋およびＣＤ４−)に関しては、さらに７２時間、１および２週の追加の表示屠殺時間を用いた。高用量実験において、ｉｖ群（ＣＤ４＋のみ）に関して、１０、３０、６０、１２０、２４０、４８０分および２４時間および４８時間の表示時間を採用した。ｓｃ群（ＣＤ４＋、１００ｍｇ／ｋｇ）に関して、７、２４、４８、７２時間および１週間の表示時間を採用した。屠殺後、血液（約１ｍｌ）を大静脈および心臓穿刺によりとりだし、１００μ ｌの１２９ｍＭクエン酸三ナトリウムの添加により凝集を防止した。全血のアリコートを酸化のためにcombusto−pad上に置き、残存する血液を遠心分離して血漿を集めた。血漿のアリコートを酸化のためにcombusto−pad上に置き、残存する血漿および血球ペレットをドライアイス上で凍結させ、約−８０℃で更なる分析のために貯蔵した。肝臓、腎臓、肺、脾臓および胸腺（あるいは、高用量ｉｖ実験においては、肝臓および脾臓のみ）を取り出して、総放射活性を測定した。組織は、エタノール性ＫＯＨ中に溶解させるか、または直接酸化のためにcombus to−cone上に置いた。残骸をエタノール性ＫＯＨ中に溶解させ、残存する総放射活性を評価した。ＳＤＳ−ＰＡＧＥ選択されたサンプルの血漿および血液放射化学的特性を、非還元ＳＤＳ−ＰＡＧＥにより評価した。血漿タンパク質の分析のために、８％（w／v）ポリアクリルアミドゲルを用いて分解を行った。血球タンパク質を１６％（w／v）ポリアクリルアミドゲルを用いて分解させた。血球タンパク質を分析するため、凍結細胞( 血漿なし)を常温で解凍し、ＰＢＳを添加した(抜き取った血漿体積に匹敵する体積)。次に、細胞を再懸濁し、ＳＤＳ負荷緩衝液中に希釈した。典型的には、１０−２０μｌの血漿または懸濁血球を分析のために直接ゲルレーン上に負荷した。電気泳動の後、ゲルをクーマシーブリリアントーブルーＲで染色し、乾燥し、スライスして、放射標識特性を評価した（回収率＞８０％）。放射標識および全タンパク質（クーマシー）特性の肉眼観察、ならびにＣＥ９.１の既知の電気泳動度および分子量標準を用いて内因性タンパク質中への放射標識の取り込みを評価した（Davisら、前掲）。セファロース−ｓＴ４抽出血漿サンプル（エクスビボ）中の純粋な放射標識ならびに放射化学を特徴づけるために、抗原結合活性をセファロース接合可溶性ＣＤ４（ｓＴ４）で評価した。放射標識を含有する血漿サンプル（典型的には＜１００μｌ）をセファロース −ｓＴ４のＰＢＳスラリーに添加した（典型的には、ＰＢＳ中１：１樹脂１００ μｌ）。上清とセファロースの分離を促進し、全タンパク質濃度を確実に高くするために、場合によっては、ＰＢＳまたはＰＢＳ中に希釈したラット血漿をさらに添加した。混合後、上清を遠心分離により集めた。抽出された全放射標識（％）を、上清のアリコート中の放射活性をもとの溶液の適当なアリコート中の放射活性の量と比較することにより決定した。全セファロース−ｓＴ４結合実験を行い、これにより存在するＣＥ９.１の等価物と比較して大過剰の樹脂があると考えられる。投与された放射線量を評価するために、血漿体積あたりの放射活性（％）を、マウスの体重および血漿体積についての文献値［５０ｍｌ／ｋｇ、Daviesら、Ph arm．Res，10：1093-1095(1993)］を用いて全血漿中の全放射活性を評価した。セファロース−ｓＴ４と結合した全放射活性を計算するために、全血漿放射活性に、すでに記載したフラクション−ｓＴ４結合を乗ずる。ＥＬＩＳＡ血奨サンプルを、抗原（ｓＣＤ４）および抗ヒトＩｇＧ１ｍＡｂに対するＣＥ９.１の同時結合に基づくＥＬＩＳＡを用いてＣＥ９.１濃度に関して分析した。分析において、ＣＥ９.１を可溶性ＣＤ４（ｓＴ４）が結合したマイクロタイタープレート中の血漿から捕捉した。ｓＴ４／ＣＥ９.１複合物を次にホースラディッシュペルオキシダーゼと直接接合したＣＨ２領域特異性マウス抗ヒトＩｇＧ１ｍＡｂ（Hamiltonら、J．Immunol．Methods 158，107-122(1993)）でプローブした。標準曲線は、クエン酸添加ラット血漿またはＰＢＳ含有１０％（ｖ／ｖ）クエン酸添加ラット血漿において２ないし５０ｎｇ／ｍｌＣＥ９.１（明らかに標準曲線範囲上のサンプルの分析用）の範囲であった。ｓＴ４／抗−γ１ＥＬＩＳＡに関するＬＬＱ（定量の下限）、はニートマウス血漿（５０μｌ）において１０ｎｇ／ｍｌであった。１０ないし１０００００ｎｇ／ｍｌの範囲の濃度以上、with-run係数は５.６ないし７.５％の範囲であり、一方、平均精度は８８ないし１１０％の範囲であった。放射活性測定用三重水素化タンパク質の酸化トリチウムを含有するサンプル中の放射活性を測定するために、液体アリコートをCombusto−cone中のCombusto−pad上に適用した。酸化の前に、０.２５ｍＬのConbusto−Aidをサンプルに添加した。酸化はPackard Nodel C306 Tri−Card Sample Oxidizer中で進行した。三重水素で標識した水を１５−１８ｍＬ Monoph ase Ｓ中に集め、混合した。ポリアクリルアミドゲルスライスについて、５ｍｍ ×２０ｍｍ切片を２または３個に切断し、Combusto−Cone中に直接入れた。組織中の放射活性を、エタノール性−ＫＯＨ中に溶解したサンプルの液体アリコートで測定するか、または組織をCombusto−Cone中に置き、直接酸化した。燃焼効率 (慣例的に＞９８％)を、燃焼および非燃焼標準（Packard Spec−Chec Tritium s tandard）中の放射活性の比較により評価した。シンチレーションカウンティングの前に、サンプルを一夜４℃に冷却した。シンチレーションカウンティングを Beckman LS3800または5801シンチレーション分光光度計で行い、計測効率を、密封クエンチ標準を用いて外部標準法により測定した。薬理動態学血漿ＣＥ９.１濃度−時間データを、非分画法（M.GibaldiおよびD.Perrier: "Pharmacokinetics,"2nd ed．Marcel Dekker，Inc.，New York，1982）により、 in-houses of twarepackageを用いて分析した。ＡＵＣO−ｔ（複合ＥＬＩＳＡデータより）を、減少する血漿濃度に関して対数台形公式および増加する血漿濃度に関して線形台形公式を用いて評価した。脾臓からの放射活性の損失の半減期（０.４ｍｇ／ｋｇｉｖ、ＣＤ４＋マウス）をログ変換用量（％）対時間データの線形回帰から計算した。同様に、ＣＤ４＋トランスジェニックマウスへのｓｃ投与（０．４ｍｇ／ｋｇ）後の全血漿放射活性データからの報告された半減期をログ変換用量（％）対時間データ（２４時間ないし２週間）の線形回帰から得た。静脈内投与ｈＣＤ４Ｔ細胞レセプター（ＣＤ４＋）を有するかまたはＣＤ４レセプターを全く有しない（ＣＤ４−、ノックアウト）トランスジェニックマウスに１回少量の代謝的に放射標識した［³Ｈ］ＣＥ９.１（０.４ｍｇ／ｋｇ）をｉｖ投与し、全血および血漿放射活性、抗原結合可能な血漿中の放射活性、および肝臓、腎臓、肺、脾臓、および胸腺中の全放射活性を評価するために屠殺した。血漿をさらに、ｓＴ４／抗−γ１ＥＬＩＳＡを用いてＣＥ９.１に関して分析した。別の研究において、ＣＤ４＋マウスに１回多量の［³Ｈ］ＣＥ９.１（１００ｍｇ／ｋｇ）をｉｖ投与し、全血および血漿放射活性、血漿ＣＥ９.１および脾臓および肝臓における全放射活性を評価した。０.４ｍｇ／ｋｇ［³Ｈ］ＣＥ９.１のＣＤノックアウトマウスへのｉｖ投与の結果、血漿中の活性抗体の、４８時間での投与された放射化学用量〈ＥＬＩＳＡによると約１.５μｇ／ｍｌ、図１）の１９％を越えるレベルが維持された。全血漿放射活性およびセファロース接合抗原に結合した血漿放射活性間に明らかな違いはなかった。さらに、４８時間までの血液の血漿に対する比は０.６８を越えず、このことは、血球放射標識結合がほとんど無いことを示す（表２）。対照的に、血漿中の投与された放射活性は、ＣＤ４＋トランスジェニックマウスへの［³Ｈ］ＣＥ９.１投与後２時間までの２０％未満であった（図１）。投薬後４時間で、５％未満の血漿放射活性がセファロース接合抗原と結合した。血漿ＣＥ９.１濃度は、ｉｖ投与（ＬＬＱ１０ｎｇ／ｍｌ）後４時間で、ＥＬＩＳＡでは定量不可能であった。図２および図３は［³Ｈ］ＣＥ９.１のＣＤ４＋およびノックアウトトランスジェニックマウスへのｉｖ投与後の全組織放射活性対時間を示す。ＣＤ４＋マウスへの投与後２時間に、最大で投与量の約１８％が脾臓中に回収され、活性抗体の血液レベルがもっと高いにもかかわらず、ＣＤ４−マウスの脾臓中では投与量の０.６％しか回収されなかった(図２)。ＣＤ４＋マウスの脾臓による吸収は、血漿コンパートメントからの損失と同様の時間枠で起こった。ＣＤ４＋マウスの脾臓からの放射標識の損失は、約１０時間の半減期を特徴とした。投与量の０.５％未満がＣＤ４＋マウスの胸腺中に回収された。全放射活性は肝臓においてのみ脾臓のそれと近似した（最大約１３％、図３）。しかし、肝臓においては、相当量の放射標識がノックアウト（９.４％）から回収され、これは肝臓が［³Ｈ］ＣＥ９.１の素因において、おそらく抗原特異的でないが、重要な役割を果たすことを示す。胸腺、腎臓および肺における放射活性は、ＣＤ４＋またはＣＤ４−実験動物において５.４％未満であり、投与された放射活性の平均約４５％が、脾臓、胸腺、肝臓、腎臓および肺の残骸中に残存していた。高用量の１００ｍｇ／ｋｇの［³Ｈ］ＣＥ９.１投与は、明らかに０.４ｍｇ／ｋｇで観察される分子の素因のＣＤ４レセプター依存性を満足した。血漿において、ＥＬＩＳＡデータに基づいて、Ｄ４＋マウスにおいて、１００ｍｇ／ｋｇでのＣＥ９.１の平均滞留時間は約１日であり、一方、０.４ｍｇ／ｋｇでは平均滞留時間は１時間未満であった。表１は用量正規化ＡＵＣ（曲線下面積）（１００ｍｇ／ｋｇ、ＣＤ４＋マウス）は、ＣＤ４−動物（０.４ｍｇ／ｋｇ）において観察されるもののファクター２以内であった。ノックアウトにおける薬物速度の直線性の仮定は：１）ＣＤ４レセプター結合がない動物において薬物速度は線形でなければならないこと；および２）外因性抗原に関する非相関ＩｇＧ１特異性の薬物速度の表示（サルにおいて１−２００ｍｇ／ｋｇ、Davisら、Drug Metab ．Dispos．23，1028-1036(1995)）を仮定すると、妥当である。０.４ｍｇ／ｋｇの［³Ｈ］ＣＥ９.１のｉｖ投与のわずか４時間後に、血漿放射活性のほとんどは内因性血漿タンパク質中に取り込まれた。対照的に、１００ｍｇ／ｋｇの［³Ｈ］ＣＥ９.１のｉｖ投与の２４時間後、血漿放射標識は主に不変抗体であった（８０−９０％）。ＣＤ４＋マウスへの１００ｍｇ／ｋｇのｉｖ投与後の血液の血漿に対する比（Ｂ／Ｐ）を表２に示す。ＣＥ９.１を、ＣＤ４−マウスにおいて低用量のｉｖ投薬でやったように、あらゆる時点で高用量のｉｖ投与後２４時間まで一時的に配分していた。これらの時点で、放射標識は基本的に不変ＣＥ９.１であった。図５Ａおよび図５Ｂは、それぞれ脾臓および肝臓における、１００ｍｇ／ｋｇの［³Ｈ］ＣＥ９.１（ＣＤ４＋マウス）のｉｖ投与後の投与された放射活性（％）を表す。比較として、０.４ｍｇ／ｋｇでのデータも示した（ＣＤ４＋およびＣＤ４−マウス）。一般に、高用量のｉｖ投与を受けたＣＤ４＋マウスの脾臓における放射化学特性は、ＣＤ４−マウスにおける低用量で観察されるものと類似していた。ＣＤ４＋マウスにおいて高用量では、脾臓吸収の明らかな時間依存性は明白でなく、全投与放射活性は、平均０.５％であった。低用量では、放射活性は２時間で最大値１８％に達した。対照的に、肝臓における投与された放射活性（％）の特性は、１００ｍｇ／ｋｇでのＣＤ４＋マウス、０.４ｍｇ／ｋｇでのＣＤ４＋マウスおよび０.４ｍｇ／ｋｇでのＣＤ４−マウスにおけるのと類似し；明らかな用量またはｈＣＤ４レセプター−依存性は観察されなかった。皮下投与ＣＤ４＋およびＣＤ４−トランスジェニックマウスに１回０.４ｍｇ／ｋｇの[³ Ｈ]ＣＥ９.１をｓｃ投与し、全血および血漿放射活性、抗原結合可能な血漿中の放射活性、および肝臓、腎臓、肺、脾臓、および胸腺中の全放射活性を評価するために、選択された時点で屠殺した。血漿はさらに、ｓＴ４（可溶性Ｔ４または可溶性ＣＤ４）／抗−γ１ＥＬＩＳＡを用いてＣＥ９.１濃度に関しても分析した。別の実験で、ＣＤ４＋マウスに１回未標識のＣＥ９.１１００ｍｇ／ｋｇをｓｃ投与して、血漿抗−ｈＣＤ４ｍＡｂ濃度を評価した。内因性抗原の非存在下でのＩｇＧの血管外全身性暴露と一致して(Davisetal. ，Drug Metab．Dispos．23，1028-1036(1995))、［³Ｈ］ＣＥ９.１のＣＤ４ノックアウトマウスへのｓｃ投与の結果、血漿中の活性抗体レベルが８時間ないし１週間投与量の１０％を超えるレベルに維持された（ＥＬＩＳＡによると＞１μｇ／ｍＬ、図５）。全血漿放射活性およびＣＤ４−マウスへのｉｖ投与後にセファロース接合抗原と結合する血漿放射活性間で明らかな違いは見られなかった。さらに、２週間までの血液の血漿に対する比は、０.６６を越えず、このことは、著しい血球放射標識結合が無いことを示す（表２）。対照的に、血漿中の全投与量（％）は［³Ｈ］ＣＥ９.１のＣＤ４＋トランスジェニックマウスへのｓｃ投与後１０分ないし２週間で多くて１％であった。血漿放射標識は、定量可能な抗原結合活性を示さなかった（図５）。同様に、血漿ＣＥ９.１濃度は、全時間に渡ってＥＬＩＳＡによって定量不可能であった（ＬＬＱ１０ｎｇ／ｍｌ）。全血漿放射活性は、しかし２４時間で最大値１％投与量まで増加し、見かけの半減期は約４日で減少した。表１は、ＣＤ４＋およびノックアウトトランスジェニックマウスへの［³Ｈ］ＣＥ９.１のｉｖまたはｓｃ投与（０.４および１００ｍｇ／ｋｇ）後の相対的血漿ＡＵＣを示す。ＡＵＣは、０−４８時間間隔に基づくｉｖ投与後または０−１６８時間間隔でのｓｃ投与後に計算した。用量は１００ｍｇ／ｋｇまで増加したので、ＣＤ４レセプター結合は飽和し、結果としてのＡＵＣはレセプターのない動物におけるＡＵＣと類似していた。０.４ｍｇ／ｋｇｓｃデータについて、全血漿濃度は実際的に定量不可能であり、最大の可能なＡＵＣを定量の分析下限( １０ｎｇ／ｍｌ)に基づいて評価した。表１ＣＤ４−マウスにおける０.４ｍｇ／ｋｇと比較したヒトＣＤ４＋トランスジェニックマウスにおける用量標準化血漿ＡＵＣｉｖ群に関して、ＡＵＣは０−４８時間間隔を基準にして計算し、ｓｃ群に関しては、ＡＵＣは０−１６８時間間隔を基準にして計算した。０.４ｍｇ／ｋｇＣＤ４＋ｓｃ群に関しては、全血漿濃度は定量不可能であり、最大可能なＡＵＣは定量化の下限分析に基づいて評価した。ＣＥ９.１の血漿濃度は、可溶性ＣＤ４結合に基づいたＥＬＩＳＡを用いて測定した。［³Ｈ］ＣＥ９.１のＣＤ４＋トランスジェニックマウスへのｓｃ投与の４時間後の血漿のＳＤＳ−ＰＡＧＥ分析は、同量のｉｖ投与後のものと類似していた。４時間での血液の血漿に対する比は０.６８あり、このことは放射標識の大部分はこれらの時点で血漿中にあり、血球と結合していないかったことを示す。しかし、投与の２週間後、血液の血漿に対するの比は７.５であった（表２）。細胞結合不変ＣＥ９.１の痕跡は観察されなかった。ｓｃ投与後、ＣＤ４＋マウスの脾臓中の放射活性のレベルはＣＤ４−マウスのものと匹敵し、ｉｖ投与群と比較して非常に低かった（≦０.５％、ＣＤ４＋マウスについて最大１８％に対して）。これは、循環放射標識の分析が不変の、生物学的に活性な親を検出できなかった（０.４ｍｇ／ｋｇｉｖデータに基づいて、これは脾臓中に蓄積すると考えられる）という事実と一致した。検査した組織のうち、ＣＤ４＋マウスの肝臓が最大２.４％の最高の投与された放射活性を有した。肝臓放射活性の同様の特性がＣＤ４＋およびＣＤ４−マウスにおいて観察され、このことは、吸収はＣＤ４−レセプター依存性でないことを示す（データは示さない）。抗体の吸収はリンパにより起こり（Weinsteinら、Science 222，423-426(1983 )；Weinsteinら、Cancer Invest．3,85-95(1985);Supersaxoら、Pharm．Res．7, 167-169(1990)）、ＣＤ４＋マウスにおけるリンパ系は比較的多量のＣＤ４＋Ｔリンパ球を含有するという仮定すると、少量のｓｃ投与後、［³Ｈ］ＣＥ９.１の全身性利用性の欠失は、抗体が循環に侵入することを防止するリンパＣＤ４＋Ｔ細胞と結合することによるらしい。さらに、［³Ｈ］ＣＥ９.１のｓｃ投与後の放射標識内因性血液および血漿タンパク質の存在は、リンパ系において著しい代謝が起こったという事実と一致する。ＣＤ４＋マウスにおける多量のｓｃ投与後、注射部位から全身性循環系中への著しいＣＥ９.１の吸収が観察された。表１は、ＣＤ４＋マウスへの多量のｓｃ投与後の用量正規化ＡＵＣは、低用量のＣＤ４−において観察されたＡＵＣの２０％以内であった。低用量で観察されるリンパＣＤ４＋Ｔ細胞結合は、高用量で飽和し、したがってＣＥ９.１は全身性循環系中へ効率よく吸収された。表２［³Ｈ］ＣＥ９.１のＣＤ４＋およびＣＤ４−トランスジェニックマウスへのｉｖまたはｓｃ投与後の全放射活性の血液の血漿に対する比 ^aＮ＝１／２４および４８時間［２匹のマウスを使用（平均値を示す）］を除く時点のｉｖデータ。 ^bＮＱは定量不可能を示す(血液および／または血漿中の放射活性が非常に低い )。 ^cＮＤはデータがないことを示す（特定の時点で実験動物を屠殺しなかった）。 ^d１匹のマウスからのデータ。表３はトランスジェニックマウスにおける２種の皮下投与量の全身性暴露を表す。第一例において、初期投与量は飽和し、後者において、初期投与量は飽和しない。表３ＣＥ９.１のｈｕＣＤ４マウスへの２ｓｃ投与一第一投薬が飽和している場合− により、第二投与量は注射部位から全身性循環中へ吸収されるヒトＣＤ４トランスジェニックマウス＊放射活性はＳＤＳ−ＰＡＧＥにより不変ＣＥ９.１として移動する。初期飽和量（１００ｍｇ／ｋｇ）の投与の結果、第二投与後１７時間の血漿中の放射活性が３０倍増加した。要約すると、抗−ｈＣＤ４ｍＡｂの特性は、ヒトＣＤ４レセプターの存在および分布に高度に依存することが証明された。少量のｉｖ投与後、血漿からの迅速な［³Ｈ］ＣＥ９.１の損失は、脾臓における放射活性の蓄積を伴う。対照的に、ＣＤ４−マウスにおいて、ＣＥ９.１は内因性抗原の非存在下でのＩｇＧ１に関して期待されるように長い血漿半減期を有していた。これらの現象は用量依存性であった。多量のｉｖ投与後のＣＤ４レセプター結合の飽和の結果、ＣＤ４レセプターを有しない動物において低用量で観察されるものと薬物動速度および分布が一致した。少量のｓｃ投与後、注射部位から全身性循環系への完全な、活性ＣＥ９.１の吸収の証拠は観察されなかった。しかしながら、高い全身性暴露は、同量のＣＤ４−マウスへのｓｃ投与後に見られ、このことは、ＣＥ９.１のＣＤレセプターとの結合は、ｍＡｂが全身性循環系へ侵入することを防止したことを示唆する。これらの現象も用量依存性であった。多量のｓｃ投与後のＣＤ４レセプター結合の飽和の結果、ＣＤ４レセプターを有しない動物における低用量で観察されるものと薬物速度が一致した。トランスジェニックマウスおよびヒトにおけるＣＥ９.１の比較データは、静脈内薬物速度は、これらの種において質的に類似し、したがってマウスにおける本明細書に記載した知見は、ヒトにおけるＣＥ９.１の特性についての情報を与えるものでなければならないことを示唆するものである。特に、トランスジェニックマウスおよびヒトの両方において、薬物速度は非線形であった。静脈内投与量がトランスジェニックマウスおよびヒトにおいて増加するにつれ、血漿濃度対時間曲線下の面積における用量に比例した増加より大きな増加が観察される。この非線形性は、末梢血部分（trafficking）の内外およびＣＥ９.１のＣＤ４との飽和可能な結合のＣＤ４陽性Ｔ細胞の動きによると思われる。ＣＤ４抗原は、トランスジェニックマウスおよびヒトの両方においてインビボでのＣＥ９.１の挙動を示すのに同様に重要な役割を有する。これらのＣＤ４トランスジェニックマウスにおいて、ヒトＣＤ４遺伝子は内因性ＣＤ４遺伝子を有しないマウスに対して、ノーマルヘルパー細胞機能を回復することはすでに実証されている（Killeen et al.，EMBO J．12，1547-1553(1993 )）。さらに、ＣＤ４＋トランスジェニックマウスにおけるＣＤ４の分布の免疫組織化学的研究は、ヒトＣＤ４分子がＴリンパ球およびヒトにおいて報告されている分布と類似したマクロファージの細胞／樹状突起細胞系上で発現されることを証明した。これらのデータはまとめて、トランスジェニックマウスモデルはヒトにおけるＣＥ９.１の挙動を予想し、本発明において記載されたデータは治療効果を最大にするために臨床的投与法を最適化するのに重要である事を示唆するものである。抗−ＣＤ４モノクローナル抗体についての慢性投与法抗−ＣＤ４モノクローナル抗体は、現在、Ｔ細胞介在自己免疫疾患、例えば慢性関節リウマチおよび喘息などの治療に関して、静脈内投与により投与されている。典型的な投与法を表４に示す。慢性皮下投薬に関して、適切な投与法は、表５に概要を示した方法を含む。本発明を特定の具体例を参照して記載した。しかし、本出願は当業者らが添付の請求の範囲の精神および範囲を逸脱することなくなすことができるこれらの変化および置換を網羅することを意図する。表４慢性関節リウマチおよび喘息における抗−ＣＤ４モノクローナル抗体についての有効な慢性投薬法静脈内投与のみ方法Ａ方法Ｂ表５方法１まずリンパ系を飽和させる静脈内投与の後、慢性皮下^*投薬方法２まずリンパ系を飽和させる皮下内投与の後、慢性皮下投薬方法３−毎週の１６０ｍｇ／用量で方法２の投薬法と同様 ^*皮下投薬間隔および投与レベルは必ずしもｉｖ投与後に採用したものに限定されない。 ^**初期投与はさらにｉｍ投与を包含してもよい。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｐ 37/02 Ｃ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/02 Ａ６１Ｋ 37/02 Ｃ１２Ｐ 21/08 Ｃ１２Ｎ 15/00 Ｃ (72)発明者マクドナルド，ブライアン・リチャードアメリカ合衆国19481ペンシルベニア州バレー・フォージ、リバティー・レイン10番

Claims

【特許請求の範囲】１．免疫細胞介在疾患を治療するための改良法であって、その改良が：モノクローナル抗体、可溶性レセプターおよび免疫細胞の表面上に発現された抗原に結合する可溶性リガンドからなる群より選択される、飽和量の治療用タンパク質を投与し；つづいて該治療用タンパク質を二次投与することからなり、ここに、二次投与は皮下投与され、該治療用タンパク質の二次投与から由来の全身性暴露は、治療用タンパク質の等量の皮下一次投与からの全身性暴露より少なくとも５０％大きいことを特徴とする方法。２．免疫細胞がＴ細胞リンパ球である請求項１記載の方法。３．Ｔ−細胞抗原がヒトＣＤ４である請求項２記載の方法。４．Ｔ−細胞抗原がヒトＣＤ２８である請求項２記載の方法。５．Ｔ−細胞抗原がヒトＣＴＬＡ−４である請求項２記載の方法。６．Ｔ−細胞抗原がヒトＣＤ４０リガンドである請求項２記載の方法。７．モノクローナル抗体が霊長類−ヒトキメラ抗体である請求項１記載の方法。８．キメラ抗体がＣＥ９.１である請求項７記載の方法。９．モノクローナル抗体がヒト化モノクローナル抗体である請求項１記載の方法。１０．モノクローナル抗体がヒトモノクローナル抗体である請求項１記載の方法。１１．Ｔ−細胞介在疾患が慢性関節リウマチである請求項２記載の方法。１２．Ｔ−細胞介在疾患が乾癬であるこ請求項２記載の方法。１３．Ｔ−細胞介在疾患が喘息である請求項２記載の方法。１４．Ｔ−細胞介在疾患が対宿主移植片疾患である請求項２記載の方法。１５．飽和量を静脈内投与する請求項１記載の方法。１６．飽和量を筋肉内投与する請求項１記載の方法。１７．治療用タンパク質の二次投与を上腕、または鎖骨上または肩甲骨上領域に皮下投与する請求項１記載の方法。１８．治療用タンパク質の二次投与を腹壁または上大腿部へ皮下投与する請求項１記載の方法。１９．免疫細胞がＢ−細胞リンパ球である請求項１記載の方法。２０．Ｂ−細胞抗原がヒトＣＤ４０である請求項１９記載の方法。２１．Ｂ−細胞抗原がヒトＣＤ８０である請求項１９記載の方法。２２．Ｂ−細胞抗原がヒトＣＤ８６である請求項１９記載の方法。２３．Ｂ−細胞抗原がヒトＣＤ２０である求項１９記載の方法。２４．治療用タンパク質がヒトＣＤ８０またはＣＤ８６に対するモノクローナル抗体である請求項１９記載の方法。２５．治療用タンパク質がヒトＣＤ２０に対するモノクローナル抗体である請求項１９記載の方法。２６．治療用タンパク質がヒトＣＤ４０に対する非増殖性モノクローナル抗体である請求項１９記載の方法。２７．Ｂ−細胞介在疾患がＢ−細胞リンパ腫である請求項１９記載の方法。２８．Ｂ−細胞介在疾患が慢性関節リウマチである請求項１９記載の方法。２９．Ｂ−細胞介在疾患が乾癬である請求項１９記載の方法。３０．Ｂ−細胞介在疾患が喘息である請求項１９記載の方法。３１．Ｂ−細胞介在疾患が対宿主移植片疾患である請求項１９記載の方法。３２．治療用タンパク質の二次投与から由来の全身性暴露が、治療用タンパク質の一次の等価な皮下投与から由来の全身性暴露よりも少なくとも２倍（すなわち１００％）以上である請求項１記載の方法。３３．治療用タンパク質の二次投与から由来の全身性暴露が、治療用タンパク質の一次の等価な皮下投与量からの全身性暴露よりも少なくとも４倍以上である請求項１記載の方法。