JP2000506397A

JP2000506397A - テイルレス核ホルモン受容体（ｔｌｘ受容体）

Info

Publication number: JP2000506397A
Application number: JP10528551A
Authority: JP
Inventors: ビーリー，リー・ジェイムズ; ジェンキンズ，オーウェン; モサコースカ，ダヌタ・エワ・イレーナ
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1996-12-23
Filing date: 1997-12-23
Publication date: 2000-05-30
Also published as: EP0902837A1; GB9626699D0; CA2246787A1; WO1998028418A1

Abstract

(57)【要約】テイルレス核ホルモンポリペプチドおよびポリヌクレオチド、ならびに組み換え法によるかかるポリペプチドの製造方法を開示する。治療および診断アッセイにおけるこれらのポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法も開示する。

Description

【発明の詳細な説明】テイルレス核ホルモン受容体（ＴＬＸ受容体）発明の分野本発明は、新たに同定されたポリヌクレオチド、それによりコードされるポリペプチド、ならびにかかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの使用、ならびにそれらの製造に関する。より詳細には、本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドは核ホルモン受容体に関連している(以下、テイルレス核ホルモン受容体( tailless nudear hormone receptor)(ＴＬＸ）という)。また本発明は、かかるポリヌクレオチドおよびポリペプチドの作用の阻害または活性化にも関する。発明の背景核ホルモン受容体は、すべての脊椎動物および無脊椎動物に見られる蛋白の大規模ファミリーであり、それらの機能は遺伝子転写を転調させることである(Par ker(1993)Curr.Op.Cell.Biol.5:499-504,Laudet et al,(1992)EMBO J.11:1003-1 013,Mangelsdorf et al,1995 Cell83:835-839,Loprs de Silva amd Burbach(199 5)Trends Neurosci.18:542-548に概説されている)。それらは、ＤＮＡ結合ドメインおよびリガンド結合ドメインを含む類似のドメイン構造を有している。構造関連性に基づけば、これらの受容体はステロイドホルモン受容体、甲状腺ホルモン受容体およびレチノイン酸受容体のごときサブファミリーに分類されうるが、既知リガンドを有しない多くの受容体の大規模でさらに増えつつあるファミリーも存在し、それらは孤児受容体（orphan receptors）と呼ばれる。ＤＮＡ結合ドメインは、化学シグナルおよび／またはシグナルトランスダクション経路に応答して特異的標的遺伝子のシス作用性エレメントと相互作用しうる。ステロイドホルモン受容体のごとき古典的受容体の場合、エストラジオール、テストステロン、プロゲステロンのごとき内分泌系からのシグナルは、ホルモンとこれらの蛋白のリガンド結合ドメインとの直接相互作用により細胞応答へとトランスダクションされうる。これらの受容体のいくつかについての他の天然リガンドが同定されており、それらは全−トランスレチノイン酸、１，２５−ジヒドロキシビタミンＤ３、３，５，３’−１−トリヨードチロニンおよび１５−デオキシ−Δ^12,14−プロスタグランジンＪ₂を包含する(Mangelsdorf et al,1995Ceｌl 83:835-839)。テイルレスとしても知られるＴＬＸ（Monaghan et al,1995,Development,121: 839-853,Pignoni et al,1990,Cell,62:151-163）は、ショウジョウバエ(Pignoni et al,1990)、マウス(Tu et al,1994,Nature 370:375-379,Monaghan et al,199 5)、アフリカツメガエル（Holleman et al,1996,GenBank受託番号Ｕ67886）およびニワトリ（Yu et al,1994）において見いだされている。ＴＬＸは発達中のショウジョウバエ胚の末端（Pignoni et al,1990）および発達中のニワトリおよびマウスの前脳（Yu et al,1994,Monaghan et al,1995）において発現される。テイルレス機能の喪失はすべての原脳神経芽細胞の不存在を招く(Younossi-Harten stein et al,1997,Developmental Biology 182:270-283)。テイルレス遺伝子のノックアウトマウスが公表されており(Monaghan et al,1997,Nature 390:515-51 7)、マウスは欠損辺縁系を有し、過度に興奮しやすく、攻撃的な表現型を有することが示されている。ホモ接合変異マウスは誕生時には生育可能であるが、嗅覚皮質、下嗅覚皮質および内嗅覚皮質を含む嗅脳および辺縁構造、扁桃および歯状回のサイズが小さい。ＴＬＸ／テイルレス機能の修飾は、鬱病、不安症、攻撃性疾患、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ニューロパシー性の痛み、ＣＮＳ炎症性疾患および他の神経変性疾患を包含するＣＮＳの疾病 (これらに限らない)、ならびに目の欠陥およびＣＮＳ発達に関する問題を変化させうる。最近、しかも本発明の優先日後、Jacksonら（Royal Free Hospital,London）は、ヒトＴＬＸ遺伝子配列を公表した(GenBank受託番号Ｙ13276)。治療において役割を果たしうるさらなる受容体の同定および特徴づけに対する必要性が存在し続けている。発明の概要１の態様において、本発明は、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドならびにその製造のための組み換え物質および方法に関する。本発明のもう１つの態様は、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドおよびポリヌクレオチドの使用方法に関する。かかる使用は、とりわけ鬱病、不安症、攻撃性疾患、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ニューロパシー性の痛み、ＣＮＳ炎症性疾患および他の神経変性疾患のごときＣＮＳの疾病中枢神経系の疾病、目の欠陥およびＣＮＳ発達に関する問題の治療を包含する。さらにもう１つの態様において、本発明は、本発明により提供される材料を用いるアンタゴニストおよびアゴニストの同定方法、ならびに同定された化合物を用いるテイルレス核ホルモン受容体のバランス不良関連症状の治療方法に関する。さらにもう１つの態様は、不適当なテイルレス核ホルモン受容体活性またはレベルに関連した疾病の検出のための診断アッセイに関する。図面の簡単な説明図１はヒトテイルレス核ホルモン受容体のヌクレオチド配列配列番号：１および推定アミノ酸配列配列番号：２を示す。発明の説明定義下記定義は、本明細書で頻繁に使用される特定の用語の理解を容易にするためのものである。「テイルレス核ホルモン受容体」は、一般的には、配列番号：２に示すアミノ酸配列を有するポリペプチド、またはその対立遺伝子変種をいう。「受容体活性」または「受容体の生物学的活性」は、該テイルレス核ホルモン受容体の代謝的または生理学的機能をいい、類似の活性または改善された活性または望ましくない副作用を減じられたこれらの活性を包含する。該テイルレス核ホルモン受容体の抗原性および免疫原性の活性も含まれる。「テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチド」は、テイルレス核ホルモン受容体配列に対して十分に類似したアミノ酸配列を有するポリペプチド、好ましくは少なくとも１つの当該受容体活性を示すポリペプチドをいう。「テイルレス核ホルモン受容体遺伝子」は、配列番号：１に示すヌクレオチド配列を有するポリヌクレオチドまたはその対立遺伝子変種および／またはそれらの相補物をいう。「テイルレス核ホルモン受容体ポリヌクレオチド」は、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドまたはそのフラグメントをコードするヌクレオチド配列、あるいは配列番号：２のポリペプチドまたはその対応フラグメントをコードしているヌクレオチド配列に対して少なくとも９２％の同一性を有するヌクレオチド配列、あるいは配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列に対して十分な同一性を有していて増幅に使用可能な条件またはプローブもしくはマーカーとして使用可能な条件でハイブリダイゼーションするヌクレオチド配列を含むポリヌクレオチドをいう。本明細書の用語「抗体」は、ポリクローナルおよびモノクローナル抗体、キメラ、１本鎖、ならびにヒト化抗体、さらにはＦａｂフラグメントを包含し、Ｆａｂまたは他の免疫グロブリン発現ライブラリーの生成物も包含する。「単離」とは、「人間の手により」天然の状態から変化させられた、すなわち、それが天然に存在する場合、元来の環境から変化させるもしくは取り除く、またはその両方を行ったことを意味する。例えばポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然の状態で生物中に存在する場合は、「単離」されていないが、同一のポリヌクレオチドまたはポリペプチドが、天然に共存する物質から分離されている場合は、本明細書に用いる用語である、「単離」がなされている。「ポリヌクレオチド」とは、一般的には、修飾されていないＲＮＡもしくはＤＮＡ、または修飾されたＲＮＡもしくはＤＮＡであってよい、任意のポリリボヌクレオチドまたはポリデオキシリボヌクレオチドを意味する。「ポリヌクレオチド」は、一本鎖および二本鎖ＤＮＡ、一本鎖および二本鎖領域の混合物または一本鎖、二本鎖および三本鎖領域の混合物であるＤＮＡ、一本鎖および二本鎖ＲＮＡ、ならびに一本鎖および二本鎖領域の混合物であるＲＮＡ、一本鎖もしくはより典型的には二本鎖もしくは三本鎖、または一本鎖および二本鎖領域の混合物であってもよいＤＮＡおよびＲＮＡを含むハイブリッド分子を意味するが、これらに限定するものではない。さらに、「ポリヌクレオチド」は、ＲＮＡもしくはＤＮＡ、またはＲＮＡとＤＮＡの両方を含む三本鎖領域を意味する。安定性またはその他の理由で修飾した骨格を有するＤＮＡまたはＲＮＡは、本明細書の用語「ポリヌクレオチド」に含まれる。イノシン等の通常的でない塩基、またはトリチル化塩基等は「修飾」された塩基に含まれる。種々の修飾がＤＮＡおよびＲＮＡについて行われているので、「ポリヌクレオチド」は、典型的に、天然において見いだされるようなポリヌクレオチドのかかる化学的、酵素的または代謝的に修飾された形態、ならびにウイルスおよび細胞に特徴的なＤＮＡおよびＲＮＡの化学的形態を包含する。また、「ポリヌクレオチド」は、しばしばオリゴヌクレオチドと称される短いポリヌクレオチドを包含する。「ポリペプチド」は、ペプチド結合または修飾したペプチド結合により互いに結合している２個またはそれ以上のアミノ酸を含むペプチドまたは蛋白を意味する。「ポリペプチド」は、通常、例えばペプチド、オリゴペプチドおよびオリゴマーとも称される短鎖のもの、および一般的に蛋白と称される長鎖のものの両方を意味する。ポリペプチドは遺伝子によりコードされた２０種のアミノ酸とは異なるアミノ酸を含有していてもよい。「ポリペプチド」には、プロセッシングおよびその他の翻訳後修飾のような天然プロセスにより修飾されたものが含まれるが、当業者に周知の化学修飾技術によっても修飾される。かかる修飾は基礎的な参考書およびさらに詳細な論文ならびに多数の研究文献にも詳しく記載されており、これらは当業者に周知である。修飾は、ペプチド骨格、アミノ酸側鎖およびアミノまたはカルボキシル末端等のポリペプチドの任意の部位で起こりうる。同一の型の修飾は該ポリペプチドの幾つかの部位で、同一または異なる程度で存在し得ることが理解されよう。また、ポリペプチドは多くの型の修飾をも含み得る。ポリペプチドは、ユビキチネーションの結果として分枝状となったものであってもよく、ポリペプチドは分枝ありまたはなしの環状のものであってもよい。環状、分枝状；および環状かつ分枝状ポリペプチドは、翻訳後の天然プロセスにより生じるものであってもよく、また、合成的方法により作られるものであってもよい。修飾には、アセチル化、アシル化、ＡＤＰ−リボシル化、アミド化、フラビンの共有結合、ヘム部分の共有結合、ヌクレオチドまたはヌクレオチド誘導体の共有結合、脂質または脂質誘導体の共有結合、ホスホチジルイノシトールの共有結合、交差架橋、環化、ジスルフィド結合形成、脱メチル化、交差架橋共有結合形成、シスチン形成、ピログルタメート形成、ホルミル化、ガンマ−カルボキシル化、グリコシル化、ＧＰＩアンカー形成、水酸化、ヨウ素化、メチル化、ミリストイル化、酸化、蛋白加水分解プロセッシング、リン酸化、プレニル化、ラセミ化、グリコシル化、脂質結合、硫酸化、グルタミン酸残基のガンマ−カルボキシル化、水酸化およびＡＤＰリボシル化、セレノイル化、硫酸化、アルギニル化のごときトランスファーＲＮＡ媒介の蛋白へのアミノ酸の添加、ならびにユビキチネーションなどがある。例えばProteins-Structure and Molecular Properties、第２版、T.E.Creighton、W.H.Freeman and Company、ニューヨーク（1993）およびPosttranslational Covalent Modification of Proteins、B.C.Johnson編、アカデミックプレス、ニューヨーク（1983）のWold,F.,Post-translational Prote in Modifications:Perspective and Prospects、１〜12頁；Seifterら、Meth.En zymol.182:626-646（1990）およびRattanら、Protein Synthesis：Posttranslat ional Modifications and Aging，Ann.N.YAcad.Sci.663:48-62（1992）を参照されたい。本明細書で用いる「変種」なる用語は、対照ポリヌクレオチドまたはポリペプチドとは各々異なるポリヌクレオチドまたはポリペプチドであるが、本質的な特性は保持している。典型的なポリヌクレオチドの変種は、別の対照ポリヌクレオチドとはヌクレオチド配列が異なる。変種のヌクレオチド配列の変化は、対照ポリヌクレオチドによりコードされるポリペプチドのアミノ酸配列を変化させるものであってもよく、変化させないものであってもよい。以下に論じるように、ヌクレオチドの変化は結果的に、対照配列によりコードされるポリペプチドにおけるアミノ酸置換、付加、欠損、融合および末端切断を招く。典型的なポリペプチドの変種は、別の対照ポリペプチドとはアミノ酸配列が異なる。一般的には、差異は、対照ポリペプチドおよび変種の配列が、全体的に非常に類似しており、多くの領域で同一なものに限られる。変種および対照ポリペプチドは、１またはそれ以上の置換、付加、欠損が任意の組み合わせで起こることにより、アミノ酸配列が変化し得る。置換または挿入されたアミノ酸残基は、遺伝学的コードによりコードされたものであってもなくてもよい。ポリヌクレオチドまたはポリペプチドの変種は、例えば対立遺伝子変種のような自然発生的なものでもよく、または自然発生することが知られていない変種でよい。ポリヌクレオチドおよびポリペプチドの非自然発生変種は、突然変異技術または直接的合成により製造できる。「同一性」とは、ヌクレオチド配列またはアミノ酸配列の同一性の尺度である。一般的には、最大の合致が得られるように配列が並置される。「同一性」なる用語自体は当該分野において認識された意味を有し、公表された方法を用いて計算できる。例えば、Computational Molecular Biology，Lesk,A.M.編、オックスフォード・ユニバーシティー・プレス、ニューヨーク、1988年；Biocomputing： Informatics and Genome Projects,Smith,D.W編、アカデミック・プレス、ニューヨーク、1993年；Computer Analysis of Sequence Data，パートＩ，Griffin, A.M.およびGriffin,H.G.編、ヒューマン・プレス、ニュージャージー、1994年； Sequence Analysis in Molecular Biology,von Heinie,G.、アカデミック・プレス、1987年；Sequence Analysis Primer,Gribskov,M.およびDevereux,J.編、Ｍストックトン・プレス、ニューヨーク、1991年参照。２つのポリヌクレオチドまたはポリペプチド配列間の同一性を測定するための多くの方法があるが、用語「同一性」は当業者によく知られている。(Carillo,H.およびLipman,D.,SIAM J.Ap phied Math.,48:1073(1988))。２つの配列間の同一性または類似性を決定するために通常用いられる方法には、Guide to Huge Computers,Martin J.Bishop,ed., Academic Press,San Diego,1994およびCarillo,H.およびLipman,D.,SIAM J.Apph ed Math.,48:1073（1988）に記載された方法があるが、これらに限らない。同一性および類似性を決定する方法は、公に入手できるコンピュータープログラムに集成されている。二つの配列間の同一性および類似性を測定する好ましいコンピュータープログラム法には、ＧＣＳプログラムパッケージ（Devereux,J.ら、Nuc leic Acids Research 12(1):387（1984）、BLASTPN、BLASTN、およびFASTA (Atschul,S.F.ら、J.Molec.Biol（1990） 215:403)）があるが、これらに限定するものではない。本発明は、新規テイルレス核ホルモン受容体のポリペプチドおよびポリヌクレオチドに関し、それらはアミノ酸配列同一性によりマウス孤児核受容体テイルレスに関連している。本発明は、特に、図１（配列番号：１および２）に示すヌクレオチドおよびアミノ酸配列を有するテイルレス核ホルモン受容体に関する。本発明のポリペプチドテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドは、配列番号：２のポリペプチド（詳細には成熟ポリペプチド）；ならびに配列番号：２のポリペプチドまたはその重要部分に対して少なくとも９９％の同一性を有するテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドを包含する。テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドは「成熟」蛋白の形態であってもよく、あるいは融合蛋白のごとき大型の蛋白の一部であってもよい。分泌またはリーダー配列、プロ配列、複数のヒスチジン残基のごとき精製を促進する配列、または組み換え生産を行っている間の安定性のためのさらなる配列を含むさらなるアミノ酸配列を含んでいることがしばしば有利である。生物学的活性のあるテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドのフラグメントも本発明に包含される。フラグメントは、前述のテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドのアミノ酸配列のすべてではなく一部に対して全く同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドである。テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドでは、フラグメントは「独立して存在するもの(free standing)」であるか、あるいはより大きなポリペプチド内に含まれていてもよく、その中でフラグメントは一部分もしくは領域を形成している。最も好ましくは、単一の連続した領域として、より大きなポリペプチドに含まれる。本発明ポリペプチドフラグメントの典型例は、例えば、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドのアミノ酸番号約１〜２０、２１〜４０、４１〜６０、６１〜８０、８１〜１００および１０１から末端までからなるフラグメントを包含する。この意味において、「約」とは、片方の端または両端において、示された数よりも数個、５個、４個、３個、２個または１個多いかまたは少ない範囲を含む。好ましいフラグメントは、例えば、アミノ末端を含む一連の残基が欠失、またはカルボキシ末端を含む一連の残基が欠失、あるいは一方がアミノ末端でもう一方がカルボキシ末端を含む２種の一連の残基が欠失していること以外はテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドのアミノ酸配列を有する末端切断ポリペプチドを包含する。また、構造的または機能的属性により特徴づけられるフラグメント、例えばアルファーヘリックスおよびアルファーヘリックス形成領域、ベータシートおよびベータシート形成領域、ターンおよびターン形成領域、コイルおよびコイル形成領域、親水性領域、疎水性領域、アルファー両親媒性領域、ベータ両親媒性領域、可変領域、表面形成領域、基質結合領域、および高抗原性指標領域を含むフラグメントなども好ましい。受容体活性を媒介する、生物学的に活性な領域も好ましく、類似の活性もしくは改善された活性のある、または望ましくない活性を減じたフラグメント等がある。動物、とりわけヒトにおいて抗原的または免疫原的なフラグメントも含まれる。よって、本発明ポリペプチドは、配列番号：２のアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を有するポリペプチドまたは配列番号：２の対応フラグメントに対して少なくとも９９％の同一性を有するそのフラグメントを包含する。好ましくは、これらのポリペプチドのすべては、抗原的活性を包含する受容体の生物学的活性を保持している。上記配列およびフラグメントの変種もこのグループに含まれる。好ましい変種は、保存的アミノ酸置換により変化したものであり、すなわち、同様の特徴を有するアミノ酸により置換されているものである。典型的なかかる置換は、Ａｌａ、Ｖａｌ、ＬｅｕおよびＩｌｅ間：ＳｅｒおよびＴｈｒ間；ＡｓｐおよびＧｌｕ間；ＡｓｎおよびＧｌｎ間；ならびに塩基性残基ＬｙｓおよびＡｒｇ間；あるいは芳香族残基ＰｈｅおよびＴｙｒ間におけるものである。数個、５ないし１０個、１ないし５個、または１ないし２個のアミノ酸がいずれかの組み合わせで置換、欠失または付加されている変種が特に好ましい。いずれの適当な方法でも本発明テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドを製造することができる。かかるポリペプチドは、単離された天然ポリペプチド、組み換え法によるポリペプチド、合成法によるポリペプチド、またはこれらの方法の組み合わせによるポリペプチドを包含する。かかるポリペプチドの製造手段は当該分野においてよく理解されている。本発明のポリヌクレオチド本発明のもう１つの態様は、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドをコードしている単離ポリヌクレオチドおよびそれに密接に関連したポリヌクレオチドに関する。ヒトテイルレス核受容体ホルモン受容体をコードするｃＤＮＡの配列決定結果により示されるように、本発明テイルレス核ホルモン受容体は、核ホルモン受容体の他の蛋白に構造的に関連している。そのｃＤＮＡ配列は、３８５個のアミノ酸（推定分子量４２．６ｋＤａ）をコードする１つの読み枠を含んでいる。図１（配列番号：２）のテイルレス核ホルモン受容体は、マウステイルレス核ホルモン受容体（Monaghan et al,Development,121:839-853,1995）に対して３８５個のアミノ酸残基において約９８％の同一性（BLASTを用いた場合）を有する。図１（配列番号：１）のテイルレス核ホルモン受容体遺伝子は、マウステイルレス核ホルモン受容体（Monaghan et al,Development,121:839-853,1995）に対して１１５８個のヌクレオチド残基において約９１％の同一性（BLAST）を有する。本発明テイルレス核ホルモン受容体は、コーディング配列中の１つの位置、すなわち位置２６８においてJacksonらの配列（GenBank受託番号Ｙ13276）と異なり、この位置においてＣではなくＴを有する。これが翻訳されるとアミノ酸配列の９０番目がヒスチジンでなくチロシンとなる。この相違は多型性変異またはエラー、例えば配列を得るための遺伝子クローニングにおけるＰＣＲエラーにより生じうる。カエル、マウス、ニワトリのごとき他の種由来のＴＬＸはJacksonの配列と同じ位置にＣを有する。ヒト・扁桃細胞中のｍＲＮＡ由来のｃＤＮＡライブラリーから、発現配列タグ（ＥＳＴ）分析（Adams,M.D.,et al.Science(1991)252:1651-1656;Adams,M.D.et al.,Nature(1992)355:632-634;Adams,M.D.,et al.,Nature(1995)377 Supp:3-17 4）を用いて、テイルレス核ホルモン受容体をコードしている本発明の１のポリヌクレオチドを得てもよい。ゲノムＤＮＡライブラリーのごとき天然起源から本発明ポリヌクレオチドを得ることもでき、あるいはよく知られ市販されている手段方法を用いて合成することもできる。テイクレス核ホルモン受容体ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列は、その全長にわたり図１（配列番号：１）に示すコーディング配列と同一であってもよく、あるいは配列番号：２のポリペプチドをコードしているこのヌクレオチド配列の縮重形態であってもよく、あるいは配列番号：２のポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列に対して非常に同一性のあるものであってもよい。好ましくは、本発明ポリヌクレオチドは、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列に対して少なくとも９２％同一、好ましくは少なくとも９５％同一、より好ましくは少なくとも９７％同一、最も好ましくは少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含み、あるいは図１（配列番号：１）に示すコーディングヌクレオチド配列に対して少なくとも９２％同一、好ましくは少なくとも９５％同一、より好ましくは少なくとも９７％同一、最も好ましくは少なくとも９９％同一であるヌクレオチド配列を含み、あるいは配列番号：２のポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列に対して少なくとも９２％同一、好ましくは少なくとも９５％同一、より好ましくは少なくとも９７％同一であるヌクレオチド配列を含む。本発明ポリヌクレオチドをテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドの組み換え生産に用いる場合、ポリヌクレオチドはそれ自体、成熟ポリペプチドまたはそのフラグメントのコーディング配列を含むものであってもよく；あるいは他のコーディング配列を伴った読み枠中の成熟ポリペプチドまたはフラグメントのコーディング配列を含むものであってもよい。他のコーディング配列としては、例えば、リーダーまたは分泌配列、プレ、プロ、プレプロ蛋白配列をコードするコーディング配列、または他の融合ペプチド部分が挙げられる。例えば、融合ポリペプチドの精製を促すマーカー配列をコードしていてもよい。本発明のこの態様の１の好ましい具体例において、マーカー配列は、ｐＱＥベクター（Qiagen,I nc.）に提供されるようなヘキサーヒスチジンペプチド（Gentzら、Proc.Natl.Ac ad.Sci.,USA,86:821-824（1989）に記載される）またはＨＡタグ（Wilsonら、Ce ll，37:767(1984)）である。本発明のポリヌクレオチドはまた、構造遺伝子および遺伝子発現を調節する天然の配列をも含むが、これらに限定するものではない。ポリヌクレオチドは、例えば、転写された非翻訳配列、終止シグナル、リボソーム結合部位、ｍＲＮＡを安定化する配列のごとき非コーディング５'および３' 配列を含有していてもよい。図１（配列番号：２）に示すアミノ酸配列を有するテイルレス核ホルモン受容体またはその変種をコードしているポリヌクレオチドは本発明の特に好ましい具体例である。さらに好ましい具体例は、表２（配列番号：２）のテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドのアミノ酸配列を含むテイルレス核ホルモン受容体変種をコードしているポリヌクレオチドであり、数個、５ないし１０個、１ないし５個、１ないし３個、１ないし２個または１個のアミノ酸残基がいずれかの組み合わせで置換、欠失または付加されているものである。本発明のさらに好ましい具体例は、図１（配列番号：２）に示すアミノ酸配列を有するテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して全長にわてり少なくとも９２％同一であるポリヌクレオチド、およびかかるポリヌクレオチドに相捕的なポリヌクレオチドである。寄託クローンのヒトｃＤＮＡのテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドをコードしているポリヌクレオチドに対して全長にわたり少なくとも９２％同一である領域を含むポリヌクレオチドおよびそれに相捕的なポリヌクレオチドが最も好ましい。この点において、少なくとも９７％同一のポリヌクレオチドが非常に好ましく、少なくとも９８〜９９％同一のものがさらに非常に好ましく、少なくとも９９％同一のものが最も好ましい。さらに本発明は、上記配列にハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに関する。この点において、本発明は、厳密な条件下で上記ポリヌクレオチドにハイブリダイゼーションするポリヌクレオチドに特別に関する。本明細書の用語「厳密な条件」は、配列間に少なくとも９５％、好ましくは少なくとも９７％の同一性がある場合にハイブリダイゼーションが起こることを意味する。配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列またはそのフラグメントに対して十分に同一である本発明ポリヌクレオチドをｃＤＮＡおよびゲノムＤＮＡ用のハイブリダイゼーションプローブとして用いて全長のｃＤＮＡおよびテイルレス核ホルモン受容体をコードしているゲノムクローンを単離し、あるいはテイルレス核ホルモン受容体遺伝子に対して高い類似性を有する配列を有する他の遺伝子のｃＤＮＡおよびゲノムクローンを単離してもよい。かかるハイブリダイゼーション法は当業者に知られている。典型的には、これらのヌクレオチド配列は、対照に対して７０％、好ましくは８０％、より好ましくは９０％の同一性を有する。一般的には、プローブは少なくとも１５個のヌクレオチドを含む。好ましくは、かかるプローブは少なくとも３０個のヌクレオチドを有し、少なくとも５０個のヌクレオチドを有していてもよい。特に好ましいプローブは３０ないし５０個の範囲のヌクレオチドを含む。本発明ポリヌクレオチドおよびポリペプチドを、動物およびヒトの疾病の研究試薬ならびに治療および診断のための材料として用いてもよい。ベクター、宿主細胞、発現本発明はまた、ポリヌクレオチドまたは本発明のポリヌクレオチドを含むベクター、本発明のベクターで遺伝子操作する宿主細胞および組換え技法による本発明のポリペプチドの製造にも関する。本発明のＤＮＡ構築物に由来するＲＮＡを用いる、かかる蛋白の製造に無細胞翻訳系を用いてもよい。組換え体を製造するために、宿主細胞を遺伝子操作して、発現系もしくはそれらの一部、または本発明のポリヌクレオチドを組み込むことができる。ポリヌクレオチドの宿主細胞への導入は、例えば、Davisら、Basic Methods in Molecular Biology(1986)；Sambrookら、Molecular Cloning；A Laboratory Man ual、第２版；コールド・スプリング・ハーバー・ラボラトリー・プレス、コールド・スプリング・ハーバー、ニューヨーク（1989）のように、多くの標準的な実験マニュアルに記載される方法により行うことができ、例えばリン酸カルシウムトランスフェクション、ＤＥＡＥ−デキストラン媒介トランスフェクション、トランスベクション、マイクロインジェクション、陽イオン脂質媒介トランスフェクション、エレクトロポレーション、トランスダクション、スクレイプ負荷(s crape loading)、バリスティック導入（ballistic introduction）および感染等がある。適当な宿主の代表的なものには、細菌細胞、例えば連鎖球菌属(Streptococci) 、ブドウ球菌属(Staphylococi)、大腸菌(E.coli)、ストレプトミセスおよび枯草菌（Bacillus subtiis）細胞；真菌細胞例えば酵母細胞およびアスペルギルス属（Aspergillus）細胞；昆虫細胞例えばショウジョウバエＳ２（DrosophilaS2）およびスポドプテラＳｆ９（Spodoptera Sf9）細胞;動物細胞例えばＣＨＯ、ＣＯＳ、ＨｅＬａ、Ｃ１２７、３Ｔ３、ＢＨＫ、２９３およびボウズ（Bows）黒色腫細胞；ならびに植物細胞等がある。非常に多くの発現系を使用できる。かかる系は、染色体、エピソームおよびウイルス由来のベクター、例えば細菌プラスミド由来、バクテリオファージ由来、トランスポゾン由来、酵母エピソーム由来、挿入エレメント由来、酵母染色体エレメント由来、例えばバキュロウイルス、パポバウイルス、例えばＳＶ４０、ワクシニアウイルス、アデノウイルス、鶏痘ウイルス、仮性狂犬病ウイルスおよびレトロウイルス等のウイルス由来のベクター、ならびにそれらを組み合わせた物に由来するベクター、例えばプラスミドおよびバクテリオファージ遺伝学的エレメント由来のベクター、例えばコスミドおよびファージミドを包含する。発現系は、発現を制御ならびに発生させる制御領域を含有していてもよい。一般的には、宿主中でポリヌクレオチドを保持、伸長または発現してポリペプチドを発現するのに適した系またはベクターを用いてもよい。例えばSambrookら、Molecular Cloning,A Laboratory Manual（上述）に記載されているような周知のおよび常套的な種々の技術により、適当なＤＮＡ配列を発現系に挿入できる。翻訳蛋白を、小胞体内腔、ペリプラスミックスペースまたは細胞外環境へ分泌させるために、適当な分泌シグナルを所望ポリペプチド中に含ませてもよい。これらのシグナルはポリペプチドに本来的なものであってもく、あるいは異種性のシグナルでもよい。テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドをスクリーニングアッセイのために発現させる場合、一般的には、細胞表面にポリペプチドを生成させるのが好ましい。この場合、スクリーニングアッセイに使用する前に細胞を集めてもよい。テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドを培地中でスクリーニングする場合、培地を回収してポリペプチドを回収し精製することができる。細胞内に生成される場合、まず細胞を溶解し、次いで、ポリペプチドを回収しなければならない。テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドは周知の方法により、組換え細胞培養物から回収および精製でき、その方法には例えば硫酸アンモニウムまたはエタノール沈殿、酸抽出、陰イオンまたは陽イオン交換クロマトグラフィー、ホスホセルロースクロマトグラフィー、疎水性相互作用クロマトグラフィー、親和性クロマトグラフィー、ヒドロキシルアパタイトクロマトグラフィーおよびレクチンクロマトグラフィー等がある。高速液体クロマトグラフィーを精製に用いるのが最も好ましい。ポリペプチドが単離および／または精製中に変性した場合、再び活性な立体配座にするために、蛋白再生のための周知の技法を用いることができる。診断アッセイ本発明はまた診断試薬としての本発明テイルレス核ホルモン受容体ポリヌクレオチドの使用にも関する。機能不全に関連している変異形態のテイルレス核ホルモン受容体遺伝子の検出は、テイルレス核ホルモン受容体の発現低下、過剰発現または変化した発現から生じる疾病またはかかる疾病に対する感受性の診断をするための手段を提供するであろう。テイルレス核ホルモン受容体遺伝子中の変異を有する個体を、種々の方法によりＤＮＡレベルで検出できる。診断用の核酸は、対象の細胞、例えば骨、血液、尿、唾液、組織生検または剖検材料から得てもよい。ゲノムＤＮＡは検出に直接使用できるか、または分析の前にＰＣＲもしくはその他の増幅法を用いることにより酵素的に増幅できる。ＲＮＡまたはｃＤＮＡも同様の方法で用いることができる。正常な遺伝子型と比較した場合の増幅生成物のサイズの変化により、欠失および挿入を検出することができる。点突然変異は、増幅ＤＮＡを標識テイルレス核ホルモン受容体ポリヌクレオチド配列にハイブリダイズさせることにより同定できる。好ましくは、完全に対合した配列は、ＲＮアーゼ消化または融解温度の差により、誤対合二重らせんから区別できる。ＤＮＡ配列の差はまた、変性剤含有または不含のゲル中のＤＮＡフラグメントの電気泳動の可動性の変化を検出することにより、または直接的なＤＮＡの配列決定により検出できる。例えばMeyers et.al.Science,230:1 242（1985）参照。特異的な位置での配列の変化はまた、ヌクレアーゼ保護アッセイ例えばＲＮアーゼおよびＳ１保護または化学的切断法によっても明らかにすることができる。例えばCotton et al.Proc.Natl.Acad.Sci.,USA,85:4397-4401 （1985）参照。診断アッセイは、本明細書記載の方法によりテイルレス核ホルモン受容体遺伝子の変異を検出することにより、鬱病、不安症、攻撃性疾患、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ニューロパシー性の痛み、ＣＮＳ炎症性疾患および他の神経変性疾患のごときＣＮＳの疾病中枢神経系の疾病、目の欠陥およびＣＮＳ発達に関する問題に対する感受性の診断または決定方法を提供する。さらに、対象由来の試料の異常に上昇または低下したテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドもしくはテイルレス核ホルモン受容体ｍＲＮＡレベルを調べることを含む方法によって、鬱病、不安症、攻撃性疾患、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ニューロパシー性の痛み、ＣＮＳ炎症性疾患および他の神経変性疾患のごときＣＮＳの疾病中枢神経系の疾病、目の欠陥およびＣＮＳ発達に関する問題を診断することができる。減少または増加した発現は、ポリヌクレオチドの定量法として当該分野で周知の方法の任意の方法、例えばＰＣＲ、ＲＴ−ＰＣＲ、ＲＮアーゼ保護、ノーザンブロッティングおよびその他のハイブリダイゼーション法を用いて測定できる。宿主由来の試料中の蛋白レベル、例えばテイルレス核ホルモン受容体のレベルを決定するために用いることができるアッセイ法は、当業者に周知である。このようなアッセイ法には、ラジオイムノアッセイ、競争結合アッセイ、ウェスタンブロット分析およびＥＬＩＳＡアッセイ等がある。染色体アッセイ本発明ヌクレオチド配列は染色体の同定にも価値がある。本発明配列は、個々のヒト・染色体上の特定の位置を標的とし、これにハイブリダイゼーションしうる。本発明による重要な部分の染色体へのマッピングは、それらの配列を遺伝子関連疾病と関連づける重要な第１工程である。配列を正確な染色体位置にマッピングしたならば、染色体上の配列の物理的位置を遺伝学的地図のデータと関連づけることができる。かかるデータは、例えば、V.McKusick,Mendelian Inheritan ce in Man（Johns Hopkins University Weich Medical Libraryからオンラインで利用できる）に見いだされる。次いで、連関（物理的に近接した遺伝子の同時遺伝）の分析により、同じ染色体領域にマッピングされた遺伝子と疾病との関係を同定する。罹病個体と未罹病個体との間のｃＤＮＡまたはゲノム配列の相違も調べることができる。罹病個体のいくつかまたは全部において変異が観察されるが正常個体においては観察されない場合、その変異は疾病の原因である可能性がある。遺伝子が６ｑ２１に局在しており、ＣＮＳの疾病に関連したトランスロケーションにマッピングされる領域にあることが、染色体局在化により示された。この局在化はJacksonらにより確証された(上記文献参照)。抗体本発明のポリペプチドもしくはそれらの変種、またはそれらを発現する細胞は、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドに対して免疫特異的な抗体を産生する免疫原として用いることができる。本明細書で用いる「免疫特異的」とは、抗体が、先行技術における他の関連ポリペプチドに対してよりも、本発明ポリペプチドに対して実質的に大きいアフィニティーを有することを意味する。本発明のポリペプチドに対して生じる抗体は、ポリペプチドまたはエピトープが付いたフラグメント、アナログまたは細胞を、好ましくはヒトはでない動物に、通常の実験法を用いて投与することにより得ることができる。連続的細胞系培養により産生される抗体を提供する、当業者周知の技術を用いて、モノクローナル抗体を調製することができる。例としては、Kohler,G.and Milstein,C.,Natur e，256:495-497（1975）；Kozbor et al.Immunology Today，4:72（1983）；Col e et al.Monodonal Antibodies and Cancer Therapy,Alan R Liss,Inc.,77-96頁（1985）に記載されるような種々の技法がある。一本鎖抗体の産生のために記載された技術（米国特許第４９４６７７８号）は、本発明のポリペプチドに対する一本鎖抗体を産生するのに適用できる。また、トランスジェニックマウスまたはその他の生物、例えばその他の哺乳動物を用いて、ヒト化抗体等の抗体を発現させてもよい。上記抗体を用いて、ポリペプチドを発現するクローンを単離または同定してもよく、あるいはアフィニティークロマトグラフィーによりポリペプチドを精製してもよい。テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドに対する抗体を用いて、とりわけ、鬱病、不安症、攻撃性疾患、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ニューロパシー性の痛み、ＣＮＳ炎症性疾患および他の神経変性疾患のごときＣＮＳの疾病中枢神経系の疾病、目の欠陥およびＣＮＳ発達に関する問題を治療してもよい。ワクチン本発明の別の態様は、哺乳動物における免疫学的反応を誘導する方法に関し、該方法は、抗体および／またはＴ細胞免疫応答を生じさせるに十分なテイルレス核ホルモン受容体またはそれらのフラグメントを哺乳動物に接種して、とりわけ、鬱病、不安症、攻撃性疾患、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ニューロパシー性の痛み、ＣＮＳ炎症性疾患および他の神経変性疾患のごときＣＮＳの疾病中枢神経系の疾病、目の欠陥およびＣＮＳ発達に関する問題から該動物を防御することを特徴とする。本発明のもう１つの態様は、哺乳動物における免疫学的応答を誘導する方法に関し、該方法は、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドをインビボで発現させるベクターを介してテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドを送達し、かかる免疫学的応答を誘導して該動物を疾患から防御する抗体を生させることを特徴とする。本発明のさらなる態様は免疫学的／ワクチン処方（組成物）に関するものであり、それは、哺乳動物宿主中に導入された場合、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドに対する哺乳動物の免疫学的応答を誘導する。該組成物はテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドまたはテイルレス核ホルモン受容体遺伝子を含んでなる。ワクチン処方は、さらに適当な担体を含んでいてもよい。テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドは胃で分解される可能性があるので、好ましくは非経口投与する(皮下、筋肉内、静脈、皮内等への注射を包含)。非経口投与に適した処方は、抗酸化剤、バッファー、静細菌剤および処方を受容者の血液と等張にする溶質を含んでいてもよい水性または非水性滅菌注射用溶液；ならびに懸濁剤または増粘剤を含んでいてもよい水性または非水性滅菌懸濁液を包含する。処方を１回量または複数回量として容器に入れて提供してもよく、例えば、密封アンプルおよびバイアルに入れて提供してもよく、また使用直前に滅菌液体担体の添加のみを必要とする凍結乾燥状態として保存してもよい。またワクチン処方は、水中油系および当該分野で知られた他の系のごとき処方の免疫原性を高めるためのアジュバント系を含んでいてもよい。用量は、個々のワクチンの活性に左右され、通常の実験により容易に決定することができる。スクリーニングアッセイ本発明受容体ポリペプチドに結合してこれを活性化（アゴニスト）または阻害（アンタゴニスト）する化合物のスクリーニングプロセスにおいて本発明テイルレス核ホルモン受容体を用いてもよい。よって、本発明ポリペプチドを用いて、小型分子基質とリガンドとの結合を、例えば細胞、無細胞調製物、化学ライブラリーおよび天然産物混合物において評価してもよい。これらの基質およびリガンドは天然の基質およびリガンドであってもよく、あるいは構造または機能を模倣したものであつてもよい。Cohgan et al.,Current Protocols in Immunology 1( 2):Chapter5(1991)参照。テイルレス核ホルモン受容体蛋白は咄乳動物宿主に広く存在し、多くの生物学的機能に関与しており、多くの病気にもかかわっている。したがって、テイルレス核ホルモン受容体を刺激する化合物および薬剤、あるいはまたテイルレス核ホルモン受容体を阻害しうる化合物または薬剤を見いだすことが望まれる。一般的には、鬱病、不安症、攻撃性疾患、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ニューロパシー性の痛み、ＣＮＳ炎症性疾患および他の神経変性疾患のごときＣＮＳの疾病中枢神経系の疾病、目の欠陥およびＣＮＳ発達に関する問題のごとき状態を治療または予防するためにアゴニストが用いられる。鬱病、不安症、攻撃性疾患、卒中、多発性硬化症、アルツハイマー病、パーキンソン病、ニューロパシー性の痛み、ＣＮＳ炎症性疾患および他の神経変性疾患のごときＣＮＳの疾病中枢神経系の疾病、目の欠陥およびＣＮＳ発達に関する問題のごとき状態の種々の治療または予防のためにアンタゴニストを用いてもよい。一般的には、かかるスクリーニング手順は、細胞表面に本発明受容体ポリペプチドを発現する適当な細胞を製造することを含む。かかる細胞は、哺乳動物由来の細胞、酵母、ショウジョウバエ（Drosophila）または大腸菌（E.coh）を包含する。次いで、受容体発現細胞（または発現された受容体を含む細胞膜）を試験化合物と接触させて、結合または機能的応答の刺激もしくは阻害を観察する。アッセイの一例は、本発明テイルレス核ホルモン受容体のリガンド結合ドメインおよび別の蛋白のＤＮＡ結合ドメインを含むキメラ受容体をリポーター遺伝子アッセイにおいて用いるものであってもよい。これはシス−トランスアッセイの形態となるであろう。かかるキメラ受容体の一例は、配列番号：２のアミノ酸残基１０４から３８５までまたは８３から３８５までに対応するポリペプチドを含む。リガンド結合ドメインをイー・コリ（E.coh）ＧＳＴ−融合蛋白として直接発現させることによりアッセイを構築してもよい。これをリガンド結合アッセイまたは蛍光捕捉アッセイとして用いてもよい。そのアッセイは候補化合物の結合を試験するだけでよく、候補化合物に直接的または間接的に結合した標識を用いることにより、あるいは標識競争物質との競争を用いるアッセイにおいて、受容体を有する細胞への付着を検出する。さらに、これらのアッセイにおいて、受容体を表面に有する細胞に適する検出系を用いて、候補化合物が受容体活性化により発生するシグナルを生じるかどうかを試験してもよい。一般的には、既知アゴニスト存在下において活性化阻害剤をアッセイし、アゴニストによる活性化に対する候補化合物の存在の影響を観察する。潜在的なテイルレス核ホルモン受容体アンタゴニストの例は、抗体、あるいはいくつかの場合にはオリゴヌクレオチドまたはテイルレス核ホルモン受容体のリガンドに密接に関連した蛋白（例えば、リガンドのフラグメント、または受容体に結合するが応答を誘発せず、その結果受容体活性を妨害する小型分子）を包含する。予防および治療方法本発明は、過剰または不十分な量のテイルレス核ホルモン受容体活性に関連する異常な状態の治療方法を提供する。テイルレス核ホルモン受容体活性が過剰な場合、いくつかの方法を用いることができる。１の方法は、有効量の上記阻害剤化合物（アンタゴニスト）を医薬上許容される担体とともに対象に投与して、テイルレス核ホルモン受容体へのリガンドの結合をブロックすることあるいは第２のシグナルを阻害することにより活性化を阻害し、そのことにより異常な状態を改善することを特徴とする。もう１つのアプローチにおいて、内在性テイルレス核ホルモン受容体と競争してリガンドに結合する能力をやはり有している可溶性形態のテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドを投与してもよい。かかる競争物質の典型的な具体例はテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドのフラグメントを含む。さらにもう１つの方法において、発現ブロック法を用いて内在性テイルレス核ホルモン受容体をコードしている遺伝子の発現を阻害してもよい。知られているかかる方法には、細胞内で生成した、あるいは別個に投与されたアンチセンス配列を用いる。例えば、Oligodeoxynucleotides as Antisense Inhibitors of Gen e Expression,CRC Press,Boca Raton,FL(1988）中、OWConnor,J.Neurochem (1991)56:560を参照のこと。別法として、遺伝子とともに三重らせんを形成するオリゴヌクレオチドを提供してもよい。例えば、Lee et al.,Nucleic Acids Res (1979)6:3073;Cooney et al.,Science(1988)241:456;Dervan et al.,Science (1991)251:1360参照。これらのオリゴマーはそれ自体投与することができ、あるいは関連オリゴマーをインビボで発現させることもできる。ティルレス核ホルモン受容体およびその活性の発現不足に関連する異常な症状の治療には、いくつかの方法が用いられる。１の方法は、テイルレス核ホルモン受容体を活性化する治療上有効量の化合物（すなわち上記アゴニスト）を医薬上許容される担体とともに投与し、そのことにより異常な状態を改善することを特徴とする。別法として、遺伝子治療を用いて、対象中の細胞によるテイルレス核ホルモン受容体の細胞内での生成を有効ならしめてもよい。例えば、上記のごとく本発明ポリヌクレオチドを処理加工して複製欠損レトロウイルスベクターに入れて発現するようにしてもよい。次いで、レトロウイルス発現構築物を単離し、本発明ポリペプチドをコードしているＲＮＡを含むレトロウイルスプラスミドベクターでトランスダクションしたパッケージング細胞中に導入して、今度はパッケージング細胞が目的遺伝子を含む感染性ウイルス粒子を生成するようにしてもよい。これらのプロデューサー細胞を対象に投与して細胞をインビボで処理加工して、インビボでポリペプチドを発現するようにしてもよい。遺伝子治療の概説としては、Human Molecular Genetics,T.Strachan and A.P.Read,BIOS Scientif -ic Publishers Ltd(1986)中、第２０章、Gene Therapy and other Molecular G enetic-based Therapeutic Approaches（およびその中の引用文献）参照。もう１つのアプローチは、適当な医薬担体と混合して治療量のテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドを投与することである。処方および投与可溶性形態のテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドのごときペプチド、ならびにアゴニストおよびアンタゴニストペプチドまたは小型分子を、適当な医薬担体と組み合わせて処方してもよい。かかる処方は、治療上有効量のポリペプチドまたは化合物、および医薬上許容される担体または賦形剤を含んでなる。かかる担体としては、セイライン、緩衝化セイライン、デキストロース、水、グリセロール、エタノール、およびそれらの混合物が挙げられるが、これらに限らない。処方は投与経路に適したものとすべきであり、当業者によく知られている。さらに本発明は、上記本発明成分の１種またはそれ以上を充填した、１個またはそれ以上の容器を含んでなる医薬パックおよびキットにも関する。本発明ポリペプチドおよび他の化合物を単独で使用してもよく、あるいは治療化合物のごとき他の化合物と一緒に使用してもよい。医薬組成物の全身投与の好ましい形態は、注射、典型的には静脈注射を包含する。皮下、筋肉内または腹腔内のごとき他の注射経路を用いることもできる。全身投与のための別の手段は、胆汁酸塩またはフシジン酸または他の界面活性剤のごとき浸透剤を用いる経粘膜または経皮投与を包含する。さらに、腸溶処方またはカプセル処方がうまく処方されるならば、経口投与も可能である。これらの化合物の投与は局所的なものであってもよく、膏薬、パスタ、ゲル等の形態であってもよい。必要な用量範囲は、ペプチド、投与経路、処方の性質、対象の症状の性質、および担当医師の判断による。しかしながら、適当な用量は対象の体重１ｋｇあたり０．１ないし１００μｇの範囲である。しかしながら、種々の使用化合物および種々の投与経路のさまざまな有効性を考慮すれば、必要な用量は広範囲なものと思われる。例えば、経口投与には静脈注射よりも多い用量が必要であると考えられる。当該分野においてよく知られた最適化のための標準的な常套的実験を用いてこれらの用量の変更を行うことができる。しばしば「遺伝子治療」と称される上記治療方法において、治療に使用するポリペプチドを対象中において得ることもできる。よって、例えば、レトロウイルスプラスミドベクターを用いることにより、ポリペプチドをコードしているＤＮＡまたはＲＮＡのごときポリヌクレオチドを用いて対象由来の細胞をエクスビボで処理加工してもよい。次いで、細胞を対象に導入する。特記しないかぎり、当業者によく知られた標準的方法を用いて下記実施例を行う。実施例は本発明を例示説明するものであり、本発明を限定するものではない。実施例１イー・コリ宿主株ＳＯＬＲ（Stratagene）中のＨＧＳクローン２４３８９０をＨＧＳから得て、２５０ｍlのLuriaブロス中で増幅した。塩化セシウム遠心分離によりファージミドＤＮＡを精製し、蛍光色素ターミネーターサイクル配列決定を用いるABI Prism 377 ＤＮＡシークエンサーにより配列決定した。最初にpBlu escript II SK＋ファージミドベクター（Stratagene）中のＴ７およびＴ３プロモーターに相捕的なプライマー、次いで、得られた配列に相捕的な内部プライマーを用いて両鎖からヌクレオチド配列を得た。ＨＧＳクローン２４３８９０から失われているテイルレス核ホルモン受容体遺伝子の５’末端を、製造者の説明に従って下記の合成オリゴヌクレオチドプライマーを用いてヒト脳Marathon-Ready^TMcDNAライブラリー（Clontech）の全体からＰＣＲ増幅し、次いで、pCRScript^TMSK(+)（Stratagene）中にクローン化した。５’ＧＧＣＡＧＣＴＧＡＴＴＣＡＣＡＣＡＣＣＧＡＣＴＣＣ３’ ５’ＧＴＧＧＣＣＡＣＴＴＣＡＴＡＧＡＧＡＴＡＣＡＴＴＧＧＧ３’ 実施例２−組織分配ＲＴ−ＰＣＲおよびTaqmanシステム（Perkin Elmer/Applied Biosystems）を用いて、ＣＮＳおよび末梢組織におけるヒトのテイルレス核ホルモン受容体（ＴＬＸ）の組織分配を調べた。脳の８つの異なる領域および１４の末梢組織からＲＮＡを得た。ヒトＴＬＸ配列特異的プライマーをＲＴ−ＰＣＲ用に設計し、第２のプライマーセットをTaqman用に設計した。ＲＴ−ＰＣＲは、ＴＬＸが大動脈、心臓、膵臓、骨格筋、精巣、前立腺、肺、腎臓、骨髄、肝臓および脂肪組織には存在しないが、ＴＬＸが扁桃、尾形、海馬、視床、黒質、小脳、視床下部、前頭皮質および脊髄に存在することを示した。Taqmanのデータは、ＴＬＸが膵臓、肺、肝臓、脾臓および腸には存在しないが、ＴＬＸが扁桃、海馬、小脳、側座核、線条、果核、海馬傍回、内側前回に存在することを示した。ＴＬＸは、胃において、脳の領域よりも約２オーダー低いレベルで存在していた。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.⁷ 識別記号ＦＩテーマコート゛(参考）Ａ６１Ｋ 39/395 Ａ６１Ｋ 39/395 ＮＣ０７Ｋ 14/705 Ｃ０７Ｋ 14/705 16/28 16/28 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｃ１２Ｑ 1/02 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｇ０１Ｎ 33/15 Ｚ 33/50 33/50 ＴＰ 33/566 33/566 33/68 33/68 //(Ｃ１２Ｎ 1/21 Ｃ１２Ｒ 1:19） (72)発明者ジェンキンズ，オーウェンイギリス、シーエム19・５エイダブリュー、エセックス、ハーロウ、サード・アベニュー、ニュー・フロンティアーズ・サイエンス・パーク・サウス、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ (72)発明者モサコースカ，ダヌタ・エワ・イレーナイギリス、シーエム19・５エイダブリュー、エセックス、ハーロウ、サード・アベニュー、ニュー・フロンティアーズ・サイエンス・パーク・サウス、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ

Claims

【特許請求の範囲】１．配列番号：２またはその対応フラグメントのポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列に対して少なくとも９２％同一であるヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド、または該ヌクレオチド配列に相捕的なヌクレオチド配列。２．配列番号：２のポリペプチドまたはそのフラグメントをコードしているヌクレオチド配列をコードしている請求項１のポリヌクレオチド。３．配列番号：１に含まれるヌクレオチド配列に対して少なくとも９２％同一であるヌクレオチド配列を含む単離ポリヌクレオチド。４．ヌクレオチド配列が配列番号：１に含まれるものである請求項３のポリヌクレオチド。５．請求項３のポリヌクレオチドの少なくとも１５個の連続したヌクレオチドを含むポリヌクレオチドプローブまたはプライマー。６．適合する宿主細胞中に存在する場合に、配列番号：２のポリペプチドまたはそのフラグメントのポリペプチドをコードしているヌクレオチド配列に対して少なくとも９２％の同一性を有するテイルレス核ホルモン受容体またはそのフラグメントを生成する能力のある発現系を含むＤＮＡまたはＲＮＡ分子。７．請求項６の発現系で宿主細胞を形質転換またはトランスフェクションして、適当な培養条件下で宿主細胞がテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドまたはフラグメントを生成するようにすることを含む、テイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドまたはそのフラグメントを生成する細胞の製造方法。８．配列番号：２に含まれるアミノ酸配列に対して少なくとも９９％同一であるアミノ酸配列を含むテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドまたはそのフラグメント。９．配列番号：２のアミノ酸配列を含む請求項８のポリヌクレオチド、またはそのフラグメント。１０．請求項８のテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドに対して免疫特異的な抗体。１１．テイルレス核ホルモン受容体活性の増強を必要とする対象の治療方法であって、（ａ）該受容体に対する治療上有効量のアゴニストを対象に投与すること、および／または（ｂ）インビボで該受容体活性を生じる形態のテイルレス核ホルモン受容体ポリヌクレオチドを対象に提供することを含む方法。１２．テイルレス核ホルモン受容体活性の阻害を必要とする対象の治療方法であって、（ａ）該受容体に対する治療上有効量のアンタゴニストを投与すること、および／または（ｂ）該受容体をコードしているヌクレオチド配列の発現を阻害する核酸分子を対象に投与すること、および／または（ｃ）リガンドを求めて該受容体と競争する治療上有効量のポリペプチドを対象に投与することを含む方法。１３．対象におけるテイルレス核ホルモン受容体の発現または活性に関連した対象における疾病またはかかる疾病に対する感受性の診断方法であって、（ａ）該対象ノゲノム中の該テイルレス核ホルモン受容体をコードしているヌクレオチド配列における変異の存在または不存在を決定すること、および/または（ｂ）該対象由来の試料中のテイルレス核ホルモン受容体発現の存在または量を分析することを含む方法。１４．テイルレス核ホルモン受容体に結合する化合物の同定方法であって、（ａ）請求項１１の細胞を候補化合物と接触させること、ついで（ｂ）該細胞に結合する候補化合物の能力を評価することを含む方法。１５．候補化合物が細胞表面のテイルレス核ホルモン受容体ポリペプチドの活性化により発生するシグナルを生じさせるかどうかを決定することをさらに含み、該シグナルを生じさせる候補化合物がアゴニストであると同定される請求項１４の方法。１６．請求項１５の方法により同定されるアゴニスト。１７．テイルレス核ホルモン受容体に対する既知アゴニストに該細胞を接触させ、ついで、該候補化合物の存在下で該アゴニストにより生じたシグナルが減少するかどうかを決定することをさらに含み、該シグナルを減少させる候補化合物が該テイルレス核ホルモン受容体に対するアンタゴニストであると同定される請求項１４の方法。１８．請求項１７の方法により同定されるアンタゴニスト。