JP2000503313A

JP2000503313A - 医薬的使用

Info

Publication number: JP2000503313A
Application number: JP9525694A
Authority: JP
Inventors: クリスティー，ゲイリー; ウエストン，ビバリー・ジェーン
Original assignee: スミスクライン・ビーチャム・パブリック・リミテッド・カンパニー
Priority date: 1996-01-17
Filing date: 1997-01-14
Publication date: 2000-03-21
Also published as: EP0909169A1; GB9601042D0; WO1997025981A1

Abstract

(57)【要約】コラゲナーゼなどのマトリックス・メタロプロテアーゼのある種の阻害剤はヒト可溶性ＣＤ２３の放出の阻害能を有する。したがって、該阻害剤は過剰なｓ−ＣＤ２３が関係する症状、例えばアレルギーおよび自己免疫疾患の治療および予防にて有用である。

Description

【発明の詳細な説明】医薬的使用本発明は医薬的使用、特に自己免疫疾患およびアレルギーなどの可溶性ＣＤ２３（ｓ−ＣＤ２３）の過剰生産に付随する症状を治療するための可溶性ヒトＣＤ２３の形成の阻害剤としての使用に関する。コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびゲラチナーゼなどのマトリックス・メタロプロテアーゼが、結合組織欠損に関与していることが知られている。公知の一連のマトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤としてヒドロキサム酸、リン酸塩およびチオールの誘導体が挙げられる。国際特許出願公開番号ＷＯ９３／２００４７は、マトリックス・メタロプロテアーゼの阻害剤、特にヒドロキサム酸誘導体が、そのような組織欠損、例えば、慢性リウマチ関節炎、変形性関節炎、骨粗鬆症などのオステオペニア、歯周炎、歯肉炎、角膜潰瘍、表皮潰瘍、胃潰瘍および腫瘍転移または浸潤を含む、症状の治療または予防に有用である可能性があると開示している。ＷＯ９３／２００４７は、次の特許公報：米国特許第４５９９３６１号、ＥＰ -Ａ-０２３６８７２、ＥＰ-Ａ-０２７４４５３、ＷＯ９０／０５７１６、ＷＯ９／０５７１９、ＷＯ９１／０２７１６、ＥＰ-Ａ-０４８９５７７、ＥＰ-Ａ-０４８９５７９、ＥＰ-Ａ-０４９７１９２およびＷＯ９２／１３８３１より由来のものを含む、種々のヒドロキサム酸誘導体を開示する。ＣＤ２３(低親和性ＩｇＥレセプターＦceＲII、ブラスト２)は、ＢおよびＴリンパ球、マクロファージ、ナチュラルキラー細胞、ランゲルハンス細胞、単球および血小板を含む、種々の成熟細胞の表面上で発現する、４５ｋＤａのII型細胞膜内タンパク質である (De1espesseら、Adv Immunol,49［1991］149-191)。好酸球上にはＣＤ２３様分子もある（Grangette ら、Ｊ Immunol，143［1989］358 0-3588)。ＣＤ２３は免疫応答の調節に関連付けられている(Delespesse ら、IEu nol Rev，125［1992］77-97)。ヒトＣＤ２３は、アミノ酸の細胞内Ｎ−末端でのみ異なる、２種の特異的に調節されるアイソホーム、ａおよびｂで存在する (Yokota ら、Ce11，55［1988］611-618)。ヒトにおいて、構成性ａアイソホームはＢリンパ球でのみ見られるのに対して、ＩＬ４により誘発可能なｂアイソホームはＣＤ２３の発現能を有するすべての細胞で見られる。無傷の細胞結合ＣＤ２３（ｉ-ＣＤ２３）が、細胞表面から切断され、複雑な一連のタンパク質分解事象の結果として生成される、多数の周知の可溶性フラグメント(ｓ-ＣＤ２３)を形成することが知られているが、その機構はまだあまり解っていてない(Bourget ら、Ｊ Bjol Chem，269［1994］6927-6930)。まだ立証されていないが、これらのタンパク質分解事象の主な可溶性フラグメント（分子量３７、３３，２９および２５ｋＤａ）は、そのすべてがｉ−ＣＤ２３と共通のＣ−末端レクチン領域を保持しており、その事象は最初の３７ｋＤａフラグメントの形成を介して連続的に起こると仮定されている（Letellier ら、J Exp Med ，172[1990]693-700)。別の細胞内切断経路で、ｉ-ＣＤ２３とＣ−末端領域にて異なる安定した１６ｋＤａフラグメントが得られる（Grenier-Brosetteら、Eur J Immunol,22［1992］1573-1577)。いくつかの活性はヒトにおける膜結合ｉ-ＣＤ２３に起因するものであり、そのすべての活性がＩｇＥ調節にて役割を果たすことがわかっている。個々の活性として:ａ）抗原表示、ｂ）ＩｇＥ介在の好酸球細胞毒性、ｃ）Ｂ細胞のリンパ節および脾臓の胚中心へのホーミング、およびｄ）ＩｇＥ合成のダウンレギュレーションが挙げられる(Delespesseら、Adv ImmEuno1,49，［1991］149-191)。３つの高分子量の可溶性CＤ２３フラグメント（分子量３７、３３および２９ｋＤａ）は多機能性サイトカイン特性を有し、ＩｇＥ産生にて主な役割を果たすと思われる。かくして、ｓＣＤ２３の過度の形成は、ＩｇＥの生産過剰、すなわち、外因性喘息、鼻炎、アレルギー性結膜炎、湿疹、アトピー性皮膚炎およびアナフィラキシーなどのアレルギー疾患の顕著な特徴に関連付けられる(Sutton および Gou1d、Nature,366，［1993］421-428)。ｓ−ＣＤ２３が原因の他の生物学的活性として、Ｂ細胞の増殖を刺激すること、メディエーターの単球からの放出を誘発することが挙げられる。かくして、高レベルのｓ−ＣＤ２３が、Ｂ−慢性リンパ性白血病の患者の血清中で観察され(Sarfatiら、B1ood,71[1988]94-98)、慢性リウマチ関節炎の患者の滑液中で観察される（Chomarat ら、Arthritis and Rheumatism，36[1993 ］234-242)。ＣＤ２３のこれらの特性のため、ｓ-ＣＤ２３の形成を阻害する化合物は、ａ）Ｂ細胞の細胞表面にあるｉ−ＣＤ２３のレベルを維持することによりＩｇＥ合成の負のフィードバック阻害を強化し、ｂ）ｓ−ＣＤ２３の高分子量（分子量３７、３３および２９Ｄａ）の可溶性フラグメントの免疫刺激性サイトカイン活性を阻害する、二面的な作用を有するはずである。今回、意外にも、マトリックス・メタロプロテアーゼ（例えば、コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびゲラチナーゼ）の作用を阻害する化合物が、哺乳動物細胞培養系にトランスフェクトされたヒト可溶性ＣＤ２３の放出の効果的な阻害剤であることが見出された。また、そのような化合物がＩＬ４に応答してヒト末梢血液単核細胞によるＩｇＥの形成を阻害し、ＣＤ４０に対する抗体による刺激を阻害することも示されている。したがって、マトリックス・メタロプテアーゼの阻害剤は、ｓ−ＣＤ２３の過剰生産が関連するアレルギーおよび自己免疫疾患などの障害の治療または予防に有用であろう。既知の一連のマトリックス・プロテアーゼ阻害剤として、ＣＤ２３タンパク質分解作用を阻害することがわかっている、ヒドロキサム酸、リン酸およびチオールの誘導体が挙げられる。本発明は、ｓ−ＣＤ２３の過剰生産が関連するアレルギーおよび自己免疫疾患などの障害を治療または予防するための医薬の製造における、マトリックス・メタロプロテアーゼのある種の阻害剤の使用を提供するものである。さらなる態様において、本発明は、ｓ−ＣＤ２３の過剰生産が関連するアレルギーおよび自己免疫疾患などの障害の治療または予防方法であって、マトリックス・メタロプロテアーゼのある種の阻害剤を、その治療または予防を必要とするヒトまたはヒト以外の哺乳動物に投与することからなる方法を提供する。本発明において有用なマトリックス・メタロプロテアーゼを表に示す。表に列挙した特許公報の内容を、その公報に開示されている実施例を含め、出典明示により本明細書の一部とする。前記したマトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤の医薬上許容される塩、溶媒和物および他の医薬上許容される誘導体も本発明に含まれることは理解されるであろう。本発明において言及するマトリックス・メタロプロテアーゼは、立体異性体の形態を含め、数種類の異なる異性体の形態にて存在してもよい。個々の化合物について特に断らない限り、すべての異性体は、立体異性体およびラセミ混合物などの異性体の混合物を含め、本発明の範囲に含まれる。本発明のマトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤の異性体は、立体異性体を含め、かかる異性体の混合物として、または個々の異性体として調製できる。個々の異性体はいずれか適当な方法により調製でき、例えば、個々の立体異性体は、キラル基質から出発する立体特異的化学合成操作によりまたはエナンチオマーの混合物を公知方法により分離することにより調製することができる。マトリックス・メタロプロテアーゼは実質的に純粋な形態にて単離されることが好ましい。本明細書にて用いる場合、「マトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤」なる語およびその等価なる語は、結合組織マトリックスの成分を分解する能力を有する一連の亜鉛およびカルシウム依存性エンドペプチダーゼ（マトリックス・メタロプロテアーゼ）の構成員を阻害する化合物を意味する。マトリックス・メタロプロテアーゼおよびその阻害は、とりわけ、Hooper、FEBS Letters 1994,354,1- 6;Gordon ら、Clinical and Experimental Rheumatology 1993，11(Suppl．8),S 91-S94;Woessner、FASEB 1991,5,2145-2154;およびBirkedal-Hansen、Critical Re views in 0ral Biology and Medicine 1993,4(2)，197-250にて検討されている。コラゲナーゼ、ストロメリシンおよびゲラチナーゼの阻害についてのアッセイは、各々、ＷＯ９０／０５７１９（６７頁）、ＷＯ９０／０５７１９（６８頁）およびＥＰ−Ａ−０４８９５７７（２５−２６頁）に記載されている。本明細書にて示すように、マトリックス・メタロプロテアーゼ阻害剤などの可溶性ヒトＣＤ２３の形成についての阻害剤は、有用な医薬特性を有する。好ましくは、活性な化合物を医薬上許容される組成物として投与する。該組成物は経口投与に適していることが好ましい。しかし、該組成物は、気道障害を治療するために、例えば、スプレー、エアロゾルまたは他の慣用的な吸入方法の形態にて；または心臓疾患を患っている患者のために、非経口投与の形態にて投与する他の方法に適していてもよい。他の投与方法として、舌下または経皮的投与が挙げられる。組成物は、錠剤、カプセル、散剤、顆粒、ロゼンジ、坐剤、復元可能な散剤または液体製剤、例えば経口または滅菌非経口溶液または懸濁液の形態であってもよい。投与に一貫性をもたすために、本発明の組成物は単位用量の形態であることが好ましい。経口投与の単位投与形は錠剤およびカプセルであってもよく、結合剤、例えばシロップ、アカシア、ゼラチン、ソルビトール、トラガカントまたはポリビニルピロリドン；充填剤、例えばラクトース、ショ糖、トウモロコシ澱粉、リン酸カルシウム、ソルビトールまたはグリシン；錠剤化滑沢剤、例えばステアリン酸マグネシウム；崩壊剤、例えば澱粉、ポリビニルピロリドン、澱粉グリコール酸ナトリウムまたは微結晶セルロース；または医薬上許容される湿潤剤、例えばラウリル硫酸ナトリウムなどの通常の賦形剤を含有してもよい。固形経口用組成物は、通常の混合、充填または錠剤化方法により調製することができる。繰り返し混合操作を用いて、活性剤を多量の充填剤を用いる組成物全体に分配させることができる。そのような操作は、もちろん、当該分野にて慣用的である。錠剤は、製薬慣習に周知の方法に従って、特に腸溶性コーティング剤で被覆してもよい。経口用液体製剤は、例えば、エマルジョン、シロップまたはエリキシルの形態であってもよく、あるいは使用前に水または他の適当なビヒクルで復元する乾燥品として提供してもよい。そのような液体製剤は、沈殿防止剤、例えばソルビトール、シロップ、メチルセルロース、ゼラチン、ヒドロキシエチルセルロース、カルボキシメチルセルロース、ステアリン酸アルミニウムゲル、硬化食用脂；乳化剤、例えばレシチン、ソルビタンモノオレエートまたはアカシア；非水性ビヒクル（食用油を含んでいてもよい）、例えばアーモンド油、分別ココヤシ油、グリセリン、プロピレングリコールまたはエチルアルコールのエステルなどの油状エステル；保存剤、例えばｐ−ヒドロキシ安息香酸メチルまたはプロピルあるいはソルビン酸；および要すれば、通常のフレーバーまたは着色剤などの通常の添加剤を含有してもよい。非経口投与の場合、化合物と滅菌ビヒクルを用いて流体単位投与形を調製し、使用する濃度に応じて、ビヒクルに懸濁させるかまたは溶解させることができる。溶液を調製するにおいて、化合物を注射用水に溶かし、滅菌濾過し、適当なバイアルまたはアンプルに充填して密封することができる。有利には、局所麻酔薬、保存剤および緩衝剤などのアジュバントをビヒクルに溶かすことができる。安定性を高めるために、組成物をバイアルに充填した後に凍結し、真空下で水を除去することができる。非経口懸濁液は、化合物をビヒクルに溶かす代わりに懸濁させること、滅菌処理を濾過により行うことができないことを除いて、実質的に同じ操作にて調製する。化合物は、滅菌ビヒクルに懸濁させる前に酸化エチレンに曝すことにより滅菌処理することができる。有利には、界面活性剤または湿潤剤を組成物に配合し、化合物の均一な分散を容易にする。本発明の組成物はまた、適当には、嗅剤または噴霧器用のエアロゾルもしくは溶液として、あるいは通気用の微細粉末として、単独でまたはラクトースなどの不活性担体と組み合わせて、気道に投与するように付与することができる。そのような場合、活性な化合物の粒子は、径が５０ミクロン以下、好ましくは１０ミクロン以下、例えば１−５０ミクロン、１−１０ミクロンまたは１−５ミクロンの範囲の径を有する。適当ならば、少量の他の抗喘息薬および気管支拡張剤、例えば、イソプレナリン、イソエタリン、サルブタモール、フェニレフリンおよびエフェドリンなどの交感神経興奮作用性アミン；テオフィリンおよびアミノフィリンなどのキサンチン誘導体；およびプレドニソロンなどのコルチコステロイドおよびＡＣＴＨなどの副腎刺激剤が含まれていてもよい。組成物は、投与方法に応じて、０．１ないし９９重量％、好ましくは１０−６６重量％の活性物質を含有してもよい。吸入投与の場合の好ましい範囲は、１０ −９９％、特に６０−９９％、例えば９０、９５または９９％である。微細粉末処方は、適当には、計量した用量のエアロゾルにてまたは適当な呼吸活性化装置を用いて投与することができる。適当な計量した用量のエアロゾル処方は、通常の噴射剤、エタノールなどの共溶媒、オレイルアルコールなどの界面活性剤、オレイルアルコールなどの滑沢剤、硫酸カルシウムなどの乾燥剤および塩化ナトリウムなどの比重調節剤を有してなる。噴霧器に適する溶液は、標準的噴霧装置で用いるための、所望により、例えばｐＨ４−７に緩衝化されていてもよく、２０ｍｇ／ｍｌまでの、より一般には０．１ないし１０ｍｇ／ｍｌの化合物を含有する、滅菌等張溶液である。有効量は、本発明の化合物の相対的効能、治療すべき障害の重度および患者の体重に依存するであろう。適当には、単位投与形の本発明の組成物は、０．１ないし１０００ｍｇの、より一般には、１ないし５００ｍｇ、例えば、１ないし２５または５ないし５００ｍｇの本発明の化合物（吸入では、０．００１ないし１０ｍｇ）を含有する。かかる組成物を、一日に１ないし６回、より一般には一日に２ないし４回、７０ｋｇの成人で一日の用量が１ｍｇないし１ｇ、さらには５ないし５００ｍｇであるように投与してもよい。この用量は、約１.４ｘ１０^-2 ｍｇ／ｋｇ／日ないし１４ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にあり、さらには約７ｘ１０^-2 ｍｇ／ｋｇ／日ないし７ｍｇ／ｋｇ／日の範囲にある。生物学的試験方法操作１: 試験化合物の可溶性ＣＤ２３の放出を阻害する能力を以下の方法を用いて試験した。ＲＰＭＩ８８６６細胞膜ＣＤ２３切断活性アッセイ：高レベルのＣＤ２３を発現するＲＰＭＩ８８６６細胞、ヒトEpstein-Barrウイルス形質転換Ｂ−細胞系（Sarfati ら、Immunology 60［1987］539-547）からの原形質膜を水性抽出法を用いて精製する。均質化緩衝液（20mM HE P ESpH7.4, 150 nM NaCl，1.5 mM MgCl2，1 mM DTT）に再び懸濁させた細胞をParrボンベでのＮ₂キャビテーションにより破壊し、他の膜と混合している原形質膜フラクションを１００００ｘｇで遠心分離に付すことにより回収する。比重の小さいペレットを１−３ｇの湿った細胞当たり２ｍlの０．２Ｍリン酸カリウム（ｐＨ７．２）に再び懸濁させ、核ペレットを捨てる。その膜を、膜タンパク質１０−１５ｍｇ当たり合計１６ｇにて、０．２５Ｍシュークロースで、デキストラン５００ (６．４％ｗ／ｗ)とポリエチレングリコール(ＰＥＧ)５０００(６.４％ｗ／ｗ)( ref)の間に分配してさらに分画する［MorreおよびMorre、BioTechniques 7,946- 957(1989)]。短時間、１０００ｘｇで遠心分離に付して相を分離し、ＰＥＧ相（上部）を収集し、２０ｍＭリン酸カリウム緩衝液（ｐＨ７．４）で３ないし５倍に希釈し、１０００００ｘｇで遠心分離に付し、その相中の膜を回収する。ぺレットを再びリン酸緩衝化セイラインに懸濁させる。それは３ないし４倍豊富な原形質膜ならびに他の細胞膜（例えば、リソソーム、ゴルジ(Golgi)）を有している。膜をアリコートし、−８０℃で貯蔵する。６．６％デキストラン／ＰＥＧで分画し、１０倍豊富な原形質膜を得る。分画した膜を３７℃で４時間までインキュベートし、ＣＤ２３のフラグメントを得、アッセイをＰ３０９９４の調製例１（５μＭ）でクエンチした後、それを０．２ミクロンのDuraporeフィルタープレート（Millpore）で濾過して膜から分離する。膜より分離したｓＣＤ２３を、The Binding Site（バーミンガム、ＵＫ）からのＥＩＡキットまたはサンドウィッチＥＩＡにて捕獲抗体としてＭＨＭ６抗-ＣＤ２３ｍＡｂ[Roweら、Int．J．Cancer，29，373-382(1982)]もしくは他の抗-ＣＤ２３ｍＡｂを利用する同様のキットを用いて測定する。総容量５０μ ｌのリン酸塩緩衝化セイライン中、０．５μｇ膜タンパク質を用いて製造した可溶性ＣＤ２３の量をＥＩＡで測定し、種々の濃度の阻害剤の存在下で測定した量と比較する。阻害剤を水またはジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）の溶液に調製する。最終のＤＭＳＯ濃度は最大２％である。ＩＣ５０を、ｓＣＤ２３の産生の５０％阻害が阻害剤不在の下でインキュベートされた対照との間でsＣＤ２３の相違に関連して観察される場合の濃度として曲線適合操作により決定する。操作 2: 試験化合物のインビトロにおけるヒトＩｇＥの形成を阻害する能力を以下の操作を用いて試験した。ヒト末梢血液単核細胞を、Ficoll-Paque（Pharmacia）で遠心分離に付すことにより分離した。細胞を、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、５０μＭ２−メルカプトエタノールおよび５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン（ＴＣＭ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地に１．２５ｘ１０⁶細胞／ｍｌの濃度で懸濁させた。８００μｌの細胞懸濁液を４８ウェルプレートのウェルにアリコートした。１００μｌのＴＣＭまたはＩＬ４を５００ｎｇ／ｍｌで適当なウェルに４重試験にて添加し、つづいて１００μｌのＴＣＭまたは１０ｘ最終濃度の試験化合物を添加した。試験化合物は１０^-2Ｍのストック希釈度でジメチルスルホキシド（ＤＭＳ０）に溶解されており、前記では、ＴＣＭ１００中で１に希釈する。プレートを９５％空気／５％ＣＯ₂の加湿したインキュベーター中、３７℃で１２日間インキュベートする。培養期間の最後に、上澄をウェルより取り出して遠心分離（２００ｘｇ、１０分間）に付し、非粘着細胞を取り出した。トリパンブルー色素排除試験により評価した場合、毒性はなかった。上澄中のＩｇＥ濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。操作３試験化合物のインビトロにおけるヒトＩｇＥの形成を阻害する能力を以下の操作を用いて試験した。ヒト扁桃Ｂリンパ球を、１０％ウシ胎児血清、２ｍＭグルタミン、５０μＭ２−メルカプトエタノールおよび５０μｇ／ｍｌのゲンタマイシン（ＴＣＭ）を含有するＲＰＭＩ１６４０培地に１．２５ｘ１０⁶細胞／ｍｌの濃度で懸濁させた。８００μｌの細胞懸濁液を４８ウェルプレートのウェルにアリコートした。１００μｌのＴＣＭまたはＩＬ４を１００ｎｇ／ｍｌで、およびＣＤ４０に対する抗体を１０μｇ／ｍｌで適当なウェルに４重試験にて添加し、つづいて１００μｌのＴＣＭまたは１０ｘ最終濃度の試験化合物を添加した。試験化合物はストック希釈度１０^-2Ｍでジメチルスルホキシド（ＤＭＳＯ）に溶解されており、前記では、ＴＣＭ１００中で１に希釈する。プレートを９５％空気/５％ＣＯ₂の加湿したインキュベーター中、３７℃で１１日間インキュベートする。培養期間の最後に、上澄をウェルより取り出して遠心分離（２００ｘｇ、１０分間）に付し、非粘着細胞を取り出した。トリパン色素排除試験による評価によれば、毒性はなかった。上澄中のＩｇＥ濃度をＥＬＩＳＡにより測定した。

───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (72)発明者ウエストン，ビバリー・ジェーンイギリス、アールエイチ３・７エイジェイ、サリー、ベッチワース、ブロッカム・パーク、スミスクライン・ビーチャム・ファーマシューティカルズ

Claims

【特許請求の範囲】１．可溶性ＣＤ２３（ｓ−ＣＤ２３）の過剰生産が関与する障害の治療または予防にて用いるための医薬の製造におけるヒトｓ−ＣＤ２３の形成の阻害剤の使用であって、その阻害剤が表に関連して前記した化合物であることを特徴とする使用。２．アレルギーまたは自己免疫疾患の治療または予防にて用いるための医薬の製造における請求項１記載の使用。３．ｓ−ＣＤ２３の過剰生産が関与する障害の治療または予防方法であって、有効量のヒト可溶性ＣＤ２３の形成の阻害剤をヒトまたはヒト以外の動物に投与することからなり、その阻害剤が表に関連して前記した化合物であることを特徴とする方法。４．ｓ−ＣＤ２３の過剰生産が関与する障害を治療または予防するための医薬組成物であって、ヒト可溶性ＣＤ２３の形成の阻害剤を有し、その阻害剤が表に関連して前記した化合物であることを特徴とする医薬組成物。５．さらに、医薬上許容される担体を有してなる請求項４記載の医薬組成物。６．アレルギーまたは自己免疫疾患の治療または予防にて用いるための請求項４または５記載の医薬組成物。