JP2000032987A - Ｄｎａ - Google Patents
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- JP2000032987A JP2000032987A JP10201651A JP20165198A JP2000032987A JP 2000032987 A JP2000032987 A JP 2000032987A JP 10201651 A JP10201651 A JP 10201651A JP 20165198 A JP20165198 A JP 20165198A JP 2000032987 A JP2000032987 A JP 2000032987A
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- JP
- Japan
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- dna
- peptide
- gene
- vector
- recombinant dna
- Prior art date
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- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
(57)【要約】 （修正有）
【課題】 ペプチドを大量にかつ経済的に生産するた
め、さらに遺伝子治療に有用な、選択的に特定の臓器あ
るいは組織において強力なプロモーター活性を有するＤ
ＮＡを提供する。 【解決手段】 配列表の配列番号１で表わされるＤＮ
Ａ、その一部分、配列表の配列番号１で表わされるＤＮ
ＡにハイブリダイズするＤＮＡおよびハイブリダイズす
るＤＮＡの一部分。
め、さらに遺伝子治療に有用な、選択的に特定の臓器あ
るいは組織において強力なプロモーター活性を有するＤ
ＮＡを提供する。 【解決手段】 配列表の配列番号１で表わされるＤＮ
Ａ、その一部分、配列表の配列番号１で表わされるＤＮ
ＡにハイブリダイズするＤＮＡおよびハイブリダイズす
るＤＮＡの一部分。
Description
【０００１】
【発明の属する技術分野】本発明は遺伝子発現を目的と
して、転写効率が高く（強力な遺伝子発現能を有し）、
かつ選択的に特定の臓器あるいは組織においてプロモー
ター活性を示すＤＮＡに関する。
して、転写効率が高く（強力な遺伝子発現能を有し）、
かつ選択的に特定の臓器あるいは組織においてプロモー
ター活性を示すＤＮＡに関する。
【０００２】
【従来の技術】プロモーターとは、ＤＮＡを鋳型にして
ｍＲＮＡの転写を開始するＤＮＡ上の特定塩基配列とし
て知られている。また、ｍＲＮＡの合成酵素であるＲＮ
Ａポリメラーゼは、プロモーターを認識してｍＲＮＡの
合成をおこなう。プロモーターは転写の効率を決定して
おり、強いプロモーターの下流にある遺伝子のｍＲＮＡ
は大量に合成され、その結果、その遺伝子の遺伝子産物
も大量に生産される。
ｍＲＮＡの転写を開始するＤＮＡ上の特定塩基配列とし
て知られている。また、ｍＲＮＡの合成酵素であるＲＮ
Ａポリメラーゼは、プロモーターを認識してｍＲＮＡの
合成をおこなう。プロモーターは転写の効率を決定して
おり、強いプロモーターの下流にある遺伝子のｍＲＮＡ
は大量に合成され、その結果、その遺伝子の遺伝子産物
も大量に生産される。
【０００３】したがって、強力な活性を有するプロモー
ターを利用することは、遺伝子工学的手法によりペプチ
ドを大量にかつ経済的に生産するのに適している。さら
に、選択的に特定の臓器あるいは組織において活性を示
すプロモーターを利用することで、特定の臓器あるいは
組織においてペプチドを生産することができ、経済的で
ある。
ターを利用することは、遺伝子工学的手法によりペプチ
ドを大量にかつ経済的に生産するのに適している。さら
に、選択的に特定の臓器あるいは組織において活性を示
すプロモーターを利用することで、特定の臓器あるいは
組織においてペプチドを生産することができ、経済的で
ある。
【０００４】また、選択的に特定の臓器あるいは組織に
おいて活性を示すプロモーターは、遺伝的に特定の臓器
あるいは組織において生理活性物質が全く産生されな
い、もしくは産生されても、その産生が異常に低い遺伝
病の治療や腫瘍、がん等の治療に効果的に利用できるな
どの面から、遺伝子治療においても効果が期待される。
おいて活性を示すプロモーターは、遺伝的に特定の臓器
あるいは組織において生理活性物質が全く産生されな
い、もしくは産生されても、その産生が異常に低い遺伝
病の治療や腫瘍、がん等の治療に効果的に利用できるな
どの面から、遺伝子治療においても効果が期待される。
【０００５】
【発明が解決しようとする課題】本発明の課題は、ペプ
チドを大量にかつ経済的に生産するため、さらに遺伝子
治療に有用な、選択的に特定の臓器あるいは組織におい
て強力なプロモーター活性を有するＤＮＡを提供するこ
とである。
チドを大量にかつ経済的に生産するため、さらに遺伝子
治療に有用な、選択的に特定の臓器あるいは組織におい
て強力なプロモーター活性を有するＤＮＡを提供するこ
とである。
【０００６】
【課題を解決するための手段】本発明者らは、上記課題
を解決するために鋭意検討した結果、あるＤＮＡが選択
的に特定の臓器あるいは組織において強力なプロモータ
ー活性を有することを見いだした。
を解決するために鋭意検討した結果、あるＤＮＡが選択
的に特定の臓器あるいは組織において強力なプロモータ
ー活性を有することを見いだした。
【０００７】
【発明の実施の形態】すなわち、本発明は配列表の配列
番号１で表わされるＤＮＡに関する。以下に、本発明に
ついて説明する。
番号１で表わされるＤＮＡに関する。以下に、本発明に
ついて説明する。
【０００８】本発明の配列表の配列番号１で表わされる
ＤＮＡは、マウスの胚性幹細胞の染色体から遺伝子工学
的手法により分離されたものである。本発明者らは、こ
のＤＮＡが選択的に神経細胞、さらには脳においてプロ
モーター活性を有することを見いだした。プロモーター
活性を有するＤＮＡの探索は、構造遺伝子の適当な領域
を解析する方法、転写因子結合ＤＮＡ断片をプローブと
する方法、ＤＮＡ断片をランダムに解析する方法により
行われる。
ＤＮＡは、マウスの胚性幹細胞の染色体から遺伝子工学
的手法により分離されたものである。本発明者らは、こ
のＤＮＡが選択的に神経細胞、さらには脳においてプロ
モーター活性を有することを見いだした。プロモーター
活性を有するＤＮＡの探索は、構造遺伝子の適当な領域
を解析する方法、転写因子結合ＤＮＡ断片をプローブと
する方法、ＤＮＡ断片をランダムに解析する方法により
行われる。
【０００９】一般に、新規なＤＮＡが見いだされると、
当業者はそのＤＮＡの一部分または全部をプローブとし
て、ハイブリダイズするＤＮＡを種々のライブラリーを
用いて探索する。配列表の配列番号１で表わされるＤＮ
ＡにハイブリダイズするＤＮＡまたはその一部分も、プ
ロモーター活性を有することが予測される。
当業者はそのＤＮＡの一部分または全部をプローブとし
て、ハイブリダイズするＤＮＡを種々のライブラリーを
用いて探索する。配列表の配列番号１で表わされるＤＮ
ＡにハイブリダイズするＤＮＡまたはその一部分も、プ
ロモーター活性を有することが予測される。
【００１０】したがって、本発明のＤＮＡには、配列表
の配列番号１で表わされるＤＮＡのみならず、その一部
分、配列表の配列番号１で表わされるＤＮＡにハイブリ
ダイズするＤＮＡおよびハイブリダイズするＤＮＡの一
部分も含まれるものである。特に、プロモーター活性を
有するものは本発明に含まれる。
の配列番号１で表わされるＤＮＡのみならず、その一部
分、配列表の配列番号１で表わされるＤＮＡにハイブリ
ダイズするＤＮＡおよびハイブリダイズするＤＮＡの一
部分も含まれるものである。特に、プロモーター活性を
有するものは本発明に含まれる。
【００１１】ハイブリダイズするＤＮＡとは、配列表の
配列番号１で表わされるＤＮＡまたはその一部分をプロ
ーブにして、Molecular Cloning,-A laboratory manual
-,second edition, Cold Spring Harbar Laboratory Pr
ess 1989 に記載されているような一般的な条件下で、
ハイブリダイズするものをいう。ハイブリダイズの条件
は適宜検討すればよい。例えば、０．７５Ｍ ＮａＣ
ｌ、５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）、
０．２ｍＭ エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、
０．２％牛血清アルブミン、０．２％ポリビニルピロリ
ドン、０．２％Ｆｉｃｏｌｌ ４００（ファルマシア社
製）、０．１％ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、５
０μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ、６５℃、１６時間反
応させるといった条件を挙げることができるが、特にこ
の条件に限定されるべきものではない。この条件ではプ
ローブと約７０％の配列同一性を有するＤＮＡがハイブ
リダイズする。さらに、プローブと７０％配列以上の配
列同一性を有するＤＮＡを得たい場合には、ハイブリダ
イズ後の洗浄を塩濃度を下げながら、６５℃で行うこと
で得ることができる。
配列番号１で表わされるＤＮＡまたはその一部分をプロ
ーブにして、Molecular Cloning,-A laboratory manual
-,second edition, Cold Spring Harbar Laboratory Pr
ess 1989 に記載されているような一般的な条件下で、
ハイブリダイズするものをいう。ハイブリダイズの条件
は適宜検討すればよい。例えば、０．７５Ｍ ＮａＣ
ｌ、５０ｍＭ トリス−塩酸緩衝液（ｐＨ８．０）、
０．２ｍＭ エチレンジアミン四酢酸（ＥＤＴＡ）、
０．２％牛血清アルブミン、０．２％ポリビニルピロリ
ドン、０．２％Ｆｉｃｏｌｌ ４００（ファルマシア社
製）、０．１％ラウリル硫酸ナトリウム（ＳＤＳ）、５
０μｇ／ｍｌ変性サケ精子ＤＮＡ、６５℃、１６時間反
応させるといった条件を挙げることができるが、特にこ
の条件に限定されるべきものではない。この条件ではプ
ローブと約７０％の配列同一性を有するＤＮＡがハイブ
リダイズする。さらに、プローブと７０％配列以上の配
列同一性を有するＤＮＡを得たい場合には、ハイブリダ
イズ後の洗浄を塩濃度を下げながら、６５℃で行うこと
で得ることができる。
【００１２】また、本発明においてハイブリダイズする
ＤＮＡとは、配列表の配列番号１で表わされるＤＮＡの
誘導体としても表現することができる。すなわち、配列
表の配列番号１で表わされるＤＮＡに対して、少なくと
も約７０％の配列同一性を有するものであり、例えば、
ＤＮＡの配列に１つまたは２つ以上のヌクレオチドが挿
入されたもの、ＤＮＡの配列に１つまたは２つ以上のヌ
クレオチドが付加されたもの、ＤＮＡの配列の１つまた
は２つ以上のヌクレオチドを欠失させたもの、ＤＮＡの
配列の１つまたは２つ以上のヌクレオチドを置換させた
もの、さらにこれらが組合わさったものを挙げることが
できる。本発明においては、配列表の配列番号１であら
わされるＤＮＡにハイブリダイズするＤＮＡとして、８
０％以上配列同一性を有するのが好ましく、９０％以上
配列同一性を有するものがさらに好ましい。
ＤＮＡとは、配列表の配列番号１で表わされるＤＮＡの
誘導体としても表現することができる。すなわち、配列
表の配列番号１で表わされるＤＮＡに対して、少なくと
も約７０％の配列同一性を有するものであり、例えば、
ＤＮＡの配列に１つまたは２つ以上のヌクレオチドが挿
入されたもの、ＤＮＡの配列に１つまたは２つ以上のヌ
クレオチドが付加されたもの、ＤＮＡの配列の１つまた
は２つ以上のヌクレオチドを欠失させたもの、ＤＮＡの
配列の１つまたは２つ以上のヌクレオチドを置換させた
もの、さらにこれらが組合わさったものを挙げることが
できる。本発明においては、配列表の配列番号１であら
わされるＤＮＡにハイブリダイズするＤＮＡとして、８
０％以上配列同一性を有するのが好ましく、９０％以上
配列同一性を有するものがさらに好ましい。
【００１３】本発明のＤＮＡは、公知の方法によって合
成することにより製造することもできる。
成することにより製造することもできる。
【００１４】ペプチドを大量にかつ経済的に生産する、
または遺伝子治療を行うためには、本発明のＤＮＡに、
発現させたいペプチドをコードする構造遺伝子を、構造
遺伝子が正しく転写される方向に連結されている組換え
ＤＮＡを構築する必要がある。
または遺伝子治療を行うためには、本発明のＤＮＡに、
発現させたいペプチドをコードする構造遺伝子を、構造
遺伝子が正しく転写される方向に連結されている組換え
ＤＮＡを構築する必要がある。
【００１５】組換えＤＮＡには、本発明のＤＮＡの上流
または下流の適当な箇所に、さらにエンハンサーやター
ミネーター等の転写調節領域を連結することも可能であ
る。なお、組換えＤＮＡは公知の製造方法により製する
ことができる。
または下流の適当な箇所に、さらにエンハンサーやター
ミネーター等の転写調節領域を連結することも可能であ
る。なお、組換えＤＮＡは公知の製造方法により製する
ことができる。
【００１６】プロモーター活性を有する本発明のＤＮＡ
に連結される発現させたいペプチドをコードする構造遺
伝子は、特に限定されるべきものではないが、例えば、
生理活性物質をコードする遺伝子、遺伝子転写の機能解
析に用いられる遺伝子等を挙げることができる。これら
構造遺伝子の１種または複数は、プロモーター活性を有
する本発明のＤＮＡに正しく転写される方向に連結すれ
ばよい。
に連結される発現させたいペプチドをコードする構造遺
伝子は、特に限定されるべきものではないが、例えば、
生理活性物質をコードする遺伝子、遺伝子転写の機能解
析に用いられる遺伝子等を挙げることができる。これら
構造遺伝子の１種または複数は、プロモーター活性を有
する本発明のＤＮＡに正しく転写される方向に連結すれ
ばよい。
【００１７】生理活性物質をコードする遺伝子として
は、例えば、プロスタグランジン、プロスタサイクリ
ン、トロンボキサン、ロイコトリエン、インターフェロ
ン、インターロイキン、組織プラスミノーゲンアクチベ
ーター（ｔ−ＰＡ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、上皮増
殖因子（ＥＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳性利尿
ペプチド（ＢＮＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）
およびエリスロポエチン等をコードする遺伝子を挙げる
ことができるが、特にこれらのものに限定されるべきも
のではない。遺伝子転写の機能解析に用いられる遺伝子
としては、例えば、クロラムフェニコールアセチルトラ
ンスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子、アルカリフォスファ
ターゼ遺伝子、β−ガラクトシダーゼ遺伝子およびルシ
フェラーゼ遺伝子等を挙げることができるが、特にこれ
らのものに限定されるべきものではない。
は、例えば、プロスタグランジン、プロスタサイクリ
ン、トロンボキサン、ロイコトリエン、インターフェロ
ン、インターロイキン、組織プラスミノーゲンアクチベ
ーター（ｔ−ＰＡ）、腫瘍壊死因子（ＴＮＦ）、上皮増
殖因子（ＥＧＦ）、神経成長因子（ＮＧＦ）、脳性利尿
ペプチド（ＢＮＰ）、脳由来神経栄養因子（ＢＤＮＦ）
およびエリスロポエチン等をコードする遺伝子を挙げる
ことができるが、特にこれらのものに限定されるべきも
のではない。遺伝子転写の機能解析に用いられる遺伝子
としては、例えば、クロラムフェニコールアセチルトラ
ンスフェラーゼ（ＣＡＴ）遺伝子、アルカリフォスファ
ターゼ遺伝子、β−ガラクトシダーゼ遺伝子およびルシ
フェラーゼ遺伝子等を挙げることができるが、特にこれ
らのものに限定されるべきものではない。
【００１８】発現させたいペプチドを得るためには、組
換えＤＮＡをベクターに導入し、次いで、組換えＤＮＡ
を導入したベクターを用いて、宿主を形質転換すればよ
い。宿主としては、例えば、ヒト、ウシ、マウス、ラッ
ト、カイコ等の動物や昆虫の細胞等を挙げることができ
る。
換えＤＮＡをベクターに導入し、次いで、組換えＤＮＡ
を導入したベクターを用いて、宿主を形質転換すればよ
い。宿主としては、例えば、ヒト、ウシ、マウス、ラッ
ト、カイコ等の動物や昆虫の細胞等を挙げることができ
る。
【００１９】なお、宿主を形質転換するためのベクター
は、宿主−ベクター系を考慮して、選択することが必要
である。例えば、動物細胞用のベクターとしては、特に
限定されるべきものではないが、レトロウイルスやｐＭ
ＡＭ（クローンテック社製）等のプラスミド等を挙げる
ことができる。なお、組換えＤＮＡを導入したベクター
は公知の製造方法により製することができる。
は、宿主−ベクター系を考慮して、選択することが必要
である。例えば、動物細胞用のベクターとしては、特に
限定されるべきものではないが、レトロウイルスやｐＭ
ＡＭ（クローンテック社製）等のプラスミド等を挙げる
ことができる。なお、組換えＤＮＡを導入したベクター
は公知の製造方法により製することができる。
【００２０】組換えＤＮＡを導入したベクターを用い
て、宿主を形質転換することによって、構造遺伝子によ
りコードされる発現させたいペプチドを形質転換体にお
いて発現させることができる。
て、宿主を形質転換することによって、構造遺伝子によ
りコードされる発現させたいペプチドを形質転換体にお
いて発現させることができる。
【００２１】ベクターを用いた宿主の形質転換は公知の
方法により行うことができる。例えば、リン酸カルシウ
ム法、エレクトロポレーション法、ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔ
ｒａｎ法、プロトプラスト法等（Molecular Cloning,-A
laboratory manual-,secondedition, Cold Spring Har
bar Laboratory Press 1989）を挙げることができる
が、特に限定されるべきものではない。また、宿主を形
質転換するには、公知の遺伝子導入用試薬と組換えＤＮ
Ａとの混合物を用いることもできる。
方法により行うことができる。例えば、リン酸カルシウ
ム法、エレクトロポレーション法、ＤＥＡＥ−Ｄｅｘｔ
ｒａｎ法、プロトプラスト法等（Molecular Cloning,-A
laboratory manual-,secondedition, Cold Spring Har
bar Laboratory Press 1989）を挙げることができる
が、特に限定されるべきものではない。また、宿主を形
質転換するには、公知の遺伝子導入用試薬と組換えＤＮ
Ａとの混合物を用いることもできる。
【００２２】発現させたいペプチドを得るには、形質転
換体を培地で培養し、培養物からペプチドを単離し、採
取すればよい。発現させたいペプチドを考慮して、培養
方法・条件等は適宜検討すればよいが、培地としては、
例えば、約５〜２０％の胎児牛血清（ＦＣＳ）を添加し
たＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地およびＲＰＭＩ１６４０培
地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）等を挙げることができ
る。
換体を培地で培養し、培養物からペプチドを単離し、採
取すればよい。発現させたいペプチドを考慮して、培養
方法・条件等は適宜検討すればよいが、培地としては、
例えば、約５〜２０％の胎児牛血清（ＦＣＳ）を添加し
たＭＥＭ培地、ＤＭＥＭ培地およびＲＰＭＩ１６４０培
地（ＧＩＢＣＯ ＢＲＬ社製）等を挙げることができ
る。
【００２３】ペプチドの単離・採取方法としては、例え
ばゲル濾過法、イオン交換クロマトグラフィー法、逆相
クロマトグラフィー法およびアフィニティークロマトグ
ラフィー法等を挙げることができるが、特に限定される
べきものではない。
ばゲル濾過法、イオン交換クロマトグラフィー法、逆相
クロマトグラフィー法およびアフィニティークロマトグ
ラフィー法等を挙げることができるが、特に限定される
べきものではない。
【００２４】また、発現させたいペプチドをコードする
構造遺伝子を含む組換えＤＮＡもしくはベクター、また
は遺伝子導入用試薬と組換えＤＮＡとの混合物用いて、
受精卵または未分化の体細胞を形質転換すると、形質転
換された動物（トランスジェニックアニマル）を作成す
ることもできる。形質転換する動物としては、ウシ、ブ
タ、ヒヒ、マウス、ラット、モルモット、イヌといった
動物を挙げることができる。
構造遺伝子を含む組換えＤＮＡもしくはベクター、また
は遺伝子導入用試薬と組換えＤＮＡとの混合物用いて、
受精卵または未分化の体細胞を形質転換すると、形質転
換された動物（トランスジェニックアニマル）を作成す
ることもできる。形質転換する動物としては、ウシ、ブ
タ、ヒヒ、マウス、ラット、モルモット、イヌといった
動物を挙げることができる。
【００２５】さらに、本発明のＤＮＡと発現させたいペ
プチドをコードする構造遺伝子が正しく転写される方向
に連結されている組換えＤＮＡ、該組換えＤＮＡを含む
ベクターなどは、ヒト等の遺伝子治療に用いることがで
きる。
プチドをコードする構造遺伝子が正しく転写される方向
に連結されている組換えＤＮＡ、該組換えＤＮＡを含む
ベクターなどは、ヒト等の遺伝子治療に用いることがで
きる。
【００２６】遺伝子治療に適した疾患としては、特に限
定すべきものではないが、例えば、遺伝的に特定の生理
活性物質が全く産生されない、あるいはその産生が異常
に低いレベルにある遺伝病、さらに腫瘍、がん等を挙げ
ることができる。
定すべきものではないが、例えば、遺伝的に特定の生理
活性物質が全く産生されない、あるいはその産生が異常
に低いレベルにある遺伝病、さらに腫瘍、がん等を挙げ
ることができる。
【００２７】遺伝的に特定の生理活性物質がまったく産
生されない、またはその産生が異常に低いレベルにある
遺伝病としては、例えば、アデノシンデアミナーゼ欠損
症、血友病Ａ、血友病Ｂ、フェニルケトン尿症、成長ホ
ルモン欠損症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、オル
ニチントランスカルバモイラーゼ欠損症、ペリツェウス
−メルバッハー病、ゲルストマン−シェトラウスラー
病、悪性過高熱、色素性網膜炎、高カリウム血症性周期
性四肢麻痺、オランダ脳アミロイドーシス、アルツハイ
マー病、網膜芽細胞腫、嚢胞性線維症、１型神経線維腫
症、およびアンチトロンビンＩＩＩ欠損症等を挙げるこ
とができる。
生されない、またはその産生が異常に低いレベルにある
遺伝病としては、例えば、アデノシンデアミナーゼ欠損
症、血友病Ａ、血友病Ｂ、フェニルケトン尿症、成長ホ
ルモン欠損症、デュシェンヌ型筋ジストロフィー、オル
ニチントランスカルバモイラーゼ欠損症、ペリツェウス
−メルバッハー病、ゲルストマン−シェトラウスラー
病、悪性過高熱、色素性網膜炎、高カリウム血症性周期
性四肢麻痺、オランダ脳アミロイドーシス、アルツハイ
マー病、網膜芽細胞腫、嚢胞性線維症、１型神経線維腫
症、およびアンチトロンビンＩＩＩ欠損症等を挙げるこ
とができる。
【００２８】これらの疾患についての遺伝子治療は、遺
伝的に欠損している遺伝子または、がん遺伝子の発現を
抑制するアンチセンスオリゴヌクレオチドを、本発明の
ＤＮＡに正しく転写される方向に連結した組換えＤＮＡ
をヒト等に投与することにより行われる。投与に際して
は、組換えＤＮＡをベクターやリポソーム、リンパ球等
に導入して行うことが好ましい。
伝的に欠損している遺伝子または、がん遺伝子の発現を
抑制するアンチセンスオリゴヌクレオチドを、本発明の
ＤＮＡに正しく転写される方向に連結した組換えＤＮＡ
をヒト等に投与することにより行われる。投与に際して
は、組換えＤＮＡをベクターやリポソーム、リンパ球等
に導入して行うことが好ましい。
【００２９】したがって、本発明の遺伝子治療用組成物
とは、組換えＤＮＡ、または組換えＤＮＡを導入したベ
クター、リポソーム、リンパ球等を含有した組成物をい
う。
とは、組換えＤＮＡ、または組換えＤＮＡを導入したベ
クター、リポソーム、リンパ球等を含有した組成物をい
う。
【００３０】なお、本発明の遺伝子治療用組成物をヒト
等に投与する方法としては、経口的または非経口的に投
与する方法が挙げられるが、非経口的に投与するのが好
ましい。また、投与量については、疾患や患者の状態等
を考慮して検討すればよい。
等に投与する方法としては、経口的または非経口的に投
与する方法が挙げられるが、非経口的に投与するのが好
ましい。また、投与量については、疾患や患者の状態等
を考慮して検討すればよい。
【００３１】経口的に投与するための製剤としては、例
えば、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、錠
剤、液剤、ドライシロップ等を挙げることができる。ま
た、非経口的に投与するための製剤としては、例えば、
注射剤、坐剤、吸入剤、点眼剤、軟膏剤、貼付剤等を挙
げることができる。
えば、丸剤、散剤、顆粒剤、細粒剤、カプセル剤、錠
剤、液剤、ドライシロップ等を挙げることができる。ま
た、非経口的に投与するための製剤としては、例えば、
注射剤、坐剤、吸入剤、点眼剤、軟膏剤、貼付剤等を挙
げることができる。
【００３２】またヒト等に投与する際には、薬理学的ま
たは製剤学的に許容し得る添加物を本発明の遺伝子治療
用組成物に添加することができる。
たは製剤学的に許容し得る添加物を本発明の遺伝子治療
用組成物に添加することができる。
【００３３】添加物としては、例えば、賦形剤、崩壊
剤、崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、等張化剤、ｐＨ調節
剤、安定化剤、着色剤等種々のものを挙げることができ
る。
剤、崩壊補助剤、結合剤、滑沢剤、等張化剤、ｐＨ調節
剤、安定化剤、着色剤等種々のものを挙げることができ
る。
【００３４】次に、本発明を実施例により説明するが、
本発明はこれに限定されるべきものではない。
本発明はこれに限定されるべきものではない。
【００３５】
【実施例】［プロモーター活性の検討］クロラムフェニ
コールアセチルトランスフェラーゼ（以下、ＣＡＴと略
す。）遺伝子の５’末端の上流に配列表１の塩基配列を
有するＤＮＡをつないだプラスミドを作製した。
コールアセチルトランスフェラーゼ（以下、ＣＡＴと略
す。）遺伝子の５’末端の上流に配列表１の塩基配列を
有するＤＮＡをつないだプラスミドを作製した。
【００３６】このプラスミド単独でトランスフェクトを
行うと、トランスフェクション効率が補正できないの
で、サイトメガロウイルスのプロモーターにβ−ガラク
トシダーゼ遺伝子をつないだプラスミド（ＣＬＯＮＴＥ
ＣＨ社、商品名：ｐＣＭＶβ）を共にトランスフェクト
した。
行うと、トランスフェクション効率が補正できないの
で、サイトメガロウイルスのプロモーターにβ−ガラク
トシダーゼ遺伝子をつないだプラスミド（ＣＬＯＮＴＥ
ＣＨ社、商品名：ｐＣＭＶβ）を共にトランスフェクト
した。
【００３７】すなわち、β−ガラクトシダーゼのアッセ
イでトランスフェクションの効率を補正し、ＣＡＴのア
ッセイで配列表１の塩基配列を有するＤＮＡのプロモー
ター活性を調べた。具体的な方法について、以下に詳述
する。
イでトランスフェクションの効率を補正し、ＣＡＴのア
ッセイで配列表１の塩基配列を有するＤＮＡのプロモー
ター活性を調べた。具体的な方法について、以下に詳述
する。
【００３８】１．ＤＮＡの調製 Analytical Biochemistry.,219,131(1994)に記載の方法
により、マウス胚性幹細胞から、染色体ＤＮＡを抽出
し、次いでこれを超音波処理して、ＤＮＡを低分子化し
た。低分子化したＤＮＡ断片をＫｌｅｎｏｗ Ｆｒａｇ
ｍｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（東洋紡績社製）で３７
℃で１時間反応させ、ＤＮＡ末端を平滑化した。
により、マウス胚性幹細胞から、染色体ＤＮＡを抽出
し、次いでこれを超音波処理して、ＤＮＡを低分子化し
た。低分子化したＤＮＡ断片をＫｌｅｎｏｗ Ｆｒａｇ
ｍｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（東洋紡績社製）で３７
℃で１時間反応させ、ＤＮＡ末端を平滑化した。
【００３９】２．ベクターＤＮＡの調製 ｐＣＡＴベクター（プロメガ社製）をＰｓｔ Ｉ（東洋
紡績社製）を用い、３７℃で２時間反応させ、ＤＮＡを
切断した。切断したＤＮＡ末端をＫｌｅｎｏｗＦｒａｇ
ｍｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（東洋紡績社製）で３７
℃で１時間反応させ、末端を平滑化した。更に、Ａｌｋ
ａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（Ｅ．ｃｏｌｉ
Ｃ７５：宝酒造社製）で６５℃で１時間反応させ、ＤＮ
Ａの５’末端のリン酸を除去した。
紡績社製）を用い、３７℃で２時間反応させ、ＤＮＡを
切断した。切断したＤＮＡ末端をＫｌｅｎｏｗＦｒａｇ
ｍｅｎｔ ＤＮＡポリメラーゼ（東洋紡績社製）で３７
℃で１時間反応させ、末端を平滑化した。更に、Ａｌｋ
ａｌｉｎｅ Ｐｈｏｓｐｈａｔａｓｅ（Ｅ．ｃｏｌｉ
Ｃ７５：宝酒造社製）で６５℃で１時間反応させ、ＤＮ
Ａの５’末端のリン酸を除去した。
【００４０】３．ＤＮＡの連結（組換えＤＮＡの構築） 上記１．で調製したＤＮＡと２．で調製したベクターＤ
ＮＡを、ＤＮＡライゲーションキット（宝酒造社製）を
用いて、両ＤＮＡを連結した。すなわち、両ＤＮＡの混
合液１溶に対し、４倍溶のＡ液（Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂ
ｕｆｆｅｒ）と１倍溶のＢ液（Ｅｎｚｙｍｅ ｓｏｌｕ
ｔｉｏｎ）を加えて、１６℃で１６時間反応させ、組換
えＤＮＡを含有するベクターを作製した。
ＮＡを、ＤＮＡライゲーションキット（宝酒造社製）を
用いて、両ＤＮＡを連結した。すなわち、両ＤＮＡの混
合液１溶に対し、４倍溶のＡ液（Ｒｅａｃｔｉｏｎ ｂ
ｕｆｆｅｒ）と１倍溶のＢ液（Ｅｎｚｙｍｅ ｓｏｌｕ
ｔｉｏｎ）を加えて、１６℃で１６時間反応させ、組換
えＤＮＡを含有するベクターを作製した。
【００４１】４．形質転換体の作製 上記３．で得た組換えＤＮＡを含有するベクターをコン
ピテント細胞（大腸菌：ＤＨ５、ＢＲＬ社製）に導入
し、形質転換を行い、形質転換体を得た。この形質転換
体はアンピシリン耐性を持つものであったので、組換え
ＤＮＡを含有するベクターであることが確認できた。
ピテント細胞（大腸菌：ＤＨ５、ＢＲＬ社製）に導入
し、形質転換を行い、形質転換体を得た。この形質転換
体はアンピシリン耐性を持つものであったので、組換え
ＤＮＡを含有するベクターであることが確認できた。
【００４２】５．プラスミドＤＮＡの抽出 各々の形質転換体から、プラスミドＤＮＡ（ＣＡＴ遺伝
子の上流に配列表１の塩基配列を有するＤＮＡをつない
だプラスミド）を抽出し、Ｑｉａｇｅｎ社のＱｉａｇｅ
ｎ ｔｉｐ（商品名）で精製したものを以下の操作に使
用した。
子の上流に配列表１の塩基配列を有するＤＮＡをつない
だプラスミド）を抽出し、Ｑｉａｇｅｎ社のＱｉａｇｅ
ｎ ｔｉｐ（商品名）で精製したものを以下の操作に使
用した。
【００４３】６．トランスフェクション ＧＩＢＣＯＢＲＬ社の合成ポリカチオン試薬である、Ｌ
ＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商品名）およびＬＩＰＯＦ
ＥＣＴＩＮ（商品名）を使用し、試薬に添付のマニュア
ルにしたがって、トランスフェクションを行った。 （方法）エタノール沈殿しておいたＤＮＡを、クリーン
ベンチ内で血清を添加していない培地に溶かし、必要な
濃度（０〜５μｇＤＮＡ／１００μｌ無血清培地）のＤ
ＮＡ溶液を調製した。あらかじめ、ポリスチレンチュー
ブに、調製したＤＮＡ溶液中のＤＮＡ量に応じて、合成
ポリカチオン試薬（ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥの場合
は、６μｌ／１μｇＤＮＡ、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮの場
合は、４μｌ／１μｇＤＮＡ）を無血清培地１００μｌ
に攪拌しておいたものに、調製したＤＮＡ溶液１００μ
ｌを混合した。これを室温で３０分間静置し、ＤＮＡと
カチオンのコンプレックス２種を形成させた。
ＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥ（商品名）およびＬＩＰＯＦ
ＥＣＴＩＮ（商品名）を使用し、試薬に添付のマニュア
ルにしたがって、トランスフェクションを行った。 （方法）エタノール沈殿しておいたＤＮＡを、クリーン
ベンチ内で血清を添加していない培地に溶かし、必要な
濃度（０〜５μｇＤＮＡ／１００μｌ無血清培地）のＤ
ＮＡ溶液を調製した。あらかじめ、ポリスチレンチュー
ブに、調製したＤＮＡ溶液中のＤＮＡ量に応じて、合成
ポリカチオン試薬（ＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩＮＥの場合
は、６μｌ／１μｇＤＮＡ、ＬＩＰＯＦＥＣＴＩＮの場
合は、４μｌ／１μｇＤＮＡ）を無血清培地１００μｌ
に攪拌しておいたものに、調製したＤＮＡ溶液１００μ
ｌを混合した。これを室温で３０分間静置し、ＤＮＡと
カチオンのコンプレックス２種を形成させた。
【００４４】前日に新たにうえ継いでおいたＰＣ１２Ｄ
細胞（ラット副腎由来の褐色芽細胞種である、ＰＣ１２
細胞の亜種。神経様細胞。）およびＬ細胞（マウス皮下
組織由来）それぞれ７×１０５ｃｅｌｌｓ／２ｍｌ 増
殖培地、３．５ｃｍディッシュを、３７℃に保温してお
いた２ｍｌの無血清培地で２回洗浄した。ＤＮＡとカチ
オンのコンプレックス２００μｌに、無血清培地８００
μｌを混合し、計１ｍｌとした後、洗浄した細胞に添加
し、５％ＣＯ２存在下、３７℃で５時間インキュベート
した。
細胞（ラット副腎由来の褐色芽細胞種である、ＰＣ１２
細胞の亜種。神経様細胞。）およびＬ細胞（マウス皮下
組織由来）それぞれ７×１０５ｃｅｌｌｓ／２ｍｌ 増
殖培地、３．５ｃｍディッシュを、３７℃に保温してお
いた２ｍｌの無血清培地で２回洗浄した。ＤＮＡとカチ
オンのコンプレックス２００μｌに、無血清培地８００
μｌを混合し、計１ｍｌとした後、洗浄した細胞に添加
し、５％ＣＯ２存在下、３７℃で５時間インキュベート
した。
【００４５】なお、カチオンがＬＩＰＯＦＥＣＴＡＭＩ
ＮＥの場合は、細胞にＰＣ１２Ｄ細胞を用い、ＬＩＰＯ
ＦＥＣＴＩＮの場合は、Ｌ細胞を用いた。
ＮＥの場合は、細胞にＰＣ１２Ｄ細胞を用い、ＬＩＰＯ
ＦＥＣＴＩＮの場合は、Ｌ細胞を用いた。
【００４６】インキュベート後、培地を増殖培地（血清
添加）に交換し、翌日再び培地交換を行った。トランス
フェクションを開始してから４８時間後に、セルスクレ
ーパーを用いて細胞を回収した。
添加）に交換し、翌日再び培地交換を行った。トランス
フェクションを開始してから４８時間後に、セルスクレ
ーパーを用いて細胞を回収した。
【００４７】７．細胞抽出液の調製 基本的に、Molecular Cloning,-A laboratory manual-,
second edition, ColdSpring Harbar Laboratory Press
1989に従った。 （方法）トランスフェクトしてから４８時間後に、氷冷
したＭｇ２＋、Ｃａ２＋不含リン酸緩衝液（以下、ＰＢ
Ｓ（−）と略す。）２ｍｌで細胞を洗浄した。ＰＢＳ
（−）１ｍｌを加え、セルスクレーパーで細胞をシャー
レからはがした後、細胞をエッペンドルフチューブに移
した。４℃で、５分間、１０００ｒｐｍで遠心分離し、
上清を捨てた後、１００μｌの２５０ｍＭ トリス−塩
酸（ｐＨ８．０）緩衝液に懸濁し、あらかじめ用意して
おいたアイスボックスにドライアイスを詰めたものに３
分間、３７℃の水浴に３分間という凍結融解のサイクル
を３回繰り返した。４℃で、５分間、１５０００ｒｐｍ
で遠心分離し、上清を新しいエッペンドルフチューブに
写し、細胞抽出液とした（−８０℃で保存）。
second edition, ColdSpring Harbar Laboratory Press
1989に従った。 （方法）トランスフェクトしてから４８時間後に、氷冷
したＭｇ２＋、Ｃａ２＋不含リン酸緩衝液（以下、ＰＢ
Ｓ（−）と略す。）２ｍｌで細胞を洗浄した。ＰＢＳ
（−）１ｍｌを加え、セルスクレーパーで細胞をシャー
レからはがした後、細胞をエッペンドルフチューブに移
した。４℃で、５分間、１０００ｒｐｍで遠心分離し、
上清を捨てた後、１００μｌの２５０ｍＭ トリス−塩
酸（ｐＨ８．０）緩衝液に懸濁し、あらかじめ用意して
おいたアイスボックスにドライアイスを詰めたものに３
分間、３７℃の水浴に３分間という凍結融解のサイクル
を３回繰り返した。４℃で、５分間、１５０００ｒｐｍ
で遠心分離し、上清を新しいエッペンドルフチューブに
写し、細胞抽出液とした（−８０℃で保存）。
【００４８】８．β−ガラクトシダーゼのアッセイ 基本的に、Molecular Cloning,-A laboratory manual-,
second edition, ColdSpring Harbar Laboratory Press
1989に従った。 （方法）細胞抽出液２μｇを２５０ｍＭ トリス−塩酸
（ｐＨ８．０）緩衝液で５０μｌとした後、１５０μｌ
のβ−ｇａｌ ｂｕｆｆｅｒ（10mM NaHPO4 pH7.0、0.1m
M MgCl2 、100mMNaCl、0.1%BSA、0.1%NaN3 、0.3mM 4-methy
lumbelliferyl-β-D-galactoside）に加えた。３７℃で
１時間インキュベートした後、６００μｌの０．１Ｍ
グリシン−ＮａＯＨ（ｐＨ１０．３）を加え、励起３６
０ｎｍ、蛍光４５０ｎｍで蛍光を測定した。
second edition, ColdSpring Harbar Laboratory Press
1989に従った。 （方法）細胞抽出液２μｇを２５０ｍＭ トリス−塩酸
（ｐＨ８．０）緩衝液で５０μｌとした後、１５０μｌ
のβ−ｇａｌ ｂｕｆｆｅｒ（10mM NaHPO4 pH7.0、0.1m
M MgCl2 、100mMNaCl、0.1%BSA、0.1%NaN3 、0.3mM 4-methy
lumbelliferyl-β-D-galactoside）に加えた。３７℃で
１時間インキュベートした後、６００μｌの０．１Ｍ
グリシン−ＮａＯＨ（ｐＨ１０．３）を加え、励起３６
０ｎｍ、蛍光４５０ｎｍで蛍光を測定した。
【００４９】９．ＣＡＴのアッセイ 細胞抽出液１００μｇを２５０ｍＭ トリス−塩酸（ｐ
Ｈ８．０）緩衝液で８０μｌとした後、６５℃で１０分
間インキュベートした。次いで、４℃で２分、１５００
０ｒｐｍで遠心分離し、上清に１０ｍＭ アセチルＣｏ
Ａ１０μｌ、［１４Ｃ］クロラムフェニコール０．２μ
Ｃｉ／２０μｌを２０μｌ加えて混合し、３７℃で２時
間インキュベートした。１０ｍＭ アセチルＣｏＡ１０
μｌを更に加え、３７℃で終夜反応させ、２００μｌの
酢酸エチルエステルを加え、攪拌し、遠心分離後、上清
の酢酸エチルエステル１８０μｌをとり、アセチル化さ
れたクロラムフェニコールを抽出した。エバポレーター
で乾燥し、２０μｌの酢酸エチルエステルに溶解し、薄
層クロマトグラフィーで展開した。
Ｈ８．０）緩衝液で８０μｌとした後、６５℃で１０分
間インキュベートした。次いで、４℃で２分、１５００
０ｒｐｍで遠心分離し、上清に１０ｍＭ アセチルＣｏ
Ａ１０μｌ、［１４Ｃ］クロラムフェニコール０．２μ
Ｃｉ／２０μｌを２０μｌ加えて混合し、３７℃で２時
間インキュベートした。１０ｍＭ アセチルＣｏＡ１０
μｌを更に加え、３７℃で終夜反応させ、２００μｌの
酢酸エチルエステルを加え、攪拌し、遠心分離後、上清
の酢酸エチルエステル１８０μｌをとり、アセチル化さ
れたクロラムフェニコールを抽出した。エバポレーター
で乾燥し、２０μｌの酢酸エチルエステルに溶解し、薄
層クロマトグラフィーで展開した。
【００５０】１０．対照 ＣＡＴ遺伝子の上流にＳＶ４０プロモーターをつないだ
プラスミドについて、上述の１．〜９．と同じ操作を行
い、対照とした。
プラスミドについて、上述の１．〜９．と同じ操作を行
い、対照とした。
【００５１】１１．結果 結果を図１に示す。結果から明らかなように、配列表の
配列番号１で表わされるＤＮＡは選択的にＰＣ１２Ｄ細
胞で強力なプロモーター活性を有していることが判っ
た。
配列番号１で表わされるＤＮＡは選択的にＰＣ１２Ｄ細
胞で強力なプロモーター活性を有していることが判っ
た。
【００５２】
【発明の効果】本発明のＤＮＡは、選択的に脳で強力な
プロモーター活性を有しており、ペプチドを大量にかつ
経済的に生産するため、また遺伝子治療に有用である。
プロモーター活性を有しており、ペプチドを大量にかつ
経済的に生産するため、また遺伝子治療に有用である。
【図１】図１は、本発明のＤＮＡが選択的にＰＣ１２Ｄ
細胞でプロモーター活性を示すものである。
細胞でプロモーター活性を示すものである。
【配列表】 配列番号：１ 配列の長さ：２５４ 配列の型：核酸 鎖の数：二本鎖 トポロジー：直鎖状 配列の種類：Genomic DNA 起源 生物名：Myomorpha Mus. 株名：１２９ 細胞の種類：胚性幹細胞 配列の特徴 特徴を表す記号：promotor 特徴を決定した方法：Ｅ 配列 ＧＡＧＡＡＡＡＴＧＧ ＡＡＧＧＣＴＣＣＣＡ ＡＡＡＡＡＧＣＡＧＧ ＡＡＧ
ＡＧＣＡＴＣＡ ＣＡＧＣＣＴＧＧＣＴ ＴＴＡＧＧＧＡＧＡＴ ６０ ＴＣＣＣＡＴＧＡＣＣ ＴＧＧＧＣＡＧＣＣＣ ＧＴＧＣＡＧＧＧＣＴ ＧＧＣ
ＧＡＧＧＧＧＡ ＴＴＴＴＡＧＧＡＣＣ ＣＴＧＡＧＧＣＣＣＴ １２０ ＧＧＣＧＣＧＡＧＣＧ ＴＧＡＧＧＣＧＣＡＧ ＧＧＧＡＧＧＧＣＧＣ ＴＣＣ
ＣＧＧＡＧＣＣ ＴＧＣＡＴＣＣＣＧＧ ＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴ １８０ ＣＴＣＧＣＧＣＣＣＧ ＧＧＣＣＧＣＧＣＴＴ ＣＴＡＴＴＧＧＣＧＧ ＣＡＧ
ＣＧＣＧＣＧＧ ＧＴＧＡＣＧＡＴＧＡ ＣＧＧＣＴＧＧＣＧＣ ２４０ ＧＡＧＧＣＣＣＣＧＣ ＣＣＣＧ
２５４
ＡＧＣＡＴＣＡ ＣＡＧＣＣＴＧＧＣＴ ＴＴＡＧＧＧＡＧＡＴ ６０ ＴＣＣＣＡＴＧＡＣＣ ＴＧＧＧＣＡＧＣＣＣ ＧＴＧＣＡＧＧＧＣＴ ＧＧＣ
ＧＡＧＧＧＧＡ ＴＴＴＴＡＧＧＡＣＣ ＣＴＧＡＧＧＣＣＣＴ １２０ ＧＧＣＧＣＧＡＧＣＧ ＴＧＡＧＧＣＧＣＡＧ ＧＧＧＡＧＧＧＣＧＣ ＴＣＣ
ＣＧＧＡＧＣＣ ＴＧＣＡＴＣＣＣＧＧ ＡＧＧＧＣＧＧＧＧＴ １８０ ＣＴＣＧＣＧＣＣＣＧ ＧＧＣＣＧＣＧＣＴＴ ＣＴＡＴＴＧＧＣＧＧ ＣＡＧ
ＣＧＣＧＣＧＧ ＧＴＧＡＣＧＡＴＧＡ ＣＧＧＣＴＧＧＣＧＣ ２４０ ＧＡＧＧＣＣＣＣＧＣ ＣＣＣＧ
２５４
───────────────────────────────────────────────────── フロントページの続き (51)Int.Cl.7 識別記号 ＦＩ テーマコート゛(参考） Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ ４Ｃ０８７ Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｎ 5/00 Ｂ //(Ｃ１２Ｎ 15/09 ＺＮＡ Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｎ 5/10 Ｃ１２Ｒ 1:91） (Ｃ１２Ｐ 21/02 Ｃ１２Ｒ 1:91） Ｆターム(参考） 4B024 AA01 BA10 CA03 DA02 DA06 EA02 EA04 FA02 GA11 GA14 HA17 4B064 AG01 CA10 CA19 CC24 DA01 4B065 AA91X AA91Y AB01 AC14 BA01 BA02 BA03 CA29 CA44 4C084 AA06 AA13 CA53 NA05 ZB212 ZB262 4C086 AA01 AA02 EA16 NA05 ZB21 ZB26 4C087 AA01 AA02 BB57 CA12 NA05 ZB21 ZB26
Claims (13)
- 【請求項１】 配列表の配列番号１で表わされるＤＮ
Ａ。 - 【請求項２】 配列表の配列番号１で表わされるＤＮＡ
にハイブリダイズするＤＮＡ。 - 【請求項３】 請求項１または請求項２に記載のＤＮＡ
の一部分であるＤＮＡ。 - 【請求項４】 プロモーター活性を有する請求項１〜請
求項３のいずれか１項に記載のＤＮＡ。 - 【請求項５】 選択的に神経細胞においてプロモーター
活性を示す請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載の
ＤＮＡ。 - 【請求項６】 選択的に脳においてプロモーター活性を
示す請求項１〜請求項４のいずれか１項に記載のＤＮ
Ａ。 - 【請求項７】 請求項１〜請求項６のいずれか１項に記
載のＤＮＡに正しく転写される方向に連結された構造遺
伝子を含む組換えＤＮＡ。 - 【請求項８】 請求項７に記載の組換えＤＮＡを含むベ
クター。 - 【請求項９】 請求項７に記載の組換えＤＮＡまたは請
求項８に記載のベクターにより形質転換された形質転換
体。 - 【請求項１０】 請求項７に記載の組換えＤＮＡまたは
請求項８に記載のベクターにより形質転換された動物。 - 【請求項１１】 請求項９に記載の形質転換体を培養
し、その培養物から構造遺伝子によりコードされるペプ
チドを分離し、採取するペプチドの製造方法。 - 【請求項１２】 請求項１〜請求項４のいずれか１項に
記載のＤＮＡを含む発現キット。 - 【請求項１３】 請求項５もしくは請求項６に記載のＤ
ＮＡ、請求項７に記載の組換えＤＮＡまたは請求項８に
記載のベクターを含む遺伝子治療用組成物。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10201651A JP2000032987A (ja) | 1998-07-16 | 1998-07-16 | Ｄｎａ |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP10201651A JP2000032987A (ja) | 1998-07-16 | 1998-07-16 | Ｄｎａ |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| JP2000032987A true JP2000032987A (ja) | 2000-02-02 |
Family
ID=16444634
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| JP10201651A Pending JP2000032987A (ja) | 1998-07-16 | 1998-07-16 | Ｄｎａ |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| JP (1) | JP2000032987A (ja) |
Citations (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP2006508101A (ja) * | 2002-11-08 | 2006-03-09 | ワーナー−ランバート・カンパニー、リミテッド、ライアビリティ、カンパニー | フェニルアルキルおよびピリジルアルキルピペラジン誘導体 |
| JP2012502947A (ja) * | 2008-09-23 | 2012-02-02 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | ドーパミンＤ３受容体の調節剤として有用なベンゾ［ｄ］イソオキサゾール−３−イル−ピペラジン誘導体 |
| JP2012502944A (ja) * | 2008-09-22 | 2012-02-02 | エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー | ピペラジンｄ３及び５−ｈｔ２ａ受容体調節薬 |
| JP2013028626A (ja) * | 2007-04-04 | 2013-02-07 | Merck Sharp & Dohme Corp | 治療薬 |
| JP2013075894A (ja) * | 2011-09-14 | 2013-04-25 | Dainippon Sumitomo Pharma Co Ltd | Ｎ−アシル環状アミン誘導体またはその医薬上許容される塩からなる医薬 |
| CN103130737A (zh) * | 2011-12-05 | 2013-06-05 | 江苏恒谊药业有限公司 | 环己烷胺类化合物及其作为抗精神分裂症药物的应用 |
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-
1998
- 1998-07-16 JP JP10201651A patent/JP2000032987A/ja active Pending
Patent Citations (7)
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| CN103130737A (zh) * | 2011-12-05 | 2013-06-05 | 江苏恒谊药业有限公司 | 环己烷胺类化合物及其作为抗精神分裂症药物的应用 |
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