HUT72980A

HUT72980A - Stable liquid compositions of gamma interferon

Info

Publication number: HUT72980A
Application number: HU9503223A
Authority: HU
Inventors: Tue Nguyen
Original assignee: Genentech Inc
Priority date: 1993-05-12
Filing date: 1994-05-04
Publication date: 1996-06-28
Also published as: CZ285389B6; EP0697887B1; GR3029286T3; CA2159602A1; NO954544L; DE69414841T2; TW275585B; EP0697887A1; CN1122575A; ZA942955B; KR100330325B1; JP4053586B2; DK0697887T3; CZ295595A3; WO1994026302A1; NZ266354A; PL176079B1; NO320069B1; HU9503223D0; KR960702320A

Description

A jelen találmány stabilis folyékony gyógyászati készítményekre vonatkozik, amelyek gamma-interferont (immun interferon néven is ismert IFN-gammát ) tartalmaznak. A találmány tárgyát speciálisan a gamma-interferon terápiásán hatásos mennyiségének többszörös dózisát tartalmazó, ismételt adagolásra alkalmas stabilizált vizes gyógyászati készítmények alkotják.

A gamma-interferőn az interferon-család egyik tagja, amely az α-interferonra és β-interferonra jellemző vírusellenes és burjánzásellenes tulajdonságokkal rendelkezik, azonban az u- és β-interferonoktól eltérően 2-es pH-értéken labilis. A gamma-interferont eredetileg limfociták mitogén indukciója során állították elő. A humán gamma-interferon rekombináns előállításáról először Gray, Goeddel és munkatársai számoltak be [Gray és munkatársai, Natúré 295. 503508 (1982)], és ez a tárgya a 4 762 791, 4 929 544, 4 727 138 és a 4 925 793 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásoknak is. A Gray és Goeddel által E. coliban előállított rekombináns humán gamma-interferon 146 aminosavból állt, a molekula N-terminálisa CysTyrCys szekvenciával kezdődött. Később azt találták, hogy a természetes humán gamma-interferon (azaz amelyet a humán perifériás vér limfociták mitogén indukciója révén és az azt követő tisztítással állítanak elő) olyan polipeptid, amelyből a Gray és munkatársai által (ld. fentebb) azonosított CysTyrCys N-terminális hiányzik. Újabban meghatározták az E. coli-bői származó rekombináns humán gamma♦ *

-3-interferon (rhIFN-gamma) kristályos szerkezetét [Ealick és munkatársai, Science, 252 , 698-702 (1991)], ami azt mutatta, hogy a fehérje egy szorosan összefonódott nem-kovalens homodimerként létezik, amelyben a két azonos polipeptidlánc antiparallell módon orientált.

A gamma-interferonról ismert, hogy számos biológiai hatást, többek között daganatellenes mikróbaellenes és immunszabályzó hatást fejti ki. Rekombináns humán gammainterferon (rhifn-gamma, Actimmune^, Genentech, Inc. South San Francisco, Kalifornia) a kereskedelemben immunmodulátor hatású gyógyszerként kapható krónikus granulomás betegségek kezelésére, amely betegségre a fagociták tökéletlen vagy abnormális működése következtében a bőr, nyirokmirígy, máj, tüdő és a csontok súlyos, kiújuló fertőzései jellemzők [Baehner R. L. , Pediatric Pathol. 10 . 143-153 (1990 )]. A gamma-interferont atopic dermatitis kezelésére, amely egy gyakori gyulladásos bőrbetegség, jellemzői az erős viszketés, krónikusan kiújuló folyamat gyakori súlyosbodó szakaszokkal, jellegzetes klinikai morfológiával és bőrlézió-eloszlással (ld. a WO 91/07984 számon 1991. június 13-án közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentést), érszűkület, ezen belül érplasztikát és/vagy érműtétet követően kialakult érszűkület kezelésére (WO 90/03189 számon 1990. április 5-én közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentés), különféle t iidő ál 1 apó t o k , ezen belül légzési fájdalom szindrómák (RDS, respiratory distress syndrome ) , így a felnőttkori légzési fájdalom szindróma (ARDS, aduit

	·.* ··»> · ·· ·· -4-
respiratory distress	syndrome) és egy neonatális forma

kezelésére is ajánlották, ez utóbbit különféleképpen, idiopátiás RDS-nek vagy hyalin membrán betegségnek is nevezik (WO 89/01341 számon 1989. február 23-án közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentés). Emellett a gamma-interferont sikerrel alkalmazták különféle allergiák, például asztma és HIV-fertőzéssel kapcsolatos állapotok, így oppor-

tunista fertőzések,	például Pneumocystis carinii által
okozott tüdőgyulladás	és traumával járó vérmérgezés keze-

lésére.

Az 1992. szeptember 29-én engedélyezett 5 151 265 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban stabil

folyékony gyógyászati

készítményeket ismertetnek, amelyek

nem-1iofi1izált gamma-interferont, a pH érték 4,0 és 6,0 között tartására képes pufferrel, stabilizálószerrel, így mannittal és egy nemionos detergenssel együtt tartalmaznak.

Az ismert kereskedelmi, folyékony, gamma-interferontartalmú készítmény (Actimmune^R, rhuIFN-gamma-lb, Genentech,

Inc.) steril, tiszta,

színtelen, tartósítás nélküli oldat,

amelyet egyetlen dózist magábafoglaló fiolákba töltenek szubkután injekció céljára. Az Actimmune minden 0,5 ml-es fiolája 100 pg (3 millió egység, specifikus aktivitás: 30 millió U/mg) IFN-gamma-1b-t 20 mg mannittal, 0,36 mg

nátrium-szuke ináttál,

0,05 mg poliszorbát 20-szal és steril

injekciós vízzel együtt tartalmaz. Mivel a készítmény tartósítószert nem foglal magába, csak egy alkalommal használható, egyetlen terápiás dózisból áll, és a fel nem

-5használt mennyiséget ki kell önteni.

Bizonyos indikációk, mint az atopic dermatitis vagy a renális sejtkarcinóma, hosszú ideig tartó és ismételt adagolást magábafoglaló alkalmazást igényelnek, így kívánatos volna olyan stabilis, folyékony gyógyászati készítményt kifejleszteni, amely a gamma-interferon többszörös dózisát tartalmazza, és amelyben az ajánlott tárolási körülmények között a gamma-interferőn hosszabb időn át megtartja biológiai hatását és fizikai stabilitását. Az ilyen készítménynek, az adott gyógyászati alkalmazásra tekintettel, előnyösen a gamma-interferőn terápiásán hatásos mennyiségének kb. 30-szorosát kel lene magábafoglalnia, és stabilisnak kellene maradnia az első beadást követő legalább 14 napon át. Azonban az ilyen többdózisu készítmények előállítása egyáltalán nem egyszerű.

A fehérjék, a szokásos szerves vagy szervetlen hatóanyagoktól eltérően, nagyméretűek. A biológiai hatás szempontjából lényeges, hogy az aminosavszekvenciájuk legalább egy magját érintetlenül megőrizzük a konformációs integritáshoz. Továbbá, mivel a fehérjék különféle funkciós csoportokat tartalmaznak, ilyenek például az alkotó aminosavak különböző oldalláncai, ugyanazon időszakban számos lebomlási reakció fellépése lehetséges. Ha ilyen többszörös lebomlási reakcióutak léteznek, feltehetően különféle aktiválási energiákkal, akkor valószínű, hogy a lebomlási kép a hőmérséklettől függően lényegesen változik.

Ennek a bonyolultságnak eredményeként a fehérjék

-6gyakran nem stabilisak, és a lebomlásuk módjának, a lebomlás mechanizmusának meghatározása és a lebomlási profil jellemzése, ezen belül a sebesség-meghatározó reakció azonosítása, szintén nagyon bonyolult. Gyakran nem léteznek közvetlen eszközök a kémiai azonosság meghatározására és a lebomlási termékek mennyiségének mérésére. Általában a segédanyagok szignifikáns hatást gyakorolnak a fehérjék stabilitására, mind fizikai értelemben, mind a biokémiai és hatástani méréseknél, és ezért gondos megválasztásuk a készítmény megtervezésének nagyon fontos és bonyolult részét képezi.

A fenti problémák különösen érvényesek a gamma-interferon esetében, amely kb. 15 000 D méretű, 143(146) aminosavból álló láncú fehérje, amelyről ismert, hogy hő hatására notóriusan nem stabilis, és aggregációra és proteolitikus lebomlásra hajlamos [Wetzel R. L. és munkatársai, Unfolding and Inactivation a Protein Design and the Development of New Therapeutics And Vaccines című kézikönyvben, szerkesztő: Hook J. B. és Pose G., Plenum Publishing Corp., 1990, 79. oldal; Mulkerrin M. G. és Wetzel R., Biochemistry 28 , 6556 (1989)].

A találmány stabilis vizes gyógyászati készítményekre vonatkozik, amelyek előzőleg nem liofilizált gamma-interferon terápiásán hatásos mennyiségét, a pH értékének kb. 4,0 és 6,0 között tartására acetát puffért, nemionos detergenst, izotonizáló anyagot, és a fenol, benzil-alkohol és egy benzetónium-halogenid, például -klorid közül választott konzerválószert tartalmaz. A gamma-interferon előnyösen

-7többszörös dózisban van jelen, és biológiai hatását és fizikai stabilitását fagyasztás nélkül, előnyösen 2-8°C-on legalább kb. két hétig megtartja.

A találmány másik tárgya egy olyan tartály, amely a fenti folyékony gyógyászati készítményt olyan mennyiségben tartalmazza, amely a gamma-interferon legalább egy terápiásán hatásos dózisának felel meg. A tartály lehet üveg, fiola vagy egy olyan eszköz, amely a folyékony gyógyászati készítményt tartalmazza és alkalmas annak adagolására, például fecskendő vagy aeroszolos tartály vagy porlasztó.

találmány továbbá gamma-interferőn vizes készítményben való stabilizálási eljárására is vonatkozik, amely oly módon történik, hogy az előzőleg nem liofilizált gamma-interferont vízzel, a pH értékét kb. 4,0 és 6,0 között tartó acetát pufferrel, anyaggal és a fenol, a nemionos detergenssel, izotonizáló benzil-alkohol és egy benzetónium halogenid közül választott konzerválószerrel elegyítjük.

A találmány egy még további tárgya eljárás gamma

-interferon intrapulmonáris adagolására, amely abban áll, hogy egy ilyen kezelést igénylő betegnek inhalálással aeroszol részecskéket adagolunk, amely részecskék előzőleg nem liofilizált gamma-interferont terápiásán hatásos menynyi ségben, a pH értékének a kb. 4,0 és 6,0 közötti tartományban való tartására acetát puffért, nemionos detergenst, izotonizáló anyagot és a fenol, a benzil-alkohol és egy benzetónium-halogenid közül választott konzerválószert tartalmaznak, ahol a részecskék mérete megfelelően kicsi ahhoz,

-8hogy a tüdő léghólyagocskáiba és onnan a beteg véráramába jussanak.

Ezek és a további vonatkozások a szakember számára nyilvánvalóak lesznek.

Az 1. ábra azt mutatja, hogy a különféle konzerválószerek milyen hatást gyakorolnak a rhuIFN-gamma (Actimmune^, Genentech, Inc. South San Francisco, Kalifornia) bioaktivitására nem tartósított folyékony gyógyászati készítményben, 25'C-on.

A 2A és 2B ábrák a fenol konzerválószer különféle koncentrációinak a hatását mutatják a rhuINF-gamma bioaktivitására folyékony gyógyászati készítményben, 25*C-on.

A 3. ábra azt mutatja, hogy 0,9% benzil-alkohol milyen hatással van a rhuIFN-gamma bioaktivitására 25’C-on olyan folyékony készítményben, amely 1 mM illetve 5 mM szukcinátot tartalmaz.

A 4. ábrán az látható, hogy a 0,4% fenol konzerválószer milyen hatást gyakorol 25°C-on a rhuIFN-gamma bioaktivitására olyan folyékony gyógyászati készítményben, amely 5 mM illetve 1 mM szukcinátot tartalmaz.

Az 5. ábra azt mutatja, hogy milyen hatással van a fenol a rhuIFN-gamma bioaktivitására 25C-on ImM szukcinátot illetve 10 mM acetátot tartalmazó készítményben.

A gamma-interferont többszörös dózisban tartalmazó olyan készítmény előállítására tett próbálkozások során, amelyben a megmaradó, gyógyászatilag hatásos gamma-interferon dózisok tartósítva vannak és az első adagolást

-9követően gyógyászati felhasználásra hosszabb ideig alkalmasak maradnak, a jelen feltalálók megállapították, hogy sok ismert, gyógyászatilag elfogadható tartósítószer nem kompatibilis a gamma-interferont tartalmazó folyékony gyógyászati készítményekben szokásosan használt más komponensekkel, és hogy ez az összeférhetetlenség a stabilitás drámai csökkenését eredményezi. Közelebbről, azt találták, hogy különféle terápiásán elfogadható konzerválószer hozzáadása a kereskedelemben kapható, gamma-interferont tartalmazó folyékony gyógyászati készítményt (Actimmuné, Genentech, Inc.) labilissá teszi, amelynek következtében aggregátum képződik és csökken a biológiai hatás. A jelen találmány sikeres kutatás eredménye, amely egy stabilis, konzerválószert tartalmazó gamma-interferon hatóanyagú vizes gyógyászati készítményt hozott létre. A leírásban a gammainterferon, interferon-gamma és IFN-gamma megnevezéseket felcserélhetően használjuk, és ezek a gamma-interferon minden formájára (humán és nem-humán állat) utalnak, amelyek biológiailag aktívként ismertek elfogadott IFN-gamma meghatározásokban, ilyenek az alkalmas sejtvonalban vírus replikáció gátlása (encephalomyocarditis vírus replilációjának A549 humán tüdő karcinóma sejtvonalban való gátlása humán IFN-gamma esetében), II csoportba tartozó antigének indukciója, hőlabilitás, más vírusellenes, daganatellenes vagy immunszabályzó vizsgálatok, vagy az IFN-gammával, de nem az IFN-a-val vagy IFN-B-val szemben immunreaktivitást mutató antitestek semlegesítése, és magukba foglalják a

-10teljesen kialakult, pro, met vagy des(l-3) (desCysTyrCys IFN-gamma) formákat is, akár természetes forrásból, akár kémiai szintézissel vagy rekombináns DNS technológia alkalmazásával állították is elő. A rekombináns humán IFNgamma (rhulFN-gamma) előállításának teljes ismertetését, beleértve a cDNS és aminosavszekvenciák előállítását is, a fentebb idézett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban, például a 4 762 791 számú leírásban találjuk meg. A CysTyrCys molekularészt nem tartalmazó rekombináns humán gamma-interferont, annak különféle csonkolt származékait például a 146 354 számon közzétett európai szabadalmi bejelentésben írják le. A nem-humán állati interferonokat, ezen belül a gamma-interferont például a 88 622 számon közzétett európai bejelentésben ismertetik. A fogalom az ilyen természetes (vad-típusú) interferonok különféle glikozilezett formáit és más variánsait és származékait is magában foglalja, függetlenül attól, hogy ismert-e a szakterületen vagy hozzáférhetővé válik-e a jövőben. Ilyen variánsokra példaként az alléleket, és a helyre-irányuló mutagenézis termékeit, amelyekből csoportokat távolítunk el, amelyekbe csoportokat viszünk be és/vagy helyettesítünk, (ld. például a 146 354 számú európai közzétételi iratot, amelyre fentebb hivatkoztunk). A gamma-interferonról tudott, hogy szűk a befogadó (hőst) tartománya, ezért a kezelendő állattal homológ gamma-interferont kell alkalmaznunk. Humán terápiában előnyösen a 4 717 138 számú amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírásban és az annak megfelelő 77 670

-11számú európai szabadalmi leírásban bemutatott szek-venciának a desCysTyrCys variánsát használjuk, és adott esetben azt a

C-terminál is variánst , ame1yben az átfordítás utáni feldolgozásban az utolsó négy aminosavat elhagyjuk.

Farmakológiai értelemben a jelen találmányban gamma-interferon terápiásán hatásos mennyisége arra menynyiségre utal, amely azon patológiai állapotok megelőzése vagy kezelése szempontjából hatásos, amelyek a gamma-interf éronna1 kezelhetők.

Ilyen állapotok például, a korlátozás szándéka né1kü1 , a különféle daganatok, mikrobák által okozott f ertőzések, krónikus granulómás betegségek atopic dermatitis, érszűkület, beleértve az érplasztikát é s/vagy érmű té tét követően légzési fájdalom szindróma (RDS), így a felnőttkori légzési f ájdalom szindróma (ARDS) és egy neonatális forma, amelyet különféleképpen, idiopátiás

RDS-nek vagy hyalin membrán betegségnek is neveznek, allergiák, például asztma és HIV-fertőzéssel kapcsolatos állapotok, így opportunista fertőzések, például

Pneumocystis carinii által okozott tüdőgyulladás és tuberkulózis.

A gyógyászati készítmény olyan készítményeket jelent, amelyek formája lehetővé teszi, hogy a hatóanyag biológiai aktivitása egyértelműen hatásos legyen, és amely nem tartalmaz olyan további komponenseket, amelyek az egyedre nézve, akinek a készítményt beadják, mérgezőek.

A gyógyászatilag elfogadható segédanyagok (vivő anyagok, adalékanyagok) azok, amelyek egy emlősnek ésszerűen

-12beadhatók és az alkalmazott hatóanyag hatásos dózisát szolgáltatják.

A gamma-interferon egy gyógyászati készítményben megőrzi biológiai hatását, ha a biológiai hatása egy adott időpontban kb. 20%-a annak a biológiai hatásnak, amelyet a gyógyászati készítmény előállításakor kifejtett, és. amelyet standard gamma-interferon bioaktivitási vizsgálatokkal, például A549 vírusellenes biológiai vizsgálattal határoznak meg.

A gamma-interferon megtartja fizikai stabilitását egy folyékony gyógyászati készítményben, ha aggregáció jelei vizuálisan nem észlelhetők vagy nem mérhetők méretkizárásos HPLC eljárással.

A 4,0-6,0 pH-tartományt korábban optimálisnak írták le a gamma-interferon vizes oldatára vonatkozóan. Kimutatták továbbá, hogy kb. 5*C-on vagy magasabb hőmérsékleten való tároláskor a folyékony, nem tartósított készítmények, amelyek előzőleg nem liofilizált rhuIFN-gammát tartalmaznak, lényegesen stabilisabbak, mint a liofilizált rhuIFN-gamma készítmények, és különösen azt, hogy a folyékony készítményekben az aggregátum-képződés lényegesen kisebb (ld. például az 5 152 265 számú, 1992. szeptember 29-én engedélyezett amerikai egyesült államokbeli szabadalmi leírást).

Azt találtuk, hogy a tartósítószer (mikrobáéilenes szer) a gamma-interferőn folyékony készítményéhez adva, amelyben a pH-t szukcinát pufferrel tartjuk fenn, nem várt aggregátum képződést eredményez, és a fehérje ilyen oldatban

-13gyorsan elveszti aktivitását. A jelen feltalálók megkísérelték azonosítani az okokat, amelyek a konzerválószert tartalmazó oldatok stabilitásának csökkenését okozták, és azt találták, hogy az aggregátum képződése nem a gammainterferon és az alkalmazott konzerválószer inkompatibilitása következtében jött létre, hanem a szukcinát puffer és a vizsgált konzerválószerek egyidejű jelenléte okozta. Noha az aggregátum képződésének hátterében levő reakciók pontos természete nem ismert, és a lebomlási termékeket nem különítettük el, meglepően azt találtuk, hogy a lebomlás elkerülhető, és stabilis vizes gyógyászati készítmények állíthatók elő, ha a szukcinát puffért egy acetát pufferrel helyettesítjük, amely képes a pH-értéket a kívánt pHintervallumban tartani.

Az első kísérletben a különféle tartósítószereknek az Actimmune-ban (rhIFN-gamma-1b, Genentech, Inc.) levő rhuIFN-gamma bioaktivitására gyakorolt hatását tanulmányoztuk. A gamma-interferont a kiválasztott pufferbe dializáltuk. A gamma-interferon koncentrációját 0,2 mg/ml-re állítottuk be. Konzerválószereket adtunk az oldathoz és az elegyet oldódásig kevertük. 1 ml-es részleteket 3 ml-es I típusú üvegfiolába vittünk át, amelyeket 5 és 25°C-on tároltunk. Periodikusan választottunk ki fiolákat (egy fiola/időpont/tárolási hőmérséklet) és vizsgálatokat végeztünk. A vizsgálatok például a következők voltak: SDS-PAGE, ELISA, A549 vírusellenes bioassay [ld. például Fish E. N. és munkatársai, Drug Design and Delivery 2, 191-206 (1988)], és

-14kevésbé gyakran, fordított fázisú és méretkizáró kromatográf ia .

HPLC eljárás, ioncserélő

Csak a bioaktivitásra vonatkozó és SDS-PAGE adatokat tárgyaljuk, mivel ezek bemutatott, aktuális kísérleti adatokat 25'C-on kaptuk (gyorsított stabilitásvizsgálat), mivel 5’C-on jelentősen hosszabb időre lenne szükség változás észleléséhez.

Amint azt az 1. ábra mutatja, 1% benzil-alkohol vagy

0,4% fenol konzerválószer hozzáadása drámaian csökkentette a gamma-interferon biológiai hatását 25’C-on a nem konzervált kontrolihoz és a benzetónium-kloridőt két különböző kon centrációban tartalmazó készítményekhez viszonyítva.

A 2A ) ábra a fenol különféle koncentrációjának a hatását mutatják a rhuIFN-gamma (Actimmuné^, Genentech, Inc.) biológiai aktivitására folyadék készítményben, 25’Con. Noha a gamma-interferon bioaktivitása kielégítő volt a 0,1% és 0,2% fenollal tartósított oldatokban, az aggregátumképződés növekedett ezekben az oldatokban, a nátrium-dodecil-szulfát-poliakrilamid gél elektroforézissel (SDSPAGE) végzett vizsgálat szerint (2B ábra).

A 3. ábra a 0,9% benzil-alkoholnak a rhuIFN-gamma bioaktivitására 25°C-on gyakorolt hatását szemlélteti 1 mM és 5 mM szukcináttal puffereit készítményekben. Az a tény, hogy a bioaktivitás vesztesége kisebb a szukcinátot kisebb koncentrációban tartalmazó készítményekben, arra látszik utalni, hogy a szukcinát puffer jelenléte, legalábbis részlegesen, felelős a tartósított rhuINF-gamma oldatoknál jelentkező

-15stabilitási problémákért. A következtetést a 4. ábrán bemutatott eredmények látámasztják. A gamma-interferon biológiai aktivitásának vesztesége kevésbé drámai az olyan vizes oldatokban, amelyek pH-ját 1 mM szukcináttal 5,0 értéken tartjuk, mint azokban, amelyek 5 mM szukcinátot tartalmaznak .

Ezután 0,4% fenol rhuIFN-gammára gyakorolt hatását tanulmányoztuk 1 mM szukcinát puffért illetve 10 mM acetát puffért tartalmazó folyékony készítményekben. Amint az az 5. ábrán látható, az acetáttal puffereit oldat stabilitása, a gamma-interferon biológiai aktivitása alapján ítélve, lényegében azonos volt a nem tartósított, szukcináttal illetve acetáttal puffereit kontroll oldatokéval, és vizuális vagy SDS-PAGE elektroforézissel történő értékeléssel aggregátumok nem voltak kimutathatók.

A jelen találmány szerinti gyógyászati készítmények a következő komponenseket tartalmazzák:

a) előzőleg nem liofilizált gamma-interferon;

b) acetát puffer, amely képes a pH értéket kb. 4 és kb.

között tartani (ez az oldatban levő fehérje maximális stabilitásának pH-tartománya);

c) nemionos detergens, főként a fehérjének a keveréssel indukált aggregációval szembeni stabilizálására;

d) izotonizáló anyag;

e) konzerválószer, amelyet a fenol, a benzil-alohol és egy benzetónium-halogenid, például -klorid közül választunk; és

f) víz.

A nemionos detergens (felületaktív anyag) például poliszorbát [például poliszorbát (Tween) 20, 80, stb.] vagy poloxamer (például poloxamer 188). A nemionos felületaktív anyagok lehetővé teszik, hogy a készítményt nyíró felületi feszültségnek tegyük ki anélkül, hogy a fehérje denaturálódna. Továbbá, az ilyen felületaktív anyagot tartalmazó készítményeket a pulmonáris adagolásnál használt aeroszol szerkezetekben, és tűnélküli sugárinjektoros szórópisztolyokban lehet alkalmazni (ld. például a 257 956 számú európai szabadalmi leírást).

Az izotonizáló anyagot, amely azért van jelen, hogy a találmány szerinti folyékony készítmények izonicitását biztosítsa, és például polihidroxi-cukoralkoholok, előnyösen háromértékű vagy magasabb cukoralkoholok, így glicerin, eritrit, arabit, xilit, szorbit és mannit közül választjuk. Ezek a cukoralkoholok önmagukban vagy kombinációban alkalmazhatók. Más esetben nátrium-kloridot vagy más alkalmas szervetlen sót is használhatunk az oldatok izotóniássá tételére.

Az acetát puffer például ecetsav és nátrium-acetát keveréke, ecetsav és nátrium-hidroxid keveréke stb. A találmány szerinti folyékony készítmény pH-ját kb. 4,0-6,0, előnyösen 4,5-5,5 tartományba, és legelőnyösebben kb. 5-ös értékre kell pufferelni.

A fenol, benzil-alkohol és benzetónium-halogenidek, például a -klorid tartósítószerek ismert mikróbaellenes * · f

-17anyagok.

Egy előnyös megvalósítás esetén a találmány szerinti folyékony gyógyászati készítmény a következő komponenseket tartalmazza.

gamma-interferon nátrium-acetát (pH 5,0) Tween 20 fenol mannit injekciós víz, USP ahol a százalékos mennyiségek

0,1-2,0 mg/ml

5-100 mM

0,1-0,01 tömeg%

0,05-0,4 tömeg% tömeg%

100%-ig, a készítmény tömegére vonat koztatott értékek. A lal, és a mannit 0,9 hető.

Még előnyösebben gamma-interferon nátrium-acetát (pH 5,0) Tween 20 fenol mannit fenol tömeg% a készítmény

0,5-1,0 tömeg% benzil-alkohol nátrium-kloriddal helyettesít komponensei a következők

0,1-1,0 mg/ml mM

0,01 tömeg%

0,2%

5%

A fenol 0,75 tömeg% benzil-alkohollal és a mannit 0,9 tömeg% nátrium-kloriddal helyettesíthető.

A tartósított folyékony, készítmények előnyösen a gamma-interferon terápiásán hatásos mennyiségének többszörös dózisát tartalmazzák. Ezen polipeptid szűk gazda- (hőst-) tartományára tekintettel a humán betegek kezelésére humán gamma-interferon, előnyösebben természetes humán gamma

-18-interferon szekvencia alkalmazása előnyös. Mint biológiai választ módosító anyag, a gamma-interferon számos különböző hatást fejt ki a sejttípusok széles körére, a legkülönbözőbb humán és nem-humán emlős fajokban. A terápiásán hatásos dózis természetesen több tényezőtől, így a kezelendő patológiai állapottól (a megelőzést is beleértve), a beteg korától, testtömegétől, általános egészségi állapotától, az orvosi előzményektől stb. függ, és meghatározása a gyakorló orvos szaktudásához tartozik. A hatásos dózis általában kb. 0,001 és kb. 1,0 mg/kg közötti, előnyösebben 0,01 és 1 mg/kg közötti, legelőnyösebben 0,01 és 0,1 mg/kg közötti mennyiség. Az ilyen készítményekben a huIFN-gamma előnyösen kb. 2 x 10' U/mg fehérje nagyságrendű vagy nagyobb hatást fejt ki A549 sejteken encephalomyocarditis vírussal szemben vizsgálva. Tisztában kell lenni azzal, hogy az endotoxin szennyezést minimális értéken kell tartani egy biztonsági szint, például 0,5 ng/mg fehérje alatt. Emellett, humán adagolás esetén a folyékony készítményeknek meg kell felelniök a sterilitással, pirogenicitással, általános biztonsággal és tisztasággal kapcsolatos követelményeknek, amelyeket az FDA Office and Biologics standardjai írnak elő.

A készítményeket előnyösen ismételt intravénás (i.v.), szubkután (s.c.) vagy intramuszkuláris (i.m.) injekciók formájában vagy aeroszol készítményekként adagoljuk, amelyek intranazális vagy intrapulmonáris beadásra alkalmasak (az intrapulmonáris adagolást illetően ld. például a 257 956 számú európai szabadalmi leírást).

• * · · · « • · · a · · · • · · » · · ·· ···« · «· a··

-19A krónikus granulómás betegségben szenvedő betegek kezelésére 50 pg/m^ (1,5 millió U/m^) dózis ajánlott abban az esetben, ha a testfelület nagyobb mint 0,5 m^ , és 1,5 pg/kg dózis azon betegek esetében, akiknek a testfelülete n

0,5 πι^ύ vagy kisebb. Az injekciót szubkután, heti három alkalommal ajánlott beadni.

Súlyos sérüléses betegekben a fertőzés és halál csökkentésére 100 pg-os rhuIFN-gamma dózist szubkután, napi egy alkalommal adagolhatunk. Az ily módon megelőzhető vagy kezelhető fertőzések többek között a tüdőgyulladás, baktériumvérűség, hasűri vagy mellüregi fertőzés, sebfertőzés, vecticulitis/meningitis, stb.

A jelen találmány szerinti stabilis vizes készítményeket előnyösen fiolákba töltjük, amelyek kb. legfeljebb 30 terápiásán hatásos gamma-interferőn dózist tartalmaznak. A gamma-interferon előnyösen kb. 20%-át megtartja az első adagolás idején kifejtett biológiai aktivitásnak az első adagolást követő legalább 14 napon, előnyösebben legalább 200 napon át.

A leírásban található minden idézet és az azokban levő hivatkozások utalás formájában a leírás részét képezik.

Noha az előzőekben speciális előnyös foganatos!tási módokra utaltunk, nyilvánvaló, hogy ezek a jelen találmányt nem korlátozzák. A szakember tudja, hogy az ismertett foganatosítási módokra vonatkozóan különféle módosítások végezhetők anélkül, hogy a találmány általános elvétől eltérnénk. Minden ilyen módosítás a jelen találmány körébe tartozik.

Claims

Szabadalmi igénypontok:

1. Stabilis vizes gyógyászati készítmény, amely előzőleg nem liofilizált gamma-interferon gyógyászatilag hatásos mennyiségét, a pH értékének kb. 4,0 és kb. 6,0 között tartására acetát puffért, nemionos detergenst, izotonizáló anyagot és a fenol, a benzil-alkohol és egy benzetónium-halogenid közül választott konzerválószert tartalmaz.
2. Az 1. igénypont szerinti készítmény, amelyben a gamma-interferon humán gamma-interferon.
3. A 2. igénypont szerinti készítmény, amelyben a gamma-interferon desCysTyrCys-IFN-gamma.
4. A 2. igénypont szerinti készítmény, amelyben a gamma interferon olyan desCysTyrCys-IFN-gamma, amelyből a négy Cterminális aminosav hiányzik.
5. A 2. igénypont szerinti készítmény, amelyben a rí gamma-interferon fajlagos aktivitása legalább 2 x 10' U/mg.
6. Az 5. igénypont szerinti készítmény, amely a humán gamma-interferon legalább két hatásos dózisát tartalmazza.
7. A 6. igénypont szerinti készítmény, amely a humán gamma-interferőn 2-30 terápiásán hatásos dózisát tartalmazza.
8. Az 5. igénypont szerinti készítmény, amelyben a nemionos detergens egy poliszorbát.
9. A 8. igénypont szerinti készítmény, amelyben az amelyben a amelyben a

-21izotonizáló anyag egy többértékű cukoralkohol.
10. A 9. igénypont szerinti készítmény, többértékű cukoralkohol mannit.
11. A 10. igénypont szerinti készítmény, konzerválószer fenol vagy benzil-alkohol.
12. Tartály, amely előzőleg nem liofilizált gammainterferon gyógyászatilag hatásos mmennyiségéből, a pH értékét kb. 4,0 és kb. 6,0 között tartó acetát pufferből, nemionos detergensből, izotonizáló anyagból és a fenol, a benzil-alkohol és egy benzetónium-halogenid közül választott konzerválószerből álló stabilis vizes gyógyászati készítményt tartalmaz.
13. A 12. igénypont szerinti tartály, amely egy fiola és a gamma-interferon terápiásán hatásos mennyiségének legalább két dózisát tartalmazza.
14. A 12. igénypont szerinti tartály, amely képes a benne levő készítményt injekció útján vagy aeroszol formájában adagolni.
15. Eljárás gamma-interferon vizes készítményben való stabilizálására, oly módon, hogy előzőleg nem liofilizált gamma-interferont vízzel, a pH értékét kb. 4,0 és kb. 6,0 között tartó acetát-pufferrel, nemionos detergenssel, izotonizáló anyaggal és a fenol, benzil-alkohol és egy benzetónium-halogenid közül választott konzerválószerrel kombinálunk.
16. Eljárás gamma-interferon intrapulmonáris adagolására, amely abban áll, hogy egy ilyen kezelést igénylő • · λ betegnek inhalálás útján aeroszol részecskéket adagolunk, amelyek előzőleg nem liofilizált gamma-interferon gyógyászatilag hatásos mennyiségét, a pH értékét kb. 4,0 és kb. 6,0 között tartó acetát puffért, izotonizáló anyagot és a fenol, a benzil-alkohol és egy benzetónium-halogenid közül választott konzerválószert tartalmaznak, ahol a részecskék mérete elég kicsi ahhoz, hogy lehetővé tegye a részecskéknek a tüdő léghólyagocskáiba és onnan a beteg véráramába való bejutását.