HU222248B1

HU222248B1 - Trombózis elleni hatású (aza-cikloalkil)-alkanoil-peptidek, -pszeudopeptidek és ezeket a vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények

Info

Publication number: HU222248B1
Application number: HU9600983A
Authority: HU
Inventors: Scott I. Klein; Bruce F. Molino
Original assignee: Aventis Pharmaceuticals Inc.
Priority date: 1993-10-15
Filing date: 1994-10-17
Publication date: 2003-05-28
Also published as: DE69426897D1; DE69426897T2; EP0812205A1; PL313975A1; CA2174097C; UA44258C2; AU8123794A; US5866685A; CZ291378B6; GR3035581T3; KR100304332B1; CZ108496A3; SG64919A1; CN1135717A; FI961634A0; NO961460D0; JPH09507213A; PT812205E; HK1006225A1; AU703854B2

Abstract

A találmány antitrombotikus hatású vegyületekre, közelebbről az (I)általános képletű (aza-cikloalkil)-alkanoil-pep- tidekre és -pszeudopeptidekre vonatkozik, amelyek emlősállatokban atrombocitaaggregációt és a trombusképződést gátolják. E vegyületekkóros állapotokkal, például szívizominfarktussal, hűdéssel, perifériásartériás megbetegedéssel és szóródó, intravaszkuláris koagulációvalkapcsolatos trombózis megelőzésére és kezelésére terá- piásanalkalmazhatók. A találmány szerinti vegyületek (I) általánosképletében B jelentése 1–7 szénatomos alkilcsoport, Z jelentése (a)általános képletű csoport, amelyben F jelentése 1–7 szénatomos alkil-,(3–9 szénatomos cikloalkil) (1–4 szénatomos alkil)-, adamantil-(1–4szénatomos al- kil)-, (3–8 szénatomos cikloalkil)- (3–8 szénatomoscikloalkil)-(1–4 szénatomos alkil)-, 3–8 szénatomos cikloalkil-, (8–12szénatomos bicikloalkil)-(1–4 szénatomos alkil)-, fenil-(1–4szénatomos alkil)-, naftil-(1–4 szénatomos alkil)- vagytetrahidronaftil-(1–4 szénatomos alkil)-csoport, G jelentése OR1 vagyNR1R2 általános képletű csoport – ahol R1 és R2 jelentése hidrogénatomvagy egymástól függetlenül adott esetben adamantilcsoporttalszubsztituált 1–4 szénatomos alkilcsoport, r értéke 0 vagy 1, m értéke2, 3 vagy 4, n értéke 1, 2, 3, 4, 5 vagy 6, és p értéke 1. A találmányaz (I) általános képletű vegyületek gyógyászati szempontbólelfogadható sóira, valamint mindezen vegyületeket hatóanyagkénttartalmazó gyógyászati készítményekre is vonatkozik. ŕ

Description

A leírás terjedelme 24 oldal (ezen belül 9 lap ábra)

HU 222 248 Β1 vagy tetrahidronaftil-(l-4 szénatomos alkilcsoport,

G jelentése OR¹ vagy NR'R² általános képletű csoport - ahol

R¹ és R² jelentése hidrogénatom vagy egymástól függetlenül adott esetben adamantilcsoporttal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoport, r értéke 0 vagy 1, m értéke 2, 3 vagy 4, n értéke 1,2, 3,4, 5 vagy 6, és p értéke 1.

A találmány az (I) általános képletű vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sóira, valamint mindezen vegyületeket hatóanyagként tartalmazó gyógyászati készítményekre is vonatkozik.

A találmány trombózis elleni (antitrombotikus) hatású vegyületekre vonatkozik. Közelebbről, a találmány olyan (aza-cikloalkil)-alkanoil-peptidekre és -pszeudopeptidekre vonatkozik, amelyek emlősállatokban a trombocitaaggregációt és trombusképződést gátolják, és alkalmazhatók trombózis megelőzésére és kezelésére, amely kóros állapotokkal, például szívizominfarktussal, hűdéssel, perifériás artériás megbetegedéssel és szóródó, éren belüli (intravaszkuláris) koagulációval (alvadással) kapcsolatos.

A hemosztázis (vérpangás, vérzéscsillapítás), a véralvadás biokémiája rendkívül összetett jelenség, aminek során a normális teljes vér és testszövet spontán módon megállítják a sérült véredényekből eredő vérzést. A hatékony hemosztázis megkívánja a vaszkuláris, trombocita- és plazmafaktorok egyesült aktivitását, valamint egy szabályozómechanizmust, amely a felesleges vérrögképződést meggátolja. E komponensek közül bármelyiknek a hiánya, a hiányossága vagy fölöslege vérzéshez vagy trombotikus következményekhez vezethet.

A trombociták tapadása, szóródása és halmozódása (aggregációja) az extracelluláris mátrixokon a trombusképződés központi folyamatait jelenti. Ezeket a folyamatokat tapadó glikoproteinek - azaz fibrinogén, fibronektin és von Willebrand-faktor - csoportja közvetíti. A fibrinogén a trombocitaaggregáció kofaktora, míg a fibronektin elősegíti a trombociták tapadási és szóródási reakcióit, és a von Willebrand-faktor a trombociták szubendoteliális mátrixokra kapcsolódásában és szóródásában játszik fontos szerepet. A fibrinogén, fibronektin és von Willebrand-faktor kötődési helye a trombocitamembrán-protein komplexen van, amely glikoprotein Ilb/IIIa néven ismert.

A tapadó glikoproteinek - így a fibrinogén - a normális, nyugvó trombocitákhoz nem kötődnek. Ha azonban a trombocitát egy agonista - például trombin vagy adenozin-difoszfát - aktiválja, akkor a trombocita megváltoztatja az alakját, esetleg úgy, hogy a glikoprotein Ilb/IIIa (az alábbiakban rövidítve: GPIIb/IIIa) kötési helyét a fibrinogén számára hozzáférhetővé teszi. A találmány körébe tartozó vegyületek a fibrinogénreceptort blokkolják, így a trombocitaaggregációt és az ezt követő trombusképződést megakadályozzák; és az ilyen vegyületeket tartalmazó gyógyászati készítmények alakjában adagolva trombogén (vérrögképződéssel járó) betegségek, például szívizominfarktus, hűdés, perifériás artériás megbetegedés és szóródó intravaszkuláris véralvadás megelőzésére és kezelésére alkalmazhatók.

Megfigyelték, hogy a fibrinogénben, fibronektinben és a von Willebrand-faktorban ezeknek a sejtfelületi receptorral végbemenő kölcsönhatásához az Arg-GlyAsp (RGD) jelenléte szükséges [E. Rupsilahti, Pierschbacher: Cell 44, 517-518 (1986)]. Úgy látszik, hogy a fibrinogénnek a trombocitához kapcsolódásában még két további aminosavszekvencia vesz részt, ezek a GlyPro-Arg szekvencia, valamint a His-His-Leu-Gly-GlyAla-Lys-Gln-Ala-Gly-Asp-V al dodekapeptidszekvencia. Kimutatták, hogy kisméretű szintetikus peptidek, amelyek az RGD-t vagy a fenti dodekapeptidet tartalmazzák, a trombocita GPIIb/IIIa receptorhoz kapcsolódnak, és így kompetitíven gátolják a fibrinogén, fibronektin és a von Willebrand-faktor kötődését, továbbá megakadályozzák az aktivált trombociták aggregációját [Plow és munkatársai: Proc. Natl. Acad Sci. ÚSA 82, 8057-8061 (1986); Ruggeri és munkatársai: Proc. Natl. Acad Sci. USA 5708-5712 (1986); Ginsberg és munkatársai: J. Bioi. Chem. 260, 3931-3936 (1985); valamint Gartner és munkatársai: J. Bioi. Chem. 260, 11 891-11 894(1987)].

Tjoeng és munkatársai az 5 037 808 és 4 879 313 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásokban közölték, hogy guanidino-alkanoil- és guanidino-alkenoil-aszparaginoil-egységeket tartalmazó indolilszármazékok trombocitaaggregációt gátló hatással rendelkeznek.

Tjoeng és munkatársai az 1991. február 12-én kiadott 4 992 463 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban általánosságban közölték, hogy aril- és aralkil-guanidino-alkil-szerkezetű peptidmimetikus vegyületek trombocitaaggregációt gátló hatással bírnak; konkrétan mono- és dimetoxi-fenil típusú peptidmimetikus vegyületek csoportját, valamint egy bifenil-alkil-csoportos peptidmimetikus vegyületet ismertettek.

Adams és munkatársai az 1989. augusztus 15-én kiadott 4 857 508 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban általánosan közölték, hogy terminálisán aralkilszubsztituenseket tartalmazó guanidino-alkil-peptid-származékok gátolják a trombocitaaggregációt; konkrétan ismertették terminális amid funkciós csoportot tartalmazó O-metil-tirozin-, bifenil-, és naftilszármazékok csoportjait.

D. M. Haverstick és munkatársai [Blood 66, 948-952 (1986)] közölték, hogy számos szintetikus peptid - ezek között az Arg-Gly-Asp-Ser és Gly-Arg-Gly-Asp-Ser - a trombin indukálta trombocitaaggregációt gátolja.

E. F. Plow és munkatársai [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 79, 3711-3715 (1982)] ismertették, hogy a glicil2

HU 222 248 Β1

L-prolil-L-arginil-L-prolin tetrapeptid a fibrinogénnek emberi trombocitákhoz kötődését gátolja.

Az 1986. december 15-én benyújtott 86/17607 számú francia szabadalmi bejelentésben leírták, hogy az -Arg-Gly-Asp- szekvenciát tartalmazó tetra-, penta- és hexapeptidszármazékok trombózis elleni hatóanyagokként alkalmazhatók.

Zimmermann és munkatársai a 4 683 291 számú, 1987. július 28-án kiadott egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölték, hogy 6-40 aminosavból álló, az -Arg-Gly-Asp- szekvenciát tartalmazó peptideknek trombocitakötődést gátló hatásuk van.

Az 1988. június 7-én publikált 0 319 606 számú európai szabadalmi bejelentésben ismertették, hogy az -Arg-Gly-Asp- szekvenciát tartalmazó tetra-, penta- és hexapeptidszármazékok trombocitaaggregációt gátló hatással rendelkeznek.

Az 5 023 233 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban közölték, hogy a Gly-Asp egységet tartalmazó gyűrűs peptidanalógok fíbrinogénreceptor-antagonisták.

Az 1991. március 28-án, 1990. június 7-én, illetve 1990. január 4-én benyújtott 07/677,006,07/534,384, illetve 07/460,777 számú, vizsgálat alatt álló egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésekben, továbbá a 4 952 562 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban, valamint az 1990. szeptember 26-án benyújtott PCT/US90/05448 számon benyújtott nemzetközi szabadalmi bejelentésben - amelyek engedményese a jelen találmány engedményesével azonos - közölték, hogy amino-, guanidino-, imidazolil- és/vagy amidino-alkanoil- és alkenoilegységeket tartalmazó peptidek és pszeudopeptidek trombózis elleni hatóanyagok.

A vizsgálat alatt álló, 1990. február 5-én benyújtott 07/475,043 számú egyesült államokbeli szabadalmi bejelentésben, valamint az 1991. április 11-én benyújtott, 1992. október 29-én WO 92/13117 számon közzétett US91/02471 számú PCT nemzetközi szabadalmi bejelentésben - amelyek engedményese a jelen találmány engedményesével azonos - közölték, hogy amino- és guanidino-alkil-, alkenil-benzoil-, fenil-alkanoil-, valamint fenil-alkenoil-egységeket tartalmazó peptidek és pszeudopeptidek antitrombotikus hatóanyagok.

Az 1989. december 1-jén benyújtott 5 063 392 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban - amelynek engedményese és feltalálói a jelen találmányéval azonosak - ismertették, hogy alkanoil- és szubsztituált alkanoil-(aza-cikloalkil)-formil-aszparaginsav-származékok a trombocitaaggregációt gátolják.

Az 1990. április 5-én benyújtott 5 064 814 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban - amelynek feltalálói és engedményese a jelen találmányéval azonosak - közölték, hogy N-szubsztituált (aza-cikloalkil)karbonil-szerkezetű, gyűrűs amino-acil-aszparaginsavszármazékok antitrombotikus hatással bírnak. Az 1989. október 10-én benyújtott 5 051 405 számú egyesült államokbeli szabadalmi leírásban - amelynek engedményese a jelen találmány engedményesével azonos - közük, hogy (aza-cikloalkil)-formil-glicil-aszparaginsavszármazékok antitrombotikus hatással rendelkeznek.

Az 1992. április 8-án publikált 0 479 481 számú európai szabadalmi bejelentésben ismertették, hogy egyes (aza-cikloalkil)-alkanoil-glicil-aszparaginoil-aminosavak fibrinogénreceptor-antagonista hatásúak.

Az 1992. április 1-jén publikált 0 478 382 számú európai szabadalmi bejelentésben fibrinogénreceptorantagonista hatású (aza-cikloalkil)-alkanoil-peptidil-Palaninokat közöltek.

A találmány olyan (aza-cikloalkil)-alkanoil-peptidekre és -pszeudopeptidekre vonatkozik, amelyek a trombocitaaggregációt és a trombusképződést (vérrögképződést) gátolják. E vegyületek szerkezetét az (I) általános képlet fejezi ki, ahol

B jelentése 1-7 szénatomos alkilcsoport,

Z jelentése (a) általános képletű csoport, amelyben

F jelentése 1-7 szénatomos alkil-, (3-9 szénatomos cikloalkil)-(l-4 szénatomos alkil)-, adamantil-(l -4 szénatomos alkil)-, (3-8 szénatomos cikloalkil)- (3-8 szénatomos cikloalkil)-(l—4 szénatomos alkil)-, 3-8 szénatomos cikloalkil-, (8-12 szénatomos bicikloalkil)(1-4 szénatomos alkil)-, fenil-(l-4 szénatomos alkil)-, naftil-(l-4 szénatomos alkil)vagy tetrahidronaftil-(l-4 szénatomos alkil)csoport,

G jelentése OR¹ vagy NR*R² általános képletű csoport - ahol

R¹ és R² jelentése hidrogénatom vagy egymástól függetlenül adott esetben adamantilcsoporttal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoport, r értéke 0 vagy 1, m értéke 2, 3 vagy 4, n értéke 1,2, 3, 4, 5 vagy 6, és p értéke 1.

A találmány a fenti (I) általános képletű vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sóira is vonatkozik.

A találmány továbbá azokra a gyógyászati készítményekre is kiteljed, amelyek ezeket a vegyületeket tartalmazzák.

A találmányra jellemző, hogy a fenti (I) általános képletű vegyületek kifejezett és tartós antitrombotikus hatást fejtenek ki.

„Alkilcsoport” telített alifás szénhidrogéncsoportot jelent, amely egyenes vagy elágazó szénláncú, a láncban 1-7 szénatomot tartalmazó csoport lehet. Az „elágazó” kifejezés azt jelenti, hogy egy lineáris alkillánchoz rövid szénláncú alkilcsoport, például metil-, etil- vagy propilcsoport kötődik. A legelőnyösebb rövid szénláncú alkilcsoportok körülbelül 1-6 szénatomosak.

„Cikloalkilcsoport” egy vagy több gyűrűt tartalmazó, körülbelül 3-9 szénatomos, telített karbociklusos csoportot jelent.

Cikloalkilcsoportokként előnyösek például: a ciklopropil-, ciklobutil-, ciklopentil-, ciklohexil-, cikloheptilcsoport.

„Cikloalkil-alkil-csoport” cikloalkilcsoporttal szubsztituált alkilcsoportot jelent. Előnyös cikloalkil-al3

HU 222 248 Β1 kil-csoport például a ciklopentil-metil-, ciklohexil-metil-, ciklohexil-etil-csoport.

Találmány szerinti vegyületek a következők: N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-valin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -D-valin,

N- {N-[N-[3-(piperidin-4-il)-propanoil]-N-etil-glicil]aszparaginoil}-valin,

N-{N-[N-[5-(piperidin-4-il)-pentanoil]-N-etil-glicil]aszparaginoil} -valin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -L-oc-ciklohexil-glicin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-P-ciklohexil-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -norleucin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-oc-(2,2-dimetil-prop-3-il)-glicin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -L-p-(dekahidronaft-1 -il)-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-oc-(2-ciklohexil-etil)-glicin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -fenil-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -L-p-naft-l -il-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-p-naft-2-il-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-P-ciklohexil-alanin-amid,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-p-ciklohexil-alanin-(etil-észter),

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-P-(cisz-dekahidronaft-2-il)-alanin, (3-adamant-l-il-propil)-N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginát,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-P-ciklohexil-D-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} - P-(dekahidronaft-1 -il)-alanin, N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-gliciI]-aszparaginoilj-p-ciklohexil-alanin-etil-amid,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-P-ciklooktil-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-oc-(ciklohexil-metil)-etanol-amin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-p-(ciklohexil-metil)-alanin-amid,

N- {N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -β-adamant-1 -il-alanin, N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]aszparaginoil }-β-(1,2,3,4-tetrahidronaft-6-il)-alanin,

N-{N-(N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-(4-ciklohexil)-ciklohexil-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoilj^-cikloheptil-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} - β-ciklooktil-alanin-amid,

N-{N-|N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-(ciklohexil-propil)-glicin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-(ciklooktil-metil)-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-ciklopentil-alanin és

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-(ciklohexil-metil)-alanin-(etil-észter), valamint e vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói.

A találmány szerinti vegyületek aszimmetriacentrumokat tartalmaznak. Ezek az aszimmetriacentrumok egymástól függetlenül (R)- vagy (S)-konfigurációban lehetnek. A találmány mind az egyedi (tiszta) sztereoizomerekre, mind keverékeikre vonatkozik.

A találmány szerinti vegyületek felhasználhatók szabad bázis vagy sav, vagy gyógyászati szempontból elfogadható sók alakjában. Mindezen formák a találmány oltalmi körébe tartoznak.

Amennyiben egy találmány szerinti vegyület bázisos egységgel szubsztituált, savaddíciós sói képezhetők, amelyek a felhasználás szempontjából célszerűbbek; a gyakorlatban a sóforma használata egyenlő értékű a szabad bázis alkalmazásával. A savaddíciós sók előállításához előnyösen olyan savak használhatók, amelyek a szabad bázissal egyesítve gyógyászati szempontból elfogadható, tehát olyan sókat eredményeznek, amelyek - a sók szükséges gyógyászati dózisaiban adagolva - az állati szervezet számára nem toxikusak, s így a szabad bázis kedvező antitrombotikus sajátságait az anionok rovására írható mellékhatások nem rontják. Jóllehet az említett bázisos vegyületeknek a gyógyászati szempontból elfogadható sói előnyösek, valamennyi savaddíciós só hasznos termék, mint a szabad bázisforma forrása, például abban a konkrét esetben, amikor a sóforma csak közbenső tennék szerepét játssza, például, ha az adott sót csak tisztítás vagy azonosítás céljára képezzük; vagy ha közbenső termékként szerepel egy gyógyászati szempontból elfogadható só ioncserélő folyamat útján végzett előállításában. A találmány oltalmi körébe tartozó, gyógyászati szempontból elfogadható sókat kapunk például a következő savakból: ásványi savak, így a sósav, kénsav, foszforsav és szulfaminsav; szerves savak, így az ecetsav, citromsav, tejsav, borkősav, malonsav, metánszulfonsav, etánszulfonsav, benzolszulfonsav, p-toluolszulfonsav, ciklohexil-szulfaminsav, kininsav. Az e savaknak megfelelő savaddíciós sók: a hidroklorid, szulfát, foszfát, szulfamát, acetát, citrát, laktát, tartarát, malonát, metánszulfonát, etánszulfonát, benzolszulfonát, p-toluolszulfonát, ciklohexilszulfamát, illetve kinát.

A találmány szerinti savaddíciós sókat úgy állítjuk elő, hogy a szabad bázist a megfelelő savat tartalmazó vizes vagy vizes-alkoholos oldatban vagy más, alkalmas oldószenei készült oldatban feloldjuk, majd a sót az oldat bepárlásával izoláljuk; vagy a szabad bázist és savat olyan szerves oldószerben reagáltatjuk, amelyből a só közvetlenül kiválik, vagy az oldat töményítésével nyerhető.

HU 222 248 Bl

Ha egy találmány szerinti vegyület savas jellegű szerkezeti egységgel szubsztituált, akkor ebből bázisaddíciós sók alakíthatók ki, amelyek a felhasználás szempontjából célszerűbb formát jelentenek; a gyakorlatban a sóforma alkalmazása egyenértékű a szabad savforma használatával. Az ilyen bázisaddíciós sók előállításához előnyösen olyan bázisok alkalmazhatók, amelyek szabad savval végzett egyesítése gyógyászati szempontból elfogadható sókat, tehát olyan sókat eredményez, amelyek kationjai az adott sók gyógyászati dózisaiban adagolva az állati szervezet számára nem toxikusak, s így a szabad sav kedvező hatású antitrombotikus sajátságait a kationok rovására írható mellékhatások nem rontják. A találmány szerinti, gyógyászati szempontból elfogadható sók állíthatók elő például az alábbi bázisokból: nátrium-hidroxid, kálium-hidroxid, kalcium-hidroxid, alumínium-hidroxid, lítium-hidroxid, magnézium-hidroxid, cink-hidroxid, ammónia, etilén-diamin, N-metil-glükamin, lizin, arginin, omitin, kolin, N,N’-dibenzil-etilén-diamin, klór-prokain, dietanol-amin, prokain, N-benzil-fenetil-amin, dietil-amin, piperazin, trisz(hidroxi-metil)-amino-metán, tetrametil-ammónium-hidroxid és ezekhez hasonló bázisok.

A találmány szerinti vegyületek fémsói úgy állíthatók elő, hogy a választott fém hidroxidját, karbonátját vagy hasonló reakcióképes vegyületét vizes oldószerben a vegyület szabad sav formájával érintkezésbe hozzuk. A vizes oldószer lehet víz, vagy víz és valamilyen szerves oldószer keveréke, előnyösen víz és valamilyen alkohol, például metanol vagy etanol keveréke; vagy víz és valamilyen keton, például aceton keveréke; vagy víznek alifás éterrel vagy tetrahidrofuránnal, vagy valamilyen észterrel, például etil-acetáttal képzett keveréke. Ezeket a reakciókat normális körülmények között környezeti hőmérsékleten hajtjuk végre, kívánt esetben azonban melegítéssel is végezhetők.

A találmány szerinti vegyületek aminokkal alkotott sói úgy állíthatók elő, hogy egy amint vizes oldószerben a vegyület szabad sav formájával hozunk kölcsönhatásba. E célra alkalmas, vizes oldószerek például: a víz, valamint a víznek alkoholokkal, például metanollal vagy etanollal, éterekkel, például tetrahidrofuránnal, nitrilekkel, például acetonitrillel vagy ketonokkal, így acetonnal alkotott keverékei. Az aminosavsók hasonlóképpen állíthatók elő.

A találmány szerinti vegyületek az alábbiakban ismertetett reakciósorokkal megegyezően, vagy a technika állása szerint ismert módszerekkel állíthatók elő. A találmány szerinti vegyületek előállításához alkalmazott kiinduló anyagok ismertek vagy kereskedelmi forgalomból beszerezhetők; vagy ismert módszerekkel, vagy az alábbiakban leírt konkrét reakciósorokkal állíthatók elő.

A találmány szerinti vegyületek könnyen előállíthatok standard, szilárd fázisú vagy oldatfázisú peptidszintézis-eljárásokkal, vegyi anyagokat gyártó cégektől beszerezhető kiinduló anyagokkal és/vagy könnyen beszerezhető közbenső termékek alkalmazásával. Ilyen gyártó cégek például az Aldrich vagy a Sigma cég [H. Paulsen és munkatársai: „O-glikopeptid-szekvenciák szilárd fázisú szintézise” (angolul), Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 27, (1968); H. Mergier és munkatársai: „Szilárd fázisú és oldatos módszerek kombinációjával végzett peptidszintézis” (angolul), I.: „Új, erősen savlabilis kötőcsoport teljesen védett fragmentumok szilárd fázisú szintézisére” (angolul), Tetrahedron Letters 29, 4005 (1988); R. B. Merrified: „Szilárd fázisú peptidszintézis 25 év múltán: a glukagon antagonistáinak tervezése és szintézise” (angolul), Makromol. Chem. Macromol. Symp. 19, 31 (1988)].

A találmány szerinti vegyületek előállításának egy előnyös módszerét az oldatfázisos módszer útján az 1. reakcióvázlatban körvonalazzuk.

Az 1. reakcióvázlatban

B, F, G, m, n, p és r jelentése a fentiekben meghatározott;

F’, G’ jelentése F, G jelentésével azonos; vagy azok védett formában lévő analógjai; vagy azoknak megfelelő prekurzor szubsztituensek; és

P_b P₂ és P₃ aminosav-védőcsoportok.

A találmány szerinti vegyületek általában úgy kaphatók, hogy előbb a megfelelő aminosavat vagy más, megfelelő Z csoport prekurzort - ahol Z jelentése a fenti - mely szabad primer vagy szekunder amint tartalmaz, az aszparaginsav valamely védett származékának szabad karbonsavegységével kapcsolunk.

Az aszparaginsavnak olyan funkciós csoportjait - vagy a Z csoport prekurzor olyan funkciós csoportjait -, amelyeket nem kívánunk kapcsolási reakcióba vinni, a szükséges helyeken védőcsoportokkal látjuk el, hogy a kapcsolási folyamat során a mellékreakciókat elkerüljük. Ilyen szerkezeti részek például azok az aminosavszármazékok és (aza-cikloalkil)-alkánsav-származékok, amelyeket a következő szintetikus lépésekben használunk fel. Alkalmas védő- (blokkoló-) csoportok például: az N-octerc-butoxi-karbonil- (BOC), benzil-oxi-karbonil(CBZ), benzil-, metil-, terc-butil-, 9-(fluorenil-metoxi)karbonil- (FMOC), 2-(trimetil-szilil)-etil-, és a 4-metoxi2,3,6-trimetil-benzolszulfonil-csoport.

Az aszparaginsavnak egyik előnyös, védett származéka a BOC-aszparaginsav-p-benzil-észter. A kapcsolást ismert módszerekkel végezzük. A kapcsolásnak egy előnyös módszere abban áll, hogy az amint és a karbonsavat megfelelő, aprotikus szerves oldószerben - például metilén-kloridban vagy dimetil-formamidban (DMF) megfelelő kapcsolószer jelenlétében kapcsoljuk. Előnyös kapcsolószer az izopropil-(klór-formiát) N-metil-piperidin jelenlétében. Egy másik kapcsolószer például az l-(3-dimetil-amino-propil)-3-etil-karbodiimid-hidroklorid (EDC) 1-hidroxi-benzotriazol (HOBT) és trietil-amin jelenlétében. Egy másik, előnyös kapcsolószer a bisz(2oxo-3-oxazolidinil)-foszfonsav-klorid (BOP-C1) trietilamin jelenlétében.

Az így kapott, védett termékből a védőcsoportot szelektíven eltávolítjuk ismert módszerekkel, s így az aszparaginsav szerkezeti egység N-terminális szabad aminjához jutunk. A BOC-csoport eltávolítására előnyösen úgy járunk el, hogy a védett származékot aprotikus szerves oldószerben, például metilén-kloridban trifluor-ecetsavval kezeljük.

HU 222 248 Bl

Az így kapott, védőcsoport nélküli terméket ezt követően egy szabad karboxilcsoportot tartalmazó, megfelelő N-védett-N-szubsztituált glicin- vagy β-alaninszármazékkal kapcsoljuk, majd az így előállított termékből az N-védőcsoportot eltávolítjuk. Az így kapott szabad amint a megfelelő, védett formában lévő (azacikloalkil)-alkánsawal kapcsoljuk, és az így kapott termékből a védőcsoportot ismert módszenei eltávolítva jutunk a végtermékhez.

A találmány egy másik előnyös kiviteli módja szerint úgy járunk el, hogy a jól ismert szilárd fázisú módszereket alkalmazzuk. A szilárd fázisú módszer során a C-terminális maradékot egy oldhatatlan gyanta karboxilcsoportjához kötjük; így például ez a maradék p-alkoxibenzil-alkohol gyanta-észter alakjában köthető meg. Ezután olyan módon, amely az oldatfázisos módszerhez hasonló, a védett aminosavat vagy más maradékokat adjuk hozzá mindaddig, amíg a gyantán a teljes szekvencia fel nem épül. Ezután a vegyületből a védőcsoportokat eltávolítjuk, majd a gyantáról standard módszerek alkalmazásával felszabadítva kapjuk a célvegyületet.

A találmány szerinti vegyületek vagy közbenső termékeik előállítása során továbbá kívánatos vagy szükséges lehet mellékreakciók elkerülése olyan, kémiailag aktív szubsztituensek között, amelyek a természetes eredetű vagy más aminosavakban jelen lévő szubsztituensektől eltérők. A szubsztituensek standard blokkolócsoportokkal védhetők, amelyek a következőkben eltávolíthatók vagy megtarthatók kívánalom szerint, ismert módszerekkel, s így a kívánt termékekhez vagy intermedierekhez jutunk [lásd például: Green: „Védőcsoportok a szerves szintézisben” (angolul), Wiley, New York (1981)]. A szelektív védelem vagy a védőcsoportok szelektív eltávolítása azért is szükséges vagy kívánatos lehet, hogy már meglévő szubsztituensek átalakítása vagy eltávolítása lehetővé váljék, vagy a kívánt végtermék előállítására szolgáló, soron következő reakciót lehetővé tegyük.

A találmányt az alábbi szemléltető példákban tovább részletezzük. Ha erre vonatkozó más megjegyzést nem teszünk, akkor a királis oc-szénatomot tartalmazó ac-aminosavak L-konfigurációban vannak.

Ha külön meg nem jegyezzük, akkor a tömegszínkép-elemzési adatokat a „Low Resolution Fást Atom Bombardment” (Kis feloldású, gyors-atombombázásos) módszerrel a VG 70SE műszerrel vettük fel, és így az (M+H)+ értékek „számítottak”. A magmágneses rezonancia színképi adatait D₂O-ban Brucker ACF 300 eszközzel vettük fel. A „flash” kromatográfiát (gyorskromatográfiát) szilikagélen végeztük. A túlnyomásos folyadékkromatográfiás (HPLC) vizsgálatokat Dynamex 60 A 8 μ C-18 fordított fázisú oszlopon végeztük.

1. példa

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-β-ciklohexil-alanin [(III) képletű vegyület]

A) 1,12 g β-ciklohexil-alanin és 50 ml metanol oldatába körülbelül 15 percig hidrogén-klorid-gázt buborékoltatunk, utána az oldatot vákuumban bepároljuk, és a maradékhoz toluolt adva azeotróposan bepároljuk, így a β-ϋΐΗοΙίβχίΙ-Ε-βΙηηΐη-ίπιβίϊΙ-έβζίεΓ)-! hidrokloridja alakjában kapjuk.

B) 1,27 g BOC-L-aszparaginsav^-benzil-észter és 20 ml metilén-klorid oldatát 0 °C-ra hűtjük, és előbb 0,48 ml N-metil-piperidint, majd utána 3,94 ml izopropil-(klór-formiát)-ot adunk hozzá. A reakcióelegyet 0 °C-on körülbelül 2 percig keverjük, majd 0,88 g βciklohexil-L-alanin-metil-észter-hidrokloridot teszünk hozzá, szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és másnapig keveijük. Ekkor az oldatot vákuumban bepároljuk, és a maradékot 200 ml etil-acetát és 50 ml 1 n sósavoldat között megoszlatjuk. A szerves fázist 1 n sósavoldattal, utána telített nátrium-hidrogén-karbonátoldattal, majd konyhasóoldattal mossuk, vízmentes magnézium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így N-[BOC-L-aszparaginoil-$-benzil-észter)]^-ciklohexil-L-alanin-metil-észterhez jutunk.

C) 2,01 g N-[BOC-L-aszparaginoil-^-benzil-észter)]^-ciklohexil-alanin-metil-észter és 15 ml metilénklorid oldatát 0 °C-ra hűtjük, és körülbelül 1 perc alatt 5 ml trifluor-ecetsavat adagolunk hozzá. Az oldatot 0 °C-on 2 órán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk, a maradékot etil-acetátban felvesszük, és a szerves oldatot telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal addig mossuk, amíg a mosófolyadék bázisossá nem válik. A szerves oldatot konyhasóoldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, szűrjük, vákuumban bepároljuk, s így L-aszparaginoil-^-benzil-észter)^-ciklohexil-L-alanin-metil-észtert kapunk.

D) Lényegében ezen 1. példa fenti B) lépésében leírt kapcsolási eljárással, lényegében a fenti 1. példa C) lépésében leírt védőcsoport-eltávolítási folyamattal L-aszparaginoil-^-benzil-észter)^-ciklohexil-L-alanin-metil-észterből és N-BOC-N-etil-glicinből N-[etilglicil-L-aszparaginoil-^-benzil-észter)]-L^-ciklohexil-L-alanin-metil-észtert állítunk elő.

E) 100 ml ecetsavban 10 g 4-piridin-ecetsavhoz 1,0 g platina-oxidot adunk, és a keveréket körülbelül 16 órán át 345 kPa hidrogénnyomás alatt rázatjuk. Ekkor a reakcióelegyet szűrjük, és az oldatot vákuumban bepároljuk. A maradékról azeotróposan toluolt desztillálunk le, s így 2-(piperidin-4-il)-ecetsavat kapunk.

F) 11,6 g 2-(piperidin-4-il)-ecetsavat 200 ml 1 N vizes nátrium-hidroxid-oldatban oldunk, 0 °C-ra hűtjük, és 100 ml tetrahidrofuránban (THF) oldott 18,0 g di(terc-butil)-dikarbonátot csepegtetünk hozzá. A reakcióelegyet szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és körülbelül 18 órán át keveijük. Ekkor a keveréket vákuumban bepároljuk a THF eltávolítására, a maradékot vízben felvesszük, és etil-acetáttal mossuk. A vizes fázishoz etil-acetátot adunk, és ezt a keveréket 1 n sósavval savanyítjuk. Elkülönítés után a vizes réteget etil-acetáttal extraháljuk. Az egyesített szerves fázist rendre vízzel, konyhasóoldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így NBOC-2-(piperidin-4-il)-ecetsavat kapunk.

G) 15,8 g N-BOC-2-(piperidin-4-il)-ecetsav 150 ml THF-nal készült oldatához 70 ml 1 mol/1 THF6

HU 222 248 Bl os boránoldatot csepegtetünk. Az oldatot szobahőmérsékleten körülbelül 20 órán át keveijük, majd 200 ml 1 n nátrium-hidroxid-oldatot csepegtetünk hozzá. A THF-t vákuumban lepároljuk, a vizes maradékot etilacetáttal extraháljuk. Az etil-acetátos oldatot vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így N-BOC-2-(piperidin-4-il)-etanolt nyerünk.

H) 11,8 g oxalil-klorid és 180 ml metilén-klorid oldatát -78 °C-ra hűtjük, és 8,9 ml dimetil-szulfoxidot (DMSO) csepegtetünk hozzá. A kapott oldatot körülbelül 3 percig -78 °C-on keverjük, majd körülbelül 10 perc alatt 250 ml metilén-kloridban oldott 14,3 g NBOC-2-(piperidin-4-il)-etanolt adagolunk hozzá. Az oldatot körülbelül 1 órán át keveqük, majd körülbelül 15 perc alatt 21,6 g N-metil-morfolint adagolunk hozzá. Az oldatot szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, majd körülbelül 30 perc múlva 68,6 g (trifenil-foszforanilidén)-ecetsav-metil-észtert adunk hozzá. Az oldatot szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át keverjük, majd vákuumban bepároljuk, és a maradékot etilacetátban felvesszük. Az etil-acetátos oldatot előbb vízzel, utána 5 t% sósavval, 5 t%-os nátrium-hipoklorit-oldattal, ismét vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, vízmentes nátrium-szulfáton szárítjuk, szüljük, vákuumban bepároljuk. így 4-(N-BOC-piperidin-4-il)transz-krotonsav-metil-észterhez jutunk.

I) 11,6 g 4-(N-BOC-piperidin-4-il)-transz-krotonsav-metil-észter és 200 ml metanol oldatához 3 g 10 t%-os csontszenes palládiumkatalizátort adunk, és az elegyet 18 órán át 345 kPa hidrogénnyomás alatt rázatjuk. Ezután az elegyet szüljük, a szűrlethez friss katalizátort adunk, és a hidrogénezést megismételjük. Ezt követően az elegyet szüljük, és vákuumban bepárolva 4-(N-BOC-piperidin-4-il)-vajsav-metil-észtert nyerünk.

J) 100 g 1 N vizes nátrium-hidroxid-oldat és 200 ml metanol elegyéhez 10,1 g 4-(N-BOC-piperidin-4-il)-vajsav-metil-észtert adunk, és az elegyet szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át keverjük. Az elegyet vákuumban bepároljuk, a maradékot vízzel hígítjuk, és éterrel mossuk. A vizes fázist 5 t%-os sósavval savanyítjuk, etil-acetáttal extraháljuk, és a szerves oldatot előbb vízzel, majd konyhasóoldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így 4-(N-BOC-piperidin-4-il)-vajsavat kapunk.

K) 0,91 g 4-(N-BOC-piperidin-4-il)-vajsav és 50 ml metilén-klorid oldatát 0 °C-ra hűtjük, majd 0,86 g bisz(2-oxo-3-oxazolidinil)-foszfinsav-kloridot (BOP-C1) és 0,47 ml trietil-amint adunk hozzá. Az oldatot 0 °C-on körülbelül 10 percig keveqük, ekkor minimális mennyiségű metilén-kloridban oldott 1,52 g Netil-glicil-L-aszparaginoil-(P-benzil-észter)-L-p-ciklohexil-L-alanin-metil-észtert adunk hozzá, majd 0,47 ml trietil-amin metilén-kloridos oldatát csepegtetjük hozzá körülbelül 15 perc alatt. A reakcióelegyet 0 °C-on körülbelül 1 órán át, majd szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át keverjük, utána vákuumban bepároljuk, és a maradékot etil-acetátban felvesszük. A szerves oldatot n sósavval mossuk, utána telített nátrium-hidrogénkarbonát-oldattal, konyhasóoldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, szüljük, vákuumban bepároljuk, és a maradékot gyorskromatográfiával tisztítjuk. Eluálószerként 60 térfogat% etil-acetátot tartalmazó hexánt alkalmazva N-{N-[N-[4-(N-BOC-piperidin-4-il)butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil-(p-benzil-észter)}-P-ciklohexil-alanin-metil-észterhez jutunk.

L) 1,79 g N- {N-[N-[4-(N-BOC-piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil-(P-benzil-észter)}β-ciklohexil-alanin-metil-észter és 40 ml metanol oldatához 0,25 g 10 t%-os csontszenes palládiumkatalizátort adunk, és az elegyet 345 kPa hidrogénnyomás alatt körülbelül 18 órán át rázatjuk. Ezután az elegyet cellitrétegen szüljük, és a szűrletet vákuumban bepároljuk, így N- {N-[N-[4-(N-BOC-piperidin-4-il)-butanoil]-Netil-glicil]-aszparaginoil^-ciklohexil-alanin-metil-észtert kapunk. Ezt az észtert 20 ml metanolban oldjuk, és 10 ml 1 n vizes nátrium-hidroxid-oldat hozzáadása után szobahőmérsékleten körülbelül 4 órán át keveqük. Ekkor 25 ml vízzel hígítjuk, és 1 n sósavval pH 2-ig savanyítjuk. A keveréket háromszor extraháljuk 100 ml etil-acetáttal, az egyesített etil-acetátos oldatot magnézium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így N-{N-[N-[4-(N-BOC-piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-ciklohexil-alanint nyerünk.

M) 1,39 g N-{N-[N-[4-(N-BOC-piperidin-4-il)butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-ciklohexil-alanin és 15 ml metilén-klorid oldatát 0 °C-ra hűtjük, 5 ml trifluor-ecetsavat adunk hozzá, és az oldatot körülbelül 2,5 órán át 0 °C-on keveqük. Ekkor az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot vízzel hígítjuk, lefagyasztjuk, és liofílizáljuk. Az így kapott maradékot fordított fázisú HPLC eljárással tisztítjuk; eluálószerként vízben 40-80 térfogat% metanolt tartalmazó gradienselegyeket alkalmazunk, amelyek 0,1 térfogat% trifluorecetsavat tartalmaznak. A megfelelő frakciókat egyesítjük, liofílizáljuk, így N-{N-[N-[4-(N-BOC-piperidinil)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginonil} -β-ciklohexil-alanint kapunk trifluor-acetátja alakjában.

MS: számított érték: 525, talált: 525;

•H-NMR, 8: 4,58-4,48 (m, 1H), 4,35-4,22 (m, 1H),

3,88 (s, 2H), 3,32 (q, 2H), 3,28-3,10 (m, 2H),

2,88-2,60 (m, 4H), 2,33 (t, 2H), 1,85-1,70 (m,

2H), 1,62-1,35 (m, 10H), 1,30-1,08 (m, 5H),

1,04-0,65 (m, 3H).

Lényegében a fenti 1. példában leírt eljárások alkalmazásával állítottuk elő az alábbi vegyületeket a megfelelő kiinduló anyagokból.

2. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil-valin [(IV) képletű vegyület]

MS: számított érték: 471, talált: 471;

•H-NMR, δ: 4,15-4,05 (m, 2H), 3,90 (2,2H), 3,30 (q,

2H), 3,30-3,15 (m, 2H), 2,90-2,60 (m, 4H), 2,33 (t, 2H), 2,05 (q, 1H), 1,85-1,72 (m, 2H), 1,55-1,35 (m, 3H), 1,30-1,08 (m, 4H), 1,02 (t, 3H), 0,70 (d,

6H).

HU 222 248 BI

3. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]aszparaginoil}-fenil-alanin [(V) képletű vegyület]

MS: számított érték: 518; talált: 518;

Ή-NMR, δ: 7,20-6,95 (m, 5H), 4,55-4,35 (m, 2H), 3,73 (s, 2H), 3,30-2,40 (m, 10H), 2,25 (t, 2H), 1,75-1,60 (m, 2H), 1,45-1,25 (m, 3H), 1,20-0,97 (m, 4H), 0,92 (t, 3H).

4. példa

N- {N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-D-valin [(VI) képletű vegyület]

MS: számított érték: 471; talált: 471;

Ή-NMR, δ: 4,10-3,98 (m, 2H), 3,85 (s, 2H), 3,28 (q, 2H), 3,23-3,10 (m, 2H), 2,82-2,58 (m, 4H), 2,28 (t, 2H), 2,02 (q, 1H), 1,80-1,65 (m, 2H), 1,50-1,28 (m, 3H), 1,25-1,00 (m, 4H), 0,95 (t, 3H), 0,78-0,65 (m, 6H).

5. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-a-(2,2-dimetil-3-propil)-glicin [(VII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 499 talált: 499

Ή-NMR, δ: 4,63-4,55 (m, 1H), 4,30-4,20 (m, 1H),

3,88 (s, 2H), 3,33 (q, 2H), 3,30-3,15 (m, 2H),

2,88-2,60 (m, 4H), 2,35 (t, 2H), 1,85-1,75 (m, 2H), 1,73-1,35 (m, 5H), 1,30-1,08 (m, 4H), 1,03 (t, 3H), 0,78 (s, 9H).

6. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-norleucin [(VIII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 485; talált: 485;

Ή-NMR, δ: 4,58-4,50 (m, 1H), 4,20-4,10 (m, 1H), 3,85 (s, 2H), 3,32 (q, 2H), 3,25-3,10 (m, 2H), 2,85-2,55 (m, 4H), 2,30 (t, 2H), 1,82-1,50 (m, 4H), 1,50-1,30 (m, 3H), 1,28-1,05 (m, 8H), 0,88 (t, 3H), 0,75-0,60 (m, 3H).

7. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-P-naft-l-il-alanin (IX) képletű vegyület]

MS: számított érték: 569; talált: 569;

Ή-NMR, δ: 8,00-7,15 (m, 7H), 4,80-4,45 (m, 2H), 3,71 (s, 2H), 3,65-3,50 (m, 2H), 3,40-2,98 (m, 4H), 2,70-2,42 (m, 4H), 2,21 (t, 2H), 1,70-1,45 (m, 2H), 1,40-0,98 (m, 7H), 0,92 (t, 3H).

8. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-P-naft-2-il-alanin [(X) képletű vegyület]

MS: számított érték: 589; talált: 589;

Ή-NMR, δ: 7,65-7,03 (m, 7H), 4,60-4,45 (m, 2H), 3,41 (s, 2H), 3,20-3,01 (m, 3H), 3,00-2,71 (m, 3H), 2,68-2,40 (m, 4H), 1,98 (t, 2H), 1,68-1,42 (m, 3H), 1,25-0,85 (m, 8H), 0,71 (t, 3H).

9. példa

N-{N-[N-[3-(Piperidin-4-il)-propanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-valin [(XI) képletű vegyület]

MS: számított érték: 547; talált: 457;

Ή-NMR, δ: 4,62 (m, 2H), 3,80 (s, 2H), 3,33 (m, 4H),

2,68 (m, 4H), 2,37 (t, 2H), 2,16 (m, 1H), 2,03 (m,

1H), 1,78 (m, 2H), 1,44 (m, 2H), 1,20 (m, 2H), 1,00 (m, 3H), 0,78 (d, 6H).

10. példa

N-{N-[N-[5 -(Piperidin-4-il)-pentanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-valin [(XII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 485; talált: 485;

Ή-NMR, δ: 4,20-4,05 (m, 2H), 3,92 (s, 2H), 3,33 (m, 2H), 3,28-3,15 (m, 2H), 2,90-2,61 (m, 4H),

2,34 (t, 2H), 2,06 (m, 1H), 1,85-1,70 (m, 2H),

1,55-1,32 (m, 3H), 1,30-1,12 (m, 6H), 1,06 (t,

3H), 0,81 (d, 6H).

11. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-P-ciklohexil-alanin-etil-észter [(XIII) képletű vegyület]

A) 1,5 g β-ciklohexil-alanin 75 ml absz. etanollal készült oldatát 0 °C-ra hűtjük, és 10-15 perc alatt 1,1 ml tionil-kloridot csepegtetünk hozzá. Az oldatot szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, majd szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át keveijük. Ekkor a reakcióelegyet vákuumban bepároljuk, a maradékról kétszer toluolt desztillálunk le azeotróposan, és az így kapott maradékot etil-acetátban felvesszük. Az etil-acetátos oldatot előbb vízzel, utána 1 n nátrium-hidroxid-oldattal, ismét vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, nátriumszulfáton szárítjuk, szűrés után vákuumban bepároljuk, s így β-ciklohexil-alanin-etil-észtert kapunk.

B) Lényegében az 1. példa B)-től M) lépéséig leírt eljárások alkalmazásával [az L) lépésben leírt vizes nátrium-hidroxidos hidrolízis lépését mellőzve] a kívánt termékhez jutunk.

MS: számított érték: 553; talált: 553;

Ή-NMR, δ: 4,4 (1H, m), 4,1 (4H, q), 4,0 (2H, d),

3,2-3,5 (5H, m), 2,7-3,0 (5H, m), 2,4 (2H, t), 2,2 (1H, m), 1,9 (2H, d), 1,4-1,7 (7H, m), 0,7-1,4 (18H, m).

12. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-P-ciklohexil-alanin-amid [(XIV) képletű vegyület]

A) 2,0 g N-BOC-P-ciklohexil-alanint és 1,03 ml trietil-amint 100 ml THF-ban oldunk, az oldatot -20 °C-ra hűtjük, 1,06 ml izobutil-(klór-formiát)-ot adunk hozzá, majd -20 °C-on mintegy 30 percig keverjük. Ekkor 20 ml telített metanolos ammóniaoldatot adunk hozzá, szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át keveijük. Az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékot etil-acetátban oldjuk, és ezt az oldatot rendre vízzel, 5 t%-os sósavoldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, ismét vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, nátrium-szulfáton

HU 222 248 Bl szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így NBOC-p-ciklohexil-alanin-amidot kapunk.

B) 2,0 g N-BOC-P-ciklohexil-alanin-amidot 100 ml etil-acetátban oldunk, az oldaton át hidrogénklorid-gázt buborékoltatunk, és szobahőmérsékleten körülbelül 18 órán át keveijük. Ezután az oldatot vákuumban bepároljuk, a maradékról azeotróposan kétszer toluolt desztillálunk le, s így a β-ciklohexil-alanin-amid hidrokloridját kapjuk.

C) Lényegében az 1. példa B)-M) lépéseiben leírt eljárások alkalmazásával [az L) lépésben leírt vizes nátrium-hidroxidos hidrolízis elhagyásával] kapjuk a kívánt terméket.

MS: számított érték: 524; talált: 524;

‘H-NMR, δ: 8,4 (1H, d), 8,1 (1H, d), 4,2 (2H, q), 4,1 (1H, s), 3,9 (4H, q), 3,4 (2H, q), 3,3 (4H, d),

2,3-3,0 (6H, m), 2,4 (2H, t), 2,2 (1H, m), 1,8 (4H, d), 1,4-1,7 (7H, m), 0,7-1,3 (10H, m).

13. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -L-a-ciklohexil-glicin [(XV) képletű vegyület]

A) 1,0 g a-fenil-glicin-metil-észter-hidroklorid és 25 ml THF 0 °C-ra hűtött oldatához 1,38 ml trietilamint adunk, az így kapott elegyhez 1,06 g di(terc-butil)-dikarbonát és 25 ml THF oldatát adjuk, majd az elegyet szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és szobahőmérsékleten körülbelül 16 órán át keveijük. A bepárlás után kapott maradékot 200 ml etil-acetátban felvesszük, és rendre 1 n sósavoldattal, telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, végül konyhasóoldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így N-BOC-a-fenil-glicil-metilésztert kapunk.

B) 1,2 g N-BOC-a-fenil-glicin-metil-észtert 1 ml ecetsavat tartalmazó 50 ml metanolban oldunk, 0,60 g, 5 t% rádiumot tartalmazó alumíniumport adunk hozzá, majd az elegyet 345 kPa hidrogénnyomás alatt körülbelül 16 órán át rázatjuk. Ezután a keveréket szüljük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a maradékot etilacetátban felvesszük. E szerves oldatot előbb vízzel, utána telített nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, ismét vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, magnézium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk, így N-BOC-a-ciklohexil-glicin-metil-észterhez jutunk

C) Lényegében az 1. példa B)-M) lépéseiben leírt eljárások alkalmazásával kapjuk a kívánt terméket. MS: számított érték: 511; talált: 511;

‘H-NMR, δ: 4,62-4,55 (1H, m), 4,08 (2H, s), 3,85 (2H, s), 3,30 (2H, q), 3,23-3,10 (2H, m),

2,85-2,55 (4H, m), 2,30 (2H, t), 1,83-1,60 (3H, m), 1,59-1,32 (8H, m), 1,30-0,75 (12H, m).

14. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L^-(dekahidronaft-l-il)-alanin [(XVI) képletű vegyület]

A) 2,0 g β-(1 -naftil)-alanint hidrogén-kloriddal telített metanolos oldatban szobahőmérsékleten körülbelül 2 órán át keverünk, utána az elegyet vákuumban bepároljuk, és a maradékról kétszer toluolt desztillálunk le azeotrópos formában. A maradékot metilén-kloridban szuszpendáljuk, 1,02 ml N-metil-morfolint adunk hozzá, 0 °C-ra hűtjük, 2,02 g di(terc-butil)-dikarbonátot és 0,8 g 4-(dimetil-amino)-piridint (DMAP) adunk hozzá, majd az oldatot szobahőmérsékletre hagyjuk felmelegedni, és szobahőmérsékleten körülbelül 2 órán át keveijük. A reakcióelegyet 5 t%-os sósavoldattal, majd vízzel mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így N-BOC-β(l-naftil)-alanin-metil-észtert kapunk.

B) 2,0 g N-BOC-3-(l-naftil)-alanin-metil-észtert és 1,0 g alumínium-oxidra lecsapott 5%-os ródiumkatalizátort 1 ml ecetsavat tartalmazó 50 ml metanolhoz adunk, és ezt a keveréket 345 kPa hidrogénnyomás alatt körülbelül 18 órán át rázatjuk. Ekkor a reakcióelegyet szüljük, a szűrletet vákuumban bepároljuk, és a maradékot etil-acetáttal felvesszük. A szerves oldatot vízzel, utána 5 t%-os nátrium-hidrogén-karbonát-oldattal, ismét vízzel, végül konyhasóoldattal mossuk, nátrium-szulfáton szárítjuk, és szűrés után vákuumban bepároljuk. így L^-(dekahidronaft-l-il)-alanin-metil-észterhez jutunk.

C) Lényegében az 1. példa B)-M) lépéseiben leírt eljárások alkalmazásával kapjuk a kívánt terméket. MS: számított érték: 579; talált: 579;

15. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-a-(2-ciklohexil-etil)-glicin [(XVIII) képletű vegyület]

A) Lényegében a 13. példa A) lépésében leírt eljárással L-homofenil-alaninból N-BOC-a-(2-fenil-etil)glicin-metil-észtert állítunk elő.

B) Lényegében a 14. példa B) lépésében leírt eljárás alkalmazásával N-BOC-a-(2-fenil-etil)-glicin-metil-észterből N-BOC-a-(2-ciklohexil-etil)-glicin-metilésztert állítunk elő.

C) Lényegében az 1. példa B)-M) lépéseiben leírt eljárások útján a kívánt termékhez jutunk.

MS: számított érték: 589; talált: 589;

‘H-NMR, δ: 4,60-4,55 (m, 1H), 4,20-4,08 (m, 1H),

3,85 (s, 2H), 3,28 (q, 2H), 3,25-3,12 (m, 2H),

2,84-2,55 (m, 4H), 2,29 (t, 2H), 1,83-1,65 (m,

2H), 1,83-1,32 (m, 10H), 1,28-0,81 (m, 13H),

0,79-0,56 (m, 2H).

Lényegében az előbbi példákban leírt eljárásokkal a megfelelő kiinduló anyagokból a következő származékokat állítottuk elő.

16. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L^-(cisz-dekahidronaft-2-il)alanin [(XIX) képletű vegyület]

MS: számított érték: 579; talált: 579;

‘H-NMR, δ: 4,7 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,1 (d, 2H),

3,3-3,7 (m, 5H), 2,6-2,8 (m, 5H), 2,5 (t, 2H), 2,3 (t, 1H), 1,9 (d, 2H), 1,3-1,8 (m, 14H), 0,9-1,3 (m,

14H), 0,7-0,8 (m, 3H).

HU 222 248 Bl

17. példa (3-Adamant-l-il-propil)-N-{N-[4-(piperidin-4-il)butanoil]-N-etil-glicil}-aszparaginát [(XX) képletű vegyület]

MS: számított érték: 548; talált: 548;

•H-NMR, δ: 4,65-4,50 (m, 1H), 4,05-3,85 (m, 4H), 3,35-3,15 (m, 4H), 2,90-2,50 (m, 4H), 2,30 (1, 2H), 2,18 (t, 1H), 1,94 (d, 2H), 1,85-1,35 (m, 20H), 1,82-1,12 (m, 4H), 1,10-0,90 (m, 5H).

18. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -β-ciklohexil-D-alanin [(XXII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 525; talált: 525;

•H-NMR, δ: 4,60-4,55 (m, 1H), 4,32-4,20 (m, 1H), 4,05 (s, 1H), 3,85 (s, 1H), 3,32 (q, 2H), 3,25-3,12 (m, 2H), 2,85-2,60 (m,4H), 2,32 (t, 1H), 2,12 (t, 1H), 1,65-1,68 (m, 2H), 1,60-1,32 (m, 10H), 1,26-0,60 (m, 13H).

19. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} ^-(dekahidronaft-1 -il)-alanin [(XXIII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 579; talált: 579;

•H-NMR, δ: 4,1-4,3 (1H, m), 3,8-4,1 (2H, m),

3,1-3,4 (4H, m), 2,6-2,9 (4H, m), 2,3 (1H, m), 2,0 (1H, m), 1,8 (3H, d), 0,5-1,6 (33H, m).

20. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-6-ciklohexil-alanin-etil-amid [(XXIV) képletű vegyület]

MS: számított érték: 552; talált: 552;

•H-NMR, δ: 4,55-4,45 (m, 1H), 4,20-4,06 (m, 1H), 4,05-3,85 (m, 2H), 3,40-3,25 (m, 2H), 3,28-3,15 (m, 2H), 3,10-2,90 (m, 2H), 2,88-2,55 (m, 4H), 2,40-2,25 (m, 1H), 2,20-2,05 (m, 1H), 1,85-1,70 (m,2H).

21. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-ciklooktil-alanin [(XXV) képletű vegyület]

MS: számított érték: 553; talált: 553;

•H-NMR, δ: 4,1-4,3 (1H, m), 3,8-4,1 (2H, m),

3,1-3,4 (4H, m), 2,6-2,9 (4H, m), 2,3 (1H, m), 2,0 (1H, m), 1,8 (2H, d), 0,5-1,6 (31H, m).

22. példa

N - {N-[N- [4-(Piperidin-4-il)-butanoil] -N-etil-glicil]-aszparaginoil}-a-(ciklohexil-metil)-etanolamin [(XXVI) képletű vegyület]

MS: számított érték: 511; talált: 511;

•H-NMR, δ: 4,60-4,45 (m, 1H), 4,10-3,75 (m, 3H), 3,45-3,15 (m, 6H), 2,90-2,80 (m, 4H), 2,35 (t, 1H), 2,00-2,08 (m, 1H), 1,88-1,75 (m, 2H), 1,62-1,35 (m, 8H), 1,30-1,08 (m, 7H), 1,10-0,60 (m, 8H).

23. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-(ciklohexil-metil)-alaninamid [(XXVII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 538; talált: 538;

•H-NMR, δ: 4,60-4,50 (m, 1H), 4,15-4,00 (m, 1H), 4,00-3,80 (m, 2H), 3,35 (q, 2H), 3,30-3,15 (m, 2H), 2,90-2,82 (m, 4H), 2,35 (t, 1H), 2,15 (t, 1H),

1,88-1,75 (m, 2H), 1,85-1,40 (m, 9H), 1,30-0,88 (m, 14H), 0,85-0,65 (m, 2H).

24. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-adamant-l-il-alanin [(XXVIII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 577; talált: 577;

•H-NMR, δ: 4,5-4,1 (1H, m), 4,1-4,2 (1H, m), 3,8 (2H, d), 3,2 (2H, q), 3,1-3,1 (6H, m), 2,4-2,98 (5H, m), 2,3 (1H, m), 2,0 (1H, m), 1,8 (4H, m),

1,2-1,7 (16H, m), 1,0-1,2 (6H, m), 8-1,0 (3H, m).

25. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-(l,2,3,4-tetrahidronaft-5-il)alanin [(XXIX) képletű vegyület]

MS: számított érték: 573; talált: 573;

•H-NMR, δ: 6,9 (d, 4H), 4,7 (m, 1H), 4,3 (m, 1H), 4,1 (d, 2H), 3,3-3,7 (m, 6H), 2,6-3,1 (m, 12H), 2,5 (t, 2H), 2,3 (t, 1H), 1,9 (d, 2H), 1,2-1,8 (m, 16H), 1,1 (t,2H), 1,0 (t, 2H).

26. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-(4-ciklohexil-ciklohexil)-alanin [(XXX) képletű vegyület]

MS: számított érték: 607; talált: 607;

•H-NMR, δ: 4,2-4,3 (1H, m), 3,9-4,1 (2H, m), 3,1-3,4 (5H, m), 2,6-2,9 (5H, m), 2,3 (1H, m), 2,0 (1H, m), 1,8 (3H, d), 0,9-1,6 (32H, m), 0,7-0,8 (3H, m).

27. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -β-cikloheptil-alanin [(XXXI) képletű vegyület]

MS: számított érték: 539; talált: 539;

•H-NMR, δ: 4,60-4,55 (m, 1H), 4,35-4,25 (m, 1H), 4,08 (S, 1H), 3,92 (S, 1H), 3,35 (q, 2H), 3,33-3,20 (m, 2H), 2,90-2,60 (m, 4H), 2,35 (t, 1H), 2,18 (t, 1H), 1,90-1,75 (m, 2H), 1,70-1,10 (m, 22H), 1,10-0,85 (m, 3H).

28. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}^-ciklooktil-alanin-amid [(XXXII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 551; talált: 551;

•H-NMR, δ: 4,45 (dd, 1H, H-12), 4,18 (m, 1H, H-14),

3,89 (d, 1H, H-ll), 3,69 (d, 1H, H-ll), 3,31 (q, 2H, H-9), 3,18 (dt, 2H, H-la), 2,74 (dt, 2H, H-10), 2,65

HU 222 248 Bl (dd, Μ, H-13), 2,25 (t, 2H, H-8), 1,85-1,10 (m,

26H, H-3 Η-7-en keresztül és H-15 Η-23-οη keresztül), 1,08 (t, 3H, H-10).

29. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil] -aszparaginoil} -a-(ciklohexil-propil)-glicin [(XXXIII) képletű vegyület]

MS: számított érték: 553; talált: 553;

H-NMR, δ: 4,70-4,80 (m, IH), 4,30-4,15 (m, IH),

4,10 (S, IH), 3,95 (S, IH); 3,35 (q, 2H), 3,35-3,20 (m, 2H), 2,90-2,60 (m, 4H), 2,40 (t, IH), 2,15 (t,

IH), 1,90-1,75 (m, 2H), 1,75-1,45 (m, 10H),

1,35-1,15 (m, 6H), 1,12-0,90 (m, 9H), 0,85-0,60 (m, 2H).

30. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-p-(ciklooktil-metil)-alanin [(XXXIV) képletű vegyület]

MS: számított érték: 567; talált: 567;

H-NMR, δ: 4,05-4,15 (m, IH, 14), 3,75-4,00 (m,

2H, 11 & 18), 3,10-3,30 (m, 4H, 19 & 20 eq),

2,50-2,80 (m, 4H, 15 & 26 ax), 2,05-2,25 (m, 2H,

21), 0,75-1,75 (m, 31H, 1-10, 20 & 22-25).

31. példa

N- {N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-3-ciklopentil-alanin [(XXXV) képletű vegyület]

MS: számított érték: 511; talált: 511;

H-NMR, δ: 4,7 (m, IH), 4,3 (m, IH), 4,1 (d, 2H),

3,3-3,7 (m, 5H), 2,8 (t, 2H), 2,7 (m, 3H), 2,5 (t,

2H), 2,3 (t, IH), 1,9 (d, 2H), 1,0-1,8 (m, 16H).

32. példa

N-{N-[N-[4-(Piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparagmoil}-P-(ciklohexil-metil)-alanin-etilészter [(XXXVI) képletű vegyület]

MS: számított érték: 587; talált: 587;

H-NMR, δ: 4,30-4,10 (m, IH), 4,10-3,80 (m, 3H),

3,35 (q, 2H), 3,30-3,16 (m, 2H), 2,90-2,60 (m,

4H), 2,40-2,10 (t, 2H), 1,80-1,70 (m, 2H),

1,65-1,40 (m, 10H), 1,35-0,85 (m, 18H),

0,85-0,60 (m, 2H).

A találmány oltalmi körébe tartozó vegyületek úgy gátolják a trombocitaaggregációt, hogy akadályozzák a fibrinogén kötődését az aktivált trombocitákhoz és más megtapadó, a trombocitaaggregációban és véralvadásban szerepet játszó glikoproteinekhez; a találmány szerinti vegyületek továbbá bizonyos kóros állapotokkal - így a szívizominfarktussal, hűdéssel, perifériás artériás megbetegedéssel és a szóródó, éren belüli (intravaszkuláris) koagulációval - együtt járó trombózis megelőzésére és kezelésére alkalmazhatók embereken és más emlősállatokon.

A találmány szerinti vegyületek normális körülmények között orálisan vagy parenterálisan adagolhatok a fenti kóros állapotokkal kapcsolatos trombózis kezelésében vagy megelőzésében.

Adagolás céljára a találmány szerinti vegyületeket bármely célszerű úton végzett adagolás esetére gyógyászati készítményekké alakíthatjuk; a találmány azokra a gyógyászati készítményekre is kiterjed, amelyek az emberi vagy állatgyógyászatban történő alkalmazás céljára legalább egy, találmány szerinti vegyületet tartalmaznak. Ezek a készítmények a szokásos módon, egy vagy több, gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyag vagy kötőanyag alkalmazásával alakíthatók ki. E célra alkalmas vivőanyagok például a hígítószerek vagy töltőanyagok, steril vizes közegek és különböző, nem toxikus szerves oldószerek. A készítmények például tabletták, kapszulák, gyógycukorkák, pirulák, porok, vizes szuszpenziók vagy oldatok, befecskendezhető oldatok, elixírek és szirupok formájában alakíthatók ki, és gyógyászati szempontból elfogadható termék céljából egy vagy több édesítőszert, ízesítőszert, színezéket és tartósítószert tartalmazhatnak.

A konkrétan alkalmazható vivőanyagot, valamint a trombocitaaggregációt és a trombus kialakulását gátló vegyületnek a vivőanyaghoz viszonyított arányát a hatóanyagok oldhatósági és kémiai sajátságai, az adagolás módja és a standard gyógyszerészeti gyakorlat dönti el. Tabletták előállítása során például töltőanyagként laktóz, nátrium-citrát, kalcium-karbonát, dikalcium-foszfát és különböző, a tabletták szétesését elősegítő szerek, például keményítő, alginsav és egyes komplex szilikátok, valamint kenőanyagok (gördülékenységet elősegítő anyagok), például magnézium-sztearát, nátriumlauril-szulfát és talkum alkalmazhatók. Kapszulaforma esetén előnyös, gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyagok a laktóz és a nagy molekulatömegű polietilénglikolok. Orális alkalmazás céljára formulázott vizes szuszpenziók esetében a vivőanyag emulgeálóvagy szuszpendálószer lehet. Hígítószerként például etanol, propilénglikol, glicerin, kloroform és ezek keverékei, valamint egyéb anyagok használhatók.

Parenterális adagolás céljára a találmány szerinti vegyületek szezámolajjal vagy mogyoróolajjal készült szuszpenziói vagy oldatai, vagy vizes propilénglikollal készült oldatok, valamint oldható, gyógyászati szempontból elfogadható sóik vizes oldatai alkalmazhatók. A találmány szerinti vegyületek sóinak az oldatai intramuszkuláris és szubkután befecskendezés céljára különösen alkalmasak. A vizes oldatok - beleértve a tiszta, desztillált vízben oldott sók oldatait - szintén alkalmasak intravénás injekció céljára, azzal a feltétellel, hogy pH-értéküket megfelelően beállítjuk, megfelelően pufferoljuk, izotóniássá tesszük megfelelő mennyiségű sóval vagy glükózzal, és hevítés vagy mikroszűrés útján sterilizáljuk.

A találmány szerinti eljárás kivitelezése során olyan adagolási rend követhető, amely biztosítja a maximális terápiás választ, amíg a javulást el nem érjük, és ezt követően a minimális hatásos koncentrációt, amely gyógyulást hoz. Általában: az orális adag körülbelül 0,1 mg/kg és körülbelül 100 mg/kg, előnyösen körülbelül 0,1 mg/kg és 20 mg/kg között, legelőnyösebben körülbelül 1 mg/kg és 20 mg/kg között lehet; az intravénás dózis körülbelül 0,1 pg/kg és körülbelül 100 pg/kg

HU 222 248 Bl között, előnyösen körülbelül 0,1 pg/kg és 60 pg/kg között lehet; szem előtt tartva természetesen, hogy a megfelelő dózis választásában bármely konkrét esetben figyelembe kell venni a beteg súlyát, általános egészségi állapotát, korát és más tényezőket, amelyek a hatóanyagra adott válaszát befolyásolhatják. A hatóanyagot orálisan naponta 1-4 alkalommal, előnyösen naponta egy vagy két alkalommal adagolhatjuk.

A találmány szerinti vegyületeknek a gátló hatását a fibrinogénnel közvetített trombocitaaggregációra, a fibrinogénnek trombinnal stimulált trombocitákhoz kötődésének gátlását az alábbi farmakológiai vizsgálatokkal értékeltük ki; az ADP indukálta trombocitaaggregáció gátlása ex vivő körülmények között és ezeknek a vizsgálatoknak az eredményei korrelációban vannak a találmány szerinti vegyületek in vivő körülmények között kifejtett gátló hatásaival.

A trombocitaaggregáció mérése a Blood 66, 946-952 (1985) helyen leírt közleményen alapul. A fibrinogénkötés meghatározása lényegében Z. M. Ruggeri és munkatársai [Proc. Natl. Acad. Sci. USA 83, 5705-5712 (1986)], valamint E. F. Plow és munkatársai módszere [Proc. Natl. Acad Sci. USA 82, 6057-6061 (1985)]. Az ex vivő körülmények között ADP-vel indukált trombocitaaggregáció gátlásának a mérése Zucker „A trombocitaaggregáció mérése fotoelektromos módszerrel” (angolul) [Methods in Enzymology 169, 117-133 (1959)] című közleményén alapul.

A trombocitaaggregáció mérése

Rögzített aktivált trombociták előállítása

G. A. Margueris és munkatársai [J. Bioi. Chem. 254, 5357-5363 (1979)], valamint Z. M: Ruggeri és munkatársai [J. Clin. Invest. 72, 1-12 (1983)] által leírt gélszűrő eljárás alkalmazásával emberi trombocitakoncentrátumból trombocitákat különítettünk el. A trombocitákat 2 χ 10⁸ sejt/ml koncentrációban módosított, kalciummentes Tyrode-pufferben szuszpendáltuk, amely 127 mM nátrium-kloridot, 2 mM magnézium-kloridot, 0,42 mM dinátrium-hidrogén-foszfátot, 11,9 mM nátrium-hidrogén-karbonátot, 2,9 mM kálium-kloridot, 5,5 mM glükózt, 10 mM HEPES-t (pH-értéke 7,35) és 0,35% humán szérumalbumint (HSA) tartalmazott. A kimosott trombocitákat humán α-trombin hozzáadásával (végkoncentrációja 2 egység/ml) aktiváltuk, majd 1-2581 trombingátlót adtunk hozzá (40 μΜ végkoncentrációban). Az aktivált trombocitákhoz 0,50% végkoncentrációban paraformaldehidet adtunk, és szobahőmérsékleten 30 percig inkubáltuk. A rögzített, aktivált trombocitákat 650 xg sebességgel 15 percig végzett centrifugálással összegyűjtöttük, a trombocitapelleteket négyszer mostuk a fenti Tyrode-oldattal (amely 0,35% HSA-pufferoldatot tartalmazott), majd 2xl0⁸ sejt/ml koncentrációban ugyanabban a pufferoldatban ismét szuszpendáltuk.

A trombocitaaggregáció mérése

A rögzített, aktivált trombocitákat a trombocitaaggregációt gátló hatásra vizsgálandó vegyület meghatározott dózisával 1 percig inkubáltuk, majd az aggregációt

250 pg/ml végkoncentrációban hozzáadott humán fibrinogénnel indítottuk meg. A trombocitaaggregáció regisztrálásához egy trombocitaaggregáció-profilozó Model PAP-4 műszert használtunk. A trombocitaaggregáció gátlásának mértékét a gátlóanyag hiányában (nélkül) megfigyelt aggregáció sebességének a százalékában fejeztük ki. Ezt követően minden egyes vegyület esetére kiszámítottuk az IC₅₀-értéket, azaz a gátlóanyagnak azt a mennyiségét, amely az aggregáció sebességének 50%-os csökkentéséhez szükséges [lásd például: E. F. Plow és munkatársai: Proc. Natl. Acad Sci. USA 82, 5057-5061 (1985)].

A fibrinogénkötés mérése

A trombocitákat mosással, az albuminsűrűségi gradiens eljárással [P. N. Walsh és munkatársai módszere, Br. J. Haematol. 281-296 (1977); módosították V. Trapani-Lombardo és munkatársai: J. Clin. Invest. 76, 1950-1958 (1985)] mentesítettük a plazma alkotórészeitől. Minden egyes kísérleti elegyben a trombocitákat módosított Tyrode-pufferban [Z. M. Ruggeri és munkatársai: J. Clin. Invest. 72, 1-12 (1983)] humán α-trombinnal stimuláltuk 22-25 °C-on 10 percig (3,125xlO¹¹ trombocita/liter és 0,1 NIH egység/ml trombin). Ezt követően (egység/egységben számítva) 25-szörös feleslegben hirudint, és 5 perc múlva ¹²⁵J-dal jelzett fibrinogént és a vizsgálandó vegyületet adtuk hozzá. A hozzáadagolások után az elegy végső trombocitaszáma 1 x 10*'/liternek adódott. További 30 percig 22-25 °C-on végzett inkubálás után a kötött és szabad ligandumot úgy választottuk el, hogy az elegy 50 μΐ térfogatát 300 μΐ 20%-os szacharózig 4 percig 12 000 χ g sebességgel centrifugáltuk. A trombocitapelletet az elegy maradékától a trombocitához kötött radioaktivitás meghatározása céljából elkülönítettük. A nemspecifikus kötést a nem jelzett ligandum feleslegét tartalmazó elegyekben mértük. A kötési görbék Scatchardanalízise során a nemspecifikus kötést alkalmas paraméterként, számítógépes program segítségével a kötési izotermából deriváltuk [P. J. Munson: Methods Enzymol. 92, 542-576 (1983)]. Abból a célból, hogy minden egyes gátlóvegyületnek azt a koncentrációját meghatározzuk, amely a fibrinogénnek trombinnal aktivált trombocitákhoz kötődését 50%-ban gátolja (IC50), minden egyes vegyületet hat vagy több koncentrációban vizsgáltunk ¹²⁵J-dal jelzett fibrinogénnel, amelynek koncentrációját 0,176 pmol/liter (60 pg/ml) értéken tartottuk. Az IC50-értéket úgy deriváltuk, hogy a maradék fibrinogénkötést a vegyületnek mintában fennálló koncentrációja logaritmusának függvényében ábrázoltuk.

Az ADP által ex vivő körülmények között előidézett trombocitaaggregáció gátlása

A vizsgálat menete

A kontrollként alkalmazott vérmintákat 5-10 perccel előbb vettük le, mielőtt a vizsgálandó vegyületeket 10-20 kg testtömegű korcs kutyáknak adagoltuk. Az adagolást vizes szondán át a gyomorba végeztük; vagy zselatinkapszulában, orálisan adagoltunk. Ezt követően az 5 ml térfogatú vérmintákat 30 percenként vettük le

HU 222 248 Bl órán át, majd az adagolás után 6,12 és 24 órával. Minden egyes vérmintát a fejvéna szúrásával vettünk le, és közvetlenül gyűjtöttük egy műanyag fecskendőbe, amely 9 rész vérre vonatkoztatva 1 rész 3,8% trinátrium-citrátot tartalmazott.

A trombocitaaggregáció vizsgálata kutyán, ex vivő körülmények között

A vérmintákat 1000 rpm (percenkénti fordulatszám) sebességgel 10 percig centrifugáltuk trombocitákban dús plazma (PRP) nyerése céljából. A PRP eltávolítása után a mintát további 10 percig centrifugáltuk 2000 rpm sebességgel, s így trombocitákban szegény plazmát (PPP) kaptunk. A PRP trombocitaszámát Coulter Counter (számlálóműszer) segítségével határoztuk meg 15 (beszerezhető a Coulter Electronics cégtől, Hlalesh,

FL). Ha a PRP-ban a trombociták koncentrációja a 300 000 trombocita/μΐ értéket meghaladta, akkor a PRP-t PPP-val hígítottuk, hogy a trombocitaszámot 300 000 trombocita/μΐ értékre szabályozzuk. Ezután a PRP 250 μΐ-es aliquotjait szilikonizált üvegküvettákba helyeztük (méretük 7,25x55 mm, Bio/Data Corp., Horsham, PA). A PRP-hoz 1 μΜ végkoncentrációban adrenalint adtunk, és 1 percig 37 °C-on inkubáltuk. Ekkor a trombocitaaggregációt stimuláló ADP-t adtunk a PRP-hoz 10 μΜ végkoncentrációban. A trombocitaaggregációt spektrofotometriásán monitoroztuk, fényátbocsátást mérő aggregométer alkalmazásával (Bio/Data trombocitaaggregációt profilozó, Model PAP-4, Bio/Data Corp., Horsham, PA). Minden egyes vizsgálandó vegyületre két párhuzamos kísérletben vettük fel a fényátbocsátás (transzmittancia) változásának sebessé5 gét (a görbe meredekségét) és a maximális fényátbocsátást (maximális aggregációt). A trombocitaaggregáció adatait a meredekség vagy a maximális aggregáció százalékos csökkenésében (átlag ± SEM) adjuk meg a kontrollként alkalmazott PRP-val nyert adagokkal 10 összehasonlítva, amelyet a vizsgálandó vegyület adagolása előtt levett vérmintákból készítettünk.

A találmány szerinti vegyületek a fentebb ismertetett vizsgálatok során jelentős aktivitást mutattak, s így azokat bizonyos kóros állapotokkal kapcsolatos trombózisok megelőzésére és kezelésére alkalmazhatóknak tekintjük. A kutyákon ex vivő körülmények közötti antitrombotikus aktivitás - a trombocitaaggregáció mérése útján - előre jelzi ezt az aktivitást embereken [lásd például J. L. Catalfamo: és W. J. Dodds: „Trombo20 citák elkülönítése laboratóriumi állatokból” (angolul), Methods Enzymol. 169, A) rész 27 (1989)]. A találmány szerinti vegyületek fenti módszerekkel kapott vizsgálati eredményeit az alábbi táblázatban tüntetjük fel. A táblázatban megadjuk továbbá a [4-(4-piperidil)25 butanoil]-glicil-aszparaginoil-triptofánnal kapott összehasonlító vizsgálati eredményeket is (az utóbbi vegyületet a 0 479 481 számú, publikált európai szabadalmi bejelentésben ismertették).

Táblázat

A vegyület példaszáma	A rögzített trombociták aggregációjának a gátlása, IC₅₀ μΜ	Dózis, mg/kg	Az ADP-vel ex vivő körülmények között előidézett trombocitaaggregáció gátlása. A trombocitaaggregáció %-os gátlása orális adagolás után, ex vivő
lóra	3 óra	6 óra	12 óra	24 óra
2.	0,027	10	90	60	20
3.	0,064	10	40	20
9.	0,77
1.	0,026	5	100	100	100	88	42
4.	0,72	10	90	50	20
6.	0,130	10	80	20
5.	0,082	10	100	90	35
11.	0,064	5	100	100	60	37
12.	0,097	5	100	100	100	98	50
7.	0,110	5	30	20
8.	0,068	5	30	20
15.	0,072	5	35	18
1 ¹⁴·	0,018	5	100	100	100	100	95
13.		5	100	100	25
17.	0,096
18.	0,104
19.	3,41
20.	1,37

HU 222 248 Bl

Táblázat (folytatás)

A vegyület példaszáma	A rögzített trombociták aggregációjának a gátlása, IC₅₀ μΜ	Dózis, mg/kg	Az ADP-vel ex vivő körülmények között előidézett trombocitaaggregáció gátlása. A trombocitaaggregáció %-os gátlása orális adagolás után, ex vivő
lóra	3 óra	6 óra	12 óra	24 óra
2L	0,055
22.	0,09
23.	0,078
24.	0,129
25.	0,046
26.	0,029
27.	0,119
28.	0,048
29.	0,032
30.	0,07
31.	0,053
32.	0,052
33.	0,047
34.	0,074
EPANo. 479 481 szerinti vegyület	0,047	5	53	20

A szakterületen jártas egyén könnyen beláthatja, hogy a találmány jól alkalmazható az említett célok és előnyök kivitelezésére, illetve elérésére. A találmányban leírt vegyületek, készítmények és eljárások az előnyös megvalósítási formákat mutatják be, vagy céljuk csupán példa illusztrálása, de nem irányulnak a találmány oltalmi körének bármely korlátozására. A leírásban végezhető változtatások és további alkalmazások - amelyek a szakterületen jártas egyén számára feltűnhetnek - a találmány szellemével összhangban vannak, vagy a csatolt igénypontok oltalmi köre által meghatározottak.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Az (I) általános képletű vegyületek és gyógyászati szempontból elfogadható sóik, ahol az (I) általános képletben

B jelentése 1-7 szénatomos alkilcsoport,

Z jelentése (a) általános képletű csoport,

F jelentése 1-7 szénatomos alkil-, (3-9 szénatomos cikloalkil)-(l—4 szénatomos alkil)-, adamantil-(l-4 szénatomos alkil)-, (3-8 szénatomos cikloalkil)- (3-8 szénatomos cikloalkil)-(l —4 szénatomos alkil)-, 3-8 szénatomos cikloalkil-, (8-12 szénatomos bicikloalkil)(1-4 szénatomos alkil)-, fenil-(l-4 szénatomos alkil)-, naftil-(l-4 szénatomos alkil)vagy tetrahidronaftil-(l-4 szénatomos alkil)csoport,

G jelentése OR¹ vagy NR'R² általános képletű csoport - ahol

R¹ és R² jelentése hidrogénatom vagy egymástól függetlenül adott esetben adamantilcsoporttal szubsztituált 1-4 szénatomos alkilcsoport, r értéke 0 vagy 1, m értéke 2, 3 vagy 4, n értéke 1,2, 3,4, 5 vagy 6, és p értéke 1.
2. Az 1. igénypont szerinti

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-valin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -D-valin,

N-{N-[N-[3-(piperidin-4-il)-propanoil]-N-etil-glicil]aszparaginoil} - valin,

N-{N-[N-[5-(piperidin-4-il)-pentanoil]-N-etil-glicil]aszparaginoil} -valin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-oc-ciklohexil-glicin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -β-ciklohexil-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoilj-norleucin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-oc-(2,2-dimetil-prop-3-il)-glicin,

HU 222 248 Β1

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-p-(cisz-dekahidronaft-2-il)-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-p-ciklohexil-D-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -P-(dekahidronaft-1 -il)-alanin, N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-p-ciklooktil-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-P-adamant-l-il-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-p-(4-ciklohexil-ciklohexil)-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -β-cikloheptil-alanin, N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-a-(ciklohexil-propil)-glicin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-P-(ciklooktil-metil)-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -β-ciklopentil-alanin, N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -L-P-(dekahidronaft-1 -il)-alanin, N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-a-(2-ciklohexil-etil)-glicin, valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból elfogadható sói.
3. Az 1. igénypont szerinti

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -fenil-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-P-(l,2,3,4-tetrahidronaft-5-il)-alanin,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -L-p-naft-1 -il-alanin,

N- {N-[N- [4-(piperidin-4-il)-butanoil] -N-etil-glicil] -aszparaginoil}-L-p-naft-2-il-alanin, valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból el fogadható sói.
4. Az 1. igénypont szerinti

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil}-L-p-ciklohexil-alanin-amid,

N - {N-[N- [4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil] -aszparaginoil}-p-ciklooktil-alanin-amid,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-asz· paraginoil}-P-(ciklohexil-metil)-alanin-amid,

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-asz· paraginoilj-p-ciklohexil-alanin-etil-amid, valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból el fogadható sói.
5. Az 1. igénypont szerinti

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-asz· paraginoil}-L-P-ciklohexil-alanin-(etil-észter),

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginoil} -p-(ciklohexil-metil)-alanin-(etil-észter), (3-adamant-1 -il-propil)-N- {N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-aszparaginát, valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból el fogadható sói.
6. Az 1. igénypont szerinti

N-{N-[N-[4-(piperidin-4-il)-butanoil]-N-etil-glicil]-asz· paraginoil}-a-(ciklohexil-metil)-etanol-amin, valamint a fenti vegyületek gyógyászati szempontból el fogadható sói.
7. Gyógyászati készítmény, amely egy 1. igénypont szerinti vegyület trombózis ellen hatásos mennyiségét és gyógyászati szempontból elfogadható vivőanyagot tartalmaz.