HU218084B - Daganatokra specifikus monoklonális antitest és sejtvonal, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények - Google Patents
Daganatokra specifikus monoklonális antitest és sejtvonal, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények Download PDFInfo
- Publication number
- HU218084B HU218084B HU9400011A HU9400011A HU218084B HU 218084 B HU218084 B HU 218084B HU 9400011 A HU9400011 A HU 9400011A HU 9400011 A HU9400011 A HU 9400011A HU 218084 B HU218084 B HU 218084B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- antibody
- cell line
- monoclonal antibody
- producing
- cells
- Prior art date
Links
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 10
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 title description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 72
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 claims abstract description 23
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 32
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 32
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 32
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 17
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 11
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 8
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 108010047041 Complementarity Determining Regions Proteins 0.000 claims description 3
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 claims description 3
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims description 2
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 claims description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 2
- 230000002269 spontaneous effect Effects 0.000 claims 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 claims 1
- 229940124531 pharmaceutical excipient Drugs 0.000 claims 1
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 27
- 102100024952 Protein CBFA2T1 Human genes 0.000 description 19
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 18
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 15
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 13
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 13
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- 210000001072 colon Anatomy 0.000 description 9
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 9
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 8
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 6
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 6
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 6
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 6
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 description 5
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N Acetone Chemical compound CC(C)=O CSCPPACGZOOCGX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 4
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 4
- 206010035226 Plasma cell myeloma Diseases 0.000 description 4
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 4
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 4
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical group 0.000 description 4
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 4
- 201000000050 myeloid neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 208000008443 pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 4
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 2,3-bis(butanoylsulfanyl)propyl butanoate Chemical compound CCCC(=O)OCC(SC(=O)CCC)CSC(=O)CCC NHBKXEKEPDILRR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 101100191768 Caenorhabditis elegans pbs-4 gene Proteins 0.000 description 3
- 201000009030 Carcinoma Diseases 0.000 description 3
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 3
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 206010061902 Pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 description 3
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 3
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 3
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 3
- 208000015486 malignant pancreatic neoplasm Diseases 0.000 description 3
- 201000002528 pancreatic cancer Diseases 0.000 description 3
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 3
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 description 3
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 3
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100035360 Cerebellar degeneration-related antigen 1 Human genes 0.000 description 2
- 208000001333 Colorectal Neoplasms Diseases 0.000 description 2
- 102000012410 DNA Ligases Human genes 0.000 description 2
- 108010061982 DNA Ligases Proteins 0.000 description 2
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N Haematoxylin Chemical compound C12=CC(O)=C(O)C=C2CC2(O)C1C1=CC=C(O)C(O)=C1OC2 WZUVPPKBWHMQCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N Isopropanol Chemical compound CC(C)O KFZMGEQAYNKOFK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 2
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 2
- 206010054184 Small intestine carcinoma Diseases 0.000 description 2
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 2
- 239000000853 adhesive Substances 0.000 description 2
- 230000001070 adhesive effect Effects 0.000 description 2
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000000941 bile Anatomy 0.000 description 2
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 2
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 201000010897 colon adenocarcinoma Diseases 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 2
- SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N dATP Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1CC(O)C(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N dGTP Chemical compound C1=NC=2C(=O)NC(N)=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 HAAZLUGHYHWQIW-KVQBGUIXSA-N 0.000 description 2
- NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N dTTP Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NHVNXKFIZYSCEB-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 2
- OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N folic acid Chemical compound C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 230000002496 gastric effect Effects 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N isoamylol Chemical compound CC(C)CCO PHTQWCKDNZKARW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical compound CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 2
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 2
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 2
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 2
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 2
- 210000000813 small intestine Anatomy 0.000 description 2
- 208000014680 small intestine neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 2
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 2
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 2
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M sodium pyruvate Chemical compound [Na+].CC(=O)C([O-])=O DAEPDZWVDSPTHF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000000106 sweat gland Anatomy 0.000 description 2
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 2
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 description 2
- GHKCSRZBNZQHKW-UHFFFAOYSA-N 1-sulfanylethanol Chemical compound CC(O)S GHKCSRZBNZQHKW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 4-aminofolic acid Chemical compound C1=NC2=NC(N)=NC(N)=C2N=C1CNC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 TVZGACDUOSZQKY-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- NGYHUCPPLJOZIX-XLPZGREQSA-N 5-methyl-dCTP Chemical compound O=C1N=C(N)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)C1 NGYHUCPPLJOZIX-XLPZGREQSA-N 0.000 description 1
- ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 7553-56-2 Chemical compound [I] ZCYVEMRRCGMTRW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 9-ethyl-3-carbazolamine Chemical compound NC1=CC=C2N(CC)C3=CC=CC=C3C2=C1 OXEUETBFKVCRNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N Ala-Arg Chemical compound C[C@H](N)C(=O)N[C@H](C(O)=O)CCCN=C(N)N SITWEMZOJNKJCH-WDSKDSINSA-N 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100263837 Bovine ephemeral fever virus (strain BB7721) beta gene Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 102000004594 DNA Polymerase I Human genes 0.000 description 1
- 108010017826 DNA Polymerase I Proteins 0.000 description 1
- 108020003215 DNA Probes Proteins 0.000 description 1
- 239000003298 DNA probe Substances 0.000 description 1
- 238000001712 DNA sequencing Methods 0.000 description 1
- 108010014303 DNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 102000016928 DNA-directed DNA polymerase Human genes 0.000 description 1
- 108010054576 Deoxyribonuclease EcoRI Proteins 0.000 description 1
- 108010016626 Dipeptides Proteins 0.000 description 1
- 101100316840 Enterobacteria phage P4 Beta gene Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 1
- 201000003741 Gastrointestinal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 206010017993 Gastrointestinal neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 229930186217 Glycolipid Natural products 0.000 description 1
- 108010015899 Glycopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000002068 Glycopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 1
- 238000010268 HPLC based assay Methods 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N L-alanine-L-arginine Natural products CC(N)C(=O)NC(C(O)=O)CCCNC(N)=N SITWEMZOJNKJCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 1
- 239000002841 Lewis acid Substances 0.000 description 1
- QXOHLNCNYLGICT-YFKPBYRVSA-N Met-Gly Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O QXOHLNCNYLGICT-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N N-Lauroylsarcosine Chemical compound CCCCCCCCCCCC(=O)N(C)CC(O)=O BACYUWVYYTXETD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N N-Pteroyl-L-glutaminsaeure Natural products C=1N=C2NC(N)=NC(=O)C2=NC=1CNC1=CC=C(C(=O)NC(CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 OVBPIULPVIDEAO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 108090000526 Papain Proteins 0.000 description 1
- 102000057297 Pepsin A Human genes 0.000 description 1
- 108090000284 Pepsin A Proteins 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N Phe-Gly Chemical compound OC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 GLUBLISJVJFHQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N Phe-Thr Chemical compound C[C@@H](O)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 NYQBYASWHVRESG-MIMYLULJSA-N 0.000 description 1
- 108010021757 Polynucleotide 5'-Hydroxyl-Kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000008422 Polynucleotide 5'-hydroxyl-kinase Human genes 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 1
- 108010071390 Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000007562 Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N Trp-Gly Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(=O)NCC(O)=O)=CNC2=C1 UYKREHOKELZSPB-JTQLQIEISA-N 0.000 description 1
- IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N Trp-Phe Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)N)C(O)=O)C1=CC=CC=C1 IMMPMHKLUUZKAZ-WMZOPIPTSA-N 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000246 agarose gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 235000005550 amino acid supplement Nutrition 0.000 description 1
- 229960003896 aminopterin Drugs 0.000 description 1
- 239000008346 aqueous phase Substances 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 239000012148 binding buffer Substances 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 210000000481 breast Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 229910002091 carbon monoxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 230000007910 cell fusion Effects 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 239000012059 conventional drug carrier Substances 0.000 description 1
- 230000009260 cross reactivity Effects 0.000 description 1
- 239000012228 culture supernatant Substances 0.000 description 1
- RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J dCTP(4-) Chemical compound O=C1N=C(N)C=CN1[C@@H]1O[C@H](COP([O-])(=O)OP([O-])(=O)OP([O-])([O-])=O)[C@@H](O)C1 RGWHQCVHVJXOKC-SHYZEUOFSA-J 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 208000018554 digestive system carcinoma Diseases 0.000 description 1
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002845 discoloration Methods 0.000 description 1
- 238000006073 displacement reaction Methods 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N ethyl mercaptane Natural products CCS DNJIEGIFACGWOD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000021045 exocrine pancreatic carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- 229960000304 folic acid Drugs 0.000 description 1
- 235000019152 folic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000011724 folic acid Substances 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 238000010353 genetic engineering Methods 0.000 description 1
- 229960002518 gentamicin Drugs 0.000 description 1
- 239000007973 glycine-HCl buffer Substances 0.000 description 1
- 108010037850 glycylvaline Proteins 0.000 description 1
- STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N glycylvaline Chemical compound CC(C)[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CN STKYPAFSDFAEPH-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N guanidinium thiocyanate Chemical compound SC#N.NC(N)=N ZJYYHGLJYGJLLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 1
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 229940027941 immunoglobulin g Drugs 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000010324 immunological assay Methods 0.000 description 1
- 210000003000 inclusion body Anatomy 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229910052740 iodine Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011630 iodine Substances 0.000 description 1
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 1
- 238000002372 labelling Methods 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 150000007517 lewis acids Chemical class 0.000 description 1
- 125000003473 lipid group Chemical group 0.000 description 1
- 239000007791 liquid phase Substances 0.000 description 1
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 238000010841 mRNA extraction Methods 0.000 description 1
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 108010005942 methionylglycine Proteins 0.000 description 1
- 238000004264 monolayer culture Methods 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229940055729 papain Drugs 0.000 description 1
- 235000019834 papain Nutrition 0.000 description 1
- 230000005298 paramagnetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 230000007170 pathology Effects 0.000 description 1
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 1
- 229940111202 pepsin Drugs 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 108700004121 sarkosyl Proteins 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 1
- 229940054269 sodium pyruvate Drugs 0.000 description 1
- CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M sodium;2-aminoacetic acid;hydroxide Chemical compound O.[Na+].NCC([O-])=O CIJQGPVMMRXSQW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- IGHGOYDCVRUTSU-UHFFFAOYSA-M sodium;2-hydroxypropane-1,2,3-tricarboxylic acid;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O IGHGOYDCVRUTSU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M sodium;3-acetamido-5-[acetyl(methyl)amino]-2,4,6-triiodobenzoate;(2r,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,3s,4s,5r)-3,4-dihydroxy-2,5-bis(hydroxymethyl)oxolan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound [Na+].CC(=O)N(C)C1=C(I)C(NC(C)=O)=C(I)C(C([O-])=O)=C1I.O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 YEENEYXBHNNNGV-XEHWZWQGSA-M 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000002198 surface plasmon resonance spectroscopy Methods 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 210000000115 thoracic cavity Anatomy 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 108010038745 tryptophylglycine Proteins 0.000 description 1
- 239000000439 tumor marker Substances 0.000 description 1
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 description 1
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1063—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from stomach or intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K51/00—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo
- A61K51/02—Preparations containing radioactive substances for use in therapy or testing in vivo characterised by the carrier, i.e. characterised by the agent or material covalently linked or complexing the radioactive nucleus
- A61K51/04—Organic compounds
- A61K51/08—Peptides, e.g. proteins, carriers being peptides, polyamino acids, proteins
- A61K51/10—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody
- A61K51/1045—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants
- A61K51/1057—Antibodies or immunoglobulins; Fragments thereof, the carrier being an antibody, an immunoglobulin or a fragment thereof, e.g. a camelised human single domain antibody or the Fc fragment of an antibody against animal or human tumor cells or tumor cell determinants the tumor cell being from liver or pancreas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/303—Liver or Pancreas
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
- C07K16/3046—Stomach, Intestines
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K2123/00—Preparations for testing in vivo
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
- C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
- C07K2317/77—Internalization into the cell
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Immunology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Oncology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Optics & Photonics (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
A találmány tárgya az ECACC 90012601 számon deponált C242:II hibridómasejtvonal által termelt vagy ezzel azonos epitóp specifikussággalrendelkező antitest. A találmány kiterjed a fenti antitestalkalmazására, az antitestet tartalmazó gyógyszerkészítményre,valamint az antitestet termelő sejtvonalra. ŕ
Description
A találmány tárgya új, monoklonális tumorantigénre specifikus antitest, ezt termelő sejtvonal, a monoklonális antitestet tartalmazó gyógyszerkészítmény, valamint eljárás ezek előállítására.
A monoklonális antitestek előállítására szolgáló hibridómatechnológia, amit először Köhler és Milstein írt le [Natúré 256., 495-497. (1975)], ma már általánosan elterjedt. Az eljárás során mielómasejteket egyesítenek egy adott antigénnel immunizált állatokból származó limfocitákkal. A kapott hibridómasejt egy adott antigéndeterminánsra specifikus antitesteket termel. Ennek következtében a monoklonális antitestek az immunoassay-vizsgálatokban egyre jobban kiszorítják a szokásos antiszérumokat. Jelentős kutatásokat végeztek a hibridómatechnológiának terápiás célból történő alkalmazására.
Általánosan ismert továbbá, hogy normál szöveti sejteknek tumorsejtekbe történő átvitelekor a sejt felületén lévő szénhidrátszerkezet megváltozik. Sok szénhidrátszerkezet antigénként szolgál, és a tumor által módosított szerkezetek úgynevezett tumorral asszociált antigéneket (TAA) képeznek. A sejtfelületi szénhidrátszerkezetek vagy egy lipidrészhez kapcsolódnak, amikor is ezeket glikolipideknek nevezzük, vagy valamely fehérjéhez vagy peptidhez kötődnek, amikor is ezeket glikofehérjéknek vagy glikopeptidnek nevezzük. A két forma közös megjelölése a glikokonjugátum.
Tumorral asszociált glikokonjugátum antigének ismertek humán tumorbetegségekkel kapcsolatosan. így például két, karcinómával asszociált antigén, a CEA (karcinóma embrionális antigén) és GICA (gasztrointesztinális rák antigén), amely CA 19-9 epitópot hordoz, mutatható ki a gasztrointesztinális karcinómákban, míg egy harmadik epitóp, a CA-50, általános karcinómaantigénnek tűnik. Mindhárom antigén a tumorsejt felületén választódik ki, és a vérszérumban kimutatható. Ezek a felfedezések elősegítették a tumorspecifikus antigéneket felismerő monoklonális antitestek kutatását, amelyek felhasználhatók különböző rákos megbetegedések immunológiai lokalizálásában és terápiájában.
Ismertek hasnyálmirigy- és vastagbél-vékonybél rákra specifikus monoklonális antitestek, amelyek jele C242 (a megfelelő antigén CA-242) [Larsson L. N. és munkatársai: Int. J. Cancer 42., 877-882. (1988); Lindholm L. és munkatársai: „An Immunoradiometric Assay (IRMA) fór the CA-50 antigén”, Tumor Marker Antigens, Jan Holmgren kiadó, Studentlitteratur, (1985); Haglund C. és munkatársai: Br. J. Cancer 60., 845-851. (1989); Sell S.: Humán Pathology
21.(10), 1003-1019. (1990); Johansson C. és munkatársai: Int. J. Cancer 48., 757-763. (1991); és Kuusela P. és munkatársai: Br. J. Cancer, 63., 636-640. (1991)]. A C242 antitestet azonban közelebbről még nem írták le, és így szakember számára előállítása nem volt ismert, és ezért általánosan hozzáférhetőnek nem tekinthető.
A találmány tárgya egy új, monoklonális antitest, amely szignifikáns specifikussággal rendelkezik gasztrointesztinális, elsősorban hasnyálmirigy- és vastagbélvékonybél ráksejtekkel szemben, amely monoklonális antitestet a továbbiakban a C242: II jellel jelöljük.
A C242: II az IgG csoportba tartozó monoklonális egerantitest, amely előállítható, ha megfelelő tápközegben humán vastagbél-adenokarcinómasejtvonallal immunizált egerek lépsejtjeinek Sp2/0 egér-mielómasejtvonallal történő fuzionálásával kapott hibridóma-sejtvonalat tenyésztünk (az eljárást közelebbről az 1. példában mutatjuk be). A C242:II antitestet termelő hibridóma-sejtvonalat 1990. január 26-án deponáltuk a budapesti szerződés előírásai szerint a European Collection of Animál Cell Cultures (ECACC) gyűjteményben (PHLS Centre fór Applied Microbiology and Research, Porton Down, Salisbury Wilts, Nagy-Britannia), ahol a 90012601 deponálási számot kapta. Erre a letétre hivatkoztunk korábban a WO 92/01470 számon közzétett nemzetközi szabadalmi bejelentésünkben, amelynek elsőbbsége 1990. július 20.
A találmány tárgya tehát új, monoklonális antitest, amelynek jele C242:II vagy ezzel lényegében azonos antitest, vagyis ennek funkcionális ekvivalense, amelyet a továbbiakban találmány szerinti antitestnek nevezünk.
A találmány tárgya továbbá olyan sejtvonal, amely képes a találmány szerinti antitest termelésére, elsősorban a fent említett és 90012601 számon deponált hibridóma sejtvonal.
A találmány kiterjed a fenti antitest, valamint a sejtvonal előállítására.
A „lényegében azonos” vagy „funkcionális ekvivalens” kifejezés alatt azt értjük, hogy az antitest lényegében azonos immunológiai specifikussággal rendelkezik, mint a 90012601 számon deponált sejtvonal által termelt antitest, vagyis ugyanahhoz az antigéndeterminánshoz vagy epitóphoz kötődik, és a kötődés vonatkozásában verseng a C242: II antitesttel.
A „találmány szerinti antitest” kifejezés felöleli az érintett antitestek antigénkötő fragmenseit is. Az ilyen fragmens megtartja az ép immunoglobulin kötőképességét és specifikusságát, és előállítható például az antitestnek proteolitikus enzimekkel, így pepszinnel végzett hasításával. Ennek során F(ab’)2-molekula és kisebb peptidek keletkeznek, ahol az F(ab’)2 az antigénkötő fragmensek egyik képviselője. Ugyancsak idetartoznak a géntechnológiai úton előállított megfelelő antitestek és ffagmensek, valamint az antitest származékai és humanizált formái. A találmány keretein belül esnek továbbá azok az egérből és más állatokból származó antitestek, amelyek eltérő lg csoportba vagy alcsoportba tartoznak, de ugyanilyen specifikussággal rendelkeznek. Az antitestkötő fragmensek és rekombináns úton előállított variánsok vonatkozásában a találmány szerinti antitest csoportja vagy alcsoportja kevésbé jelentős, mivel az egyetlen csoport- vagy alcsoport-specifikus determináns az előállítás során többé-kevésbé kiiktatható. A találmány ezért a teljesen nem humán antitestektől a teljesen humán antitestekig terjed, és különböző kimér formákat ölel fel. A teljesen humán antitestek előállíthatok örökített humán antitestet termelő sejtek tenyésztésé\ el.
HU 218 084 Β
A találmány szerinti megoldás egyik megvalósítási módja olyan antitest, amelynek a CA-242 antigén/epitóp vonatkozásában mutatott kötőaffinitása a deponált hibridóma sejtvonal által termelt antitest kötőaffinitásához viszonyítva 10+l-szerestől bizonyos esetekben 10 >szeres értékig terjed. A kérdéses keresztreaktivitást a szokásos blokkoló/kötő vizsgálattal mértük. Ezek az affinitásértékek nem fragmentált és nem derivatizált nem humán antitestekre vonatkoznak.
Az említett géntechnológiai előállítás során a C242:II monoklonális antitest könnyű- és nehézláncegységei változó területeinek megfelelő cDNS-molekulákat közelebbről a 4. példában leírt módon klónozzuk. Az eljárás részletes tárgyalása előtt röviden általánosan áttekintjük egy alap-immunoglobulin szerkezeti felépítését, amit egy G csoportba tartozó immunoglobulin vonatkozásában az 1. ábrán mutatunk be.
Az 1. ábra szerinti immunoglobulin két azonos, könnyű polipeptid láncegységet (L) és két azonos nehéz polipeptid láncegységet (H) tartalmaz, ahol a négy láncegységet diszulfidkötések és különböző, nem kovalens erők tartják össze, és így szimmetrikus Y konfigurációt képeznek. Mindegyik nehézlánc-egység egy változó területet (VH) tartalmaz, amit több állandó terület (CH) követ. Az egyes könnyűlánc-egységek egy változó területet (VL) tartalmaznak, amelyhez a láncegység másik végén egy állandó terület (CL) csatlakozik. A könnyűláncegységnek két típusa van, amit kappa- és lambda-j ellel különböztetünk meg. A könnyűlánc-egység változó területe a nehézlánc-egység változó területéhez kapcsolódik, és a könnyűlánc-egység állandó területe a nehézlánc-egység első állandó területéhez kapcsolódik, ahol a könnyű- és nehézlánc-egység változó területei képezik az antigénkötő helyet.
A könnyű- és nehézlánc-egység változó területei ugyanazt az általános szerkezetet mutatják, mindegyik három hipervariábilis szakaszt tartalmaz, amit komplementaritást meghatározó szakasznak (az angol complementarity determining region elnevezés után rövidítve CDR) nevezünk, amelyeket négy keretszakasz (az angol framework region elnevezés után rövidítve FR) vesz körül. Az egyes változó területekhez tartozó CDR szakaszok szoros közelségben vannak a keretszakaszokkal, és a két CDR készlet együtt határozza meg az antitest specifikusságát.
A C242: II antitest könnyű- és nehézlánc-egységei változó területeinek megfelelő cDNS-molekulák klónozásához először önmagában ismert módon cDNS-fágtárat állítunk elő a C242: II hibridómából. Ezután egér genomiális DNS-éből polimeráz láncreakcióval (PCR) és megfelelő primerek alkalmazásával a nehézlánc-egység és a kappa-könnyűlánc-egység állandó területeit átfedő hibridizációs próbákat állítunk elő. A kapott próbákkal a cDNS-tárat a C242: II antitest nehézlánc-egységét és kappa-láncegységét kódoló DNS-szekvenciát tartalmazó cDNS-klónokra vizsgáljuk. A pozitív hibridizált fágklónokat kiterjesztjük, és a cDNS-t plazmid formájában kivágjuk. Ezeket restrikciós térképezéssel jellemezzük, és a kívánt méretű inszerteket tartalmazó plazmidokat szekvenáljuk. A CDR szakaszok meghatározása érdekében a szekvenált inszertek által kódolt aminosavszekvenciákat az ismert egér kappa- és nehézláncegység szekvenciáival hasonlítjuk össze, amelynek során figyelembe vesszük a CDR szakaszok alapvető elhelyezkedését [Rabat E. A. és munkatársai: Sequences of Proteins of Immunological Interest, 4. kiadás, U. S. Department of Health and Humán Services, National Institutes of Health (1987)]. Azt találtuk, hogy a megfelelő láncegységekhez tartozó CDR szakaszok a következő aminosavszekvenciákkal rendelkeznek (az érintett szekvenciákat a 3. és 4. ábrán is jelöltük): Kappalánc/könnyű lánc:
CDR1: ArgSerSerLysSerLeuLeuHisSerAsnGlyAsnThrTyrLeuTyr (TrpPhe)
CDR2: ArgMetSerAsnLeuValSer(GlyVal)
CDR3: LeuGlnHisLeuGluTyrProPheThr(PheGly) Nehéz lánc:
CDR1: (PheThr)TyrTyrGlyMetAsn
CDR2: (MetGly)TrpIleAspThrThrThrGlyGluProThrT yr AlsGlu AspPheLysGly (Arglle)
CDR3: (AlaArg)ArgGlyProTyrAsnTrpTyrPheAspVal (TrpGly).
A zárójelbe tett terminális dipeptidmaradékok a CDR szekvenciák adott esetben előforduló változatai. A 3. ábrán megadott kappa láncegység egy cisz-maradékot tartalmaz, ami arra utal, hogy a hozzá tartozó CDR szakaszok aminoterminális határa jól definiált.
A fenti CDR szakaszokat kódoló DNS-szekvenciákat a 4. ábra mutatja. A CDR aminosavszekvenciák és/vagy DNS-szekvenciák ismeretében szakember képes arra, hogy a C242:II antitest CDR szakaszait ismert helyspecifikus mutációval valamely más antitest vagy antitestfragmens változó területeibe klónozza. Az eljárás során, amit általában CDR oltásnak neveznek, a DNS szintjén a C242TI antitest CDR szakaszait kódoló szekvenciákat a befogadó antitest vagy fragmens CDR szakaszait kódoló szekvenciák helyére visszük be, és ennek során a C242: II monoklonális antitest specifikusságának megfelelő antitestet vagy antitestfragmenst kapunk. A „találmány szerinti antitest” kifejezés ezért magába foglalja a fenti CDR szakaszokat vagy alternatív CDR aminosavszekvenciákat tartalmazó antitesteket vagy antitestfragmenseket, ahol a CDR szakaszok az ECACC 90012601 számon deponált hibridóma sejtvonal által termelt antitesttel keresztreakcióba lépő funkcionális antitest keretszakaszokba vannak beojtva.
A találmány szerinti antitest tumorasszociált antigénre specifikus, amely antigént CA-242 jellel jelöljük. Ez az antigén egy olyan szialilezett szénhidrát antigén, amely a fent említett CA-50 antigénnel azonos makromolekulán fejeződik ki. Szerkezetileg ez az antigén annyiban tér el a CA-50 epitóptól, hogy a találmány szerinti antitest nem reagál sem szialilezett Lewisariyaggal, sem szialoszillakto-N-tetraózzal. A CA-50re specifikus monoklonális antitest azonban gátolhatja a találmány szerinti antitestnek CA-50-hez történő kötődését, ami arra utal, hogy szerkezeti rokonság van a CA-50 és a találmány szerinti antitest által felismert antigén között. A CA-242 tumorasszociált antigént a legtöbb vastagbél-vékonybél tumor kifejezi, és csak gyen3
HU 218 084 Β gén fejeződik ki, vagy hiányzik a normál vastagbélszövetben.
A találmány szerinti antitestnek a sejthez kötött antigénhez történő kötődése után a képződött antigén-antitest komplex képes arra, hogy bejusson a sejt belsejébe például sejtzárvány formájában. Ez a deponált C242: II antitest legfontosabb tulajdonsága.
Bár a találmány szerinti antitest által felismert antigén alig fejeződik ki normál hasnyálmirigy- és vastagbélszövetben, erősen kifejeződik a hasnyálmirigy-karcinóma és a vastagbél-adenokarcinóma sejtekben. A találmány szerinti antitest ezért felhasználható a humán hasnyálmirigyrák és humán vastagbél-karcinóma immunolokalizálásában és terápiájában.
A találmány szerinti új antitest felhasználható ezért immunológiai vizsgálatra vagy terápiára.
A találmány tárgya továbbá gyógyszerkészítmény, amely találmány szerinti új antitestet tartalmaz, valamint eljárás a gyógyszerkészítmény előállítására.
A találmány szerinti új antitesten alapuló in vitro immunológiai vizsgálat a szokásos immunológiai technikákkal megvalósítható, amelynek során a találmány szerinti antitestet használjuk jelölt vagy jelöletlen formában, és meghatározzuk az antitestnek a vizsgált mintában található specifikus antigénfajtákkal kialakított komplexét. Az első esetben az antitest jelölését valamely kimutatható jelöléssel végezzük, amelyre példaként említhető a radiojelölés, a kemilumineszcensz-jelölés, a fluoreszcensjelölés vagy enzimes jelölés. Az utóbbi esetben az antitestet valamely jelölt anyaggal képezett komplexen keresztül mutatjuk ki, vagy a kimutatást nem jelölőtechnikával végezzük, ilyen például a felületi plazmonrezonancián alapuló bioszenzormódszer. Mintaként alkalmazható például valamely testfolyadék, így szérum, valamint szövetpreparátum (hisztokémiai vizsgálat).
Az in vivő diagnosztikai eljáráshoz a találmány szerinti antitestet megfelelő külső detektálható jelöléssel, így radiojelöléssel vagy nehéz fématommal látjuk el, majd a vizsgált betegnek adagoljuk, és a szervezeten belül meghatározzuk az antitest felhalmozódásának helyét.
A terápiás alkalmazáshoz a találmány szerinti új antitestet gyógyszerkészítménnyé alakítjuk, amelynek előállításához a szokásos gyógyszerészeti hordozóanyagokat, például vizet alkalmazunk, és amit a szokásos módon, például intravénásán, szubkután, intramuszkulárisan vagy intraperitoneálisan adagolunk.
Az 1. ábra a G immunoglobulin általános szerkezetének vázlatát mutatja be.
A 2. ábra a sejtzárványok kialakulását mutatja be a C242: II sejteknél.
A 3. ábra a C242:II monoklonális antitest kappaláncegysége változó területét kódoló cDNS-szekvenciát mutatja be a megfelelő aminosavszekvenciával együtt.
A 4. ábra a C242: II monoklonális antitest nehézlánc-egység változó területét kódoló cDNS-szekvenciát mutatja be a megfelelő aminosavszekvenciával együtt.
A találmány tárgyát közelebbről az alábbi példákkal mutatjuk be anélkül, hogy az oltalmi kör a példákra korlátozódna. A példákban leírjuk a találmány szerinti új antitestet termelő hibridóma előállítását, ennek immunohisztológiai vizsgálathoz történő alkalmazását, a sejtzárvány kialakulását, valamint a C242: II monoklonális antitest könnyű- és nehézlánc-egységét kódoló cDNSmolekulák klónozását.
1. példa
A C242:II antitestet termelő hibridóma sejtvonal kialakítása
Az American Type Culture Collection (ATCC; Rockville, Md., USA) gyűjteményből CCL 222 számon beszerezhető COLO 205 humán vastagbél-vékonybél karcinóma-sejtvonalat 10% magzati borjúszérummal (FCS) kiegészített Iscove-féle MÉM tápközegen tenyésztjük a szokásos módon. A sejteket az összefolyás előtt, általában 2-3 nappal az altenyészet megkezdése után összegyűjtjük, és foszfátpufferolt sóoldattal, (PBS) háromszor mossuk.
4-6 hetes BALB/C egerek immunizálásához kezdeti dózisként intraperitoneálisan 3 χ 107 COLO 205 sejtet adagolunk 0,1 ml PBS-ben szuszpendálva. Második dózisként további 0,1 ml szuszpenzióban 3 χ 107 COLO 205 sejtet adagolunk, majd az állatokat 4 nap elteltével megöljük, és a lépet eltávolítjuk. A lépet egyetlen sejtszuszpenzióban disszociáljuk.
A sejtszuszpenzióból 1,2 χ 108 lépsejtet megosztunk két kémcső között. Minden kémcsőhöz további 108 mielómasejtet adunk, ami SP2/0 egér-mielómasejtvonalból (az ATCC gyűjteményben CRL 1581 számon) származik. A két kémcsövet centrifugáljuk, és a folyékony fázist dekantáljuk. Minden kémcsőhöz lassan 2 ml, 37 °C hőmérsékletű polietilénglikol (PEG) oldatot (10 g 4000 móltömegű PEG, 1 ml dimetil-szulfoxid (DMSO) és 10 ml monoklonális sóoldat) adagolunk 1 perc alatt folyamatos kevertetés közben. A kémcsöveket ezután 90 percen keresztül 37 °C hőmérsékletű vízfürdőn óvatosan kevertetjük. A sejtfúzió megszakításához a kémcsövekhez fiziológiás pufferoldatot adunk a következő előírás szerint: 2 ml 30 másodperc alatt, 6 ml 30 másodperc alatt, majd további 32 ml 1 perc alatt. A sejtszuszpenziót a tenyészközeggel mossuk, majd összesen 100 ml hipoxantin/aminopterin/timidin (HAT) eleggyel kiegészített tápközegben szuszpendáljuk. Tápközegként 10 tömeg% FCS, 36 mg/1 L-aszparagin, 116 mg/1 Larginin HC1, 10 mg/1 folsav, 292,3 mg/1 L-glutamin, 110,1 mg/1 nátrium-piruvát és 3,49 μ 1/1 merkapto-etanol adalékokkal kiegészített Iscove-féle MÉM tápközeget használunk. 50 μΐ térfogatú aliquot mintákat 96 mérőhelyes szövettenyésztő lemezre viszünk. A mérőhelyeket BALB/C egerekből származó 250 μΐ makrofág szuszpenzióval (2xl04 sejt/ml) lefedjük, ahol a makrofág szuszpenziót HAT eleggyel kiegészített tápközegben vesszük fel. A tápközeget a fúziót követő 6 nap elteltével lecseréljük.
A hatodik napon lecserélt, kimerült közeget COLO 205 pozitív antitestekre vizsgáljuk Kennett R. H. módszere szerint („Enzyme-linked antibody assay with cells
HU 218 084 Β attached to polyvinyl chloride plates”, Monoclonal Antibodies. Hybridomas. A new dimension in biological analyses. H. R. Kennett, T. J. McKevin, Κ, B. Bechtol Kiadó, Plenum Press, New York (1980)]. Ennek során IIF típusú Nunc immunolemezek mérőhelyeit 2xl05 sejt/mérőhely mennyiségben 50 μΐ COLO 205 sejttel (1 mg/100 ml PBS) vonjuk be. Ezután 50 μΐ/mérőhely mennyiségben a hatodik napon eltávolított, kimerült tápközeget adjuk a sejtekhez. Egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd peroxidázzal konjugált antiegér Ig-t (Dakopatts P 260, Dakopatts A/S, Koppenhága, Dánia) adunk hozzá 100 pg/mérőhely mennyiségben 1:500 arányban 1 tömeg% BSA-PBS-ben (BSA=borjú-szérumalbumin) hígítva. Egy éjszakán keresztül szobahőmérsékleten inkubáljuk, majd 100 pl/mérőhely mennyiségben négy OPD-tablettát (Dako S2000) adunk hozzá 12 ml citromsavpufferben (pH=5,0) és 5 μΐ 30 tömeg%-os hidrogén-peroxidban oldva, és inkubálás után 450 nm hullámhosszon mérjük a fényelnyelést.
Megközelítőleg 600 hibridómaklónt vizsgálunk. A vizsgált kiónok közül 190 reagál COLO 205 sejtekkel, ebből 177 normál humán limfocitákkal (Lymphoprep, Nyegaard A/S, Norvégia) is reagál, amit eldobunk. A fennmaradó kiónok közül az egyik C242 jelet kapja, és izotípusa szerint az IgGl osztályba tartozik. A C242 hibridómát több szubklónozással stabil, monoklonális antitest termelésére képes C242: II kiónná alakítjuk.
Ennek során a C242 hibridóma első klónozásakor C242:5 kiónt kapunk. Ezt C242:5:2 kiónná alakítjuk. Mindkét lépésben a hibridómaszuszpenziót hipoxantin/timidin (HT) eleggyel kiegészített tenyészközegben hígítjuk 4 sejt/ml sűrűségig. Ebből 50 pl-t (0,2 sejt) egy 96 mérőhelyes, előzetesen 250 pl, HT eleggyel kiegészített közegben felvett BALB/C egérmakrofág-szuszpenzióval (5xl03 makrofág/mérőhely) bevont lemez mérőhelyeihez adagolunk. 2-5 nap elteltével mikroszkópon, vizuálisan egyetlen sejtklónt detektálunk. A hatodik napon a tápközeget kicseréljük, és a kimerült közeg aliquot részeit a fent leírt módon ELISA-vizsgálattal COLO 205 sejtekhez kötődő, de normál humán sejtekhez nem kötődő antitestekre vizsgáljuk. Kiválasztjuk a COLO 205 sejtekkel pozitív reakciót, és a normál sejtekkel negatív reakciót adó legjobb kiónt, és fiolákban folyékony nitrogénben fagyasztjuk.
A harmadik klónozáshoz a sejteket megolvasztjuk, és DMEM közegben (Dulbecco szerint módosított Eagle közeg+5 tömeg% FCS) tenyésztjük. A sejteket ezután átlag három sejt/mérőhely mennyiségben 96 mérőhelyes tenyészlemezre visszük. A klónozást 5 tömeg% FCS-sel kiegészített DMEM közegben végezzük, és etetősejtként egérmakrofágot használunk. Ezen a lemezen 30 klón jelenik meg, amiből 16 kiónt nefelometriásan IgG-termelésre vizsgálunk, és az antitestre vonatkozó specifikusságot a fent leírt módon ELISA- vizsgálattal ellenőrizzük. A vizsgált kiónok közül tizenkettő IgG-t termel. Tíz kiónt 24 mérőhelyes szövettenyésztő lemezre viszünk, amelyről a kimerült tápközeget IgG-termelésre és specifikusságra vizsgáljuk. A szelektálás során négy olyan kiónt választunk ki, amely viszonylag nagy termelékenységet mutat. A végső termelékenységi vizsgálatot a négy klónnál kettős szövettenyésztő palackban végezzük. A legnagyobb termelékenységet mutató klón a C242/CL 510 Al jelet kapja. Ezt folyékony nitrogénben fagyasztjuk.
A C242/CL 510 Al első klónozása szerint a sejtek egyharmada nem termel IgG-t, mivel az általános egérIgG ELISA szerint 1:1000 arányú hígításnál 0,1 alatti abszorpció mérhető. Öt pozitív szubklónt egyesítve C242:I kiónt alakítunk ki. A klón termelékenysége HPLC-alapú vizsgálat szerint 150 pg egér-IgG 1 ml-enként.
A C242:1 ki ónt 96 mérőhelyes lemezen klónozva 33 kiónt kapunk, amely mindegyike egér-IgG-t termel. Egyenként legalább 150 pg/ml termelékenységet mutató öt klónból kialakítjuk a végső C242:II jelű kiónt, amely stabilan képes IgG termelésére. HPLC-vizsgálat szerint a C242:11 termelékenysége 196 pg egér-IgG 1 ml-enként. A sejteket fiolákban folyékony nitrogénben fagyasztjuk és tároljuk. A C242: II hibridómasejtek egy mintáját az ECACC gyűjteményben 90012601 számon deponáltuk.
A fenti hibridómából kezdeti sejtszuszpenziót képezünk, és a sejteket összesen 6000 cm2 felületű szövettenyésztő kamrába (Nunc A/S) visszük 2 χ 104 sejt/ml sűrűséggel. A sejteket Iscove szerint módosított DMEM közegben [Iscove N. N. és Melchers F.: J. Exp. Med. 147, 923 (1978)] tenyésztjük, amit előzetesen 1 tömeg% gentamicinnel, 1 tömeg% aminosav kiegészítővel és 5 tömeg% FCS-sel egészítünk ki. A sejteket négy vagy öt napon keresztül 37 °C hőmérsékleten 8% CO2-t tartalmazó nedves légkörben inkubáljuk. Az inkubálás után a sejteket megszámoljuk, és a monoklonális antitest-koncentráció meghatározásához mintát veszünk. A sejttenyészet felülúszóját dekantáljuk, és cellulózszűrőn szűrve eltávolítjuk a szuszpendált sejteket. A felülúszót ezután ultraszűréssel Millipore Pellican ultraszűrősejtben 20-30szorosra bekoncentráljuk, amelynek során 30 000 móltömegű membránt használunk. A koncentrátum egyik mintáját analizálva meghatározzuk a C242: II monoklonális antitest koncentrációját és antigén reaktivitását, majd a monoklonális antitest-koncentrátumot további tisztításig -70 °C hőmérsékleten tároljuk.
Protein-A-Sepharose 4B töltetet (Pharmacia AB., Uppsala, Svédország) készítünk elő a gél duzzasztásával és mosásával, majd a kapott C242: II antitest koncentrátumot 1,5 mol/1 glicin-NaOH és 3 mol/1 NaCl (pH=8,9) kötőpuffer alkalmazásával megkötjük. A fenti pufferrel végzett kezdeti mosás után az affinitív oszlopot 0,1 mol/1 citromsav-NaOH pufferrel (pH=5,0) eluáljuk, és a C242:II monoklonális antitestet 1 mol/1 Trisz-HClt (pH=8,0) tartalmazó csövekbe gyűjtjük. A kapott antitestet 0,02 mol/1 foszfátpufferrel, 0,15 mol/1 nátriumkloriddal (pH=7,2) és 0,2 g/1 nátrium-nitrittel szemben dializáljuk. A dializált C242:II antitestet 30 000 móltömegű membrán alkalmazásával ultraszűréssel koncentráljuk. A koncentráció és a minőség ellenőrzése után a C242:II monoklonális antitestet -20 °C hőmérsékleten tároljuk.
HU 218 084 Β
2. példa
A C242:II immunohisztokémiai vizsgálata vastagbél-vékonybél rákon és normál szöveten Sebészeti úton primer vastagbél-vékonybél karcinóma és különböző normál szövetmintákat veszünk. A szöveteket jégen tartjuk, és a mintavételt követő 1 órán belül folyékony nitrogénnel előhűtött izopentánon fagyasztjuk. A szöveteket a vizsgálatig -70 °C hőmérsékleten tároljuk. A fagyasztott biopsziákat 5 μιη-es szakaszokra vágjuk, és a fixálást 50 tömeg% acetonban 30 másodpercen keresztül +4 °C hőmérsékleten, majd tiszta acetonban 5 percen keresztül +4 °C hőmérsékleten végezzük. A szakaszokat levegőn szárítjuk, és 10 percen keresztül PBS-sel öblítjük. A mintákat ezután 0,3 tömeg% PBS-ben felvett hidrogén-peroxiddal inkubáljuk 5 percen keresztül az endogén peroxidáz blokkolása érdekében, majd kétszer PBS-sel átöblítjük. Ezután a mintákat PBS-4 tömeg% BSA eleggyel 1:10 arányban hígított normál sertésszérummal kezeljük 5 percen keresztül +4 °C hőmérsékleten az antitest nem specifikus kötődésének blokkolása érdekében.
Az antitest inkubálását mindig nedves légkörben, 30 percen keresztül szobahőmérsékleten végezzük. A mintákat először C242:1I monoklonális antitesttel (1. példa) inkubáljuk PBS-4 tömeg% BSA elegyben, majd az inkubálást biotinilezett ló-antiegér IgG-vel (Vectastain, Vector Laboratories, Burlingame, CA, USA) folytatjuk 1:400 hígítással 2 tömeg% sertés-antinyúl immunoglobulinnal kiegészített PBS-4 tömeg% BSA eleggyel, majd a végső inkubálást Avidin DH/biotinilezett tormaperoxidáz H komplexszel (Dakopatts A/S, Koppenhága, Dánia) végezzük. Az egyes inkubálási lépések után a mintákat 15 percen keresztül PBS-sel öblítjük. A mintát ezután 15 percen keresztül szubsztrátummal kezeljük, PBS-sel öblítjük, hematoxilinnel megfestjük, és glicerinzselatinba (Merck, Darmstadt, Németország) ágyazzuk. Szubsztrátumként 10 mg 3-amino-9-etil-karbazolt (Sigma, St. Louis, Mo., USA) használunk, amit 6 ml dimetil-szulfoxidban oldunk, és 4 pl 30 tömeg% hidrogén-peroxidot tartalmazó 50 ml 0,02 mol/1 nátrium-acetáttal (pH=5,5) hígítunk. A szubsztrátum oldatát felhasználás előtt szűrjük. A minták vizsgálati eredményét az 1. táblázatban foglaljuk össze.
1. táblázat
Vastagbél-vékonybél tumor és különböző normál szövetek C242: II antitesttel történő megfestése
| Szövetminta | Festett/összes |
| Vastagbél-vékonybél karcinóma | 26/41 |
| Normál vastagbél | 8/16 |
| Emlő | 2/3 |
| Fültőmirigy | 2/2 |
| Bőr | 0/1 (a verejtékmirigyek enyhe elszíneződése) |
| Szövetminta | Fcstett/összcs |
| Máj | 0/2 (az epe enyhe elszíneződése) |
| Vese | 0/1 |
| Hasnyálmirigy | 2/2 (vezeték) |
| Gyomor | 0/1 |
| Vékonybél | 0/1 |
Az 1. táblázatban felsorolt eredményekből látható, hogy a vastagbél-vékonybél tumorból származó biopsziák 63%-a pozitív elszíneződést mutat a C242: II monoklonális antitesttel, A CA-242 antigén kifejeződése normál vastagbélszöveten általánosan gyengébb, mint a tumorszövetben, az elszíneződés teljes egészében az oszlopos epitéliumra és talpas sejtekre lokalizálódik. A vastagbéltől eltérő normál szövetek gyakorlatilag nem mutatnak reakcióképességet, míg pozitív eredményt találtunk a normál mellkasi vezetékben, hasnyálmirigy-vezetékben, epevezetékben és verejtékmirigyben, de az elszíneződés intenzitása gyenge.
3. példa
Sejtzárványképződés COLO 205 humán vastagbélkarcinómához kötött C242: II antitestnél A sejtzárványképződés vizsgálatához egyrétegű kultúrában tenyésztett COLO 205 sejtekből (lásd az 1. példát) egyetlen sejtszuszpenziót készítünk. A sejteket tripszinnel kezeljük, majd a tenyészközeggel alaposan átöblítjük, végül szuszpendáljuk. Jóddal jelölt C242: II antitestet (lásd az 1. példát; 200 000 cpm megfelel 50 ng monoklonális antitestnek) adunk a COLO 205 sejtek egyetlen sejtszuszpenziójához (106 sejt) 5 ml-es csövekben. A végső térfogat 200 μΐ.
A sejteket l25I-C242 jelenlétében 1 órán keresztül jégen (0 °C) inkubáljuk. A szuszpenziót ezután centrifugáljuk, és a sejteket mosással megszabadítjuk a meg nem kötött monoklonális antitesttől. Az előinkubált sejteket ezután 37 °C hőmérsékleten 1 órán keresztül 10 perces intervallumokban inkubáljuk, amelynek során a sejteket minden esetben lehűtjük, és pelletáljuk. A tenyészközegben felszabadult radiojelölésű anyag mennyiségét a felülúszóban vizsgáljuk (LKB gamma-számláló, Pharmacia AB, Uppsala, Svédország). A felülúszón emellett TCA kicsapást végzünk, és mérjük a csapadék radioaktivitását. A felülethez kötött 125I-C242-t 2,5 mg/ml papaint tartalmazó 0,2 mol/1 glicin-HCl-pufferrel (pH = 1,5) végzett savas mosással távolítjuk el, és méijük a radioaktivitást. A felülethez kötött antitest mennyiségét a 37 °C-on végzett inkubálás során minden esetben úgy számoljuk, hogy a felszabadult és beépült monoklonális antitestet kivonjuk a felülethez kötött ossz monoklonális antitestből. A felszabadult antitest degradálódását a közeg felülúszójából TCA kicsapással kapott csapadékon méijük.
Az eredményeket a 2. ábrán adjuk meg, ahol a sejtfelületen mért radioaktivitást (Sur), a beépült radioakti6
HU 218 084 Β vitást (Int), a felszabadult radioaktivitást (Rés) és a degradált felszabadult radioaktivitást (Deg.Re) ábrázoljuk a sejtfelületen mért ossz kezdeti radioaktivitás százalékában. A 2. ábrából látható, hogy a C242:II antitest több mint 20%-ban beépül 1 órán belül, ha az előinkubált sejteket 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Csekély savban oldódó radioaktivitás mérhető, ha a közeg felülúszóját TCA kicsapásnak vetjük alá, ami arra utal, hogy a felszabadult aktivitás 1 órás inkubálás alatt kismértékben fragmentálódik.
4. példa
A C242.ll monoklonális antitest könnyű- és nehézlánc-egységének részeit kódoló cDNS molekuláris klónozása
108 sejtből ossz RNS-t állítunk elő Chomezynksi P. és Sacchi N. által módosított [Anal. Biochem. 162., 156-159. (1987)] Chirgwin J. M. és munkatársai módszerével [Biochemistry 18., 5294-5299. (1979)]. Ennek során a sejtpelletet 15 ml hideg denaturálóoldatban (4 mol/1 guanidinium-tiocianát, 25 mmol nátrium-citrát, pH=7, 0,5 tömeg% N-lauroil-szarkozin és 0,1 mol/1 2merkapto-etanol) oldunk, majd 1,2 ml 2 mol/1 nátrium-acetátot (pH =4,0) adunk hozzá, és az elegyet fenol/kloroform/izoamil-alkohol 250:49:1 eleggyel extraháljuk. Centrifugálás után az RNS-t a vizes fázisból azonos térfogatnyi izopropanollal kicsapjuk, majd egy éjszakán keresztül -20 °C hőmérsékleten inkubáljuk. Centrifugálás után az RNS-t szuszpendáljuk, ismét kicsapjuk, majd a centrifugálást és kicsapást megismételjük. így 960 pg ossz RNS-t kapunk.
A kapott össz-RNS-ből poliadenilezett mRNS-t izolálunk PolyATract mRNS izolálórendszerrel (Promega Corporation, Madison, Wisconsin, USA) a gyártó előírásai szerint [Promega Technical Bulletin, 090. szám (1990)]. Ennek során 960 pg ossz RNS-t oldunk vízzel, és biotinilezett oligo(dT)mintával (50 pmol) kezeljük 0,4xSSC jelenlétében (lxSSC=8,77 g NaCl, 4,41 g nátrium-citrát 1 liter vízben, pH = 7,0). Streptavidinnel bevont paramágneses gyöngyöket (Streptavidin Magnesphere) adunk hozzá, és 10 perces inkubálás után a mágneses részecskéket eltávolítjuk, és 0,lxSSC-vel többször mossuk. A poliadenilezett mRNS-t a gyöngyökről vizes inkubálással eluáljuk, amelynek során 5 pg mRNS-t kapunk.
A kapott poliadenilezett mRNS-ből cDNS-t állítunk elő Gubler U. és Hoffman B. J. módszerével [Gene, 25., 263-269 (1983)] Uni-Zap vektor (Stratagene Inc. La Jolla, Califomia, USA) alkalmazásával, ami lehetővé teszi a kétszálú cDNS egyirányú klónozását. Ennek során 5 pg poliadenilezett mRNS-t egyszálú cDNS-sé alakítunk Uni-Zap linker primer (56 ng/ml) alkalmazásával, amikor is 0,6 mmol/1 dATP-t, dGTP-t, dTTP-t és 5metil-dCTP-t, valamint 45 egység moloncia egér leukémia vírus reverz transzkriptázt adunk az elegyhez. Az elegyet 1 órán keresztül 37 °C hőmérsékleten inkubáljuk. A kétszálú cDNS szintézisét 0,15 mmol/1 koncentrációjú dATP-vel, dGTP-vel dTTP-vel és dCTP-vel végezzük 3,2 egység R-náz H enzim és 6,5 egység DNSpolimeráz I enzim jelenlétében. Az inkubálást 2,5 órán keresztül 16 °C hőmérsékleten végezzük. Az elegyet fenol/kloroform 1:1 eleggyel extraháljuk, és etanollal kicsapjuk. A cDNS-végeit 0,16 mmol/1 dNTP és 10 egység T4 DNS-polimeráz jelenlétében 37 °C hőmérsékleten 30 percen keresztül végzett inkubálással tompa végűvé alakítjuk. Fenol/kloroform eleggyel végzett extrahálás és etanolos kicsapás után a kapott tompa végű cDNS-t EcoRI adapterhez ligáljuk három Weiss-egység T4 DNS-ligáz és 1 mmol/1 ATP jelenlétében egy éjszakán keresztül 8 °C hőmérsékleten végzett inkubálással. A ligálás után az EcoRI tapadó végeket 10 egység T4 polinukleotid kinázzal kezeljük 1 mmol/1 ATP jelenlétében 37 °C hőmérsékleten 30 percen keresztül végzett inkubálással. A kapott cDNS-t, amely foszforilezett EcoRI tapadó végekkel rendelkezik, 90 egység Xhol enzimmel emésztjük, és így az Uni-Zap linker primer által kódolt szekvenciától egy Xhol tapadó véget alakítunk ki. A kapott cDNS-t ezután 1 pg Uni-Zap XR EcoRIgyel és Xhol-gyel kialakított karjaihoz ligáljuk kettő Weiss-egység T4 DNS-ligáz és 1 mmol/1 ATP jelenlétében egy éjszakán keresztül 12 °C hőmérsékleten végzett inkubálással. A ligáló elegyet in vitro fágrészecskékbe csomagoljuk Gigapack II Gold csomagolóextraktum alkalmazásával a gyártó előírásai szerint, és a kapott fágokkal E. coli PLK-F’ sejteket fertőzünk. A kapott 8,5 xlO4 független klónból álló cDNS-tárat 7,5 xlO8 pfii/ml fágtiterre egészítjük ki. A kapott cDNS-tárat E. coii XLl-Blue törzzsel [Bullock W.: Biotechniques 5., 4. T978)] vizsgáljuk.
A C242:ll antitest IgGl nehézlánc-egységét és kappa-láncegységét kódoló cDNS-klónok kimutatásához a nehézlánc-egység CH 1 első állandó területét és a kappa-láncegység CK állandó területét lefedő hibridizációs mintákat állítunk elő egér genomiális DNS-éből polimeráz láncreakcióval [Saiki R. H. és munkatársai: Science, 239., 487-491. (1988)]. Ennek során az egér genomiális DNS-t a fenti immunoglobulin területeket kódoló exonok 5’- és 3’-szakaszaival hibridizáló oligonukleotid primer párokat használjuk. Agarózgél-elektroforézissel végzett tisztítás után a kapott DNS-próbaffagmenseket 32P-vel jelöljük véletlenszerű primer kiterjesztéses módszerrel [Feinberg A. P. és Vogelstein B. Biochem. 132., 6., (1983)].
A cDNS-tárat két külön körben immunoglobulin IgGl és kappa-minták segítségével vizsgáljuk [Sambrook J. és munkatársai: Molecular Cloning, 2. kiadás, Cold Spring Harbor Laboratory Press (1989)]. A két külön hibridizációs vizsgálat pozitívan hibridizáló fágklónjait tovább tisztítjuk, amelynek során a kezdeti vizsgálathoz használt próbákat alkalmazzuk. A pozitívan hibridizáló fágklónokat E. coli XLl-Blue tenyészetben elszaporítjuk, és a kapott fágtörzset használjuk a pBluescript SK(-) plazmidokat tartalmazó cDNS-nek fágmid kivágással és szaporítással történő előállításához [Short J. M. és munkatársai: Nucleic Acids Rés. 76,7583-7600.(1988)].
A kapott és a plazmidokat tartalmazó cDNS-t restrikciós enzimes térképezéssel jellemezzük, és a kívánt méretű inszerteket tartalmazó plazmidokat didezoxi DNS-szekvenálásnak vetjük alá [Sanger F. és munkatár7
HU 218 084 Β sai: Proc. Natl. Acad. Sci. USA 74., 5463-5467. (1977)]. Az lg kappa-próbával hibridizáló plazmid, jele pKGE761, olyan cDNS-inszertet tartalmaz, amelynek szekvenciája a korábban ismert egér kappa-könnyűlánc-egység szekvenciával [Kábát E. A. és munkatársai : Sequences of Protein of Immunological Interest, 4. kiadás, U. S. Department of Health and Humán Services, National Institutes of Health (1987)] közeli homológiát mutató nyílt leolvasó keretet kódol. A kappakönnyűlánc-egység VK változó területét kódoló részleges cDNS-szekvenciát és ennek lefordított fehérje szekvenciáját a 3. ábra mutatja. A három CDR-szekvenciát (CDR1-CDR3) aláhúzással jelöljük. A VK-szegmens aminoterminális végét megelőző szignálpeptidet S jelöli. A VK-szekvencia karboxiterminális végét követő állandó területet CK jelöli.
Az IgGl próbával hibridizáló plazmid, jele pKGE762, olyan cDNS-inszertet tartalmaz, amelynek szekvenciája a korábban ismert egér-IgGl nehézláncegységének szekvenciájával (Kábát E. A. és munkatársai idézett műve) közeli homológiát mutató nyílt leolvasókeretet kódol. Az IgGl nehézlánc-egységének VH változó területét kódoló részleges cDNS-szekvenciát és ennek lefordított fehérje szekvenciáját a 4. ábra mutatja. A három CDR-szekvenciát (CDR1-CDR3) aláhúzással jelöljük. A VH szegmens aminoterminális végét megelőző szignálpeptidet S jelöli. A VH szegmens karboxiterminális végét követő állandó területet CH 1 jelöli.
Claims (16)
- SZABADALMI IGÉNYPONTOK1. Az ECACC 90012601 számon deponált C242:II hibridóma sejtvonal által termelt antitest vagy azonos epitóp specifikussággal rendelkező más antitest.
- 2. Az 1. igénypont szerinti monoklonális antitest in vivő diagnosztikai célra.
- 3. Az 1. igénypont szerinti monoklonális antitest terápiás célra.
- 4. Az 1-3. igénypontok bármelyike szerinti antitest fragmentált formája.
- 5. Az 1-4. igénypontok bármelyike szerinti antitest, azzal jellemezve, hogy specifikusan ugyanahhoz az epitóphoz kötődik, mint az az antitest, amely a komplementaritást meghatározó szakaszaiban az alábbi aminosavszekvenciákkal rendelkezik:Kappa-lánc:CDR1: ArgSerSerLysSerLeuLeuHisSerAsnGlyAsnThrTyrLeuTyrCDR2: ArgMetSerAsnLeuValSerCDR3: LeuGlnHisLeuGluTyrProPheThrNehézlánc:CDR1: TyrTyrGlyMetAsnCDR2: TrpIleAspThrThrThrGlyGluProThrTyrAlsGluAspPheLysGlyCDR3: ArgGlyProTyrAsnTrpTyrPheAspVal.
- 6. In vitro diagnosztikai eljárás, azzal jellemezve, hogy a mintát az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti monoklonális antitesttel érintkeztetjük a saját antigénjéhez kötött monoklonális antitestből álló komplex kialakulását biztosító körülmények között, majd a kapott komplexet meghatározzuk, ahol a komplex mennyisége a mintában lévő antigén mennyiségével van összefüggésben.
- 7. Gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy az 1 - 5. igénypontok bármelyike szerinti monoklonális antitestet tartalmaz.
- 8. A 7. igénypont szerinti gyógyszerkészítmény, azzal jellemezve, hogy a monoklonális antitest vizes oldatát tartalmazza.
- 9. Sejtvonal, azzal jellemezve, hogy az 1-5. igénypontok bármelyike szerinti antitestet vagy ennek antigénkötő fragmensét termeli.
- 10. A 9. igénypont szerinti sejtvonal, amely ECACC 90012601 számon deponált C242:II hibridóma sejtvonal vagy ennek mesterséges vagy spontán változata.
- 11. Eljárás az ECACC 90012601 számon deponált C242: II hibridóma sejtvonal által termelt antitest vagy azonos epitop specifikussággal rendelkező más antitest előállítására, azzal jellemezve, hogy a C242:II hibridóma sejtvonalat vagy ezzel azonos epitóp specifikussággal rendelkező más antitestet termelő, önmagában ismert módon előállított sejtvonalat tenyésztünk, és a termelt antitestet kinyerjük.
- 12. A 11. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az antitestet fragmentált formában nyerjük ki.
- 13. A 11. vagy 12. igénypont szerinti eljárás olyan antitest előállítására, amely specifikusan ugyanahhoz az epitóphoz kötődik, mint az az antitest, amely a komplementaritást meghatározó szakaszaiban az alábbi aminosavszekvenciákkal rendelkezik:Kappa-lánc:CDR1: ArgSerSerLysSerLeuLeuHisSerAsnGlyAsnThrTyrLeuTyrCDR2: ArgMetSerAsnLeuValSerCDR3: LeuGlnHisLeuGluTyrProPheThrNehézlánc:CDR1: TyrTyrGlyMetAsnCDR2: TrpIleAspThrThrThrGlyGluProThrTyrAlsGluAspPheLysGlyCDR3: ArgGlyProTyrAsnTrpTyrPheAspVal, azzal jellemezve, hogy a megfelelő antitestet termelő sejteket tenyésztjük, és a termelt antitestet kinyeljük.
- 14. Eljárás gyógyszerkészítmény előállítására, azzal jellemezve, hogy egy, a 11-13. igénypontok bármelyike szerint előállított antitestet gyógyszerészeti hordozóanyaggal és adott esetben egyéb gyógyszerészeti segédanyaggal keverünk, és a keveréket gyógyszerkészítménnyé alakítjuk.
- 15. Eljárás sejtvonal előállítására, azzal jellemezve, hogy a 11-13. igénypontok bármelyike szerint előállított antitest ismeretében önmagában ismert módon az adott antitestet termelő sejtvonalat állítjuk elő.
- 16. A 15. igénypont szerinti eljárás ECACC 90012601 számon deponált C242:II hibridóma sejtvonal vagy ennek mesterséges, vagy spontán változata előállítására, azzal jellemezve, hogy a megfelelő sejtvonalat állítjuk elő.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE9102074A SE9102074D0 (sv) | 1991-07-03 | 1991-07-03 | Tomour antigen specific antibody |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HU9400011D0 HU9400011D0 (en) | 1994-05-30 |
| HUT71193A HUT71193A (en) | 1995-11-28 |
| HU218084B true HU218084B (hu) | 2000-05-28 |
Family
ID=20383243
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU9400011A HU218084B (hu) | 1991-07-03 | 1992-07-03 | Daganatokra specifikus monoklonális antitest és sejtvonal, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények |
| HU95P/P00289P HU211512A9 (en) | 1991-07-03 | 1995-06-20 | Tumor antigen specific antibody and cell line, and pharmaceutical composition comprising them |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU95P/P00289P HU211512A9 (en) | 1991-07-03 | 1995-06-20 | Tumor antigen specific antibody and cell line, and pharmaceutical composition comprising them |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5552293A (hu) |
| EP (1) | EP0521842B1 (hu) |
| JP (1) | JP3194020B2 (hu) |
| KR (1) | KR100246681B1 (hu) |
| AT (1) | ATE171193T1 (hu) |
| AU (2) | AU2292092A (hu) |
| CA (1) | CA2073124C (hu) |
| DE (1) | DE69226990T2 (hu) |
| DK (1) | DK0521842T3 (hu) |
| EE (1) | EE03031B1 (hu) |
| ES (1) | ES2124250T3 (hu) |
| FI (1) | FI109207B (hu) |
| HU (2) | HU218084B (hu) |
| IE (1) | IE80841B1 (hu) |
| IL (1) | IL102390A (hu) |
| NO (1) | NO315472B1 (hu) |
| NZ (1) | NZ243435A (hu) |
| SE (1) | SE9102074D0 (hu) |
| WO (2) | WO1993001302A1 (hu) |
Families Citing this family (28)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| SE9402430L (sv) | 1994-07-11 | 1996-01-12 | Pharmacia Ab | Konjugat mellan modifierat superantigen och en målsökande förening samt användning av konjugaten |
| SE9601245D0 (sv) | 1996-03-29 | 1996-03-29 | Pharmacia Ab | Chimeric superantigens and their use |
| TW517061B (en) | 1996-03-29 | 2003-01-11 | Pharmacia & Amp Upjohn Ab | Modified/chimeric superantigens and their use |
| EP1229934B1 (en) | 1999-10-01 | 2014-03-05 | Immunogen, Inc. | Compositions and methods for treating cancer using immunoconjugates and chemotherapeutic agents |
| DK1411962T3 (da) | 2001-03-15 | 2011-04-04 | Neogenix Oncology Inc | Terapi for pancreacancer med monoklonalt stof |
| DE10116552A1 (de) * | 2001-04-03 | 2002-10-10 | Abc Armbruster Biochemicals | Verfahren zur Bestimmung der wirksamen Parathormon-Aktivität in einer Probe |
| NZ537610A (en) * | 2002-07-02 | 2006-07-28 | Smithkline Beecham Corp | Stable formulations of the C242 antibody |
| US7390898B2 (en) | 2002-08-02 | 2008-06-24 | Immunogen Inc. | Cytotoxic agents containing novel potent taxanes and their therapeutic use |
| US8088387B2 (en) | 2003-10-10 | 2012-01-03 | Immunogen Inc. | Method of targeting specific cell populations using cell-binding agent maytansinoid conjugates linked via a non-cleavable linker, said conjugates, and methods of making said conjugates |
| AU2004240541B2 (en) | 2003-05-20 | 2009-08-20 | Immunogen, Inc. | Improved cytotoxic agents comprising new maytansinoids |
| EP2468304A3 (en) | 2005-02-11 | 2012-09-26 | ImmunoGen, Inc. | Process for preparing stable drug conjugates |
| US20110166319A1 (en) * | 2005-02-11 | 2011-07-07 | Immunogen, Inc. | Process for preparing purified drug conjugates |
| JP2009505640A (ja) * | 2005-08-11 | 2009-02-12 | − ロジャーズ、アルピ マトシアン | 自己免疫疾患の治療及び診断のためのｔｃｒ−ｖベータ関連ペプチド |
| AU2012244244B2 (en) * | 2005-08-11 | 2015-08-27 | Arpi Matossian-Rogers | TCR-V-beta related peptides for treatment and diagnosis of autoimmune disease |
| NZ716641A (en) | 2005-08-24 | 2017-06-30 | Immunogen Inc | Process for preparing maytansinoid antibody conjugates |
| JP5644110B2 (ja) | 2008-08-05 | 2014-12-24 | 東レ株式会社 | 癌の検出方法 |
| DK2437790T3 (da) | 2009-06-03 | 2019-05-20 | Immunogen Inc | Konjugeringsfremgangsmåder |
| RS58367B1 (sr) | 2011-03-29 | 2019-03-29 | Immunogen Inc | Priprema konjugata antitela i majtanzinoida jednostepenim postupkom |
| SG193997A1 (en) | 2011-03-29 | 2013-11-29 | Immunogen Inc | Process for manufacturing conjugates of improved homogeneity |
| CA2886993A1 (en) | 2012-10-04 | 2014-04-10 | Immunogen, Inc. | Use of a pvdf membrane to purify cell-binding agent cytotoxic agent conjugates |
| WO2015076425A1 (ja) * | 2013-11-25 | 2015-05-28 | リンク・ジェノミクス株式会社 | 新規モノクローナル抗体 |
| CA2966932A1 (en) | 2014-11-19 | 2016-05-26 | Immunogen, Inc. | Process for preparing cell-binding agent-cytotoxic agent conjugates |
| CA3010678A1 (en) | 2016-01-10 | 2017-07-20 | Neotx Therapeutics Ltd. | Methods and compositions for enhancing the potency of superantigen mediated cancer immunotherapy |
| KR20180105233A (ko) | 2016-02-05 | 2018-09-27 | 이뮤노젠 아이엔씨 | 세포 결합제-세포독성제 접합체를 제조하기 위한 효율적인 방법 |
| CN107167590B (zh) * | 2017-04-14 | 2019-03-08 | 江苏福隆生物技术有限公司 | 糖类抗原242的板式化学发光法检测试剂盒及制备方法 |
| US20200256880A1 (en) * | 2017-08-16 | 2020-08-13 | The Broad Institute, Inc. | Neuronal Assay Method Involving Calcineurin |
| MX2021013908A (es) | 2019-05-15 | 2022-03-11 | Neotx Therapeutics Ltd | Tratamiento para el cáncer. |
| MX2022010936A (es) | 2020-03-05 | 2022-11-16 | Neotx Therapeutics Ltd | ³métodos y composiciones para el tratamiento del cáncer con células inmunológicas. |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4752569A (en) * | 1984-06-21 | 1988-06-21 | The Regents Of The University Of California | Sialylated Lewisx epitope, antibodies and diagnosis |
| US4904596A (en) * | 1985-08-07 | 1990-02-27 | Fred Hutchinson Cancer Research Center | Hybridoma antibody (FH6) defining a human cancer-associated difucoganglioside |
| SE8902043L (sv) * | 1988-11-10 | 1990-05-11 | Pharmacia Ab | Foerfarande foer karakterisering av makromolekyler |
| JP3334130B2 (ja) * | 1990-07-20 | 2002-10-15 | フアルマシア・アクチエボラーグ | 抗体接合体 |
| EP0540612A1 (en) * | 1990-07-20 | 1993-05-12 | Pharmacia AB | Heterobifunctional reagents and conjugates with oxaalkylene units for amphiphilic bridge structures |
-
1991
- 1991-07-03 SE SE9102074A patent/SE9102074D0/xx unknown
-
1992
- 1992-07-02 WO PCT/SE1992/000495 patent/WO1993001302A1/en active Search and Examination
- 1992-07-02 IL IL10239092A patent/IL102390A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 AT AT92850166T patent/ATE171193T1/de not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 JP JP17584892A patent/JP3194020B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 AU AU22920/92A patent/AU2292092A/en not_active Abandoned
- 1992-07-03 HU HU9400011A patent/HU218084B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 EP EP92850166A patent/EP0521842B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 IE IE922188A patent/IE80841B1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 DK DK92850166T patent/DK0521842T3/da active
- 1992-07-03 CA CA002073124A patent/CA2073124C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 NZ NZ243435A patent/NZ243435A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-03 ES ES92850166T patent/ES2124250T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-03 WO PCT/SE1992/000502 patent/WO1993001303A1/en active IP Right Grant
- 1992-07-03 KR KR1019930704117A patent/KR100246681B1/ko not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-03 AU AU19425/92A patent/AU658198B2/en not_active Ceased
- 1992-07-03 DE DE69226990T patent/DE69226990T2/de not_active Expired - Lifetime
-
1993
- 1993-12-22 NO NO19934777A patent/NO315472B1/no unknown
- 1993-12-31 FI FI935970A patent/FI109207B/fi not_active IP Right Cessation
-
1994
- 1994-11-16 EE EE9400328A patent/EE03031B1/xx not_active IP Right Cessation
-
1995
- 1995-05-08 US US08/438,123 patent/US5552293A/en not_active Expired - Lifetime
- 1995-06-20 HU HU95P/P00289P patent/HU211512A9/hu unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| AU2292092A (en) | 1993-02-11 |
| ES2124250T3 (es) | 1999-02-01 |
| WO1993001302A1 (en) | 1993-01-21 |
| WO1993001303A1 (en) | 1993-01-21 |
| DE69226990D1 (de) | 1998-10-22 |
| KR100246681B1 (ko) | 2000-04-01 |
| NO934777D0 (no) | 1993-12-22 |
| CA2073124A1 (en) | 1993-01-04 |
| AU658198B2 (en) | 1995-04-06 |
| NO315472B1 (no) | 2003-09-08 |
| EE03031B1 (et) | 1997-08-15 |
| FI109207B (fi) | 2002-06-14 |
| DE69226990T2 (de) | 1999-03-25 |
| IL102390A0 (en) | 1993-01-14 |
| HU9400011D0 (en) | 1994-05-30 |
| EP0521842A2 (en) | 1993-01-07 |
| CA2073124C (en) | 2007-06-19 |
| EP0521842B1 (en) | 1998-09-16 |
| JP3194020B2 (ja) | 2001-07-30 |
| FI935970A0 (fi) | 1993-12-31 |
| JPH05276987A (ja) | 1993-10-26 |
| NO934777L (no) | 1994-02-11 |
| SE9102074D0 (sv) | 1991-07-03 |
| IE80841B1 (en) | 1999-03-24 |
| HUT71193A (en) | 1995-11-28 |
| ATE171193T1 (de) | 1998-10-15 |
| IL102390A (en) | 1996-01-19 |
| US5552293A (en) | 1996-09-03 |
| NZ243435A (en) | 1994-10-26 |
| EP0521842A3 (hu) | 1994-01-26 |
| HU211512A9 (en) | 1995-11-28 |
| DK0521842T3 (da) | 1999-06-14 |
| FI935970L (fi) | 1993-12-31 |
| AU1942592A (en) | 1993-01-07 |
| IE922188A1 (en) | 1993-01-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU218084B (hu) | Daganatokra specifikus monoklonális antitest és sejtvonal, valamint ezeket tartalmazó gyógyászati készítmények | |
| JP3492373B2 (ja) | モノクローナル抗体 | |
| CN113544156B (zh) | 抗Claudin18.2抗体及其应用 | |
| JP4124486B2 (ja) | ガン細胞を特異的に検出する抗原結合フラグメント、このフラグメントをコードするヌクレオチド、ならびにガンの予防および検出のためのその使用 | |
| CA2798778C (en) | Anti-human trop-2 antibody having anti-tumor activity in vivo | |
| CA2250080C (en) | Humanization of an anti-carcinoembryonic antigen anti-idiotype antibody and use as a tumor vaccine and for targeting applications | |
| RU2266298C2 (ru) | Антитела к антигену эпителиальных опухолей желудочно-кишечного тракта человека, родственному альфа 6 бета 4 интегрину | |
| JP2005538682A (ja) | カルボキシックアンヒドラーゼｉｘ（ｃａｉｘ）腫瘍抗原に対する抗体 | |
| JP2935520B2 (ja) | ガン治療に用いられる新規高親和性改変抗体系統群 | |
| JPH10505231A (ja) | Ｂ細胞リンパ腫細胞および白血病細胞に特異的な免疫結合体およびヒト化抗体 | |
| JP7063623B2 (ja) | 治療用抗体およびその使用 | |
| JP2009148299A (ja) | ヒト癌胎児性抗原に対する特異的結合メンバー；材料および方法 | |
| US5976531A (en) | Composite antibodies of human subgroup IV light chain capable of binding to tag-72 | |
| JP2002502621A (ja) | 乳腫瘍を伴うムチンに対する特異性のある抗体、その生産方法及び使用方法 | |
| US11608384B2 (en) | Humanized anti-TPBG antibody, preparation method therefor, conjugate thereof, and applications | |
| US7179899B2 (en) | Composite antibodies of humanized human subgroup IV light chain capable of binding to TAG-72 | |
| CA2555306A1 (en) | Humanized antibody | |
| EP0618969B1 (en) | Composite antibodies of human subgroup iv light chain capable of binding to tag-72 | |
| EP0723663B1 (en) | Hybridoma and anti-kc-4 humanised monoclonal antibody, dna and rna encoding it, kit and diagnostic methods | |
| JP2002504372A (ja) | 高親和性ヒト型化抗−ｃｅａモノクロ−ナル抗体 | |
| CN113597432B (zh) | 抗EpCAM抗体及其应用 | |
| JP3483556B2 (ja) | 細胞接着阻害抗体およびこれを利用する細胞接着阻害剤 | |
| EP3619237B1 (en) | Antibodies against carcinoembryonic antigen for cancer therapy and diagnosis | |
| EP4149543A1 (en) | Anti-cd38 single-domain antibodies in disease monitoring and treatment | |
| JP3045313B2 (ja) | Ｔａｇ−７２に結合できるヒトサブグループｉｖ ｌ鎖の複合抗体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of definitive patent protection due to non-payment of fees |