HU202554B - Process for lipophyl protheines - Google Patents
Process for lipophyl protheines Download PDFInfo
- Publication number
- HU202554B HU202554B HU874664A HU466487A HU202554B HU 202554 B HU202554 B HU 202554B HU 874664 A HU874664 A HU 874664A HU 466487 A HU466487 A HU 466487A HU 202554 B HU202554 B HU 202554B
- Authority
- HU
- Hungary
- Prior art keywords
- protein
- cells
- alkali metal
- hbsag
- rhodanide
- Prior art date
Links
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K1/00—General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/06—Lysis of microorganisms
- C12N1/063—Lysis of microorganisms of yeast
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/16—Yeasts; Culture media therefor
- C12N1/165—Yeast isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/0004—Oxidoreductases (1.)
- C12N9/0006—Oxidoreductases (1.) acting on CH-OH groups as donors (1.1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2730/00—Reverse transcribing DNA viruses
- C12N2730/00011—Details
- C12N2730/10011—Hepadnaviridae
- C12N2730/10111—Orthohepadnavirus, e.g. hepatitis B virus
- C12N2730/10122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/84—Pichia
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/911—Microorganisms using fungi
- Y10S435/938—Pichia
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Mycology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Botany (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Description
A találmány tárgya eljárás HBsAg fehérje kinyerésére és tisztítására. A találmány tárgya eljárás részben az oldott fehérje sejtmaradványból való kinyerésére, részben pedig fehérje szelektív extrakciójára.
A diganosztikában, a gyógyászatban, a kémiában és így tovább széles körben alkalmazott peptidek és fehérjék előállítására gyorsan elterjedt a DNS rekombinációs technológia. Gyakran merül fel az a probléma, hogy a kívánt fehérje tisztított formában mentes legyen az előállításakor keletkező szennyező fehérjéktől. A találmány a DNS rekombinációs technika fejlesztésére irányul.
A jelen találmány tárgya tehát eljárás a kívánt genetikailag módosított élesztőkultúrák segítségével termelt-fehérjék hathatós kinyerésére.
Azt tapasztaltuk, hogy a genetikailag módosított Pichia törzsek segítségével termelt lipofil HBsgAg fehérjék szelektíven kinyerhetők kaotropikus sókat tartalmazó lizáló puffer felhasználásával. A Pichia törzs roncsolódása a lizáló puffer jelenlétében csökkenti az extrahált fehérjék teljes mennyiségét, ugyanakkor alig hat a kívánt lipofil HBsAg fehérje extrakciójára. A találmány szerint előállított sej tkivonatban több a lipofil HBsAg fehérje, mint az extraktumban levő egyéb fehérje, s így egyszerűsödik a kívánt lipofü HBsAg fehérje további tisztítása.
A találmány szerinti eljárással kapcsolatba hozható a Biochim,BiophysActa 801,416 (1984) /C A 101, 225 094n (1984)/ cikkben ismertetett megoldás, melyben élesztő 80 S riboszomojának kaotróp sókkal végzett disszociációját, továbbá a riboszomális fehérje rRNS elválasztására szolgáló eljárást ismertetnek, továbbá a FEBS Letters 158, 53-57 (1983) cikk, melyben élesztőből származó RNS-nek a nukleoprotein komplextől való, kaotróp sókkal végzett disszociációját ismertetik (lásd 54. oldal, bal oszlop, utolsó bekezdés).
A fenti két cikkben ismertetettekből nem lehet arra következtetni, hogy kaotróp sók alkalmazásával Pichia törzsbeli gazdasejtekből a -lipofil, a sejt lipidmembránjához kötődő HBsAg fehérjét a leírásban ismertetett előnyös módon lehet kinyerni.
A találmány szerint a Pichia törzs gazdasejtjei által előállított HBsAg fehérjéket a következők szerint extraháljuk:
a sejtek 60-100%-át elroncsoljuk 5-9 pH-értékű oldatban, amely 1-5 mól/1 koncentrációban alkálifém-halogenidet és/vagy alkálifém-rodanidot tartalmaz, majd a kapott keverékből az oldott frakciót kinyerjük és kívánt esetben betöményitjük.
Az előzőek szerint kapott oldható frakciót összhangban a jelen találmánnyal - ismert módon tovább kezelhetjük a kívánt fehérje további koncentrálására és tisztítására. Az oldható frakcióban levő fehérje töményíthető dialízissel, fordított fázisú gyantán keresztül minimális térfogatú oldószeres elucióval, továbbá kicsapással, ultraszűréssel, liofilizálással és így tovább. A kívánt fehérje további tisztítására szolgáló technikák közé tartozik a méret szerinti frakcionálás, amelyre felhasználhatunk méretspecifikus gyantákat, nagyhatékonyságú folyadékkromatográfiás, ioncserés, hidrofób kromatográf iát és így tovább.
A találmány értelmében a kaotropikus sóként olyan sókat alkalmaznak, amelyek anionjai képesek apoláris csoportokat vízbe juttatni. Ilyen sók azok, amelyek rodanidiont, halogén-ionokat, így jodidot és bromidot, valamint kationokat, így például alkálifémionokat tartalmaznak.
A találmány szerinti eljárásban alkalmazott kaotropikus sóiéra a következő példákat nevezzük meg: nátrium-rodanid, kálium-rodanid, nátriumjodid, kálium-jodid, lítium-klorid, lítium-bromid.
A lipofü fehérjék Pichia nemzetséggel történő előállításakor a kívánt fehérjéket kódoló megfelelő DNS szekvenciákkal genetikaüag módosítottuk a Pichia gazdasejteket. A kívánt fehérjét kódoló megfelelő DNS szekvenciák a technika állásából ismertek, így például természetes forrásból izolálhatok, szintetikus DNS szekvencia kialakítható. Pichia nemzetségbe történő DNS manipulálásra speciális módszereket közöl a Molecular and Cellular Biology folyóiratban megjelent cikk (1111. és 3376. oldal. 1985).
A találmány szerinti extrakciós eljárást a sejtek roncsolásával valósítjuk meg, olyan hosszú ideig végezve a műveletet, amíg a teljes sejttömeg elroncsolódik. A sejtroncsolást olyan extrakciós közegben valósítjuk meg, amely 1-5 mól/1 koncentrációban legalább egy kaotropikus sót tartalmaz, pH-ja pedig a kívánt fehérje stabil formájának megfelelően 5-9, előnyösen 6-8. Az extrakció során a fehérje degradálódását csökkenthetjük, ha anti-proteázt, így például fenil-metil-szulfoníl-fluoridot adunk a lizáló pufferhez.
A találmány szerinti eljárásban a sejtroncsolást golyósmalomban vagy hasonló berendezésben homogenizálással végezzük. A sejtroncsolás idejét a sejtfal szuszceptibilitása, a homogenizálás erőssége, a lizáló pufferhez adott komponensek, illetve azok koncentrációja határozza meg. A sejtroncsolást 0,5-30 percig, előnyösen 1-5 percig végezzük.
A sejtroncsolás hőmérsékletét úgy határozzuk, hogy a fehérjét károsító enzimek működése minimális legyen. így a műveletet általában 0 és 10 °C közötti hőmérsékleten, előnyösen 0 °C körüli hőmérsékleten folytatjuk le, hogy a sejtroncsolás során minimálisra csökkenjen le, hogy a sejtroncsolás során minimálisra csökkenjen a kívánt fehérje károsodása, s ezáltal az elroncsolt sejtekből növekedjen a kívánt fehérje kitermelése. Először összetörjük a sejteket, majd az oldható frakciót valamilyen ismert módszerrel, például centrifugálással vagy tangenciális szűréssel eltávolítjuk a sejttörmeléktől.
Ha szükséges az így kezelt közeget tovább kezelhetjük, hogy a kívánt lipofil fehérjét koncentráltabb formában nyerjük ki. Erre a célra különböző ismert technikát alkalmazhatunk, így például savas kicsapást, szűrést, kromatografálást, oldószeres bepárlást.
A találmány szerinti eljárást az oltalmi kör korlátozása nélkül a következő példákkal szemléltetjük.
1. Példa
A p BSAG (5) vektorral (E. coli gazdasejtből, letéti szám: NNRL Β-18021, „Northern Régiónál Research Center of the US Department of Agriculture,
-2HU 202554Β
Peoria, 111.) átalakított Pichia sejtekből történő 22 nm-es hepatitis B felületi antigén (HBsAg) extrakcióját a következők szerinti végezzük.
10-100 optikai sűrűség egység (600 nm/ml) sejtsűrűségű P. pastoris tenyészetet készítünk. 100 op- 5 tikai sűrűség egységnek megfelelő aliquotot egy 13 x 100 mm-es boroszilikát tenyésztő csőbe viszünk, és 20 térfogatrész lizáló pufferrel a következő leírás szerint kétszer mossuk.
A szemcsés sejtekhez (EEC klinikai centrifuga) 10 0,5 g savasan mosott üveggyöngyöt (0,5 mm) és 0,35 ml lizáló puffért adunk A lizáló puffer kontrollként vagy 0,5 M nátrium-kloridot és 0,1 %-os Triton X100 (vegyes%) tartalmaz, vagy 2 M ill. 3 M kaotropikus sót 0,1%-os Triton Χ-100-zal vagy anélkül. 15 Mindegyik oldatot 10 mM nátrium-foszfáttal pH =
7,5-re pufféról juk. Az elegyet egy perces időközönként maximális fordulatszámú keverővei nyolcszor megkeverjük A keverés szüneteiben az elegyet legalább 1 percig jéggel hűtjük. A csöveket előnyösen 20
I. Táblázat
20-40”-os szögbe helyezzük miközben a keverés hatására a maximális sejtroncsolás megvalósul.
A lizálás után az összetört sejteket eltávolítjuk, az üveggyöngyöket 0,35 ml lizáló pufferrel mossuk, majd a két oldatot összeöntjük és 15 percig 1300 gvel centrifugáljuk. A felülúszót eltávolítjuk és immunoreaktív HBsAg részecskékre (Ausria vizsgálat) és teljes fehérjére (Bradford) vizsgáljuk. Az eredményeket az I/a. táblázatban közöljük
2. Példa
A találmány szerinti eljárásban 88 ml szuszpenziót (egy rész sejt/2 rész lizáló puffer v/v) sejtroncsolóban (Impandex, Inc.) 64 mm-es 4500 fordulat/perc fordulatszámú keverőtárcsával kezelünk. A lizáló puffer vagy 0,5 M nátrium-kloridot és 0,1%os Triton X-t (vegyes%) vagy 3 M kálium-rodanidot tartalmaz, a felülúszót HBsAg-re (Ausria) és teljes fehérjére (Bradford) vizsgáljuk Az eredményeket az Pb. táblázatban közöljük.
| Lizálási körülmények | HBsAg részecske (pg/ml) | Teljes protein (mg/ml) | HBsAg/protein tömeg%) |
| (a)Sd (koncentráció) NaCl (0,5 M) +Triton | 230 | 10,1 | 2,3 |
| KI(2M)+Triton | 14 | 1,4 | 1,0 |
| KI(2M)-Triton | 169 | 2,4 | 7,0 |
| KSCN(3M) +Triton | 10 | 1,9 | 0,5 |
| KSCN(3M) - Triton | 222 | 3,5 | 6,3 |
| (b) Sejtroncsolás NaCl(0,5M) +Triton | 600 | 32,5 | 1.8 |
| KSCN(3M) | 803 | 10,6 | 7,6 |
A kaotropikus sók alkalmazása esetén a HBsAg kitermelés nem nő szignifikánsan a kontrolihoz képest (I.oszlop), azonban világosan kitűnik, hogy a 45 kaotropikus sók gátolják a teljes fehérjemennyiség kibocsátását (Hoszlop), ennélfogva a HBsAg specifikus aktivitása 2-5-szörösére nő (HLoszlop).
Claims (5)
1. Eljárás Pichia nemzetségbe tartozó gazdasejtekből HBsAg fehérjék kivonására, azzal jellemezve, hogy a sejtek 60-100%-át elroncsoljuk 5-9 pH- 55 értékű oldatban, amely 1-5 mól/1 koncentrációban alkálifém-halogenidet és/vagy alkálifém-rodanidot tartalmaz, majd a kapott keverékből az oldott frakciót kinyerjük és kívánt esetben betöményít jük.
2. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jelle- 60 mezve, hogy a közeg pH-ját 6-8-ra állítjuk
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a sejtroncsolást 0-10 °C hőmérsékleten 0,5-30 percig végezzük
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy alkálifém-halogenid és/vagy alkálif émrodanid sóként a következő vegyületek valamelyikét, vagy ezekből kettő vagy több vegyűlet keverékét alkalmazzuk:
- nátrium-rodanid
-kálium-rodanid
-nátrium-jodid
-kálium-jodid
-lítium-klorid
- lítium-bromid.
5. Az 1. igénypont szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az oldott frakciót az elroncsolt sejteket tartalmazó oldat centrifugálásával nyerjük ki.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/920,385 US4683293A (en) | 1986-10-20 | 1986-10-20 | Purification of pichia produced lipophilic proteins |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| HUT45079A HUT45079A (en) | 1988-05-30 |
| HU202554B true HU202554B (en) | 1991-03-28 |
Family
ID=25443644
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| HU874664A HU202554B (en) | 1986-10-20 | 1987-10-16 | Process for lipophyl protheines |
Country Status (22)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4683293A (hu) |
| EP (1) | EP0271667A1 (hu) |
| JP (1) | JPS63105693A (hu) |
| KR (1) | KR880005259A (hu) |
| CN (1) | CN1006808B (hu) |
| AU (1) | AU586758B2 (hu) |
| CA (1) | CA1277272C (hu) |
| CS (1) | CS752987A2 (hu) |
| DD (1) | DD262673A5 (hu) |
| DK (1) | DK545187A (hu) |
| FI (1) | FI874597A (hu) |
| HU (1) | HU202554B (hu) |
| IE (1) | IE872807L (hu) |
| IL (1) | IL83402A0 (hu) |
| IN (1) | IN166069B (hu) |
| NO (1) | NO874357L (hu) |
| NZ (1) | NZ221296A (hu) |
| PH (1) | PH23461A (hu) |
| PL (1) | PL154027B1 (hu) |
| PT (1) | PT85935B (hu) |
| YU (1) | YU46080B (hu) |
| ZA (1) | ZA875698B (hu) |
Families Citing this family (35)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4935235A (en) * | 1979-05-24 | 1990-06-19 | The Regents Of The University Of California | Non-passageable viruses |
| US5124256A (en) * | 1985-11-13 | 1992-06-23 | Labofina, S.A. | Process for recovering polypeptides localized in the periplasmic space of yeast without breaking the cell wall by using an non-ionic detergent and a neutral salt |
| US4816564A (en) * | 1986-01-31 | 1989-03-28 | Merck & Co., Inc. | Method for producing hepatitis B virus proteins in yeast |
| US4742158A (en) * | 1986-04-25 | 1988-05-03 | Merck & Co., Inc. | Purification of hepatitis pre-S antigens by polymerized serum albumin affinity binding |
| US5026828A (en) * | 1987-02-27 | 1991-06-25 | Merck & Co., Inc. | Method of purifying recombinant pres-1/S-2/S/S hepatitis B antigen from yeast |
| US5011915A (en) * | 1987-10-26 | 1991-04-30 | Merck & Co., Inc. | Process for purifying recombinant hepatitis antigens |
| US5004688A (en) * | 1988-04-15 | 1991-04-02 | Phillips Petroleum Company | Purification of hepatitis proteins |
| US5030720A (en) * | 1988-09-01 | 1991-07-09 | Merck & Co., Inc. | Pres2+S hepatitis B vaccine derived from plasma |
| US6509192B1 (en) * | 1992-02-24 | 2003-01-21 | Coulter International Corp. | Quality control method |
| US6362003B1 (en) | 1992-02-24 | 2002-03-26 | Coulter Corporation | Hematological reference control composition containing leukocyte analogs, methods of making, and uses thereof |
| US5855902A (en) * | 1992-11-02 | 1999-01-05 | Protatek International, Inc. | Method of administering a vaccine comprising tritrichomonas foetus membrane surface antigens between 45 and 300 kilopaltons |
| US5872098A (en) * | 1995-06-05 | 1999-02-16 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| US5866543A (en) * | 1995-06-05 | 1999-02-02 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| US5945275A (en) * | 1994-10-18 | 1999-08-31 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| CA2202351A1 (en) * | 1994-10-18 | 1996-04-25 | George Phillip Vlasuk | Nematode-extracted serine protease inhibitors and anticoagulant proteins |
| US5863894A (en) * | 1995-06-05 | 1999-01-26 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| PL183855B1 (pl) | 1994-10-18 | 2002-07-31 | Corvas International | Białko, cząsteczka cDNA, oligonukleotyd, kompozycja farmaceutyczna i środek farmaceutyczny do hamowania krzepnięcia krwi |
| US5866542A (en) * | 1994-10-18 | 1999-02-02 | Corvas International, Inc. | Nematode-extracted anticoagulant protein |
| MX9605082A (es) | 1996-10-24 | 1998-04-30 | Univ Autonoma De Nuevo Leon | Levaduras metilotroficas modificadas geneticamente para la produccion y secrecion de hormona de crecimiento humano. |
| GB2338236B (en) | 1998-06-13 | 2003-04-09 | Aea Technology Plc | Microbiological cell processing |
| GB9927801D0 (en) | 1999-11-24 | 2000-01-26 | Danisco | Method |
| US7455990B2 (en) * | 1999-11-24 | 2008-11-25 | Danisco A/S | Method of extracting recombinant hexose oxidase |
| US7598055B2 (en) * | 2000-06-28 | 2009-10-06 | Glycofi, Inc. | N-acetylglucosaminyltransferase III expression in lower eukaryotes |
| US7625756B2 (en) | 2000-06-28 | 2009-12-01 | GycoFi, Inc. | Expression of class 2 mannosidase and class III mannosidase in lower eukaryotic cells |
| US8697394B2 (en) * | 2000-06-28 | 2014-04-15 | Glycofi, Inc. | Production of modified glycoproteins having multiple antennary structures |
| US7449308B2 (en) * | 2000-06-28 | 2008-11-11 | Glycofi, Inc. | Combinatorial DNA library for producing modified N-glycans in lower eukaryotes |
| ATE440959T1 (de) | 2000-06-28 | 2009-09-15 | Glycofi Inc | Verfahren für die herstellung modifizierter glykoproteine |
| US7863020B2 (en) * | 2000-06-28 | 2011-01-04 | Glycofi, Inc. | Production of sialylated N-glycans in lower eukaryotes |
| US7118901B2 (en) * | 2002-12-18 | 2006-10-10 | Roche Diagnostics Operations, Inc. | Recombinant bovine pancreatic desoxyribonuclease I with high specific activity |
| ATE387494T1 (de) * | 2002-12-20 | 2008-03-15 | Hoffmann La Roche | Hitzelabile desoxyribonuklease i-varianten |
| US7332299B2 (en) * | 2003-02-20 | 2008-02-19 | Glycofi, Inc. | Endomannosidases in the modification of glycoproteins in eukaryotes |
| EP1460425A1 (en) * | 2003-03-17 | 2004-09-22 | Boehringer Mannheim Gmbh | Deglycosylated enzymes for conjugates |
| ES2337684T3 (es) * | 2003-12-05 | 2010-04-28 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Carboxipeptidasa b recombinante y su purificacion. |
| CN100388381C (zh) * | 2004-10-14 | 2008-05-14 | 联发科技股份有限公司 | 光学储存媒体的数据记录方法及其装置 |
| US7981635B2 (en) * | 2005-09-14 | 2011-07-19 | Sanofi-Aventis Deutschland Gmbh | Cleavage of precursors of insulins by a variant of trypsin |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4540668A (en) * | 1979-06-05 | 1985-09-10 | Phillips Petroleum Company | Alcohol oxidase from Pichia-type yeasts |
| US4427580A (en) * | 1982-09-01 | 1984-01-24 | Cornell Research Foundation, Inc. | Method for separation and recovery of proteins and nucleic acids from nucleoproteins using water destructuring salts |
| US4512922A (en) * | 1982-12-22 | 1985-04-23 | Genentech, Inc. | Purification and activity assurance of precipitated heterologous proteins |
| EP0135435A3 (en) * | 1983-08-22 | 1987-03-25 | Merck & Co. Inc. | Immunogenic hbsag derived from transformed yeast |
| US4559307A (en) * | 1983-10-17 | 1985-12-17 | Phillips Petroleum Company | Treatment of yeast cells with proteolytic enzymes |
| US4604377A (en) * | 1984-03-28 | 1986-08-05 | Cetus Corporation | Pharmaceutical compositions of microbially produced interleukin-2 |
| US4569790A (en) * | 1984-03-28 | 1986-02-11 | Cetus Corporation | Process for recovering microbially produced interleukin-2 and purified recombinant interleukin-2 compositions |
| GB8414354D0 (en) * | 1984-06-05 | 1984-07-11 | Biogen Nv | Purifying protein |
| US4572798A (en) * | 1984-12-06 | 1986-02-25 | Cetus Corporation | Method for promoting disulfide bond formation in recombinant proteins |
| US4649192A (en) * | 1985-05-30 | 1987-03-10 | Smith Kline-Rit | Method for the isolation and purification of hepatitis B surface antigen using polysorbate |
| US4895800A (en) * | 1985-11-26 | 1990-01-23 | Phillips Petroleum Company | Yeast production of hepatitis B surface antigen |
-
1986
- 1986-10-20 US US06/920,385 patent/US4683293A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-05-28 CA CA000538267A patent/CA1277272C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-31 NZ NZ221296A patent/NZ221296A/xx unknown
- 1987-07-31 ZA ZA875698A patent/ZA875698B/xx unknown
- 1987-07-31 PH PH35608A patent/PH23461A/en unknown
- 1987-08-02 IL IL83402A patent/IL83402A0/xx unknown
- 1987-08-10 IN IN621/CAL/87A patent/IN166069B/en unknown
- 1987-08-11 CN CN87105519A patent/CN1006808B/zh not_active Expired
- 1987-08-18 AU AU77178/87A patent/AU586758B2/en not_active Ceased
- 1987-09-02 KR KR870009721A patent/KR880005259A/ko not_active Application Discontinuation
- 1987-09-03 JP JP62219311A patent/JPS63105693A/ja active Pending
- 1987-10-15 PT PT85935A patent/PT85935B/pt not_active IP Right Cessation
- 1987-10-16 YU YU191387A patent/YU46080B/sh unknown
- 1987-10-16 HU HU874664A patent/HU202554B/hu not_active IP Right Cessation
- 1987-10-19 FI FI874597A patent/FI874597A/fi not_active Application Discontinuation
- 1987-10-19 NO NO874357A patent/NO874357L/no unknown
- 1987-10-19 PL PL1987268298A patent/PL154027B1/pl unknown
- 1987-10-19 IE IE872807A patent/IE872807L/xx unknown
- 1987-10-19 DK DK545187A patent/DK545187A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-10-19 CS CS877529A patent/CS752987A2/cs unknown
- 1987-10-19 EP EP87115255A patent/EP0271667A1/en not_active Withdrawn
- 1987-10-19 DD DD87308079A patent/DD262673A5/de not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| KR880005259A (ko) | 1988-06-28 |
| IN166069B (hu) | 1990-03-10 |
| DK545187A (da) | 1988-04-21 |
| CN1006808B (zh) | 1990-02-14 |
| NO874357D0 (no) | 1987-10-19 |
| CA1277272C (en) | 1990-12-04 |
| IE872807L (en) | 1988-04-20 |
| NO874357L (no) | 1988-04-21 |
| JPS63105693A (ja) | 1988-05-10 |
| PH23461A (en) | 1989-08-07 |
| US4683293A (en) | 1987-07-28 |
| CN87105519A (zh) | 1988-05-04 |
| EP0271667A1 (en) | 1988-06-22 |
| FI874597A (fi) | 1988-04-21 |
| FI874597A0 (fi) | 1987-10-19 |
| PL268298A1 (en) | 1988-07-07 |
| AU7717887A (en) | 1988-04-21 |
| CS752987A2 (en) | 1991-08-13 |
| AU586758B2 (en) | 1989-07-20 |
| DK545187D0 (da) | 1987-10-19 |
| DD262673A5 (de) | 1988-12-07 |
| NZ221296A (en) | 1989-07-27 |
| PT85935A (en) | 1987-11-01 |
| PT85935B (pt) | 1990-07-31 |
| YU46080B (sh) | 1992-12-21 |
| ZA875698B (en) | 1988-04-27 |
| PL154027B1 (en) | 1991-06-28 |
| HUT45079A (en) | 1988-05-30 |
| IL83402A0 (en) | 1988-01-31 |
| YU191387A (en) | 1989-06-30 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| HU202554B (en) | Process for lipophyl protheines | |
| KR960004707B1 (ko) | B형 간염 표면 항원의 정제 방법 | |
| KR940010283B1 (ko) | 단백질이 생성된 배양배지로부터 그 단백질을 추출 및 정제하는 방법 | |
| Holland et al. | ENTEROVIRAL RIBONUCLEIC ACID: II. Biological, Physical, and Chemical Studies | |
| KR910008643B1 (ko) | B형 간염 비루스 표면항원(HBs 항원)의 정제 방법 | |
| Zabel et al. | In vitro replication of cowpea mosaic virus RNA. II. Solubilization of membrane-bound replicase and the partial purification of the solubilized enzyme | |
| US5139943A (en) | Processes for the recovery of microbially produced chymosin | |
| JPH05500602A (ja) | 微生物学的に生成されたキモシンの回収方法 | |
| US3975344A (en) | Interferon purification | |
| US4261967A (en) | T-factor, CoA-SPC substantially free of proteolytic enzymes and its preparation | |
| RU2132386C1 (ru) | Способ получения рекомбинантного интерферона-гамма человека | |
| Hara et al. | Degradation of RNA Polymerase in Escherichia coli | |
| SU1495377A1 (ru) | Способ получени рибонуклеазы Н из ЕSснеRIснIасоLI | |
| KR890002068B1 (ko) | 겔여과 컬럼에 의한 엔도톡신의 제거방법 | |
| SU810716A1 (ru) | Способ разделени белков и нуклеи-НОВыХ КиСлОТ | |
| US3650903A (en) | Method of production of fibrinolytic material | |
| SU929705A1 (ru) | Способ выделени метилазы есо RI из еSснеRIснIа coLI | |
| JP3040190B2 (ja) | タンパクの精製方法 | |
| KR100374307B1 (ko) | 재조합효모로부터발현된감마인터페론의정제방법 | |
| JPH0244320B2 (hu) | ||
| JPH04229187A (ja) | 組換えヒトγインターフェロンの抽出および精製方法 | |
| JPH0691824B2 (ja) | 逆転写酵素遺伝子を含む新規な組換え体 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| HMM4 | Cancellation of final prot. due to non-payment of fee |