HU195858B

HU195858B - Process for the selective enrichment of some main components of teicoplanin a2 complex

Info

Publication number: HU195858B
Application number: HU862133A
Authority: HU
Inventors: Francesco Assi; Giancarlo Lancini; Anacleto Gianantonio
Original assignee: Lepetit Spa
Priority date: 1985-05-21
Filing date: 1986-05-20
Publication date: 1988-07-28
Also published as: ES8708017A1; ZA863400B; AU597251B2; PH23805A; ATE47883T1; DK165703B; CN1029321C; FI861834A0; JP2506082B2; EP0204179A1; IE861334L; DK233086D0; DE3666839D1; ES555133A0; PT82612A; JPS61268195A; IL78832A0; FI861834A; CA1249785A; NO167402C

Description

A találmány tárgya eljárás a T-A2 egyes fő komponensei arányának szelektív növelésére a T-A2 komplexben.

A teicoplanin (régebbi nevén teichomycin) egy, az. Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 tenyészetből előállított glikopeplid antibiotikum, mely elsősorban a Gram-pozitiv baktériumok ellen alkalmazható hatásosan.

• Az egyesült államokbeli 4 239 751 számú szabadalmi leírásban található eljárás szerint a teicoplanint a termelő tenyészet fermentációs levéből egy háromkomponensű komplex alakjában nyerik ki, melynek összetevőit At-nek, Aj-nek ill, Aj-nak nevezik. A fenti tenyészetek fermentálásával nyert antibiotikum-komplex túlnyomó részben A2 komponensből áll, mely a komplex biológiai hatása szempontjából a legfontosabb összetevő. Az Ai és Aj komponens csak igen kis mennyiségben van jelen.

Az egyesült államokbeli 4 239 751 számú szabadalmi leírás szerint a teicoplanin A2-t (T-A2) a teicoplanin komplex egyéb komponenseitől oszlopkromatográflás módszerrel választják et. Az eljáráshoz Sephadex Ί.Η-20 töltetet használnak, mely egy térhálós polidexlrán gél hidroxi-propil-származéka, és kiszűrési hatóra 4000-es molekulatömeg körül van.

Üzemi méretű gyártási és tisztítási eljárásokkal (ezeknek egyik példája megtalálható a 0122969 számú európai szabadalmi leírásban általában olyan teichomyc.ín-terméket állítanak elő, mely kis mennyiségű leichoplanin Aj mellett főleg teichoplanin A2-ből áll. Ez a termék gyógyászati felhasználásra alkalmas (lásd: Drugs of the Future: Vol. 9, No. 6, 1984, p.: 429-430, kiadó: J. R. Prous Publishers, Barcelona, Spanyolország).

Egy közlemény szerint (A. Borghi, C. Coronelli el al., Journal of Antibiotics, Vol. 37, No, 6, pp. 615-620, June 1984) a teicoplanin A2 komponense (a T-A2) viszont öt fő komponens keveréke, melyek polaritás tekintetében nagyon közel állnak egymáshoz.

Ezeket a komponenseket (melyeknek jelzése T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 ill. T-A2-5), első lépésben fordított fázisú megoszlásos kromatográfiával választották el, amit normál légköri nyomás alatt, szilénozott szilikagél oszlopon hajtottak végre. A T-A2-3, T-A2-4, T-A2-5 komponensek tisztítása egy további lépést igényelt, melyben szemi-preparatív, nagynyomást! folyadékkromatográfiás eljárást alkalmazlak, Whatman Partisii ^BODS M-9 oszlopon, eluensként pedig 76 : 24 arányú ammónium-formiát : acetonitril elegy 0,2%-os vizes oldatát használták. A közlemény az összes említett komponens kémiai és biológiai jellemzését megadja (lásd még a 2 121 401 számi! brit szabadalmi leírást).

A J. C. J. Barna, D. M. Williams et al. által közölt szerkezetvizsgálatok (J. Am. Chem. Soc. 1984, 106, 4895-4902) azt mutatják, hogy a teicoplanin Aj fő komponensei az (1) általános képlettel irhatok le, ahol R jelentése (a) általános képletű csoport,

R’ jelentése a T-A2-1 komponensben (b) általános képletű (Z)-4-decenoil-csoport, a T-A2-2 komponensben (c) általános képletű fi-metil-nonanoil-c.soport, a T-A2-3 komponensben (d) általános képlel ü n-deknnoil-csoporl, a T-A2-4 komponensben (e) általános képletű 8-metil— -dekanoil-csoport, η T-A2-5 komponensben pedig (f) általános képletű 9-metil- dekanoil-csoport.

A fenti 2 121 401 számi! brit szabadalmi leírásban ismertetett in vitro és in vivő vizsgálatok azt mutatják, hogy a T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 és T-A2-5 komponensek mindegyike hatásosabb, mint az A2 komplex egészében véve.

Ezért nyilvánvaló, hogy a teicoplanin ipari méretű előállilásában minden olyan módszer célszerűen alkalmazható, mely a teicop’anin A2 bármely fő komponensének képződését szelektíven előmozdítja. Fontos műszaki előnyt jelent, hogy e módszerek vonatkozhatnak a T-A2 egyedi komponenseinek tszta alakban történő izolálására, vagy pedig a hatásosabb komponensekben feldúsított T-A2 komplex előállítására. Ezen túlmenően, ha az ipari méretű fermentálás során módosítani tudjuk a T-A2 komplex egyes főkomponenseinek arányát, ez az eszköz jól használható arra, hogy a fermentációs termék összetételét állandó - és a szabvány-előírásoknak megfelelő - értéken tartsuk. Ez azt jelenti, hogy ha az egyes komponensek %-os aránya bármilyen okból (pl. az ipari tenyészet közegének megváltoztatása olcsóbb anyagok felhasználása céljából) eltávolodik a szabvány szerinti értéktől, akkor ezen hiba korrigálására hasznos eszközt nyújt az a lehetőség, hogy a T-A2 valamely fő komponensének arányát szelektíve megnövelhetjük.

A találmány tárgya eljárás az egyes T-A2 főkomponensek arányának szelektív növelésére a T-A2 komplexben. A találmány tárgya közelebbről eljáráe a T-A2-1, A-A2-2, T-A2-3, T-A2-4 vagy T-A2-5 főkomponensek bármelyikében szelektive feldúsított teicoplanir: A2 előállítására, mely abból áll, hogy egy Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 vagy annak valamely olyan mutánsának tenyészetéhez, mely azonos metabolikuti úton T-A2 komplexet állít elő, a T-A2 egyik glükóz-amin részéhez kapcsolódó jellemző acilc.soport (lásd az R’ fenti jelentéseit) megfelelő prekurzorából szelektíve hatásos mennyiséget adunk hozzá. A prekurzorra a továbbiakban így hivatkozunk: „a T-A2 glükóz-amin részéhez kapcsolódó jellemző ac.ilcsoport megfelelő prekurzora.

A találmány szerinti eljárást az jellemzi, hogy

a) a T-A2 komplexben a T-A2-1 komponens arányának növelésére megfelelő prekur3 zorként linolsaval, annak valamely, a mikroorganizmusra nézve nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú, mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észtereit alkalmazzuk,

b) a T-A2-2 komponens arányának növelésére megfelelő prokurzorként valint (cc-amino-izovaleriánsnv), annak a mikroorganizmusra nem mérgező savakkal vagy bázisokkal képzett sóit, alfa-keto-izovaleriánsavat, annak a mikroorganizmusra nem mérgező bázisokkal képzett sóit vagy 1-6 szénatomszámú monovagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észtereit, izovajsavat, annak a mikroorganizmusra nem mérgező bázisokkal képzett sóit vagy 1-G szénatomszámú mono-vagy poliiiidroxi-nlkanolokkal képzett észtereit, izobutanolt vagy annak a riiikrooganizmusra nem mérgező savakkal képzett észtereit alkalmazzuk,

c) a T-A2-3 komponens arányának növelésére megfelelő prekurzorként olajsavat, annak a mikroorganizmusra nem mérgező bázisokkal képzett sóit, vagy 1-6 szénatoinszámú mono-, illetve polihidroxi-alkanolokkal képzett bázisait alkalmazzuk,

d) a Τ-Α2-Ί komponens arányának növelésére megfelelő prekurzorként, izoleucinl, annak a mikroorganizmusra nem mérgező savakkal vagy bázisokkal alkotott sóit alfa-keto-béla-metil-valeriánsavat, annak a mikroorganizmusokra nem mérgező bázisokkal alkotott sóit vagy 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észtereit, 2-metil-vajsavat, annak a mikroorganizmusra nem mérgező bázisokkal alkotott sóit vagy 1-6 szénatomszámű mono- vagy poühidroxi-alkanolokkal képzett észtereit, 2-metil-butanolt vagy annak a mikroorganizmusokra nem mérgező savakkal képzett észtereit alkalmazzuk,

e) a T-A2-5 komponens arányának növelésére megfelelő prekurzorként leucint, annak a mikroorganizmusra nem mérgező savakkal és bázisokkal képzett sóit, izovalerinánsavat, annak a mikroorganizmusra nem mérgező bázisokkal alkotott sóit, vagy 1-6 szénatomszámú monovagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észtereit, alfa-keto-izokapronsavat, annak a mikroorganizmusra nem mérgező bázisokkal képzett sóit vagy 1-6 szénatomszámü mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észtereit, izoamilalkoholt vagy annak a mikroorganizmusokra nem mérgező savakkal képzett észtereit alkalmazzuk.

A mikroorganizmusra nem mérgező bázisokkal képzett sók azok, melyekben az adott kation jellege és koncentrációja olyan, hogy nem gátolja számottevő mértékben a mikroorganizmus-tenyészet fejlődését, sem pedig a kívánt antibiotikus hatású anyag termelését. Ilyen kationok pl. a nátrium, kálium, aniinónium stb.

A kis szénntoniszámú mono- és polihidroxi-alkanolokknl képzett észterek olyan (Ci-C6)-alkanolok, melyek molekulánként 1, 2, 3, 4, 5 vagy 6 funkciós csoportot tartalmaznak.

Ha 4-6 szénatomezámú alkanolokat alkalmazunk, ezeknek eltérőnek kell Jenniök . azoktól, amelyeket a T-A2 egyéb fő komponenseinek prekurzorakénl alkalmazunk (mint pl. izobutanol, izoamil-alkohol vagy 2-metil-butanol), kivéve azt az esetet, mikor egyidejűleg egy vagy több ilyen komponens mennyiségét is növelni akarjuk.

Előnyösen alkalmazható polihidroxi-alkariolok, pl. a glicerin és a propilén-glikol.

Az alkanolok különböző enantiomerek és epimerek alakjában lehetnek jelen, akkor a leírásba és az igénypontokba beleértjük mindkét formát külön-külön, valamint az egyes formák bármilyen arányú keverékeit is.

A mikroorganizmusra nézve nem mérgezőek azok a 2-22 szénatomszámű alknnoil-észterek, melyeknél az alkanoil molekularész jellege és az észter koncentrációja olyan, hogy a fermentáció során sein a mikroorganizmus-tenyészet fejlődését, sem pedig a kívánt antibiotikus hatású anyag előállítását nem gátolja számottevő mértékben. Általában előnyösek sz egyenes szénláncú 2-4 szénatomos alkanolok.

A találmány szerinti eljárás abból áll, hogy a fent említett törzset olyan vizes táptalajban fermentáljuk, mely táptalaj asszimilálható nitrogénforrást és szervetlen sókat tartalmaz, a teic.oplanin termelésére a technika állásában leírt szokásos körülmények között, azon módosítással, hogy a fermentációs közeghez annak beoltása előtt vagy a fermentálási folyamat során valamely megfelelő prekurzorból szelektíve hatásos mennyiséget adunk azzal a céllal, hogy a T-A2-1, Τ-Λ2-2, T-A2-3, T-A2-4 vagy T-A2-5 teicoplanin Ai komponensek közül egynek vagy töl bnek a mennyiségét szelektíve megnöveljük.

Az „annak valamely olyan mutánsa, mely azr nos melabolikuB úton T-A2 komplexet termel” kifejezés az Actinoplanes íeichomyceticijs ATCC 31121 (anyatörzs) azon természetet- vagy mesterséges mutánsaira utal, mely; k a T-A2 komplex termelése során a komplex H’ zsirsav-acil molekularészének előállításához lényegében ugyanolyan enzimrendszert. használnak, mint az anyatenyészet.

A leírásban és az igénypontokban n „szelektíve hatásos mennyiség a szelektív prekurzornak azon mennyiségét jelenti, melyet a fermentációs közeghez hozzáadva a T-A2 komplex egy meghatározott komponensének mennyiségét szelektíve megnöveli anélkü‘, hogy a mikroorganizmusra mérgező hatást fejtene ki.

A találmány kivitelezéséhez felhasználható, TA-2 komplexet termelő tenyészetek fermentálásához alkamas táptalaj általában a következő anyagokat tartalmazza: valamilyen alkalmas szénforrás, mely lehet például cukor (pl. glükóz, szacharóz, maltőz), poliszacharid (pl. keményítő, dextrán), polialkohol (pl. glicerin, propilén-glikol); egy megfelelő nitrogénforrás, mely lehet például ammóniumsó, aszparagin, borsóliszt, szójaliszt, húskivonat, tripton, pepton, élesztö-hidrolizátum, élesztókivonat vagy gabonafőzel; savas ásványi sók, mint pl. kalcium-karbonát, nátrium-klorid vagy magnézium-szulfát.

A fermentálást 50-200 órán át végezzük aerob körülmények között, 25 és 35 “C közötti hőmérsékleten. A megfelelő prekurzorok szelektíve hatásos mennyiségét hozzáadhatjuk a fermentációs közeghez a termelő törzszsel történő beoltás előtt, de célszerűen az erjedés megindulása után 24-28 óra múlva adjuk hozzá. Az adagolás történhet egy vagy több részletben, vagy pedig folyamatosan.

A találmány szerinti eljárás egy tipikus kísérleti megvalósításában a ferde zabliszt-agaron tárolt Actinoplano.s leichomyceíicus tenyészetet beoltjuk egy táptalajt tartalamz-ó, 100 ml-es lombikba. 36 óra elteltével a tenyészetből vett 5 ml-es mintákkal beoltunk egy sor erjesztőpalackot, melyek egyenként 100 ml fermentációs közeget tartalmaznak. 24-48 órás erjesztés után hozzáadjuk a megfelelő prekurzor szelektíve hatásos mennyiségét. Ha a T-A2 komplexben egyidejűleg két vagy több komponenst kívánunk feldúsítani, akkor ugyanahhoz az erjesztópalackhoz két vagy több prekurzort is hozzáadhatunk. A fermentálást további 60-150 órán át folytatjuk, majd a közeget centrifugálással eltávolítjuk, és az erjesztett mintákban nagy teljesítményű folyadékkromatográfiával (HPLC) meghatározzuk a T-A2 fő komponenseinek koncentrációját.

A prekurzor hozzáadását általában úgy végezzük, hogy a fermentációs közeg előzőleg meghatározott pH értéke ne változzék meg. Ha pl. prekurzorként szabad savat adunk közvetlenül a közeghez, akkor a pH értéket vagy a közeg pufferolásával vagy pedig úgy szabályozzuk, hogy azonnal semlegesítjük egy, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal.

Ha a felhasználandó prekurzor valamely aminosav, akkor a fermentációs közeghez hozzáadhatjuk vizes oldat, vagy olyan savakkal vagy bázisokkal képzett sók (pl. hidroklorid- vagy nátriumsók) alakjában, melyek a komplexet termelő mikroorganizmusra nem mérgezőek. Mind a racém keverékek, mind pedig az optikailag aktív izomerek használhatók prekurzorként, azonban bizonyos esetekben az I.-változat jobb eredményeket ad, mint a megfelelő 0-izomer.

A találmány szerinti eljárás egyik előnyős megvalósítási módjában L-aminosav prekurzorokat alkalmazunk: a teic.oplanin A2 komplex T-A2-2 koncentrációjának növelésére valint, annak valamely sóját vagy észterét, a T-A2--4 koncentrációjának növelésére I.-izoleucint, annak valamely sóját vagy észterét és/vagy a Τ-Λ2-5 koncentráció növelésére L-leucint, vagy· annak valamely sóját vagy észterét. A találmány ezen előnyös megvalósítási módjában a komplex T-A2-2, T-A2-4 vagy T-A2-5 koncentrációja 90-95%-ig is növelhető.

A kis szénatomszámú alkánsav-prekurzorok (pl. izovajsav, 2-metil-vajsav, izovaleriánsav, alfa-oxo-izovaleriánsav, alfa-oxo-bétg-metil-valeriánsav vagy alfa-oxo-izokapronsíiv) hozzáadása történhet nem mérgező bázisokkal képzett sóik vizes oldata alakjában: rendszerint előnyösek az ammónium- és nátriumsók.

Ha prekurzorként telítetlen zsírsavak pl. Lnol- vagy olajsav - sóit használjuk, akko- általában előnyösek a nátrium- és ammóniumsók, de használhatjuk bármely olyan bázis sóját, mely a termelő mikroorganizmusra nem mérgező.

Ha prekurzorként a fenti alkánsavnak vagy telítetlen zsírsavaknak 1-6 szénatomszámi monohidroxi-alkanolokkal képzett észterei. használjuk, ezek az észterek rendszerint a metanol, etanol vagy propanol származékai, de alkalmazhatunk Cí-Ce alkanolokkal képzett észtereket is. Ezesetben ff Ct-Ce alkano’ nem lehet azonos azon alkoholokkal, melyeket a T-A2 komplex egyéb komponenseihez használunk prekurzorként (pl. izobutanol, izoamil-alkohol vagy 2-metil-butanol), kivéve, ha egyidejűleg ezen komponensek közű' egynek vagy többnek az arányát is növe'ni kívánjuk.

A fenti, kis szénatomszámú alkánsavaknak és telítetlen zsírsavaknak kis szénatomszám i polihidroxi-alkanolokkal képzett észterei közül előnyösek az etilén-glikollal és a glicerinnel képzett észterek, mint pl. a triizobv tirin, trióiéin vagy trilinolein.

A telítetlen zsírsavak hozzáadását úgy is végezhetjük, hogy olyan természetes anyagokat alkalamazunk, melyek ezeket a savakat eredeti alakjukban vagy glicerideik alakjában tartalmazzák. Például a kereskedelmi forgalomban kapható szójaolaj általában kb. 10-35% olajsavat és kb. 50-60% linolsavat tartalmaz trigeliceridek alakjában; a sertészsír kb. 40-55% olajsavat; a gyapotmagolaj kb. 10-45% olajsavat és kb. 30-55% linolsavat; a napraforgóolaj kb. 15-25% olajsavat és kb. 65-7f% linolsavat tartalmaz.

Az alkanoi prekurzorokat - mint pl. izobutanol, izoamilalkohol vagy 2-metil-butanol általi ban eredeti alakjukban adjuk a fermentáció; közeghez, de használhatjuk ezen alkohololat a mikroorganizmusra nem mérgező savakkal képzett észtereik alakjában is. Ezen savaknak különbözniük kell azoktól, melyek a T-A2 komplex egyéb főkomponenscinek pre-49 kurzoraként működhetnek (pl. izovajsav, izovaleriánsav, 2-metil-vajBav, linolsav stb.), kivéve, ha ugyanakkor ezen komponensek közül egynek vagy többnek az arányát is növelni akarjuk. Általában előnyösek a kis szénatomszámú alkánsavakkal - mint pl. ecet- ’ sav, propionsav, vajsav - képzett észterek.

A találmány szerinti eljárásban a fermentációs közeghez adagolandó „szelektive hatásos mennyiség” a prekurzor típusától függ. A kis szénatomszámú alkánsavak (izovajsav, 2-metil-vajsav, izovaleriánsav) és a telítetlen zsírsavak (linolsav, olajsav) észtereiből olyan mennyiséget alkalmazunk, hogy a fermentációs közegben koncentráció- _rjuk 0,5 g/1 és 15 g/1, előnyösen 1 és 5 g/1 érték legyen. A kis szénatomszámú alkanolokból (izobutanol, 2-metil-bulanol, izoamil-alkohol) és ezeknek a mikroorganizmusra nem mérgező savakkal képzett észtereiből olyan mennyiséget alkalmazunk, hogy a fermentációs közegben koncentrációjuk 0,5 és 5 g/1 előnyösen 1 és 2 g/1 közötti érték legyen.

Az arainosavakból (vanilin, leucin, izoleucin) és a ketosavakból (alfa-oxo-izovuleriánsav, alfa-oxo-béta-metil-valcriánsav) valamint ezeknek sóiból és bázisaiból a fermentációs közeghez hozzáadandó „szelektive hatásos mennyiség 0,5 g/l-től 5 g/l-ig, elő- 33 nyösen 1 g/l-től 3 g/l-ig terjed.

Ha a kis szénatomszámú alkánsavakat (izovajsav, 2-metil-vajsav, izovaleriánsav) a telítetlen zsírsavakat (linolsav, olajsav) vagy sóikat közvetlenül adjuk a fermentációs kö- 35 zeghez, a „szelektive hatásos mennyiség 0,1 és 2,5 g/1, előnyösen 0,3 és 1,5 g/1 közötti érték.

A T-A2 főkomponcnsei mennyiségének szelektív növelésére az ennél nagyobb kon- 40 centrációk is hatásosak, de a T-A2 komplex teljes kihozatala a mikroorganizmusra gyakorolt mérgező hatások miatt csökkenni fog.

Az alábbi példákban részletesen ismertetjük a találmány néhány kivitelezési mód- 45 ját.

1. példa

Általános eljárás

Ferde zabliszt-agaron tenyésztett Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 törzset beoltunk egy 500 ml-es palackba, amely 100 ml-t tartalmaz az alábbi összetételű táptalajból:

Glükóz 10 g/1

Peptone Difco 4 g/1

Élesztökivonat 4 g/1

Magnézium-szulfát 0,5 g/1

Kalcium-karbonát 5 g/1

Ritka elemeket tartalmazó oldatok: 1-1 ml az A, B és C oldatból

Víz 1000 ml (sterilizálás után a pH-t 6,7-re állítjuk be)

A oldat: 10 tömeg% nátrium-klorid

B oldat: 10 tömeg% kalcium-klorid

C oldat: 50 mg bórsav, 4 mg réz-szulfát, 10 mg kálium-jodid, 20 mg vas(lll)-klorid, 40 mg magnézium-szulfát, 40 mg vas(ll )-szulfát és 20 mg ainmónium-molibdenét, 100 ml desztillált vízben oldva.

Forgó rázógépben 36 órán át végzett erjesztés után a tenyészetnek 5 ml-es adagéival beoltjuk a vizsgálandó és a kontroll palackokat, melyeknek mindegyike 100 ml-t lí rtalmaz az alábbi összetételű táptalajból:

Éleszető-hidrolizátum 5 g/1

Aszparagin 1,5 g/1

Glükóz 20 g/1

Magnézium-szulfát 0,5 g/1

Kalcium-knrbonát 5 g/1

Ritka elemeket tartalmazó oldat 1-1 ml az A, B és C oldatból (sterizlizálás után a pH-t 6,9-re állítjuk be).

Az A, B ős C oldat összetétele a fent megadott.

Az erjesztést 28-30 °C-os hőmérséklete n, forgó rázógépben végezzük. 24 óra elteltével hozzáadjuk a megfelelő prekurzorl. A te nyészctet 72 óra mólva lecentrifugáljuk, és a fermentum 50 mikroliteres mintáiból meghatározzuk a T-A2 fó komponenseinek koncentrációját.

Az elemzést az alábbi nagyteljesítményű folyadékkromatográfiás módszerre) végezzük:

a) Elválasztás fordított fázisú megoszlási kromatográfiával

Berendezés:

Oszlop:

Mobil fázis:

G0

Gradiens-profit

Injektálás:

Varian 5000 A tip. szivattyú;

254 mikrométeres Varian detektor;

Rheodyne 7125 tip. injektor;

Spectra Physics 4000 tip. integrátor;

Zorbax ODS 5 mikrométer, 4,6 x 150 nm; (Du Pont)

A) 0,025 M metil-cianid, 1 : 9 Nátrium-dihidro-foszfát, pH = 6,0

B) 0,025 M metil-cianid, 7 : 3 nstrium-dihidro-foszfát, pH = 6,0 és 50% B között 30 percen át lineáris. Áramlási sebesség 2 ml/perc.

mikroliter a fermentációs léből

Retenciós idők (perc):

-511

T-A2-1 = 16,9 T-A2-2 = 18,0 T-A2-3 = 18,6 T-A2-4 = 20,5 T-A2-5 = 20,9

Belső összehab) Százalékos megoszlás

A komponenseket a fenti eljárással választjuk el, relatív megoszlásukat az öl csúcs összegének százalékaként kapjuk meg a csúcs-megoszlási módszer segítségével.

sonlító: 3,5-di hid roxi-toluol (retonciós idő: 6,3 porc).

Hozzáadott mennyiség g/l	Teljes kihozatal mikrogramm/1	T-A2-1 %	T-A2-2 %	T-A2-3 %	T-A2-4 %	T-A2-5 %
Semmi	340	2.0	30.4	18.1	26.1	23.3
Semmi	305	2.1	32.0	20.6	20.1	25.0
Semmi	379	1.8	32.9	20.4	24.1	20.7
L—Valin (Nötriumsó)
0.5	295	1.5	52.1	20.5	14.0	11,9
1	64 8	0.8	70.4	12.4	9.8	6.7
2	795	0.9	83.0	9.2	3.0	3.3
L-Izoleucín (Nátriumsó)
0.5	116	2.0	29.3	20.4	32.1	16.2
1	134	1.8	24.1	13.5	40.2	20.4
2	159	1.7	13.5	4.4	66.5	13.9
L-Leucin (Nátriumsó)
0.5	373	2.1	37.9	15.2	15.1	29.7
1	459	2.0	35.0	17.7	9.5	35.8
2	281	1.7	35.4	9.5	8.0	45.4
2.5	144	0.8	12.6	12.0	1.5	73.5
L-valin (HC1)
2.5	750	0.2	86.2	8.7	2.8	2.1

Trióiéin (10 tömeg% trilinoleint tartalmaz)

2	320	12.0	17.2	41.0	18.9	10.9
4	258	12.3	16.1	48.8	16.9	10.9
Trilinolein
2	341	29.0	20.3	14.0	20.1	17.1
5	355	31.2	22.9	17.4	16.9	11.5

A fent leírt eljárással kaptuk az alábbiakban megadott, további ki	sérleti eredményeket is:
Hozzáadott Teljes kihozatal mennyiség g/l mikrogramm/1	T-A2-] %	T-A2-2 %	T-A2-3 %	T-A2-4 %	T-A2-5 y.
Semmi 460	2.2	44.1	20.8	15.2	17.7
Izobu tanol
1 480	2.6	52.3	16.8	15.9	12.4
2 258	1.4	60.7	15.2	13.1	9.6
2-Metilbu tanol
1 423	2.3	42.1	15.2	26.3	14.1
2 265	1.7	46.3	10.5	30.1	11.4

2. példa

Általános eljárás 55

Az Actioplanes Teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 törzsből előteriyészetel készítünk egy 500 ml-es rézópalackban, mely 100 ml-t tartalmaz az alábbi összetételű közegből:

Húskivonat 3 g/l

Tripton 5 g/l

Élesztőkivonal 5 g/l

Glükóz ] g/l

Oldható keményítő 24 g/l

Kalcium-karbonát 5 g/l

Víz 1000 ml (Sterizálás után a pH-t 6,7-re állítjuk be.)

A palackokat 24 órán át 28-30 °C-os hőmérsékleten rázzuk, majd az előtenyészetet olya-i ballonokban oltjuk be, melyek mind60 egyike 10 litert tartalmaz az alábbi összetételű táptalajból:

Húskivonat 4 g/l

Peptori 4 g/l

Élesztókivonal 1 g/l

G5 Nátrium-klorid 2,5 g/l

-613

Szójaliszt	10 g/1		majd a fennen	Leírókból a terméket	begyűjt-
Glukóz	50 g/1		jük. A fermentlé 100	ml-es mintáit	pH 11-en
Kalcium-karbonát	5 g/1		leszűrjük (a pll-t 20 vegyes%-os	nátrium-
Csapvízzel 1000 ml	-re feltöltve		-h idroxid-oldat	hozzáadásával állítjuk be),
(Sterilizálás után	a pH-t 6,9-re állítjuk	5	majd az 1. példában	leirt eljárással elemez-
be.)			zük oly módon,	hogy	a leszűrt minták pH-ját
A fermentorok tartalmát aerob körülmó-		0,1 M foszfátos	puffer-oldattal 7,38	-ra állít-
nyék között inkubálva	24 órán át keverjük,		juk be, és mindegyik	mintából 40 mikrolitert
majd hozzáadjuk a megfelelő prekurz.ort. Az		fecskendezünk	be.
erjesztést további 90	órán át folytatjuk,	10
Hozzáadott mennyiség	Teljes ki-	Τ-Λ2-	-1 T-A2-2	T-A2-	-3 T-A2-4	T-A2-5
g/1	hozatal mikrogramm/1	%	%	7.	%	%
Semmi	678	4.5	50.9	16.0	15.8	12.8
Semmi Tri-linolein	684	3.5	50.0	15.1	17.0	14.4
5	764	15.5	45.1	14.0	12.8	12.7
10 Tri-olein	596	52.8	21.1	10.4	5.5	10.2
5	802	4.0	44.0	26.9	13.8	11.3
10 2-metil vajsav-melilészter	792	5.0	29.3	49.2	9.8	6.7
1	720	2.8	40.3	15.2	31.0	10.7
3	846	4.2	40.9	11.9	35.7	7.3
5 2-Me til-vajsav (nátriumsó)	530	5.7	41.3	9.6	37.2	6.2
0.5	531	3.8	39.6	14.6	32.3	9.7
1.5 l;ov3 jsav-mctilészter	357	5.0	35.9	10.6	41.4	7.1
1	683	3.9	67.9	15.9	6.7	5.6
3	402	2.6	80.8	12.5	1.8	2.3
5 Izovajsav (nátriumsó)	220	3.1	80.8	12.2	1.6	2.3
0.5	532	3.8	69.1	18.4	4.4	4.3
1.5 L-valin (pufferolt oldat)	214	3.3	79.7	13.5	1.8	1.7
1	458	2.3	79.3	10.2	4.3	3.9
2	377	3.2	83.9	9.4	1.6	1.9
3	250	1.9	85.3	9.6	1.2	2.0
Gyapotmagolaj 10	571	37.3	26.4	22.9	6.0	7.4
Sertészsír 10	708	8.1	36.1	36.3	11.3	8.2
Szójaolaj 10	637	39.9	23.8	21.6	7.4	7.3
Napraforgóolaj 10	712	31.7	31.8	18.6	8.8	9.1
Alfa-oxo-izo- -valeriónsav 3 A lf a-o xo- béta-me til-Valérián sav	380	2.8	81.0	13.2	1.2	1.8
1.5 Alfa-oxo-izo- -kapronsav	360	4.5	34.9	11.4	41.9	7.3
3	350	6.2	21.4	10.5	9.3	52.6
Izoamilalkohol 1 Izovaleriánsav	410	2.3	35.1	15.8	6.6	40.2
1.5	280	2.8	34.6	15.3	7.6	39.7

-Ί8

3. példa

Actinoplanes teichomyceticus nov. sp.

ATCC 31121 törzsből a 2. példában leírt módon előtonyészelet készítünk. Az elölenyészetet tartalmazó palackokkal beoltunk egy erjesztöballont, mely 10 litert tartalmaz a 2. példában megadott összetételű táptalajból.

A ballon tartalmát aerob körülmények között, keverés közben, 24 órán át 25 °C-on inkubáljuk, majd 2 g/l-nyi b-valint adunk hozzá. Az L-valint előzőleg vízben feloldjuk (2 g/15 ml) oly módon, hogy a pH - 3-as érték eléréséig kénsavat. adunk hozzá, s az így kapott oldatot 10 percen át 120 °C-os hőmérsékleten keverjük.

Az erjesztést 25 ‘C-on további 50 órán at folytatjuk, majd a fcrmenter tartalmát leszúr ju k.

A pH = 11-en leszűrt és az 1. példában leírt módon elemzett fermentációs lé 220 mikrogramm/liter T-A2 komplexet tartalmaz, melynek összetétele a következő:

T-A2-1: 2%; T-A2-2: 95%; T-A2-3: 3%.

Claims

SZABADALMI IGÉNYPONTOK

1. Eljárás (I) általános képletű T-A2-1, T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4, vagy T-A2-5 jelű főkomponensek bármelyikében szelektíve dúsított teicoplanin A2 (T-A2) előállítására az Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 vagy mutánsa tenyésztésével, az általános képletben

R jelentése (a) általános képletű csoport,

R’ jelentése a T-A2-1 komponensben (b) képletű (Z)-4-decenoil-csoport,

A T-A2-2 komponensben (c) képletű 8-metil-nonanoil-csoport, a T-A2-3 komponensben (d) képletű n-dekanoil-csoport, a-T-A2-4 komponensben (e) képletű 8-metil-dekanoil-csoport, a T-A2-5 komponensben pedig (f) képletű 9-metil-dekanoil-csoport, azzal jellemezve, hogy egy Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 tenyészethez, vagy annak valamely olyan mutánsához, mely azonos metabolikus úton T-A2 termelésére képes, a T-A2 glükózamin részében található jellemző acilcsoport megfelelő prekurzorából szelektíve hatásos mennyiséget adunk hozzá az alábbiak szerint:

a) a T-A2 komplexben a T-A2-1 arányának növelésére megfelelő prekurzorként linolsavat, annak valamety, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú monovagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét,

b) a T-A2 kompolexben a T-A2-2 arányának növelésére megfelelő prekuzorokként valint, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval vagy bázissal képzelt sóját, az alfa-oxo-izovaleriánsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzelt sóját vagy 1-6 szénntoinszámú monovagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét, az izovajsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanolokkal képzett észterét, az izobutanolt, vagy annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét,

c) a T-A2 komplexben a T-A2-3 arányának növelésére megfelelő prekuzorként olajsavat, annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszémú monovagy polihidroxi-alkanollal képzett észteréi,

d) a T-A2 komplexben a T-A2-4 arányának növelésére megfelelő prekurzorként izoleucint, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal vagy savval képzett sóját, az alfa-oxo-béta-metil-valeriénsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét, a 2-metil-vajsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénalomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét, a 2-métil-butanolt vagy annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét,

e) a T-A2 komplexben a T-A2-5 arányénak növelésére megfelelő prekurzorként leucint, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval vagy bázissal képzett sóját, az izovaleriénsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkalnollal képzett észterét, az alfa-oxo-izokapronsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszémú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét, az izoamil-alkoholt vagy annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét. (Elsőbbsége: 1986. 05. 20)
2. Eljárás (I) általános képletű T-A2-1,

T-A2-2, T-A2-3, T-A2-4, vagy T-A2-5 jelű főkomponensek bármelyikében szelektíve dúsított teicoplanin A2(T-A2, előállítására az Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 vagy mutánsa tenyésztésével, az általános képletben

R jelentése (a) általános képletű csoport,

R’ jelentése η T-A2-] komponensben (b) képletű (Z)-4-decenoil-csoport, a T-A2-2 komponensben (c) képletű 8-melil-nonanoil-csoport,

-817

19585F a T-A2-3 komponensben (d) képletű n-dekanoil-esoport, a T-A2-4 komponensben (e) képletű 8-metil-dekanoil-csoport, a T-A2-5 komponensben pedig (f) képletű 9-metil-dekanoil-csoport, azzal jellemezve, hogy egy Actinoplanes teichomyceticus nov. sp. ATCC 31121 tenyészethez, vagy annak valamely olyan mutánsához, mely azonos metabolikus úton T-A2 termelésére képes, a T-A2 glükózamin részében található jellemző acilcsoport megfelelő prekurzorából szelektíve hatásos mennyiséget adunk hozzá az alábbiak szerint:

a) A T-A2 komplexben a T-A2-1 arányának növelésére megfelelő prekurzorként linolsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú monovagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét,

b) a T-A2 komplexben a T-A2-2 arányának növelésére megfelelő prekurzorokként valint, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval vagy bázissal képzett sóját, az izovajsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanolial képzett észterét, az izobutanolt, vagy annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét,

c) a T-A2 komplexben a T-A2-3 arányának növelésére megfelelő prekurzorként olajsavat, annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú monovagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét,

d) a T-A2 komplexben a T-A2-4 arányának növelésére megfelelő prekurzorként izoleucint, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal vagy savval képzett sóját, a 2-metil-vajsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét, a 2-metil-butanolt vagy annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét,

e) a T-A2 komplexben a T-A2-5 arányának növelésére megfelelő prekurzorként leucint, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval vagy bázissal képzett sóját, az izovaleriánsavat, annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét, az izoamil-alkoholt vagy annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét. Elsőbbség: 1985. 05. 21.
3. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-1 jelű fókomponensben szelektíve dúsított teicoplainin A2(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy prekurzorként linolsavnt vagy annak vulamely, a mikroorganizmusra nein mérgező bázissal képzett sóját 0,3-1,5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
4. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-1 jelű fókomponensben szelektíve dúsított teicoplanin Az(T-A2) előállítására azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként a linolsavnak valamely 1-6 szénatomszámú. mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét 1-5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21
5. .Az 1. igénypont szerinti aljérás T-Λ2-2 jelű fókomponensben szelektíve dúsított teicoplanin A2ÍT-A2) előállítására azzal jellemezve, hogy megfelelő pre.kurzorként valint vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező savval vagy bázissal képzett sóját 1-3 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
6. Az 1. igénypont szerinti eljárás, a T-A2-2 jelű főkomponensben szelektíve dúsított teicoplanin A2(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként izovajsavat vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját 0,3-1,5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
7. Az 1. igénypont szerinti el járás η T-A2-2 jelű főkomponensben szelektíve dúsított. teicoplanin A2<T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként az izovajsavnak valamely 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét 1-5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
8. Az 1. igénypont szerinti eljárás a T-A2-2 jelű fókomponensben szelektíve dúsított. teicoplanin A2ÍT-A2) előállításéra, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként izobutanolt vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét 1-2 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
9. Az 1. igénypont szerinti eljárás a T-A2-3 jelű főkomponensben szele.klive dúsított. teicoplanin A2(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként olajsavat vagy annak valamely mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját 0,3-1,5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
10. Az 1. igénypont szerinti eljárás a T-A2-3 jelű főkomponensben szelektíve dúsított teicoplanin A2ÍT-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként az olajsavnak valamely 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét 1-5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.

-919
11. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-4 jelű fökomponensben szelektive dúsított teicoplanin Aí(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként izoleucinl vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező savval vagy bázissal képzett sóját 1-3 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
12. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-4 jelű főkomponensben szelektive dúsított teicoplanin Λ21Τ-Α2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként 2-metil-vajsavat vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját 0,3-1,5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
13. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-4 jelű főkomponensben szelektive dúsított teicoplanin A2(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként a 2-metil-vajsavnak valamely 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét 1-5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
14. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-4 jelű főkomponensben szelektive dúsított teicoplanin A2<T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként 2-metil-butanolt vagy annak valamely, a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét 1-2 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
15. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-5 jelű fökomponensben szelektive dúsított teicoplanin A2<T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként leucint vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező savval vagy bázissal képzett sóját 1-3 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
16. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-5 jelű főkomponensben szelektive dúsított teicoplanin Az(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként izovaleriánsavat vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját 0,3-1,5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1905. 05. 21.
17. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-5 jelű fökomponensben szelektive dúsított teicoplanin A2(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként izovaleriánsavnak valamely 1-6 szénatomszámú mono- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét 1-5 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1905. 05. 21.
18. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-A2-5 jelű főkomponensben szelektive dúsított teicoplanin A2(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként izoamil-alkoholt, vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező savval képzett észterét 1-2 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
19. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-Λ2-2 jelű fökomponensben szelektive dúsított teicoplanin Aj(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként alfa- oxo-izovaleriánsavat vagy annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját 1-3 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1986. 05. 20.
20. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-Λ2-4 jelű főkomponensben szelektive dúsító t teicoplanin Ai(T-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként alfa -oxo-béta-melil-valeriánsaval, annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénatomezámú int no- vagy polihidroxi-alkanollal képzett észterét 1-3 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1986. 05. 20.
21. Az 1. igénypont szerinti eljárás T-/2-5 jelű fökomponensben szelektive dúsított teicoplanin A2ÍT-A2) előállítására, azzal jellemezve, hogy megfelelő prekurzorként alfa-oxo-izokapronsavat, annak valamely a mikroorganizmusra nem mérgező bázissal képzett sóját vagy 1-6 szénalomszámii mono- vagy pt lihidroxi-alkanollal képzett észterét 1-3 g/1 mennyiségben alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1986. 05. 20.
22. A 3., 5., 6., 9., 11., 12., 15., 16.,-19., 2C. vagy 21. igénypontok bármelyik szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmusra nem mérgező sóként nátrium- vagy anmóniumsót alkalmazunk. Elsőbbsége: 1986. 05. 20.
23. A 4., 7., 10., 13., 17., 20. vagy 21 igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy észterként metanol-, etanol-, propanol-, etilénglikol- vagy glicerinészterl alkalmazunk. Elsőbbsége: 1986. 05.

20.
24. Az 5., 11. vagy 15. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy az aminosavat az L-izomer alakjában alkalmazzuk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
25. Az 5., II., 15. vagy 24. igénypontok bármelyike szerinti eljársB, azzal jellemezve, hogy a mikroorganizmusra nem mérgező sóként hidrokloridot vagy szulfátot alkalmazunk. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
26. A 2., 3., 4.,. 9. vagy 10. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a telítetlen zsírsavakat vagy észtereiket természetes anyagok alakjában adagoljuk a közeghez. Elsőbbsége: 1985. 05. 21.
27. Az 1-26. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy le rzslenyészetkénl Actinoplanes teichomyceíícur nov. ap. ATCC 31121 törzset alkalmazunk. Elsőbbsége: 1986. 05. 20.
28. Az 1-27. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a fermentálást 25 °C és 35 °C közötti, előnyösen 27 °C és 35 °C közötti hőmérsékleten végezzük. Elsőbbsége: 1986. 05. 20.

-1021
29. Az 1-28. igénypontok bármelyike szerinti eljárás, azzal jellemezve, hogy a megfelelő prekurzort az erjedés megindulása után 24-48 óra múlva adagoljuk a közeghez.· Elsőbbsége: 1986. 05. 20.
30. Az 1. igénypont szerinti eljárás 40-95 t% mennyiségű T-A2-2, T-A2-4 vagy T-A2-5 jelű komponenst tartalamzó teicoplanin Aj előállítására, azzal jellemezve, hogy a fermentációs közeghez szelektíve hatásos mennyiségű valint, izoleucint, illetve leucint

5 adunk.