FR2949682A1 - Use of ice plant (Mesembryanthemum crystallinum) extract for the preparation of a cosmetic or dermatological composition for protecting and/or regenerating skin and hair - Google Patents
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Abstract
Description
Utilisation d'un extrait de ficoïde glaciale en tant qu'ingrédient actif cosmétique Use of glacial ficoid extract as a cosmetic active ingredient
La présente invention concerne une utilisation d'un extrait de ficoïde glaciale utile pour la protection, la régénération, l'hydratation de la peau humaine et l'amélioration de son aspect physique et esthétique. The present invention relates to a use of an extract of glacial ficoïde useful for the protection, regeneration, hydration of human skin and the improvement of its physical and aesthetic appearance.
La ficoïde glaciale (nom botanique Mesembryanthemum crystallinum) est une plante de la famille des Aizoaceae. Plante halophyte, elle est capable de s'adapter à des milieux riches en sel mais possède aussi la faculté de résister à la sécheresse par son caractère succulent, lié à sa capacité de retenir une grande quantité d'eau dans ses tissus. Ses cellules épidermiques les plus externes forment d'ailleurs des vésicules ou papilles, conséquence de la quantité de sel importante absorbée par la plante. Ces vésicules donnent un aspect "givré" à la plante, d'où le nom de ficoïde glaciale ( iceplant en anglais). Selon un premier aspect, l'invention concerne l'utilisation d'un extrait de ficoïde glaciale pour la protection et la régénération de la peau et des cheveux. The glacial ficoïde (botanical name Mesembryanthemum crystallinum) is a plant of the family Aizoaceae. A halophytic plant, it is able to adapt to environments rich in salt but also has the ability to resist drought by its succulent nature, linked to its ability to retain a large amount of water in its tissues. Its outermost epidermal cells form besides vesicles or papillae, consequence of the amount of important salt absorbed by the plant. These vesicles give a "frosted" appearance to the plant, hence the name of glacial ficoïde (iceplant in English). According to a first aspect, the invention relates to the use of an extract of glacial ficoide for the protection and regeneration of the skin and hair.
L'extrait de ficoïde glaciale est en effet un agent cosmétique ou dermatologique intéressant. La peau est un organe vital à part entière qui se compose de trois tissus distincts, assumant chacun différents rôles grâce à différents types cellulaires et structures. The extract of glacial ficoide is indeed an interesting cosmetic or dermatological agent. The skin is a vital organ in its own right that consists of three distinct tissues, each assuming different roles through different cell types and structures.
L'hypoderme, situé en profondeur et constitué en majeure partie de lobules graisseux (adipocytes), assure une fonction de support primaire, de protection mécanique et thermique et joue aussi un rôle de stockage des réserves énergétiques. En position intermédiaire, le derme est aussi un tissu conjonctif investi majoritairement de fibroblastes et de protéines matricielles donnant à la peau ses qualités de compressibilité et d'élasticité connues. Au sein de la trame conjonctive, s'intercalent aussi d'autres cellules et structures, tel un important réseau circulatoire et nutritif, constitué des vaisseaux sanguins et des capillaires lymphatiques et les annexes épidermiques (poils, ongles, glandes pilosébacées et glandes sudoripares) qui prennent naissance dans le derme profond. The hypodermis, located in depth and consisting for the most part of fat lobules (adipocytes), provides a primary support function, mechanical and thermal protection and also plays a role in storing energy reserves. In the intermediate position, the dermis is also a connective tissue mainly invested with fibroblasts and matrix proteins giving the skin its qualities of compressibility and elasticity known. Within the conjunctive framework, other cells and structures are inserted, such as an important circulatory and nutritive network, consisting of blood vessels and lymphatic capillaries and epidermal appendices (hair, nails, pilosebaceous glands and sweat glands) which take birth in the deep dermis.
Le tissu le plus en surface et donc le plus exposé est l'épiderme. Cet épithélium pluristratifié (Malpighien) et kératinisant, dont la partie la plus externe est la couche cornée, se compose de différentes cellules associées à de nombreuses fonctions de barrière de protection. Les majoritaires sont les kératinocytes qui, par leurs processus de prolifération/différenciation, aboutissent à la formation de la couche cornée connue pour son aspect et ses propriétés hydrophobes, compactes et étanches. Le rôle majeur de l'épiderme est d'apporter à la peau et donc au corps humain une première ligne de protection contre les agressions physiques chimiques, hydriques, bactériologiques... The most surface tissue and therefore the most exposed is the epidermis. This multilayered (Malpighian) and keratinizing epithelium, the outermost part of which is the stratum corneum, consists of different cells associated with many protective barrier functions. The majority are keratinocytes which, by their proliferation / differentiation processes, result in the formation of the horny layer known for its appearance and its hydrophobic properties, compact and tight. The major role of the epidermis is to provide the skin and thus the human body with a first line of protection against chemical, waterborne and bacteriological physical aggressions.
Le tissu conjonctif dermique joue, quant à lui, un rôle essentiel dans le support et le maintien de l'architecture cutanée. Les modifications de sa texture et de sa composition sont largement responsables des altérations de la peau qui surviennent au cours du vieillissement. Le relief de la couche cornée est, par ailleurs, directement conditionné par la qualité et la densité du derme qui la sous- tend. C'est en effet le tissu dermique qui confère à la peau ses qualités biomécaniques (compressibilité, extensibilité, étirabilité, fermeté...). Plus que l'épiderme, dont le renouvellement est rapide et constant, le derme subit des troubles importants liés à l'âge, par le vieillissement de ses cellules et de sa matière. En vieillissant, les fibroblastes sont de moins en moins réactifs et de moins en moins prolifératifs. De plus, les macro-molécules constitutives du derme telles que les fibres de collagène, les fibres élastiques, les protéoglycanes et les glycosaminoglycanes ont tendance à dégénérer et à se fragmenter. Leurs réseaux se désorganisent et se réorientent parallèlement à la jonction dermo-épidermique, notamment sous l'action d'enzymes de dégradations des protéines matricielles, les MMP (Matrix Metallo Proteases) aussi appelées collagénases ou elastases. Avec l'âge, les synthèses de ces macromolécules ne sont plus assurées par les fibroblastes. Ces phénomènes d'altération du tissu dermique provoquent en surface un défaut d'organisation de l'épiderme et d'une façon plus visible et plus directe, une perte de fermeté pouvant aller jusqu'à la ptose cutanée et/ou la formation de rides. Par sa position externe, la peau est un organe particulier qui est particulièrement exposé et qui subit les stress environnementaux (variations thermiques, variations hydriques, irradiations physiques liées aux UV...). Ceux-ci contribuent et accélèrent l'apparition des phénomènes précités. The dermal connective tissue plays a key role in supporting and maintaining the cutaneous architecture. Changes in texture and composition are largely responsible for skin changes that occur during aging. The relief of the stratum corneum is, moreover, directly conditioned by the quality and density of the dermis underlying it. It is indeed the dermal tissue that gives the skin its biomechanical qualities (compressibility, extensibility, stretchability, firmness ...). More than the epidermis, whose renewal is rapid and constant, the dermis undergoes significant age-related disorders, through the aging of its cells and its material. As they age, fibroblasts are less and less reactive and less proliferative. In addition, the constituent dermal macromolecules such as collagen fibers, elastic fibers, proteoglycans and glycosaminoglycans tend to degenerate and fragment. Their networks disorganize and reorient themselves parallel to the dermal-epidermal junction, especially under the action of matrix protein degrading enzymes, MMPs (Matrix Metallo Proteases) also called collagenases or elastases. With age, syntheses of these macromolecules are no longer provided by fibroblasts. These phenomena of deterioration of the dermal tissue cause on the surface a lack of organization of the epidermis and in a more visible and direct way, a loss of firmness that may lead to skin ptosis and / or the formation of wrinkles . By its external position, the skin is a particular organ which is particularly exposed and which undergoes environmental stresses (thermal variations, water variations, UV-related physical irradiations ...). These contribute and accelerate the appearance of the aforementioned phenomena.
L'extrait de ficoïde glaciale présente une action au niveau du tégument humain, notamment l'épiderme et le derme. Il a en effet été découvert que l'extrait de ficoïde glaciale permet de protéger et/ou de régénérer la peau, et ainsi d'améliorer son aspect physique et esthétique. The glacial ficoid extract has an action on the human integument, especially the epidermis and the dermis. It has been discovered that the extract of glacial ficoïde can protect and / or regenerate the skin, and thus improve its physical and aesthetic appearance.
Tout d'abord, l'extrait de ficoïde glaciale peut être utilisé pour hydrater la peau, notamment le derme et l'épiderme. De plus, l'extrait de ficoïde glaciale peut être utilisé pour lutter contre le vieillissement cutané et protéger la peau des agressions extérieures, notamment les stress hydriques, thermiques et solaires. En particulier, l'extrait de ficoïde glaciale a une action anti-oxydante et plus particulièrement anti-radicalaire. L'extrait de ficoïde glaciale peut en outre être utilisé pour stimuler la prolifération des fibroblastes et/ou protéger la viabilité des kératinocytes. En effet, l'extrait de ficoïde glaciale présente la propriété de relancer le processus de prolifération des fibroblastes et de les protéger vis à vis des stress hydriques et solaires. L'extrait permet aussi de protéger la viabilité des kératinocytes en condition de stress thermiques et hydriques et de protéger leur métabolisme en condition normale. Ainsi, l'extrait de ficoïde glaciale stimule le renouvellement des tissus dermique et épidermique à titre préventif. L'extrait de ficoïde glaciale peut être préparé de différentes manières : sur plante fraîche ou sèche, de préférence sur plante broyée, à l'aide de solvants polaires type eau, éthanol, glycérine, glycols... Néanmoins, le procédé de préparation de l'extrait ne met de préférence pas en oeuvre de solvant. En effet, l'eau présente dans la ficoïde glaciale suffit à solubiliser les molécules extractibles. De préférence, l'extrait de ficoïde glaciale utilisé est obtenu par : (A) broyage de ficoïde glaciale, à une température inférieure à la température de congélation de la ficoïde glaciale, ce par quoi on obtient un broyat végétal comprenant des éléments solides au sein d'un milieu liquide ; (B) ajout au broyat végétal de l'étape (A) d'au moins une enzyme propre à lyser tout ou partie des éléments solides présents dans le broyat végétal obtenu. Ce procédé est décrit dans la demande de brevet FR 08 58921 déposée le 22 décembre 2008. L'extrait de ficoïde glaciale obtenu par ce procédé présente l'avantage de comprendre à la fois le contenu des cellules végétales présentes dans la ficoïde glaciale et le contenu des parois de ces cellules végétales. Ce procédé de préparation permet avantageusement d'enrichir l'extrait en composés pariétaux, notamment glucidiques simples (glucose, fructose, rhamnose, arabinose, mannose, acides uroniques) et sous forme d'oligomères. De plus, l'extraction réalisée assure une extraction plus efficace que lorsque l'on met uniquement en oeuvre soit une enzymolyse, soit une extraction par cryobroyage, jusqu'à + 300% de sucres pariétaux supplémentaires. A l'issue de ces étapes, un milieu liquide est obtenu, qui comprend les composés et/ou principes actifs à l'état dissous ou dispersé, ce milieu liquide pouvant être aisément récupéré, typiquement par une simple filtration et/ou par centrifugation. Le procédé peut comprendre, suite à l'étape (B), une étape (C) où on filtre le milieu obtenu à l'issue de l'étape (B), puis où on centrifuge le filtrat obtenu. Avantageusement, dans ce cas, le surnageant de la centrifugation peut à nouveau être filtré. First, glacial ficoid extract can be used to moisturize the skin, especially the dermis and epidermis. In addition, the extract of glacial ficoïde can be used to fight against skin aging and protect the skin from external aggressions, including water, heat and solar stress. In particular, the glacial ficoide extract has an antioxidant and more particularly anti-radical action. The glacial ficoid extract can furthermore be used to stimulate the proliferation of fibroblasts and / or to protect the viability of keratinocytes. Indeed, the extract of glacial ficoïde has the property to revive the process of proliferation of fibroblasts and protect them against water and solar stress. The extract also protects the viability of keratinocytes under thermal and water stress and protect their metabolism under normal conditions. Thus, the extract of glacial ficoïde stimulates the renewal of the dermal and epidermal tissues as a preventive measure. The glacial ficoid extract can be prepared in different ways: on a fresh or dry plant, preferably on a crushed plant, using polar solvents such as water, ethanol, glycerine, glycols ... Nevertheless, the preparation process of the extract preferably does not use a solvent. In fact, the water present in the glacial ficoïde is sufficient to solubilize the extractable molecules. Preferably, the glacial ficoide extract used is obtained by: (A) crushing glacial ficoide, at a temperature below the freezing temperature of the glacial ficoide, whereby a vegetable crushed material comprising solid elements within a liquid medium; (B) adding to the vegetable mash of step (A) at least one enzyme capable of lysing all or part of the solid elements present in the vegetable mash obtained. This process is described in the patent application FR 08 58921 filed on December 22, 2008. The glacial ficoide extract obtained by this process has the advantage of understanding both the content of the plant cells present in the glacial ficoid and the content walls of these plant cells. This preparation method advantageously makes it possible to enrich the extract with parietal compounds, in particular simple carbohydrates (glucose, fructose, rhamnose, arabinose, mannose, uronic acids) and in the form of oligomers. In addition, the extraction carried out provides a more efficient extraction than when only enzymolysis or cryobrush extraction is used, up to + 300% additional parietal sugars. At the end of these steps, a liquid medium is obtained, which comprises the compounds and / or active ingredients dissolved or dispersed, this liquid medium can be easily recovered, typically by simple filtration and / or centrifugation. The method may comprise, after step (B), a step (C) in which the medium obtained at the end of step (B) is filtered, and then the filtrate obtained is centrifuged. Advantageously, in this case, the supernatant of the centrifugation can again be filtered.
Ce procédé peut être conduit en l'absence de solvant dans les étapes (A) et/ou (B), de préférence dans les étapes (A) et (B) (introduction des enzymes sous forme sèche, et en tout état de cause sous la forme la plus concentrée possible), ce qui permet d'obtenir un extrait de ficoïde glaciale particulièrement riche en principes actifs et constitué essentiellement des composés de la ficoïde glaciale elle-même, non dilués dans un milieu dispersant, et donc entièrement naturel. Le broyage réalisé dans l'étape (A) peut être conduit selon toute méthode de cryobroyage ou cryoextraction connue en soi. Par exemple, le broyage réalisé peut être conduit en utilisant des dispositifs de type presse, pilon ou broyeur à marteau. L'étape (A) est spécifiquement conduite en plaçant la ficoïde glaciale à une température inférieure à sa température de congélation, et de préférence en conservant la ficoïde glaciale à une température inférieure à sa température de congélation pendant toute la durée de l'étape (A). Pour ce faire, et compte tenu de l'échauffement dû au broyage, il est préférable de conduire l'étape (A) à une température maintenue inférieure d'au moins 5°C à la température de congélation de la ficoïde glaciale, et plus préférentiellement inférieure d'au moins 10°C, voire d'au moins 15°C à sa température de congélation. Typiquement, l'étape (A) est conduite en portant la ficoïde glaciale à une température inférieure à -10°C, et plus préférentiellement inférieure ou égale à -18°C. La ficoïde glaciale est plus avantageusement portée à des températures inférieures, par exemple en la plongeant dans un milieu cryogénique de type azote liquide (-196°C). L'étape (A) peut être conduite sur une ficoïde glaciale précongelée ou surgelée aux températures précitées préalablement à l'étape (A). Une autre possibilité est de réaliser l'étape (A) sur de la ficoïde glaciale fraîche qui n'est portée à une température inférieure à sa température de congélation qu'au moment de la mise en oeuvre de l'étape (A), typiquement en plongeant la ficoïde glaciale dans l'azote liquide ou un autre fluide cryogénique, ou en versant un fluide cryogénique de type azote liquide sur la ficoïde glaciale fraîche (par exemple dans un dispositif de broyage (broyeur, pressoir, mortier) où la ficoïde glaciale fraîche a été initialement introduite). A titre de méthodes de cryobroyage ou de cryoextraction utilisables dans le cadre de l'étape (A), on peut par exemple citer celles du type décrit dans la demande FR 2 652 265. This process can be carried out in the absence of solvent in steps (A) and / or (B), preferably in steps (A) and (B) (introduction of enzymes in dry form, and in any case in the most concentrated form possible), which makes it possible to obtain an extract of glacial ficoide particularly rich in active principles and consists essentially of the compounds of the glacial ficoïd itself, undiluted in a dispersing medium, and therefore entirely natural. The grinding carried out in step (A) may be carried out according to any method of cryomilling or cryoextraction known per se. For example, the grinding performed can be conducted using devices such as press, pestle or hammer mill. Step (A) is specifically carried out by placing the glacial ficoide at a temperature below its freezing temperature, and preferably keeping the glacial ficoide at a temperature below its freezing temperature for the duration of the step ( AT). To do this, and given the heating due to grinding, it is preferable to conduct step (A) at a temperature kept at least 5 ° C below the freezing temperature of the glacial ficoide, and more preferably at least 10 ° C, or at least 15 ° C below its freezing temperature. Typically, step (A) is conducted by bringing the glacial ficoide to a temperature below -10 ° C, and more preferably less than or equal to -18 ° C. The glacial ficoide is more advantageously brought to lower temperatures, for example by immersing it in a liquid nitrogen cryogenic medium (-196 ° C.). Step (A) may be carried out on a frozen or frozen frozen ficoide at the aforementioned temperatures prior to step (A). Another possibility is to carry out step (A) on cool glacial ficoïde which is brought to a temperature below its freezing temperature only at the time of the implementation of step (A), typically by immersing the glacial fluid in liquid nitrogen or other cryogenic fluid, or by pouring a cryogenic fluid of liquid nitrogen type on the fresh glacial fluid (for example in a grinding device (crusher, press, mortar) where the glacial ficoïde fresh was initially introduced). As cryomilling or cryoextraction methods that can be used in the context of step (A), those of the type described in application FR 2 652 265 may for example be mentioned.
Dans l'étape (B), le broyat végétal qui a été obtenu à l'issue de l'étape (A) est traité par au moins une enzyme. L'enzyme employée (ou le mélange ( cocktail ) d'enzymes employé) vise à digérer, en tout ou partie, les éléments solides présents dans le broyat végétal, ce par quoi on libère dans le milieu liquide tout ou partie des composés ou principes actifs présents dans ces éléments solides. Dans cette étape (B), le milieu liquide présent dans le broyat végétal est propre à servir de solvant pour les enzymes employées, ce qui permet d'introduire les enzymes à l'état non solvaté. Les enzymes utilisables dans le cadre de l'étape (B) peuvent notamment être choisies parmi les cellulases, les hemicellulases, les pectinases, les xylanases, et les mélanges de ces enzymes. Des mélanges comprenant une association d'au moins une cellulase ; au moins une pectinase ; et au moins une hémicellulase se révèlent en particulier intéressants. A titre d'exemple d'enzymes bien adaptées à la mise en oeuvre de l'étape (B), on peut notamment citer les enzymes suivantes : l'exopolygalacturonase, l'endopolygalacturonase, la polygalacturonase, la rhamnogalacturonane hydrolase, la rhamnogalacturonane lyase, la rhamnogalacturonane acétylestérase, la rhamnohydrolase, la galacturonohydrolase, la xylogalacturonane hydrolase, la pectine acétylestérase, la pectine méthylestérase, l'endo-arabinase, la bêta-arabinofuranosidase, la bêta-1,4-galactanase, la bêta-1,3-galactanase, la bêta-galactosidase, l'alpha-galactosidase, la féruloyl acétyl estérase, l'alpha-fucosidase, la bêta-apiosidase, l'alpha-rhamnosidase, la bêtarhamnosidase, l'alpha-arabinopyranosidase, la bêta-glucuronidase, l'alpha- glucuronidase, la bêta-xylosidase, l'alpha-xylosidase ; la pectine méthylestérase, la pectine lyase ou la pectate lyase, l'endoxylanase ou l'endo-beta-glucanase. Des enzymes commerciales intéressantes pour la mise en oeuvre de l'invention sont notamment les cellulases du type de la cellulyve AN3500 ; les pectinases du type de la peclyve V extraction liquide ; les hémicellulases du type de la Feedlyve AXC 1500L ou la Feedlyve AGL 1500P . Quelle que soit sa nature exacte, l'enzyme est employée dans l'étape (B) à une température où elle est efficace, et, de préférence aux alentours de (et plus préférentiellement à une température égale à) sa température optimale d'activité. Cela nécessite généralement de réchauffer le milieu entre l'étape (A) et l'étape (B). A cet effet, on peut par exemple laisser le milieu de l'étape (A) se réchauffer jusqu'à température ambiante, ou bien chauffer plus activement le milieu en évitant dans ce dernier cas toute surchauffe qui pourrait dégrader l'enzyme (typiquement en plaçant le milieu dans un milieu thermostaté (bain marie ou bain d'huile par exemple), ou bien encore en contrôlant la vitesse de montée en température). De préférence, l'extrait de ficoïde glaciale utilisé est un extrait des parties aériennes de ficoïde glaciale. L'extrait de ficoïde glaciale, seul ou en combinaison avec d'autres ingrédients actifs, peut être incorporé dans une composition cosmétique ou dermatologique destinée à la protection, la régénération, l'hydratation et/ou l'amélioration des qualités de la peau et des cheveux. Ainsi, selon un deuxième aspect, l'invention concerne une composition cosmétique pour la protection et la régénération de la peau et des cheveux comprenant un véhicule cosmétiquement acceptable et un extrait de ficoïde glaciale. L'extrait de la composition peut notamment être obtenu par : (A) broyage de ficoïde glaciale, à une température inférieure à la température de congélation de la ficoïde glaciale, ce par quoi on obtient un broyat végétal comprenant des éléments solides au sein d'un milieu liquide ; (B) ajout au broyat végétal de l'étape (A) d'au moins une enzyme propre à lyser tout ou partie des éléments solides présents dans le broyat végétal obtenu. Par véhicule cosmétiquement acceptable , on entend un véhicule adapté pour une utilisation en contact avec des cellules humaines cutanées, en particulier les cellules de l'épiderme, sans toxicité, irritation, réponse allergique indue et similaire, et proportionné à un rapport avantage/risque raisonnable. La composition cosmétique comprend de préférence de 0,0001 à 5 % en poids, notamment 0,0005 à 0,5% en poids d'extrait de ficoïde glaciale par rapport au poids total de la composition. La composition cosmétique peut être sous la forme d'onguent, de crème, d'huile, de lait, de pommade, de poudre, de tampon imbibé, de solution, de gel, de spray, de lotion, de suspension, de savon ou de shampooing. De préférence, la composition est sous forme de gel aqueux ou hydroalcoolique, de crème aqueuse ou hydroalcoolique, d'huile, ou de lotion aqueuse ou hydroalcoolique. La composition peut également être sous la forme d'émulsion huile dans eau, eau dans huile, ou multiple. L'application de la composition selon l'invention est généralement effectuée par voie topique. Toutefois, la composition peut également être administrée par voie orale, notamment lorsqu'elle est sous forme de complément alimentaire. Selon un troisième aspect, l'invention concerne l'utilisation d'un extrait de ficoïde glaciale, notamment un extrait tel qu'obtenu par le procédé susmentionné, pour la préparation d'une composition cosmétique destinée à la protection et/ou la régénération de la peau et des cheveux, notamment l'hydratation de la peau, la lutte contre le vieillissement cutané, la protection de la peau des agressions extérieures, notamment les stress hydriques et solaires, la stimulation de la prolifération des fibroblastes et/ou la protection de la viabilité des kératinocytes. In step (B), the vegetable crushed material which has been obtained at the end of step (A) is treated with at least one enzyme. The enzyme used (or the mixture (cocktail) of enzymes used) is intended to digest, in whole or in part, the solid elements present in the vegetable crushed material, whereby the whole or part of the compounds or principles are liberated in the liquid medium. assets present in these solid elements. In this step (B), the liquid medium present in the vegetable crushed material is able to serve as a solvent for the enzymes used, which makes it possible to introduce the enzymes in the unsolvated state. The enzymes that may be used in the context of step (B) may especially be chosen from cellulases, hemicellulases, pectinases, xylanases, and mixtures of these enzymes. Mixtures comprising a combination of at least one cellulase; at least one pectinase; and at least one hemicellulase are particularly interesting. By way of example of enzymes which are well adapted to the implementation of step (B), mention may notably be made of the following enzymes: exopolygalacturonase, endopolygalacturonase, polygalacturonase, rhamnogalacturonan hydrolase, rhamnogalacturonan lyase, rhamnogalacturonan acetyl esterase, rhamnohydrolase, galacturonohydrolase, xylogalacturonan hydrolase, pectin acetyl esterase, pectin methylesterase, endo-arabinase, beta-arabinofuranosidase, beta-1,4-galactanase, beta-1,3-galactanase , beta-galactosidase, alpha-galactosidase, feruloyl acetyl esterase, alpha-fucosidase, beta-apiosidase, alpha-rhamnosidase, betarhamnosidase, alpha-arabinopyranosidase, beta-glucuronidase, alpha-glucuronidase, beta-xylosidase, alpha-xylosidase; pectin methylesterase, pectin lyase or pectate lyase, endoxylanase or endo-beta-glucanase. Commercial enzymes of interest for the implementation of the invention include cellulases of the cellulyve AN3500 type; pectinases of the type of peclyve V liquid extraction; hemicellulases of the type of the Feedlyve AXC 1500L or the Feedlyve AGL 1500P. Whatever its exact nature, the enzyme is employed in step (B) at a temperature where it is effective, and preferably around (and more preferably at a temperature equal to) its optimum temperature of activity. . This generally requires warming the medium between step (A) and step (B). For this purpose, it is possible, for example, to allow the medium of step (A) to warm to room temperature, or to heat the medium more actively, avoiding in the latter case any overheating which could degrade the enzyme (typically placing the medium in a thermostatic medium (water bath or oil bath for example), or even by controlling the rate of rise in temperature). Preferably, the glacial ficoid extract used is an extract of the aerial parts of glacial ficoide. The glacial ficoide extract, alone or in combination with other active ingredients, may be incorporated into a cosmetic or dermatological composition intended for the protection, regeneration, hydration and / or improvement of the qualities of the skin and hair. Thus, according to a second aspect, the invention relates to a cosmetic composition for the protection and regeneration of skin and hair comprising a cosmetically acceptable vehicle and an extract of glacial ficoïde. The extract of the composition may especially be obtained by: (A) grinding of glacial ficoide, at a temperature below the freezing temperature of the glacial ficoide, whereby a vegetable crushed material comprising solid elements within a liquid medium; (B) adding to the vegetable mash of step (A) at least one enzyme capable of lysing all or part of the solid elements present in the vegetable mash obtained. By cosmetically acceptable vehicle is meant a vehicle adapted for use in contact with cutaneous human cells, in particular the cells of the epidermis, without toxicity, irritation, undue allergic response and the like, and proportionate to a reasonable risk / benefit ratio . The cosmetic composition preferably comprises from 0.0001 to 5% by weight, especially 0.0005 to 0.5% by weight of glacial ficoide extract relative to the total weight of the composition. The cosmetic composition may be in the form of ointment, cream, oil, milk, ointment, powder, impregnated buffer, solution, gel, spray, lotion, suspension, soap or shampoo. Preferably, the composition is in the form of an aqueous or aqueous-alcoholic gel, an aqueous or aqueous-alcoholic cream, an oil, or an aqueous or aqueous-alcoholic lotion. The composition may also be in the form of oil-in-water, water-in-oil or multiple emulsion. The application of the composition according to the invention is generally carried out topically. However, the composition may also be administered orally, especially when it is in the form of a dietary supplement. According to a third aspect, the invention relates to the use of an extract of glacial ficoide, in particular an extract as obtained by the above-mentioned method, for the preparation of a cosmetic composition intended for the protection and / or regeneration of skin and hair, especially the hydration of the skin, the fight against skin aging, the protection of the skin from external aggressions, especially water and solar stress, the stimulation of the proliferation of fibroblasts and / or the protection of the skin. the viability of the keratinocytes.
Dans les exemples suivants, l'extrait de ficoïde glaciale a été préparé comme suit. In the following examples, the glacial ficoid extract was prepared as follows.
L'extraction a été réalisée sur des parties aériennes de plants de ficoïde glaciale (Mesembryanthemum crystallinum) cultivés en serre, la récolte des parties aériennes ayant été effectuée au bout de 3 mois environ. Les parties aériennes ainsi récoltées ont été utilisées dans les extractions décrites ci-après, soit à l'état frais, soit après congélation. Le cas échéant, la congélation des parties aériennes a été effectuée à -18°C. Cryobroyage On a introduit 500 g du matériau végétal, à l'état congelé, dans un mortier. On a versé de l'azote liquide dans ce mortier et le matériau ainsi porté à -196°C a été broyé au pilon jusqu'à l'obtention d'une poudre (cryobroyat). Extraction was carried out on aerial parts of glacial ficoid plants (Mesembryanthemum crystallinum) grown in a greenhouse, the harvest of aerial parts having been carried out after about 3 months. The aerial parts thus harvested were used in the extractions described below, either in the fresh state or after freezing. If necessary, the freezing of the aerial parts was carried out at -18 ° C. Cryobrilling 500 g of the plant material, in the frozen state, was placed in a mortar. Liquid nitrogen was poured into this mortar and the material thus heated to -196 ° C was ground with a pestle until a powder (cryobroyate) was obtained.
Enzymolyse Le cryobroyat obtenu à l'issue de l'étape précédente a été transféré dans un bécher placé dans un bain-marie à 50°C (qui correspond à la température optimale de fonctionnement des enzymes employées dans cette étape). Lorsque la température a atteint le point de fusion, et que le cryobroyat est devenu liquide, on y a ajouté 2,5 g d'un cocktail enzymatique comprenant, en masse par rapport à la masse totale du cocktail enzymatique : 33.3% de cellulyve AN3500 (cellulase) ; 33.3% de peclyve V extraction liquide (pectinase), 33.3% d'un mélange d'hémicellulases comprenant, en masse par rapport à la masse dudit mélange : 50% de Feedlyve AXC 1500L et 50% de Feedlyve AG L 1500P ) Si besoin est, le pH du milieu est ajusté à 4,5, la quantité d'acide ou de base à introduire pour réguler le pH étant alors négligeable (quelques microlitres tout au plus). En outre aucun solvant (eau par exemple) n'est ajouté, le cryobroyat décongelé ayant une teneur en eau suffisante pour assurer la dispersion des enzymes. 8 Le mélange obtenu a été agité par une hélice, à 400 tours/minute pendant 1 heure ; puis à 250 tours/minute pendant 7 heures. Le mélange obtenu à l'issue de ces différents traitements a été filtré, sur une toile de nylon de 55 m. Le filtrat a été centrifugé à 18500 g pendant 15 minutes. Le surnageant est filtré sur plaque de cellulose de seuil de coupure de 3 à 7 m. On a ainsi obtenu un extrait végétal de ficoïde glaciale. Enzymolysis The cryobroyate obtained after the previous step was transferred into a beaker placed in a water bath at 50 ° C (which corresponds to the optimum operating temperature of the enzymes used in this step). When the temperature reached the melting point, and the cryobroyate became liquid, 2.5 g of an enzymatic cocktail was added comprising, in mass relative to the total mass of the enzyme cocktail: 33.3% of cellulyve AN3500 (cellulase); 33.3% pecanve V liquid extraction (pectinase), 33.3% of a mixture of hemicellulases comprising, in mass relative to the mass of said mixture: 50% of Feedlyve AXC 1500L and 50% of Feedlyve AG L 1500P) If necessary the pH of the medium is adjusted to 4.5, the amount of acid or base to be introduced to regulate the pH being then negligible (a few microliters at most). In addition no solvent (water for example) is added, the thawed cryobroyate having a water content sufficient to ensure the dispersion of the enzymes. The resulting mixture was stirred by a helix at 400 rpm for 1 hour; then at 250 rpm for 7 hours. The mixture obtained at the end of these different treatments was filtered on a nylon fabric of 55 m. The filtrate was centrifuged at 18500 g for 15 minutes. The supernatant is filtered on cellulose plate with a cut-off threshold of 3 to 7 m. In this way, a plant extract of glacial ficoids was obtained.
Exemple 1 : activité de l'extrait de ficoïde glaciale sur la prolifération des fibroblastes EXAMPLE 1 Activity of the Glicoid Ficoid Extract on the Proliferation of Fibroblasts
Différentes études ont été réalisées sur des fibroblastes dermiques humains normaux obtenus par méthode enzymatique de plasties abdominales ou mammaires ensemencés en monocouche dans les conditions de culture adéquates avec du milieu DMEM (milieu de Dulbecco ( Dulbecco/Vogt modified Eagle's minimal essential medium en anglais) - Invitrogen ). Après 24h de culture, les cellules ont été traitées avec 0,5 % en volume/volume d'extrait de ficoïde glaciale. A terme, la viabilité cellulaire a été évaluée par quantification de l'activité métabolique des déshydrogénases mitochondriales, par mesure d'hydrolyse du MTT (MéthylThiazoleTétrazolium - Sigma Aldrich ) après 1, 2, 3 et 6 jours de culture (Chaque condition a été réalisée quatre fois et l'expérience, renouvelée deux fois). Les données du tableau 1 concernent le pourcentage de viabilité des fibroblastes en fonction des traitements. Le témoin positif correspond à l'adjonction de SVNN (5 % en volume/volume, sérum de veau nouveau né, Invitrogen ) et le témoin négatif, au milieu de culture seul (DMEM seul, Invitrogen ) qui sert de base 100. Various studies have been carried out on normal human dermal fibroblasts obtained by enzymatic method of abdominal or mammary plasty pledged as monolayer under the appropriate culture conditions with DMEM medium (Dulbecco's medium). Invitrogen). After 24h culture, cells were treated with 0.5% v / v ice cold extract. In the long term, the cell viability was evaluated by quantification of the metabolic activity of the mitochondrial dehydrogenases, by measurement of hydrolysis of MTT (MethylThiazoleTetrazolium - Sigma Aldrich) after 1, 2, 3 and 6 days of culture (Each condition was carried out four times and experience, repeated twice). The data in Table 1 relate to the percentage of fibroblast viability as a function of the treatments. The positive control corresponds to the addition of SVNN (5% v / v, newborn calf serum, Invitrogen) and the negative control, in culture medium alone (DMEM alone, Invitrogen) which serves as a base 100.
Tableau 1 : Pourcentage de viabilité des fibroblastes en fonction des traitements. Durée du % de Viabilité des Fibroblastes Humains Normaux traitement Témoin négatif Témoin positif Ficoïde Glaciale (0,5%) J1 100 106 99 J2 100 133 104 J3 100 136 124 J6 100 139 149 Cet exemple montre que l'adjonction de l'extrait de ficoïde glaciale dans le milieu de culture permet aux fibroblastes de mieux proliférer et donc de stimuler leur renouvellement cellulaire à hauteur de 49% après une cinétique de 6 jours. Exemple 2 : activité de l'extrait de ficoïde glaciale sur la protection et la réparation des fibroblastes face à un stress hydrique Des cultures de fibroblastes humains normaux ont été réalisées et soumises à un stress hydrique (cellules sans milieu de culture) pendant 2,5h. 24h après les stress, la viabilité résiduelle des cellules a été évaluée par quantification de l'activité métabolique des déshydrogénases mitochondriales, par mesure d'hydrolyse du MTT (MéthylThiazoleTétrazolium - Sigma Aldrich ). Les traitements avec l'extrait de ficoïde glaciale étaient préventif (avant le stress) et curatif (après le stress) et à 0,5% ou 5.10-2% en volume/volume de ficoïde glaciale. Ces stress occasionnent une mortalité cellulaire : la viabilité résiduelle est en moyenne de 70%. Table 1: Percentage of viability of fibroblasts according to treatments. Duration of Viability of Human Fibroblasts Normal Treatment Negative Control Positive Control Glacial Ficoide (0.5%) J1 100 106 99 J2 100 133 104 J3 100 136 124 J6 100 139 149 This example shows that the addition of glacial ficoide in the culture medium allows the fibroblasts to proliferate better and therefore stimulate their cell turnover by 49% after a kinetics of 6 days. EXAMPLE 2 Activity of the Glicoid Ficoide Extract on the Protection and Repair of Fibroblasts in the Face of Water Stress Normal human fibroblast cultures were made and subjected to water stress (cells without culture medium) for 2.5 hours. . 24h after the stresses, the residual viability of the cells was evaluated by quantification of the metabolic activity of the mitochondrial dehydrogenases, by measurement of hydrolysis of MTT (MethylThiazoleTetrazolium - Sigma Aldrich). Treatments with glacial ficoid extract were preventive (before stress) and healing (after stress) and at 0.5% or 5.10-2% in volume / volume of glacial ficoïde. These stresses cause cell death: the residual viability is on average 70%.
Les données du tableau 2 ci-après concernent le pourcentage de viabilité résiduelle des fibroblastes en fonction des traitements. Le témoin interne correspond à l'adjonction de SVNN (5% en volume/volume) et le témoin négatif, au milieu de culture seul (DMEM (Dulbecco/Vogt modified Eagle's minimal essential medium), Invitrogen + 1 % en poids/volume SVNN) ayant subi le stress, qui sert de base 100 dans chaque condition pour les calculs. Chaque condition a été réalisée deux fois et l'expérience, renouvelée deux fois. The data in Table 2 below relate to the percentage of residual fibroblast viability as a function of the treatments. The internal control corresponds to the addition of SVNN (5% in volume / volume) and the negative control, in culture medium alone (DMEM (Dulbecco / Vogt modified Eagle's minimal essential medium), Invitrogen + 1% in weight / volume SVNN ) under stress, which serves as a base 100 in each condition for calculations. Each condition has been performed twice and the experiment is repeated twice.
Tableau 1 : Pourcentage de viabilité des fibroblastes en fonction des traitements. Viabilité des cellules DMEM 1% DMEM 5% Ficoïde Ficoïde soumises à un SVNN (témoin SVNN Glaciale Glaciale stress avec négatif) (témoin positif) (0,5%) (5.10-2%) traitements Traitement curatif 100% 98% 120% 118% Traitement préventif 100% 111°/o 116% 117% Les traitements n'entraînent pas de modifications de la viabilité cellulaire en conditions normales ; en conditions de stress, des effets protecteurs sont observés pour les deux types de traitement. L'extrait de ficoïde glaciale permet donc non seulement de protéger l'activité métabolique des fibroblastes en condition de stress hydrique mais aussi de réparer les dommages liés à ce stress. Exemple 3 : activité de l'extrait de ficoïde glaciale sur la protection des fibroblastes face à un stress solaire Table 1: Percentage of viability of fibroblasts according to treatments. Viability of DMEM cells 1% DMEM 5% Ficoide Ficoide subjected to SVNN (control SVNN Glacial Glacial stress with negative) (positive control) (0.5%) (5.10-2%) treatments Curative treatment 100% 98% 120% 118 % Preventive treatment 100% 111% 116% 117% Treatments do not lead to changes in cell viability under normal conditions; under stress conditions, protective effects are observed for both types of treatment. The glacial ficoide extract therefore not only protects the metabolic activity of the fibroblasts under water stress conditions but also repairs the damage associated with this stress. Example 3 Activity of the Folicoid Extract on the Protection of Fibroblasts in the Face of a Solar Stress
Des cultures de fibroblastes humains normaux obtenus par méthode enzymatique de plasties abdominales ou mammaires, ont été réalisées dans les mêmes conditions que celles de l'exemple 1 et soumises à un stress physique (UV) délivré par une dose énergétique d'irradiation en un temps déterminé par un irradiateur solaire (SUNTEST CPS+, 760W/m2 pendant 16 minutes). Cette dose énergétique d'irradiation a été déterminée afin de provoquer environ 50% de mortalité cellulaire. Elle permet d'observer, par une augmentation du pourcentage de viabilité cellulaire, tout effet bénéfique de l'extrait de ficoïde glaciale sur le métabolisme cellulaire. 24h après ce stress, les analyses suivantes ont été réalisées : dosage fluorimétrique au CellTiter-Blue qui permet de quantifier l'activité métabolique mitochondriale correspondant à la viabilité cellulaire résiduelle avec ou sans irradiation, dosage par colorimétrie à la sulforhodamine B les protéines cellulaires totales. Comme dans l'exemple 2, le traitement (0,5%; 5.10-2% et 5.10-3% en volume/volume) a été réalisé avant et/ou après le stress. Le témoin interne est le DMEM, seul (témoin négatif). Chaque condition a été réalisée trois fois et l'expérience, renouvelée deux fois. Les résultats sont consignés dans les tableaux 3 et 4 suivants : Tableau 3 : Pourcentage de viabilité des fibroblastes en fonction des traitements. 0/0 de viabilité cellulaire (CTB) plaque non irradiée plaque irradiée à 760W/m2-16min Témoin 100 53 préventif 101 40 FG 0,5% curatif 102 36 curatif+préventif 102 31 préventif 101 42 FG 5.10-2% curatif 103 49 curatif+préventif 103 47 préventif 103 55 FG 5.10-3% curatif 104 48 curatif+préventif 104 46 Tableau 4 : Pourcentage de viabilité des fibroblastes en fonction des traitements. 0/0 de protéines totales 0/0 de protéines totales (SRB) rapportées au % de viabilité cellulaire plaque non plaque plaque non plaque irradiée irradiée à irradiée irradiée à 760W/m2- 760W/m2- 16min 16min Témoin 100 61 100 115 préventif 103 58 102 145 FG 0,5% curatif 98 54 96 150 curatif+préventif 103 53 101 171 préventif 109 56 108 133 FG 5.10-2% curatif 107 59 104 120 curatif+préventif 106 57 103 121 préventif 106 60 103 109 FG 5.10-3% curatif 103 59 99 123 curatif+préventif 103 60 99 130 Les résultats montrent que l'extrait de ficoïde glaciale stimule le métabolisme des fibroblastes en condition de stress solaire, sans pour autant augmenter leur viabilité résiduelle. L'extrait de ficoïde glaciale prévient et répare les dommages cellulaires provoqués par les radiations solaires. Normal human fibroblast cultures obtained by enzymatic method of abdominal or mammary plasties were performed under the same conditions as those of Example 1 and subjected to a physical stress (UV) delivered by an irradiation energy dose in one time. determined by a solar irradiator (SUNTEST CPS +, 760W / m2 for 16 minutes). This irradiation energy dose was determined to cause about 50% of cell death. It makes it possible to observe, by an increase in the percentage of cell viability, any beneficial effect of the glacial ficoid extract on cellular metabolism. 24h after this stress, the following analyzes were carried out: CellTiter-Blue fluorimetric assay which makes it possible to quantify the mitochondrial metabolic activity corresponding to the residual cell viability with or without irradiation, assay by colorimetry with the sulforhodamine B total cellular proteins. As in Example 2, the treatment (0.5%, 5.10-2% and 5.10-3% v / v) was performed before and / or after the stress. The internal control is DMEM alone (negative control). Each condition has been performed three times and the experiment, repeated twice. The results are reported in the following Tables 3 and 4: Table 3: Percentage of viability of fibroblasts according to treatments. 0/0 cell viability (CTB) plate non-irradiated plate irradiated at 760W / m2-16min Control 100 53 preventive 101 40 FG 0.5% curative 102 36 curative + preventive 102 31 preventive 101 42 FG 5.10-2% curative 103 49 curative + preventive 103 47 preventative 103 55 FG 5.10-3% curative 104 48 curative + preventive 104 46 Table 4: Percentage of viability of fibroblasts as a function of treatments. 0/0 of total protein 0/0 of total protein (SRB) relative to the% of cell viability plate non-plate irradiated irradiated irradiated non-irradiated plate at 760W / m2- 760W / m2- 16min 16min Control 100 61 100 115 preventive 103 58 102 145 FG 0.5% curative 98 54 96 150 curative + preventive 103 53 101 171 preventive 109 56 108 133 FG 5.10-2% curative 107 59 104 120 curative + preventive 106 57 103 121 preventive 106 60 103 109 FG 5.10- 3% curative 103 59 99 123 curative + preventive 103 60 99 130 The results show that the glacial ficoide extract stimulates the metabolism of fibroblasts under solar stress conditions, without increasing their residual viability. The folic acid extract prevents and repairs cellular damage caused by solar radiation.
Exemple 4 : activité de l'extrait de ficoïde glaciale sur la stimulation du métabolisme des kératinocytes Des cultures de kératinocytes humains normaux (KHN) obtenus par méthode enzymatique de plasties abdominales ou mammaires ont été réalisées en KSFM (keratinocytes serum free medium, invitrogen ) et traitées avec l'extrait de ficoïde glaciale (0,5%; 5.10-2% et 5.10-3% en volume/volume). Des dosages de viabilité et des dosages protéiques ont été réalisés à l'issue de 5 jours de culture. EXAMPLE 4 Activity of the Glicoid Ficoide Extract on the Stimulation of Keratinocyte Metabolism Normal human keratinocyte (KHN) cultures obtained by enzymatic method of abdominal or mammary plasties were made in KSFM (keratinocytes serum free medium, invitrogen) and treated with glacial ficoid extract (0.5%, 5.10-2% and 5.10-3% v / v). Viability assays and protein assays were performed after 5 days of culture.
Le témoin correspond au KFSM seul. Les résultats sont consignés dans le tableau 5 suivant : The cookie is KFSM alone. The results are shown in Table 5 below:
Tableau 5 : Pourcentage de viabilité des kératinocytes en fonction des traitements. 0/0 protéines 0/0 totales de protéines totales rapportées au % de viabilité cellulaire Témoin 100 100 FG 0,5% Traitement total 96 98 FG 5.10-2% Traitement total 114 114 FG 5.10-3% Traitement total 124 120 Les résultats montrent que l'extrait de ficoïde glaciale ne stimule pas la viabilité des kératinocytes mais stimule leur métabolisme protéique. Table 5: Percentage of keratinocyte viability as a function of treatments. 0/0 total protein 0/0 total protein relative to% cell viability Control 100 100 FG 0.5% Total treatment 96 98 FG 5.10-2% Total treatment 114 114 FG 5.10-3% Total treatment 124 120 The results show that the glacial ficoide extract does not stimulate the viability of keratinocytes but stimulates their protein metabolism.
Exemple 5 : activité de l'extrait de ficoïde glaciale sur la protection des kératinocytes face à un stress hydrique EXAMPLE 5 Activity of the Glicoid Ficoide Extract on the Protection of Keratinocytes in the Face of Water Stress
Des cultures de kératinocytes humains normaux ont été réalisées et soumises à un stress hydrique (cellules sans milieu de culture) pendant 2,5h. 24h après les stress, la viabilité résiduelle des cellules a été évaluée par quantification de l'activité métabolique des déshydrogénases mitochondriales, par mesure d'hydrolyse du MTT (MéthylThiazoleTétrazolium). Les traitements avec l'extrait de ficoïde glaciale étaient préventif (avant le stress) et curatif (après le stress) et à 0,5% ou 5.10-2% en volume/volume de ficoïde glaciale. Ces stress occasionnent une mortalité cellulaire : la viabilité résiduelle est en moyenne de 70-80%. Normal human keratinocyte cultures were made and subjected to water stress (cells without culture medium) for 2.5 hours. 24h after the stresses, the residual viability of the cells was evaluated by quantification of the metabolic activity of the mitochondrial dehydrogenases, by measurement of hydrolysis of the MTT (MethylThiazoleTetrazolium). Treatments with glacial ficoid extract were preventive (before stress) and healing (after stress) and at 0.5% or 5.10-2% in volume / volume of glacial ficoïde. These stresses cause cell death: the residual viability is on average 70-80%.
Les données du tableau 6 ci-après concernent le pourcentage de viabilité résiduelle des kératinocytes en fonction des traitements. Chaque condition a été réalisée trois fois et l'expérience, renouvelée deux fois. Le témoin négatif correspond au milieu de culture seul (KSFM) ayant subi le stress, qui sert de base 100 dans chaque condition pour les calculs. The data in Table 6 below relate to the percentage of residual viability of the keratinocytes as a function of the treatments. Each condition has been performed three times and the experiment, repeated twice. The negative control corresponds to the stress-only culture medium (KSFM), which serves as the base 100 in each condition for the calculations.
Tableau 6 : Pourcentage de viabilité des kératinocytes en fonction des traitements. Viabilité des cellules KSFM Ficoïde Ficoïde soumises à un (témoin Glaciale Glaciale stress avec négatif) (0,5%) (5.10-2%) traitements Traitement curatif 100% 116% 120% Traitement préventif 100% 116% 138% Les traitements n'entraînent pas de modifications de la viabilité cellulaire en conditions normales. En conditions de stress des effets protecteurs sont observés 25 pour les deux types de traitement. L'extrait de ficoïde glaciale permet donc non seulement de protéger l'activité mitotique des kératinocytes en condition de stress hydrique mais aussi de mieux réparer les dommages liés à ce stress. Table 6: Percentage of keratinocyte viability as a function of treatments. Viability of KSFM Ficoide Ficoide cells subjected to (Glacial Glacial stress with negative control) (0.5%) (5.10-2%) treatments Curative treatment 100% 116% 120% Preventive treatment 100% 116% 138% Treatment no result in no changes in cell viability under normal conditions. Under stress conditions protective effects are observed for both types of treatment. The glacial ficoide extract therefore not only protects the mitotic activity of keratinocytes under water stress conditions but also better to repair the damage associated with this stress.
Exemple 6 : activité de l'extrait de ficoïde glaciale sur la protection des kératinocytes face à un stress thermique Des cultures de kératinocytes humains normaux ont été réalisées et soumises à un stress thermique chaud (45°C pendant 2h30) ou à un stress froid (4°C pendant 2h30). 24H après les stress, la viabilité résiduelle des cellules a été évaluée par quantification de l'activité métabolique des déshydrogénases mitochondriales, par mesure d'hydrolyse du MTT (MéthylThiazoleTétrazolium). Les traitements avec l'extrait de ficoïde glaciale (0,5% et 5.10-2% en volume/volume) étaient préventif (avant le stress) et curatif (après le stress). Ces stress occasionnent une mortalité cellulaire : la viabilité résiduelle est en moyenne de 40-60 %. EXAMPLE 6 Activity of the Glicoid Ficoide Extract on the Protection of Keratinocytes Against Thermal Stress Normal human keratinocyte cultures were cultured and subjected to a hot thermal stress (45 ° C. for 2.5 hours) or to a cold stress ( 4 ° C for 2h30). 24 hours after the stress, the residual viability of the cells was evaluated by quantification of the metabolic activity of the mitochondrial dehydrogenases, by measurement of hydrolysis of MTT (MethylthiazoleTetrazolium). Treatments with glacial ficoid extract (0.5% and 5.10-2% v / v) were preventive (before stress) and curative (after stress). These stresses cause cell death: the residual viability is on average 40-60%.
Les données du tableau 7 ci-après concernent le pourcentage de viabilité résiduelle des kératinocytes en fonction des traitements. Chaque condition a été réalisée trois fois et l'expérience, renouvelée 2 fois. Le témoin négatif correspond au milieu de culture seul (KSFM) ayant subi le stress, qui sert de base 100 dans chaque condition pour les calculs. The data in Table 7 below relate to the percentage of residual viability of the keratinocytes as a function of the treatments. Each condition was performed three times and the experiment, repeated twice. The negative control corresponds to the stress-only culture medium (KSFM), which serves as the base 100 in each condition for the calculations.
Tableau 7 : Pourcentage de viabilité des kératinocytes en fonction des traitements. Viabilité des KSFM Ficoïde Ficoïde cellules soumises (témoin Glaciale Glaciale à un stress négatif) (0,5%) (5.10-2%) CHAUD Traitement curatif 100% 127% 112% Traitement 100% 102% 106% préventif Viabilité des KSFM Ficoïde Ficoïde cellules soumises (témoin Glaciale Glaciale à un stress négatif) (0,5%) (5.10-2%) FROID Traitement curatif 100% 111 % 96% Traitement préventif 100% 126% 123% Le tableau montre que l'extrait de ficoïde glaciale présente des activités complémentaires sur la viabilité des kératinocytes en condition de stress thermiques chaud et froid.5 Table 7 Percentage of keratinocyte viability as a function of treatments. Viability of KSFM Ficoide Ficoide subjected cells (Glacial Glacial control at negative stress) (0.5%) (5.10-2%) HOT Curative treatment 100% 127% 112% Treatment 100% 102% 106% preventative Viability of KSFM Ficoide Ficoide subjected cells (Glacial Glacial Control at a negative stress) (0.5%) (5.10-2%) COLD Curative treatment 100% 111% 96% Preventive treatment 100% 126% 123% The table shows that the glacial ficoid extract presents complementary activities on the viability of keratinocytes under hot and cold thermal stress conditions.5
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