FR2727415A1 - Complexes du ruthenium utilisables en particulier pour determiner la topologie des proteines, et leur procede de preparation - Google Patents

Abstract

L'invention concerne des complexes du ruthénium utilisables en particulier pour déterminer la topologie des protéines, et leur procédé de préparation. Ces complexes qui portent plusieurs ligands comprennent: - un groupement capable de reconnaître une séquence peptidique incorporant des histidines, par exemple le groupement RuCO3 , et - au moins un groupe fonctionnel, par exemple un groupe photosensible comme la benzophénone, qui a la propriété de présenter une intéraction avec des acides aminés, porté par au moins un autre ligand du complexe.

Description

COMPLEXES DU RUTHENlUN UTILISABLES EN PARTICULIER POUR
DETERMINER LA TOPOLOGIE DES PROTEINES, ET LEUR PROCEDE
DE PREPARATION.

La présente invention a pour objet de nouveaux complexes du ruthénium, utilisables en particulier pour déterminer la topologie des protéines.

Ces complexes du ruthénium peuvent aussi trouver d'autres utilisations, par exemple comme agents anticancéreux, comme réactifs en vue d'étudier le transfert de fluorescence sur des protéines et comme agents de stabilisation des protéines.

On connait de nombreux complexes du ruthénium (II) et (III), portant des ligands variés, comme des groupes carbonyle, phosphine, alkylamine et/ou amine hétérocyclique.

Jusqu'à présent ces complexes ont été synthétisés en vue d'utilisations telles que la catalyse, les études cinétiques et mécanistiques des réactions de substitution de ligands et les études photochimiques, en particulier pour le stockage chimique de l'énergie lumineuse.

Plus récemment, les complexes du ruthénium ont trouvé de nouvelles applications, en particulier dans le domaine des macromolécules biologiques.

Ainsi, Clarke et al, dans Inorganica
Chimica Acta, vol. 124, 1986, p. 13-28, ont décrit des complexes du ruthénium de formule! < H2O) (NH3)5 Ru1112+ comme agents anticancéreux et comme inhibiteurs de la synthèse d'ADN. Ils ont montré que ces complexes avaient une affinité pour les résidus guanine.

Bannwarth et al dans Helvetica Chimica
Acta, vol. 71, 1988, p. 2085-2099, ont décrit des complexes du Ru(II) comme marqueurs fluorescents utilisables dans des sondes biologiques.

Plus récemment, Casimiro et al dans J.

Phys. Chem., vol. 97, 1993, p. 13073-13077, ont montré que le complexe neutre Ru(bipy)2 C03 réagissait de manière spécifique avec les histidines présentes à la surface de protéines telles que les cytochromes c.

Muheim et al dans J. Am. Chem. Soc., vol.

115, 1993, p. 5312-5313, ont montré que l'on pouvait utiliser le complexe du ruthénium RuII(bpy)2CO3 pour lier deux histidines sur des brins opposés d'un feuillet ss du cytochrome c afin de stabiliser cette protéine.

Selon la présente invention, on utilise cette propriété d'affinité pour l'histidine de certains complexes du ruthénium, mais on les modifie de plus en termes de structures pour les rendre bifonctionnels, en vue de déterminer la topologie de protéines. Ainsi, l'invention a pour objet des complexes du ruthénium bifonctionnels possédant, d'une part, la propriété de reconnaltre spécifiquement une séquence d'aminoacides présente b la surface d'une des sous-unites composant la protéine étudiée et, d'autre part, la propriété de présenter une interaction avec une deuxième sous-unite de la protéine considérée, gracie à la présence d'un groupe fonctionnel porté par l'un des ligands du complexe.

En effet, la détermination de la topologie de protéines à l'aide de complexes doit utiliser des relations de proximité / contact entre les différentes sous-unités protéiques constituant une protéine donnée.

Aussi, la présente invention a pour objet de nouveaux complexes de ruthénium bifonctionnels possédant ces deux propriétés.

Selon l'invention, le complexe bifonctionnel du ruthénium (II) ou (ICI) porteur de plusieurs ligands, comprend
- un groupement capable de reconnaltre une séquence peptidique incorporant au moins une histidine, ledit groupement étant formé par l'atome central de ruthénium du complexe lié au ligand CO3 ou à deux ligands identiques ou différents, choisis parmi Cl, Br,
I et H2O ; et
- au moins un groupe fonctionnel ayant une réactivité intrinsèque vis-a-vis d'autres acides aminés éventuellement modifiés, ce groupe fonctionnel étant porté par au moins l'un des autres ligands du complexe.

Selon un mode de réalisaiton de l'invention, le complexe de ruthénium répond à la formule

dans laquelle
a) X1 et X2 qui peuvent être identiques ou différents, représentent Br, I, C1 ou H2O, ou X1 et X2 forment ensemble CO3 ;
b) Y est une simple liaison ou un groupe bivalent choisi parmi -C (O) O-, -CONH-, -O-, -S-, -CH2O-, -CH=CH-,-CH2-CH=CH-, -CH2S- et -'C- ;;
d) R1 est un groupe monovalent choisi parmi les groupes photosensibles, les groupes fluorescents, les groupes luminescents, les groupes complexants, les enzymes, l'avidine, la biotine, les chromophores fluorescents, les chromophores absorbant la lumière, les groupes marqués par un élément radioactif, les anticorps et les fragments d'anticorps, et
e) m est tel que 1 S m s 5 ; et
f) R2 représente ~(CH2)n- avec 0 S n 5 2 ou
R2 est un cycle benzénique condensé avec les deux cycles pyridines pour former le cycle orthophénanthroline.

Dans ces complexes de ruthénium le groupement chimique RuX1X2 confère au complexe la propriété de réactivité/reconnaissance spécifique de peptides donnés incorporant des histidines, et la présence des ligands bipyridine ou phénanthroline fonctionnalisés avec le groupe R1 confère au complexe la propriété de pouvoir interagir avec la chalne peptidique d'une deuxième sous-unité d'une protéine considérée.

Cette interaction peut etre de différents types.

Ainsi, lorsque R1 est un groupe photosensible ou photoactivable, l'irradiation de R1 permettra la formation d'une liaison covalente stable avec la channe peptidique d'une deuxième sous-unité de la protéine considérée.

Lorsque R1 est un groupe fluorescent, un groupe luminescent ou un chromophore, l'interaction pourra etre obtenue après une modification appropriée de la deuxième sous-unité protéique, par transfert de fluorescence.

Lorsque R1 est une protéine, par exemple une enzyme, un anticorps ou un fragment d'anticorps, l'interaction sera obtenue après modification éventuelle de la sous-unité protéique par des réactions du type enzyme-substrat d'enzyme, et antigène-anticorps.

Ainsi, les complexes bifonctionnels de l'invention sont appropriés à la détermination de la topologie des protéines. Toutefois, ils présentent également des propriétés intéressantes pour une utilisation comme agents anticancéreux, comme agents pour stabiliser la structure de protéines, par exemple par établissement d'une liaison entre groupes histidines, ou comme réactifs permettant d'étudier des transferts de fluorescence sur des protéines, dans le cas où le groupe fonctionnel est un groupe fluorescent.

Dans le complexe de ruthénium de l'invention, R1 peut aussi représenter un groupe marqué par un élément radioactif tel que l'iode, le tritium, le carbone 14, l'indium.

Dans ce cas, l'élément radioactif peut être introduit juste au moment de l'utilisation.

De préférence, selon l'invention, on utilise pour R1 un groupe photosensible tel que les groupes benzophénone, bromobenzophénone et azoture d'aryle, car ces groupes peuvent etre activés par irradiation å une longueur d'onde supérieure a 280-300 nanomètres, qui ne dénature pas les protéines.

Ainsi, R1 répond de préférence à la formule (II)

dans laquelle R3 représente H, 3H ou Br.

Dans les complexes de l'invention, Y et Z peuvent être de divers types. On obtient en particulier des résultats satisfaisants avec les complexes dans lesquels Y représente -C(O) z et Z représente -OC(O)-.

De préférence, dans ces complexes, les bipyridines sont des bipyridines sans channe hydrocarbonée intermédiaire, c'est-à-dire que R2 représente -(CH2)n- avec n égal à 0.

Les complexes de ruthénium de l'invention peuvent étre préparés par des procédés classiques à partir des dérivés appropriés de bipyridine ou de phénanthroline.

Ainsi, on peut préparer les complexes de ruthénium de formule (I) dans laquelle Y, Z, R1, R2 et m ont les significations données ci-desus, et X1 et X2 représentent Cl, par réaction d'un dérivé de bipyridine ou de phénanthroline de formule

dans laquelle R11 R2, Z, Y, et m sont tels que définis ci-dessus, avec un sel de ruthénium de formule RuCl3, pH2O dans laquelle p est un nombre entier allant de 1 a 3.

Pour effectuer cette réaction, on peut utiliser la technique décrite par Sullivan et al dans
Inorganic Chemistry, vol. 17, n 12, 1978, p. 3335, qui consiste à chauffer au reflux le sel de ruthénium, par exemple RuC13, 3H2O avec la bipyridine et Licol dans un solvant organique tel que le diméthylformamide.

Lorsqu'on veut préparer les complexes du ruthénium de formule (I) dans laquelle X1 et X2 forment CO3, on peut opérer de la façon suivante
a) préparer tout d'abord le complexe de ruthénium de formule (I) dans lequel X1 et X2 représentent C1 par le procédé décrit ci-dessus, puis
b) mettre en contact le complexe de ruthénium ainsi obtenu avec Na2CO3 pour échanger les atomes de C1 du complexe par CO3.

Cette mise en contact peut etre effectuée notamment en utilisant la technique décrite par Johson et al dans Inorganic Chemistry, vol. 17, n 8, 1978, p.

2212.

Lorsque l'on veut préparer un complexe de ruthénium de formule (I) dans laquelle au moins un des Xl représente Br, I ou H2O, on peut opérer de la façon suivante : préparer tout d'abord un complexe du ruthénium de formule (I) dans laquelle X1 et X2 représentent C1, par le procédé décrit ci-dessus, puis soumettre ce complexe à une réaction d'échange en une ou plusieurs étapes afin de remplacer au moins l'un des C1 par Br, I ou H2O.

Des réactions d'échange de ce type sont decrites en particulier dans Inorganic Chemistry, vol.

17, n 12, 1978, p. 3336.

Les bipyridines ou phénanthrolines de formule (III) utilisées comme produit de départ dans ces procédés peuvent etre préparées par des techniques classiques à partir des bipyridines ou phenanthrolines méthvlées correspondantes de formule

dans laquelle R2 est tel que défini cidessus.

Ainsi, dans le cas où Y est une simple liaison, on fait réagir le dérivé diméthylé avec du lithium pour transformer les groupes méthyles en groupes CH2Li que l'on fait réagir ensuite avec un dérivé halogéné de formule X-(CHZ)m-1-OP où X représente un atome d'halogène tel que Br ou I, et
P un groupement protecteur d'alcool, pour former, après déprotection de l'alcool, le dérivé de formule

Par réaction ultérieure des groupes OH avec un composé de formule R1ZH, on obtient le dérivé de bipyridine ou de phénanthroline souhaité.

Dans le cas où Y représente -C(O)O- on peut oxyder le dérivé diméthylé de formule (IV) au moyen d'oxyde de chrome pour remplacer les deux CH3 par COOH.

Par réaction de ces groupes COOH avec un dialcool approprie dont l'une des fonctions est convenablement protégée puis déprotégée, on peut former le bras -C(O)O-(CH2)m-OH.

La réaction ultérieure de ce groupe OH avec un composé de formule R1ZH conduira au dérivé de bipyridine ou de phénanthroline souhaité.

Dans le cas où Y représente -CONH-, on peut oxyder le dérivé diméthylé de formule (IV) comme précédemment pour remplacer les deux CH3 par COOH, puis faire réagir les groupes CH avec un amino alcool dont la fonction alcool est protégée puis déprotégée pour obtenir le bras -CO-NH-(CH2)s-OH.

La réaction de OH avec R1ZH conduira comme précédemment au dérivé souhaité.

Dans le cas où Y représente -O-, on peut partir du dinitro-N,N'-dioxyde de formule

que lton fait réagir avec l'alcoolate de sodium de formule NaO(CH2)mR4 où R4 est un atome d'halogène ou un groupe hydroxyle protégé, pour obtenir le composé de formule

qui peut etre réduit ensuite, par exemple par PC13, pour donner le dérivé de formule

Par réaction avec R1ZH, après déprotection du groupe OH lorsque R4 est un groupe hydroxyle protégé, ce dérivé conduira au dérivé de bipyridine ou de phénanthroline voulu.

Le meme procédé peut être utilisé dans le cas où Y représente S en utilisant le thiolate de Na au lieu de l'alcoolate.

Dans le cas où Y représente -CH2O-, on peut partir du diacide de formule

que l'on réduit par l'hydrure double de lithium et d'aluminium, pour former le diol correspondant de formule

Par réaction de ce diol avec un halogénure approprié puis avec un composé de formule R1ZH, on obtiendra comme précédemment le dérivé de bipyridine ou de phénanthroline souhaité.

Dans le cas où Y représente -CH2S- on peut partir de la 4,4'-diméthyl-2,2'-bipyridine qui, bromée par voie radicalaire, est mise en réaction avec le thiolate correspondant.

Dans le cas où Y représente -HC = CH-, on peut partir du diacide de formule (IX) que l'on réduit en dialdéhyde de formule

En effectuant une réaction de Wittig entre ce dialdéhyde et Ph3P=CH-R, on obtient le dérivé de formule

Dans le cas où Y représente -CH2-CH=CH-, on peut partir du dérivé diméthylé (IV) que 1'on transforme en dérivé CH2Li. Ce composé peut alors réagir sur un composé de type formule

pour donner le composé de

Dans le cas où Y représente - C t C-, on part de la 4,4' dibrométhyl-bipyridine que l'on condense avec l'alcynure lithium approprié.

Les bipyridines de départ de formule (IV) sont des produits du commerce ou peuvent être préparées par couplage avec du palladium ou du cuivre, d'une bromopyridine de formule

avec une bromopyridine de formule

avec n=l ou 2
D'autres caractéristiques et avantages de l'invention apparaltront mieux a la lecture des exemples suivants, donnés bien entendu à titre illustratif et non limitatif, en référence aux figures annexées.

Les propriétés fonctionnelles en particulier de reconnaissance des complexes du ruthénium du type de ceux décrits dans la présente invention sont démontrées par la complexation des dérivés bifonctionnels carbonatés avec un peptide approprié. Cette complexation met en évidence l'affinité du complexe 11 pour le résidu histidine incorporé dans une séquence peptidique donnée.

La figure 1 est un schéma correspondant à la synthèse des complexes décrits dans les exemples.

La figure 2 illustre la formule des complexes obtenus.

Dans les exemples qui suivent, les composés ont été identifiés par spectrométrie, chromatographie, microanalyse et détermination des points de fusion, dans les conditions suivantes.

Les spectres RMN 1H et 13C ont été obtenus sur un spectromètre à onde pulsée BRUCKER AC 300, opérant à 300 MHz pour la RMN du proton et 75,47 MHz pour le carbone, et équipé d'un calculateur
ASPECT 3000. Les valeurs des déplacements chimiques sont exprimées en parties par million (ppm) et les constantes de couplage en Hertz (Hz). La référence utilisée est le tétraméthylsilane (TMS, 0,00 ppm). Dans la description des spectres, les multiplicités des signaux sont indiquées à l'aide des abréviations suivantes s, d, t, q, m, M signifiant respectivement singulet, doublet, triplet, quadruplet, multiplet et massif.

Les spectres infra-rouge IR ont été réalisés sur un appareil PERKIN ELMER System 2000 FT
I.R., le traitement des spectres est effectué avec le programme IR Data Manager sur un ordinateur DIGITAL
DECpc 450D2LP (domaine 4000-450 cm~l, les nombres d'onde des bandes d'absorption sont exprimés en cm-i).

Les spectres ultra-violet UV ont été effectués sur un spectrophotomètre XONTRON modèle
UVIKON 860 avec système d'acquisition Victor VPC IIc.

Les points de fusion ont été obtenus sur un appareil Boche 535.

Les spectres de masse basse résolution ont été obtenus sur un appareil FINNIGAN-MAT 4600 quadruple couplé et piloté par un système informatique
INCOS, tandis que les spectres haute résolution ont été réalisés sur un spectromètre VARIAN MAT 311. Les spectres de masse en F.A.B. sont effectués sur un spectromètre NERMAG R3010.

Les chromatographies sur couche mince CCM sont réalisées sur des plaques de silice MERCK Si 60
F254 sur support verre ou plastique. Les révélations sont effectuées soit par illumination ultra-violette
(254 nm), soit à l'iode bisublimé, soit par pulvérisation de l'un des révélateurs suivants : la vanilline, le panisaldéhyde, la ninhydrine, le permanganate de potassium.

Exemple 1 : Préparation du cis-Dichloro-bis (4,4'-bis[4-
(4-benzoylbenzoyloxy) butoxycarbonyl] -2,2'
bipyridine) ruthénium (II) 9.

a) préparation de la 4,4'-dicarboxy-2,2'-bipyridine
2.

La 4.4'-diméthyl-2,2' -bipyridine
(64,0 mmol ; 12,0 g) est dissoute dans 100 ml d'acide sulfurique concentré. La solution est refroidie à OOC et l'oxyde de chrome (39,0 g ; 6 éq.) est ajouté par petites portions durant 1 heure. Le mélange bleu-vert est chauffé à 75 C pendant 4 heures, puis agite une nuit a température ambiante. La solution est versee dans un mélange eau-glace (100 ml), puis filtrée sur verre fritté. Après un lavage a l'eau (SxS0 ml), le précipité jaune clair est dissous dans 50 ml d'une solution de KOH 1N jusqu'à ce que la solution devienne basique (formation du dicarboxylate de potassium).

Après filtration sur célite, le filtrat est acidifié par une solution d'HCl 1N (50 mi). Le diacide précipité est lavé à l'eau (3x50 ml) : obtient ainsi 14,5 g de 2
(Rdt : 92,7%).

CCM : Rf 0.08 (CH2Cl2-EtOAc : 9-1) ; Rf 0,75 (CHCl3
MeOH-AcOH : 14-6-2) ;
RMN 1H (300 MHz, CF3COOD) : # 9,17 (s, 2 H, H3, H3), 9, 07 (d, 2 H, J5-6=J5'-6'= 5,3 Hz, H6, H62), 8,49 (d, 2 H, J5-6=J5i-6'= 5,3 Hz, Hs, H5')
RMN 13C (75,47 MHz, CF3COOD+D2O) : 145,96 (2C, C7,
C7'), 125,89 (2C, C2, C2'), 121,65 (2C, C6, C6'), 119,25
(2C, C4, C4'), 111, 72 (2C, C5, C5,), 107,92 (2C, C3, C3') ;
IR (KBr) : 3114 #(C-H) arom, 2457 u(O-H) acide, 1722 #
(C=O) acide arom, 1604-1563 #(C=N) et #(C=C) bipy, 766 #(C-H) arom ;
W (NaOH 0,1 N, 0,0171g/l) : 216 (19736), 293 (11782)
SM (70eV/DCI/NH3/ intensité %) : m/z : 245 (100 ;
[M+1]+), 201 (25,76 ; [M-CO2]+)
SMHR : masse théorique : 244,04840 masse trouvée 244,0474 ;
Microanalyse pour C12H8N2O4.1/2H2O : Calc. : C, 56,92 ;
H, 3,58 ; N, 11,04 ; Exp. : C, 57,26 ; H, 3,77 ; N, 11,20.

b) préparation du 4-t-butyldiméthylsilyloxybutanol
3 .

NaH à 60% en dispersion dans l'huile
(44,8 mmol ; 1,792 g) est mis en suspension dans du THF anhydre (88 ml). Le 1,4-butanediol (44,8 mmol ; 4,0 ml) est ajouté goutte à goutte, puis le milieu est agité pendant 45 minutes à température ambiante. Un précipité blanc se forme alors. Après addition du chlorure de tbutyldiméthylsilyle (44,8 mmol ; 6,752 g), le mélange est agité vivement pendant 45 minutes. La solution est versée dans 700 ml d'éther, lavée par 240 ml de K2CO3 à 108 et 240 ml de NaCl. La phase organique décantée est séchée sur Na2SO4, filtrée puis concentrée sous vide.

L'huile résultante est purifiée par chromatographie sur silice (éluant : EtOAc/Heptane 40/60). On obtient 7,8 g
(38,2 mmol) de 3 (Rdt : 85%).

CCM : Rf 0,48 (EtOAc/Heptane : 40/60) ;
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : b 0,05 (s, 6 H, 2 CH3), 0,9
(s, 9 H, 3 CH3), 1,60-1,70 (m, 4 H, CH2-CH2), 2,60 (s, 1
H, OH), 3,55-3,70 (m, 4 H, 2 CH2O)
RMN 13C (75,47 MHz, CDCl3) : 0,00 (2C, Me2Si), 18,00
(1C, Si-C(CH3)3), 25,80 (3C, Si-C(CH3)3), 29,40 (1C,
CH2-CH2OH), 29,80 (1C, CH2-CH2OSi), 62,50 (1C, CH2OH), 63,30 (1C, CH2OSi) ;
IR (KBr) : 3350 #(OH), 2931-2859 #(CH2) 1472 #(CH2), 1390 6(t-Bu-Si), 1256 (CH3-Si), 1102 #(Si-O-C), 837 6
(Si-O) ;
SM (70eV/DCI/NH3/inensité %) : m/z : 222 (77,22 ;
[M+18]+), 205 (100 ; [M+1]+) ;
Microanalyse pour C10H24O2Si : Calc. : C, 58,76 ; H, 11,83 ; Exp. : C, 58,52 ; H, 11,68.

c) preparation de la 4,4'-bis-[4-(t-
butyldiméthylsilyloxy)butoxycarbonyl]-2,2'
bipyridine 4.

2 (8,19 mmol ; 2,0 g), la DCC (17,9 mmol ; 3,7 g) et 3 (18,8 mmol ; 3,84 g) sont dissous dans le mélange CH2Cl2/THF (150 ml/20 ml). Après 10 min d'agitation, la DMAP (9,0 mmol ; 1,1 g) est ajoutée et le milieu agité pendant 24 heures à température ambiante. Le mélange reactionnel est filtre afin d'éliminer la dicyclohexylurée formée. Le filtrat est lavé successivement par 2x50 ml d'HCl 1N, 2x50 ml d'une solution de NaHC03 saturée et 2x50 ml d'une solution de NaCl saturée. La phase organique est séchée (Na2SO4), filtrée et évaporée sous vide. 4 est chromatographié sur silice 60H (éluant : Heptane-EtOAc 60-40). On obtient 3,73 g (6,0 mmol) de 4 sous forme d'un solide blanc (Rdt : 74%).

CCM : Rf 0,8 (EtOAc/Heptane : 40/60) ; Pf : 54,5-55 C ;
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : # 8,94 (s, 2 H, H3, H3'), 8,85 (d, 2 H, J5-6=J5'-6'= 5 Hz, H6, H6'), 7.89 (d, 2 H, J56=J5'-6'= 5 Hz, H5, H5, H5'), 4,42 (t, 4 H, J8-9=J8'-9'= 6,2
Hz, 2 H8, 2 H8'), 3,68 (t, 4 H, J10-11=J10'-11'= 6,0 Hz, 2
H11, 2 H11'), 1,88 (m, 4 H, 2 Hg, 2 H9'), 1,67 (m, 4 H, 2 H10, 2 H10'), 0,89 (s, 18 H, 9 H13, 9 H13'), 0,05 (s, 12 H, 6 Hl2 6 H12') ;
RMN 13C (75,47 MHz, CDCl3) :: 164,98 (2C, C7, (C7'), 156,31 (2C, C2, C2'), 149,80 (2C, C6, C6 ), 138,70 (2C,
C4, C4e), 122,93 (2C, Cs, C5'), 120,31 (2C, C3, C3'), 65,63 (2C, C8, C8'), 62,31 (2C, C11, C11'), 29,05 (2C,
C10, C10'), 25,69 (6C, 3C13, 3C13'), 25,12 (2C, C9, C9'), 18,05 (2C, C14, Ci4'), 0,00 (4C, 2C12, 2C12') ;
IR (KBr) : 2955 #as (C-H) alkyle, 2830 ')s #s(C-H) alkyle, 1730 u(C=O) ester arom, 1580-1558 #(C=N) et #(C=C) bipy, 1463 #(C-H) de CH2 et CH3, 1380-1362 6(C-H) des tBu, 1256 #(CH3-Si), 1110 #(Si-O-C), 1100 6(C-O) ester, 836 #(Si-O), 776 #(C-H) arom ;
UV (MeOH, 0,0672 mg/ml) : 207 (42250), 240 (11879), 298
(12445) ;
SM (70eV/DCI/NH3/intensité %) : m/z : 617 (100 ;
[M]+)
HRMS [M-tBu]+: masse théorique : 559,26594 masse trouvée : 559,2638 ;
Microanalyse pour C32H52N2O6Si2 : Calc. : C, 62,30 ; H, 8,50 ; N, 4,54 ; Exp. : C, 62,20 ; H, 8,46 ; N, 4,54.

préparation de la 4,4'-bis-[4
(hydroxy)butoxycarbonyl]-2,2'-bipyridine 5.

4 (3,48 mmol ; 2,15 g) dissous dans 30 ml de THF anhydre, est additionné de 3 ml d'acide acétique, puis de 12 ml (12,0 mmol ; 3,4 éq.) d'une solution molaire de fluorure de tétrabutylammonium dans le THF anhydre. Le milieu est agité à 200C pendant 24h, puis une solution saturée de NaHCO3 est ajoutée afin de neutraliser le milieu. Après extraction au CH2C12 (3x50 mi), séchage (Na2SO4), et concentration sous vide, S est purifie par chromatographie sur silice 60H (éluant : EtOAc-MeOH : 80-20). On obtient 1,17 g (3,01 mmol) de 5 sous forme d'un solide blanc (Rdt : 86,5%).

CCM : Rf 0,7 (EtOAc/MeOH : 80/20) ;
Pf : 91,0-91,50C ;
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : d 8,90 (s, 2 H, H3, H3'), 8,83
(d, 2 H, J5-6=J5'6'= 4,94 Hz, H6, H6'), 7,87 (d, 2 H,
J6-5=J6'-5'= 4,94 Hz, H5, H5'), 4,41 (t, 4 H, J8-9=J8'-9'= 6,7 Hz, 2 Hs, 2 H8'), 3,72 (t, 4 H, J10-11=J10'-11'= 5,8
Hz, 2 H11, 2 H11'), 1,90 (m, 4 H, 2 H9, 2 H9'), 1,72 (m, 4 H, 2 H10, 2 H10'), 1,39 (t, 2H, J11-12=J11'-12'= = 5,06
Hz, H12, H12')
RMN 13C (75,47 MHz, CDCl3) : 164,97 (2C, C7, C7'), 156,33 (2C, C2, C2'), 149,88 (2C, C6, C6'), 138,63 (2C,
C4, C4'), 122,97 (2C, C5, C5'), 120,31 (2C, C3, C3'), 65,45 (2C, C8, Ce'), 62,08 (2C, C11, C11'), 28,69 (2C,
C10, C10'), 24,95 (2C, C9, C9') ;
IR (KBr) : 3419 u(O-H) alcool, 2970 #as(C-H) alkyle, 2890 #s(C-H) alkyle, 1713 u(C=O) ester arom, 1593-1558 #(C=H) et #(C=C) bipy, 1474 #(C-H) de CH2, 1131 #(C-O-C) ester, 1059 #(C-O) alcool, 763 6(C-H) arom, 725 #(C-H) alkyle ;
W (CH2Cl2, 0,0526 mg/ml) : 228 (10692), 241 (11496), 299 (12442) ;
SM (70eV/DCI/NH3/intensité %) : m/z : 389 (100 [M+1]+)
Microanalyse pour C20H24N2O6 : Calc. : C, 61,85 ; H, 6,23 ; N, 7,21 ; Exp. : C, 61,85 ; H, 6,19 ; N, 7,06.

e) préparation de la 4,4'-bis[4-(4
benzoylbenzoyloxy)butoxycarbonyl]-2,2'
bipyridine 7a
Le diol 5 (5,15 mmol ; 2,0 g), la DCC (9,8 mmol 1 2,02 g) et l'acide 4-benzoylbenzoïque 6a (8,95 mmol ; 2,0 g) sont mis en solution dans 150 ml de
CH2C12. Après 10 min d'agitation à 20 C, la DMAP
(0,89 mmol ; 0,11 g) est ajoutée et le milieu agité pendant 24 heures à température ambiante. La solution trouble est chauffée légèrement (400C) afin de solubiliser 7a. Seule la dicyclohexylurée (DCU) formée reste insoluble. Le mélange réactionnel est ensuite filtré. Le filtrat est lavé par 2x50 ml d'HCl 1N, 2x50 ml d'une solution de NaHCO3 saturée et 2x50 ml d'une solution de NaCl saturée.La phase organique est ensuite séchée (Na2SO4), filtrée et concentrée sous vide. 7a est purifié par chromatographie sur silice 60H
(éluant : Heptane-EtOAc 60-40). On obtient 2,9 g (3,6 mmol) de 7a sous forme d'un solide blanc (Rdt : 708).

A une solution d'acide 4-benzoylbenzoïque 6a (240 mg , 1,06 mmol) et de 4,4'-bis-[4-
(hydroxy)butoxycarbonyl]-2,2'-bipyridine 5 (200 mg ; 0,52 mmol) dans 10 ml de THF anhydre, on ajoute lentement une solution commerciale de DEAD (177 l ; 1,13 mmol) puis une solution de triphénylphosphine (300 mg ; 1,14 mmol) dans 5 ml de THF anhydre. La solution se décolore rapidement. Le milieu réactionnel est alors évapore et directement purifié par chromatographie sur silice 60H (éluant : THF-Heptane 50-50). On obtient 375 mg (0,47 mmol) de solide blanc (Rdt : 44%).

CCM : Rf 0,5 (EtOAc/Heptane : 50/50 ou CHCl3/Et2O 1/1) ;
Pf : 118-119 C ;
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : d 8,94 (s, 2 H, H3, H3'), 8,86
(d, 2 H, J5-6=J5'-6'= 4,94 Hz, H6, H6'), 8,14 (d, 2 H,
J14-15=J14'-15'= 8,2 Hz, H14, H14'), 7,89 (d, 2 H, J56=J5'-6'= 4,94 HZ, H5, H5'), 7.83 (d, 4 h, J=14-15=J14'-15'= 8,2 Hz, H15, H15'), 7,81 (d, 4 H, J19-20=J19'-20'= 7,4 Hz,
H19, H19'), 7.61 (t, 2 H, J20-21=J20'-21'= 7,4 Hz, H21,
H21'), 7,49 (t, 4 H, J19-20=J19'-20'=J20-21=J20'-21'= 7,4
Hz, H20, H20'), 4,44 (m, 8 H, 2 H8, 2 H8', 2 H11, 2 H11'), 2,03-1,98 (m, 8 H, 2 Hg, 2 H9' 2 Hic, 2 H10') ;
RMN 13C (75,47 MHZ, CDCl3) :: # 195,64 (2C, C17, C17'), 165,46 et 164,86 (4C, C7, C7', C12, C12'), 156,29 (2C,
C2, C2'), 149,86 (2C, C6, C6'), 141,11 (2C, C16, C16'), 138,45 (2C, C4, C4'), 136,64 (2C, Cie, C18'), 133,03
(2C, C13, C13'), 132,68 (2C, C21, C21'), 129,85 et 129,49 et 129,21 (12C, 2C14, 2C14', 2C15, 2C15', 2C19, 2C19'), 128,17 (4C, 2C20, 2C20'), 122,93 (2C, C5, C5'), 120,27
(2C, C3, C3'), 65,03 et 64,51 (4C, C8, C8' C11, C11'), 25,18 et 24,66 (4C, C9, Cgw, Cîo, Cio') ;
IR (KBr) : 2928 #as(C-H) alkyle, 2852 #s(C-H) alkyle, 1727 #(C=O) ester arom, 1646 u(C=O) cétone, 1627-1578 u
(C=N) et #(C=C) bipy, 1448 #(C-H) de CH2, 1285 #(C-O) ester, 1127 #(C-O-C) ester, 712 #(C-H) alkyle, 766 6(C
H) arom ;
W (100 l d'une solution 0,4176 mg/ml dans CH2Cl2 dans 2,5 ml de MeOH) : 252 (25895) ;
SM (FAB/thioglycérol) : m/z : 805 ([M+1]+), 595 ((M- 2PhCO]+), 525 ([M-(CH2)4Obzp)]+), 507 ((M {O(CH2)4Obzp}]+), 375 ([M-(COO(CH2)4Obzp)-PhCO}]+), 242
([M-2{(CH2)4Obzp}]+), 209 ([M-2[CO2(CH2)4Obzp}]+) ;
HRMS : : masse théorique : 804,26827 masse trouvée 804,2705.

f) Préparation du cis-Dichloro-bis
(4,4'-bis[4-(4-benzoylbenzoyloxy)butoxycarbonyl]-2,2'-bipyridine)ruthénium (II) 9.

RuCl3@nH2O (65,0 mg ; 0,25 mmol) est dissous dans 8 ml de DMF anhydre en présence de 7a (400 mg ; 0,5 mmol) et de LiCl (73,6 mg ; 1,74 mmol). Le milieu est porte à reflux du DMF pendant 8 heures sous atmosphère d'argon. Après refroidissement à 20 C, le milieu homogène violet est additionne de 30 ml d'acétone. La solution est alors mise au congélateur
(-200C) pendant une nuit. Après filtrationdes cristaux noirs obtenus, les solides sont lavés à l'éther éthylique (3x25 ml). On obtient 161 mg du complexe 9 sous la forme d'un solide noir pulvérulent (Rdt : 36,4 %).

IR (KBr):3385 #(O-H)H2O, 1722 u(C=O) ester arom., 1650-1570 u(C=O) cetone et #(C=N) bipy, 1548 #(C=C) bipy, 1264 #(C-O) ester, 1128 #(C-O-C) ester, 787 #(C-H) arom ; UV (MeOH, 0,05915 mg/ml) :389 (12985), 309 (55323), 243 (62087), 210 (85279) , SM
(FAB/thioglycérol):m/z :1500 ([M-R]+), 1465 ([M-R-Cl]+), 1429 ([M-R-2C1]+), 1222 ([M-2R]+), 1185 ([M-2R-Cl]+), 1149([M-R-2C1]+), avec R=(CH2)4O2CBzp.

EXEMPLE 2 : Préparation du cis-Dichloro bis(4,4'-bis[4-(4-(4-bromobenzoyl)benzoyloxy)butoxy- carbonyl]-2,2'-bipyridine)ruthenium(II) 10.

On suit le meme mode operatoire que dans l'exemple 1 pour préparer le compos S et l'on fait réagir celui-ci avec l'acide 4-(4-bromobenzoyl)benzoïque 6b qui est préparé de la façon suivante
a) préparation de l'acide 4-(4-bromobenzoyl)benzoïque
6b:
Pour cette preparation, on suit le schema reactionnel suivant

L'acide 4-bromobenzotque (2,5 g ; 12,31 mmol) est dissous dans 35 ml de THF anhydre, puis refroidi d -100 C. On ajoute lentement 19 ml (24,89 mmol ; 2,02 éq.) de n-butyllithium (solution 1,31M dans l'hexane anhydre). La temperature du milieu doit rester inférieure à -95 C.La solution est ensuite agitée pendant 2h à -780C. Le 4-bromobenzoate d'éthyle (2,82 g ; 12,3 mmol) dans 15 ml de THF est additionné en conservant la température inférieure à -700C. Après agitation pendant 3h à -200C, le mélange réactionnel est versé dans 50 ml d'une solution d'HCl 5%. Après extraction à l'éther (3x50 ml), la phase éthérée est lavée par 50 ml d'une solution de NaOH 1M. 6b reprécipite de nouveau lors d'une addition lente d'une solution à 10% d'HCl (30 ml) . Après filtration et séchage sous vide, on obtient 1,95 g (6,4 mmol) de 6b sous la forme d'un solide blanc (Rdt : 52%).

CCM : Rf 0,4 (Heptane/EtOAc : 1/2) ;
Pf : 269-270 C ;
RMN 1H (300 MHz, DMSO) : 8,09 (6, 2 H, J7-8=8,2 Hz, 2
Hs), 7,82 (d, 2 H, J2-3=7,6 Hz, 2 H3), 7,80 (d, 2 H, J23=7,6 Hz, 2 H2), 7,70 (d, 2 H, 2 H7) ;
RMN 13C (75,47 MHz, DMSO) : # 195,93 (1C, Cs), 168,06
(1C, C10), 141,50 (1C, C6), 137,00 (1C, C4), 135,829
(1C, Cg), 133,22-133,12 (4C, 2C2, 2C3), 131,05-130,85
(4C, 2C7, 2Ce), 128,59 (1C, C1) ;
IR (KBr) : 3002 #(C-H), 1690 u(C=O) acide sous forme de dimère, 1647 #(C=O) cétone, 1548 #(C=C) arom, 732 #(C-
H) arom ;
W (MeOH + 1 goutte de THF, 0,0074 mg/ml) : 263 (17469) ;
SM (70eV/EI/ intensité %) : m/z : 304/306 (68/60 ; [M]+), 259/261 (8,0/7,2 ; [M-COOH]+), 225 (12,08, [M-
Br]+), 183/185 (91,8/86,6 ; [M-PhCOOH]+), 155/157 (30,3/28,3 ; [M-COPhCOOH]+), 149 (100, [M-PhBr]+).

b) préparation de la 4,4'-bis[4-(4-
bromobenzoyl)benzoyloxy)butoxycarbonyl]-2,2'
bipyridine 7b
A une solution de 6b (1,15 g ; 3,77 mmol) et 4 (732 mg; 1,88 mmol) dans 20 ml de THF anhydre, on ajoute lentement le DEAD (660 Rl ; 4,22 mmol) puis la triphénylphosphine (1,10 g ; 4,20 mmol ; 5 ml de THF anhydre). On observe une décoloration immediate de la solution du jaune au blanc accompagnée de la précipitation de 7b. On obtient 1,30 g (1,35 mmol) de 7b sous forme d'un solide blanc (Rdt : 72%). Après filtration, 230 mg supplémentaires sont extraits du filtrat (Rdt global : 84,5%).

CCM : Rf 0,75 (Et2O-CHCl3; 50-50) ;
Pf : 180-180,60C ;
RMN 1H (300 MHz, CDCl3) : d 8,93 (s, 2 H, H3, H3'), 8,84 (d, 2 H, J5-6=J5'-6'= 4,80 Hz, H6, H6'), 8,14 (d, 4 H,
J14-15=J14'-15'= 8,13 Hz, 2H14, 2H14'), 7,88 (d, 2 H, J56=J5'-6'= 4,80 Hz, H5, H5'), 7,79 (d, 4 H, J14-15=J14'-15'= 8,13 Hz, 2Hîs, 2H15'), 7,70-7,60 (M, 8 H, 2H19, 2H19'.

2H20, 2H20'), 4,47 (m, 8H, 2H8, 2H8', 2H11, 2H11'), 2,00 (m, 8H, 2H9, 2H9', 2H10, 2H10') ;
RMN 13C (75,47 MHz, CDCl3) : # 195,59 (2C, C17, C17'),
165,41 et 164,87 (4C, C7, C7', C12, C12'), 156,31 (2C,
C2, C2'), 149,91 (2C, C6, C6'), 140,66 (2C, C16, C16'),
138,49 (2C, C4, C4e), 135,21 (2C, Cie, C18'), 133,26
(2C, C13, C13'), 131,59 et 131,30 (8C, 2C19, 2C19', 2C20, 2C20'), 129,42 et 129,35 (8C, 2C14, 2C14', 2C15, 2C15'), 127,94 (2C, 2C21, 2C21'), 122,97 (2C, C5, C5'), 120,28
(2C, C3, C3'), 65,06 et 64,61 (4C, C8,C8', C11, C11'), 25,26 et 25,207 (4C, Cg, Csl, C10, C10') ;
IR (KBr) : 2968 #as (C-H) alkyle, 1719 #(C=O) ester arom., 1651 #(C=O) cétone, 1584-1540 u(C=N) et #(C=C) bipy, 1286 #(C-O) ester, 1123 #(C-O-C) ester, 760 6(C-H) arom, 733 #(C-H) squelette (CH2)4, 660 #(C-Br) ;
W (100 l d'une solution 0,1007 mg/ml dans CH2Cl2 dans 2,5 ml de MeOH) : 261 (53232) ;
SM (70eV/IC/NH3/ intensité %) : m/z : 960/962/965
(47,45/100/60,64 ; (M=1]+) ;
Microanalyse pour C48H38Br2N2O10 : Calc. : C, 59,89 ; H, 3,98 ; N, 2,91 ; Br, 16,60 ; Exp. : C, 59,96 ; H, 4,29 ; N, 2,86 ; Br, 16,47.

c) Préparation cis-dichloro-bis(4,4'-bis(4-(4-(4
bromobenzoyl)benzoyloxy)butoxycarbonyl]-2,2'
bipyridine)ruthénium (II) 10.

Le mode opératoire nécessaire a la synthese de 10 est identique a celui dans l'exemple l.f. On obtient 963,0 mg du complexe 10 sous forme d'une poudre noire pulvérulente (Rdt : 44 %).

IR (KBr):3417 u(O-H)H20, 1720 #(C=O) ester arom., 1651 #(C=O) cétone, 1585-1540 #(C=N) bipy et v(C=C) bipy, 1272 #(C-O)ester, 1106 #(C-O-C) ester, 758 #(C-H) arom, 733 #(C-H) squelette (CH2)4 ; UV (MeOH, 0,04865 mg/ml):393 (11824), 310 (40003), 205 (93254).

EXEMPLE 3 : Preparation du cis-Carbonato-bis(4,4'-bis(4-(4-benzoylbenzoyloxy)butoxycarbonyl]-2,2'-bipyridine)ruthénium(II) 11.

9 (28,0 mol ; 50,0 mg) est dissous dans 2 ml d'eau dégazée à l'argon. Après addition d'un large excès de Na2CO3 (46,0 mol ; 46,0 l d'une solution 1M), la solution est agitée à reflux pendant 2 heures.

La solution rouge-bordeaux est refroidie à 20 C puis lyophilisée. On obtient 11 sous forme d'une poudre de couleur pourpre (Rdt : 95%).

RMN 1H (300 MHz,D2O): 89,57-8,86 (M, 16H, 2H1, 2H10, 4H18, 4H18', 2H4, 2H7),8,3-8,13 (M,8H, 2H2, 2Hg, 4H19), 8,04 (m,2H,2H25), 7,8-7,4 (M, 20H, 4H19', 4H24' 4H24', 2H25', 4H23, 4H23', 2H25), 3,56 (m, 16H, 4H12, 4H12',4H15, 4H15'), 1,28 (m,16H, 4H13, 4H13w, 4H14, 4H14') ; IR (KBr) : 3430 #(O-H) H20, 1730 u(C=O) ester arom., 1650-1570 u(C=O) cétone et #(C=N)bipy, 1539 u (C=C) bipy, 1265 #(C=O) ester, 1120 #(C-O-C) ester, 787 #(C-H) arom ; W (MeOH, 0,0486 mg/ml):361 (5064), 306
(22152), 247 (20731), 203 (37565).

EXEMPLE 4 : Préparation du
cis-Carbonato-bis(4,4'-bis([4-(4-(4
bromobenzoyl)benzoyloxy)butoxycarbonyl]
2,2'-bipyridine)ruthénium(II) 12.

Le mode opératoire nécessaire à la synthèse de 12 est identique å celui décrit dans l'exemple 3. On obtient 12 sous forme d'une poudre de couleur pourpre
(Rdt : 95%)-
RMN 1H (300 MHz, D2O): #9,35-8,78 (M, 16H, 2H1, 2H10, 4H18, 4H18', 2H4, 2H7), 8,31-8,13 (M,8H, 2H2, 2H9, 4H19), 8,04-7,48 (M, 20H, 4H19', 4H24, 4H24', 4H23, 4H23'), 3,67 (m, 16H, 4H12, 4H12, 4H15, 4H15'), 1,62 (m, 16H, 4H13, 4H13, 4H141 4H14') ; IR (KBr) : 3442 v(O-H) H2O, 1721 v(C=O) ester arom., 1651 v(C=O) cétone1618-1540 v
(C=N) bipy et v(C=C)bipy, 1282 #(C-O) ester, 1105 6
(C-O-C) ester, 786 6(C-H) arom, 735 6(C-H) squelette
(CH2)4, 663 6(C-Br) ;UV (MeOH, 0,05565 mg/ml):369
(10319), 306 (38762), 249 (33359), 203 (56736).

EXEMPLE 5 : Préparation du cis-Carbonato-bis(4,4'-bis[4-(4-(4-3H-benzoyl)benzoyl oxy)butoxycarbonyl]-2,2'-bipyridine)ruthénium(II) 13.

Le complexe 12 (4,8 mmol ; 10 mg) est dissous dans 1 ml de MeOH. Après addition d'un large exces de Pd/C
(20 mg) et de 2,5 ml de TEA (18 mmol ; 4 éq.), la solution est installée sur une pompe de type Toepler. L'ampoule de tritium gaz est cassée et le ballon saturé en 3H. La solution est agitée à température ambiante pendant 8 heures. Après filtration du catalyseur et lavages par 3x10 ml de MeOH, le solvant est évaporé. Le produit est purifié par reprécipitation dans l'EtOH, puis conservé dans du MeOH.

RMN3H (320,135 MHz, D2O) : 6 8,01 (s, 1 3H, 1 3H25), 7,61
(s, 2 3 H, 2 3 H25') ; UV (MeOH): 367, 306, 247, 203 ;
Activité spécifique déterminée par W å 306 nm : A.S.

11 Ci/mmole.

EXEMPLE 6 : Préparation du complexe 14.

Après dissolution complète de il (2,8 pinol ; 5 mg) dans le tampon phosphate (pH 7), 2 mg du peptide
Ala-His-Ala-Ala-Ala-His-Ala (3,1 Cunol ; 1,1 éq.) en solution dans le tampon sont ajoutés. Le milieu est mis sous argon, et laissé ainsi pendant 24 h. Après addition de 6 équivalents de NH4PF6 (16,8 pmol ; 2,7 mg), la solution est agitée penant 2 h, le tampon évaporé et le tout repris au MeOH. On obtient le composé 14 sous forme de poudre rouge avec des rendements compris entre 30 et 50 %.

RMN 1H (300 MHz,D2O); #9, 61-8,78 (M, 16H, 2H1, 2H10, 4H18, 4H18', 2H4, 2H7), 8,35 (s, 1H, Im),8,11 (s, 1H, Im) 7,98-7,48 (M,32H,2H2, 2Hg, 4H191 4H19', 4H241 4H24', 4H231 4H23', 2H25, 2H25'), 7,21(s, 1H, Im), 7,11 (s, 1H, Im), 4,70-4,05 (M, 7H, 7H en a sur les peptides), 3,70 (m, 16H, 4H12, 4H12', 4H15,4H15'), 3,30-3,00 (M, 4H, 2CH2 en des histidines), 1,60 (m, 16H, 4H13, 4H13', 4H14, 4H14w), 1,53-1,35 (M, 15H, 5 Me des alanines); IR (KBr): 3446 et 3378 v(N-H)amide, 3132 v(C-H) arom., 2925v(C-H) alkyle, 2341 v(O-H) acide, 1713-1580v(C=O) amide, cétone et ester arom., v(C=N) et v(C=C) bipy, 1376 #(C-H)CH3, 1262 # (C-O) ester arom,. 1123 #(C-O-C) ester, 996-955 #(C-H), 848 6 (P-F), 830 #(C-H) arom. ; UV (MeOH, 0.1188 mg/ml) : 499 (2229), 370 (5729), 307 (24789), 243 (21624), 203 (50827).

Claims (10)

REVENDICATIONS

1. Complexe bifonctionnel du ruthénium (II) ou (III) porteur de plusieurs ligands, comprenant

- un groupement capable de reconnaître une séquence peptidique incorporant au moins une histidine, ledit groupement étant formé par l'atome central de ruthénium du complexe lié au ligand CO3 ou à deux ligands, identiques ou différents, choisis parmi C1,

Br, I et H2O ; et

- au moins un groupe fonctionnel ayant une réactivité intrinsèque vis-à-vis d'autres acides aminés éventuellement modifiés, ce groupe fonctionnel étant porté par au moins l'un des autres ligands du complexe.

2. Complexe de ruthénium, répondant à la formule

dans laquelle

a) X1 et x2 qui peuvent être identiques ou différents, representent Br, I, C1 ou H2O, ou X1 et X2 forment ensemble CO3

b) Y est une simple liaison ou un groupe bivalent choisi parmi -C(O)O-, -CONH-, -O-, -S-, -CH2O-, -CH=CH-, -CH2S,-CH2-CH=CH et -C=C-

c) Z est une simple liaison ou un groupe bivalent choisi parmi -OC(O)-, -NHCO-, -O-, -S- ; -OCH2-,-SCH2-, -CH=CH- et -C-C-;;

d) R1 est un groupe monovalent choisi parmi les groupes photosensibles, les groupes fluorescents, les groupes luminescents, les groupes complexants, les enzymes, l'avidine, la biotine, les chromophores fluorescents, les chromophores absorbant la lumière, les groupes marqués par un élément radioactif, les anticorps et les fragments d'anticorps ;

e) m est tel que 1 S m 5 5 ; et

f) R2 représente -(CH2)n- avec 0 S n S 2 ou

R2 est un cycle benzénique condensé avec les deux cycles pyridines pour former le cycle orthophénanthroline.

3. Complexe de ruthénium selon la revendication 2, caractérise en ce que R2 représente

(CH2)n avec n egal à 0.

4. Complexe de ruthénium selon 1'une quelconque des revendications 2 et 3, caractérisé en ce que Y représente -C(O)O-.

5. Complexe de ruthénium selon l'une quelconque des revendications 2 a 4, caractérisé en ce que Z represente -OC -OC(O)-.

6. Complexe de ruthénium selon l'une quelconque des revendications 2 à 5, caractérisé en ce que R1 est un groupe photosensible.

7. Complexe de ruthénium selon la revendication 6, caractérisé en ce que R1 répond à la formule

dans laquelle R3 représente H, 3H ou Br.

8. Complexe du ruthénium choisi parmi le cis-dichloro-bis(4,4'-bis[4-(4-benzoyl benzOyloxy)butoxycarbonyl]-2,2'-bipyridine)ruthénium

(II), le cis-dichloro-bis)4,4'-bis [4- (4- (4bromobenzoyl) benzoyloxy)butoxycarbonyl] -2,2'bipyridine) ruthénium (II), le cis-carbonato-bis (4,4' bis[4-(4-benzoylbenzoyloxy)butoxycarbonyl]-2,2'- bipyridine)ruthénium (II), le cis-carbonato-bis (4,4' bis[4-(4(4-bromobenzoyl)benzoyloxy)butoxycarbonyl]- 2,2'-bipyridine)ruthénium (II) et le cis-carbonato-bis(4,4'-bis[4-(4-(4-(3H) benzoyl)benzoyloxy)butoxycarbonyl)-2,2'-bipyridine) ruthénium (II).

9. Procédé de préparation d'un complexe de ruthénium répondant à la formule

dans laquelle R1, R2S, Z, Y et m sont tels que définis ci-dessus, avec un chlorure de ruthénium de formule RuC13, p H2O dans laquelle p est un nombre entier allant de 1 à 3.

B 11991.3 MDT dans laquelle Y, Z, R1, R2 et m ont les significations données dans la revendication 2, et X1 et X2 représentent C1, caractérisé en ce qu'il consiste à faire réagir une bipyridine de formule

10. Procédé de préparation d'un complexe de ruthénium répondant à la formule

dans laquelle Y, Z, R1, R2 et m ont les significations données dans la revendication 2, et X1 et X2 forment ensemble CO3, caractérisé en ce qu'il comprend les étapes suivantes

a) préparer un complexe de ruthénium de formule (I) dans laquelle Y, Z, R1, R2 et m sont tels que définis ci-dessus, et X1 et X2 représentent C1, par mise en oeuvre du procédé de la revendication 9, et

b) mettre en contact le complexe de ruthénium obtenu dans l'étape a) avec du carbonate de sodium pour remplacer les deux C1 par C03.