FI92693C - Menetelmä terapeuttisesti käyttökelpoisten 1,2,5-ditiatsosiinijohdannaisten valmistamiseksi - Google Patents

Description

92693

Menetelmå terapeuttisesti kåyttiikelpoisten 1,2,5-ditiatso-siinijohdannaisten valmistamiseksi Tåmå keksintG koskee kaavan [I] mukaisten yhdis-5 teiden ja niiden suolojen (seuraavassa kåytetåån nimitystå yhdiste) valmistamista r‘ 2 I 3 dl

R -C-CONH-CHCOOR

x° ! , chz-s-s-ch2 jossa R1 ja R2 tarkoittavat itsenåisesti C^g-alkyyliå; 15 R3 tarkoittaa vetyå tai C1.6-alkyyliå;

Terml C^-alkyyli tarkoittaa esimerkiksi metyyliå, etyyliå, propyyliå, isopropyyliå ja heksyyliå.

Kysteiinijohdannaisista on olemassa erilaisia tut-kielmia.

20 Kuitenkin syklisistå disulfidiyhdisteistå, joiden kemiallisessa rakenteessa on aminohapporyhmå, on tehty hyvin harvoja tutkimuksia niiden synteesin osalta ja sovel tuvuudesta lååkkeiksi. Erityisesti sovellutusmahdolli-suus lååkkeiksi on paljastettu ainoastaan US-patentissa 25 4 517 123.

Muutamia tutkimuksia, edellisten lisåksi, on ole massa syklisistå sulfidi-yhdisteistå, joiden kemiallisessa rakenteessa on aminohapporyhmå, mutta yhdisteiden sovel-lutuksista lååkkeiksi ei ole ollut tietoa ja erås selostus 30 1,4-tiatsepiinijohdannaisten kemiallisesta synteesistå julkaistiin lehdesså Can. Chem., 49, 3 866 (1971).

Tåmån mukaisesti renkaan ketjun pituuden vaihtelui-den tai radikaalien substituointien vaikutus farmakologi-seen tehokkuuteen oli låhes tuntematonta, ja se on vålttå-35 måtOntå sellaisten syklisten yhdisteiden syntesoimisen ja lååkkeiksi soveltuuvuusmahdollisuuksien tutkimiseksi.

92693 - Γ” 2

Tuloksena tutkimuksista, joiden kohteena oli sel-laisten uusien yhdisteiden kemiallinen synteesi ja farma-kologinen vaikutus, totesimme, ettå yhdisteilia on erin-omainen ehkåisevå vaikutus maksasairauksiin ja immuunimo-5 dulointivaikutus.

Yhdistettå voidaan valmistaa esimerkiksi seuraavien menetelmien A - C mukaisesti.

A) Kaavan (I) esittåmåå yhdistettå voidaan valmistaa hapettamalla kaavan [II] mukainen yhdiste yleisesti 10 kåytetyllå hapettimella kuten metallisuolalla, hapella, halogeenilla, vetyperoksidilla tai dietyylibromimalonaa-tilla.

R1 R1

2 I I

15 R -C-C0NH-CHC00R3 _^ R2-C-CONH-CHCOOR3

I I * I I

ch2 ch2 ch2-s-s-ch2

I I

SH SH 1 lII) 111

Kun R3 kaavan [I] mukaisessa yhdisteesså on vety, se voidaan esterOidå helposti diatsometaanilla jne., jol-loin saadaan yhdistettå, jossa R3 on C1.6-alkyyli. Ja kåån-tåen, R3:n ollessa C^g-alkyyli kaavan [I] mukaisessa yhdis-.25 teesså, se voidaan hydrolysoida helposti natriumhydroksi-dilla jne., jolloin saadaan yhdistettå, jossa R3 on vety.

Kaavan [I] mukainen yhdiste voidaan muuttaa farma-seuttisesti hyvåksyttåviksi epåorgaanisen tai orgaanisen emåksen suoloiksi.

30 Esimerkkejå suoloista ovat natriumsuola, kaliumsuo- la, kalsiumsuola, magnesiumsuola, ammoniumsuola, dietyyli-amiinisuola ja trietanoliamiinisuola.

Tåmån keksinndn yhdisteilia on stereoisomeereja koska niisså on yksi tai useampi asymmetrinen hiiliatomi, 35 ja nåmå isomeerit sisållytetåån tåmån keksinndn piiriin.

3 92693

Maksasairausmallia, joka aiheutetaan antamalla CC14:a rotalle, kåytetSSn laajalti tutkittaessa yhdisteen tehokkuutta maksasairauksiin.

Maksasairausasteen osoittamiseen kaytetaan seerumin 5 GOT- ja GPT-arvoja. Jos arvo, joka maksasairauden johdos-ta, putoaa yhdistetta annettaessa, yhdisteen katsotaan olevan tehokas maksasairauden suhteen.

Kokeen tuloksena, jonka yksityiskohtaiset arvot on esitetty farmakologisen kokeen kohdalla, keksinndn yhdis-10 tettå kSytettåesså totesimme, etta GOT- ja GPT-arvot yh-disteelia kåsitellyssS ryhmåssS ovat merkittåvåsti alen-tuneet verrattuna kåsittelemåttdmån ryhmån arvoihin. Koe osoittaa, etta yhdisteelia on ehkaiseva vaikutus maksasai-rauteen.

15 Viime aikoina immuuniuden on ajateltu olevan lahei- sesså suhteessa maksasairauden kehittymismekanismiin ja kroonisuuteen. Yhdisteen vaikutusten tutkimiseksi immuuni-systeemiin tutkimme hiirien immuunireaktiota lampaan pu-naisia verisoluja vastaan, jota tavallisesti kaytetaan 20 immuunimodulointivaikutuksen tutkimiseen.

Taiia koemenetelmålla pyritåan tutkimaan tehokkuutta immuunisysteemiin, sen mukaan lisååntyykS vai vSheneekG punasoluja liuottavien tSpliS muodostavien solujen luku-måfira hiiren pernasoluissa. Kuten farmakologisessa kokees-25 sa on osoitettu, yhdisteelia osoittautuu olevan erinomai-nen hylkimistS vastustava vaikutus.

Yhdiste, jolla on samanlainen kemiallinen rakenne kuin tåmån keksinndn yhdisteilia, on paljastettu US-paten-tissa 4 517 123. Yleisesti tunnettua on, etta hyvin vahai-30 nen kemiallisen rakenteen modifiointi vaikuttaa huomatta- vasti yhdisteen tehokkuuteen. Sen vuoksi tutkimme kuinka kemiallisen rakenteen modifiointi vaikuttaa tehokkuuteen.

Teimme vertailukokeen taman keksinndn yhdisteen ja tunnetun yhdisteen, jota esittaa kaava [III] 4 92693 CH-I 3

CH.. - C-CONHCHCOOH I I

S—S—CH- 5 3 [III] hylkimista vastustavan vaikutuksen osalta.

Kuten farmakologinen koe osoittaa, tåman keksinndn 10 yhdiste osoittautuu tehokkaammaksi kun US-patentissa se- lostettu yhdiste.

Taman seurauksena totesimme, etta tåman keksinndn yhdisteen on oltava uuden tyyppinen låake maksasairauksiin koska yhdiste alensi GOT- ja GPT-arvo seerumissa ja vas-15 tusti hylkimista.

Lisaksi, yhdistetta, jolla on erinomainen immuuni-modulointivaikutus, voidaan kayttaa laakkeena ei ainoas-taan maksasairauksissa vaan myds erilaisissa immuunisai-rauksissa, esimerkkeina itseimmunointisairaudet, kuten 20 nivelreuma.

Yhdistetta voidaan antaa joko suun kautta tai pa- renteraalisesti. Esimerkkeja annostemuodoista ovat tabletti, kapseli, jauhe, rae, ruiske, perapuikko, silmatipat ja anto ihon lapi.

25 Annosta saadetaån riippuen oireistosta, annosmuo- dosta, jne., mutta tavallisesti paivittainen annos on 1 -5 000 mg yhtena tai muutamana jaettu annoksena.

Esimerkkeja yhdisteiden valmistuksista ja seosmuo-doista on esitetty seuraavassa.

30 Esimerkkeja

Esimerkki 1 (4R)-heksahydro-7,7-dimetyyli-6-okso-l,2,5-diatiat- sosiini-4-karboksyylihappo (yhdiste no. 1) 1) Liuokseen, jossa on dietyylibromimalonaattia 35 (10,5 g) ja trietyyliamiinia (8,5 g) metyleenikloridissa « li..

5 92693 (3,8 1), lisåttiin j&Ssuolaseoksella jaahdyttaen tiputta-mallaN-(2,2-dimetyyli-3-merkaptopropionyyli)-L-kysteiinia (9,5 g) liuotettuna metyleenikloridiin (0,3 1). LisSyksen jaikeen reaktioseosta sekoitettiin 30 minuuttia samassa 5 lampdtilassa ja 30 minuuttia huoneen lamptttilassa. Seos tehtiin happameksi 6-norm. kloorivetyhapolla ja pestiin kyliastetylia natriumkloridiliuoksella. Orgaaninen kerros kuivattiin vedettOmållS natriumsulfaatilla ja konsentroi-tiin vakuumissa. Erottuneet kiteet kerattiin talteen suo-10 dattamalla, jolloin saatiin 6,1 g (65 %) otsikon yhdistetta.

Sp. 160 - 162 °C (etyyliasetaatista) IR (KBr, cm-1) 3 444, 3 376, 1 730, 1 627, 1 507, 1 403, 1 202, 1 185 15 [a]2D5: -110,8° (c = 1,0, metanoli) 2) Otsikon yhdistetta saatiin myds seuraavalla me-netelmålia.

Liuokseen, jossa oli trietyyliamiinia (13,3 g) me-tyleenikloridissa (0,5 1), lisåttiin samanaikaisesti ti-20 puttamalla N-(2,2-dimetyyli-3-merkaptopropionyyli)-L-kys-teiiniå (15,6 g) liuotettuna metyleenikloridiin (0,5 1) ja jodia (18,3 g) liuotettuna metyleenikloridiin (0,5 ml), jSS-suola-seoksella jaahdyttåen. Lisayksen jaikeen reaktioseosta sekoitettiin tunnin ajan samassa låmpdtilassa.

25 Orgaaninen kerros pestiin vedelia, kuivattiin vedettdmaiia natriumsulfaatilla ja konsentroitiin vakuumissa. Erottuneet kiteet kerattiin talteen suodattamalla, jolloin saatiin 8,5 g (55 %) otsikon yhdistetta.

Esimerkki 2 30 (4R)-heksahydro-7,7-dimetyyli-6-okso-l, 2,5-ditiat- sosiini-4-karboksyylihappometyyliesteri (yhdiste no. 2)

Liuokseen, jossa oli yhdistetta no. 1 (11,0 g) me-tyyliasetaatissa (250 ml), lisåttiin 3,9-norm. kloorivety-35 happoa etyyliasetaatissa (4 ml). Reaktioseokseen lisåttiin 6 92693 diatsometaania liuotettuna eetteriin (180 ml) jSS-suola-seoksella jaåhdyttåen ja seosta sekoitettiin 10 minuuttia. Seokseen lisåttiin etikkahappoa (6 ml) ja haihdutettiin kuiviin vakuumissa. Muodostunut dljymåinen jåånnGs puhdis-5 tettiin kromatografoimalla silikageelikolonnissa, jolloin saatiin 10,3 g (88 %) otsikon yhdistettå.

Sp. 87,0 - 89,0 °C

IR (KBr, cm*1) 3 360, 1 740, 1 661, 1 504, 1 436, 1 343, 1 199, 615.

10 [a]2D5: -100,7° (c = 1,0, metanoli).

Esimerkki 3

Heksahydro-3,3-dimetyyli-4-okso-l,2,5-ditiatsosii-ni-6-karboksyylihappo (yhdiste no. 3)

Samanlaisella menetelmallå kuin esimerkissa 1 kåyt-15 tåmållå dietyylibromimalonaattia (25,0 g), trietyyliamii- nia (20,2 g) ja N-(2-merkapto-2-metyylipropionyyli)-DL-homokysteiinia (22,6 g), saatiin 31,3 g (70 %) otsikon yhdistettå.

Sp. 210,5 - 212 °C (etanoli-vesi) 20 IR (KBr, cm'1) 3 348, 1 701, 1 653, 1 520, 1 238, 1 213, 1 186, 1 109, 674.

Esimerkki 4

Heksahydro-3,3-dimetyyli-4-okso-l,2,5-ditiatsosii-ni-6-karboksyylihappometyyliesteri (yhdiste no. 4) 25 Samanlaisella menetelmallå kuin esimerkissa 2 kayt- tamaiia 28,0 g yhdistettå no. 3, saatiin 27,0 g (91 %) otsikon yhdistettå.

Sp. 110 - 112 °C (bentseeni-heksaani) IR (KBr, cm'1) 3 340, 1 728, 1 644, 1 520, 1 296, 30 1 239, 1 212, 685.

Esimerkki 7 (4S)-heksahydro-7,7-dimetyyli-6-okso-l,2,5-ditiat-sosiini-4-karboksyylihappo (yhdiste no. 7) Samanlaisella menetelmålia kuin esimerkissa 1 k3yt-35 tamålia dietyylibromimalonaattia (16,6 g), trietyyliamii- II : 7 92693 nia (13,4 g) ja N-(2,2-dimetyyli-3-merkaptopropionyyli)-D-kysteiinia (15,0 g), saatiin 9,8 g (66 %) otsikon yhdis-tetta.

Sp. 159,5 - 161,5 °C (etyyliasetaatti) 5 IR (KBr, cm'1) 3 450, 3 376, 1 729, 1 625, 1 505, 1 401, 1 202, 1 184 [a]2D5: +110,2° (c = 1,0, metanol!)

Es inter kki 10 (4R)-heksahydro-7,7-dietyyli-6-okso-l, 2,5-ditiat-10 soslini-4-karboksyylihappoa (yhdiste no. 10)

Samanlaisella menetelmaiia kuin esimerkissa 1-2) kayttamaiia N-12-etyyli-2-(merkaptometyyli)butyryyli]-L-kysteiinia (2,7 g), saatiin 1,8 g (67 %) otsikon yhdistet-ta.

15 Sp. 127 - 128,5 °C (etyyliasetaatti-heksaani) IR (KBr, cm’1) 3 308, 1 713, 1 642, 1 518, 1 449, 1 397, 1 199, 1 176 [ct]2D5: -90,3° (c = 1,0, metanoli)

Farmakologinen koe 20 Rotan maksasairausmallia, joka on aiheutettu CCl4:lia, kaytetaan yleisesti laakkeen tehokkuuden tutki-miseksi maksasairauksiin.

Tutkimme yhdisteen tehokkuutta maksasairauteen kayttamaiia rottamallia. Lisaksi tutkimme yhdisteen immuu-25 nimoduloivaa vaikutusta kayttamaiia immuunireaktiota lam- paan punaisia verisoluja vastaan hiiren yhteydessa, jota kaytetaan yleisesti tutkittaessa tehokkuutta immuunisys-teemiin.

1) Tehokkuus CCl4:llå aiheutettuun maksasairauteen.

30 Koeyhdiste suspendoitiin traganttikumiliuokseen ja annettiin suun kautta Wistar-urosrotille (5 rottaa ryhmas-sa) annoksena 300 mg/kg.

Kolmekymmentå minuuttia myOhemmin annettiin vatsa-ontelon sisaisesti CCl4:aa, maksasairauden aiheuttajaa, 35 annoksena 0,25 mg/kg.

8 92693

Seerumin GOT- ja GPT-arvot måSråttiin 24 tuntia CCl4:n antamisen jålkeen. Kontrolliryhmålle annettiin 0,5-prosenttista traganttikumiliuosta. Tulokset kokeesta kéy-tettåessS yhdistetta no. 1, tyypillistå tåmån keksinndn 5 yhdistettS, on esitetty taulukossa 1.

II

92695 9

Taulukko 1

Koeyhdiste GOT GPT

5----

Kontrolli 18 69310 026

Yhdiste no. 1 12 642 6 006 10 Kuten taulukko 1 osoittaa, ryhmån GOT- ja GPT-ar- vot, jolle on annettu keksinnGn yhdistettå, olivat merkit-tåvåsti alhaisemmat kuin kontrollin. Tulos todisti, ettå yhdisteellå on erinomainen tehokkuus maksasairauteen.

2) Tehokkuus immuunireaktioon lampaan punaisia ve-15 risoluja vastaan hiiren yhteydesså.

Iso'n ym.:n menetelmån mukaisesti (Int. J. Immunotherapy, 1, 93 (1985)), 5 x 108 lampaan punaisia verisolu-ja annettiin vatsaontelon sisåisesti BALB/c -naarashiiril-le (3 - 5 hiirtå ryhmåsså) ja immunisoitiin.

20 Immunisoinnin jålkeen koeyhdistettå, joka oli sus- pendoitu 1-prosenttiseen metyyliselluloosaliuokseen, annettiin jatkuvasti 4 påivån ajan.

Hiiret tapettiin ja arvioitiin punasoluja liuotta-vasti tåplittyvien pernasolujen lukumåårå.

25 50-prosenttisesti ehkåisevå annos arvioitiin solu- laskennan perusteella. Vertailua vårten suoritettiin sa-manlainen koe tunnetulla kaavan [HI] mukaisella yhdis-teellå, jota on selostettu US-patentissa 4 517 123.

Tulokset kokeesta yhdisteellå no. 1, tyypillisellå 30 tåmån keksinnOn yhdisteellå, ja tunnetulla yhdisteellå on esitetty taulukossa 2.

O O C Q 7 -/ Z o y j 10

Taulukko 2

Koeyhdiste 50 %:sesti ehkåisevå annos 5-----

Yhdiste no. 1 1,23 mg/kg tunnettu yhdiste 7,12 mg/kg

Kuten taulukko 2 osoittaa, tåmån keksinn5n yhdis-10 teella osoittautuu olevan erinomainen hylkimista vastus-tava vaikutus, ja sen vaikutus on tehokkaampi kuin tunne-tun yhdisteen vaikutus.

li

Claims (3)

92693

1. MenetelmS kaavan [I] mukaisen terapeuttisesti kåyttekelpoisen yhdisteen, tai sen farmaseuttisesti hyvåk- 5 syttSvSn suolan valmistamiseksi R1

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelma, tunnettu siita, etta kaavan [I] mukainen yhdiste 30 on heksahydro-7,7-dimetyyli-6-okso-l,2,5-ditiatsosiini-4-karboksyylihappo tai sen suola.

2 I R -C-CONH-CHCOOR [III

20. I ch2 ch2 I I SH SH ja tarvittaessa, R3:n ollessa kaavassa (II) vety, esterdi- 25 daan happo C^-alkyyliesterin muodostamiseksi, ja tarvittaessa, R3:n ollessa kaavassa (II) C1.6-alkyyli, hydrolysoi-daan ester! hapon muodostamiseksi.

2 I R -C-CONH-CHCOOR I I 10 ch2-s-s-ch2 [I] jossa R1 ja R2 tarkoittavat itsenaisesti vetya tai 01-6-alkyyliS;

15 R3 tarkoittaa vetya tai C^-alkyylia; tunnettu siitå, etta hapetetaan kaavan [II] mukai-nen yhdiste R1

3. Patenttivaatimuksen 1 tai 2 mukainen menetelma, jossa kaavan [II] mukaisen yhdisteen hapettaminen suorite-taan hapettavan aineen avulla, joka on valittu ryhmasta 35 metallisuola, happi, halogeeni, vetyperoksidi ja dietyyli-bromimalonaatti. ο η £ g 7 /^.07 J