FI86202B - Foerfarande foer produktion av amider genom anvaendning av mikroorganismer. - Google Patents
Foerfarande foer produktion av amider genom anvaendning av mikroorganismer. Download PDFInfo
- Publication number
- FI86202B FI86202B FI860084A FI860084A FI86202B FI 86202 B FI86202 B FI 86202B FI 860084 A FI860084 A FI 860084A FI 860084 A FI860084 A FI 860084A FI 86202 B FI86202 B FI 86202B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- reaction
- light
- cells
- bacterial cells
- irradiation
- Prior art date
Links
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims description 75
- -1 nitrile compound Chemical class 0.000 claims description 38
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims description 37
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 32
- 238000006703 hydration reaction Methods 0.000 claims description 25
- 108010033272 Nitrilase Proteins 0.000 claims description 15
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 14
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 claims description 11
- RENMDAKOXSCIGH-UHFFFAOYSA-N Chloroacetonitrile Chemical compound ClCC#N RENMDAKOXSCIGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 11
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N Acrylonitrile Chemical compound C=CC#N NLHHRLWOUZZQLW-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N benzonitrile Chemical compound N#CC1=CC=CC=C1 JFDZBHWFFUWGJE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 claims description 6
- 241000193830 Bacillus <bacterium> Species 0.000 claims description 4
- 241000186146 Brevibacterium Species 0.000 claims description 4
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 claims description 4
- 241000187654 Nocardia Species 0.000 claims description 4
- CUONGYYJJVDODC-UHFFFAOYSA-N malononitrile Chemical compound N#CCC#N CUONGYYJJVDODC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000005855 radiation Effects 0.000 claims description 4
- GYCMBHHDWRMZGG-UHFFFAOYSA-N Methylacrylonitrile Chemical compound CC(=C)C#N GYCMBHHDWRMZGG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000192041 Micrococcus Species 0.000 claims description 3
- RFFFKMOABOFIDF-UHFFFAOYSA-N Pentanenitrile Chemical compound CCCCC#N RFFFKMOABOFIDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KVNRLNFWIYMESJ-UHFFFAOYSA-N butyronitrile Chemical compound CCCC#N KVNRLNFWIYMESJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 230000036571 hydration Effects 0.000 claims description 3
- FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N propionitrile Chemical compound CCC#N FVSKHRXBFJPNKK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- KYPOHTVBFVELTG-OWOJBTEDSA-N (e)-but-2-enedinitrile Chemical compound N#C\C=C\C#N KYPOHTVBFVELTG-OWOJBTEDSA-N 0.000 claims description 2
- 238000010186 staining Methods 0.000 claims description 2
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 claims 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 60
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 29
- HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N Acrylamide Chemical compound NC(=O)C=C HRPVXLWXLXDGHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 230000001678 irradiating effect Effects 0.000 description 9
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 9
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 7
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 7
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 5
- 210000000712 G cell Anatomy 0.000 description 4
- 238000004817 gas chromatography Methods 0.000 description 4
- 150000002825 nitriles Chemical class 0.000 description 4
- 239000000047 product Substances 0.000 description 4
- 230000009471 action Effects 0.000 description 3
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 3
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 3
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 3
- IAHFWCOBPZCAEA-UHFFFAOYSA-N succinonitrile Chemical compound N#CCCC#N IAHFWCOBPZCAEA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- FFNVQNRYTPFDDP-UHFFFAOYSA-N 2-cyanopyridine Chemical compound N#CC1=CC=CC=N1 FFNVQNRYTPFDDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 2
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 2
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 2
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 2
- 230000000887 hydrating effect Effects 0.000 description 2
- 125000001183 hydrocarbyl group Chemical group 0.000 description 2
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 2
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 238000011160 research Methods 0.000 description 2
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 2
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 2
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 2
- CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N Fe2+ Chemical compound [Fe+2] CWYNVVGOOAEACU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000192125 Firmicutes Species 0.000 description 1
- 238000003794 Gram staining Methods 0.000 description 1
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004372 Polyvinyl alcohol Substances 0.000 description 1
- 229910000831 Steel Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012736 aqueous medium Substances 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 1
- 125000006297 carbonyl amino group Chemical group [H]N([*:2])C([*:1])=O 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 239000003054 catalyst Substances 0.000 description 1
- 210000000170 cell membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012295 chemical reaction liquid Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 1
- 125000004122 cyclic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000006185 dispersion Substances 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 1
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 229910052736 halogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002367 halogens Chemical class 0.000 description 1
- 150000004677 hydrates Chemical class 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001257 hydrogen Substances 0.000 description 1
- 125000004435 hydrogen atom Chemical group [H]* 0.000 description 1
- 125000002887 hydroxy group Chemical group [H]O* 0.000 description 1
- 238000005286 illumination Methods 0.000 description 1
- 210000001822 immobilized cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000001771 impaired effect Effects 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- LRDFRRGEGBBSRN-UHFFFAOYSA-N isobutyronitrile Chemical compound CC(C)C#N LRDFRRGEGBBSRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 1
- 210000004379 membrane Anatomy 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000007769 metal material Substances 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000013048 microbiological method Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000035699 permeability Effects 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005554 polynitrile Polymers 0.000 description 1
- 229920002451 polyvinyl alcohol Polymers 0.000 description 1
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Chemical group 0.000 description 1
- 229930195734 saturated hydrocarbon Chemical group 0.000 description 1
- 238000000638 solvent extraction Methods 0.000 description 1
- 239000010959 steel Substances 0.000 description 1
- 125000001424 substituent group Chemical group 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 229930195735 unsaturated hydrocarbon Chemical group 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/02—Amides, e.g. chloramphenicol or polyamides; Imides or polyimides; Urethanes, i.e. compounds comprising N-C=O structural element or polyurethanes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N13/00—Treatment of microorganisms or enzymes with electrical or wave energy, e.g. magnetism, sonic waves
Landscapes
- Organic Chemistry (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Description
86202 MENETELMÄ AMIDIEN TUOTTAMISEKSI BAKTEEREJA KÄYTTÄMÄLLÄ KEKSINNÖN TAUSTA Alan toiminta-alue Tämä keksintö koskee menetelmää nitriiliyhdisteen hydratoimi-seksi mikro-organismien toiminnan avulla, joilla on nitrilaa-siaktiivisuutta, nitriiliyhdisteen muuttamiseksi vastaavaksi amidiyhdisteeksi. Erityisemmin, tämä keksintö koskee menetelmää amidiyhdisteen tuottamiseksi mikro-organismeja valolla säteilyttämällä, hyvällä saannolla, tila-aika-saannolla ja tuottavuudella bakteerisoluja kohti (so. tuotettavien amidi-yhdisteiden määrä per bakteerisolujen yksikkömäärä).
Viime aikoina on kehitetty menetelmiä kemiallisten reaktioiden suorittamiseksi käyttämällä mikro-organismeja tai niistä saatavia entsyymejä. Yleensä mikro-organismien tai entsyymien avulla tapahtuvat reaktiot ovat edullisia siinä, että reaktioiden energian kulutus on pieni, koska reaktio voidaan suorittaa huoneen lämpötilassa ja ilmakehän paineessa, ja että haluttuja tuotteita, joilla on suuri puhtaus, saadaan helposti, koska reaktion selektiivisyys haluttujen tuotteiden tuottamiseksi on hyvin suuri. Toisaalta, parantamisen varaa on mitä tulee reaktion aktiivisuuteen, mikro-organismien tai entsyymien elinikään, joita entsyymejä käytetään katalysaat-··· toreina. Erityisesti, ongelmia esiintyy, kun halutun reaktion nopeus (so. reaktion aktiivisuus) on alhainen sen optimiolo-.**·. suhteiden alapuolella ja alhainen erityisesti sen optimiläm- .···. pötilassa ja/tai -pHrssa. Sellaisessa tapauksessa, tuottavuus käytettyjä bakteerisoluja kohti on alentunut, koska tarvitaan ‘Ί suuren kapasiteetin reaktoreita alhaisen tilavuussaannon joh- ' * dosta, reaktio vie pitemmän ajan alhaisesta reaktionopeudesta johtuen, ja myös reaktion aktiivisuus on alentunut.
-* · Näin ollen, on olennaisesti tärkeää toteuttaa mikro-organis- • mien tai käytettävien entsyymien suuri reaktioaktiivisuus.
.···. Sellainen reaktioaktiivisuus on teollisen tuotannon pääasial- \ linen taloudellinen tekijä.
« * » • · · · 2 86202
Tekniikan taso
Menetelmiä nitriiliyhdisteiden hydratoimiseksi vastaavien amidiyhdisteiden tuottamiseksi mikro-organismien toiminnan avulla, joilla on entsymaattista aktiivisuutta, joka hydratoi nitriiliyhdisteen vastaavaksi amidiyhdisteeksi (so. nitrilaa-siaktiivisuutta), kuvaillaan japanilaisten patenttijulkaisujen no. 17918/81 ja 38118/81 ja japanilaisen patenttihakemus-julkaisun (Kokai) no. 86186/76 selityksissä. Mikro-organismeilla on tärkeä osuus näissä reaktioissa, ja useita mikro-organismeja tuodaan esiin edellä mainittujen viitteiden selityksissä.
Ongelmia
Kyseiset keksijät ovat havainneet, että nitrilaasiaktiivi-suutta ei voi riittävästi osoittaa, kun käytetään suurta metallista reaktiolaitetta nitriiliyhdisteiden hydratointi-reaktion suorittamiseksi teollisessa mitassa käyttämällä näiden mikro-organismien nitrilaasiaktiivisuutta. On ollut epävarmaa, ovatko nämä ilmiöt aiheutuneet mikro-organismeista itsestään vaiko reaktiolaitteen materiaalista ja rakenteesta tai muista syistä. Näin ollen oli välttämätöntä ratkaista nämä ongelmat mikrobiologisen prosessin teolliseksi operoimi-seksi amidiyhdisteiden tuottamiseksi.
Ratkaisu
Ratkaisuna yllä oleviin ongelmiin, ovat kyseiset keksijät jo ΓΙ tehneet keksinnön (japanilainen patenttihakemus no.
125588/83), johon liittyy se ominaisuus, että käytettävän mikro-organismin annetaan vastaanottaa valoenergiaa vähintään • noin lxl0"2 uE/g mikrobisoluja·sekunti suoritettaessa hyd- ' ratointireaktiota reaktioastiässä, joka koostuu ainakin osak- ·;·” si valoa läpäisemättömästä aineesta.
• 3 86202
Sen jälkeen, seurauksena voimaperäisestä tutkimuksesta koskien vuorovaikutusta nitriiliaktiivisuuden toteutuksen ja säteilytettävän valon aallonpituuden välillä, keksijät ovat havainneet, että minimi valoenergia, jonka avulla mikro-organismien aktiivisuuden odotetaan lisääntyvän, vaihtelee valon aallonpituuden mukaan, ja että minimi valoenergiaa voidaan huomattavasti alentaa edellä mainitusta lxl0-2 uE/g mikrobi-soluja ·sekunti.
KEKSINNÖN YHTEENVETO
Tämä keksintö perustuu edellä olevaan havaintoon.
Tämän keksinnön mukaisesti esitetään parannus menetelmässä nitriiliyhdisteen hydratoimiseksi, bakteerien toiminnan avulla, jolloin bakteeri ei ole jakautumisolosuhteissa, ja bakteereilla on nitrilaasiaktiivisuutta nitriiliyhdisteen muuttamiseksi vastaavaksi amidiyhdisteeksi, ja parannus käsittää reaktion suorittamisen olosuhteissa, joissa: (a) bakteeri, jolla on nitrilaasiaktiivisuutta, on Gram-positiivisesti värjäytyvä, tunnettu siitä, että (b) bakteerisolujen annetaan vastaanottaa valoenergiaa noin 2x10~3 - noin lxl0“2 uE/g mikrobisoluja·se- ·*· kunti säteilyttämällä valolla, jonka aallonpituus on •V: noin 300 - noin 450 nm ennen hydratointireaktion päättymistä; ja (c) hydratointireaktio suoritetaan astiassa, joka koos- Π tuu ainakin osaksi materiaalista, joka ei salli * " valon kulkeutumista lävitseen.
• · '· ” Näin ollen, nitriiliyhdisteen hydratointireaktiossa mikro- : organismin vaikutuksesta, jolla on nitrilaasiaktiivisuutta ....: tämän keksinnön mukaisesti, (i) hydratointireaktio, joka ei .·*·. olennaiset! etene reaktioastiassa, joka koostuu valoa läpäi- 4 86202 semättömästä materiaalsta, josta valo olennaisesti puuttuu, voi edetä säteilyttämällä mikro-organismeja valolla, ja (ii) hydratointireaktio, joka etenee jossain määrin reaktioastias-sa, joka koostuu osaksi valoa läpäisemättömästä materiaalista, jossa jonkin verran valoa on läsnä, voi edetä olennaisesti nopeammin valoa säteilyttämällä.
Sellaista valolla säteilyttämisen vaikutusta, joka toteutuu tässä hydratointireaktiossa, ei voida havaita mikro-organismeilla, joilla ei ole nitrilaasiaktiivisuutta keksijöiden suorittamien testien perusteella.
On hyvin tunnettua, että mikrobiologisin menetelmin tuotetaan hyödyllisiä aineita, mukaanlukien entsyymien käyttäminen. Kuitenkin mikro-organismien tai niiden entsyymien aktiivisuuden lisääminen säteilyttämällä sähkömagneettisilla aalloilla kuten valolla, ei uskota olleen hyvin tunnettua. Päinvastoin, yleisesti uskotaan, että valolla säteilyttäminen on usein haitallista. Näin ollen, voidaan sanoa, että valolla säteilyttämisen vaikutusta, jota esitetään vain yllä mainitussa tapauksessa, ei ole osattu odottaa tavallisten valon vaikutusten vuoksi mikro-organismeihin.
KEKSINNÖN YKSITYISKOHTAINEN KUVAILEMINEN
\\ Käytettävät mikro-organismit
Kuten yllä on kuvailtu, on tunnettua, että nitriiliyhdiste " muutetaan vastaavaksi amidiyhdisteeksi mikro-organismien vai- kutuksesta, joilla on nitrilaasiaktiivisuutta. Kyseiset kek- • · *’·' sijät ovat havainneet, että mikro-organismeilla, jotka kuulu vat sukuihin, joita on kuvailtu edellä mainituissa japanilai-sten patenttijulkaisujen nrot 17918/81 ja 38118/81 ja japani-/ : laisen patenttihakemusjulkaisun nro 86186/76 selityksissä, yleensä on parantunut aktiivisuus niitä valolla säteilyttä-mällä.
li s 86202 Näihin sukuihin kuuluvilla mikro-organismeilla on yleisenä ominaisuutena se, että (i) mikro-organismeilla on positiivinen Gram-värjäysreaktio, (ii) ne sisältävät yleensä fosfoli-pidiä, (iii) niiden solumembraanit ovat paksuja, ja näin ollen ovat jonkin verran resistenttejä aineiden läpäisevyydelle niiden läpi, ja (iv) membraanien rikkominen ei ole helppoa solunsisäisten entsyymien ulos ottamiseksi.
Tässä keksinnössä käytettävät mikro-organismit ovat Gram-positiivisia bakteereja, joilla on nitrilaasiaktiivisuutta. Erityisiin esimerkkeihin sellaisista mikro-organismeista lukeutuvat bakteerit, jotka kuuluvat seuraaviin sukuihin: (a) Corynebacterium; (b) Nocardia; (c) Bacillus; (d) Bacteridium; (e) Micrococcus; ja (f) Brevibacterium.
Erityisiin kantoihin, jotka kuuluvat näihin sukuihin, kuuluvat: Corynebacterium --- N-771-kanta (FERM P 4445, tallen nettuna japanilaisessa kokoelmassa, Fermentation Research Institute, Agency of Industrial Science and Technology, 1, *·· 3-Higashi 1-chome, Yatabe-machi, Tsukuba-gun, Ibaraki-ken,
Japani, jota kokoelmaa nimitetään tässä nimellä FRI, 30. päi-.·*·. vänä toukokuuta, 1978) ja N-774-kanta (FERM P 4446, tallen- nettu FRI:ssä 30. päivänä toukokuuta, 1978); Nocardia-suku --- N-775-kanta (FERM P 4447, tallennettu FRI:ssä 30. päivänä » * · toukokuuta, 1978), näiden kantojen ollessa kuvailtuna japani- « · · ··' laisten patenttijulkaisujen no 17918/81 ja no 38118/81 selityksissä; ja Bacillus-suvun kannat ja muut, joita • · *. *: kuvaillaan japanilaisessa patenttihakemus julkaisussa no : 86186/1976 ja joiden on ilmoitettu olevan tallennettuna CBS : ssä ja FRI: ssä . Näiden kantojen bakteriologisia ominaisuuksia kuvaillaan näissä julkisten viitteiden tunnetuissa selityksissä.
6 86202
Nitriilivhdisteitä Ta amidivhdisteitä
Nitriiliyhdisteitä edustaa yleinen kaava R-(CN)n( ja niihin kuuluu laaja joukko yhdisteitä. Yhdisteisiin kuuluu mononit-riilejä kun n = 1 ja polynitriilejä kun n 2 2. R on vety tai kyllästetty tai kyllästämätön hiilivetytähde, jossa on vaih-televia määriä hiiliatomeja ja myös suora, haaroittunut tai syklinen ketju. Hiilivetytähde voi lisäksi sisältää aminoryh-män, hydroksyyliryhmän, halogeenin, karboksyyliryhmän tai muita substituentteja, jotka sopivat yhteen käytettävien mikro-organismien kanssa.
Esimerkkeihin edullisista nitriiliyhdisteistä kuuluvat aseto-nitriili, propionitriili, n-butyronitriili, isobutyronitrii-li, n-valeronitriili, akryylinitriili, metakryylinitriili, bentsonitriili,'syaanipyridiini, malononitriili, sukkinonit-riili, fumaronitrii1i, klooriasetonitriili, fl-hydroksipropio-nitriili, aminoasetonitriili ja fl-aminopropionitriili.
Tuloksena kokeista monilla nitriiliyhdisteillä, kuten on esitetty seuraavissa esimerkeissä, on havaittu, että nitrilaasi-aktiivisuus lisääntyy poikkeuksetta valolla säteilyttämällä. Näin ollen sanotaan, että tämä keksintö voidaan yleisesti näyttää toteen nitriiliyhdisteiden suhteen.
Syntyvä hydratoinnin reaktiotuote on vastaava amidiyhdiste, jossa lähtönitriiliyhdisteen CN-ryhmä hydratoituu CONH2_ryh-mäksi.
Tuotteiden hyödyllisyyden kannalta katsottuna, on tärkeätä ainakin tällä hetkellä akryyliamidin tuottaminen akryylinit-riilistä ja nikotiinihapon amidin tuottaminen syaanipyridii-nistä.
Hvdratointireaktio 7 86202
On tunnettua suorittaa nitriiliyhdisteen hydratointireaktio mikro-organismien tuottaman nitrilaasin vaikutuksesta, joilla on nitrilaasiaktiivisuutta. Tässä keksinnössä voidaan hydra-tointi suorittaa missä tahansa edullisessa suoritusmuodossa niin kauan kuin ei heikennetä keksinnön kohdetta. Tulee panna merkille, ettei itse hydratointireaktiossa ole havaittu mitään muutoksia valolla säteilyttämällä.
Hydratointireaktion menetelmä käsittää yleensä lähtönitriili-yhdisteen saattamisen yhteen bakteerisolujen kanssa vesipitoisessa alustassa ennalta määrätyn ajanjakson ajaksi.
Bakteerisolut voivat olla nestemäisen viljelmän muodossa; käsittelemättöminä bakteerisoluina erotettuina kasvualustasta, edullisesti sellaisina, jotka on pesty vedellä; käsittelemättömien bakteerisolujen kuivattuna tuotteena; tai käsit-··· telemättöminä soluina tai kuivattuina soluina kiinnitettyinä * * a , tai immobilisoituina kantajaan. Edullisia bakteerisolujen .···. muotoja ovat käsittelemättömät solut, tai ne, jotka on immo- • · · ,···, bilisoitu polymeerigeeliin kuten ristisidottu polyakryyli- “! amidigeeli tai ristisidottu polyvinyylialkoholi.
Substraatin (nitriili) ja bakteerisolujen konsentraatiot nestemäisessä alustassa voidaan sopivasti valita, ja ne ovat yleensä substraatin konsentraation alueella noin 0,01 - noin 5\ painon mukaan ja bakteerisolujen konsentraatioalueella : noin 0,01 - noin 2 paino-\ kuivia soluja. Reaktion lämpötila, reaktion pH ja muut reaktio-olosuhteet voidaan määrittää riippuen käytettävien mikro-organismien tyypistä. Normaalisti '/ reaktion lämpötila on alueella noin 0 - noin 20eC, ja pH on '···" noin 7 läheisyydessä. Sopivaa puskuriainetta voidaan käyttää *·.. pH:n pysyttämiseksi ennalta määrätyllä tasolla.
β 86202
Ohimennen sanoen, hydratointireaktiossa käytettävien bakteerisolujen preparointi suoritetaan helposti viljelemällä mikro-organismia sopivissa olosuhteissa. Kasvualustasta erotetut ja hydratointireaktiossa käytettävät bakteerisolut ovat yleensä jakaantumattomassa tilassa.
Valolla säteilvttäminen (1) Valo
Valolla säteilyttäminen toimitetaan bakteerisoluihin, jotka ovat vaiheessa ennen hydratointireaktion päättymistä. Ilmaus "ennen hydratointireaktion päättymistä" tarkoittaa mitä tahansa ajankohtaa ennen hydratointireaktion päättymistä, jossa yhteydessä päättyminen ei aina tarkoita 100\:n konversiota. Koska valolla säteilyttäminen toimitetaan bakteeri-soluille, sisältää vaihe ennen hydratointireaktion päättymistä myös ajankohdan ennen solujen saattamista yhteen nitriili-yhdisteen kanssa. Niin muodoin, säteilyttäminen voidaan . suorittaa ennen ja/tai jälkeen bakteerisolujen saattamisen yhteyteen nitriiliyhdisteen kanssa.
Säteilyttäminen voidaan näin ollen suorittaa ainoastaan ennen kuin solut saatetaan yhteen nitriilin kanssa. Kun bakteeri-solut, joita on säteilytetty valolla, saatetaan yhteen nitriiliyhdisteen kanssa ilman valoa, kuitenkin, valolla sätei-lyttämisen vaikutusta nitrilaasiaktiivisuuden lisäämiseen ei voida jatkaa riittävästi, vaikka vaikutus elpyy valolla säteilyttämällä. Näin ollen, tämän keksinnön edullisessa suoritusmuodossa, bakteerisolut saatetaan yhteen nitriiliyhdisteen kanssa ja niitä säteilytetään sitten valolla. Erityisesti, säteilyttäminen suoritetaan, esimerkiksi, ennen ja jälkeen bakteerisolujen saattamisen yhteen nitriiliyhdisteen kanssa.
li 9 862C2 Säteilytettävällä "valolla" on tämän keksinnön mukaisesti aallonpituus noin 300 - noin 450 nm. Erityisesti, sellaista valoa voidaan saada aikaan esimerkiksi tummanvalon lampusta tai muista elohopealampuista aallonpituusalueella 300 - 400 nro, mutta voi tuskin saada valonlähteestä yleiseen säteilyttämiseen aallonpituusalueella 400 - 800 nm, kuten luminesoiva lamppu tai hehkulamppu.
Valolla säteilyttäminen voidaan suorittaa millä tahansa voimakkuudella tai määrällä niin kauan kuin vaikutusta aktiivisuuden lisääntymiseen havaitaan. Erityisemmin, säteilyttäminen pitäisi suorittaa niin, että bakteerisolut vastaanottavat valoenergiaa noin 2x10-3 - noin 1x10-2 ^uE/g soluja.sekunti, edullisesti noin 5x10-3 - noin 1x10-2 μΕ/q soluja.sekunti. Ohimennen sanoen, immobilisoitujen solujen käyttäminen vähentää joskus reaktionopeutta noin 1/2:sta noin 1/3:aan verrattuna elävien solujen käyttämiseen samassa konsentraatiossa. Tässä tapauksessa tarvitsee säteilyttäminen valoenergiaa noin . 2-3 kertaa niin paljon kuin yllä mainittu arvo. Mitä tulee ”” valoenergiaan, yksikkö "μΕ" on se määrä valoenergiaa ilmais- tuna E (einstein) x 10-6:11a, mikä vastaa fotonien energiaa, i Φ t joka vastaa 1 moolin molekyylien määrää. Yksikkö "g soluja" on paino ilmaistuna grammoina kuivattuja bakteerisolua.
• j : "Sekunti" on säteilyttämisaika ilmaistuna sekunteina.
Elohopealampun valo huoneen valaistukseen ja auringonvalo voivat osittain olla tämän keksinnön mukaisella aallonpituusalueella. Kuitenkin, ympäristöolosuhteissa reaktioastian tai muun tavallisen teollisen mitan laitteen ympärillä, huoneen-valo kuten edellä kuvailtiin, ja/tai hajanainen auringonvalo ’·*·* huoneeseen eivät voi antaa tämän keksinnön mukaista minimi /·*; valoenergian määrää.
10 862Q2 (2) Säteilyttäminen
Sateilyttäminen voidaan toimittaa millä tahansa tavalla niin kauan kuin bakteerisolut, ennen kontaktia tai kontaktissa nitriiliyhdisteen kanssa, voivat peräkkäin tai ajoittain ottaa vastaan tarvittavan määrän valoenergiaa säteilyttämisen valonlähteestä.
Ilmaisu "valonlähde bakteerisolujen säteilyttämiseen" tarkoittaa valonlähdettä sijoitettuna reaktiolaitteen sisäpuolelle tai ulkopuolelle bakteerisolujen säteilyttämiseksi valolla, ja käsittää myös jonkin verran valoa kuten hajanainen auringonvalo ja/tai huoneen valo, jotka voivat päästä reaktiolaitteeseen reaktiolaitten ympäristöstä. Ohimennen sanoen, kun valmistetaan tila, johon reaktiolaite asennetaan, erittäin tai erikoisen kirkkaaksi niin, että merkittävä määrä valoenergiaa huoneenvalosta voi päästä reaktioastiaan, tulisi sellainen valonlähde käsittää tämän keksinnön mukaiseksi säteilyttämisen valonlähteeksi.
Erityisemmin, voidaan valolla säteilyttäminen suorittaa esimerkiksi, (a) valonlähteellä, joka on sijoitettu yläosaan astian päällä, joka sisältää bakteerisoluja (so. tila bakteerisolujen tai niiden vesisuspension päällä), (b) säteilyttä- mällä ulkopuolisella valonlähteellä ikkunan läpi sijoitettuna reaktioastian ylä, sivu- tai pohjaosaan, (c) säteilyttämällä lampun avulla, joka on sijoitettu nesteen sisään reaktioasti-assa niin, että astiaa voidaan myös käyttää fotokemiallisena reaktorina, ja (d) muilla menetelmillä. Tarvittaessa, ja jos se on mahdollista, otetaan reaktioliuos ulos astiasta (erityisesti reaktioastiasta), joka sisältää bakteerisoluja, ja soluja sisältävää nestettä säteilytetään sitten toisessa astiassa menetelmällä, jota edellä on kuvailtu. Säteilyttämiseen käytettävä astia voi tässä tapauksessa, esimerkiksi, käsittää yhden tai usemman läpinäkyvän lasiputken.
li 11 862C2
Valolla säteilyttäroisen vaikutus tämän keksinnön mukaisesti voi selvästi tulla esille, kun käytetään suurta, teollisen mitan reaktioastiaa, jossa yhteydessä tavallisesta hajanaisesta auringonvalosta tai huoneenvalosta tuleva valoenergia ei riitä tarvittavaan valoenergian määrään. Sellainen suuri reaktioastia on tavallisesti valmistettu valoa läpäisemättömästä materiaalista ja erityisesti metallisesta materiaalista huomattavilta osiltaan. Sellaisessa valoa läpäisemättömässä reaktioastiassa on valoenergia hyvin pieni, joka saadaan tavallisesta valaisemisesta ikkunan tai astian kannen läpi. Näin ollen, positiivinen säteilyttäminen valolla on välttämätöntä. Ohimennen sanoen, termi "reaktioastia" tässä yhteydessä tarkoittaa osaa reaktiolaitteistosta, jossa ainakin pääosa hydratointireaktiosta suoritetaan.
KOKEELLISTA
Esimerkki 1
Pestyjä, kannan N-774 (Corynebacterium) bakteerisoluja val-·’·" mistettiin viljelemällä kantaa aerobisesti alustassa (pH
• 7,2), joka sisälsi glukoosia 1%, peptonia 0,5%, hiivauutetta ·...’ 0,3¾. mallasuutetta 0,3% ja ferrosulfaatti . 7-hydraattia :.j.: 0,05%, ja pesemällä saatuja soluja 0,05M fosfaattipuskuril- : la. Solut dispergoitiin 0,05 M fosfaattipuskuriin (pH 7,7) pimeässä paikassa soludispersion valmistamiseksi, jonka kon-sentraatio on 2,0 g kuivattuja soluja/litra. Muodostuneen solususpension annettiin seistä 0°C:ssa pimeässä paikassa 15 . tuntia, nimittäen tätä näytettä tämän jälkeen "pimeässä seis- ;\‘ syt", ja se jaettiin sitten kahteen osaan. Sen toisen osan ·"·' annettiin seistä 0°C:ssa 4 tuntia säteilytyksessä valoenergi- assa 8x10-3 /iE/g solu ja. sekunti käyttäen 4 W tummanvalon lamppua (toimittajana Tokyo Shibaura Denki K.K., Japani), 12 862C2 nimittäen tätä näytettä tämän jälkeen "valossa seissyt". Sen toisen osan seisottamista 0°C:ssa pimeässä paikassa jatkettiin.
Kumpaakin solususpensiota käyttäen, tuotettiin akryyliamidia akryylinitriilistä, ja reaktionopeutta tutkittiin tarkkailemalla näin tuotetun akryyliamidin määriä.
Valossa seisseiden bakteerien tapauksessa, seos, jossa oli 0,088 osaa soluja (määrän ollessa tässä esitettynä kuivien solujen painona), 1 osa akryylinitriiliä ja 0,05M fosfaatti-puskuria (pH 7,7) 98,912 osaa, alistettiin reaktioon 10°C:ssa 50 ml:n lasireaktorissa sekoittaen 20 minuuttia samoissa säteilytysolosuhteissa kuin edellä on kuvailtu, tämän reaktion ollen tämän jälkeen nimettynä "säteilytetty reaktio". Pimeässä seisseiden bakteerien tapauksessa, toistettiin edellä mainittu reaktio, paitsi että valoa ei käytetty, nimittäen tätä reaktiota tämän jälkeen "pimeä reaktio". Reaktion päättymisen jälkeen, akryyliamidi, jota oli kummassakin reaktio-liuoksessa, joiden reaktio oli päätetty, alistettiin kvantitatiiviseen analyysiin kaasukromatografialla. Tuloksena, akryyliamidin määrä (tämän jälkeen nimitettynä AA:ksi) per yksikkö bakteerisoluja oli 20,4 yu moolia AA/mg soluja.minuutti valossa seisseessä säteilytetyssä reaktiossa, ja 0,31 yu moolia AA/mg soluja.minuutti pimeässä seisseessä pimeässä reaktiossa, vastaavasti. Näiden tuotannon suorituskykyjen suhde oli, valossa seissyt säteilytetty reaktio/pimeässä seissyt pimeä reaktio = 66.
Seuraavissa esimerkeissä, arvo 20,4 μ moolia AA/mg soluja, minuutti, saatuna esimerkin 1 mukaisesta valossa seis-seestä, säteilytetystä reaktiosta, on esitetty suhteellisena arvona 100U. Näin ollen, arvo, joka saatiin esimerkin 1 mukaisessa pimeässä seisseessä, pimeässä reaktiossa, nousee arvoon 1,52U.
Esimerkit 2-13 13 8 6 2 C 2
Reaktionestettä, jonka koostumus on esitetty taulukossa 1, valmistettiin käyttämällä kumpaakin valossa seisseistä ja pimeässä seisseistä bakteerisoluista, jotka oli valmistettu kuten esimerkissä 1. Reaktioliuos alistettiin reaktioon kuten esimerkissä 1. Vastaavat amidiyhdisteet, joita oli päättyneessä reaktioliuoksessa, alistettiin kvantitatiiviseen analyysiin kaasukromatografialla, jolloin saatiin tulokset, jotka on esitetty taulukossa 2, vastaavasti.
TAULUKKO 1
Esim. Bakteeri Lähtönitriili 0,05M fos- pH
no. soluja (osaa) faattipus- __(osaa)___ kuri (osaa)__ 2 __0,088__asetonitriili (1)__98,912__7,7 3 __"__metakryylinitriili (1)__98,912__“ 4 __"__n-valeronitriili (0,25)__99,662__" 5 ___"__syaanipyridiini (1 )__98,912__“
·:· - 6__"__bentsonitriili (0,125)__99,787__M
‘! ’! 7___"___propionitriili (1)__98,912__" •.-.: 8___"___n-butyronitriili ( 1 )__98,912__‘1_ .·4 9__^____malononitriili ( 1 )___98,912__" ;;; - 10__"__sukkinonitriili (1) ' 98,912__" : - 11__"__fumaronitriili (1)__98,912__" * ‘! - 1 2__“__klooriasetonitriili ( 1 )__98,912 " 13 M fl-hydroksipropio- 98,912 " .·.·. ---—n it rilli ( 1)---------- 14 8 6 2 G 2 v tn
>·>* .-(« O
« v a) v h « v a >< v
-H 0) H m M
4) V O. « <o r- m t— <*> vo ao tn > h ω - ~ - i-t·— o) p<nm>^5^*rMcn<yi^ookvr~e>
<0 -h tn mt-iei-eeinf^m^N
W4IO :«e -- r-r-»-»-r- « V -H :<0 4) 0 :<β V « a
—I W M -H
««JO.
> 4)
M
3 w :(tj ('(ΜΗΗΡΊτ-Η^τ’Γ'Ο'β
«V O n'vcMO'-OtNtnOf'ir^'V
W >< -H
:<0 M :«J V 000«~0«~*-00l0«-«-
4> M 4) M
a -h a <0 •H 4) H 4)
01 « O· H
>.
V — V 3 n) V ro t— LnOOO^OO^* «e v >. o ------------ « >i (Η -h (ΝΟιηιηο'Ο'βτ’ΐ^ι^Οβ' «m -hv ('tr^t-T-^aieioe'inin'i1
(N O M 4) f t- N (N
rH -H V <t) O <0 4) :(t) 4) te > tn tn n
K
3--.---.-..--.------------„----
iV
=> 4) -h g ti -3 •s - s g
£ -h -H -H
O Ό -H -H Ό Cu
e H Ό TS -HO
a <o ό a -na -h «e o.
<t> H -H « H TS <tJ -H Ό Η V -H
-H »H β -H *Ö -H -H TS -H T3 4) «
O O>iteC-HarH-Ha-H«X
V ·Η>,Μ.Ηβ3>ιβ«)Β«0
V aH4)-H(dO^n)C(0-HM
4) «XrHVm-HVO -HMMTS
V Vrt<Ö0V0.30.*«0>·, O 4) V >MCOX3^Mm O £ O «4)l -H4)Vl«33rH, H «BCCjQCXcanv>:ca
•H
rH
3
•H -H V
•H -H r-t -H
N Ή -H CS
+* -H -H -H -H O
·* -H #H -H r-t -H M -H
C Η Η C -H ·Η Η ·Η rH -H V O.
:P -H V -H -H rH rH -H rH Ή rH -H O
V rH -H M -H Ή -H M -H -H -H β H
•e -h e v <o -rt n v h μ η o a
:Λ -H -H -H ·Η M V -H M V V V -<H
HrHCMVVCV HV4)«
+> O >1 -H H O -H C -H n M
•H>,tHQ.CCHCOC«IO CH4) -HOO>,OCO -HN O^rHCM HVC -HHHTS
v<e«j«jvo.ooi<«p>i 4)V>«cox)rH2aö« «4)l>,«Ml433rHt «acuAacawvijwa) a •h c^n^irt'vr'-oocnO’-raro V) r· r· V- _M _ l!
Esimerkit 14 - 18 is 86202
Pestyjä bakteerisoluja saatiin preparoitaessa kuten esimerkissä 1 seuraavien sukujen kantoja: Bacillus (CBS-494) esimerkissä 14, Bacteridium (CBS-496) esimerkissä 15, Micrococcus (CBS-497) esimerkissä 16, Brevibacterium (CBS-717) esimerkissä 17 ja Nocardia (N-775) esimerkissä 18. Kannat, jotka on varustettu CBS-numeroi 1la, ovat niitä, jotka on tallennettu ja saatu kokoelmasta Centraal Bureau Voor Schimmelcultures (CBS), Osterstraat 1, Baarn, Hollanti. Pestyjä soluja käsiteltiin kuten esimerkissä 1 valossa seisseiden ja pimeässä seisseiden solujen saamiseksi. Käyttämällä soluja seuraavissa formulaatioissa, tuotettiin akryyliamidia akryylinitriilistä, ja reaktionopeutta tutkittiin tarkastelemalla näin tuotetun akryyliamidin määriä.
Valossa seisseiden kantojen tapauksessa, seos, jossa oli 0,088 osaa soluja, 1 osa akryylinitriiliä ja 98,912 osaa 0,05M fosfaattipuskuria (pH 7,7) alistettiin reaktioon sekoittaen 10°C-.ssa 20 minuuttia ( sätei ly tetty reaktio).
; ; Pimeässä seisseiden kantojen tapauksessa, reaktio toistet tiin, paitsi että valoa ei käytetty (pimeä reaktio). Akryyli-amidi, jota oli kummassakin päättyneessä reaktioliuoksessa, alistettiin kvantitatiiviseen analyysiin kaasukromatografial-- ·' la, jolloin saatiin tulokset, jotka on esitetty taulukossa 3.
TAULUKKO 3
Valossa TT"! I TT
Pimeässä , seissyt Valo- Käytetty K.n., valolla reaktio / bakteensuku säteilyt. .. . pimeä , *. reaktio * , “ reaktio .... reaktio - ____(uj__lii__ - 14__Bacillus__CBS-494 41,5__7^8__5,3 - 15 Bacteridium CBS-496 93,7__15,2__6,2 - 1 6 Micrococcus__CBS-497__56,4__11,1__5 , 1 • 17 Brevibacterium CBS-717 91,6__3^_1__29,5 —iS--| - -Mocagdi* -4 -N>775 --40,-3 -2,1 --| 13^,2
Esimerkit 19 - 21 & vertailuesimerkit 1 ia 2 16 86202
Kannan N-774 pestyjä bakteerisoluja valmistettiin viljelemällä kantaa aerobisesti alustassa (pH 7,2), jossa oli glukoosia 1%, peptonia 0,5%, hiivauutetta 0,3%, mallasuutetta 0,3% ja ferrosulfaatti-7-hydraattia 0,05%, ja pesemällä saadut solut 0,05M fosfaattipuskurilla. Solut dispergoitiin 0,05 M fosfaattipuskuriin (pH 7,7) pimeässä paikassa bakteeriliuok-sen 22,72 mg/ml, valmistamiseksi.
Yksi (1) ml kumpaakin solususpensiota vietiin 50 ml:n teräsastioihin, ja niihin kumpaankin lisättiin 24 ml 0,05M fosfaattipuskuria (pH 7,7). Syntynyttä solususpensiota säteily-tettiin valonlähteellä, jota käytettiin esimerkissä 1, 0°C:ssa 1-20 tuntia, jossa yhteydessä valoenergiaa säädettiin kuten on osoitettu taulukossa 4 käyttämällä suodinta, jossa on erilaisia optisia alueita sijoitettuna astian yläosaan.
Kuhunkin solususpensioon, jota oli säteilytetty vaolla, lisättiin 25 ml 5% akryylinitriililiuosta (0,05M fosfaatti-puskuriliuoksessa, pH 7,7). Seos altistettiin reaktioon 20 minuutiksi samoissa valon säteilytysolosuhteissa. Vertailun vuoksi, reaktiot suoritettiin samalla tavalla käyttämällä solususpensiota ilman valolla säteilyttämistä tai säteilyt-tämällä valoenergialla 1x10-3 ^uE/g soluja.sekunti.
;; Se määrä akryyliamidia, joka oli näissä reaktioliuoksissa, analysoitiin kvantitatiivisesti kaasukromatografialla reaktionopeuden saamiseksi. Tulokset on esitetty taulukossa 4.
Claims (5)
1. Menetelmä nitrii1iyhdisteen hydratoimiseksi bakteerien toiminnan avulla, jolloin bakteeri ei ole jakautumisolosuh-teissa, ja bakteereilla on nitrilaasiaktiivisuutta nitriili-yhdisteen muuttamiseksi vastaavaksi amidiyhdisteeksi, joka menetelmä käsittää reaktion suorittamisen olosuhteissa, joissa: (a) bakteeri, jolla on nitrilaasiaktiivisuutta, on Gram-positiivisesti värjäytyvä, tunnettu siitä, että (b) bakteerisolujen annetaan vastaanottaa valoenergiaa noin 2xl0“3 - noin lxl0“2 ^uE/g mikrobisolu ja · sekunti sätei-lyttämällä valolla, jonka aallonpituus on noin 300 -noin 450 nm ennen hydratointireaktion päättymistä, ja (c) hydratointireaktio suoritetaan astiassa, joka ainakin ' osaksi koostuu materiaalista, joka ei salli valon kul keutumista lävitseen. 18 86202
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valoenergia on noin 5xl0~3 _ noin lxl0“2 yuE/g bakteerisolu ja·sekunti.
3. Jonkin patenttivaatimusten 1-2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valolla säteilyttäminen suoritetaan ennen ja jälkeen bakteerin saattamisen kontaktiin nitriili-yhdisteen kanssa.
4. Jonkin patenttivaatimusten 1-3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että bakteeri kuuluu sukuun, joka on valikoitu ryhmästä, johon kuuluvat Corynebacterium, Nocardia, Bacillus, Bacteridium, Micrococcus ja Brevibacterium.
5. Jonkin patenttivaatimusten 1-4 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että nitriiliyhdiste valikoidaan ryhmästä, johon kuuluvat asetonitriili, propionitriili, n-butyronit-riili, n-valeronitriili, akryylinitriili, metakryylinitriili, bentsonitriili, syaanipyridiini, malononitriili, sukkino-nitriili, fumaronitriili, klooriasetonitriili ja β-hydroksi-propionitriili. 19 862C2
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP60002725A JPS61162195A (ja) | 1985-01-11 | 1985-01-11 | 微生物によるアミド類の製造法 |
| JP272585 | 1985-01-11 |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI860084A0 FI860084A0 (fi) | 1986-01-08 |
| FI860084L FI860084L (fi) | 1986-07-12 |
| FI86202B true FI86202B (fi) | 1992-04-15 |
| FI86202C FI86202C (fi) | 1992-07-27 |
Family
ID=11537285
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI860020A FI860020A0 (fi) | 1985-01-11 | 1986-01-02 | Foerfarande foer att alstra amider genom anvaendning av mikroorganismer. |
| FI860084A FI86202C (fi) | 1985-01-11 | 1986-01-08 | Foerfarande foer produktion av amider genom anvaendning av mikroorganismer. |
Family Applications Before (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI860020A FI860020A0 (fi) | 1985-01-11 | 1986-01-02 | Foerfarande foer att alstra amider genom anvaendning av mikroorganismer. |
Country Status (6)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0187681B1 (fi) |
| JP (1) | JPS61162195A (fi) |
| BR (1) | BR8600088A (fi) |
| DE (1) | DE3685337D1 (fi) |
| FI (2) | FI860020A0 (fi) |
| SU (1) | SU1568892A3 (fi) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| AU2077392A (en) * | 1991-08-05 | 1993-04-29 | Mitsubishi Kasei Corporation | Process for preparing amides |
| JPH05244968A (ja) * | 1991-08-16 | 1993-09-24 | Mitsui Toatsu Chem Inc | α−ヒドロキシイソブチルアミドの製造法 |
| US7300775B2 (en) | 1999-12-29 | 2007-11-27 | Verenium Corporation | Methods for producing α-substituted carboxylic acids using nitrilases and strecker reagents |
| US7521216B2 (en) | 1999-12-29 | 2009-04-21 | Verenium Corporation | Nitrilases and methods for making and using them |
| US7608445B1 (en) | 1999-12-29 | 2009-10-27 | Verenium Corporation | Nitrilases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
| CA2679503A1 (en) | 2007-03-01 | 2008-09-04 | Verenium Corporation | Nitrilases, nucleic acids encoding them and methods for making and using them |
| CN115558685B (zh) * | 2022-09-28 | 2023-09-29 | 南通博亿化工有限公司 | 一种微生物法生产丙烯酰胺的工艺 |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US3880717A (en) * | 1971-03-30 | 1975-04-29 | Leonid Borisovich Rubin | Method of cultivating microorganisms |
| GB2018240B (en) * | 1978-03-29 | 1982-12-22 | Nitto Chemical Industry Co Ltd | Process for producing acrylamide or methacrylamide utilizing microoganisms |
| JPS6019496A (ja) * | 1983-07-12 | 1985-01-31 | Nitto Chem Ind Co Ltd | 微生物によるアミド類の製造法 |
-
1985
- 1985-01-11 JP JP60002725A patent/JPS61162195A/ja active Granted
-
1986
- 1986-01-02 FI FI860020A patent/FI860020A0/fi not_active Application Discontinuation
- 1986-01-08 FI FI860084A patent/FI86202C/fi not_active IP Right Cessation
- 1986-01-10 BR BR8600088A patent/BR8600088A/pt active Search and Examination
- 1986-01-10 SU SU864017232A patent/SU1568892A3/ru active
- 1986-01-11 DE DE8686100306T patent/DE3685337D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1986-01-11 EP EP86100306A patent/EP0187681B1/en not_active Expired
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| JPH0237B2 (fi) | 1990-01-05 |
| FI86202C (fi) | 1992-07-27 |
| BR8600088A (pt) | 1986-09-23 |
| FI860020A0 (fi) | 1986-01-02 |
| EP0187681A3 (en) | 1988-04-13 |
| FI860084A0 (fi) | 1986-01-08 |
| FI860084L (fi) | 1986-07-12 |
| JPS61162195A (ja) | 1986-07-22 |
| DE3685337D1 (de) | 1992-06-25 |
| SU1568892A3 (ru) | 1990-05-30 |
| EP0187681B1 (en) | 1992-05-20 |
| EP0187681A2 (en) | 1986-07-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EP0187680B1 (en) | Process for producing organic acids by use of microorganisms | |
| FI93858C (fi) | Menetelmä amidin valmistamiseksi mikrobiologisesti | |
| US4532210A (en) | Process for producing hydrogen by alga in alternating light/dark cycle and environmental aerobic/microaerobic conditions | |
| US4908313A (en) | Process for producing amides by use of microoganisms | |
| EP0449648B1 (en) | Process for producing R(-)-mandelic acid and derivatives thereof | |
| FI87579C (fi) | Foerfarande foer framstaellning av amider anvaendande mikroorganismer | |
| JP2676568B2 (ja) | Ｒ（−）−マンデル酸およびその誘導体の製造法 | |
| US3922194A (en) | Process for producing 2-keto-L-gulonic acid | |
| FI86202B (fi) | Foerfarande foer produktion av amider genom anvaendning av mikroorganismer. | |
| US4335209A (en) | Process for preparation of L-tryptophan by enzyme | |
| CN111088043A (zh) | 一种可见光激发、长波长发射的荧光碳点及其制备方法和应用 | |
| KR100269996B1 (ko) | 아미드 화합물의 제조방법 및 거기에 사용하는 미생물 | |
| CN101701243B (zh) | 生物催化法生产r-扁桃酸及其衍生物的方法 | |
| FI86201B (fi) | Foerfarande foer hydratisering nitrilfoerening. | |
| Shibatani et al. | Enzymatic production of urocanic acid by Achromobacter liquidum | |
| JP2004215586A (ja) | ４−ヒドロキシ安息香酸の製法 | |
| US5496715A (en) | Process for preparing indigo | |
| SU1620479A1 (ru) | Штамм бактерий РSеUDомоNаS метнYLIса, используемый дл очистки сточных вод от метанола | |
| Kawashima | Production of [(2-hydroxyethyl) thio] acetic acid from thiodiglycol (2, 2′-thiodiethanol) by resting cells of Candida rugosa IFO 1364 | |
| KR830002328B1 (ko) | 효소에 의한 l-트리프토판의 제조방법 | |
| JPH02100687A (ja) | プロトカテキュ酸およびその塩の製造方法 | |
| KR970065721A (ko) | 생분해성 수지 미세분말과 그 제조방법 | |
| JPH02100689A (ja) | ４−ヒドロキシフタル酸およびその塩の製造方法 | |
| JPH01225486A (ja) | Ｄ−グリセリン酸の製造法 | |
| JP2006158323A (ja) | 微生物によるアミド化合物の製造方法およびそれに使用する微生物、菌体処理物および酵素 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM | Patent lapsed | ||
| MM | Patent lapsed |
Owner name: NITTO KAGAKU KOGYO KABUSHIKI KAISHA Owner name: MITSUBISHI RAYON KABUSHIKI KAISHA |