FI84817C - Foerfarande foer framstaellning av en terapeutiskt aktiv gem-6,6-difluor-1,12-diamino-4,9-diazadodekan. - Google Patents

Description

1 84817

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisen gem-6,6-difluori-1,12-diamino-4,9-diatsadodekaanin valmistamiseksi 5 On hyvin tunnettu havainto, että sellaisten luonnon polyamiinien kuin putreskiinin, spermidiinin ja spermiinin biosynteesi lisääntyy nopeasti jakautuvissa soluissa verrattuna normaaleihin lepotilassa oleviin soluihin. Tiedetään myös, että putreskiinin ja spermidiinin poistaminen 10 johtaa solujen jakautumisen vähenemiseen.

Ornitiini on aineenvaihdunnassa putreskiinin edeltäjä, ja jälkimmäinen on puolestaan spermidiiniä edeltävä aineenvaihduntatuote, ja tämä puolestaan on spermiiniä edeltävä aineenvaihduntatuote. Näitä biokemiallisia muu-15 toksia katalysoivat aineenvaihdunnassa vastaavasti entsyy mit ornitiinidekarboksylaasi, spermidiinisyntaasi ja sper-miinisyntaasi. Lisäksi spermidiini- ja spermiinisyntaasi-entsyymi käyttävät kosubstraattina dekarboksyloitua S-ade-nosyyli-L-metioniiniä, joka on S-adenosyyli-L-metioniini-20 dekarboksylaasientsyymin reaktiotuote. Näiden entsyymien inhibiittoreiden, mukaan luettuna S-adenosyyli-Lmetionii-nidekarboksylaasin inhibiittorit, pitäisi siten toimia putreskiinin ja siitä saatavien korkeampien polyamiinien, nimittäin spermidiinin ja spermiinin, biosynteesin estäji-25 nä ja niiden pitäisi teoriassa olla tehokkaita solujen lisääntymistä vastustavia aineita ja/tai kasvaimia vastustavia aineita.

Kuitenkaan aikaisemmin ornitiinidekarboksylaasin irreversiibelien inhibiittoreiden eikä S-adenosyyli-L-me-30 tioniinidekarboksylaasin, spermidiinisyntaasin ja sper-miinisyntaasin inhibiittoreiden käyttö ei ole osoittautunut täysin tehokkaaksi. Niinpä esimerkiksi putreskiini ja spermidiini eivät ole välttämättömiä solujen elinkykyi-syyden säilymiselle niin kauan kuin jo olemassa oleva 35 spermiinivarasto pysyy suuruudeltaan määrätyn kriittisen 2 84817 tason yläpuolella. Sitä paitsi dekarboksylaasientsyymien täydellinen in vivo -inhiboiminen on vaikeaa niiden suuren vaihtumisnopeuden vuoksi.

Patentinhakijat ovat löytäneet yhdisteitä, jotka 5 vaikuttavat solussa spermiinin toimintoja vastaan. Nämä yhdisteet ovat erittäin tehokkaita solun kasvun estäjiä nopeasti jakautuvissa soluissa. Siten tämän keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet ovat hyödyllisiä solujen lisääntymistä vastustavina ja kasvaimia vastustavina ai-10 neina.

Tämä keksintö koskee menetelmää selektiivisten spermiinin gem-difluorijohdannaisten valmistamiseksi. Tarkemmin sanottuna tämä keksintö koskee menetelmää gem-6,6-difluori-1,12-diamino-4,9-diatsadodekaanin valmistamisek-15 si, jolla on kaava I

H2N-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-0 (CH2) 2-NH-CH ->-CH2-CH2-NH2 (I) / \ "

F F

20 ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmis tamiseksi .

Kuten yllä olevasta yleisestä kaavasta (I) ilmenee, muodostaa tämän keksinnön mukaisesti valmistettu yhdiste erityisen gem-difluorispermiinien luokan yhdessä farma-25 seuttisesti hyväksyttävien suolojensa kanssa. Kuitenkin käytetään koko ajan täsmällisempää nimistöä ja yhdistettä nimitetäängem-difluori-1,12-diamino-4,9-diatsadodekaanik-si.

Farmaseuttisesti hyväksyttäviin suoloihin sisälty-30 vät sellaiset yllä olevan kaavan (I) mukaisen emäsyhdis-teen happoadditiosuolat orgaanisten tai epäorgaanisten happojen kanssa, jotka eivät ole myrkyllisiä. Esimerkkejä epäorgaanisista hapoista ovat kloorivety- bromivety-, rikki- ja fosforihappo samoin kuin sellaiset metallisuolat ·. 35 kuin dinatriumortofosfaatti ja kaliumvetysulfaatti. Esi- 3 84817 merkkejä orgaanisista hapoista, jotka muodostavat sopivia suoloja, ovat sellaiset mono-, di- ja trikarboksyylihapot kuten etikka-, glykoli-, maito-, palorypäle-, maloni-, meripihka-, glutaari-, fumaari-, omena-, viini-, sitruu-5 na-, askorbiini-, maleiini-, hydroksimaleiini-, bent- soe-, p-hydroksibentsoe-, fenyylietikka-, kaneli-, sali-syyli-, 2-fenoksibentsoehappo ja sellaiset sulfonihapot kuin metaanisulfonihappo ja 2-hydroksietaanisulfonihappo. Tällaiset suolat voivat esiintyä joko hydratoituina tai 10 käytännöllisesti katsoen vedettöminä. Keksinnön mukaiselle menetelmälle kaavan (I) mukaisen yhdisteen valmistamiseksi on tunnusomaista se, mitä patenttivaatimuksessa 1 esitetään.

Kaavan (I) mukainen yhdiste valmistetaan johdon-15 mukaisessa järjestyksessä lähtien vastaavasta 2,2-difluo- ri-1,4-butaanidiolista, jolla on kaava (II)

H0-CHo-C-( CH- )o-0H

2 /\ 2 2 (II)

F F

20 Tämä yhdiste valmistetaan helposti antamalla 2,2-difluori-meripihkahapon reagoida trifluorietikkahapon kanssa, jolloin muodostuu vastaava 2,2-difluorimeripihkahappoanhydri-di. Anhydridin lohkaiseminen metanolilla johtaa vastaavan 25 metyyli-2,2-difluorisukkinaatin muodostumiseen. Vastaavan vapaan happoryhmän pelkistäminen boraanimetyylisulfidi-kompleksin avulla johtaa vastaavan alkoholin, so. metyyli- 2,2-difluori-4-hydroksibutanoaatin muodostumiseen. Este-riryhmän pelkistäminen, esimerkiksi käyttämällä natrium-30 boorihydridiä, johtaa halutun lähtöaineen, so. 2,2-difluo-ri-1,4-butaanidiolin (II) muodostumiseen.

Kaavan (I) mukainen 6,6-difluori-l,12-diamino-4,9-diatsadodekaani voidaan valmistaa seuraavan synteesisarjan mukaisesti: * 84817 pht = ο o o 5 Mes = CH0-S- 3 n 0 0 _ *

Tos = CH,^—^0/- S

0 10

F F F F F F

\ / \ / W

HO-CH2-C-(CH2)2-OH -. MesO-CH2-C-(CH2)2-OMe* -* PbtN-CH2-C-<CH2)2-NPht II 3 4 15

F F F *F

\ / \ / 20 HW-CH2-C-(CH2)2NH i- H2N-CH2-C-(CH2)2-NH2

Tos Tos 6 5 2 \ Br(CH2)3MPht 25 \

F\/ F

PhtN-( CH2 )3-N-CH2-C-{ CH2 )2-K-( CH2 )3-NPht Tos Tos 2 30 ...

F F

.:. \ / H2H-{ CH2)3-HH-CH2-C-(CH2)-HH-( CH2)3-HHj -:. 35 i 5 84817

Yhdistettä 2,2-difluori-l,4-butaanidioli (II) käsitellään kahdella ekvivalentilla metaanisulfonyylikloridia pyridiinin läsnäollessa, jolloin muodostuu 1,4-bis-metaa-nisulfonyylioksi-2,2-difluoributaani (3). (3):n reaktio 5 kahden ekvivalentin kanssa kaliumftaali-imidiä sellaisessa liuottimessa kuin dimetyyliformamidi johtaa vastaavan 2,2-difluori-1,4diftaali-imidobutaanin (4) muodostumiseen.

(4):n kuumentaminen hydratsiinin kanssa sellaisessa liuottimessa kuin etanoli poistaa suojaavat ftaloyyliryhmät, 10 jolloin saadaan tärkeä välituote, 2,2-difluori-l,4-diami-nobutaani (5), joka voidaan helposti eristää dihydroha-logenidisuoloinaan. Yhdiste 2,2-difluori-l,4-diaminobutaa-ni on tärkeä välituote, joka on hyödyllinen valmistettaessa 6,6difluori-l,12-diamino-4,9-diatsadodekaaneja. Koska 15 tämä 2,2-difluori-l,4-diaminobutaani on tällainen hyödyllinen ja uusi yhdiste, sisällytetään se tässä erityisesti patenttivaatimuksiin osana tätä keksintöä.

Jotta vältettäisiin runsaammin alkyloitujen tuotteiden muodostuminen, suojataan primaarinen amiini (5) 20 normaalilla tavalla p-tolueenisulfonyylikloridilla, jol loin saadaan vastaava 2,2-difluori-l,4-di-p-tolueenisulfo-nyyliaminobutaani (6). Alkyloimalla suojattu amiini (6) kahdella ekvivalentilla 3-bromipropyyliftaali-imidiä vedettömissä olosuhteissa sopivassa aproottisessa liuot-25 timessa, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidissa, natrium- jodidin ja kalium-tert-butoksidin läsnäollessa saadaan vastaava 6,6-difluori-l,12-diftaali-imido-4,9-di-p-tolu-eenisulfonyyli-4,9-diatsadodekaani (7).

Tästä 4,9-diatsadodekaanijohdannaisesta (7) pois-30 tetaan suojaus kahdessa vaiheessa, kuumentaen ensimmäises sä vaiheessa hydratsiinin kanssa sellaisessa liuottimessa kuin etanoli ftaloyyliryhmien poistamiseksi. Näin saatuja tuotteita kuumennetaan sitten HBr:n vesiliuoksen kanssa suojaavien tosyyliryhmien poistamiseksi. Tällä tavoin saa-: 35 tu lopputuote on vastaava 6,6-difluori-l,12-diamino-4,9- 6 84817 diatsadodekaani (I), joka voidaan helposti eristää vastaavina tetrahalogenidisuoloinaan, mieluimmin tetrahydro-bromidisuoloinaan.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistetut yhdisteet 5 ovat hyödyllisiä solujen lisääntymistä vastustavina ja kasvaimia vastustavina aineina. Näiden yhdisteiden vaikutusmekanismia ei tunneta. Kuitenkin tiedetään, että kun tämän keksinnön mukaisia yhdisteitä lisätään kasvavien rotan hepatoomakudosviljelmän (HTC) solujen viljelyainee-10 seen, vähenee solujen lisääntyminen selvästi. Käytettäessä yhdisteitä yhdessä tunnettujen ornitiinidekarboksylaasin inhibiittoreiden, kuten esimerkiksi 2-difluorimetyyli-2, 5-diaminopentaanihapon (DFMO) tai [2R,5R]-6-heptyyni-2,5-diamiinin (R,R-MAP) kanssa, estyy solujen lisääntyminen 15 vielä enemmän.

Keksinnön mukaisesti valmistettujen yhdisteiden on myös todettu kykenevän hidastamaan kasvainsolujen jakautumista, kun niitä on testattu normaaleissa eläinten kasvaintyypeissä. Hyvänä pidetty näiden yhdisteiden käyttöta-20 pa on käyttää niitä yhdessä DFM0:n tai [R,R]-MAP:in kanssa tai yhdessä muiden hoitomenetelmien tai -aineiden kanssa, joiden tiedetään vaikuttavan polyamiinien aineenvaihduntaan hoidettaessa eläinten kasvaimia. Tässä yhteydessä tarkoitetaan termillä eläimet lämminverisiä eläimiä, kuten 25 esimerkiksi hiiriä, rottia, koiria, kissoja, marsuja, lehmiä, hevosia ja ihmisiä.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettuja yhdisteitä voidaan käyttää sekä ennaltaehkäisyyn että hoitoon. Hoito-tarkoituksessa annettavan aktiivisen aineen määrä voi 30 vaihdella laajojen rajojen sisällä ja määräytyy sellaisten seikkojen kuin hoidettavan eläinlajin, sen iän, terveyden, sukupuolen, painon, luonteen ja hoidettavan tilan vakavuuden perusteella. Yleensä annettava hoidollisesti tehokas määrä aktiivista ainetta on noin 0,2-5 grammaa ja mieluim-35 min 0,5-3 grammaa päivässä. Ennaltaehkäisyä varten voi- 7 84817 daan antaa vastaavia pienempiä annoksia, jotka ovat 0,05-2 grammaa päivässä.

Kun antaminen tapahtuu yhdessä muiden ornitiini-dekarboksylaasin inhibiittoreiden, kuten esimerkiksi 5 DFMOtn tai [R,R]-MAP:in kanssa, annetaan ko. gem-6,6-di-fluori-1,12-diamino-4,9-diatsadodekaania 0,1-4 grammaa ja ornitiinidekarboksylaasin inhibiittoria 0,5-10 grammaa päivässä.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistettu yhdiste voi-10 daan antaa suun kautta. Suun kautta annettaessa ovat esimerkiksi sopivat annostustasot 2-50 mg kiloa kohti ruumiin painoa. Mieluimmin annetaan 10-20 mg gem-6,6-difluo-ri-tetrahalogeeni-1,12-diamino-4,9-diatsadodekaania kiloa kohti suun kautta päivässä jaettuina annoksina. Silloin 15 kun lääke annetaan ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti, käytetään vastaavia pienempiä annoksia. Kun antaminen tapahtuu yhdessä ornitiinidekarboksylaasin inhibiittoreiden kanssa, voidaan yhdisteet antaa standardiannostus+ yksikkömuodoissa, kuten esimerkiksi tabletteina, kapse-20 leina, rakeina, pastilleina, eliksiireinä, emulsioina, suspensioina ja erilaisina laskimon sisään, lihakseen tai ihon sisään tarkoitettuina suspensioina.

. . Suun kautta annettaessa on parhaana pidetty annos- tusmuoto tabletti tai kapseli. Kussakin annostusyksikössä - 25 oleva aktiivisen aineosan määrä vaihtelee luonnollisesti riippuen kysymyksessä olevasta annostusmuodosta. Yleensä yksi annostusyksikkö sisältää 10-500 mg aktiivista aineosaa siinä olevien erilaisten farmaseuttisten kantajaa!-neiden lisäksi. Tabletit, jotka sisältävät 100-400 mg ak-30 tiivistä aineosaa, ovat parhaana pidetty annostusyksikkö ja voidaan antaa kaksi tai kolme tai neljä kertaa päivässä.

Valmistettaessa kiinteitä annostusmuotoja, kuten esimerkiksi tabletteja, sekoitetaan aktiivinen aineosa 35 yleensä tavanomaisten farmaseuttisten kantaja- tai täyte- 8 84817 aineiden, kuten esimerkiksi gelatiinin, erilaisten tärkkelysten, laktoosin, kalsiumfosfaatin tai jauhemaisen sokerin, kanssa. Termi farmaseuttinen kantaja-aine tarkoittaa tässä myös liukastavia aineita, joita käytetään paranta-5 maan tablettimäärien solumista ja jotka estävät tabletti-materiaalin tarttumisen tablettimuottien ja lävistimien pintoihin. Sopivia liukastavia aineita ovat esimerkiksi talkki, steariinihappo, kalsiumstearaatti, magnesiumstea-raatti ja sinkkistearaatti. Farmaseuttisen kantaja-aineen 10 määritelmään sisältyvät tässä myös hajottavat aineet, joita lisätään edistämään tablettien rikkoutumista ja liukenemista antamisen jälkeen, samoin kuin väriaineet ja/tai makua parantavat aineet, joita käytetään parantamaan tablettien esteettisiä ominaisuuksia ja tekemään ne potilaal-15 le miellyttävämmiksi.

Valmistettaessa nestemäisiä annostusykslkkömuotoja ovat sopivia nestemäisiä kantaja-aineita vesi ja sellaiset alkoholit kuten etanoli, bentsyylialkoholi ja polyetylee-niglykolit, joko lisäten pinta-aktiivista ainetta tai il-20 man tällaista. Yleensä ovat parhaina pidettyjä nestemäisiä kantaja-aineita, erityisesti ruiskevalmisteisiin, vesi, fysiologinen suolaliuos, dekstroosi- ja glykoliliuokset, kuten esimerkiksi propyleeniglykolin vesiliuos tai poly-etyleeniglykolin vesiliuos.

25 Steriileinä ruiskeliuoksina käytettävät nestemäiset valmisteet sisältävät yleensä noin 0,5-25 paino-%, ja mieluimmin noin 1-10 paino-% aktiivista aineosaa liuoksessa. Eräissä ulkonaisesti käytettävissä ja ruoansulatuskanavan ulkopuolisesti käytettävissä valmisteissa voidaan käyttää 30 erilaisia öljyjä kantaja- tai täyteaineina. Esimerkkejä tällaisista öljyistä ovat mineraaliöljyt, glyseridiöljyt, kuten esimerkiksi laardiöljy, turskanmaksaöljy, maapähkinäöljy, seesamiöljy, maissiöljy ja soijaöljy. Liukenemattomia yhdisteitä varten voidaan lisätä suspendoivia ainei-35 ta samoin kuin aineita, joiden avulla säädetään viskosi- 9 84817 teettia, kuten esimerkiksi magnesiumalumiinisilikaattia tai karboksimetyyliselluloosaa. Näiden täyteaineiden lisäksi voidaan myös lisätä puskureita, antiseptisiä aineita ja emulgoivia aineita.

5 Ruoansulatuskanavan ulkopuolisesta käytettävissä annostusyksikkömuodoissa sopii aktiivisen aineen osuuden olla 0,05 - noin 20 paino-%, mieluimmin noin 0,1-10 pai-no-% nesteen koko koostumuksesta, jolloin toinen komponentti tai toiset komponentit ovat mitä tahansa edellä 10 mainittuja farmaseuttisia kantaja-aineita. Jotta ärsytys ruiskutuskohdassa saataisiin mahdollisimman vähäiseksi tai poistetuksi, voivat tällaiset valmisteet sisältää ionoi-tumatonta pinta-aktiivista ainetta, jonka hydrofiili-lipo-fiili-tasapaino (HLB) on noin 12-17. Pinta-aktiivisen ai-15 neen määrä on tällaisissa valmisteissa noin 5-15 paino-%. Pinta-aktiivinen aine voi olla yksi ainoa komponentti, jolla on yllä mainittu HLB, tai kahden tai useamman sellaisen komponentin seos, joilla on haluttu HLB. Esimerkkejä pintaaktiivisista aineista, jotka sopivat ruoansulatus-20 kanavan ulkopuolisesti käytettäviin valmisteisiin, ovat polyoksietyleenisorbitaanirasvahappoestereiden luokka, kuten esimerkiksi sorbitaanimono-oleaatti, ja suuren mole-kyylipainon omaavat etyleenioksidin adduktit hydrofobisen emäksen kanssa, jotka on muodostettu antamalla propyleeni-25 oksidin kondensoitua propyleeniglykolin kanssa.

Tässä kuvattua keksintöä valaisevat yksityiskohtaisemmin seuraavat erityiset valmistusesimerkit.

6,6-difluorl-l,12-diamino-4,9-dlatsadodekaaninval-mlstus 30 2,2-difluori-1,4-butaanidioli 2,2-difluorimeripihkahappoa (120 g, 0,78 moolia) ja trifluorietikkahappoanhydridiä (540 ml) kuumennetaan palautus jäähdyttäen (hauteen lämpötila 80 °C) 2 tunnin ajan. Suurin osa trifluorietikkahaposta tislataan pois käyttäen 35 lyhyttä Vigreux-kolonnia, viimeiset jäänteet poistetaan 10 8481 7 vakuumissa (12 mmHg, 50 °C) ja lopuksi puhdistamalla kaksi kertaa hiilitetrakloridilla. öljymäinen jäännös jähmettyy raaputettaessa sitä petrolieetterin kanssa. Suodattamalla ja pesemällä petrolieetterillä saadaan 2,2-difluorimeri-5 pihkahappoanhydridi heikosti violetteina kiteinä: 98 g (92 %).

2,2-difluorimeripihkahappoanhydridi (98 g, 0,72 moolia) liuotetaan dikloorimetaaniin ja liuos lisätään hitaasti, sekoittaen metanoliin, joka on jäähdytetty jää-10 hauteessa. Seosta pidetään huoneen lämpötilassa yli yön, haihdutetaan ja puhdistetaan kaksi kertaa hiilitetrakloridilla, jolloin saadaan metyyli-2,2-difluorisukkinaatti hiukan ruskehtavana öljynä: 121 g (100 %).

4 l:n pullossa, joka on varustettu palautusjäähdyt-15 täjällä ja 1 l:n tiputussuppilolla, lisätään liuos, jossa on BH3.Me2S-kompleksia (10 M, 88 ml) kuivassa dikloori-metaanissa (1 1) hitaasti 2 tunnin aikana sekoitettuun liuokseen, jossa on metyyli-2,2-difluorisukkinaattia (120 g, 0,714 moolia) kuivassa tetrahydrofuraanissa 20 °C:ssa. 20 Sen jälkeen kun on kuumennettu (hauteen lämpötila 80 eC) palautusjäähdyttäen noin 15 tunnin ajan, annetaan seoksen jäähtyä huoneen lämpötilaan ja lisätään hitaasti metano-lia (1 1). Haihdutettaessa saadaan metyyli-2,2-difluori4-hydroksibutyraatti öljynä, jota puhdistetaan metanolilla 25 (1 1) ja lopuksi käyttäen CCl4:a, jolloin saadaan keltainen öljy: 100 g (92 %).

Kylmään (O °C) liuokseen, jossa on natrium-boorlhydridiä (10,3 g, 0,272 moolia) etanolissa, lisätään hitaasti liuos, jossa on metyyli-2,2-difluori-4-hydroksi-30 butyraattia (55 g, 0,36 moolia) etanolissa, pitäen reak-tioseoksen sisäinen lämpötila välillä -5 °C - O °C. Seosta sekoitetaan 1 tunnin ajan O °C:ssa, minkä jälkeen lisätään varovasti noin 4 N HC1 -kaasun metanoliliuos (200 ml). Nat-riumkloridi suodatetaan, metanoli poistetaan vakuumissa ja 35 jäännös liuotetaan etanoliin. Lisää NaCl poistetaan taas il 8481 7 suodattamalla (kalvosuodatin) ja haihduttamalla suodos saadaan yhdiste 2,2-difluori-l,4-butaanidioli värittömänä öljynä, kun tislataan Kugelrohr-laitteessa olosuhteissa 150 °C/ 0,05 mmHg; 41 g (90 %).

5 2,2-difluori-l,4-diaminobutaanl

Sekoitettuun seokseen, jossa on 2,2-difluori-l,4-butaanidiolia (12,97 g, 103 mM), kuivaa pyridiiniä (65 ml) ja dikloorimetaania (200 ml), lisätään hitaasti liuos, jossa on metaanisulfonyylikloridia (23,6 g) dikloorimetaa-10 nissa (50 ml). Sekoittamista jatketaan yli yön ja seos pestään 2 N HCl-liuoksella (kaksi kertaa), 10 % NaHC03:n vesiliuoksella, kunnes se on neutraali, ja lopuksi vedellä. Orgaaninen liuos kuivataan (MgS04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan 1,4-bis-metaanisulfonyylioksi-2,2-difluo-15 ributaani kellertävänä öljynä (25,4 g, 87,5 %), joka kiteytyy raaputettaessa kuivan eetterin kanssa: valkeita kiteitä, 22,3 g (77 %).

Yhdistettä 1,4-bis-metaanisulfonyylioksi-2,2-di- fluoributaani (66 g, 234 mM), kaliumftaali-imidiä (97 g, 20 10 %:n ylimäärä) ja kuivaa DMF:a (700 ml) sekoitetaan ja kuumennetaan (hauteen lämpötila 110 °C) typpikaasun alla 110 tunnin ajan. Suurin osa DMF:stä poistetaan vakuumissa (öljypumppu) ja jäännökseen lisätään vettä. Saostunut materiaali suodatetaan, pestään kolme kertaa vedellä, liuo-25 tetaan kloroformiin ja pestään 1 N NaOH-liuoksella (kaksi kertaa) ja suolavedellä (kaksi kertaa). Kun orgaaninen liuos on kuivattu (Na2S04) ja konsentroitu, alkaa yhdiste 2,2-difluori-l,4-diftaali-imidobutaani kiteytyä. Lisätään heksaania, muodostuva kiinteä aine otetaan talteen ja pes-30 tään eetterillä, jolloin saadaan valkeita kiteitä: 69,55 g (77 %).

Typpikaasun alla olevaa seosta, jossa on 2,2-di-fluori-1,4-diftaali-imidobutaania (69,55 g, 180,6 mM), tetrahydrofuraania (361 ml) ja 361 ml 1 N hydratsiinihyd-35 raatin etanoliliuosta, kuumennetaan tehokkaasti sekoittaen 12 8481 7 yli yön 90 °C:ssa (hauteen lämpötila). Sen jälkeen kun on lisätty 6 N HC1 (700 ml), jatketaan sekoittamista ja kuumentamista 1,5 tunnin ajan. Reaktioseos jäähdytetään (jää-haude) ja saostuma suodatetaan (etanolipesu). Suodos haih-5 dutetaan, jäännös otetaan veteen, suodatetaan ja haih dutetaan jälleen. Menettely toistetaan vielä kerran käyttäen kalvosuodatinta (Millipore). Jäännös puhdistetaan isopropanolilla (kaksi kertaa) ja etanolilla (kaksi kertaa) jäljellä olevan veden poistamiseksi. Uuttamalla läm-10 mittäen etanolilla ja suodattamalla sitten näin saatu tuote saadaan valkeita kiteitä, jotka pestään peräkkäin etanolilla, asetonilla ja eetterillä: 30,9 g (87 %). Tämä materiaali uudelleenkiteytetään liuottamalla se mahdollisimman pieneen määrään kuumaa vettä (noin 50 ml), suodat-15 tamalla ja lisäämällä etanolia, jolloin muodostuu puhdasta 2,2-difluori-l, 4-diaminobutaania dihydrokloridisuolana: 22 g (61,8 %).

Laskettu yhdisteelle C4H12C12F2N2: C 24,38; H 6,14; N 14,22

Saatu: C 24,33; H 5,19; N 14,24 20 6,6-difluori-l, 12-diftaali-imido-4,9-di-p-tolueeni- sulfonyyli-4,9-dlatsadodekaani

Seokseen, jossa on 2,2-difluori-l,4-diaminobutaani-dihydrokloridia (1,57 g, 8 mM), trietyyliamiinia (3,23 g, 4 ekvivalenttia) ja kuivaa dikloorimetaania, lisätään hi-25 taasti sekoittaen liuos, jossa on tolueenisulfonyyliklori-dia (3,04 g, 2 ekvivalenttia) dikloorimetaanissa. Sen jälkeen kun on sekoitettu huoneen lämpötilassa yön ajan, lisätään vielä dikloorimetaania. Reaktioseos pestään 1 N HClliuoksella (kaksi kertaa), suolavedellä (kaksi kertaa), 30 kuivataan (Na2S04) ja haihdutetaan, jolloin saadaan val-keitä kiteitä: 3 g. Saatua materiaalia uutetaan lämmittäen eetterillä ja pestään huolellisesti eetterillä, jolloin saadaan puhdasta 2,2-difluori-l,4-di-p-tolueenisulfonyyli-aminobutaania: 2,45 g (71 %).

35 Typpikaasun alla lisätään kalium-tert.-butoksidia i3 84 81 7 (1,3 g, 2 ekvivalenttia) sekoitettuun liuokseen, jossa on 2,2-difluori-1,4-di-p-tolueenisulfonyyliaminobutaania (2,45 g, 5,67 mM) kuivassa dimetyyliformamidissa (5 ml). 30 minuutin kuluttua huoneen lämpötilassa lisätään vielä 5 dimetyyliformamidia ( 5 ml), N-3-bromipropyyliftaali-imidiä (3,04 g, 2 ekvivalenttia) ja natriumjodidia (170 mg). Seosta sekoitetaan yli yön, minkä jälkeen dimetyyliform-amidi poistetaan vakuumissa (öljypumppu). Jäännökseen lisätään vettä (250 ml) ja saostuma suodatetaan, pestään 10 vedellä ja kuivataan P205:n avulla: 4,57 g. Raaka materiaali uudelleenkiteytetään kloroformi/eetteristä, jolloin saadaan puhdasta 6,6-difluori-l,12-diftaali-imido-4,9-di-p-tolueenisulfonyyli-4,9-diatsadodekaania valkeina kiteinä: 3,45 g (75 %).

15 6,6-difluori-l,12-dlamino-4,9-diatsadodekaanl

Seosta, jossa on 6,6-difluori-l,12-diftaali-imido- 4,9-di-p-tolueenisulfonyyli-4,9-diatsadodekaania (3,4 g, 4,22 mM), etanolia (8,5 ml) ja 8,5 ml 1 N hydratsiinihyd-raatin etanoliliuosta, sekoitetaan ja kuumennetaan (hau-20 teen lämpötila: 90 °C) yli yön. Haihduttamalla ja puhdistamalla kahdesti metanolilla saadaan jäännös, joka liuotetaan liuotinseokseen, jossa on vettä (20 ml), metanolia (20 ml) ja väkevää HC1 (40 ml), ja kuumennetaan (hauteen lämpötila: 90 °C) palautusjäähdyttäen 3 tunnin ajan. Reak-25 tioseos jäähdytetään, suodatetaan ja haihdutetaan ja jäännös liuotetaan kuumaan 1 N HC1-liuokseen. Liuos suodatetaan, suodos haihdutetaan ja jäännös puhdistetaan isopro-panolilla (kaksi kertaa) ja etanolilla (kaksi kertaa). Jäännös liuotetaan etanoliin, lisätään eetteriä ja haih-30 duttamalla liuotin saadaan 1,12-diamino-6,6-difluori4,9-di-p-tolueenisulfonyyli-4,9-diatsadodekaania valkeana kiteisenä vaahtona: 2,7 g (kvantitatiivinen saanto).

Yhdistettä 1,12-diamino-6,6-difluori-4,9-di-p-to-lueenisulfonyyli-4,9-diatsadodekaani (2,7 g, 4,36 mM) ja 35 47 % HBr:n vesiliuosta kuumennetaan (hauteen lämpötila: i4 8 4 81 7 110 °C) palautusjäähdyttäen 17 tunnin ajan. Kun liuos on jäähdytetty huoneen lämpötilaan, se uutetaan huolellisesti eetterillä (kolme kertaa) ja lopuksi kloroformilla. Haihduttamalla vesifaasi ja puhdistamalla sen jälkeen iso-5 propanolilla (kaksi kertaa) ja etanolilla (kaksi kertaa) saadaan kiinteä jäännös, jota uutetaan lämmittäen asetonilla, otetaan talteen ja pestään asetonilla (kolme kertaa), etanolilla (kolme kertaa) ja lopuksi eetterillä: valkeita kiteitä, 1,8 g (74 %). Tämä materiaali kiteyte-10 tään uudelleen liuottamalla kuumaan (80 °C) vettä sisältävään etanoliin (100 ml, H20:etanoli 1:9), suodattamalla paperin lävitse ja lisäämällä vielä etanolia (10-20 ml), jolloin saadaan haluttua 6,6-difluori-l,12-diamino-4,9-diatsadodekaania tetrahydrobromidisuolana: valkeita kitei-15 tä 1,2 g (49 %).

Laskettu yhdisteelle C10H28Br4F2N4: C 21,37; H 5,02; N 9,97

Saatu: C 20,97; H 4,75; N 10,01 6,6-difluori-l,12-diamino-4,9-diatsadodekaanin solujen lisääntymistä vastustavan vaikutuksen 20 osoittaminen

Morris-rotan hepatooma 7288C (HTC) -soluja kasvatetaan rutiininomaisesti suspensioviljelmänä Swim'in 77 -vil-jelyaineessa, johon on lisätty 10 % (tilavuus/tilavuus) dialysoitua hevosen seerumia, 11,0 mM glukoosia, 2 mM gluta-: 25 miinia, 0,057 mM kystiiniä, 5,9 mM NaHC03 ja 50 mM N-tris- (hydroksimetyyli)metyyliglysiiniä. HTC-soluviljelmiä in-kuboidaan siten, että läsnä on lpm tai 10pm yhdistettä 6,6-difluori-1,12-diamino-4,9-diatsadodekaani, tai ilman tätä yhdistettä ja havainnoidaan 11 päivän ajan. Soluviljelyalus-30 ta vaihdetaan päivänä 2, jotta solut saataisiin pidettyä logaritmisen kasvun vaiheessa. Solujen lukumäärä määritetään kulloinkin laskemalla solut ja suhteellinen solunkasvu lasketaan ottaen huomioon käytetyt laimennuskertoimet. Solun-kasvun inhiboitumisprosentti lasketaan seuraavan lausekkeen 35 mukaan: is 8481 7

Nhn-N.o 100 - 100 —_ί_ Ν η-Ν ο c c 5 jossa

NcO on kontrolliviljelmien suhteellinen kasvu, kun aika = 0

Ncn on kontrolliviljelmien suhteellinen kasvu, 10 kun aika = n

NtO on testiviljelmien suhteellinen kasvu, kun aika = 0

Ntn on testiviljelmien suhteellinen kasvu, kun aika = n.

15 Taulukosta I ilmenee, että kun viljelyalustaan on lisätty lpm 6,6-difluori-l,12-diamino-4,9-diatsadodekaania, on solujen lisääntyminen inhiboitunut 54 %:lla 4 päivän kuluttua, kun taas solun kasvu on saman ajanjakson kuluttua inhiboitunut 77 %:lla, kun lääkettä on lisätty 10pm.

20 16 8481 7 w--------

-P

-μ

<D

. m O «Ο ΙΛ C-* n -H S Ό ΙΛ f*

•H TO

d s -d a) 3 >i +J e 3 -H * Ή O < 0 Λ 0 tn h 2

1 X

U d :<Ö E-ι -h +»

tC -P

C QJ

1u ? . ti O O rn in <* tt) > -p tn Ό t cm in tn tn +j -h a: ro -p to 3 a; e x: -p e CU >i

3 3 in E

rV I-10-5 •H O i-i > Π3 W d, r- > e ------------—

g J

s ί! -¾ tn O »f «f O n <2 -H o cm σ> m o rO Ό r> r· f< r> 0 x! i- 5- T- ro O' Ό >5

(tS

tn E

-P * to ^ £ ° 'O r- 1 3 σ > *» tn

e to :nJ

i a: -p

o -P

- ‘. C Cd) . . Ή <ϋ -P O MD O O' 00 .. 6 C tn o ro m cm σ (0 Ή Ή ^ : -h γ-η to r r cm in vo

-- - TO rH XI

: : i o >i - - (N CL) - +J e xt s Π 3 Λ - I QJ 00 f- ' -HQ) P tn -h * " H O Ή i—f 30 .Η O σ ro t£> ί- Ο M >1 O O CO VO VO t— A! m -P P ^ A! Hd -P r r (O l£) rf ____: 3 to :<d d T-

rH I (tS O

3 vo w W

. * -' . ffl * Ή E-l VO .-! *- - - - - - - - - - - - - * - ’ ‘ :nj

“ * * *H

>

H

:3 O r- CM ro Ά : <ΰ

M

•H

_ < ____ i7 8481 7

Keksinnön mukaisesti valmistettua fluorattua yhdistettä voidaan käyttää ydinmagneettisen resonanssin (NMR) kuvausaineina, jotka soveltuvat käytettäviksi kasvainkudoksen löytämiseen ja diagnosointiin F19-NMR in vivo-spektros-5 kopian avulla ja kasvaimen kuvaamiseen F19-NMR-kerroskuvauk-sen avulla.

Toinen hyvänä pidetty ryhmä NMR-kuvausaineita, jotka ovat hyödyllisiä minkä tahansa imettäväisten kasvainten löytämisessä ja paikallistamisessa, ovat difluorivälituotteet, 10 joita käytetään kaavan I mukaisen fluoratun yhdisteen valmistukseen, erityisesti 2,2-difluori-1,4-butaanidiamiini. Tätä käyttötarkoitusta varten yhdisteitä voidaan antaa määrä, joka on 0,2-5 g.

Claims (2)

1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisen gem-6,6-difluori-1,12-diamino-4,9-diatsadodekaanin valmistamisek-5 si, jolla on kaava H2N-CH2-CH2-CH2-NH-CH2-C- ( CH2 ) 2-nh-ch2-ch2-ch2-nh2 F F 10 ja sen farmaseuttisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) 2,2-difluori-l,4-butaanidioli, jolla on kaava

15 HO-CH,-C-(CH2)2OH F F saatetaan reagoimaan metaanisulfonyylikloridin kanssa, jolloin muodostuu vastaava 1,4-bis-metaanisulfonyylioksi- 20 2,2-difluoributaani; b) saatetaan l,4-bis-metaanisulfonyylioksi-2,2-di-fluoributaani reagoimaan kaliumftaali-imidin kanssa, jolloin saadaan vastaava 2,2-difluori-l,4-diftaali-imidobu-taani; 25 c) kuumennetaan 1,4-diftaali-imidobutaanijohdan naista hydratsiinin kanssa, jolloin muodostuu vastaava 2,2-difluori-l,4-diaminobutaani; d) suojataan vapaa amiini p-tolueenisulfonyyliklo-ridilla, jolloin muodostuu vastaava 2,2-difluori-4,9-di- 30 p-tolueenisulfonyyliaminobutaani; e) alkyloidaan 4,9-di-p-tolueenisulfonyyliaminobu-taani kahdella ekvivalentilla 3-bromipropyyliftaali-imidiä, jolloin muodostuu vastaava 6,6-difluori-l,12-di-ftaali-imido-4,9-di-p-tolueenisulfonyyli-4,9-diatsadode- 35 kaani; i9 8481 7 f) kuumennetaan 4,9-diatsadodekaania hydratsiinin kanssa suojäävien ftaloyyliryhmien poistamiseksi, minkä jälkeen kuumennetaan Hbr:n vesiliuoksen kanssa suojäävien p-tolueenisulfonyyliryhmien poistamiseksi; ja eristetään 5 tästä haluttu 6,6-difluori-l,12-diamino-4,9-diatsadode-kaani.

2. Yhdiste 2,2-difluori-l,4-diaminobutaani ja sen hydrokloridisuola. 10 20 848 1 7