FI82058C - Nytt foerfarande foer framstaellning av sfingocinderivat. - Google Patents

Description

1 82058

Uusi menetelmä sfingosiinijohdannaisten valmistamiseksi EP-patenttihakemuksen 84114415.7 (j ulkaisunumero 146 810) kohteena ovat uudet sfingosiinijohdannaiset, 5 joilla on kaavat R1 m/ HN' λ/ /y"

10 H0-1 I * ja K0— o L

0 OH _ 0 Oh <l> &

HO HO

OH (I)-D OH (I)-L

15 ja niiden valmistusmenetelmä.

Yllä olevissa kaavoissa R1 on 14 - 24 hiiliatomia sisältävän rasvahapon asyyliryhmä tai vastaava asyyliryh-mä, jonka α-asemassa on hydroksyyliryhmä tai jossa on yksi 20 tai kaksi cis-konfiguraatiossa olevaa kaksoissidosta ja R2 on pentadekanyyli- tai heptadekanyyliryhmä tai vastaava C15- tai C17-ryhmä, jossa on yksi, kaksi tai kolme kaksoissidosta, joista kulloinkin yksi on 1,2-asemassa ja trans-konfiguraatiossa ja toinen tai toiset, mikäli niitä on, 25 ovat cis-konfiguraatiossa.

Näillä yhdisteillä on erytro-konfiguraatio ja ne vastaavat jo tunnettuja neutraaleja glykosfingolipidejä. Niillä on haavojen parantumista edistäviä, soluja ja kudoksia uudistavia ominaisuuksia ja ne sopivat käytettävik-30 si eri alkuperää olevien haavojen terapeuttiseen käsittelyyn, erityisesti kun kyseessä ovat huonosti tai hitaasti paranevat haavat tai haavaumat. Ne saavat todella aikaan erityisesti haavoihin ulkoisesti käytettyinä uuden kudoksen, jossa on hyvä verenkierto, eikä häiritseviä arpia 35 synny.

Yllä mainittujen yhdisteiden valmistus aloitetaan seramideista, joilla on kaavat 2 82058 /Rl HN /

5 1 HN

(V

HO OH (II-D) 3 HQ oh (ii)_l 10

Seramideja puolestaan voidaan valmistaa Cie- tai C20-sfin-gosiineista N-asyloimalla kaavan R1-OH mukaisella rasvahapolla. Riippuen siitä, käytetäänkö lähtöaineena optisesti aktiivista vai raseemista sfingosiiniä, saadaan 15 kaavan (I)-D tai (I)-L mukaisia yhdisteitä optisesti yhtenäisenä muotona tai diastereomeerin (I)-D ja (I)-L seosta; jälkimmäisessä tapauksessa täytyy määrätyssä valmistusvaiheessa suorittaa diastereomeerien erottaminen.

Raseemisia sfingosiinejä voidaan nyttemmin valmis-20 taa hyvin saannoin glysiinistä käyttämällä yksinkertaista synteesiä, jonka ovat esittäneet R.R.Schmidt ja R.Klänger [Angew. Chem. 9jl (1982) s. 215 - 216: Angew. Chem. Int. Ed. Engl. 21 (1982) s. 210 - 211; Angew. Chem. Suppl.

1982, s. 393 - 397]. Vaikka yllä esitetyllä valmistus-25 menetelmällä saadaan kaavan (I)-D ja (I)-L mukaisia sfin-gosiinijohdannaisia saannon ollessa tyydyttävä, olisi kuitenkin edullista käyttää menetelmää, jota käytettäessä diastereomee-rejä ei tarvitse erottaa, varsinkin jos ajatellaan, että tehokkaammat yhdisteet kuuluvat D-ryhmään. 30 Toisaalta tunnetaan erilaisia synteesejä, joissa käytetään lähtöaineena vartavasten valittua kiraalista yhdistettä, ja jotka siten johtavat ilman diastereomeerien erottamista erytro-konfiguraation omaaviin ja D-ryhmään kuuluviin optisesti aktiivisiin sfingosiineihin, siis 35 luonnossa esiintyviin sfingosiineihin.

Il 3 82058

Jonkin verran vanhempaan synteesiin, jonka ovat esittäneet E. J. Reist ja P.H. Christie [J.Org.Chem. 35 (1970) s. 3521 ja 4127] ja jossa lähtöaineena on D-glukoo-si, ja synteesiin, jonka on esittänyt H. Newman [J. Am.

5 Chem. Soc. 95 (1973) s. 4098], sekä synteesiin, jonka ovat esittäneet P. Tkaczuk ja E.R. Thornton [J. Org. Chem. 46 (1981) s. 4393], joissa molemmissa käytetään lähtöaineena L-seriiniä, kuuluu aina reaktiovaihe, jossa on pieni saanto, nimittäin 3-amino-3-deoksi-di-(0-isopropylideeni)-a-10 D-allofuranoosin valmistus tai trans-vinylalaanin ja L-seriinistä johdetun aldehydin additioreaktio.

Uudehkolla synteesillä, jonka ovat esittäneet B. Bernet ja A. Vasella, [Tetrahedron Letters 24 (1983) s. 5491 - 5994], saadaan D-erytro-Cle-sfingosiinia 6 reak- 15 tiovaiheen jälkeen, jolloin kokonaissaannoksi tulee 33 %. Siinä käytetään tosin lähtöaineena pentadekyyniä, jota ei ole välittömästi saatavissa ja jonka valmistus vaikuttaa epäedullisesti valmistusvaiheiden lukumäärään ja kokonaissaantoon.

20 Lopuksi mainittakoon vielä erään seramidin syn teesi, jonka ovat esittäneet K. Koike, Y. Nakahara ja T. Ogava [Glycoconjugate J. 1 (1984) s. 107 - 109] ja jossa käytetään lähtöaineena D-glukoosijohdannaista ja joka käsittää 12 reaktiovaihetta ja jolla saadaan seramidia noin 25 20 %:n saannoin. Menetelmää voitaneen käyttää luonnon sfingosiinien konfiguraation omaavien sfingosiinien valmistukseen.

Alussa kuvatussa kaavan (I)-D mukaisten sfingosii-nijohdannaisten valmistuksessa sinänsä edullista optisesti 30 aktiivisen D-sfingosiinin käyttöä on siis tähän saakka haitannut niiden suuritöinen ja/tai saantoon nähden epätyydyttävä valmistus.

Nyt havaittiin, että seuraavalla sivulla esitetyn kaavan (I) mukaisia optisesti yhtenäisiä sfingosiinijoh-35 dannaisia voidaan saada uudella menetelmällä, jossa käyte- 4 82058 tään lähtöaineena kaupallisesti saatavaa D-galaktoosia ja jossa on yhteensä 9-12 reaktiovaihetta ja jota käytettäessä haluttujen yhdisteiden kokonaissaanto on tyydyttävä.

5 Kaavassa (I) R1 tarkoittaa samoja asyyliryhmiä kuin edellä kaavojen (I)-D ja (I)-L selityksen yhteydessä on ilmoitettu, kun taas R3 on alifaattinen ryhmä, jossa on 13 - 19 hiiliatomia, joista vähintään 13 muodostaa suoran ketjun ja mahdollisesti korkeintaan 4 muodostaa metyylisi-10 vuryhmiä, ja jossa ryhmässä voi olla 1-3 cis- tai trans-konfiguraation omaavaa kaksoissidosta tai 1-3 kolmois-sidosta.

Keksinnön mukaista menetelmää kuvaa seuraavassa esitetty reaktiokaavio.

Il s 82058

Ri I f r ,3 rt/ rt; D-galakt°osi > ΗθΛ_—I°\ -* Γ^°Η

J ®~°H CHO

(I> (31) . (III) !3 3 f JL * — 1 — (4- (VI) v T VR R; \ »3 3 \ (V) <IV) * H? s0*" tro .or" K —* ψ lV3 5 K3 m (VIII) ax·» --OAc \.IX;

AcO'T'-^--^'0» · Αο0-^,,,*-,*,^^Ο^^^χΤ^<;ϊϊϊϊ^^ OAc 5lj (VII) Ψ

Λ* N

AcO—r-L—-O · p3 R‘"0 OH

_ ΚΓ OAc OR"’ f ~\

/ % B

/ (XI) (X) (XI1^ (XIII) 6 82058

Keksinnön mukaisessa menetelmässä D-galaktoosin annetaan reagoida kaavan R-CO-R' mukaisen alemman alifaat-tisen ketonin tai aromaattisen aldehydin kanssa, jossa kaavassa R ja R' tarkoittavat alempaa alkyyliryhmää tai 5 toinen symboleista R tai R' tarkoittaa vetyä ja toinen aromaattista ryhmää 4- ja 6-asemissa suojatuksi kaavan (II) mukaiseksi D-galaktoosiksi, tämä yhdiste hajotetaan visinaalisia dioleja lohkaisevalla hapettimella vastaavaksi 2- ja 4-asemissa suojatuksi kaavan (III) mukaiseksi D-10 treoosiksi, suojatun D-treoosin annetaan reagoida R3-CH2-fosfonaatin tai R3-CH2-trifenyylifosfoniumhalogenidin kanssa, joissa R3 merkitsee samaa kuin edellä, emäksen tai emäksen ja suolan läsnäollessa kaavan (IV) mukaiseksi yhdisteeksi, tämän yhdisteen vapaa hydroksyyliryhmä ak-15 tivoidaan ja muutetaan atsidoryhmäksi, saatu kaavan (V) mukainen atsidoyhdiste vapautetaan alifaattisen ketjun asemissa 1 ja 3 olevien hydroksyyliryhmien suojaryhmästä, jolloin saadaan kaavan (VI) mukainen 2-atsido-l,3-dihyd-roksidiyhdiste, jonka annetaan reagoida orgaanisen rea-20 genssin kanssa, joka pystyy reagoimaan selektiivisesti primaarisen hydroksyyliryhmän kanssa, jolloin saadaan kaavan (VIII) mukainen yhdiste, jossa R" on hydroksyylisuo-jaryhmä, kaavan (VIHI) mukaisen yhdisteen sekundaarinen hydroksyyliryhmä suojataan suojaryhmällä R" ' , saadusta 25 kaavan (IX) mukaisesta yhdisteestä lohkaistaan hydrok-syylisuojaryhmä R", jolloin saadaan kaavan (X) mukainen yhdiste, ja joko aiemmin saatu kaavan (VI) mukainen yhdiste tai kaavan (X) mukainen yhdiste glykosidoidaan D-glukoosin O-trifluori- tai O-triklooriasetamidaatin tai 1-30 halogeenijohdannaisen kanssa, joiden 2-, 3-, 4- ja 6-ase missa olevat hydroksyyliryhmät ovat asyyliryhmien ac suojaamia, jolloin saadaan kaavan (VII) tai (XI) mukainen yhdiste, saadusta yhdisteestä lohkaistaan asyyliryhmät Ac tai asyyliryhmät Ac ja suojaryhmä R"', jolloin saadaan 35 kaavan (XII) mukainen yhdiste, tämän yhdisteen atsidoryhmä

II

7 82058 muutetaan primaariseksi aminoryhmäksi ja saatu kaavan (XIII) mukainen yhdiste N-asyloidaan kaavan Rx-OH mukaisen rasvahapon kanssa.

Seuraavassa kuvataan keksintöä yksityiskohtaisem- 5 min.

Orgaaninen karboksyylihappo R^OH, josta kaavan (I) mukainen sfingosiinijohdannaisten asyyliryhmä R1 on johdettu, on esimerkiksi myristiinihappo C14H2802, palmitiinihappo C16H3202, steariinihappo C18H3602, öljyhappo C18H34 02, linoli-10 happo C18H3202, arakishappo (maapähkinähappo) C20H4002, be- heenihappo C22H4402 ja - symbolille R1 annetun merkityksen ylärajalla - tetrakosaanihappo (lignoseriinihappo) C24H4802, cis-15-tetrakoseenihappo (nervonihappo) C24H4602, 2-hydrok-si tetrakosaanihappo (serebronihappo) C24H4802 , 2-hydroksi- 15 15-tetrakoseenihappo (hydroksinervonihappo) C24H4603 tai viime mainitun kanssa isomeerinen 2-hydroksi-17-tetrako-seenihappo.

Alifaattinen ryhmä R3 voi olla haaroittumaton ketju tai siinä voi olla yksi, kaksi, kolme tai neljä metyyli-20 ryhmää substituentteina. Lisäksi ketju voi olla tyydyt-tynyt tai tyydyttymätön; jälkimmäisessä tapauksessa siinä on 1 - 3 kaksoissidosta tai 1-3 kolmoissidosta. Kaksois-sidoksilla on cis- tai trans-konfiguraatio. Edullisia ali-faattisia ryhmiä R3 ovat sellaiset, joissa on pariton määrä 25 hiiliatomeja, erityisesti C13- ja C15-ryhmät.

Menetelmän ensimmäisessä vaiheessa voidaan D-galak-toosin 4- ja 6-asemassa olevien hydroksyyliryhmien suojaukseen käyttää alempaa alifaattista ketonia kuten asetonia, etyylimetyyliketöniä tai dietyyliketonia tai aro-30 maattista aldehydiä kuten bentsaldehydiä tai fenyyliren-kaastaan substituoitua bentsaldehydiä. Tässä on edullista bentsaldehydin käyttö. Reaktion kondensointiaineiksi sopivat yleensä Lewishapot kuten sinkkikloridi, booritrifluo-ridi, alumiinikloridi ja rautakloridi tai Br^nsted-hapot 35 kuten p-tolueenisulfonihappo. D-galaktoosin muuttaminen β 82058 4,6-O-bentsylideeni-D-galaktoosiksi voidaan suorittaa esim. menetelmällä, jonka ovat esittäneet E.G. Gros ja V. Deulofeu [J. Org. Chem. 29 (1964) s. 3647 - 3654), ja D-galaktoosin reaktio asetonin kanssa 4,6-O-isopropylideeni-5 D-galaktoosiksi voidaan suorittaa menetelmällä, jonka ovat esittäneet J. Gelas ja D. Horton (Carbohydr. Res 71 (1979) s. 103 - 121.

Menetelmän toisessa vaiheessa käytetty hapetin voi olla alkalimetalliperjodaatti, esim. litium-, natrium- tai kaliumsuola, tai lyijytetra-asetaatti. Hapetus suoritetaan edullisesti pH-arvon ollessa noin 7-8, esim. vastaavas-5 sa puskuriliuoksessa, ja huoneen lämpötilassa.

Menetelmän kolmannen vaiheen Wittig-reaktio suoritetaan tavallisesti inertissä atmosfäärissä, esim. types-sä, matalassa lämpötilassa, esim. -10 - -20 °C, ja käyttämällä R3-CH2-fosfoniumhalogenidia suolan, esim. litium-10 bromidin, natriumkloridin tai kaliumbromidin läsnäollessa. Emäksiksi sopivat muun muassa orgaaniset litiumyhdisteet, erityisesti fenyylilitium tai litiummetylaatti, lisäksi natriumamidi, natriummetylaatti ja natriumkarbonaatti. Liuottimina voidaan käyttää aromaattisia hiilivetyjä kuten 15 bentseeniä, tolueenia tai ksyleeniä, tai eettereitä kuten dietyylieetteriä, tetrahydrofuraania tai dioksaania; liuottimen tulee olla vedetön.

Vapaan hydroksyyliryhmän aktivointi ja muuttaminen atsidoryhmäksi voidaan edullisesti suorittaa 0-sulfonoi-20 maila kaavan (IV) mukainen yhdiste ja saattamalla muodostunut 0-sulfonyylijohdannainen, esim. metaanisulfonyy-li-, trifluorimetaanisulfonyyli- tai p-tolueenisulfonyyli-johdannainen sen jälkeen reagoimaan alkalimetalliatsidin kanssa; tällöin tapahtuu D-treoosin 2-aseman hiiliatomissa 25 konfiguraatio inversio. O-sulfonointi voidaan suorittaa teoksessa "Ullmanns Encyklopädie der technischen Chemie", 4. painos, osa 11, alkaen sivulta 91, Verlag Chemie GmbH, Weinheim BRD (1976) esitettyjä menetelmiä käyttäen. Taval- 9 82058 lisesti käytetään alemman alifaattisen sulfonihapon tai monosyklisen aromaattisen sulfonihapon happohalogenidia tai happoanhydridiä, esimerkiksi metaanisulfonyyliklori-dia, p-tolueenisulfonyylikloridia, metaanisulfonihappoan-5 hydridiä tai trifluorimetaanisulfonihappoanhydridiä. 0- sulfonointi suoritetaan edullisesti emäksen läsnäollessa. Koska reaktion pitää tapahtua vedettömissä olosuhteissa ja koska käytetään orgaanista liuotinta kuten bentseeniä, tolueenia, tetrahydrofuraania, dietyylieetteriä tai di-10 kloorimetaania, emäkseksi sopivat erityisesti tertiääri-set orgaaniset emäkset kuten trietyyliamiini, dimetyyli-aniliini, pyridiini, kollidiini, lutidiini yms. Seuraava reaktio alkalimetalliatsidin esim. litium-, natrium- tai kaliumatsidin kanssa suoritetaan edullisesti ilman o-sul-15 fonyylijohdannaisen puhdistusta. Molemmat reaktiot suo ritetaan edullisesti inertissä atmosfäärissä, esim. types-sä, ja matalassa lämpötilassa tai huoneen lämpötilassa.

Menetelmän viidennessä vaiheessa voidaan suojaryh-mä lohkaista kaavan (V) mukaisesta yhdisteestä happohydro-20 lyysin avulla. Yhdiste liuotetaan esimerkiksi orgaaniseen liuottimeen kuten dikloorimetaaniin tai dimetyyliforma-midiin ja sen jälkeen annetaan pienen määrän väkevää vety-kloridihappoa ja vettä vaikuttaa jonkin aikaa, edullisesti huoneen lämpötilassa.

25 Nyt voidaan kaavan (VI) mukainen yhdiste suoraan glykosidoida, niin että syntyy kaavan (VII) mukainen yhdiste, tai se voidaan muuttaa välituotteiden (VIII), (IX) ja (X) kautta kaavan (XI) mukaiseksi yhdisteeksi, joka vasta glykosidoidaan. Tässä toisessa menetelmävaihtoeh-30 dossa on tosin kolme reaktiovaihetta enemmän, mutta sen avulla saadaan suurempi kokonaissaanto ja se soveltuu sen vuoksi erityisen hyvin teollisen mittakaavan tuotantoon. Sitä selvitetään lähemmin seuraavassa.

Kaavan (VI) mukaisen 2-atsido-l,3-dihyroksiyhdis-35 teen primaarisen hydroksyyliryhmän suojaus suoritetaan 10 82058 reagensseillä, jotka primaarisen ja sekundaarisen hydrok-syyliryhmän läsnäollessa reagoivat selektiivisesti ensin mainitun kanssa. Suojaryhmäksi R" sopivat erityisesti sellaiset, jotka vievät suuren tilan kuten tert. butyyli-, 5 trifenyylimetyyli- (trityyli-), triklooriasetyyli-, trime- tyylisilyyli-, tert. butyylidimetyylisilyyli- tai tert. butyylidifenyylisilyyliryhmä. Edullisia ovat trifenyylimetyyli-, monometoksifenyylimetyyli-, tert. butyylidimetyylisilyyli- ja tert. butyylidifenyylifenyylisilyyli.

10 Suojaryhmän R" liittäminen tapahtuu käyttäen tun nettuja orgaanisen kemian menetelmiä, joiden valinta riippuu valitusta suojaryhmästä. Esimerkiksi tri-fenyylime-tyyliryhmä voidaan liittää käsittelemällä yhdistettä vastaavalla halogenidillä kuten trifenyylikloorimetaanilla 15 tai trifenyylibromimetaanilla. Myös tert. butyylidimetyy lisilyyli- ja tert. butyylidifenyylisilyyliryhmälle voidaan käyttää edullisesti vastaavaa halogenidia, edullisesti kloridia tai bromidia.

Tämän jälkeen kaavan (VIII) mukaisen 1-asemassa 20 suojatun yhdisteen 3-asemassa oleva hydroksyyliryhmä suojataan suojaryhmällä R" ’, esim. esteröimällä orgaanisella karboksyylihapolla Ac'OH tai sen reaktiokykyisellä funktionaalisella johdannaisella. Siihen sopivat ennen kaikkea yksinkertaiset alifaattiset karboksyylihapot ja aromaat-25 tiset, erityisesti monosykliset aromaattiset karboksyylihapot, edullisesti käytetään bentsoehappoa, substituoitua bentsoehappoa tai pivaliinihappoa.

Esteröinti karboksyylihapolla Ac’OH voidaan suorittaa teoksessa "Ullmanns Encyklopädie der technischen 30 Chemie", 4. painos, osa 11, Verlag Chemie, Weinheim BRD (1976) sivulta 91 alkaen kuvattujen menetelmien avulla. Se tapahtuu edullisesti käyttämällä karboksyylihappohalo-genidia tertiäärisen orgaanisen emäksen kuten trietyyli-amiinin, pyridiinin tai dimetyylianiliinin läsnäollessa 35 vedettömässä liuottimessa kuten bentseenissä, tolueenissa,

II

11 82058 tetrahydrofuraanissa, dietyylieetterissä tai dikloorime-taanissa.

Kaavan (IX) mukaisen yhdisteen 1-asemassa olevan hydroksyyliryhmän suojaryhmä R" voidaan lohkaista käyt-5 tämällä happohydrolyysiä (trifenyylimetyylisuojaryhmät, silyylisuojaryhmät) tai booritrifluoridikäsittelyä (tri-fenyylimetyyliryhmät). Saadaan kaavan (X) mukainen yhdiste, jossa on vielä 3-asemassa suojaryhmä R"', mutta 1-aseman primaarinen hydroksyyliryhmä on taas vapaa.

10 Kaavan (IX) mukaisen yhdisteen tai kaavan (VI) mu kaisen yhdisteen reaktiota D-glukoosin 0-trikloori- tai 0-trifluoriasetimidaatin kanssa, joiden hydroksyyliryhmät lukuunottamatta 1-asemassa olevaa ovat asyyliryhmien Ac suojaamia, katalysoi edullisesti Lewis-happo tai boori-15 trifluoridieetteraatti tai trifluorimetaanisulfonihappo- trimetyylisilyyliesteri. Reaktio suoritetaan yleensä vedettömässä orgaanisessa liuottimessa kuten hiilivedyssä (heksaani) tai halogenoidussa hiilivedyssä (dikloorime-taani). Asyyliryhminä D-glukoosin 2-, 3-, 4- ja 6-asemissa 20 olevien hydroksyyliryhmien suojauksessa käytetään edulli sesti alempia alifaattisia asyyliryhmiä kuten asetyyli-, propionyyli-, pivaloyyli-, trifluoriasetyyli- tai metaani-sulfonyyliryhmää. Yksityiskohtia reagenssin valmistuksesta saadaan julkaisuista R.R. Schmidt ja M. Stumpp, Liebigs 25 Ann. Chem. 1983, 1249 - 1256 ja R.R. Schmidt, J. Michel ja M. Roos, Liebigs Ann. Chem. 1984, 1343 - 1357.

Vastaava reaktio O-tetra-asyloidun D-glukoosin 1-halogeenijohdannaisen esim. O-asetyyli-a-D-glukopyrano-syylikloridin tai -bromidin (jälkimmäistä kutsutaan myös 30 α-D-O-asetobromiglukoosiksi) kanssa suoritetaan yleensä raskasmetalliyhdisteen kuten hopeaoksidin, raskasmetalli-suolan kuten hopeakarbonaatin tai elohopeasyanidin, tai orgaanisen emäksen kanssa, jotka toimivat happoa sitovina aineina (Ullmanns Encyklopädie der technischen Chemie, 4. 35 painos, osa 24, Verlag Chemie GmbH, Weinheim BRD, 1983 sivu 757).

i2 82058

Asyyliryhmien Ac ja suojaryhmän R"' lohkeamista kaavan (VII) tai (XI) mukaisesta yhdisteestä katalysoivat yleensä emäkset; erityisen edullista on käyttää natriumme-tanolaattia vedettömässä metanolissa huoneen lämpötilassa.

5 Menetelmän toiseksi viimeisessä vaiheessa atsido- ryhmän muuttaminen primaariseksi aminoryhmäksi suoritetaan parhaimmin käsittelemällä kaavan (XII) mukaista yhdistettä rikkivedyllä huoneen lämpötilassa. Tätä varten yhdiste liuotetaan esimerkiksi veden ja pyridiinin (1:1) seokseen. 10 Sama muutos voidaan suorittaa myös hydraamalla natriumboo-rihydridillä tai jollain muulla pelkistimellä, esim. nat-riumsyanoboorihydridillä.

Kaavan (XIII) mukaisen yhdisteen N-asylointi voidaan suorittaa kaavan R^OH mukaisella orgaanisella karbok-15 syylihapolla (menetelmän viimeinen vaihe) käyttämällä D. Shapiron ja avustajien esittämää menetelmää [J. am. Chem. Soc. 86, (1964) s. 4472]. Tavallisesti käytetään itse kar-boksyylihappoa vettä lohkaisevan aineen, esim. disyklohek-syylikarbodi-imidi dikloorimetaanissa, läsnäollessa tai 20 karboksyylihapon funktionaalista reaktiokykyistä johdannaista, esim. aktivoitua esteriä tai halogenidia epäorgaanisen emäksen, kuten natriumasetaatin, tai tertiäärisen orgaanisen emäksen läsnäollessa. N-asylointi suoritetaan edullisesti huoneen lämpötilassa.

25 Menetelmän jokaisessa vaiheessa valmistettujen yh disteiden eristys ja puhdistus suoritetaan tavallisia orgaanisen kemian menetelmiä käyttäen.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksinnön edullisia suoritustapoja.

30 1H-NMR-spektrit mitattiin 250 MHz-laitteella WM

250 Cryospec, valmistaja Bruker, Spectrospin, Industriestrasse 26, CH-8117 Fällanden/ZUrich. Siirtymät on mitattu käyttämällä tetrametyylisilaania (TMS) sisäisenä standardina ja siirtymät on ilmoitettu yksikköinä 35 ppm.

Il i3 82058

Annetut sulamispisteet määritettiin kupariharkoilla eikä niitä ole korjattu.

Analyyttiseen ohutkerroskromatogra£iaan (DC) käytettiin silikageelilevyjä (valmistaja E. Merck AG, 5 Darmstadt, BRD). Ohutkerroskromatogrammit sumutettiin 15-%:isella rikkihapolla ja kehitettiin lämpötilassa 120 °C, mikäli yhdisteet eivät olleet UV-aktiivisia.

Preparatiiviset pylväskromatografia-ajot suoritettiin Kieselgel 60:llä (0,062 - 0,200 mm) (valmistaja 10 Merck). Keskipainekromatografiässä käytettiin D.

Flockerzi'n (diplomityö, Stuttgartin yliopisto, BRD (1978) kuvaamia valmiita pylväitä, jotka oli täytetty silikagee-lillä "LiChroprep Si 60, 15 - 25".

Saannot on ilmoitettu sellaisen puhtausasteen mu-15 kaan, jossa NMR-spektroskooppisesti ja ohutlevykromato-grafian avulla ei enää voitu osoittaa epäpuhtauksia.

Liuotinseoksien yhteydessä suluissa ilmoitetut arvot tarkoittavat tilavuusosia.

Esimerkki 1 20 2S,3R-2-heksadekanoyyliamino-3-hydroksi-l-(3-D- glukopyranosyylioksi)-4-trans-elkoseeni a) 4,6-0-bentsylideeni-D-galaktoosi

Katso J. Org. Chem. 29, (1964) s. 3647 - 3654.

b) 2,4-0-bentsylldeeni-D-treoosi (1) 25 30 g (0,111 mol) 4,6-0-bentsylideeni-d-galaktoosia liuotetaan noin 1200 millilitraan fosfaattipuskuria, jonka pH on 7,6. 55 g (0,257 mol) natriumperjodaattia lisätään voimakkaasti sekoittaen. Lisäämällä 2-molaarista (2-nor-maalista) natriumhydroksidia tipoittain pH pidetään arvos-30 sa noin 7-8. Sekoitetaan huoneen lämpötilassa 1,5 tuntia. Sen jälkeen haihdutetaan vesisuihkupumpun aikaansaamassa alipaineessa kuiviin. Kiinteää jäännöstä uutetaan neljä kertaa kulloinkin 250 millilitralla etyyliasetaattia. Uute suodatetaan, kuivataan magnesiumsulfaatilla ja 35 haihdutetaan. Saanto: 20 g (85 %), RF = 0,64, liuottimena tolueeni/etanoli (3:1).

i4 82058 c) 2R,3R-1,3-0-bentsylideeni-2-hydroksi-4-trans-eikoseeni (2) 70 g (0,12 mol) heksadekyylitrifenyylifosfonium-bromldia uutetaan typpiatmosfäärissä noin 1 litralla vede-5 töntä, typellä kyllästettyä tolueenia. Fenyylilitiumia, joka valmistettiin käyttämällä 6,5 g (0,94 mol) litiumia ja 74 g (0,47 mol) bromibentseeniä noin 200 millilitrassa vedetöntä eetteriä, lisätään tipoittain ilman puhdistusta. Samalla seos jäähdytetään lämpötilaan -15 °C. Sen jälkeen 10 lisätään tipoittain 20 g (0,096 mol) yhdistettä (1) noin 150 millilitrassa vedetöntä tetrahydrofuraania typpiat-mosfäärissä 20 minuutin aikana. Seuraavien 20 minuutin kuluttua lisätään ensin 150 ml metanolia ja sen jälkeen 250 ml vettä. Sekoitetaan voimakkaasti. Orgaaninen faasi 15 haihdutetaan vesifaasin erottamisen jälkeen. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silikagee-lillä käyttäen petrolieetteri/etyyliasetaattiseosta (9:1). Saanto 27 g (68 %), Rf = 0,21, liuottimena petrolieet-teri/etyyliasetaatti (9:1).

20 d) 2S,3R-2-atsido-l,3-0-bentsylideeni-4-trans-ei- koseeni (3) 10 g (0,025 mol) yhdistettä (2) liuotetaan noin 70 millilitraan vedetöntä dikloorimetaania, joka sisältää 5 ml vedetöntä pyridiiniä. Se jäähdytetään typpiatmosfää-25 rissä lämpötilaan -15 °C. Lisätään hitaasti tipoittain 8,12 g (0,029 mol) trifluorimetaanisulfonihappoanhydridiä. Suodatetaan 15 minuutin kuluttua silikageelillä ja eluoi-daan dikloorimetaani/petrolieetteri-seoksella (1:1). Reaktioastiaa huuhdellaan koko ajan typellä. Suoritetaan 30 haihdutus, josta jäävä öljy sekoitetaan 50 millilitraan vedetöntä dimetyyliformamidia. Lisätään typpiatmosf äärissä 7,5 g (0,1 mol) natriumatsidia. Sekoitetaan 2 tuntia huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen laimenentaan noin 350 mil-lilitralla dikloorimetaania, suodatetaan ja haihdutetaan 35 vesisuihkupumpulla aikaansaadussa alipaineessa. Tuotteen

II

is 82058 puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silika-geelillä käyttämällä petrolieetteri/etyyliasetaatiseosta (9:1). Saanto: 8 g (75 %), RF = 0,8, liuottimena petroli-eetteri/etyyliasetaatti (9:1).

5 e. 2S,3R-2-atsido-l,3-dihydroksi-4-trans-eikoseeni (4) 8 g yhdistettä (3) liuotetaan 100 millilitraan di-kloorimetaania. Lisätään 5 ml väkevää vetykloridihappoa ja 3 ml vettä ja sekoitetaan huoneen lämpötilassa voimakkaas-10 ti 12 tuntia. Sen jälkeen ravistellaan natriumvetykar-bonaatin vesiliuoksen kanssa. Orgaaninen faasi erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silika-geelillä käyttämällä dikloorimetaani/metanoli-seosta 15 (95:5). Saanto 4,32 g (68 %), RF = 0,46, liuottimena di- kloorimetaani/metanoli (95/5), sulamispiste 56 - 57 °C. Alkuaineanalyysi:

Laskettu: C 67,95 H 11,11 N 11,88 Saatu: 67,62 11,12 11,85 20 :H-NMR (250 MHz, CDC13, yksikköinä ppm) yhdiste (4): 5,83 (m, 1H, -CH2-CH=C); 5,55 (dd, 1H, -CH2-CH=CH-, J = 15,5 Hz, J = 6,5 Hz); 4,25 (m, 1H; -CH-N3); 3,8 (m, 2H; -CH2-0H, CH-OH); 2,05 (m, 4H, OH, C=CH-CH2); 1,45 - 1,18 (m, 26H, alifaatt.); 0,88 (t. 3H, CH3).

25 f ) 2S,3R-2-atsido-3-hydroksl-l-(2,3,4,6-tetra-O- asetyyli-e-D-glukopyranosyylioks)-4-trans-eikoseeni 0,5 g (0,41 mmol) yhdistettä (4) liuotetaan 50 millilitraan vedetöntä heksaania. Lisätään 0,1 ml 0,5-molaa-rista booritrifluoridieetteraattia dikloorimetaanissa ja 30 spaatelinkärjeilinen molekyliseulaa 4 A. 0,7 g (1,41 mmol) 0-(2,3,4,6-tetra-O-asetyyli-a-D-glukopyranosyyli)-tri-klooriasetamidaattia liuotetaan 3 millilitraan vedetöntä tolueenia ja lisätään hitasti tipoittain. Pestään 4 tunnin kuluttua 30 millilitralla kylläistä natriumvetykarbonaat-35 tiliuosta. Vesifaasia ravistellaan kolme kertaa dikloori- i6 82058 metaanin kanssa, jota käytetään kulloinkin 30 millilitraa. Orgaaniset faasit kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silikageellllä käyttämällä dikloorimetaa-5 ni/metanoli-seosta (97,5:2,5). Saanto: 0,385 g (40 %), RF = 0,7, liuottimena dikloorimetaani/metanoli (95:5).

LH-NMR (250 MHz, CDC13, yksikköinä ppm) yhdiste (6): 5,78 (m, 1H, -CH2-CH=C); 5,5 (dd, 1H; -CH2-CH=CH-, J = 15,5 Hz, J = 7,3 Hz); 5,3 - 4,98 (m, 3H; H-2, H-3, H-4); 4,58 10 (d, 1H, H-l, J = 7,6 Hz); 4,35 - 4,13 (m, 3H, H-6; H-6; -CH-N3); 4,05 (dd, 1H; -CH2-0-); 3,73 (m, 2H, H-5-CH2-0); 3,47 (m, 1H, >CH-OH), 2,24 (d, 1H, OH, J = 4,8 Hz), 2,16 -1,94 (m, 14H, asetyyli, C=CH-CH2); 1,45 - 1,15 (m, 26H, alifaatt.); 0,88 (5, 3H, -CH3).

15 g) 2S,3R-2-atsido-3-hydroksi-l-(β-D-glykopyrano- syylioksi)-4-trans-eikoseeni (7) 0,4 g (0,585 mmol) yhdistettä (6) liuotetaan 30 millilitraan vedetöntä metanolia. Lisätään 0,2 ml 1-molaa-rista natriummetylaattiliuosta metanolissa. Sekoitetaan 1 20 tunti huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen neutraloidaan ioninvaihtohartsilla Amberlit IR 120 (H®-muoto). Tuotteesta suodatetaan ioninvaihtohartsi pois, haihdutetaan ja suoritetaan kromatografinen erotus silikageelillä käyttämällä kloroformi/metanoli-seosta (9:1). Saanto: 0,26 g (86 %), 25 RF = 0,22, liuottimena kloroformi/metnaoli (9:1).

1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6, yksikköinä ppm) yhdiste (7): 4,10 (d, 1H, H-l, J = 7,6 Hz).

h) 2S,3R-2-amino-3-hydroksl-l-(B-D-glykopyranosyy-lioksi)-5-trans-eikoseenl (8) 30 0,26 g (0,5 mmol) yhdistettä (7) liuotetaan pyri- diinin (4 ml) ja veden (4 ml) seokseen. Liuos kyllästetään rikkivedyllä. Sekoitetaan 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Haihdutetaan kuiviin ja suoritetaan kromatografinen erotus silikageelillä käyttämällä ensin kloroformi/metanoliseosta 35 (6:4) ja sitten kloroformi/metanoli/vesi-seosta (5:4:1).

17 82058

Saanto: 0,234 g (96 %), Rr * 0,65, liuottimena klorofor-mi/metanoli/vesi (5:4:1).

^-NMR (250 MHz, DMS0-d6, yksikköinä ppm) yhdiste (8): 4,10 (d, 1H, H-l, J = 7,6 Hz).

5 i) 2S,3R-2-heksadekanoyyliamino-3-hydroksi-l-(fi-D- glukopyranosyylioksi)-4-trans-eikoseeni (9) 0,23 g (0,47 mmol) yhdistettä (8) liuotetaan 5 mil-lilitraan tetrahydrofuraania. Lisätään 5 ml natriumasetaa-tin 50-%:ista vesiliuosta. Seos yhdistetään voimakkaasti 10 sekoittaen 0,19 gramman (0,7 mmol) kanssa heksadekanoyy-likloridia. N. 2 tunnin kuluttua orgaaninen faasi erotetaan. Vesifaasia ravistellaan kolme kertaa kulloinkin 2 millilitran kanssa kloroformia. Orgaaniset faasit kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan. Tuotteen puhdis-15 tamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silikageelil- lä käyttämällä kloroformi/metanoli-seosta (9:1). Saanto: 0,3 g (90 %), RF = 0,50, liuottimena kloroformi/metanoli (9:1).

^-NMR (250 MHz, DMS0-d6, yksikköinä ppm) yhdiste 20 (9): 7,5 (d, 1H, NH, J = 8,7 Hz); 5,52 (m, 1H, -CH2-CH=C); 5,35 (dd, 1H, C=CH-, J = 15,2 Hz, J = 6,5 Hz); 5,03 (d, 1H,OH; J = 3,4 Hz); 4,92 (m, 3H) OH); 4,5 (5, 1H, OH; J = 4,9 Hz); 4,09 (d, 1H; H-l, J = 7,6 Hz); 4,0 - 3,55 (m, 4H); 3,45 (m, 2H); 3,15 - 2,9 (m, 4H); 2,1 - 1,88 (m, 4H); 25 1,45 (m, 2H); 122 (m, 54H, alifaatt.); 0,85 (m, 6H, CH3).

Lisäys

Kaavan (VI) mukaiselle yhdisteelle kirjoitetun rakenteen varmistamiseksi käsitellään yhdiste (4) samalla tavalla rikkivedyllä (katso alla) kuin edellä olevassa 30 esimerkissä kohdassa h) on kuvattu. Tällöin on todellakin satu yhdiste (5), jonka fysikaalis-kemialliset ominaisuudet pitävät täydellisesti yhtä luonnossa esiintyvistä lähtöaineista valmistettujen erytro-D-Cie-sfingosiinien ominaisuuksien kanssa.

35 2S,3R-2-amino-l,3-dihydroksi-4-trans-eikoseeni (5) 0,25 g (0,7 mmol) yhdistettä (4) liuotetaan pyri- ie 82058 diinin (5 ml) ja veden (2 ml) seokseen. Liuos kyllästetään rikkivedyllä. Sekoitetaan 48 tuntia huoneen lämpötilassa. Seos haihdutetaan kuiviin. Jäännökselle suoritetaan kromatografinen erotus silikageelillä käyttämällä ensin kloro-5 formia, sitten kloroformi/metanoli-seosta (9:1) ja lopuksi kloroformi/metanoli/vesi-seosta (18:2:0,25). Saanto 0,215 g (95 %), Rf = 0,2, liuottimena kloroformia/metanoli (1:1), sulamipiste: 70 - 72 °C.

1H-NMR (250 MHz, CDC13, yksikköinä ppm) yhdiste 10 (5): 5,78 (m, 1H, -CH2-CH-C); 5,47 (dd, 1H, -CH2-CH=CH-, J = 15,5 Hz, J = 7,3 Hz); 4,12 (dd, 1H, C=CH-CH-0H, J = 6,1 Hz); 3,7 (m, 2H, CH2-0H); 2,93 (m, 1H, -CH-NH2); 2,57 (m, 4H, NH2, OH); 2,06 (m, 2H, C=CH-CH2); 1,45 (m, 26H, alifaat.); (t, 3H, -CH3).

15 Esimerkki 2 2S,3R-2-heksadekanoyyliamino-3-hydroksi-l-(6-D-glukopyranosyylioksi)-4-trans-oktadekeeni j) 2R,3R-1,3-0-bentsylldeeni-2-hydroksi-4-trans- oktadekeenl (10) 20 70 g (0,13 mol) tetradekyylitrifenyylifosfonium- bromidia suspendoidaan typpiatmosfäärissä noin 1 litraan vedetöntä, typellä kyllästettyä tolueenia. Fenyylilitium, joka on valmistettu litiumista (6,5 g, 0,94 mol) ja bromi-bentseenistä (74 g, 0,47 mol) noin 200 millilitrassa vede-25 töntä eetteriä, lisätään tipoittain ilman lisäpuhdistusta. Samalla seos jäähdytetään lämpötilaan -15 °C. Sen jälkeen lisätään 21,6 g (0,104 mol) 2,4-0-bentsylideeni-D-treoosia [katso esimerkki 1, yhdiste (1)] noin 150 millilitrassa vedetöntä tetrahydrofuraania tipoittain typpiatmosfäärissä 30 20 minuutin aikana. Seuraavan 20 minuutin kuluttua lisä tään ensin 150 ml metanolia ja sen jälkeen 250 ml vettä. Sekoitetaan voimakkaasti. Orgaaninen faasi haihdutetaan vesifaasin erottamisen jälkeen. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silikageelillä käyttäen 35 petrolieetteri/etyyliasetaatti-seosta (9:1). Saanto: 27 g

II

i9 82058 (68 %), Rf = 0,21, liuottimena petrolieetteri/ etyyliasetaatti (9:1), sulamispiste: 54 - 55 °C.

k) 2S,3R-2-atsldo-l,3-0-bentsylideeni-4-trans-oktadekeeni (11) 5 10 g (0,025 mol) yhdistettä (10) liuotetaan noin 70 millilitraan vedetöntä dikloorimetaania, joka sisältää 5 ml pyridiiniä. Seos jäähdytetään typpiatmosfäärissä lämpötilaan -15 eC. 8,7 g (0,31 mol) trifluorimetaanisul-fonihappoanhydridiä lisätään hitaasti tipoittain. Seos 10 suodatetaan 15 minuutin kuluttua silikageelillä ja eluoi-daan dikloorimetaani/petrolieetteriseoksella (1:1). Reak-tioastiaa huuhdellaan jatkuvasti typellä. Suoritetaan haihdutus ja jäljelle jäänyt öljy sekoitetaan 50 millilitraan vedetöntä dimetyyliformamidia. Typpiatmosfää-15 rissä lisätään 7,5 g (0,1 mol) natriumatsidia. Sekoitetaan huoneen lämpötilassa 2 tuntia. Sen jälkeen laimennetaan noin 350 millililitralla dikloorimetaania, suodatetaan ja haihdutetaan vesisuihkupumpulla aikaansaadussa alipaineessa. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kroraa-20 tografinen erotus silikageelillä käyttämällä petrolieet-teri/etyyliasetaatti-seosta (9:1). Saanto: 7,8 g (75 %), RF = 0,8, liuottimena petrolieetteri/etyyliasetaatti (9:1).

l) _2S,3R-2-atsido-l,3-dihdyroksi-4-trans-ok- tadekeeni (12) 25 7 g (0,017 mol) yhdistettä (11) liuotetaan 100 mil lilitraan dikloorimetanaania. Lisätään 5 ml väkevää vety-kloridihappoa ja 3 ml vettä ja sekoitetaan 12 tuntia huoneen lämpötilassa voimakkaasti. Sen jälkeen ravistellaan natriumvetykarbonaatin vesiliuoksen kanssa. Orgaaninen 30 faasi erotetaan, kuivataan natriumsulfaatilla ja haihdutetaan. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silikageelillä käyttämällä dikloorimetaani/-metanoli-seosta. (95:5). Saanto: 3,76 g (68 %), RF = 0,46, liuottimena dikloorimetaani/metanoli (95:5).

35 ^-NMR (250 MHz, CDC13, yksikköinä ppm): yhdiste 20 82058 (12) : 5,83 (m, 1H, CH2-CH=C); 5,55 (dd, 1H; -CH2-CH=CH-, J = 15,5 Hz, J = 6,5 Hz); 4,25 (ro, 1H; -CH-N3); 3,8 (m, 2H, -CH2-OH, >CH-OH); 3,52 (m, 1H, -CH2-OH); 2,05 (m, 4H; OH, C=CH-CH2); 1,45 - 1,18 (m, 22H, alifaatt.); 0,88 (t, 3H, 5 CH3).

m) 2S,3R-2-atsido-3-hydroksi-l-Q-trifenyylimetyy-li-4-trans-oktadekeenl (13) 4 g (12,3 mmol) yhdistettä (12) liuotetaan 45 mil-lilitraan seosta, joka koostuu pyridiinistä, kloroformista 10 ja tetrahydrofuraanista (1:1:1), jotka kaikki ovat vedet tömiä. Lisätään 6 g (21,5 mmol) trityylikloridia. Seosta sekoitetaan huoneen lämpötilassa 48 tuntia. Sen jälkeen suoritetaan haihdutus vesisuihkupumpun avulla aikaansaadussa alipaineessa. Jäännös lisätään 200 millilitraan 15 dietyylieetteriä ja ravistellaan veden (100 ml) kanssa.

Orgaaninen faasi kuivataan magnesiumsulfaatilla. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silika-geelillä käyttämällä petrolieetteri/etyyliasetaatti-seosta (9:1). Saanto: 6,3 g (90 %), RF = 0,39, liuottimena petro-20 lieetteri/etyyliasetaatti (9:1).

1H-NMR (250 MHz, CDC13, yksikköinä ppm) yhdiste (13) : 7,55 - 7,15 (m, 15H, aromaatt.); 5,75 - 5,58 (m, 1H, CH2-CH=C); 5,38 - 5,26 (dd, 1H, CH2-CH=CH-, J = 15,5 Hz, J = 7,3 hz); 4,20 (m, 1H, -CH-N3); 3,53 (m, 1H, -CH-OH); 25 3,30 (d, 2H, 0-CH2-, J = 5,4 Hz); 2,03 - 1,188 (m, 3H, -OH, CH=CH-CH2); 1,40-1,10 (m, 22H, alifaatt.); 0,88 (t, 3H, CH3).

n) 2S,3R-2-atsido-3-bentsoyylloksi-l-0-trifenyyli-metyyli-4-trans-oktadekeeni (14) 30 6,3 g (11,1 mmol) yhdistettä (13) liuotetaan 30 millilitraan seosta, joka sisältää vedetöntä tolueenia ja vedetöntä pyridiiniä (4:1). 3 g (21,3 mmol) bentsoyyli-kloridia lisätään. Sekoitetaan huoneen lämpötilassa 12 tuntia. Sen jälkeen seos lisätään noin 200 millilitraan 35 vettä ja uutetaan kaksi kertaa dietyylieetterillä, jota

II

21 82058 käytetään molemmilla kerroilla 100 ml. Orgaaninen faasi kuivataan magnesiumsulfaatilla ja haihdutetaan. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silika-geelillä käyttämällä petrolieetteri/etyyliasetaatti-seos-5 ta (95:5). Saanto: 6,7 g (90 %), RF * 0,60, liuottimena petrolieetteri/etyyliasetaatti (9:1).

o) 2S,3R-2-atsido-3-bentsoyylioksi-l-hydroksi-4- trans-oktadekeeni (15) 6,7 g (9,97 mmol) yhdistettä (14) liuotetaan seok-10 seen, joka sisältää 30 ml vedetöntä tolueenia ja 5 ml me-tanolia. 10 ml 3-molaarista booritrifluoridieetteraattia dikloorimetaanissa lisätään. 5 tunnin kuluttua seos lisätään 50 millilitraan vettä ja erotetaan orgaaninen faasi. Magnesiumsulfaatilla suoritetun kuivauksen jälkeen haih-15 dutetaan ja sen jälkeen suoritetaan kromatografinen erotus ensin käyttämällä petrolieetteri/etyyliasetaattiseosta (9:1), sitten petrolieetteri/etyyliasetaattiseosta (8:2). Saanto: 3,8 g (90 %), RF = 0,13, liuottimena petrolieetteri/etyyliasetaatti (9:1).

20 Alkuaineanalyysi yhdisteelle C25H39N303: (molekyylipaino 429,56) laskettu: C 69,90 H 9,41 N 9,78 saatu: 69,92 9,16 9,65 1H-NMR (250 MHz, CDC13, yksikköinä ppm) yhdiste 25 (15): 8,14 (m, 2H; aromaatt.); 7,58 (m, 1H, aromaatt. ); 7,47 (m, 2H, aromaatt.); 6,05 - 5,87 (m, 1H; CH2-CH=C); 5,69 - 5,53 (m, 2H; CH2-CH«CH-, CH-OBz); 2,15 - 1,95 (m, 3H, -OH, C=CH-CH2); 1,47 - 1,13 (m, 22H, alifaat.); 0,86 (t, 3H, CH3).

30 p) 2S,3R-2-atsido-3-bentsoyylioksi-l-(2,3,4,6-tet- ra-B-D-glukopyranosyylloksi)-4-trans-oktadekeeni (16) 2 g (4,6 mmol) yhdistettä (15) ja 4,6 g (7,0 mmol)

2,3,4,6-tetra-O-pivaolyyli-a-D-glukopyranosyylitri-klooriasetimidaattia liuotetaan 40 millilitraa vedetöntä 35 dikloorimetaania ja sekoitetaan 30 min molekyliseulan 4 A

22 82058 kanssa. Sen jälkeen lisätään 0,2 ml O,1-molaarista boori-trifluroidieetteraattia dikloorimetaanissa. Reaktion aikana lisätään vielä 2 ml 0,1-molaarista booritrifluoridi-eetteraattia 0,5 millilitran annoksina. 48 tunnin kuluttua 5 laimennetaan 200 millilitralla petrolieetteriä ja suodatetaan. Suodosta ravistellaan 50 millilitran kanssa natrium-vetykarbonaatin vesiliuosta, kuivataan orgaaninen faasi natriumsulfaatilla ja haihdutetaan. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromatografinen erotus silikageelillä 10 käyttämällä tolueeni/asetoni-seosta (97,5:2,5). Saanto: 4 g (94 %), RF = 0,57, liuottimean tolueeni/asetoni (97,5:-2,5).

XH-NMR (250 MHz, CDC13, yksikköinä ppm) yhdiste (16) : 8,05 (m, 2H; aromaatt.); 7,58 (m, 1H, aromaatt.), 15 7,45 (m, 2H, aromaatt.); 5,99 - 5,83 (m, 1H, CH2-CH=C); 5.65 -5,46 (m, 2H, CH2-CH=CH, CH-OBz); 5,37 - 5,02 (m, 3H; H-2, H-3, H-4); 4,58 (d, 1H, H-l, J = 7,9 Hz); 4,25 - 3,58 (m, 6H, H-6, H-6' , H-5, CH-N3, CH2-0), 2,06 (m 2H; CH=CH-CH2); 1,45 - 1,04 (m, 58H; pivalolyyli, alifaatt.); 20 0,89 (t, 3H, CH3).

g) 2S,3R-2-atsido-3-hydroksi-l-(B-D-glikopyrano-syylioksi)-4-trans-oktadekeeni (17) 4 g (4,3 mmol) yhdistettä (16) liuotetaan 50 milli-litraan vedetöntä dikloorimetaania. Lisätään 8 ml 0,05-25 molaarista natriummetylaattiliuosta vedettömässä metano-lissa. Sekoitetaan 3 päivää huoneen lämpötilassa. Sen jälkeen neutraloidaan ioninvaihtohartsilla Amberlit JR 120 (H^-muoto). Ioninvaihtohartsi suodatetaan pois, suoritetaan haihdutus ja kromatografinen erotus silikageelillä 30 käyttämällä kloroformi/metanoli-seosta (8,5:1,5). Saanto: 1.65 g (78 %), RF = 0,20, liuottimena kloroformi/metanoli (9:1).

XH-NMR (250 MHz, DMS0-d6, yksikköinä ppm) yhdiste (17) : 4,10 (d, 1H, H-l, J=7,6 Hz).

K

35 23 8 2 0 5 8 r) _2S,3R-2-amino-3-hydroksi-l-(8-D-glukopyrano- syylioksi)-4-trans-oktadekeeni (18) 1,65 g (3,4 mmol) yhdistettä (17) liuotetaan 50 millilitraan pyridiinin ja veden (1:1) seosta. Liuos kyl-5 lästetään rikkivedyllä. Sekoitetaan 24 tuntia huoneen lämpötilassa. Haihdutetaan kuiviin ja suoritetaan kromatografinen erotus silikageelillä käyttämällä ensin klorofor-mi/metanoli-seosta (9:1), sitten kloroformi/metanoli/vesi-seosta (5:4:1). Saanto: 1,47 g (94 %), RF = 0,64, liuotti-10 mena kloroformi/metanoli/vesi (5:4:1).

^-NMR (250 MHz, DMS0-d6, yksikköinä ppm) yhdiste (18): 4,10 (d, 1H, 1-H, J = 7,6 Hz).

s) 2S,3R-2-heksadekanoyyliamino-3-hydroksi-l-(B-D-glukopyranosyylioksi)-4-trans-oktadekeeni 15 1,47 g (3,2 mmol) yhdistettä (18) liuotetaan 50 millilitraan tetrahydrofuraania. Lisätään 50 ml 50 %:ista natriumasetaatin vesiliuosta. Seokseen lisätään voimakkaasti sekoittaen huoneen lämpötilassa 0,87 g (3,2 mmol) heksadekanoyylikloridia. Noin 2 tunnin kuluttua laimen-20 netaan seos 350 millilitralla tetrahydrofuraania ja vesi-faasi erotetaan. Orgaanista faasia ravistellaan kaksi kertaa keittosuolaliuoksen kanssa, jota käytetään kummallakin kerralla 50 ml, ja haihdutetaan. Jäännös kuivataan suur-tyhjössä. Tuotteen puhdistamiseksi suoritetaan kromato-25 grafinen erotus silikageelillä käyttämällä ensin kloroformia, sitten kloroformi/metanoli-seosta (9:1). Saanto: 1,81 g (81 %), RF * 0,4, liuottimena kloroformia/metanoli (8,5:1,5).

1H-NMR (250 MHz, DMSO-d6, yksikköinä ppm) yhdiste 30 (19): 7,5 (d, 1H, NH; J = 8,7 Hz); 5,52 (m, 1H, -CH2-CH=C); 5,35 (dd, 1H, CH2-CH=CH-, J = 15,2 Hz, J * 6,5 Hz); 5,03 (d, 1H, OH; J = 3,4 Hz); 4,92 (m, 3H, OH); 4,5 (5, 1H, OH; J = 4,9 Hz); 4,09 (d, 1H, H-l, J = 7,6 Hz); 4,0 - 3,55 (m, 4H); 3,45 (m, 2H); 3,15 - 2,9 (m, 4H); 2,1 - 1,88 (m, 4H); 35 1,45 (m, 2H); 1,22 (m, 50H; alifaatt.); 0,85 (5, 6H, CH3).

Claims (12)

1. Menetelmä sfingosiinijohdannaisten valmistamiseksi, joilla on yleinen kaava (I), 5 R1 / OH «N HaT^o

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä. 28 82058 tunnettu siitä, että kaavan R-CO-R' mukaisena keto-nina tai aldehydinä käytetään asetonia, etyylimetyylike-tonia tai dietyyliketonia tai bentsaldehydiä, jonka fenyy-lirengas voi olla substituoitu.

2« 82058

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hapettimena käytetään alkali-metalliperjodaattia tai lyijytetra-asetaattia ja että kaavan (II) mukaisen yhdisteen hapetus suoritetaan pH-alueel-la 7 - 8 huoneen lämpötilassa.

4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (III) mukaisen suojatun D-treoosin reaktio R3-CH2-fosfonaatin tai R3-CH2-trifenyyli-fosfoniumhalogenidin kanssa toteutetaan fenyylilitiumin, litiummetylaatin, natriumamidin, natriummetylaatin tai 15 natriumkarbonaatin läsnäollessa vedettömässä hiilivedyssä tai eetterissä typpiatmosfäärissä matalassa lämpötilassa ja käytettäessä R3-CH2-fosfoniumhalogenidia lisätään suolaa.

5. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että kaavan (IV) mukaisen yhdisteen vapaa hydroksyyliryhmä muutetaan atsidoryhmäksi käyttämällä O-trifluorimetaanisulfonointia, metaanisulfonoin-tia tai p-tolueenisulfonointia ja antamalla saadun O-sul-fonyylijohdannaisen reagoida alkalimetalliatsidin kanssa. 25

6. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suojaryhmän R-CO-R* lohkaiseminen kaavan (V) mukaisesta yhdisteestä tai suojaryhmän R" lohkaiseminen kaavan (IX) mukaisesta yhdisteestä suoritetaan käyttäen happohydrolyysiä.

5. VI OH jonka yhdisteen annetaan reagoida orgaanisen reagenssin 10 kanssa, joka pystyy reagoimaan selektiivisesti primäärisen hydroksyyliryhmän kanssa, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (VIII) H? OR" 15 / ^ H VI11 O3 20 jossa R" on hydroksyylisuojaryhmä, kaavan (VIII) mukaisen yhdisteen sekundäärinen hydroksyyliryhmä suojataan suoja-ryhmällä R" ', saadusta yhdisteestä, jolla on kaava (IX)

25 R"'O OR" 7 ^R3 k N3 30 lohkaistaan hydroksyylisuojaryhmä R", jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (X) R"10 OH li

35 J - R3 n3 27 8 2058 ja joko aiemmin saatu kaavan (VI) mukainen yhdiste tai kaavan (X) mukainen yhdiste glykosidoidaan D-glukoosin 0-trifluori- tai O-triklooriasetamidaatin tai 1-halogeeni-johdannaisen kanssa, joiden 2-, 3-, 4- ja 6-asemissa ole-5 vat hydroksyyliryhmät ovat asyyliryhmien Ac suojaamia, jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (VII) tai (XI) OAc N3 OaC N3 in AcO-rX-0 ! R3 AcO-r-Λ— 0 ! r3

7. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että hydroksyylisuojaryhmänä R" käytetään tilavuudeltaan suurta ryhmää kuten trifenyyli-metyyli-, monometoksitrifenyylimetyylisilyyli-, tert.bu-tyyli-, triklooriasetyyli-, trimetyylisilyyli-, tert.bu-35 tyylidimetyylisilyyli- tai tert.butyylidifenyylisilyyli-ryhmää. Il 29 8 2 0 5 8

8. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että suojaryhmänä R" ' käytetään alifaattisen tai aromaattisen karboksyylihapon asyyliryh-mää tai tert.butoksikarbonyyliryhmää, edullisesti 5 bentsoehapon tai substituoidun bentsoehapon tai pivaliini-hapon asyyliryhmää.

9. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (VI) tai (X) mukaisen yhdisteen glykosidointi suoritetaan mainitulla O-tri- 10 fluori- tai O-triklooriasetimidaatilla Lewis-happokataly-saattorin läsnäollessa vedettömässä hiilivedyssä tai halo-genoidussa hiilivedyssä tai mainitulla 1-halogeenijohdan-naisella happoa sitovan aineen tai raskasmetallisuolan läsnäollessa.

10. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että asyyliryhmät Ac ja suojaryhmä R"' lohkaistaan kaavan (VII) tai (XI) mukaisesta yhdisteestä emäksisen katalyysin avulla.

10 AcoX^ °>^V^ AcO OAc ΌΗ OAc 0R|, , VII XI 15 saadusta yhdisteestä lohkaistaan asyyliryhmät Ac tai asyy-liryhmät Ac ja suojaryhmät R"', jolloin saadaan yhdiste, jolla on kaava (XII) 20 f011 f3 OH OH 25 tämän yhdisteen atsidoryhmä muutetaan primääriseksi amino-ryhmäksi ja saatu yhdiste, jolla on kaava (XIII) OH NH2 30 OH OH XI11 N-asyloidaan kaavan R1-0H mukaisen rasvahapon kanssa.

10 L (I) jossa R1 on 14 - 24 hiiliatomia sisältävän rasvahapon asyyliryhmä 15 tai vastaava asyyliryhmä, jossa on hydroksyyliryhmä a-asemassa tai jossa on yksi tai kaksi kaksoissidosta cis-konfiguraatiossa, ja R3 on alifaattinen ryhmä, jossa on 13 - 19 hiiliatomia, joista vähintään 13 muodostaa suoran ketjun ja mahdollisesti korkeintaan 4 muodostaa metyylisi-20 vuryhmiä, ja joka ryhmä voi sisältää korkeintaan 3 cis-tai trans-konfiguraation omaavaa kaksoissidosta tai korkeintaan 3 kolmoissidosta, tunnettu siitä, että D-galaktoosin annetaan reagoida alemman alifaattisen keto-nin tai aromaattisen aldehydin kanssa, jolla on kaava 25 R-CO-R', jossa R ja R' tarkoittavat kumpikin alempaa al-kyyliryhmää tai toinen symboleista R ja R' tarkoittaa vetyä ja toinen aromaattista ryhmää, 4- ja 6-asemissa suojatuiksi D-galaktoosiksi, jolla on kaava (II)

30 R hoM ' OH 35 (II) 0H II 25 8 2 058 tämä yhdiste hajotetaan visinaalisia dioleja lohkaisevalla hapettimella vastaavaksi 2- ja 4-asemissa suojatuksi D- treoosiksi, jolla on kaava (III) R U_OH 111 CHO 10 (III) suojatun D-treoosin annetaan reagoida R3-CH2-fosfonaatin tai R3-CH2-trifenyylifosfoniumhalogenidin kanssa, joissa R3 merkitsee samaa kuin edellä, emäksen tai emäksen ja suolan 15 läsnäollessa yhdisteeksi, jolla on kaava (IV) R R '‘'Τ' 0 μ- tämän yhdisteen vapaa hydroksyyliryhmä aktivoidaan ja muu-25 tetaan atsidoryhmäksi, saatu atsidoyhdiste, jolla on kaava (V) R R' l·. ' N3 35 vapautetaan alifaattisen ketjun asemissa 1 ja 3 olevien 26 82058 hydroksyyliryhmien suojaryhmästä, jolloin saadaan 2-at-sido-l,4-dihydroksiyhdiste, jolla on kaava (VI) N3 i HO. /

11. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, 20 tunnettu siitä, että kaavan (XII) mukaisen yhdisteen atsidoryhmän muuttaminen primaariseksi aminoryhmäksi suoritetaan käsittelemällä rikkivedyllä veden ja pyridii-nin (1:1) seoksessa tai hydraamalla natriumboorihydridillä tai muulla pelkistimellä.

12. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavan (XIII) mukaisen yhdis teen N-asylointi suoritetaan käyttämällä kaavan R^OH mukaista rasvahappoa vettä lohkaisevan aineen läsnäollessa tai käyttämällä rasvahapon aktivoitua esteriä tai käyttä- 30 mällä rasvahapon halogenidia epäorgaanisen emäksen tai tertiäärisen orgaanisen emäksen läsnäollessa. 30 82058