FI80885C - Framstaellning av nya guaninderivat. - Google Patents

Description

1 80885

Uusien guaniinijohdannaisten valmistus

Keksintö koskee menetelmää patenttivaatimuksen 1 johdannon mukaisten terapeuttisesti aktiivisten guaniinijohdannaisten valmistamiseksi.

Virusten vaikutukset ruumiin toiminnoissa voivat johtaa lopuksi muutoksiin, jotka tapahtuvat solu- ja sitä pienemmällä tasolla. Patogeeniset muutokset solutasolla ovat erilaiset riippuen erilaisista virusten ja isäntäsolujen yhdistelmistä. Kun muutamat virukset aiheuttavat määrättyjen solujen turmeltumisen kokonaan (solujen kuoleminen), voivat muutamat muut aikaansaada soluissa neoplastisen tilan.

Tärkeitä yleisiä virusinfektioita ovat Herpes dermatitis (tähän sisältyy Herpes labialis), Herpes keratitis, Herpes genitalis, Herpes zoster, Herpes encephalitis, infektiivinen mononukleoosi ja cytomegalovirus-infektiot, jotka kaikki aiheuttavat viruksista, jotka kuuluvat herpes-virusten ryhmään. Muita tärkeitä virussairauksia ovat influenssa A ja B, jotka aiheutuvat vastaavasti influenssa A- ja B-viruk-sista. Muita tärkeitä tavallisia virussairauksia ovat viruksen aiheuttama hepatitis ja erikoisesti hepatitis B-virusin-fektiot, jotka ovat laajasti levinneet. Tarvitaan tehokkaita ja selektiivisiä viruksia vastaavia aineita näiden sairauksien käsittelyssä, samoin kuin muidenkin virussairauksien käsittelyssä.

Useiden erilaisten virusten, sekä DNA- että RNA-tyyppisten, on osoitettu aiheuttavan tuumoreita eläimissä. Syöpää aiheuttavien kemikaalien vaikutus voi aiheuttaa eläimissä la-tenttisten tuumorivirusten aktivoitumisen. On mahdollista, että tuumoriviruksia esiintyy ihmisten tuumoreissa. Nykyisin tunnetut todennäköisimmät ihmisissä esiintyvät tapaukset ovat leukemia, sarkooma, rintakarsinooma, Burkittin lymfoo-ma, nenäkarsinooma ja kaulasyöpä, joissa on todettu RNA- 2 80885 tuumori-viruksia ja herpes-viruksia. Tämä tekee tärkeäksi tutkimuksen tumorogeenisten virusten ja niiden vaikutusten selektiivisten estoaineiden löytämiseksi syövän vastustus-pyrkimyksissä .

Seuraavissa julkaisuissa on jo aikaisemmin kuvattu guanii-nijohdannaisia: Synthetic Communications 2 (6), 345-351 (1972), US-patentit 4 199 574 ja 4 355 032, Euroopan patenttihakemus 82401571.3 (julkaisunumero 74 306) ja Euroopan patenttihakemus 81850250.2 (julkaisunumero 55 239), jossa viimemainitussa on esitetty sellaisia viruksia vastustasia yhdisteitä, joilla on kaava

O

1 1

CH2-CH-CH-CH2OH

I I

Ri R2 jossa kaavassa Ri ja R2 voivat olla vety, hydroksi tai fluori.

EP-141 927 esittää seuraavan kaavan mukaisia viruksenvastai-sia yhdisteitä

X

l Y> Η2Ν'>^Ν'^ΚχΝ^

CH2-CH2-CH-CH2OH

ch2oh jossa X esittää klooria, alkoksia, fenoksia, fenyylialkok-sia, -NH2, -OH tai -SH. EP-141 927 jätettiin 10. elokuuta 3 80885 ja tuli julkiseksi 22. toukokuuta 1985 ja on siten relevantti uutuuden muttei keksinnöllisyyden suhteen verrattuna esillä olevaan keksintöön.

Esillä oleva keksintö koskee patenttivaatimuksen 1 tunnus-osan mukaista menetelmää.

On todettu, että keksinnön mukaisilla yhdisteillä on antivi-raalinen vaikutus ja ne estävät virusten määrättyjä toimintoja, kuten tumorogeenisia toimintoja, ja virusten lisääntymisen .

On myös todettu, että keksinnön mukaisilla yhdisteillä on erittäin suuri affiniteetti virusten tymidiini-kinaasiin, mikä on erittäin tärkeätä antiviraalisen aktiivisuuden kannalta käytettäessä näitä yhdisteitä sellaisissa soluissa, jotka sisältävät paljon tymidiiniä.

Keksinnön avulla aikaansaadaan täten yhdisteitä, sekä niiden geometrisiä isomeerejä ja fysiologisesti sopivia suoloja, jotka yhdisteet ovat käyttökelpoisia virussairauksien terapeuttisessa ja/tai profylaktisessa käsittelyssä, ja jotka voivat olla käyttökelpoisia virusten aiheuttaman syövän terapeuttisessa ja/tai profylaktisessa käsittelyssä.

4 80885

Tehokkaalla selektiivisellä, viruksia vastustavalla aineella, jolla on siedettävät sivuvaikutukset, tulee olla selektiivinen estovaikutus käsiteltävän viruksen spesifisen vaikutuksen suhteen. Näin ollen esillä olevan keksinnön eräänä tarkoituksena on aikaansaada uusi menetelmä virusinfektioiden vastustamiseksi käyttäen sellaista viruksia vastustavaa ainetta, jolla on selektiivinen estovaikutus viruksen toimintojen suhteen, mutta jolla on ainoastaan mitätön estovaikutus emäsolujen toimintaan nähden.

Eräs erittäin tärkeä keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttöala on herpes-virus-infektioiden käsittely. Herpes-viruksista voidaan mainita Herpes simplex-lajit 1 ja 2, varicella (Herpes zoster), sellainen virus, joka aiheuttaa mononukleoosi-infektion (so. Epstein-Barr-virus), ja cytomegalovirus. Tärkeitä herpes-virusten aiheuttamia sairauksia ovat Herpes dermatitis (sisältyy Herpes labialis), Herpes genitalis, Herpes keratitis, Herpes enkephalitis ja Herpes zoster.

Eräs toinen mahdollinen keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttöalue on syövän ja tuumorien käsittely, erikoisesti sellaisten, jotka virukset aiheuttavat. Tämä vaikutus voidaan aikaansaada eri tavoin, so. estämällä viruksen infektoimien solujen muuttuminen neoplastiseen tilaan estämällä virusten leviäminen muuttuneista soluista muihin normaalisoluihin ja estämällä virusten saastuttamien solujen kasvu.

Eräs muu keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttöalue on muuntuneiden solujen kasvun estäminen spesifisten herpes virus-entsyymien, kuten tymidaanikinaasin, käytön avulla näissä soluissa.

Mahdollisia alueita keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttämiseksi syövän kemoterapiassa ovat seuraavien sairauksien käsittely: leukemiat, lymfomat, mukaanlukien Burkittin-lymfoma ja Hodgkinsin-tauti, sarkomat, rintakarsinomat, nielu- ja nenä-karsinomat ja kaulasyövät, jotka ovat virusten aiheuttamia.

Muita mahdollisia aloja keksinnön mukaisten yhdisteiden käyttä- 5 80885 miseksi syövän kemoterapiassa ovat seuraavien tautien käsittelyt: Kerrannais-myeloma ja keuhkosyöpä (ja keuhkoputki-...

syöpä), mahasyöpä, maksasyöpä, paksusuolisyöpä, virtsarakko-syöpä, huulisyöpä, luusyöpä, munuaissyöpä, munasarjasyöpä,-prostaattassyöpä, haimasyöpä, ihosyöpä (melanoma), peräsuoli-syöpä, sylkirauhassyöpä, huulisyöpä, ruokatorvisyöpä, kivessyöpä, aivotyöpä (ja aivokalvosyöpä), kilpirauhassyöpä, virtsarakko-syöpä (ja virtsatiehytsyöpä) , nenäsyöpä,. kurkunpääsyöpä, kudos-syöpä, penissyöpä, häpyaukkosyöpä, emätinsyöpä, corpus uteri-syöpä ja kielisyöpä. -

Keksinnön avulla aikaansaadaan lääke, joka sopii käytettäväksi, kun kyseessä on: A. -Menetelmä virusten aiheuttamien sairauksien käsittelemiseksi eläimissä, ihminen mukaanlukien, joka menetelmä käsittää kaavan I mukaisen yhdisteen terapeuttisesti tehokkaan määrän tai tämän yhdisteen fysiologisesti sopivan suolan antamisen täten infektoituneelle eläimelle.

B. Menetelmä virusten, erikoisesti herpes-virusten, lisääntymisen estämiseksi eläimissä, ihminen mukaanlukien, antamalla tällaista käsittelyä tarvitsevalle eläimelle kaavan I mukaista yhdistettä tai sen fysiologisesti sopivaa suolaa riittävä määrä tämän lisääntymisen estämiseksi. .

C. Menetelmä viruksen aiheuttamien neoplastisten sairauksien käsittelemiseksi eläimissä, ihminen mukaanlukien, estämällä sellaisten solujen kasvu, joissa esiintyy virustoimintaa, antamalla täten infektoidulle eläimelle terapeuttisesti tehokas määrä kaavan I mukaista yhdistettä tai sen fysiologisesti sopivaa suolaa.

D. Viruksen muuntamien solujen kasvun estämismenetelmä eläimissä, ihminen mukaanlukien, antamalla tällaista käsittelyä tarvitsevalle eläimelle kaavan I mukaista yhdistettä tai sen fysiologisesti sopivaa suolaa määrä, joka on riittävä tämän kasvun estämiseksi.

6 80885 E. Menetelmä viruksen aiheuttamien neoplastisten sairauksien käsittelemiseksi eläimissä, ihminen mukaan lukien, estämällä tuumorivirusten lisääntyminen antamalla tällaista käsittelyä tarvitsevalle eläimelle kaavan I mukaista yhdistettä tai sen fysiologisesti sopivaa suolaa määrässä, joka on riittävä estämään tällaisen lisääntymisen.

F. Menetelmä neoplastisten sairauksien käsittelemiseksi eläimissä, ihminen mukaan lukien, antamalla tällaiselle eläimelle terapeuttisesti tehokas määrä kaavan I mukaista yhdistettä tai sen fysiologisesti sopivaa suolaa.

Kuten edellä mainittiin, niin keksinnön mukaisella menetelmällä valmistetuilla uusilla yhdisteillä on kaava

O

61 7

1 HN X8 I

2i 4 L /

HaN / 3 19

A

jossa kaavassa A on (CHa)m-CH-(CHa)nOH (Aa) tai

Ra CHa-C = C-CHaOH (Ab)

I I

Ri Rt, joissa kaavoissa m on 1 tai 2, n on 1 tai 2, jolloin m on 1 kun n on 2 ja m on 2 kun n on 1,

Ri on (CHa)pOH tai CORi, Rä on hydroksi, p on 1-4,

Ri£> ja Rt, ovat itsenäisesti valitut vedystä ja yhdisteestä (CHaJpOH, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi ryhmistä R& tai Rt, on vety, tai Rt, ja Rt, muodostavat yhdessä hiili- 7 80885 hiili-lisäsidoksen niin, että muodostuu alkyyni ja edellyttäen lisäksi, että kun m on 2 ja n on 1 ja RA on (CH^^OH, niin p on 2-4, tai sen fysiologisesti sopivan suolan, geometrisen tai optisen isomeerin valmistamiseksi valmistettaessa sellainen kaavan I mukainen yhdiste, jossa A on Aa.

Edellä esitetyt määritelmät m, n ja RA merkitsevät sitä, että seuraavat spesifiset yhdisteet, mukaan lukien niiden suolat ja optiset isomeerit, muodostavat keksinnön osan:

O

1 Y>

CH2-CH2-CH-CH2OH

RA

COOH

ch2ch2oh ch2ch2ch2oh ch2ch2ch2ch2oh o

Lj> h2n ch2-ch-ch2-ch2oh

RA

COOH

CH2OH

CH2CH2OH

ch2ch2ch2oh ch2ch2ch2ch2oh 8 80885

Kaavan I mukaiset yhdisteet sisältävät yhden epäsymmetrisen keskuksen silloin, kun R£ ja (CH2)nOH ovat erilaiset. Näin ollen ne esiintyvät kahdessa optisessa muodossa, jotka muodostavat myös keksinnön erään osan.

Seuraavat spesifiset yhdisteet, mukaan lukien niiden suolat ja geometriset isomeerit, muodostaat myös keksinnön osan:

O

tt i T>

H2N

CH2-C .................-‘C-CH2OH

I I

Ri R&

H H

H CH2OH

H CH2CH2OH

H CH2CH2CH2OH

H CH2CH2CH2CH2OH

CHaOH H

CH2CH2OH H

CH2CH2CH2OH H

CH2CH2CH2CH2OH H

Kun Rt. ei ole CH2OH, esiintyy yhdiste kahtena geometrisena isomeerinä, jotka muodostavat myös keksinnön osan.

Keksintö käsittää seuraavat yhdisteet: 9-[4-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)butyyli]guaniini 9-[4-hydroks i-3-karboksibutyyli]guani ini 9-[5-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)pentyyli ]guaniini 9-[6-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)heksyyli]guaniini 9-[4-hydroksi-2-karboksibutyyli]guaniini 9-[4-hydroksi-2-(hydroksietyyli)butyyli]guaniini 9-[5-hydroksi-2-(hydroksietyyli)pentyyliJguaniini 9 80885 9-[6-hydroksi-2-(hydroksietyyli )heksyy1i]guaniini 9-[4-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)-2-butenyyli]guaniini 9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini cis-9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini 9-(4-hydroksi-2-butynyyli)guaniini

Eräs edullinen keksinnön mukaisten yhdisteiden alaryhmä saadaan silloin, kun R^ on (CH2>pOH, kuten hydroksimetyyli tai hydroksietyyli.

Muita edullisia keksinnön mukaisia yhdisteitä ovat 9-[4-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)-2-butenyyli]guaniini ja cis-9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini.

Sellaisella kaavan I mukaisella yhdisteellä, jossa ja R£> muodostavat sidoksen, on antiviraalinen aktiivisuus, ja tämä yhdiste on myös kaavan I mukaisten yhdisteiden välituote, jossa Rj^ ja R£ ovat vetyatomeja.

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan saada jollain seuraa-vista menetelmistä A-E, jotka muodostavat myös keksinnön.

A. Asyylisivuketjun kondensoiminen, jolloin funktionaaliset ryhmät voivat mahdollisesti olla suojattuja guaniinijohdannaisen N-9-asemassa, jota seuraa suojattujen ryhmien poistaminen yhden tai useamman kemiallisen reaktion avulla.

?6a I N f*2a [ Y 7 ♦ Xa-(CH2)„,-CH-(CH2)n0R3a ->

R4a-N

I I

R5a Y

10 80885

Rea -* jlJTV -*

Ria-N -^N^NN Rja

I I I

R=a (CHa)m-CH-(CH2)nOR3a 0

Ja

HaN RA

I I

(CHa)m-CH(CH2)nOH

joissa kaavoissa RA, m ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, Xa on poistuva ryhmä, kuten kloori, bromi, jodi tai OSOaR7Ä, jossa R7a on alkyyli, fluorattu alkyyli, aryylialkyyli tai aryyli, Y on vety tai kvaternäärinen ammoniumioni, R3a on vety tai suojaryhmä, kuten asyyli, alkoksikarbonyyli, aryy-likarbonyyli, silyyli tai SOaR-^a, Ra« on RA, kuten edellä on määritelty, tai CN, COORea, CH(OR9e)2, CH(SR9a)a, NHCONHR9ä tai (CHaJpORga, jolloin p on määritelty edellä,

Rea on substituoitu silyyli tai ryhmä R7a, kuten edellä on määritelty, Rga on ryhmä R3a, kuten edellä on määritelty, tai Rea ja R®a muodostavat yhdessä ryhmän R3e kanssa kaksiarvoisen ryhmän, so. syklisen johdannaisen, kuten lakto-nin, syklisen esterin, ortohapon, asetaalin, eetterin tai silyylityyppisen yhdisteen, R4« ja Rs« ovat samat kuin edellä ryhmä R3a, Re« on poistuva ryhmä, kuten edellä määritelty ryhmä Xa, OH tai ORxoa, jossa R10a on alkyyli, aryylialkyyli, S02R7a, substituoitu silyyli, fosforyylidiesteri tai fosfinotioyyli. Suojaryhmät alan asiantuntija tuntee hyvin (ks. esim. "Protective Groups in Organic Chemistry", T. W. Greene, Wiley 1981; "Methoden der Organischen Chemie",

Houben-Weyl Vl/lb; ja "Comprehensive Organic Chemistry", D.H.R. Barton ja W.D. Ollis ym. 1979, Vol. 1 s. 623-629).

il 80885

Muutamia esimerkkejä ryhmästä R3a ovat asyyliryhmät, kuten asetyyli tai bentsoyyli, alkoksikarbonyyli- tai aryylioksi-karbonyyliryhmät, silyyliryhmät, kuten esim. tert.butyylidi-metyylisilyyli, aryylialkyyli, kuten bentsyyli ja triaryyli-metyyli tai S02R7a, jossa Rya on määritelty edellä.

Kondensaatio toteutetaan edullisesti orgaanisessa liuotti -messa, kuten esim. dimetyyliformamidissa, etanolissa, asetoni triilissä tai dikloorimetaanissa, lämpötilassa välillä 0°C ja 100°C 1 tunnin ja 3 vuorokauden välisenä aikana emäksen (kun Y on H), esim. kaliumkarbonaatin, läsnäollessa.

Kondensoimisen jälkeen hydrolysoidaan näitä yhdisteitä lämpötilassa 0-100°C 1-24 tuntia käyttäen happoa tai emästä, kuten esim. etikkahappoa, kloorivetyhappoa (1-35 %) vedessä, natriumhydroksidia (1-20 %) vedessä, ammoniakkia (1-25 %) vedessä tai metanolissa tai hydrataan vetykaasun avulla orgaanisessa liuottimessa, kuten esim. etanolissa tai dimetyyliformamidissa, käyttäen metallikatalyyttiä, 1-24 tuntia paineessa 100 - 5 000 kPa (1-50 ilmakehää). Kun R2a on CH(SRga)2, voidaan hydrolyysi suorittaa käyttäen sellaista reagenssia kuin elohopeakloridia erillisessä vaiheessa.

12 80885 B. Tyydyttämättömän sivuketjun kondensoiminen, jossa funktionaaliset ryhmät voivat mahdollisesti olla suojattuja guaniinijohdannaisen N-9-asemassa, käyttäen emäksistä katalyyttiä, jota seuraa pelkistäminen ja/tai suojaryhmien poistaminen R, ; 6 a T) 14a

4a | I

R H

R5a R, . 6a

I /N

-> ilX )> -> 43 I i h 4a R_ CH CH-CH.-R Γ 5a 22 15a —1 ..ÄX.

* | |16a

CH2CH-CH2-CH2OH

R^a, Rga ja Rga on määritelty edellä, R^a on CN, CONH2 tai COORga, ja R15a on COORga tai CH2OR9a, joissa Rga ja Rga on määritelty edellä, ja voivat lisäksi muodostaa kaksiarvoisen ryhmän, so. syklisen johdannaisen, kuten esimerkiksi laktonin tai jonkin muun syklisen esterin, ortohapon, asetaalin, eetterin tai silyylityyppisen yhdisteen, ja R^ga on C0NH2' C00H tai CH2OH.

13 80885

Kondensaatio toteutetaan edullisesti orgaanisessa liuottimessa, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidissa, etanolissa, asetonitrii-lissä tai dikloorimetaanissa, lämpötilassa välillä O ja 100°C 1 tunnin ja 3 vuorokauden välisenä aikana emäksisen katalyytin, kuten esimerkiksi kaliumkarbonaatin, natriummetoksidin, natrium-hydridin tai tetrabutyyliammoniumhydroksidin läsnäollessa.

C. Derivoitujen tai aktivoitujen karboksyylihapporyhmien pelkistäminen tai selektiivinen pelkistäminen, jota seuraa suoja-ryhmien poistaminen.

R, fl s --» »..T ϊ».

R (CH~) -CH-(CH9) ..-COR., 2 m 2 n-1 lla R, 6a ___>

R4a-N' ^N^\N' h 3a 4a I II

R_ (CH-) -CH-(CH9) OR~ 5a 2 m 2 n ia joissa kaavoissa m, n, R- , R. , Rj- ja Rc on määritelty edellä, όΟ 4 cl 33 Da R,, on R, . kuten edellä on määritelty, tai sellainen ryhmä

1 iu O

kuin (CH^)2N=CHO-, aktivoidussa karboksyylihappojohdannaisessa,

Rl2a on R2a ryhmä (C^) p_]_COR^a, 3°-*-ssa R2a' ^lla ^a P on määritelty edellä ja R-^a on R^ tai R^2a' kuten e(äellä on määritelty.

Pelkistäminen voidaan suorittaa käyttäen vetykaasua tai sellaista vetyä, joka on muodostettu in situ, ja käyttäen metallia katalyyttinä, tai edullisesti hydridipelkistysainetta orgaanisessa liuottimessa.

14 80 8 85 D. Asyylisivuketjun kondensoirainen, jolloin funktionaaliset ryhmät voidaan mahdollisesti suojata guaniinijohdannaisen N-9-asemassa, mitä seuraa suojaryhmien poistaminen yhden tai useamman kemiallisen reaktion avulla.

R6b I N R2b R7b

\ I I

Γ | \ + xb - CH2 - c = C - CH2OR3b ->

R4h-N"^. N

I I

R5b Y

R6b — rV’\ — R4b-N-^N/\N/ R2b R?b R5b CH2 - C = C - CH2OR3b 0

.N

—> xo

HoN-"^ \N N RiL RA

III

ch2 -c = c - ch2oh 15 80885 joissa kaavoissa Xb on poistuva ryhmä kuten kloori, bromi, jodi tai 0S02R8b' Jossa R8b on alkyyli, fluorattu alkyyli, aryylialkyyli tai aryyli, Y on vety tai kvaternäärinen ammoniumioni, R3b on vety tai suojaryhmä, kuten asyyli, alkoksikarbonyyli, aryylioksikarbonyyli, silyyli tai S02Rgb, R2b on R£ tai (CH2)pORgb ja Ryb on R& tai (CH2)pOR9b, jossa p on 1-4, ja jossa R9b on ryhmä R3b, kuten edellä on määritelty, tai R9b ja R3b muodostavat yhdessä kaksiarvoisen ryhmän, so. syklisen johdannaisen, kuten karbonaattiesterin, tiokarbonaattiesterin, ortohapon tai asetaaliyhdisteen,

Rgb on hydroksi tai poistuva ryhmä kuten kloori, bromi, jodi, merkapto, alkyylitio, S02Rgb tai OR^Qb' jossa R^ob on alkyyli, aryylialkyyli, substituoitu silyyli, fosforyyli-diesteri, fosfinotioyyli tai S02Rgb, R4b ja Rgb ovat samat kuin edellä määritelty ryhmä R3b. R3b voi olla hydroksisuo-jaryhmä, joita asiantuntija tuntee hyvin monenlaisia (ks. esim. "Protective Groups in Organic Chemistry", T.W. Greene, Wiley 1981; "Methoden der Organischen Chemie", Houben-Weyl Vl/lb; ja "Comprehensive Organic Chemistry", D.H.R. Barton ja W.D. Ollis, 1979, Voi. 1, s. 623-629).

Muutamia esimerkkejä ryhmistä R3b ovat asyyliryhmät, kuten asetyyli tai bentsoyyli, alkoksikarbonyyli- tai aryylioksi-karbonyyliryhmät, silyyliryhmät, kuten esim. tert.-butyyli-dimetyylisilyyli, aryylialkyyli, kuten bentsyyli ja triaryy-limetyyli, tai S02Rgb, jolloin Rgb on määritelty edellä.

16 80 885

Kondensaatio toteuetaan edullisesti orgaanisessa liuottimessa, kuten esimerkiksi dimetyyliformamidissa, etanolissa, asetonit-riilissä tai dikloorimetaanissa, lämpötilassa välillä O ja 100°C 1 tunnin ja 3 vuorokauden välisenä aikana emäksen läsnäollessa (kun Y on H), jona voi olla esimerkiksi kaliumkarbonaatti.

Kondensaation jälkeen hydrolysoidaan yhdisteet lämpötilassa 0-100°C 1-24 tunnin kuluessa käyttäen happoa tai emästä, kuten esimerkiksi etikkahappoa, kloorivetyhappoa (1-35 %) vedessä, natriumhydroksidia (1-20 %) vedessä, ammoniakkia (1-25 %) vedessä tai metanolia.

E. Tyydyttämättömän sivuketjun kondensoiminen, jossa sivuketjussa funktionaaliset ryhmät voivat mahdollisesti olla suojattuja guaniinijohdannaisen N-9-asemassa käyttäen metallikata-lyyttiä, jota seuraa suojaryhmien poistaminen yhden tai useamman kemiallisen reaktion avulla.

?6b /N R p K\( \ ,2b ,7b

Li /> + CH = c--C - CH, -* R4b -

R5b H

I 6b _>

Rih · N '^N r 4b I I ?2b R7b

R5b CH2 - c = c - CH20H

o /A.

1 u S·

ch2 - c = C - CH20H

R^t Rb» R2b' ^4b' R5b' R6b -*a R7b °n määritelty edellä.

17 80885

Kondensaatio toteutetaan edullisesti orgaanisessa liuotti-messa, kuten esim. dimetyyliformamidissa, etanolissa, ase-tonitriilissä tai dikloorimetaanissa, lämpötilassa välillä 0 ja 100°C 1 tunnin ja 3 vuorokauden välisenä aikana metal-likatalyytin, kuten esim. tetrakis(trifenyylifosfiini)palla-dium(0):n läsnäollessa.

Esitettyjä menetelmiä A-C voidaan käyttää optisten isomeerien seosten saamiseen tai sopivissa tapauksissa yhden ainoan optisen isomeerin saamiseksi. Lisäksi voidaan yhtä ainoata optista isomeeriä saada raseemisista seoksista sinänsä tunnetuilla menetelmillä.

Kuvattuja menetelmiä D ja E voidaan käyttää geometristen isomeerien seosten saamiseksi tai sopivassa tapauksessa vain yhden geometrisen isomeerin saamiseksi. Vain yksi geometrinen isomeeri voidaan myös saada isomeeriseoksista sinänsä tunnetuilla menetelmillä.

Lähtöaineet edellä mainituissa menetelmissä A-E ovat joko tunnettuja yhdisteitä tai niitä voidaan valmistaa alan asiantuntijalle tunnettujen menetelmien avulla.

Näitä uusien yhdisteiden ryhmiä voidaan valmistaa sinänsä tunnetulla tavalla.

Suolat

Keksinnön mukaisten yhdisteiden fysiologisesti sopivia suoloja valmistetaan sinänsä tunnetuilla menetelmillä. Nämä suolat ovat uusia yhdisteitä ja ovat myös keksinnön kohteena. Metallisuoloja voidaan valmistaa käsittelemällä metallihydroksidia keksinnön mukaisella yhdisteellä. Esimerkkejä metallisuoloista, joita voidaan valmistaa täten, ovat sellaiset suolat, jotka sisältävät metalleja Li, Na ja K. Vähemmän liukoinen metallisuola voidaan saostaa liukenevam-man suolan liuoksesta lisäämällä sopivaa metalliyhdistettä. Happamia suoloja voidaan valmistaa käsittelemällä keksinnön ie 80885 mukaista yhdistettä hapolla, kuten HC1, HBr, H2SO4 tai orgaanisella sulfonihapolla.

Farmaseuttiset valmisteet

Kaavan I mukaisten yhdisteiden farmaseuttiset valmisteet

O

A -

HhK \ I

k I > h2n

A

jossa kaavassa A on (CH2)mCH-(CH2)nOH (Aa) tai

Ra CH2-C = C - CH2OH (Ab)

Rb Rb joissa kaavoissa m on 1 tai 2, n on 1 tai 2, jolloin m on 1 kun n on 2 ja m on 2 kun n on 1, R4 on (CH2)pOH tai COR£, Rä on hydroksi, p on 1-4, ja Rb ovat itsenäisesti valitut ryhmästä vety ja (CH2)pOH, sillä edellytyksellä, että ainakin toinen ryhmistä Rjij tai R£ on vety, tai R& Ja Rb muodostavat yhdessä hiili-hiili-lisäsidoksen niin, että muodostuu alkyyni ja edellyttäen, että kun m on 2 ja n on 1 ja Rg on (CH2)pOH, niin p on 2-4, tai sen fysiologisesti sopiva suola, geometrinen tai optinen isomeeri, farmaseuttisesti sopivan kantajan kanssa muodostavat keksinnön mukaisen menetelmän erään toteuttamismuodon.

19 80885

Keksinnön mukaisia yhdisteitä voidaan annostella systeemi-sesti tai paikallisesti, ja kliinisessä käytännössä niitä annostellaan tavallisesti ulkoisesti, oraalisesti, nenä-ontelon kautta, injektoimalla, infusoimalla tai sisäänhen-gittämällä sellaisen farmaseuttisen valmisteen muodossa, joka sisältää aktiivisen aineosan alkuperäisen yhdisteen muodossa tai mahdollisesti sen farmaseuttisesti sopivan suolan muodossa yhdessä farmaseuttisesti sopivan kantajan kanssa, joka voi olla kiinteä, puolikiinteä tai nestemäinen laimennusaine tai käyttäen nieltävää kapselia, ja nämä valmisteet muodostavat myös keksinnön erään toteuttamismuodon. Näitä yhdisteitä voidaan myös käyttää ilman kantaja-ainetta. Esimerkkeinä farmaseuttisista valmisteista mainittakoon tabletit, liuokset, tipat, kuten nenätipat, silmätipat, ulkoiseen käyttöön tarkoitetut valmisteet, kuten salvat, geelit, voiteet ja suspensiot, hengitettävät aerosolit, nenäsuihkeet, liposomit yms. Aktiivisen aineen määrä on tavallisesti 0,01-99 paino-% tai 0,1-99 paino-%, esim. välillä 0,5-20 %, sellaisissa valmisteissa, jotka ovat tarkoitetut injektoitaviksi, ja välillä 0,1 ja 50 % sellaisissa valmisteissa, jotka on tarkoitettu oraaliseen annosteluun.

20 80885

Valmisteet ovat edullisesti annosyksikön muodossa. Edelleen ne ovat edullisesti valmistetut steriloituun muotoon.

Farmaseuttisten valmisteiden valmistamiseksi annosyksikön muodossa oraalista käyttöä varten, jotka valmisteet sisältävät keksinnön mukaista yhdistettä, voidaan aktiivinen aineosa sekoittaa kiinteän, jauhemaisen kantajan, esimerkiksi laktoosin, sakkaroosin, sorbitolin, mannitolin, tärkkelyksen, kuten perunatärkkelyksen, maissitärkkelyksen, amylopektiinin, laminaria-jauheen tai sitruunajauheen tai selluloosajohdannaisen tai gelatiinin kanssa, ja tällöin voidaan myös käyttää voiteluaineita, kuten magnesium- tai kalsiumstearaattia, tai tuotetta Carbowa>P^ tai jotain muuta polyetyleeniglykolivahaa, ja puristaa tablettien tai rakeiden sydänosien muodostamiseksi. Rakeita valmistettaessa voidaan sydänosat päällystää esimerkiksi väkevällä sokeri-liuoksella, joka voi sisältää arabikumia, talkkia ja/tai titaanidioksidia, tai vaihtoehtoisesti käyttäen kalvon muodostavaa ainetta, joka on liuotettu helposti haihtuvaan orgaaniseen liuot-timeen tai orgaanisten liuottimien seokseen. Näihin päällysteisiin voidaan lisätä väriaineita, esimerkiksi aktiivisen aineen erilaisten pitoisuuksien erottamiseksi toisistaan. Valmistettaessa pehmeitä gelatiinikapseleita, jotka sisältävät gelatiinia ja esimerkiksi glyserolia ja plastisoimisainetta, tai tämän kaltaisten suljettujen kapselien valmistamiseksi, voidaan aktiivinen aine sekoittaa tuotteen Carbowaj^ kanssa tai jonkin sopivan öljyn, kuten sesamöljyn, oliiviöljyn tai arrakkiöljyn kanssa. Kovat gelatiinikapselit voivat sisältää aktiivisen aineen rakeita yhdessä kiinteiden, jauhemaisten kantaja-aineiden, kuten laktoosin, sakkaroosin, sorbitolin, mannitolin, tärkkelysten (esimerkiksi perunatärkkelyksen, maissitärkkelyksen tai amylopektiinin), selluloosajohdannaisten tai gelatiinin kanssa, ja niissä voidaan myös käyttää voiteluaineena magnesiumstearaattia tai steariini-happoa.

21 80885 Käytettäessä useita aktiivisen lääkeaineen kerroksia, joita erottavat toisistaan hitaasti liukenevat päällysteet, saadaan pitkän aikaa vaikuttavia tabletteja. Eräs toinen tapa valmistaa pitkän aikaa vaikuttavia tabletteja on jakaa aktiivisen lääkeaineen annos rakeisiin, joilla on eri paksuiset päällysteet, ja puristaa rakeet tableteiksi yhdessä kantaja-aineen kanssa. Aktiivinen aine voidaan myös lisätä hitaasti liukeneviin tabletteihin, jotka on valmistettu esimerkiksi rasvasta ja vahasta tai jaettu tasaisesti tablettiin, jonka muodostaa liukenematon aine, kuten fysiologisesti inerttinen plastinen aine.

Nestemäiset valmisteet oraalista annostusta varten voivat olla eliksiirien, siirappien tai suspensioiden muodossa, esimerkiksi liuoksina, jotka sisältävät noin 0,1-20 paino-% aktiivista ainetta, sokeria ja etanolin, veden, glyserolin ja propyleeniglykolin seosta, ja mahdollisesti aromaattisia aineita, sakkariinia ja/tai karboksimetyyliselluloosaa dispergoimisaineina.

Injektoimiseen käytettävät parenteraaliset valmisteet voivat sisältää aktiivisen aineen vesiliuosta tai sen fysiologisesti sopivaa suolaa edullisesti väkevyydessä 0,05-10 %, ja mahdollisesti myös stabiloimisainetta ja/tai puskuriainetta vesiliuoksessa. Liuoksen annosyksiköt voidaan edullisesti sulkea ampulleihin.

Pinnallista käyttöä varten, erikoisesti käsiteltäessä herpes-virusinfektioita iholla, sukupuolielimissä ja suussa ja silmissä, ovat nämä valmisteet sopivasti liuoksen, salvan, geelin, suspension, voiteen yms. muodossa. Aktiivisen aineen määrä voi vaihdella esimerkiksi välillä 0,05-20 paino-% aktiivista ainetta. Tällaiset pinnallista käyttöä varten tarkoitetut valmisteet voidaan valmistaa tunnetulla tavalla sekoittamalla aktiivinen aine tunnettujen kantaja-aineiden, kuten isopropanolin, glyserolin, parafiinin, stearyylialkoholin, polyetyleeniglykolin, polypropyleeniglykolin yms. kanssa. Farmaseuttisesti sopiva kantaja voi myös sisältää jotain tunnettua kemiallista absorptiota edistävää ainetta. Esimerkkejä tällaisista absorptiota edistävistä aineista ovat esimerkiksi dimetyyliasetamidi 22 80885 (US-patentti 3 472 931) , trikloorietanoli ja trifluorietanoli (US-patentti 3 891 757), määrätyt alkoholit ja niiden seokset (GB-patentti 1 001 949). Se voi myös sisältää pesuaineita aktiivisen aineen tunkeutumisen edistämiseksi ihon sisään.

Ne annostukset, joissa aktiiviset aineosat annostellaan, voivat vaihdella laajoissa rajoissa ja riippuvat eri tekijöistä, kuten esimerkiksi infektion vaikeudesta, potilaan iästä jne. ja nämä voidaan säätää erikseen. Niinä mahdollisina keksinnön mukaisten yhdisteiden määrän alueina, joita voidaan annostella vuorokaudessa, mainittakoon noin 0,1-2000 mg, edullisesti 1-2000 mg, pinnalliseen annosteluun, 50 - noin 2000 mg tai noin 100-1000 mg oraaliseen annosteluun, ja noin 10-2000 mg tai noin 50-500 mg injektiota varten.

Vaikeimmissa tapauksissa on välttämätöntä lisätä annokset 5- tai aina 10-kertaisiksi. Vähemmän vaikeissa tapauksissa voi olla riittävää käyttää yhdistettä 500-1000 mg.

Aktiivisia aineosia sisältävät farmaseuttiset seokset voidaan sopivasti muodostaa sellaisiksi, että ne aikaansaavat sellaisia annoksia, jotka ovat näissä rajoissa joko yhtenä annoksena tai useampana annoksena.

Täten keksinnön mukaisesti on todettu, että kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden fysiologisesti sopivat suolat ovat käyttökelpoisia estämään herpes-virusten lisääntymisen. Kaavan I mukaiset yhdisteet ja niiden fysiologisesti sopivat suolat ovat käyttökelpoisia virusinfektioiden terapeuttisessa ja/tai estävässä käsittelyssä.

Eräs edullinen keksinnön piirre on kaavan I mukaisen yhdisteen käyttö, sellainen yhdiste mukaanluettuna, jossa R’ on CH-OH, d L· kun m on 2 ja n on 1, tai sen fysiologisesti sopivan suolan käyttö herpes-virusinfektioiden käsittelyssä.

< 23 80 8 8 5

Vertailuesimerkit

On verrattu keksinnön mukaista yhdistettä 9-[4-hydroksi- 2- (hydroksimetyyli)butyyli]guaniinia 0

II

h/V\c i I i N 1-N—CH2-CH CH2-CH2OH VSA 671

H2N I

ch2oh lähintä tekniikan tasoa edustavaan yhdisteeseen 9-(2,4-dihydroksibutyyli)guaniiniin, joka esiintyy FI-patenttijulkaisussa 68054 sen esimerkissä 12, ja jolla on kaava 0 hn ,r 1 ' 1 X —-N—CH2-CH—CH2-CH20H VIS 715

H2N I

OH

seuraavissa vertailuesimerkeissä 1-3.

Vertailuesimerkki 1 HSV-1 verisoluissa aiheuttaman plakin estäminen

Yhdisteiden VSA 671 ja VIS 715 aiheuttama viruskannan HSV-1 C-42 estäminen mitattiin plakin vähennyskokeessa "Vero-soluissa" (viherapinan munuaissolut), kuten on kuvattu julkaisussa Ejercito et ai., J. Gen. Virol. 2 357 (1968). IC50-arvot mitattiin lähiresponsitutkimuksilla kummankin aineen kuudella pitoisuudella. Arvot muodostuvat ainakin kahden eri kokeen keskiarvosta.

Yhdiste_ICc;n (μΜ) VSA 671 0,2 VIS 715 64 24 80 8 85

Arvot osoittavat, että yhdistettä VSA 671 tarvitaan ainoastaan 0,2 μΜ aikaansaamaan 50 % HSV-l-plakin muodostuksen vähennys, kun taas yhdistettä VIS 715 tarvitaan 64 μΜ aiheuttamaan vastaavan plakin muodostuksen vähennyksen. Ero on siis 320 kertainen.

Vertailuesimerkki 2

Varicella zoster-viruksen (VZV) monistumisen estäminen HL-soluissa Määritettiin useampien VZV-viruskantojen monistuminen HL-soluissa (ihmisen keuhkon sidekudosemosoluissa) yhdisteiden VSA 671 ja VIS 715 läsnäollessa. Määritys suoritettiin mittaamalla myöhäisantigeenien muodostusta ELISA-tekniikalla, kuten on selostettu julkaiussa B. Wahren et ai., J. Virological Methods 6, 141-149 (1983).

Yhdiste_IC5Q (μΜ) VSA 671 1,5-2,5 (4 isolaattia) VIS 715 300 (1 isolaatti) VZV:n 50 % inhibition aikaansaamiseksi tarvitaan yhdistettä VSA 671 1,5-2,5 μΜ, kun taas VIS 715 tarvitaan peräti 300 μΜ. Näin korkean konsentraatio on osoituksena siitä, että ettei VIS 715 ole varteenotettava VZV-muodostuksen estoaine.

Vertailuesimerkki 3

Yhdisteiden VSA 671 ja VIS 715 affiniteetti herpesvirusin-dusoituun tymidiini kinaasiin Määritettiin yhdisteiden VSA 671 ja VIS 715 inhibitiovakiot (K^), jotka osoittavat yhdisteiden afiiniteettia HSV-1 tymidiinikinaasiin. Menetelmän ohjeena käytettiin julkaisua A. Larsson et ai., Antimicrob. Agents Chemother. 23, 664 (1983).

25 80 8 8 5

Yhdiste__ VSA 671 0,6 VIS 715 19

Tulokset osoittavat, että VSA 671 omaa paljon korkeamman affiniteetin HSV-l-tymidiinikinaasiin kuin VIS 715. Tällainen korkea affiniteetti edistää viruksen vastaista aktiivisuutta sellaisissa olosuhteissa, joissa yhdisteiden on kilpailtava tymidiinin kanssa. VSA 671:n affiniteetti on lähellä luonnollisen tymidiinisubstraatin affiniteettia, sillä sen Km on 0,42 μΜ. Mitä korkeampi K-^-arvo sitä alempi on tymidiinikinaasin affiniteetti.

26 80885

Suoritusesimerkit

Seuraavat esimerkit kuvaavat keksinnön mukaisten yhdisteiden valmistusta.

Esimerkki 1. 9-/4-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)butyyli/quaniini (menetelmä C) I I p> VSA 671

H2N

CHoCHCH_CHo0H Z | z z ch2oh

Natriumboorihydridin (135 mg; 3,57 mmoolia) ja kuivatun litium-bromidin (220 mg; 2,53 mmoolia) suspensiota 4 ml:ssa kuivattua ja tislattua diglyymiä sekoitettiin huoneen lämpötilassa 1/2 h.

Kun oli lisätty dimetyyli-2-(2-amino-6-klooripurin-9-yylimetyyli)-sukkinaattia (215 mg; 0,656 mmoolia) ja 3 tippaa trimetyylibo-raattia, sekoitettiin seosta huoneen lämpötilassa yli yön ja sitä pidettiin sitten lämpötilassa 100°C 5 h. Liuotin haihdu tettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin 10 ml:aan 70 %:sta muurahaishappoa vedessä ja pidettiin lämpötilassa 50°C yli yön. Seos haihdutettiin kuiviin tyhjössä, liuotettiin veteen, neutraloitiin natriumbikarbonaatilla ja haihdutettiin tyhjössä. Suoritettaessa kromatografinen käsittely (piidioksidigeeli, etyyliasetaatti + metanoli + vesi 4+3+1 tilavuusosaa) ja kiteytettäessä uudelleen vedestä saatiin 99 mg 9-/4-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)-butyyli7guaniinia. Yhdiste puhdistettiin preparatiivisen HPLC-käsittelyn avulla (Porasil C^g-käänteisfaasipatsas, metanoli + vesi 20+80), jolloin saatiin puhdas tuote uudelleenkiteyttämisen jälkeen vedestä. Sp. 235°C.

UV-spektri, λ makg (nm): 0,01 M HC1 253 (277) H20 (pH 7) 252 (270 infl.) 0,01 M NaOH 268 (256 infl.) 27 80885 1H NMR (DMSO-dg): δ 1,43 (m, 2H) CH2CH2OH; 2,09 (m, 1H) CH; 3,34 (d, 2H) CHCH-jOH; 3,47 (t, 2H) CH2<JH2OH; 3,96 (ABX järjest. 2H) NCH2; 6,25 (leveä s, 2H) NH2; 7,59 Ts, 1H) Hg,· 10,4 (leveä s, 1H) NH.

Lähtöaineyhdiste, dimetyyli-2-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli-metyyli)siikkinaatti, valmistettiin seuraavasti: (menetelmä B)

Cl

1 jTS

2 I

CH2CHCH2COOCH3 C00CH3

Seosta, jossa oli 2-amino-6-klooripuriinia (4,07 g; 0,024 moolia), dimetyyli-itakonaattia (5,00 g; 0,032 moolia) ja natriumhydri-diä (55 % öljyssä; 0,2 g) 50 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia, sekoitettiin huoneen lämpötilassa 3 vuorokautta. Sitten lisättiin noin 50 ml vettä ja seos pestiin n-heksaanilla (2 x 50 ml) ja uutettiin sitten 2 x 50 ml:11a dikloorimetaania. Yhdistetyt CH2Cl2~uutteet pestiin 2 x 20 ml:11a vettä, kuivattiin magnesium-sulfaatilla ja haihdutettiin tyhjössä. Käsiteltäessä eetterillä ja kuivattaessa saatiin valkoinen, kiteinen tuote. Kromatografisesta käsittelystä (piidioksidigeeli, kloroformi + metanoli 15+1) saatiin 5,54 g (71 %) ja uudelleenkiteytyksestä (Me0H-H20) 5,15 g (66,1 %) dimetyyli-2-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli- metyyli)sukkinaattia.

UV-spektri EtOH:ssa, ^ma^s (nm): 310 (247) l-NMR (CDC13) δ 2,67 (dd, 2H) CH2C00; 3,46 (m, 1H) CH; 3,70 (2s, 2x3H) 0CH3; 4,42 (ABX järjest. Jgem=14 Hz, 2H) NCH2; 5,35 (leveä s, 2H) NH2; 7,79 (s, 1H) Hg.

Esimerkki 2. 9-/4-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)butyyli7guaniini (menetelmä A) 28 80 8 85 o I V VIS 873

H N

H2N I ^-CH2OH

ch2-ch2-ch

1 λ CH2OH

Seoksen, jossa oli 2-amino-6-klooripuriinia (1,275 g; 7,5 mmoo-lia) ja kaliumkarbonaattia (0,69 g; 5 mmoolia) kuivassa dimetyy-liformamidissa (30 ml), käsiteltiin ääniaaltojen avulla 15 min, siihen lisättiin bentsyyli-2-bentsyylioksimetyyli-4-bromibutyyli-eetteriä (1,82 g; 5 mmoolia) ja seoksen annettiin sitten seistä auringonvalossa 4 h ja sitä sekoitettiin sitten yli yön. Haihduttamisen jälkeen tyhjössä jäännös uutettiin 3 x 50 ml :11a kloroformia ja uutteet haihdutettiin kuiviin tyhjössä. Kromatografisen käsittelyn avulla (piioksidigeeli, kloroformi + metanoli 20+1 tilavuuden perusteella) saatiin 0,58 g (26 %) puhdasta yhdistettä, 4-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli)-2-bentsyylioksimetyy-libutyyli-bentsyylieetteriä. Vähäinen näyte tätä yhdistettä kiteytettiin uudelleen tolueenista. Sp. 108,5-109,5°C.

1H NMR (CDC13) : δ 1,96 (m, 3H) N-C-CH2CH; 3,48 (ABX järjest. 4H) CH(CH20)2; 4,13 (t, 2H) NCH2; 4,46 (sT 4H) 0CH2Ph; 5,49 (s, 2H) NH2; 7,30 (m, 10H) fenyyli; 7,69 (s, 1H) Hg.

Cl πΛ^Ν H2N \ I ch2och2-(O ) CH2-CH2-CH '—' ch2och2 —

Suojauksen poisto

Liuosta, jossa oli 4-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli)-2-bentsyyli-oksimetyylibutyyli-bentsyylieetteriä (0,904 g; 2 mmoolia) 25 ml:ssa 80 %:sta muurahaishapon vesiliuosta, pidettiin lämpötilassa 100°C 1 h, lisättiin palladiumkatalyyttiä (10 % hiilellä; 29 80885 0,40 g) ja seosta hydrattiin huoneen lämpötilassa ja ilmakehän paineessa voimakkaasti sekoittaen 45 min. Haihduttamisen jälkeen kuiviin tyhjössä kuumennettiin jäännös kiehumispisteeseen yhdessä 50 ml:n kanssa vettä, lisättiin 1 ml väkevää ammoniakin vesiliuosta, liuosta kiehutettiin varovaisesti lyhyen aikaa ja haihdutettiin sitten kuiviin. Kiteytettäessä uudelleen vedestä saatiin 0,23 g (45 %) 9-/4’-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)butyyli7~ guaniinia. Sp. 252-262°C (hajoaa, hidas kuumentaminen) tai 264-265°C(kapillaarin nopea muuttuminen).

1H NMR (DMS0-dg): 61,51 (m, 1H) CH; 1,76 (q, 2H) N-C-CH2; 3,42 (ÄBX järjest. 4H) 2CH20; 4,02 (t, 2H) NCH2; 6,29 (leveä s, 2H) NH2; 7,64 (s, 1H) H8; 10,3 (leveä s, 1H) NH.

UV, ^maks (nm): etanoli 255 ε12300 (~270 infl.) 1 M HC1 253 C11300 279 1 M NaOH 268 (257 infl.) Lähtöaineyhdiste, bentsyyli-2-bentsyylioksimetyyli-4-bromibutyyli-eetteri, valmistettiin seuraavasti: a) Dietyyli-(2,2-dimetoksietyyli)malonaatti CH30 ^COOCH2-CH3

^ CH-CH2-CH

CH-jO"^ COOCH2~CH3

Dietyylimalonaattia (168,18 g; 1,05 moolia) lisättiin liuokseen, jossa oli natriumetoksidia (23,0 g:sta; 1,00 moolia natriumia) 500 ml:ssa kuivaa etanolia, lämpötilassa 50°C 45 min kuluessa. Sitten lisättiin samassa lämpötilassa bromiasetaldehydi-dimetyyli-asetaalia (74,2 g; 1,06 moolia) 45 min kuluessa ja seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen yli yön. Etanoli haihdutettiin tyhjössä ja jäännös liuotettiin 200 ml:aan vettä ja uutettiin 3 x 300 ml:11a eetteriä. Uutteet kuivattiin (MgSO^), haihdutettiin ja tislattiin tyhjössä, jolloin saatiin 115,0 g (46 %) otsikossa mainittua yhdistettä. Kp. 97-101°C (0,6 mm Hg).

30 80885 1H NMR (CDC1,): δ 1,30 (t, J=7Hz, 6H) 2C-CH ; 2,20 (dd, J = 5Hz ja 7Hz, 2H) CH-CH2; 3,35 (s, 6H) 20CH3; 3,44 (t, 1H) C0CHC0; 4,20 (q, J=7Hz, 4H) 20CH2; 4,42 (t, J=5Hz, 1H) O-CH-O.

b) 4,4-dimetoksi-2-(hydroksimetyyli)butanoli

CH-,0 CHo0H

3 \ ./ 2

CH-CH„-CH

z' \ CH30 ch2oh

Dietyyli-(2,2-dimetoksietyyli)malonaattia (115,0 g; 0,46 moolia) lisättiin suspensioon, jossa oli litiumaluminiumhydridiä (38,0 g; 1,00 moolia) 400 ml:ssa kuivaa eetteriä sellaisella nopeudella, että voitiin ylläpitää varovainen palautusjäähdyttäminen. Kun oli sekoitettu 15 minuuttia, lisättiin 40 ml vettä, 40 ml 15 %:sta NaOH:n vesiliuosta ja 120 ml vettä, ja sekoittamista jatkettiin siksi, kunnes saatiin valkoinen suspensio. Epäorgaaniset suolat erotettiin suodattamalla ja uutettiin useilla 200 ml:n erillä tetrahydrofuraania (THF). Yhdistetyt orgaaniset uutteet haihdutettiin ja tislattiin kahdesti tyhjössä, jolloin saatiin 50,23 g (66,5 %) otsikossa mainittua yhdistettä. Kp. 116-125°C (0,02 mm Hg).

1H NMR (CDC13): 6 1,6-2,1 (m, 3H) CH2CH; 3,35 (s, 6H) 20CH3; 3,67 (d, 4H) 2CH20; 4,48 (t, J=5Hz, 1H) O-CH-O.

c) Bentsyyli-2-(bentsyylioksimetyyli)-4,4-dimetoksibutyylieetteri ch3o ch2och2 —(5)

N''S' CH-CH--CH

X \ /ΤΛ CH30 CH2OCH2 —\Q/

Natriumhydridiä (55 % öljyssä; 32,72 g; 0,75 moolia) pestiin kahdesti n-heksaanilla ja suspendoitiin 200 ml:aan THF. Sitten lisättiin tipottain 4,4-dimetoksi-2-(hydroksimetyyli)butanolia (49,26 g; 0,3 moolia) vetykaasun vähäisen kehittymisen ylläpitämiseksi. Bentsyylikloridia (94,94 g; 0,45 moolia) lisättiin 31 80885 30 minuutin kuluessa ja seosta kuumennettiin palautusjäähdyttäen yli yön, jäähdytettiin, laimennettiin 50 ml:11a etanolia ja haihdutettiin tyhjössä. Jäännös suspendoitiin noin 200 ml:aan vettä ja uutettiin 3 x 100 ml:11a eetteriä. Yhdistetyt orgaaniset uutteet kuivattiin (MgS04) ja tislattiin tyhjössä. Otsikossa mainittua yhdistettä (94,34 g; 91 %) saatiin lämpötilassa 197-200°C (0,01 mm Hg).

1H NMR (CDC13); 6 1,67 (epäselvä t, 2H) CHCH2CH; 2,02 (m, 1H) CH; 3,23 (s, 6H) 20CH3; 3,46 (d, 4H) 2CH20; 4,43 (s, 4H) 20CH2Ph; 4,43 (t, 1H) O-CH-O; 7,27 (leveä s, 10H), fenyyli.

d) 4-bentsyylioksi-3-bentsyylioksimetyylibutan-l-oli ^ ch2och2 —(c)

IIOCH2-CH2-CH

\ch2och2 —(o)

Seosta, jossa oli bentsyyli-2-bentsyylioksimetyyli-4,4-dimetoksi-butyylieetteriä (51,62 g; 0,15 moolia), etikkahappoa (70 ml), vettä (30 ml) ja THF (100 ml), kuumennettiin palautusjäähdyttäen 2 h ja haihdutettiin sitten tyhjössä. Jäännös liuotettiin eetteriin ja liuos pestiin vesipitoisella kaliumkarbonaattiliuok-sella ja vedellä, kuivattiin (MgS04> ja haihdutettiin tyhjössä, Jäännös, jonka muodosti raaka 4-bentsyylioksi-3-bentsyylioksi-metyylibutanaali (kvantitatiivinen saanto), liuotettiin 100 ml:aan THF ja lisättiin 30 minuutin kuluessa suspensioon, jossa oli litiumaluminiumhydridiä (7,6 g; 0,20 moolia) 100 ml:ssa THF.

Sitten lisättiin 8 ml vettä, 8 ml 15 %:sta NaOH:n vesiliuosta ja 24 ml vettä, ja seosta sekoitettiin siksi, kunnes se muuttui valkoiseksi, jolloin saatiin samea suspensio. Epäorgaaniset suolat erotettiin suodattamalla ja pestiin useilla erillä THF. Yhdistetyt uutteet haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 41,93 g (93 %) otsikossa mainittua yhdistettä.

1H NMR (CDC13): δ 1,66 (q, 2H) CH2CH20; 2,05 (m, 1H) CH; 3,0 (t, 1H) OH; 3,46 (d, 4H) CH(CH2oT2; 3,64 (q, 2H) CH20H; 4,47 (s, 4H) 2 0CH2Ph; 7,30 (m, 10H) fenyyli.

32 80885 e) Bentsyyli-2-bentsyylioksimetyyli-4-bromibutyylieetteri ch2och2-

BrCH--CH~-CH

^ ch2och2 —

Liuosta, jossa oli 4-bentsyylioksi-3-bentsyylioksimetyylibutan-1-olia (41,75 g; 139 mmoolia) 150 ml:ssa dikloorimetaania, jäähdytettiin jää-vesikylvyn avulla. Sitten lisättiin trife-nyylifosfiinia (42,0 g; 160 mmoolia) samalla sekoittaen ja tämän jälkeen N-bromimeripihkahappoimidiä (26,0 g; 146 mmoolia) annoksittain 15 minuutin kuluessa. 1 h pituisen seisottamisen jälkeen huoneen lämpötilassa lisättiin eetteriä (400 ml) ja saostunut trifenyylifosfiinioksidi erotettiin suodattamalla.

Liuos väkevöitiin tyhjössä pieneen tilavuuteen ja uutteeseen lisättiin lisää eetteriä, jolloin saatiin saostunutta trifenyylifosf iinioksidia . Lopuksi tämä uuttamissaostusvaihe toistettiin käyttäen kevytpetrolia, jolloin saatiin haihduttamisen jälkeen 33,55 g (66 %) raakaa, otsikossa mainittua yhdistettä.

1H NMR (CDC13): 1,98 (q, 2H) Br-C-CH2; 2,15 (m, 1H) CH; 3,45 (t, 2H) BrCH2; 3,47 (m, 4H) CH(CH20)2; 4,47 (s, 4H) 20CH2Ph; 7,30 (m, 10H) fenyyli.

Esimerkki 3. 9-/T-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)butyyli/guaniini (menetelmä C) 0 HNuX > VSA671

h_n'"^n 2 I

CH2-CH-CH2CH2OH

ch2oh

Dimetyyli-2-(2-amino-6-klooripurin-9-yylimetyyli)sukkinaattia (8,00 g; 0,0244 moolia) liuotettiin 200 ml:aan tert.butanolia lämpötilassa 50°C, sitten lisättiin annoksittain litiumboorihydridiä 33 80885 (2,66 g; 0,122 moolia) ja seosta sekoitettiin 1 h. Sitten lisättiin 100 ml vettä ja sekoittamista jatkettiin yli yön, epäorgaaniset suolat erotettiin suodattamalla ja liuos haihdutettiin kuiviin tyhjössä. Jäännöksen todettiin sisältävän 78 mooli-% 2-amino-6-tert.butoksi-9-/4-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)butyyli7-puriinia yhdessä 6-klooriyhdisteen kanssa.

1H NMR (DMSO-dg): δ 1,10 (s, 9H) C(CH3)3; 1,38 (m, 2H) CH2CH2OH; 2,14 (m, 1H) CH; 3,34 (d, 2H) CHCHjOH; 3,45 (epäselvä t, 2H) CH2CH2OH; 4,06 (t, ABX järjest. 2H) NCH^,; ~4,5 (erittäin leveä s) OH; 6,77 (s, 2H) NH2; 8,08 (s, 1H) HQ.

13C NMR (DMSO-dg): 631,41, C(CH3)3; 31-92, CH2CH2OH; 37,88, CH; 45,01, NCH2; 58,72 ja 61,3, 2CH2OH; 66,65, C(CH3)3; 123,59, C5 ; 143.91, C8; 149,53, C6; 154,59, C4; 159,87, C2.

oc(ch3)3

fifV

h2n ,

CH2CHCH2CH2OH

CH20H

Suojauksen poistaminen

Liuosta, jossa oli raakaa 2-amino-6-tert.butoksi-9-_/T-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)butyyli/puriinia (436 mg; 1,41 mmoolia) 6 ml:ssa 50 %;sta muurahaishapon vesiliuosta, pidettiin lämpötilassa 100°C 3 h ja haihdutettiin sitten kuiviin tyhjössä, lisättiin lisää vettä ja seos lyofilisoitiin. Jäännöstä pidettiin lämpötilassa 100°C 2 h yhdessä 10 ml:n kanssa 2M ammoniakin vesiliuosta. Ammoniakki poistettiin typpikaasuvirran avulla, liuos kuumennettiin kiehumispisteeseen, pieni määrä kiinteätä ainetta poistettiin ja suodos jäähdytettiin jäähdytyslaitteessa, jolloin saatiin 208 mg kiteistä 9-/4-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)butyyli/-guaniinia.

13C NMR (DMSO-dg): δ 31,80, CH2CH2OH; 38,17, CH; 44,35, NCH2; 58,80 ja 60,94, 2CH2OH; 116,64, C5; 138,05, C8; 151,57, C4; 153,57, C2; 156.92, C6.

34 80885

Esimerkki 4. 4-(2-amino-l/6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)-2- hydroksimetyylivoihappo (menetelmä A)_ rY\ Η-,Ν ^ N '

2 I

CH2CH2CHCH2OH

COOH

2-amino-6-klooripuriinia (3,37 g; 19,9 mmoolia), 4-bromi-2-hydrok-simetyylivoihappo-etyyliesteriä (4,49 g; 19,9 mmoolia) ja vedetöntä kaliumkarbonaattia (2,75 g; 19,9 mmoolia) sekoitettiin 50 ml:n kanssa dimetyyliformamidia ja seosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 92 tuntia. Seos suodatettiin sitten ja suodos haihdutettiin. Jäännös uutettiin 3 x 50 ml:11a kloroformia ja yhdistetyt uutteet haihdutettiin. Suoritettaessa kromatografinen käsittely (piidioksidigeeli, kloroformi-metanoli 10:1) ja kaksi uudelleenkiteyttämistä vedestä saatiin 0,995 g 4-(2-amino-6-kloori-purin-9-yyli)-2-hydroksimetyylivoihappoetyyliesteriä.

13C NMR (CDC13): ppm 173,56, 159,40, 153,81, 151,16, 142,38, 124,89, 62,61, 61,11, 45,08, 41,91, 28,46 ja 14,16.

Cl cYs h2n'^n I*'

CH2CH2CHCH20H

COOCH2CH3

Suojauksen poistaminen 4-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli)-2-hydroksimetyylivoihappoetyyli-esteriä (0,80 g) 50 ml:ssa IM kloorivetyhappoa kuumennettiin palautusjäähdyttäen 3 h ja haihdutettiin sitten tyhjössä. Haihdutettiin uudelleen 3 x 10 ml veden kanssa ja jäännös liuotettiin 5 ml vettä. Tämän jälkeen pH säädettiin arvoon 6-7 kiinteän 35 80885 natriumbikarbonaatin avulla. Saatu liuos suodatettiin ja pH säädettiin arvoon 4 etikkahapon avulla. Kun oli jäähdytetty lämpötilaan 0°C erotettiin sakka suodattamalla ja pestiin vedellä. Kiteytettäessä uudelleen vedestä saatiin 0,43 g 4-(2-amino-1,6-dihydro-6-oksopurin-9-yyli)-2-hydroksimetyylivoihappoa.

13C NMR (DMSO-dg): ppm 174,80 (C=0), 157,09 (C6), 153,64 (C2), 151,38 (C4), 137,49 (C8), 116,84 (C5) , 62,15 (CH20H) , 45,59 (CH) , 41,33 (NCH2) ja 28,66 (N-CH2~CH2).

Lähtöaineyhdiste, 4-bromi-2-hydroksimetyylivoihappo-etyyli-esteri, valmistettiin seuraavasti:

BrCH2CH2CHCH20H

cooch2ch3 2-hydroksimetyylibutyrolaktonia /G. Claesson ym. Arkiv för kerni 2J3, 173 (1967|7 (3,0 g) liuotettiin 20 mlraan etanolia ja liuos kyllästettiin bromivedyllä lämpötilassa 0°C. 0,5 tunnin pituisen seisottamisen jälkeen lämpötilassa 0°C haihdutettiin liuotin alhaisessa paineessa. Jäännös sekoitettiin jääveden kanssa ja seos neutraloitiin 10 %:sella natriumkarbonaatin vesi-liuoksella. Seos uutettiin sitten useita kertoja dietyylieette-rillä ja yhdistetyt eetteriuutteet pestiin kyllästetyllä natrium-kloridin vesiliuoksella ja kuivattiin vedettömän natriumsulfaa-tin avulla. Liuottimen haihduttamisen jälkeen liuotettiin jäännös 25 ml:aan kloroformia ja suodatettiin. Haihdutettaessa liuotin saatiin 4,59 g yhdistettä 4-bromi-2-hydroksimetyyli-voihappo-etyylieetteri.

13C NMR (CDC13): ppm 174,14, 62,54, 61,08, 46,02, 31,45, 38,89 ja 14,26.

Esimerkki 5. 9-/4-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)butyyli/guaniini-hydrokloridi_ 9-/4-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)butyyl_i/guaniinia (46 mg; esimerkki 1) liuotettiin 0,4 mlraan 1 M kloorivetyhapon vesiliuosta ja liuosta lyofilisoitiin (0,1 mm Hg) yli yön. Jäännös (53 mg; 36 80885 kvantitatiivinen saanto) liuotettiin muutamaan tippaan lämmintä etanolia ja saostettiin käyttäen useita tilavuusmääriä tetra-hydrofuraania, jolloin saatiin valkoinen, kiteinen tuote. Sp. noin 85°C (d).

1H NMR (D20): δ 1,61 (m, 2H) CH2CH2OH; 1,87 (m, 1H); 2,31 (septetti, 1H) CH; 3,57 (d, 2H) CHCH2OH; 3,72 (epäselvä q) CH2CH2OH; 4,32 (m, 2H) NCH2; 4,90 (s) HDO; 8,96 (s, 1H) Hg.

Esimerkki 6. 9-/4-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)-2-butenyyli/-guaniini (menetelmä A)_ 0 HN | VSA 668 h2n N 1 ^.ch2oh

CH„CH=C

z ^ CH20H

Raakaa l-bentsyylioksi-2-bentsyylioksimetyylibut-3-en-2-olia (1,42 g; 3,16 mmoolia) 10 ml:ssa CH2C12 lisättiin 0,71 g:aan tionyylikloridia (6 mmoolia) ja 2 tippaan DMF 10 ml:ssa CH2C12 ja liuosta sekoitettiin 0,5 h ja haihdutettiin tyhjössä. Sitten lisättiin tolueenia ja seos haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin raakaa l-bentsyylioksi-2-bentsyylioksimetyyli-4-kloori-but-2-eeniä.

Seosta, jossa oli 1,61 g 2-amino-6-klooripuriinia (9,5 mmoolia) ja 1,31 g hienoksi jauhettua vedetöntä K2COg (9,5 mmoolia) 50 ml:ssa kuivaa dimetyyliformamidia (DMF), pidettiin lämpötilassa 100°C 5 min ja jäähdytettiin. Lämpötilassa 10°C lisättiin raakaa 1-bentsyylioksi-2-bentsyylioksimetyyli-4-klooribut-2-eeniä 25 ml:ssa kuivaa DMF samalla sekoittaen 4 h kuluessa.

2 vuorokauden kuluttua huoneen lämpötilassa haihdutettiin seos tyhjössä, jäännös uutettiin 2 x 25 ml:11a kloroformia ja uute haihdutettiin kuiviin. Kromatografisen käsittelyn avulla (piidioksidigeeli CHCI3 + MeOH 19+1) saatiin 0,25 g (18 %) 4-(2~amino-6-klooripurin-9-yyli)-l-bentsyylioksi-2-bentsyylioksi- 37 80885 metyyli-2-buteenia (TLC-piioksidigeelissä, CHCl^ + MeOH 13+1 tilavuusosaa, Rf 0,62).

NMR (CHC13-CD30D): 64,05 ja 4,19 (2s, 2x2H) =C(CH20)2; 4,49 ja 4,55 (2s, 2x2H) bentsyyli CH2; 4,70 (d, 2H) N-CH2; 5,85 (t, 1H) CH=; 6,2 (leveä s, 2H) NH2; 7,3 (leveä s, 10H) fenyyli; 7,49 (s, 1H) Hg.

Cl «Vs H2N I ^CH2OCH2C6H5 ch2ch = c.

1 ^ch-OCh^c,^ 2 2 6 5

Suojauksen poisto

Liuosta, jossa oli 4-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli)-1-bentsyyli-oksi-2-bentsyylioksimetyyli-2-buteenia (148 mg; 0,329 mmoolia), 1,8 ml trifluorietikkahappoa ja 0,2 ml vettä suljetussa ampullissa, pidettiin lämpötilassa 110°C 17 h. Jäähdyttämisen jälkeen seos laimennettiin 2 ml :11a vettä, kuumennettiin kiehumispisteeseen 1 minuutin ajaksi, haihdutettiin kuiviin tyhjössä, liuotettiin veteen ja haihdutettiin uudelleen- Kromatografisen käsittelyn avulla (piidioksidigeeli, etyyliasetaatti + metanoli + vesi 70+20+1 tilavuusosaa) saatiin 34 mg (41 %) 9-/4-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)-2-butenyyli7guaniinia.

1H NMR (DMSO-dg): 63,96 ja 4,10 (2d, 2x2H) =C(CH20)2; 4,68 (d, 2H) N-CH2; 4,83 (2t, 2H) 20H; 5,60 (t, 1H) CH=; 6,50 (leveä s, 2H) NH2; 7,66 (s, 1H) Hg,· 10,6 (leveä s, 1H) NH.

Lähtöaineyhdiste, l-bentsyylioksi-2-bentsyylioksimetyyli-but-en-2-oli, valmistettiin seuraavasti: HO ^ CH2OCH2C6H5 CH2 = CH CH2OCH2C6H5

Liuos, jossa oli 4,0 g vinyylibromidia (37,4 mmoolia) 8 ml:ssa kuivaa tetrahydrofuraania (THF), lisättiin 0,94 g:aan Mg (38,7 mmoolia) 3 ml:ssa THF N^-kehässä lämpötilassa noin 60°C ja seos ta kuumennettiin palautusjäähdyttäen (CC^-etanolilauhduttaja) 1 h.

38 8 0 8 8 5

Liuos, jossa oli 7,4 g (27,4 mmooli) 1,3-bis(bentsyylioksi)-propan-2-onia (Araki Y. ym. J.Chem.Soc. Perkin Trans. 1, 1981, 19) 25 ml:ssa THF, lisättiin tipottain lämpötilassa 10°C ja seosta sekoitettiin ympäristön lämpötilassa 2 h. Tämän jälkeen lisättiin 8 ml 20 %:sta NH^Clsn vesiliuosta ja orgaaninen faasi haihdutettiin, liuotettiin eetteriin, kuivattiin MgS04:llä ja haihdutettiin tyhjössä, jolloin saatiin 7,90 g 1-bentsyylioksi-2-bentsyylioksimetyyli-but-en-2-olia raakana öljynä.

1H NMR (CDC13): 52,67 (s, 1H) OH; 3,50 (s, 4H) C(CH20)2; 4,55 (s, 4H) 20CH2 Ph; 5,0-6,3 (m, 3H) CH2=CH; 7,32 (leveä s, 10H) fenyyli.

Esimerkki 7. cis-9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini (menetelmä B) 0 H Ν' Y \ I 11 / VSA 151

HjnNt·'

CH. .CH.OH

2\ y 2 c = c X \

H H

2-amino-6-klooripuriinia (3,4 g), butadieenimonoepoksidia (1,65 g) ja tetrakis-(trifenyylifosfiini)palladiumia (O) (1,0 g) kuivassa dimetyyliformamidissa (75 ml), sekoiteitiin typpikehässä ja kuumennettiin lämpötilassa 60°C 45 minuuttia.

Liuotin haihdutettiin tyhjössä (0,1 mm Hg) ja jäännöstä hangattiin kuuman kloroformin (4 x 50 ml) kanssa. Yhdistetyt klorofor-miliuokset väkevöitiin (25 ml tilavuuteen) ja laimennettiin eetterillä (100 ml). Hartsimainen sakka otettiin talteen, kuivattiin ja sitä hangattiin kuuman 1,2-dimetoksietaanin kanssa (3 x 50 ml). Yhdistetyt liuokset haihdutettiin tyhjössä 33 80885 (0,1 mm Hg), jolloin saatiin raakaseos (4 g), joka erotettiin piidioksidigeelipatsaassa (500 g), elutoitiin kloroformilla + metanolilla 10+1 (800 ml) ja tämän jälkeen kloroformi + metano-lilla 8+1. Noin 15 ml:n fraktiot otettiin talteen ja yhdiste cis-4-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli)-2-buten-l-oli saatiin pienempänä tuotteena (0,2 g) fraktioista 74-78. Sp. 160-165°C.

UV-spektri, λ (nm): 0,1 M HC1 241, 315 0,1 M NaOH 246, 308 1H NMR (DMS0-dg): δ 4,20 (t, J 5,4 Hz, 2H) CH20; 4,76 (d, J 6,8

Hz, 2H) NCH2; 5,54-5,83 (m, 2H) CH=CH? 6,69 (s, 2H) NH2; 8,06 (s, 1H) Hg.

Cl

N^V^V

H„N N I H H

+ I i I

ch2-c=c-ch2oh

Suojauksen poisto cis-4-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli)-2-buten-l-olia (50 mg) muurahaishappovedessä 7+3 (5 ml) kuumennettiin lämpötilassa 45°C typpikehässä 20 tuntia. Liuotin haihdutettiin tyhjössä ja jäännös kuivattiin. Sitten lisättiin vettä (0,5 ml) ja liuos neutraloitiin vesipitoisella ammoniakilla. Sakka suodatettiin, pestiin vedellä, etanolilla ja eetterillä ja kuivattiin, jolloin saatiin yhdiste cis-9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini (40 mg).

1H NMR (DMSO-dg): 64,15 (epäselvä t, 2H) CH20; 4,65-4,90 (ABX järjest. 2H) NCH2; 5,75 (m, 2H) CH=CH; 6,52 (leveä s, 2H) NH2; 7,66 (s, 1H) Hg.

Esimerkki 8. 9-(4-hydroksi-2-butynyyli)guaniini (menetelmä A) 0

Jk/N.

I ) VSB 631

H.N^^S

CH2C = CCH20H

« 80885 N-bromimeripihkahappoimidiä (1,78 g; 10 mmoolia) lisättiin annoksittain sekoitettuun suspensioon, jossa oli 2-butyn-l,4-diolia (2,50 g; 30 mmoolia) ja trifenyylifosfiinia (2,62 g; 10 mmoolia) 20 ml:ssa dikloorimetaania huoneen lämpötilassa.

1 h kuluttua poistettiin reagoimaton butyndioli suodattamalla. Liuos haihdutettiin tyhjössä pieneen tilavuuteen, liuotettiin 20 ml:aan kuivaa dimetyyliformamidia (DMF) ja lisättiin suspensioon, jossa oli 2-amino-6-klooripuriinia (1,70 g; 10 mmoolia) ja hienoksi jauhettua vedetöntä K2C0g:a (2,07 g; 15 mmoolia) 75 mlrssa kuivaa DMF ja sekoitettiin lämpötilassa 0°C. Sekoittamista jatkettiin huoneen lämpötilassa 3 vuorokautta. Seos haihdutettiin sitten kuiviin tyhjössä. Kromatografisen käsittelyn avulla .(piidioksidigeeli, CHCl^ + MeOH 7+1) saatiin 467 mg (20 % uudelleenkiteyttämisen jälkeen vedestä 2-butyn-l,4-diolin poistamiseksi) 4-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli)-2-butyn-l-olia (TLC-piidioksidigeelissä, CHCl^ + MeOH 5+1, 0,57).

1H NMR (DMSO-dg): 6 4,10 (dt, 2H) CH20; 4,96 (t, J=2,0Hz, 2H) NCH2; 5,12 (t, J=5,9 Hz, 1H) OH; 6,89 (leveä s, 2H) NH2; 8,17 (s, 1H) Hg.

13C NMR (DMSO-dg): 6 32,79 (NCH2); 49,07 (CH20); 77,80 ja 85,19 (CSC); 123,43 (C5); 142,43 (C8); 149,82 (C6); 153,69 (C4); 160,01 (C2).

Cl H2N'' ch2c Ξ cch2oh

Suojauksen poisto

Liuosta, jossa oli 4-(2-amino-6-klooripurin-9-yyli)-2-butyn-l-olia (140 mg; 0,59 mmoolia) 2 mlissa 50 %:sta muurahaishapon vesiliuosta, pidettiin lämpötilassa 80°C 6 h ja haihdutettiin sitten kuiviin tyhjössä. Jäännös liuotettiin 2 ml:aan vettä + väkevää vesipitoista ammoniakkia 1+1 ja liuosta pidettiin lämpötilassa 80°C 1 h ja se haihdutettiin sitten kuiviin tyhjössä.

4i 80 8 85

Kiteytettäessä uudelleen vedestä saatiin 90 mg (70 %) 9-(4-hydroksi-2-butynyyli)guaniinia.

1H NMR (DMSO-dg): 6 4,09 (m, 2H) CH20; 4,84 (t, J=2,0 Hz, 2H) NCH2; 5,11 (t, J=6,0 Hz, 1H) OH; 6,44 (leveä s, 2H) NH2; 7,73 (s, 1H) Hg.

Biologiset kokeet

Keksinnön mukaisten yhdisteiden estovaikutus herpes-viruksen suhteen kokeiltiin käyttäen seuraavassa kuvattuja menetelmiä. Käytettyjen yhdisteiden myrkyllisyys emäsolutoimintojen suhteen kokeiltiin myös.

Seuraavassa on yhdisteelle 9-[4-hydroksi-2-(hydroksimetyy-li)butyyli]guaniini (emäs) annettu merkintä VSA 671, yhdisteelle 9-[4-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)butyyli]guaniini (emäs) merkintä VIS 873, yhdisteelle cis-9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini (emäs) merkintä VSA 151 ja yhdisteelle 9-[4-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)-2-butenyyli]guaniini (emäs) merkintä VSA 668, Herpes simplex -tyyppiä 1 olevaa virusta merkitään merkinnällä HSV-1, Herpes simplex -tyyppiä 2 olevaa virusta merkinnällä HSV-2 ja Varicella zoster-virusta merkinnällä VZV.

42 80885 I. Virusten monistumisen estäminen solurakenteissa HSV-l-viruksen (kanta C42) estovaikutus käytettäessä yhdisteitä VSA 671, VIS 873, VSA 151 ja VSA 668, mitattiin plakin pelkis-tyskokeessa käyttäen Vero (vihreän apinan munuaisten)-soluja ja käyttäen HEL-soluja (ihmisen keuhkoalkio) siten kuin Ejercito ym. ovat kuvanneet, J.Gen.Virol. 2,357 (1968). Vaikutus VZV:n (useita kantoja) monistumiseen HL- (ihmisen keuhkon kudos) soluissa yhdisteen VSA 671 avulla määrättiin mittaamalla myöhäisten antigeenien muodostuminen käyttäen ELISA-tekniikkaa siten kuin B. Wahren ym. ovat kuvanneet, J. Virological Methods 6, 141-149 (1983). Tulokset on esitetty taulukossa 1.

Taulukko 1

Herpes-viruksen monistumisen esto yhdisteiden VSA 671, VIS 873, VSA 151 ja VSA 668 avulla _HSV-1_ VZV_

Yhdiste Vero-soluissa HEL-soluissa HL-soluissa estyminen (%)/väkev. ID,- (/um) ID50 ^/um^ ___( /um)_ ___ _ VSA 671 >90/1 0,2 1,3-2,5 :: VIS 873 >90/1 0,4 VSA 151 >90/10 0,6 VSA 668 >90/25 II. Yhdisteiden VSA 671, VIS 873, VSA 151 ja VSA 668 affini-_teetti herpes-viruksen aikaansaamaan tymidiinikinaasiin

Estovakiot (K ), jotka esittävät affiniteettiä HSV-1:n aikaansaa- i maan tymidiinikinaasiin, määrättiin käyttäen menetelmää, jonka ovat esittäneet A. Larsson ym. Antimicrob. Agents Chemother.

23, 664 (1983). Estovakiot on esitetty taulukossa 2.

Taulukko 2

Yhdisteiden VSA 671, VIS 873, VSA 151 ja VSA 668 aikaansaamat estovakiot HSV-l-viruksen aikaansaamaan tymidiinikinaasiin nähden

Yhdiste K.

i _ (,um) VSA 671 0,6 VIS 873 1,5 VSA 151 7 VSA 668 25 « 80885

Suuri affiniteetti viruksen aiheuttamaan tymidiinikinaasiin nähden on etu antiviraalisen aktiivisuuden kannalta olosuhteissa, joissa nämä yhdisteet joutuvat kilpailemaan tymidiinin kanssa. VSA 671:n affiniteetti on lähellä luonnon substraatin, tymidiinin (Km 0,42 ^um), vastaavaa arvoa.

III. Myrkyllisyys solujen suhteen

Yhdisteiden VSA 671, VIS 873, VSA 151 ja VSA 668 myrkyllisyys soluihin nähden kokeiltiin ihmisalkion soluissa siten kuin K. Stenberg on esittänyt /Biochemical Pharmacology 30, 1005-1008 (1980J_/. Kaikilla näillä yhdisteillä oli alhainen myrkyllisyys soluihin nähden (taulukko 3) väkevyyksissä, jotka estävät herpesviruksen monistumisen suuremmassa määrin kuin 90 %:sesti (katso taulukkoa 1).

Taulukko 3

Yhdisteiden VSA 671, VIS 873, VSA 151 ja VSA 668 myrkyllisyys solujen suhteen esitettynä solujen kasvun pienenemisprosenttina (Flow 1000) 48 h pituisen hautomisen jälkeen_ Väkevyys Yhdiste Solujen kasvun pienenemis- ( ,um) _ _prosentti_ 200 VSA 671 18 200 VIS 873 7 200 VSA 151 0 200 VSA 668 0 IV. Eläinkokeet a) Kokeet ihon herpes-virus-infektion suhteen marsuissa suoritettiin siten kuin ovat aikaisemmin kuvanneet S. Alenius ja B. Öberg /Archives of Virology 58, 277-288 (1978|_/. Kokeet osoittivat, että yhdisteellä VIS 873 on terapeuttinen vaikutus herpes-viruksen ihoinfektioiden suhteen kun sitä annetaan pinnallisesti taulukossa 4 kuvatulla tavalla. 30 ^,ul liuosta tai liuotinta annettiin pinnallisesti kolmasti vuorokaudessa 4 vuorokautta alkaen 24 h istuttamisen jälkeen.

44 80885

Taulukko 4

Terapeuttinen vaikutus iholla olevaan herpes-virus-infektioon

Yhdisteen VIS 873:n väkevyys Kumulatiivisen arvon pienenemis-% dimetyylisulfoksidissa verrattuna placebo-käsittelyyn __%_ ___ 2,5 36 b) "Systeemisen" HSV-1- tai HSV-2-infektion käsittely hiirissä käyttäen yhdistettä VSA 671 tai VIS 873 i.p. suoritettiin siten kuin A. Larsson ym. ovat esittäneet, Antimicrob. Agents Chemother. 2J3, 664-670 (1983).

5

Hiiret infektoitiin käyttäen 10 pfu (plakin muodostamisyksiköt) HSV-1 (C42) tai 10^ pfu HSV-2 (kanta 91075) i.p. ja käsittely aloitettiin 1 h infektion jälkeen. Käsittely käsitti kaksi päivittäistä i.p. annosta kumpaakin nukleosidista analogia liuotettuna fosfaatilla puskuroituun suolaliuokseen, 5 vrk. Kumulatiivinen kuolleisuus (käsitellyt vs. käsittelemättömät eläimet) määrättiin kokeen kuluessa, so. 21 vuorokauden kuluessa. Tulokset on esitetty taulukossa 5.

Taulukko 5

Yhdisteiden VIS 873 ja VSA 671 antiviraalinen vaikutus systeemisiin (i.p.) HSV-1·ja HSV-2-infektioihin hiirissä

Yhdiste Annos Virus Kumulatiivinen kuolleisuus (%) _ _ _ käsitellyt/käsittelemättömät) VSA 671 25 mg/kg HSV-1 30/90 50 " " 30/90 25 HSV-2 40/90 50 " " 30/90 VIS 873 5 mg/kg HSV-1 30/80 10 " " 0/80 5 " HSV-2 70/90 10 " " 20/90 25 " " 0/90 50 " " 10/100 45 80885

Keksinnön paras toteuttamismuoto

Keksinnön mukaisista yhdisteistä, joilla on kaava I, muodostavat yhdisteet 9-/T-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)butyyliTguaniini, 9-/4-hydroksi-(2-hydroksimetyyli)butyyli7guaniini ja cis-9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini ja niiden käyttö herpes-virusinfektioiden käsittelyssä tällä hetkellä parhaiten tunnetun toteuttamismuodon. Yhdisteellä 9-/4"-hydroksi-2- (hydroksimetyyli) -butyyli7guaniini on osoittautunut olevan erittäin hyvä vaikutus Varciella zoster-viruksen monistumista vastaan.

Claims (12)

46 80885

1. I i λ y 3 19 A jossa kaavassa A on (CH2)m-CH-(CH2)n0H (Aa) tai Rä CHo-C = C-CH90H (Ab) I I Rb Rb joissa kaavoissa m on 1 tai 2, n on 1 tai 2, jolloin m on 1 kun n on 2 ja m on 2 kun n on 1, Rg on (CH2)pOH tai COR£, Rg on hydroksi, p on 1-4, r1d 3a Rb ovat itsenäisesti valitut vedystä ja yhdisteestä (CH2) pOH, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi ryhmistä R^ tai Rp on vety, tai R^ ja R£ muodostavat yhdessä hiili-hiili-lisäsidoksen niin, että muodostuu alkyyni ja edellyttäen lisäksi, että kun m on 2 ja n on 1 ja Rg on (CH2)pOH, niin p on 2-4, tai sen fysiologisesti sopivan suolan, geometrisen tai optisen isomeerin valmistamiseksi valmistettaessa sellainen kaavan I mukainen yhdiste, jossa A on Aa, tunnettu siitä, että A. kondensoidaan yhdiste, jolla on kaava R2a Xa‘(CH2)m-CH-(CH2)n-OR3a 47 80885 N-9-asemaan guaniinijohdannaisessa, jolla on kaava R6a rr'y I I R5a Y jota seuraa mahdollisten suojaryhmien poistaminen, joissa kaavoissa Ra, m ja n tarkoittavat samaa kuin edellä, Xa on poistuva ryhmä, kuten kloori, bromi, jodi tai OSC>2R7a, jossa Rya on alkyyli, fluorattu alkyyli, aryylialkyyli tai aryyli, Y on vety tai kvaternäärinen ammoniumioni, Rga on vety tai suojaryhmä, kuten asyyli, alkoksikarbonyyli, aryylikarbonyy-li, silyyli tai S02R7a, R2a on Rä' kuten edellä on määritelty, tai CN, COORga, CH(OR9a)2, CH(SR9a)2, NHC0NHRga tai (CH2)pORga, jolloin p on määritelty edellä, Rga on substi-tuoitu silyyli tai ryhmä Rya, kuten edellä on määritelty, R9a on rY^mä R3a, kuten edellä on määritelty, tai Rga ja R9a muodostavat yhdessä ryhmän Rga kanssa kaksiarvoisen ryhmän, so. syklisen johdannaisen, kuten laktonin, syklisen esterin, ortohapon, asetaalin, eetterin tai silyylityyppisen yhdisteen, R4a ja Rga ovat samat kuin edellä ryhmä Rga, Rga on poistuva ryhmä, kuten edellä määritelty ryhmä Xa, OH tai OR^Qg, jossa Rioa on alkyyli, aryylialkyyli, S02R7a> substituoitu silyyli, fosforyylidiesteri tai fosfinotioyyli, B. kondensoidaan yhdiste, jolla on kaava R14a CH2 = C - CH2 - Ri5a sellaisen guaniinijohdannaisen N-9-asemaan, jolla on kaava 48 80 8 85 ^6a N R4a-N^N^-N/ R5a H jota seuraa mahdollisten suojaryhmien poistaminen, joissa kaavoissa R4a> R5a Ja R6a on määritelty kohdassa A, R]_^a on CN, CONH2 tai COORga, Ja Rl5a on C00R8a tai CHa0R9a' jolloin R8a ja Rga on määritelty kohdassa A. C. pelkistetään derivoituja tai aktivoituja karboksyylihap-poryhmiä yhdisteessä, jolla on kaava R6a N R4a-N^^. R12a R5a (CH2)m-CH-(CH2)n.1-CORlla jota seuraa mahdollisten suojaryhmien poistaminen, jossa kaavassa m, n, R2a, R4a* R5a Ja R6a määritelty kohdassa + A, Rna °n ryhmä Rga tai tY*1"10 (CH3)2N=CHO-, ja Ri2a on ryhmä R2a tai ryhmä (CH2)p_iCORlla, jossa p on määritelty kohdassa A, D. kondensoidaan yhdiste, jolla on kaava R2b ^7b Xb-CH2-C « C-CH2OR3b N_9_asemaan guaniinijohdannaisessa, jolla on kaava 49 80885 R6b I I > R4b-N^N N *5b Y jota seuraa mahdollisten suojaryhmien poistaminen, joissa kaavoissa: Xb on poistuva ryhmä kuten kloori, bromi , jodi tai 0S02R8b, J°ssa R8b on al^yyli, fluorattu alkyyli, aryy-lialkyyli tai aryyli, Y on vety tai kvaternäärinen ammonium-ioni, R3b on vety tai suojaryhmä, kuten asyyli, alkoksi-karbonyyli, aryylioksikarbonyyli, silyyli tai S02R8b, R2b on R^j tai (CH2)pORgb ja R7b on R& tai (CH2)pORgb, jossa p on 1-4, ja jossa Rgb on ryhmä R2b, kuten edellä on määritelty, tai Rgb ja R3b muodostavat yhdessä kaksiarvoisen ryhmän, so. syklisen johdannaisen, kuten karbonaattiesterin, tiokarbonaattiesterin, ortohapon tai asetaaliyhdisteen, Rgb on hydroksi tai poistuva ryhmä kuten kloori, bromi, jodi, merkapto, alkyylitio, S02Rgb tai OR10b' jossa Riob on alkyyli, aryylialkyyli, substituoitu silyyli, fosforyyli-diesteri, fosfinotioyyli tai S02Rgb, R4b ja Rgb ovat samat kuin edellä määritelty ryhmä R3b, E. kondensoidaan yhdiste, jolla on kaava R2b R7b CH2 * C - C - CH2 O N-9-asemaan guaniinijohdannaisessa, jolla on kaava R6b I < > R4b-N-^N/'^N/ R 1 R5b H so 808 85 jota seuraa mahdollisten suojaryhmien poistaminen, joissa kaavoissa R2fc, R4b' R5b' R6b Ja R7b on määritelty kohdassa D, minkä jälkeen saatu yhdiste mahdollisesti muutetaan fysiologisesti sopivaksi suolaksi tai geometriseksi isomeeriksi .

1. Menetelmä sellaisen terapeuttisesti aktiivisen yhdisteen valmistamiseksi, jolla on kaava O 61. n

2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava Λ/ν L jl / 11 (ch2)m- CH-(CH2)nOH R<k jossa kaavassa m on 1 tai 2 ja n on 1 tai 2, jolloin m on 1, kun n on 2 ja m on 2, kun n on 1, on (ΟΗ2)ρΟΗ tai CORg, jolloin Rg on hydroksi, ja p on 1-4, sillä lisäedellytyksellä, että kun m on 2 ja n on 1 ja Rg on (CH2)pOH, niin p on 2-4, ja sen fysiologisesti sopivat suolat ja optiset isomeerit.

3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava O li HN I ^ III h2n-/^n^'s*N'/// ch2 - c = c - ch2oh Ri> Rb jossa kaavassa R^ ja R£ ovat erikseen valitut ryhmästä vety ja (CH2)pOH, jossa p on 1-4, sillä edellytyksellä, että ainakin yksi ryhmistä ja R£ on vety, tai Rp ja R£ muodos- si 80 885 tavat yhdessä hiili-hiili-lisäsidoksen niin, että muodostuu alkyyni, ja sen fysiologisesti sopivat suolat ja geometriset isomeerit.

4. Patenttivaatimusten 1 ja 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että kaavoissa I ja III 1¾ tai ovat hydroksimetyyli.

5. Patenttivaatimusten 1 ja 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava 9-[4-hydroksi-3-(hydroksimetyyli)-2-butenyyli]guaniini.

6. Patenttivaatimusten 1 ja 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava 9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini.

7. Patenttivaatimuksen 6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava cis-9-(4-hydroksi-2-butenyyli)guaniini.

8. Patenttivaatimusten 1 ja 3 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava 9-(4-hydroksi-2-butynyyli)guaniini.

9. Patenttivaatimusten 1 ja 2 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että valmistetaan yhdiste, jolla on kaava 9-[4-hydroksi-2-(hydroksimetyyli)-butyyli]guaniini.

10. Jonkin patenttivaatimuksista 1, 2 ja 9 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sillä valmistettu yhdiste on optisen isomeerin muodossa.

11. Jonkin patenttivaatimusten 1 ja 3-6 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sillä valmistettu yhdiste on geometrisen isomeerin muodossa. 52 8 0 8 8 5

12. Jonkin patenttivaatimuksista 1-11 mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että sillä valmistettu yhdiste on fysiologisesti sopivan suolan muodossa.