FI74468B - Foerfarande foer framstaellning av terapeutiskt aktiva 2-aminpurinderivat. - Google Patents

Description

1 74468

Menetelmä terapeuttisesti aktiivisten 2-aminopuriini-johdannaisten valmistamiseksi Tämän keksinnön mukaisella menetelmällä valmiste-5 taan virusten vastaisia puriinijohdannaisia, jotka si sältävät asyklisen ketjun 9-asemassa.

GB-patenttijulkaisussa 1 523 865 kuvataan laaja joukko puriinijohdannaisia, jotka sisältävät asyklisen sivuketjun 9-asemassa. Näillä puriinijohdannaisilla on 10 havaittu olevan virusten vastaista tehoa erilaisia DNA- virusryhmiä vastaan, erityisesti herpesviruksia, kuten Herpes simplex1iä vastaan.

Näistä johdannaisista 9-(2-hydroksietoksimetyyli)-guaniinilla (tunnettu myös nimellä asyklovir) on havait-15 tu olevan erityisen hyvä teho herpesviruksia, kuten esi merkiksi Herpes simplex'iä vastaan. Mutta vaikka asyklovir on todettu erittäin tehokkaaksi käytettynä paikallisesti tai parenteraalisesti, se absorboituu vain keskinkertaisesti suun kautta annettuna, lääkkeen pitoisuuk-20 sien verinesteessä ollessa vastaavat. On täysin ymmärret tävää, että hoidettaessa sisäistä häiriötilaa antaen lääkettä oraalisesti on ilmeisen toivottavaa, että lääkeaine absorboituisi gastrointestinaalialueesta hyvin, jolloin tuloksena olisi suuret pitoisuudet verinesteessä.

25 Nyt on tehty yllättävä havainto, että puriinijoh- dannainen, jolle on tunnusomaista, että siinä on vetyatomi puriiniytimen 6-asemassa, nimittäin 6-deoksiasyklovir eli 2-amino-9-(2-hydroksietoksimetyyli)puriini, asyklo-virin 6-vetyanalogi, on helposti muutettavissa in vivo 30 molybdoflavo-proteiini-tyyppisten entsyymien vaikutukses ta (varsinkin ksantiinioksidaasi/dehydrogenaasin tai al-dehydioksidaasin vaikutuksesta) vastaavaksi 6-hydroksi-puriinijohdannaiseksi, jolla on viruksia vastustava teho. Edelleen on rotilla suoritetuissa kokeissa havaittu, et-35 tä tällaisen 6-vetyjohdannaisen oraalinen anto johtaa te hokkaaseen absorbtioon gastrointestinaalialueesta ja 6-vety-yhdisteen entsymaattisen muuttumisen tuloksena vastaavan 6-hydroksiyhdisteen suuriin pitoisuuksiin veri- 2 74468 nesteessä. Lisäksi 6-deoksiasyklovir on esimerkiksi huomattavasti vesiliukoisempi kuin asyklovir, edellisen yhdisteen liukoisuuden ollessa 50 mg/ml ja jälkimmäisen yhdisteen liukoisuuden ollessa 1,23 mg/ml 25°C:ssa. Tä-5 mä parantunut vesiliukoisuus mahdollistaa 6-deoksiasyk-lovirin käytön suuremmassa joukossa vesipitoisia farmaseuttisia valmistemuotoja, jotka edellyttävät lääkeaineen jonkinasteista liukenemista.

Edellä mainittu 6-vetypuriinijohdannainen voidaan 10 esittää kaavalla N\

N

A-A»/

H2N

15 CH2OCH2CH2OH

ja sen fysiologisesti hyväksyttävinä suoloina.

Kaavan I mukaisen yhdisteen suoloihin, joita voidaan mukavasti käyttää terapiassa, kuuluvat orgaanisten 20 happojen, kuten maito-, etikka-, maleiini tai p-toluee- nisulfonihapon fysiologisesti hyväksyttävät suolat sekä mineraalihappojen, kuten vetykloridi- tai rikkihapon fysiologisesti hyväksyttävät suolat.

Se havainto, että edellä mainitut 6-vetypuriinit 25 ovat helposti muutettavissa vastaavaksi 6-hydroksianalo-giksi, on yllättävä, koska aikaisemmissa tutkimuksissa, joissa käytettiin lehmänmaidon ksantiinioksidaasia (H. Lettre et ai., (1967), Biochem. Pharmacol., 16, ss. 1747 - 1755; ja T. A. Krenitsky et ai., (1972), Arch.

30 Biophys., 150, ss. 585 - 599) ilmeni, että 9-substituu-tio estää tai pienentää suuresti nopeutta, jolla erilaiset puriinit hapettuvat. Näiden havaintojen valossa oli yllättävää todeta, että tämä entsyymi hapetti esimerkiksi 6-deoksisyklovirin, 2-aminopuriinin 9-substituoidun 35 johdannaisen, suuremmalla nopeudella kuin 9-substituoi- mattoman puriinin, kuten entsyymitutkimuksissa todettiin.

3 74468

Kaavan I mukaisen yhdisteen korkea absorptiotaso gastrointestinaalialueelta tekee yhdisteen erityisen käyttökelpoiseksi silloin kun yhdisteitä halutaan antaa suun kautta, esim. hoidettaessa sairauksia, joiden ai-5 heuttajina ovat erilaiset DNA-virukset, kuten herpes infektioita, esim. Herpes simplex, Varicella tai Zoster, Cytomegalo-virus, sekä sairauksia, joiden aiheuttajana on Hepatitis B tai Epstein-Barr-virus. Kaavan I mukaisia yhdisteitä voidaan käyttää myös Papilloma- eli syylävi-10 rusinfektioiden hoitoon tai ennaltaehkäisyyn. Sen lisäk si, että kaavan I mukaista yhdistettä voidaan käyttää ihmisten lääkehoidossa, sitä voidaan antaa muille eläinlajeille virussairauksien hoitamiseksi tai ennaltaehkäisemiseksi, esim. muille nisäkkäille.

15 Kaavan I mukaista yhdistettä ja sen fysiologises ti hyväksyttäviä suoloja (joita seuraavassa yhteisesti nimitetään aktiiviaineosiksi) voidaan antaa mitä tahansa antotietä, joka sopii käsiteltävään tilaan, sopivien an-toteiden käsittäessä oraalisen, rektaalisen, nasaalisen, 20 ulkonaisen (anto poskeen tai kielen alle mukaanlukien), vaginaalisen ja parenteraalisen (mukaanlukien anto ihon alle, lihakseen, laskimoon, ihoon, kalvoihin ja epidu-raalisesti). Suositeltava antotapa voi vaihdella riippuen esimerkiksi vastaanottajan tilasta.

25 Kaikissa yllä mainituissa käyttötavoissa ja in dikaatioissa tarvittava aktiiviaineosan määrä riippuu useista tekijöistä, joita ovat hoidettavan tilan vakavuus ja saajan ominaisuudet, ja on lopullisesti hoitavan lääkärin tai eläinlääkärin harkinnassa. Yleensä kui-30 tenkin kaikissa näissä käyttötavoissa ja indikaatioissa on sopiva, tehokas annos alueella 0,1 - 250 mg potilaan kehon kilogrammaa kohden vuorokaudessa, edullisesti 1 - 100 mg kehon kilogrammaa kohden vuorokaudessa ja edullisimmin 5 - 20 mg kehon kilogrammaa kohden vuoro-35 kaudessa; optimiannos on noin 10 mg kehon kilogrammaa

kohden vuorokaudessa. (Mikäli toisin ei ole mainittu, on kaikki aktiiviaineosan määrät laskettu vastaavana kaavan I

4 74468 mukaisena yhdisteenä; yhdisteen suoloille ja estereille lukuarvot olisivat suhteellisesti suurempia). Haluttu annos annetaan edullisesti kahtena, kolmena, neljänä tai useampana osa-annoksena sopivin väliajoin vuorokau-5 den kuluessa. Nämä osa-annokset annetaan yksikköannos- muotoina, jotka sisältävät esimerkiksi 10 - 1000 mg, edullisesti 20 - 500 mg ja edullisimmin 100 - 400 mg aktiiviaineosaa yksikköannosmuotoa kohden.

Vaikkakin on mahdollista antaa aktiiviaineosia 10 yksistään, on niitä edullista antaa farmaseuttisina val mistemuotoina. Tämän keksinnön mukaiset valmistusmuodot sekä eläinlääketieteessä että lääketieteessä käytettäviksi sisältävät ainakin yhtä edellä määriteltyä aktiivi-aineosaa yhdessä yhden tai useamman kantajan kanssa ja 15 mahdollisesti muita terapeuttisia aineosia. Kantoaineen tai -aineiden tulee olla "hyväksyttäviä" siinä mielessä, että ne sopivat yhteen valmistemuodon muiden aineosien kanssa eivätkä ole vahingollisia valmisteen saajalle.

Valmistemuotoihin kuuluvat oraaliseen, rektaali-20 seen, nasaaliseen, ulkonaiseen (mukaanlukien anto pos keen tai kielen alle), vaginaaliseen ja parenteraaliseen (mukaanlukien anto ihon alle, lihakseen, laskimoon, ihoon, kalvoihin ja epiduraalisesti) antoon sopivat valmistemuodot. Valmistemuodot ovat edullisesti yksikköan-25 nosmuodossa, ja ne voidaan valmistaa millä tahansa farma sian alalla tunnetulla menetelmällä. Näihin menetelmil-miin sisältyy vaihe, jossa saatetaan yhteen aktiiviaine-osa kantajan kanssa, joka koostuu yhdestä tai useammasta lisäaineesta. Yleensä valmistemuodot valmistetaan 30 siten, että aktiiviaineosa saatetaan tasaisesti ja tehok kaasti yhteen nestemäisten kantajien tai hienojakoisten kiinteiden kantajien tai näiden molempien kanssa, ja sen jälkeen mikäli on tarpeen, muotoutetaan tuote.

Tämän keksinnön mukaiset oraaliseen antoon sopi-35 vat valmistemuodot voivat olla erillisinä yksikköinä, kute kapseleina, lääkepusseina tai tabletteina, joista jokainen sisältää ennalta määrätyn määrän aktiiviaine- 5 74468 osaa; jauheena tai rakeina; liuoksena tai suspensiona vesipitoisessa nesteessä tai vedettömässä nesteessä; tai nestemäisenä öljy-vedessä-emulsiona tai nestemäisenä vesi-öljyssä-emulsiona. Aktiiviaineosa voidaan antaa 5 myös isona pillerinä, lääkepuurona tai tahnana.

Tabletti voi olla tehty puristamalla tai valamalla ja se mahdollisesti sisältää yhden tai useampia lisäaineita. Puristetabletit voidaan valmistaa puristamalla sopivassa koneessa vapaasti valuvassa muodossa, 10 kuten jauheena tai rakeina oleva aktiiviaineosa mahdol lisesti sekoitettuna sideaineeseen, luistoaineeseen, inerttiin laimentimeen, säilötteeseen, pinta-aktiivi-seen aineeseen tai dispergointiaineeseen. Valettuja tabletteja voidaan valmistaa valamalla sopivassa konees-15 sa seos, jonka muodostaa jauhemaisen yhdisteen seos, jo ka on kostutettu inertillä nestemäisellä laimentimella. Tabletit voivat mahdollisesti olla pinnoitettuja tai uritettuja, ja ne voivat olla siten formuloituja, että niistä vapautuu aktiiviosa hitaasti tai kontrolloidulla 20 nopeudella.

Silmän tai muun ulkoisen kudoksen, esim. suun tai ihon infektioihin valmistemuotoja käytetään edullisesti ulkonaisesti käytettävänä salvana tai voiteena, joa sisältää aktiiviaineosaa esimerkiksi 0,075 - 20 25 paino-%, edullisesti 0,2 - 15 paino-% ja edullisimmin 0,5 - 10 paino-%.

Kun aktiiviaineosat formuloidaan salvaksi, niitä voidaan käyttää yhdessä parafiinisen tai veteen sekoittuvan voidepohjan kanssa. Vaihtoehtoisesti voidaan ak-30 tiiviaineosat formuloida voiteeksi voidepohjan kanssa, joka on öljy-vedessä-tyyppiä.

Voidepohjan vesifaasi voi haluttaessa sisältää esimerkiksi vähintään 30 paino-% polyhydroksialkoholia, so. alkoholia, jossa on kaksi tai useampia hydroksiryh-35 miä, kuten propyleeniglykolia, butaani-1,3-diolia, man- nitolia, sorbitolia, glyserolia ja polyetyleeniglykolia ja niiden seoksia. Ulkonaisesti käytettävät valmistemuo- 6 74468 dot voivat edullisesti sisältää yhdistettä, joka parantaa aktiiviaineosan absorboitumista tai tunkeutumista ihon alle tai muiden infektoituneiden alueiden läpi. Esimerkkejä tällaisista yhdisteistä, jotka edistävät 5 tunkeutumista ihoon, ovat dimetyylisulfoksidi ja sen analogit.

Tämän keksinnön mukaisten emulsioiden öljyfaasi voidaan koostaa tunnetuista aineosista tunnetulla tavalla. Vaikkakin tämä faasi voi koostua vain emulgoivasta 10 aineesta (tunnettu myös emulgaattorina), se käsittää edullisesti ainakin yhtä emulgaattoria seoksena rasvan tai öljyn kanssa, tai sekä rasvan että öljyn kanssa. Edullisesti käytetään hydrofiilistä emulgaattoria yhdessä lipofiilisen emulgaattorin kanssa, joka toimii stabi-15 loivana aineena. On myös edullista käyttää sekä öljyä että rasvaa. Emulgaattori(t) yhdessä stabilisaattorien kanssa tai ilman näitä muodostavat niin kutsutun emul-gointivahan ja vaha yhdessä öljyn ja/tai rasvan kanssa muodostaa niin kutsutun emulgointivoidepohjän, joka muo-20 dostaa öljymäisen dispergoituneen faasin voideformulaa- tioissa.

Tämän keksinnön mukaisissa valmistemuodoissa käytettäviksi sopiviin emulgaattoreihin ja stabilisaatto-reihin kuuluvat Tween 60, Span 80, setestearyylialkoholi, 25 myristyylialkoholi, glyseryylimonostearaatti ja natrium- lauryylisulfaatti.

Valmistemuodoissa käytettävien sopivien öljyjen ja rasvojen valinta perustuu haluttujen kosmeettisten ominaisuuksien saavuttamiseen, sillä aktiivisen yhdisteen 30 liukoisuus useimpiin öljyihin, joita todennäköisemmin käytetään farmaseuttisissa emulsioformulaatioissa, on hyvin pieni. Siten voiteen tulisi edullisesti olla ei-rasvamainen, tahraamaton ja pestävissä oleva tuote, jonka sakeus on sikäli sopiva, että vältetään vuotaminen 35 putkiloista tai muista säilytysastioista. Voidaan käyt tää haarautumattomia tai haarautuneita, mono- tai di-emäksisiä alkyyliestereitä, kuten di-isoadipaattia, iso- 7 74468 etyylistearaattia, kookospähkinän rasvahappojen propy-leeniglykoli-diesteriä, isopropyylimyristaattia, dekyy-lioleaattia, isopropyylipalmitaattia, butyylistearaat-tia, 2-etyyliheksyylipalmitaattia tai haarautuneita hii-5 livetyketjuja omaavien estereiden seosta, joka tunnetaan nimellä "Crodamol CAP", kolmen viimeksi mainitun ollessa edullisia estereitä. Näitä voidaan käyttää yksin tai seoksina riippuen halutuista ominaisuuksista. Vaihtoehtoisesti voidaan käyttää korkealla sulavia lipidejä, ku-10 ten valkoista pehmeää parafiinia ja/tai nestemäistä pa- rafiinia tai muita mineraaliöljyjä.

Ulkonaisesti käytettäviin valmistemuotoihin, joita annetaan silmään, kuuluvat myös silmätipat, joissa aktiiviaineosa on liuotettu tai suspendoitu sopivaan kan-15 tajaan, varsinkin vesipitoiseen aktiiviainetta liuotta vaan liuottimeen. Tällaisissa valmistemuodoissa aktiivi-aineen pitoisuus on 0,5 - 20 paino-%, edullisesti 0,5 -10 paino-%, edullisimmin noin 1,5 paino-%.

Ulkonaisesti käytettäviin valmistemuotoihin, 20 joita annetaan suuhun, kuuluvat pillerit, jotka sisältä vät aktiiviaineen maustetussa pohjamateriaalissa, tavallisesti ruokosokerissa ja arabi- tai traganttikumissa; pastillit, jotka sisältävät aktiiviaineen inerttipohjas-sa, kuten gelatiinissa ja glyseriinissä tai ruokosokeris-25 sa ja arabikumissa; ja suuvedet, jotka sisältävät aktii viaineen sopivassa nestemäisessä kantajassa.

Rektaaliseen antoon tarkoitetut valmistemuodot voivat olla peräpuikkoina, joissa on sopiva perusmassa, joka koostuu esimerkiksi kaakaovoista tai salisylaatista. 30 Nasaaliseen antoon tarkoitetut valmistemuodot, joissa kantajana on kiinteä aine, käsittävät luonnollisesti jauheen, jonka hiukkaskoko on esimerkiksi alueella 20 - 500 mikronia, ja jota käytetään samalla tavalla kuin otetaan nuuskaa, so. hengittämällä nopeasti sisään nenä-35 käytävän kautta jauheastiasta, jota pidentään lähellä nenää. Sopivia valmistemuotoja, joissa kantaja on neste, ja joita annetaan esimerkiksi nenäsuihkeina tai nenätip-poina, ovat aktiiviaineosan vesi- tai öljyliuokset.

a 74468

Vaginaaliseen käyttöön tarkoitetut valmistemuodot voivat olla pessareina, tampooneina, voiteina, hyytelöinä, tahnoina, vaahtoina tai suihkevalmistemuodossa, jotka sisältävät aktiiviaineosan lisäksi kantajia, jot-5 ka tiedetään alalla sopiviksi.

Parenteraaliseen käyttöön tarkoitetut valmisteet käsittävät vesipitoiset ja vedettömät steriilit ruiske-liuokset, jotka voivat sisältää antioksidantteja, puskureita, bakteriostaatteja ja liuotettuja aineita, jotka 10 tekevät valmistemuodon isotoniseksi käsiteltävän kohteen veren kanssa; sekä vesipitoiset ja vedettömät steriilit suspensiot, jotka voivat sisältää suspendointiaineita ja sakeuttamisaineita. Valmistemuodot voivat olla kerta-annossäiliöissä tai useita annoksia sisältävissä säili-15 öissä, esimerkiksi suljetuissa ampulleissa ja viaaleis-sa ja niitä voidaan säilyttää pakastekuivattuina (lyofi-lisoituina), jolloin tarvitaan vain steriilin nestemäisen kantajan, esimerkiksi ruiskeisiin sopivan veden, lisääminen juuri ennen käyttöä. Välittömästi käytettäviä 20 ruiskeliuoksia ja -suspensioita voidaan valmistaa steriileistä, edellä kuvatunlaisista jauheista, rakeista ja tableteista. Suositeltavia yksikköannosformulaatioita ovat valmistemuodot, jotka sisältävät aktiiviaineosaa vuorokausiannoksen tai kerralla käytettävän osan vuoro-25 kausiannoksesta, kuten aikaisemmin on esitetty.

Edellä nimenomaisesti mainittujen aineosien lisäksi tämän keksinnön mukaiset valmistemuodot voivat sisältää muita aineita, jotka ovat tavanomaisia kulloinkin kysymyksessä olevaan valmistemuotoon liittyvällä alalla, 30 esimerkiksi valmistemuodot, jotka sopivat annettaviksi oraalisesti, voivat sisältää makua antavia aineita.

Tämän keksinnön piiriin kuuluvat edelleen eläinlääketieteessä käytettävät koostumukset, jotka sisältävät ainakin yhtä edellä määriteltyä aktiiviaineosaa yh-35 dessä eläinlääkinnässä käytetyn kantajan kanssa.

9 74468

Eläinlääkinnässä käytetyt kantajat ovat aineita, jotka ovat käyttökelpoisia koostumuksen antamista silmälläpitäen ja ne voivat olla kiinteitä, nestemäisiä tai kaasumaisia aineita, jotka muuten ovat inerttejä 5 tai hyväksyttyjä eläinlääketieteessä ja sopivat yhteen aktiiviaineosan kanssa. Näitä eläinlääkintäkoostumuksia voidaan antaa oraalisesti, parenteraalisesti tai mitä tahansa muuta haluttua tietä.

Oraalisesti annettaviksi tarkoitetut koostumuk-10 set voivat olla tabletteina, rakeina, lääkejuomana, tahnana, lääkepusseina, kapseleina tai rehun lisäaineena. Rakeet voidaan valmistaa märkägranuloinnin, esipuristuk-sen tai rakeistuksen tunnettua tekniikkaa käyttäen. Niitä voidaan antaa eläimille inertissä nestemäisessä ve-15 hikkelissä niin, että muodostuu lääkejuoma, tai suspensiossa vesi- tai öljykantajan kanssa. Edullisesti lisätään muita lisäaineita, kuten dispergointiainetta. Nämä valmistemuodot sisältävät aktiiviaineosaa edullisesti 15 - 85 %.

20 Tahna voidaan valmistaa suspendoimalla aktiiviai- neosa nestemäiseen laimentimeen. Tahnan jäykkyyttä tai sakeutta lisäävää ainetta voidaan käyttää mukana yhdessä kasteluaineen tai kosteuttavan aineen kanssa, jos nestemäinen laimennin on vesi. Mikäli tarvitaan emulsiotahna, 25 on suositeltavaa, että käytetään mukana yhtä tai useampaa pinta-aktiivista ainetta. 25 - 80 % näistä tahnaval-mistemuodoista voi olla aktiiviaineosaa.

Rehun lisäaineina aktiiviaineosaa on yleensä suurina määrinä, jotka vastaavat lisäaineosia ja täyteai-30 neet voidaan lisätä suoraan tai välillä suoritetun sekoittamisen tai laimentamisen jälkeen. Esimerkkejä tällaisissa valmistemuodoissa käytettävistä lisäaineosista ovat kiinteät, suun kautta nautittuina ravinnoksi kelpaa-vat kantajat, kuten maissijauho, soijajauho, karkea veh-35 näjauho, soijasuurimot, syötäväksi kelpaavat kasvimateriaalit ja käymisjätteet. Aktiiviaineosa lisätään tavallisesti yhteen tai useampaan lisäaineosaan ja dispergoi- 10 74468 daan tehokkaasti ja tasaisesti jauhamalla, rumpukäsit-telyllä tai sekoittamalla tavanomaisilla laitteilla. Valmistemuodot, jotka sisältävät 1-90 paino-% aktii-viaineosaa ovat sopivia rehuihin lisättäväksi.

5 Hevosten herpes-infektioiden käsittelyyn voidaan tarvita oraalinen tai parenteraalinen annos, joka on 0,1 - 250 mg kehon kilogrammaa kohden vuorokaudessa, edullisesti 2 - 100 mg/kg vuorokaudessa. Annos voidaan jakaa erillisiksi yksiköiksi, jotka annetaan vuorokau-10 den kuluessa säännöllisin välein, ja toistaa päivittäin jopa 14 vuorokauden ajan tai kuunes infektio on hävinnyt. Muiden eläinten virusinfektioiden käsittelyssä annos voi vaihdella riippuen eläimen koosta ja metaboliasta. Koostumukset voidaan antaa yksikköannosmuotona, kuten tablet-15 teinä, muutamia kertoja vuorokaudessa, määrinä 10 -100 mg/yksikköannos.

Kaavan I mukaista yhdistettä ja sen fysiologisesti hyväksyttäviä suoloja voidaan valmistaa tavanomaiseen tapaan menetelmillä, jotka ovat analogisia rakenteeltaan 20 samankaltaisten yhdisteiden valmistumenetelmille, kuten menetelmille, joita on kuvattu GB-patenttijulkaisussa 1 523 865.

Tämän keksinnön mukaisesti kaavan I mukaista yhdistettä ja sen fysiologisesti hyväksyttävää suolaa val-25 mistetaan siten, että

a) muutetaan yhdiste jolla on kaava II M

i if 30 11

G I

CH2OCH2CH2OH

jossa M tarkoittaa vetyatomia tai ryhmää tai atomia, jo-35 ka on muutettavissa vetyatomiksi, ja G tarkoittaa ryhmää tai atomia, joka on muutettavissa aminoryhmäksi, tai mikäli M on muu kuin vetyatomi, G voi vaihtoehtoisesti tar- 11 74468 koittaa aminoryhmää, tai sen suola tai esteri kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi tai sen fysiologisesti hyväksyttäväksi suolaksi tai esteriksi, b) saatetaan yhdiste, jolla on kaava III 5 /X /Nv XX >

, Λ H„N N N

10 2 |

Q

jossa Q tarkoittaa poistuvaa atomia tai ryhmää, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava IV 15

ach2och2ch2b IV

jossa A tarkoittaa poistuvaa ryhmää tai atomia, ja B tarkoittaa mahdollisesti suojattua hydroksiryhmää, tai 20 c) muutetaan yhdiste, jolla on kaava V

/N χ N il \ 25 > iK / v

H2N I

CH2OCH2CH2NH2 30 vastaavaksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi, ja mahdollisesti suoritetaan yksi tai usemapia seuraavista reaktioista missä tahansa halutussa järjestyksessä: 35 i) kun saatu tuote on emäs, muutetaan tämä emäs haluttaessa fysiologisesti hyväksyttäväksi happoadditio-suolakseen, 12 74468 ii) kun saatu tuote on happoadditiosuola, muutetaan tämä suola haluttaessa vastaavaksi emäkseksi, iii) kun saatu tuote on kaavan I mukaisen yhdisteen esteri, muutetaan tämä esteri vastaavaksi kaavan I mu-5 kaiseksi yhdisteeksi tai sen fysiologisesti hyväksyttäväksi suolaksi.

Kaavan II mukaisen yhdisteen muuttaminen kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi menetelmällä a) voidaan toteuttaa erilaisilla tavanomaisilla tavoilla. Esimerkiksi G 10 voi tarkoittaa atsidiryhmää, joka voidaan pelkistää ami-noryhmäksi katalyyttisellä hydrauksella käyttäen sopivaa katlysaattoria, kuten palladiumia. Vaihtoehtoisesti G voi tarkoittaa halogeeniatomia tai alkyylitio- tai alkyy-lisulfonyyliryhmää, jotka voidaan muuttaa aminoryhmäksi 15 aminolyysillä käyttäen esimerkiksi ammoniakkia. M voi tarkoittaa halogeeni- esim. klooriatomia, tai merkapto-tai tio-(S<)-ryhmää, jotka voidaan muuttaa vetyatomiksi tavanomaisella tavalla. Siinä tapauksessa, että M tarkoittaa tioryhmää, tämä muutos voidaan saada aikaan käyt-20 täen kaavan II mukaista yhdistettä, jossa mitkä tahansa amino- tai hydroksiryhmät on mahdollisesti suojattu asyy-liryhmillä, jolloin muuttuminen saadaan aikaan käyttäen Raney-nikkelikatalysaattoria esimerkiksi emäksisessä väliaineessa, joka lisäksi poistaa amino- ja/tai hydroksi-25 suojaryhmät.

Näitä menetelmiä sekä muita tavanomaisia menetelmiä on kuvattu julkaisussa Fused Pyrimidined, Part II, Purines, toim. D. J. Brown (1971), Wiley-Interscience.

Menetelmässä b) kaavan III ryhmä Q voi olla esi- 30 merkiksi vetyatomi; asyyliryhmä, esim. C^_^-alkanoyyli- ryhmä, kuten asetyyliryhmä; tai aroyyliryhmä, kuten bentsoyyliryhmä; tai tri-C^_^-alkyylisilyyliryhmä, kuten trimetyylisilyyliryhmä. Kaavan IV ryhmä A voi olla esimerkiksi halogeeniatomi (esim. kloori) tai asyylioksiryh-35 mä, jossa asyyliosa voi olla esimerkiksi C^_^-alkanoyy- liryhmä, kuten asetyyli, tai aroyyliryhmä, kuten bentso- 13 74468 yyli. Reaktio voidaan helposti toteuttaa voimakkaasti polaarisessa liuottimessa, kuten dimetyyliformamidissa tai heksametyylifosforiamidissa, edullisesti emäksen, kuten trietyyliamiinin tai kaliumkarbonaatin läsnäol-5 lessa. Vaihtoehtoisesti voidaan saada aikaan terminen kondensoituminen kuumentamalla kaavojen III ja IV mukaisia yhdisteitä niin että mukana on katalyyttinen määrä vahvaa happoa, esim. rikkihappoa.

Menetelmässä c) reaktio toteutetaan edullisesti 10 käsittelemällä kaavan V mukaista aminoyhdistettä nitriitillä, esim. natriumnitriitillä, happamessa väliaineessa.

Edellä kuvatuissa menetelmissä käytetyt lähtöaineet voidaan valmistaa tavanomaiseen tapaan, esim. menetelmillä, joita on kuvattu jo mainitussa GB-patentti-15 julkaisussa 1 523 865.

Seuraavat esimerkit havainnollistavat keksintöä.

Esimerkki 1 2-amino-9-(2-hydroksietoksimetyyli)-9H-puriini

Seosta, jonka muodostivat 2,48 g (7,13 mmol) 2-20 amino-6-kloori-9-(2-bentsyylioksietoksimetyyli)puriinia, 250 ml vedetöntä etanolia, 1,9 ml trietyyliamiinia ja 0,6 g 5-%:ista palladium-hiili-katalysaattoria, ravisteltiin vedyssä alkupaineen ollessa 3,4 atm huoneen lämpötilassa 20 tuntia. Seos suodatettiin, lisättiin 0,265 g 25 uutta palladiumkatalysaattoria ja 1,9 ml trietyyliamiinia ja seosta ravistettiin vedyssä vielä 16 tuntia.

Sen jälkeen, kun oli suodatettu Celite'n läpi, haihdutettiin etanoliliuos tyhjössä ja saatua valkoista kiinteää ainetta uutettiin useita kertoja kiehuvalla 30 bentseenillä. Bentseeniuutteet väkevöitiin, yhdistettiin 20 mlraan 40-%:ista metyyliamiinin vesiliuosta ja 20 ml:aan metanolia ja annettiin haihtua avoimessa pullossa höyryhauteella kuiviin. Jäljelle jäänyttä seosta trituroitiin eetterillä N-metyylibentsamidin poistami-35 seksi ja sen jälkeen uudelleenkiteytettiin 100 %:isesta etanolista, jolloin saatiin 2-amino-9-(2-hydroksietoksimetyyli) -9H-puriini analyyttisesti puhtaina valkoisina rakeina, sp. 186 - 187,5°C.

14 7 4 4 6 8

Esimerkki 2 a) 2-asetamido-9-asetyyli-6-merkapto-9H-puriini

Seosta, jonka muodostivat tioguaniini (54,0 g), etikkahappoanhydridi (250 ml) ja p-tolueenisulfonihappo 5 (2,0 g), kuumennettiin palautusjäähdyttäen yön yli. Reak- tioseos jäähdytettiin ja muodostunut kiinteä aine poistettiin suodattamalla ja pestiin huolellisesti asetonilla, jolloin saatiin 2-asetamido-9-asetyyli-6-merkapto-9H-puriinia (62,3 g) ruskeana kiinteänä aineena. NMR-10 spektri oli yhtäpitävä esitetyn rakenteen kanssa.

b) 2-asetamido-9-(2-asetoksietoksimetyyli)-6- merkapto-9H-puriini

Seokseen, jonka muodostivat 2-asetamido-9-asetyy-li-6-merkapto-9H-puriini (30,0 g) ja p-tolueenisulfoni-15 happao (2,0 g) tolueenissa (150 ml), lisättiin pisaroit-tain 4 tunnin aikana 90 - 95°C:ssa 2-oksa-l,4-butaanidi-olidiasetaattia (40,0 g). 10 tunnin kuluttua reaktioseos jäähdytettiin ja muodostunut kiinteä aine poistettiin suodattamalla ja pestiin asetonilla. Se uudelleen kitey-20 tettiin dimetyyliformamidi/asetonitriilistä (1:1) ja väri poistettiin aktiivihiilen avulla, jolloin saatiin 2-asetamido-9-(2-asetoksietoksimetyyli)-merkapto-9H-purii-ni (25,6 g, keltaisena kiinteänä aineena. Sp. 205 - 206°C.

c) 2-amino-9-(2-hydroksietoksimetyyli)-9H-puriini 25 2-asetamido-9-(2-asetoksietoksimetyyli)-6-merkap- to-9H-puriinia (0,50 g, 1,53 mmol), juuri valmistettua W-2 Raney-nikkeliä (2 g) ja 58-%:ista ammoniumhydroksidia (25 ml) kuumennettiin palautusjäähdyttäen 2 tuntia. Katalysaattori suodatettiin pois ja suodos väkevöitiin 30 5 mlrksi. Lisättiin asetonia (20 ml) ja muodostunut sakka suodatettiin ja kuivattiin, jolloin saatiin 0,21 g (65 %) valkoista kiinteää ainetta, sp. 188 - 189°C. TLC:n ja NMR:n perusteella identtinen autenttisen näytteen kanssa.

is 74468

Esimerkki 3 a) 9-(2-ftaalimidoetoksimetyyli)-2-aminopuriini

Seosta, jonka muodostivat 1,35 g (10,0 mmol) 2- aminopuriinia ja 0,44 g (11,0 mmol) 60-%:ista natrium-5 hydroksidin öljydispersiota 50 ml:ssa kuivaa dimetyyli-formamidia, sekoitettiin huoneen lämpötilassa 35 minuuttia. Seokseen lisättiin 2,63 g (11,0 mmol) 2-ftaalimido-etoksimetyylikloridia ja sekoittamista jatkettiin huoneen lämpötilassa 5 tuntia. Lisättiin vielä 156 g (3,9 mmol) 10 natriumhydroksididispersiota ja 0,94 g (3,9 mmol) 2-ftaal-imidoetoksimetyylikloridia ja reaktioseosta sekoitettiin huoneen lämpötilassa 20 tuntia.

Seos haihdutettiin tyhjössä ja jäännös jakouutet-tiin kloroformiin ja veteen. Vesifaasia uutettiin vielä 15 kahdesti kloroformilla ja yhdistetyt kloroformiuutteet pestiin vedellä ja kuivattiin natriumsulfaatilla.

Kuivattujen uutteiden haihdutus ja kromatogra-fointi silikageelillä antoi eluoitaessa 10-%:isella meta-nolilla dikloorimetaanissa 1,7 g 9-(2-ftaalimidoetoksime-20 tyyli)-2-aminopuriinia.

b) 9-(2-aminoetoksimetyyli)-2-aminopuriini

Seosta, jonka muodostivat 5,0 g (14,7 mmol) 9-(2- ftaalimidoetoksimetyyli)-2-aminopuriinia, 500 ml etanolia ja 15 ml hydratsiinia (95 %), refluksoitiin sekoittaen 4 25 tuntia. Reaktioseos haihdutettiin tyhjössä ja haihdutettiin vielä 2 kertaa etanolista. Kiinteitä aineita sekoitettiin 30 minuuttia 200 ml:ssa 5-%:ista etikkahapon vesi-liuosta ja sitten liuos haihdutettiin kuiviin tyhjössä. Uudelleenkiteytettiin 2 kertaa, kerran etanoli/eetteristä 30 ja kerran etanolista, jolloin saatiin analyyttisesti puhdas 9-(2-aminoetoksimetyyli)-2-aminopuriinin diasetaatti. Käsiteltäessä tuotteen vesiliuosta vahvalla OH-hartsilla saatiin vapaa emäs, 1,5 g haihdutettaessa.

ie 74468 c) 2-amino-9-(2-hydroksietoksimetyyli)-9H-puriini Jäähdytettyyn (0°C) liuokseen, jonka muodosti 1,0 g (4,8 mmol) 9-(2-aminoetoksimetyyli)-2-aminopuriinia 25 ml:ssa 0,2-n hydrokloridia ja 25 ml:ssa etanolia, li-5 sättiin 0,335 g (4,86 mmol) natriumnitriittiä annoksittain 45 minuutin aikana. Seosta sekoitettiin 0°C:ssa 18 tuntia.

Reaktioseos haihdutettiin tyhjössä (haudelämpöti-la 30°C) ja jäännös liuotettiin metanoliin ja absorboi-10 tiin silikageeliin. Liuotin haihdutettiin pois ja jauhe lisättiin "flash"-kromatografiapylvääseen. Eluointi 10-%:isella metanolilla dikloorimetaanissa antoi haihdutettaessa halutun 9-(2-hydroksietoksimetyyli)-2-aminopu-riinin. Uudelleen kiteytys etanolista antoi analyyttises-15 ti puhtaan tuotteen.

Biologinen aktiivisuus

Seuraavat kokeet suoritettiin virtsaan erittyneiden asyklovirien määrien ja sen pitoisuuksien verines-20 teessä määrittämiseksi, kun rotille oli annoslteltu oraalisesti asykloviriä, 6-deoksiasykloviriä ja sen 6-amino-analogia, so. 2,6-diamino-9-(2-hydroksietoksimetyyli)-pu-riinia, jota seuraavassa kutsutaan nimellä aminoasyklivir. Viimeksi mainittu yhdiste on asyklovirin esiaste (Good, 25 S. S. ja de Miranda, P., Fed. Proc. (1982), 41, 1733), jonka muuttumine asyklovir-yhdisteeksi in vivo johtuu ade-nosiinideaminaasista.

Menettely

Long Evans-urosrotille annettiin mahalaukunsisäi-30 sesti ruiskeena lääke ja ne sijoitettiin metabolihäkkei-hin, jotka erottivat virtsan ulosteista. Talteenotetusta virtsasta ja verinestenäytteistä analysoitiin asyklovir-pitoisuus radioimmunoanalyysillä (Quinn et ai., 1979). Osoittautui, ettei aminoasyklovir eikä 6-deoksiasyklovir 35 reagoinut kokeessa käytettyjen antiseerumien kanssa.

II.

17 74468

Tulokset

Tulokset on annettu seuraavissa taulukoissa I ja

5 Taulukko I

Asyklovir-yhdisteen erittymine virtsaan sen jälkeen, kun rotille on annetti oraalisesti yhdisteitä asyklovir, aminoasyklovir ja 6-deoksiasyklovir 10 Annos Virtsa- % annoksesta erittynyt yhdisteenä näytteet asyklovir (eläinten lukumäärä) ,, ... Amino- 6-deoksi- ^_Asyklovir asyklovir_asyklovir_ 5 0-24 - 24,7 (2) 67,0 (1) 15 24-28 - 0,4 (2) 0,2 (1) 20 0-24 - 24,8 (2) 69,1 (1) 24-28 - 0,3 (2) 0,3 (1) 25 0 - 48_19,2 (4)__ 20

Taulukko II

Verinesteessä todettujen asyklovir-pitoisuuksien vertailu, kun rotille on annettu oraalisesti yhdisteitä deoksiasyklovir ja aminoasyklovir 25

Annoksen Asyklovir-pitoisuudet verinesteessä

20 mg/kg juM

antamisesta Aminoasyklovir 6-deoksiasyklovir kulunut aika (h)_Rotta 1_Rotta 2_Rotta 3 0,5 2,75 - 30 30 1 3,03 16,6 18,6 2 2,48 4,96 17,5 4 0,93 1,00 6,7 6 0,34 0,41 4,06 20 0,1 0,01 0,25 18 74468

Myrkyllisyyskokeet

Kahdelle uros- ja kahdelle naaraspuoliselle Beag-le-koiralle annettiin yhdistettä 6-deoksiasyklovir oraalisesti (1 x päivässä, 5:nä peräkkäisenä päivänä) annok-5 sen ollessa 40 mg/kg/vrk. Mitään vaikutuksia ei ollut 1 uroksessa eikä 1 naaraassa, jotka lopetettiin käsittely-jakson lopussa, eikä 1 uroksessa eikä 1 naaraassa, jotka lopetettiin 2 viikon kuluttua lääkeannosta.

Virusten vastainen teho 10 a) 70 CDl-hiirtä infektoitiin määrällä 300 LD,-q ICI-kannan Herpese simplex-virusta tyyppi 1, jota annettiin annos 0,025 ml aivojen sisäisesti. Hiiret jaettiin 10 hiiren ryhmiin, yhden ryhmän ollessa käsittelemättömänä virusvertailuryhmänä ja muiden ryhmien saadessa vastaa-15 vasti yhdisteitä (A) asyklovir 100 mg/kg/annos i) ihonalaisesti (s.c.) ii) oraalisesti iii) intraperitoneaalisti (i.p.) (B) yhdistettä esimerkistä 1 (6-deoksiasyklovir) 20 100 mg/kg/annos i) ihonalaisesti (s.c.) ii) oraalisesti iii) intraperitoneaalisti (i.p.)

Hoidettavat ryhmät saivat lääkeannokset 2-3 tun-25 tia infektoinnin jälkeen ja kahdessa vuorokaudessa 4 vuorokauden aikana. Havainnot tehtiin 14 vuorokauden aikana ja merkittiin muistiin elossaoloajät. Tulokset on esitetty seuraavassa: 19 74468

Tulokset Käsiteltävä Elossaoloajät Elossaoloaikojen ryhmä (vrk) keskimääräinen _________kaanteisarvo_ 5 Virusverrokit 4 + 2 1+2 5+3 0,407

Asyklovir (s.s.) 3+3 4+4 2+4 1+6 0,261 6-deoksiasyklo- 1+2 3+3 1+4 2+4 vir 2+5 0,289

Asyklovir 10 (oraalisesti) 2+2 3+3 5+4 0,325 6-deoksiasyklo- 1+2 1+4 2+5 3+6 1+8 vir (oraalisesti) 1 henkiinjäänyt 0,186

Asyklovir (i.p.) 2+2 2+4 2+5 2+7 1 henkiinjäänyt 0,242 15 6-deoksiasyklo- 1+2 2+3 1+4 1+4 vir (i.p) 4+6 1+8 0,233

Edellä esitetyt tulokset osoittavat, että 6- 20 deoksiasyklovir on teholtaan voimakkaampi kuin asyklovir oraalisesti annettuna.

Claims (10)

1. 20 7 4 4 6 8
2. 1. Menetelmä terapeuttisesti aktiivisen 2-amino-puriinijohdannaisen valmistamiseksi, jolla on kaava I 5 λΧ) H2N n
3. 10 CH2OCH2CH2OH ja sen fysiologisesti hyväksyttävien suolojen valmistamiseksi, tunnettu siitä, että a) muutetaan yhdiste, jolla on kaava II
4. 15 M i I ^ 11 G N
5. 20 CH2OCH2CH2OH jossa M tarkoittaa vetyatomia tai ryhmää tai atomia, joka on muutettavissa vetyatomiksi, ja G tarkoittaa ryhmää tai atomia, joka on muutettavissa aminoryhmäksi, tai mikäli M on muu kuin vetyatomi, G voi vaihtoehtoisesti tarkoit- 25 taa aminoryhmää, tai sen suola tai esteri kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi tai sen fysiologisesti hyväksyttäväksi suolaksi tai esteriksi, b) saatetaan yhdiste, jolla on kaava III 30 jCX> H0N N
6. 2 I Q 35 jossa Q tarkoittaa poistuvaa atomia tai ryhmää, reagoimaan yhdisteen kanssa, jolla on kaava IV ach2och2ch2b IV 2i 74 4 6 8 jossa A tarkoittaa poistuvaa ryhmää tai atomia, ja B tarkoittaa mahdollisesti suojattua hydroksiryhmää, tai c) muutetaan yhdiste, jolla on kaava V xx> H2N I CH2OCH2CH2NH2 10 vastaavaksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi, ja mahdollisesti suoritetaan yksi tai useampia seuraavista reaktioista missä tahansa halutussa järjestyksessä : i) kun saatu tuote on emäs, muutetaan tämä emäs 15 haluttaessa fysiologisesti hyväksyttävksi happoadditio- suolakseen, ii) kun saatu tuote on happoadditiosuola, muutetaan tämä suola haluttaessa vastaavaksi emäkseksi, iii) kun saatu tuote on kaavan I mukaisen yhdis- 20 teen esteri, muutetaan tämä esteri vastaavaksi kaavan I mukaiseksi yhdisteeksi tai sen fysiologisesti hyväksyttäväksi suolaksi.
7. 2. Patenttivaatimuksen 1 a) mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että M tarkoittaa halogeeniato- 25 mia ja reaktio toteutetaan hydraamalla palladiumkataly-saattorin läsnäollessa.
8. 3. Patenttivaatimuksen 1 b) mukainen menetelmä, tunnettu siitä, että A tarkoittaa halogeeniato-mia tai asyylioksiryhmää.
9. 4. Patenttivaatimuksen 1 b) tai 3 mukainen mene telmä, tunnettu siitä, että Q tarkoittaa vetyatomia tai tri-C^_^-alkyylisilyyliryhmää. 5 74468 22
10. 1. Förfarande för framställning av ett terapeutiskt aktivt 2-aminopurinderivat med formeln (I) XX, > h9n^ ^ir -n ) CH-0CH„CHo0H 10 2 2 2 och fysiologiskt godtagbara salter därav, känne-t e c k n a t därav, att a) en förening med formeln (II) 15 I (II) CH2OCH2CH2OH 20 väri M betecknar en väteatom eller en grupp eller atom som kan omvandlas tili en väteatom och G betecknar en grupp eller atom som kan omvandlas tili en aminogrupp eller, dä M är annat än en väteatom, kan G alternativt •beteckna en aminogrupp; eller en sait eller en ester där-25 av omvandlas tili en förening med formeln (I) eller tili ett fysiologiskt godtagbart sait eller en dito ester därav; b) en förening med formeln (III) j I (III) ^ I Q 35 väri Q betecknar en avgäende atom eller grupp, omsätts med en förening med formeln (IV)