FI120376B - Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi - Google Patents
Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi Download PDFInfo
- Publication number
- FI120376B FI120376B FI20075028A FI20075028A FI120376B FI 120376 B FI120376 B FI 120376B FI 20075028 A FI20075028 A FI 20075028A FI 20075028 A FI20075028 A FI 20075028A FI 120376 B FI120376 B FI 120376B
- Authority
- FI
- Finland
- Prior art keywords
- seq
- antigen
- peptide
- successive
- polypeptide
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims description 60
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 title claims description 38
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 title claims description 28
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 19
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 2
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims description 44
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims description 44
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims description 44
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 33
- 101710147327 Calcineurin B homologous protein 1 Proteins 0.000 claims description 21
- 101710205625 Capsid protein p24 Proteins 0.000 claims description 21
- 101710177166 Phosphoprotein Proteins 0.000 claims description 21
- 101710149279 Small delta antigen Proteins 0.000 claims description 21
- 239000002245 particle Substances 0.000 claims description 15
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 11
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 claims description 9
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 claims description 9
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims description 5
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 4
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 claims description 4
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 claims description 4
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 3
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims description 3
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 claims description 2
- FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 Chemical compound C1(=CC=CC=C1)N1C2=C(NC([C@H](C1)NC=1OC(=NN=1)C1=CC=CC=C1)=O)C=CC=C2 FGUUSXIOTUKUDN-IBGZPJMESA-N 0.000 claims description 2
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 12
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 11
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 9
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 8
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 7
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 7
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 6
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 6
- 238000003314 affinity selection Methods 0.000 description 5
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 4
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 4
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 3
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 239000000463 material Substances 0.000 description 3
- 238000002823 phage display Methods 0.000 description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 description 3
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 2
- 108010032595 Antibody Binding Sites Proteins 0.000 description 2
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- 108010027044 HIV Core Protein p24 Proteins 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 208000037357 HIV infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 2
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 description 2
- 208000033519 human immunodeficiency virus infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 2
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 2
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 2
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 230000002688 persistence Effects 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 230000000717 retained effect Effects 0.000 description 2
- 238000012552 review Methods 0.000 description 2
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 2
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 description 1
- 108010048209 Human Immunodeficiency Virus Proteins Proteins 0.000 description 1
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 1
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 238000011225 antiretroviral therapy Methods 0.000 description 1
- 238000010256 biochemical assay Methods 0.000 description 1
- 239000003124 biologic agent Substances 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 238000012875 competitive assay Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000002967 competitive immunoassay Methods 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 238000010494 dissociation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000005593 dissociations Effects 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 1
- 102000037865 fusion proteins Human genes 0.000 description 1
- 108020001507 fusion proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 1
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 1
- 239000010931 gold Substances 0.000 description 1
- 229910052737 gold Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 1
- 238000004020 luminiscence type Methods 0.000 description 1
- 230000014759 maintenance of location Effects 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 238000004848 nephelometry Methods 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Chemical group 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000003904 phospholipids Chemical class 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 210000004896 polypeptide structure Anatomy 0.000 description 1
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 1
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 1
- 238000002708 random mutagenesis Methods 0.000 description 1
- 210000000582 semen Anatomy 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 235000021309 simple sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 description 1
- 238000004879 turbidimetry Methods 0.000 description 1
- 241001515965 unidentified phage Species 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 210000002845 virion Anatomy 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
- C07K16/1036—Retroviridae, e.g. leukemia viruses
- C07K16/1045—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV
- C07K16/1054—Lentiviridae, e.g. HIV, FIV, SIV gag-pol, e.g. p17, p24
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1037—Screening libraries presented on the surface of microorganisms, e.g. phage display, E. coli display
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
- C12N15/1034—Isolating an individual clone by screening libraries
- C12N15/1058—Directional evolution of libraries, e.g. evolution of libraries is achieved by mutagenesis and screening or selection of mixed population of organisms
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/5306—Improving reaction conditions, e.g. reduction of non-specific binding, promotion of specific binding
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N2333/00—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature
- G01N2333/005—Assays involving biological materials from specific organisms or of a specific nature from viruses
- G01N2333/08—RNA viruses
- G01N2333/15—Retroviridae, e.g. bovine leukaemia virus, feline leukaemia virus, feline leukaemia virus, human T-cell leukaemia-lymphoma virus
- G01N2333/155—Lentiviridae, e.g. visna-maedi virus, equine infectious virus, FIV, SIV
- G01N2333/16—HIV-1, HIV-2
- G01N2333/161—HIV-1, HIV-2 gag-pol, e.g. p55, p24/25, p17/18, p.7, p6, p66/68, p51/52, p31/34, p32, p40
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Oncology (AREA)
- Crystallography & Structural Chemistry (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Ecology (AREA)
- Bioinformatics & Computational Biology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Description
Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi Förfarande för producering av en biomodifierad polypeptid med hög affmitet
KEKSINNÖN ALA
5
Keksintö koskee biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamista. KEKSINNÖN TAUSTA
10 Siitä tosiseikasta huolimatta, että diagnostiset testit ihmisen immuunikatoviruksen HIV-1/2-kapsidiproteiinien immunologisen osoittamiseen ovat kliinisessä käytössä, nämä virukset eivät sisällä vasta-aine-epitooppeja (eli peptidijaksoja, joilla on riittävä pituus ja immunogeenisyys), jotka olisivat riittävän säilyneitä mahdollistaakseen luotettavan ja kvantitatiivisen osoittamisen vasta-aineen välityksellä. Tunnetun tekniikan ongelmana on, 15 etteivät kaikki maailmanlaajuisesti kiertävät viruskannat sekä yhdessä infektoituneessa yksilössä olevat kvasilajit ole osoitettavissa. Toisena ongelmana on, että tämänhetkiset immunomääritykset eivät voi osoittaa kaikkia saman affiniteetin omaavia viruksia tavalla, jossa saatu sitoutumissignaali olisi suoraan verrannollinen viruksen runsauteen huolimatta sen alkuperästä. Lisäksi HIV-antigeenien osoittamiseen käytettyjen 20 perinteisten vasta-aineiden sitoutumisaffiniteetti (katso esim. US 6,432,633) ei ole tarpeeksi korkea salliakseen riittävän herkän testin kehittämisen, joka testi olisi käyttökelpoinen HIV-infektion diagnosoinnissa tai viruskuorman tarkkailemiseksi HIV-infektoituneiden yksilöiden antiretrovirusterapian seurannan aikana. Vaikka HIV-antigeenien osoittaminen voisi teoriassa olla ylivoimainen lähestymistapa näihin 25 diagnostisiin tarpeisiin, niin edellä käsiteltyjen rajoitusten vuoksi näihin sovelluksiin käytetään tänään PCR:ään perustuvia menetelmiä tai serologiaa (yksin tai yhdistelmässä tällä hetkellä saatavissa olevan suboptimaalisen antigeenien osoitusteknologian kanssa). Tässä kuvattu keksintö tarjoaa ratkaisun virioniin liittyvien HIV-proteiinien diagnostisen osoittamisen rajoituksiin, jotka ovat luontaisia tällä hetkellä käytetyille immunologisille 30 menetelmille.
2
Schupbach et al. (Journal of Medical Virology, 2001, 65:225 - 232) tuo esille, että lämpödenaturoitua, monistumisella tehostettua p24-antigeenia voidaan käyttää vaihtoehtona HIV-RNA:n testaukselle HIV-infektion hoidon seuraamiseksi. Myös Respess et ai. [Journal of Clinical Microbiology, 2005, 43(1):506 - 508] ja Knuchel et ai. 5 (Journal of Clinical Virology, 2006, 36:64 - 67) tuovat esille ultraherkkiä p24-antigeenimäärityksiä vaihtoehtona HIV-RNA:n testaukselle.
Boder et ai. [PNAS, 2000, 97(20):10 701 - 10 705] tuo esille monovalenttia femtomolaarista, antigeeniä sitovaa affiniteettia omaavien vasta-ainefragmenttien 10 suunnatun evoluution. Holliger ja Hudson [Nature Biotechnology, 2005, 23(9):1 126 -1 136] esittävät katsauksen muokatuista vasta-ainefragmenteista. Nygren ja Uhlen (Current Opinion in Structural Biology, 1997, 7:463 - 469) ja Hosse et ai. (Protein Science, 2006,15:14 - 27) esittävät katsauksen proteiinirakenteita esittelevän proteiinirungon muokkauksesta molekulaarista tunnistusta varten.
15
Binz et ai. [Nature Biotechnology, 2005, 23(10):1 257 - 1 268] ja Hey et ai. [Trends in Biotechnology, 2005, 23(10):514 - 422] esittävät katsauksen ei-immunoglobuliini-domeeneista peräisin olevien uusien sitojaproteiinien muokkauksesta.
20 Kuitenkaan mikään edellä mainituista tunnetun tekniikan julkaisuista tai niiden yhdistelmistä ei esitä biomuokattuja korkean affiniteetin polypeptidejä, jotka on suunniteltu sitomaan p24-antigeenin vähintään kaksi tai kolme aminohappotähdettä pitkiä säilyneitä epitooppeja, mainittujen polypeptidien tuottoa ja mainittujen polypeptidien käyttöä HIV-määrityksessä.
25
PIIRUSTUSTEN LYHYT KUVAUS
Kuvio 1. Tyypillisen HIV-l-kannan p24-proteiinin aminohapposekvenssi. Kuvio esittää p24:n tähteiden suhteellista säilyneisyyttä HIV-l:n vallitsevan M-tyypin kladien A 30 - K ja erilaisten kiertävien rekombinanttivirusten sekä O- ja N-tyypin virusten ja simpanssien läheisten SIV-virusten joukossa. Pistemäärä 1 tarkoittaa yli 99,75 %:a 3 säilyneisyyttä, pistemäärä 2 tarkoittaa > 99,50 %:n säilyneisyyttä, pistemäärä 3 tarkoittaa > 99,00 %:n säilyneisyyttä, pistemäärä 4 tarkoittaa > 98,00 %:n säilyneisyyttä, pistemäärä 5 tarkoittaa > 97,00 %:n säilyneisyyttä (pistemäärä esitetään kunkin tähteen yläpuolella). X tarkoittaa, että kahden vaihtoehtoisen tähteen läsnäolo on > 99,75 %:isesti 5 säilynyt tässä asemassa. Tähteitä, jotka ovat vähemmän kuin 97 %:isesti säilyneitä, ei ole pisteytetty. Tähteet, joiden pistemäärä on 1 tai 2, on merkitty lihavoituna. Mahdolliset BHAP-kohteet on alleviivattu. Huomaa, että alleviivattujen peptidialueiden kaikkien aminohappojen sivuketjut eivät ehkä myötävaikuta BHAP:n tunnistukseen samalla tavoin tai ollenkaan. Siten tietyn BHAP:n tunnistusmotiivi voisi olla esimerkiksi WDRxHP.
10
KEKSINNÖN YKSITYISKOHTAINEN SELITYS
Joillekin tässä julkaisussa käytetyille termeille annetaan seuraavat määritelmät.
15 "Vasta-ainetta" eri kieliopillisissa muodoissaan käytetään tässä kollektiivisena substantiivina, joka viittaa immunoglobuliinimolekyylien populaatioon ja/tai immunoglobuliinimolekyylien immunologisesti aktiivisiin osiin eli molekyyleihin, jotka sisältävät antigeeniä sitovan kohdan tai paratoopin.
20 "Antigeeniä sitova kohta", "paratooppi" on vasta-ainemolekyylin rakenneosa, joka sitoo spesifisesti antigeeniä.
"Yksiketjuista vasta-ainetta" (scFv) käytetään sellaisen molekyylin määrittelemiseksi, jossa vasta-aineen raskaan ja kevyen ketjun vaihtelevat domeenit ovat liittyneet yhteen 25 linkkeripeptidin välityksellä yhdestä ainoasta mRNA-molekyylistä syntetisoidun yhtäjaksoisen aminohappoketjun (transkriptin) muodostamiseksi.
"Immunomääritys" on biokemiallinen testi, joka mittaa aineen tasoa biologisessa nesteessä, tyypillisesti seerumissa, plasmassa, virtsassa tai muissa kehon juoksevissa 30 aineissa käyttämällä vasta-aineen tai vasta-aineiden reaktiota antigeeninsä suhteen. Määrityksessä käytetään vasta-aineen spesifistä sitoutumista antigeeniinsä. Usein 4 käytetään monoklonaalisia vasta-aineita, koska ne sitoutuvat tavallisesti osoitettavan molekyylin yhteen ainoaan kohtaan ja tarjoavat siten spesifisemmän ja täsmällisemmän testauksen, jota näytteen muut molekyylit eivät häiritse. Käytetyillä vasta-aineilla täytyy olla korkea affiniteetti antigeenin suhteen. Antigeenin läsnäolo voidaan mitata 5 esimerkiksi infektiivisten sairauksien diagnoosissa osoittamalla mikrobispesifisiä molekyylirakenteita. Antigeenin määrän osoittaminen voidaan saada aikaan monilla eri menetelmillä. Eräs tavallisimmista käytetyistä tekniikoista on leimata antigeeni tai vasta-aine. Leima voi koostua entsyymistä (entsyymi-immunomääritys, EIA), fluoresenssista (FIA), luminesenssista (LIA), tai ne voivat perustua agglutinaatioon, nefelometriaan, 10 turbidimetriaan tai immunoblottaukseen (Western blot).
Immunomääritykset voivat olla joko kilpailevia tai ei-kilpailevia ja ne voivat olla homogeenisia tai heterogeenisiä. Kilpailevassa määrityksessä näytteessä oleva antigeeni kilpailee leimatun antigeenin kanssa vasta-aineen kanssa sitoutumisesta. Sitten mitataan 15 vasta-ainekohtaan sitoutuneen leimatun antigeenin määrä. Vaste on käänteisesti verrannollinen näytteessä olevan antigeenin konsentraatioon, koska mitä suurempi vaste, sitä vähemmän näytteessä on antigeeniä saatavana leimatun antigeenin kanssa kilpailemiseksi.
20 Ei-kilpailevissa immunomäärityksissä, joita kutsutaan usein "voileipämääritykseksi", näytteessä oleva antigeeni sitoutuu "sieppausvasta-aineeseen” ja leimatun vasta-aineen määrä sitoutmiskohdassa mitataan. Toisin kuin kilpailevan määrityksen tapauksessa tulos on suoraan verrannollinen antigeenin konsentraatioon.
25 Heterogeeninen immunomääritys vaatii ylimääräisen vaiheen sitoutumattoman vasta-aineen tai antigeenin poistamiseksi sitoutumiskohdasta tavallisesti kiinteän faasin materiaalia käyttämällä. Homogeeniset määritykset eivät vaadi sitoutumattoman vasta-aineen tai antigccnimolckyylicn poistamiseksi erotusvaihetta. Immunomäärityksillä on erityisen tärkeä rooli HIV:n diagnoosissa.
30 5
Lyhenne "BHAP" viittaa "biomuokattuun korkean affiniteetin polypeptidiin", joka on molekyyli, joka on muodostettu ja optimoitu käyttämällä rekombinantti-DNA-metodologioita ja jolla on kyky sitoutua ligandiin. Esimerkiksi yksiketjuiset vasta-aineet ja niiden johdannaiset voivat toimia BHAP:inä.
5
Lyhenne "COPOS" viittaa "säilyneeseen polypcptidirakenteeseen", joka on rakenne, joka on muodostunut tyypillisesti kahdesta tai useammasta aminohappotähteestä, joilla on taipumus olla muuttumattomia jopa muuten erittäin vaihtelevissa proteiineissa, kuten monissa virusproteiineissa, ja ne voivat toimia ligandina BHAPdle. COPOS voi mennä 10 päällekkäin antigeeniepitoopin kanssa mutta perinteinen vasta-aine ei ehkä kohdennu siihen.
Tässä käytettynä termi "spesifisesti sitova" tai "spesifisesti tunnistava" tai ilmaus "omata sitomisspesifisyyttä epitoopin suhteen" viittaa matalaan taustaan ja korkean affiniteetin 15 sitoutumiseen BHAP:n tai sen fragmentin tai johdannaisen ja sen kohdemolekyylin välillä (eli epäspesifisen sitoutumisen puutteeseen). Toisin sanoen, termit (ja ekvivalentit ilmaisut) viittaavat sitovan osan (esim. reseptorin, vasta-aineen, ligandin tai antiligandin) kykyyn sitoutua valikoivasti tiettyyn kohdemolekyyliin (esim. ligandiin tai antigeeniin) proteiinien ja muiden biologisten aineiden heterogeenisen populaation läsnä ollessa (eli 20 ilman merkittävää sitoutumista testinäytteessä läsnä oleviin muihin komponentteihin).
Tyypillisesti spesifinen sitoutuminen kahden kokonaisuuden, kuten ligandin ja reseptorin välillä, tarkoittaa sitomisaffiniteettia, joka on vähintään noin 106 M"1 ja edullisesti vähintään noin ΙΟ7, ΙΟ8, 109 tai 1010 M"1, edullisemmin vähintään noin 1011, ΙΟ12, 1013, 1014 tai 1015 M1.
25
Termejä "affinitteettiselektio" (engl. biopanning) ja "faagi-display-kirjasto" käytetään tässä samalla tavalla kuin US-patenttihakemuksessa nro 2005/0074747 (Arap et ai.).
Edelleen, antigeenin klassinen määritelmä on "mikä tahansa vieras aine", joka herättää 30 immuunivasteen (esim. spesifisten vasta-ainemolekyylien tuoton) vietynä alttiin eläimen kudoksiin ja kykenee liittymään yhteen muodostuneiden spesifisten vasta-aineiden kanssa.
6
Antigeeneillä on tavallisesti korkea molekyylipaino ja ne ovat yleensä proteiineja tai polysakkarideja. Polypeptidit, lipidit, nukleiinihapot ja monet muut materiaalit voivat myös toimia antigeeneinä. Immuunivasteita voi muodostua myös hapteeneiksi kutsuttuja pienempiä aineita vastaan, jos ne ovat kemiallisesti kytkettyjä suurempaan 5 kantajaproteiiniin, kuten naudan seemmin albumiiniin, keyhole limpet -hemosyaniiniin (KLH) tai muihin synteettisiin matrikseihin. Monet eri molekyylit, kuten lääkkeet, yksinkertaiset sokerit, aminohapot, pienet peptidit, fosfolipidit tai triglyseridit voivat toimia hapteeneina. Siten jos annetaan tarpeeksi aikaa, immuunijärjestelmä tunnistaa suunnilleen minkä tahansa vieraan aineen ja aine saa aikaan spesifisen vasta-aineen 10 tuoton. Tämä spesifinen immuunivaste on kuitenkin erittäin vaihteleva ja riippuu paljon osaksi antigeenien koosta, rakenteesta ja koostumuksesta. Voimakkaita immuunivasteita herättävien antigeenien sanotaan olevan voimakkaasti immunogeenisiä.
Hyvän antigeenin ominaispiirteitä ovat: 15 • Rakenteellisen stabiilisuuden ja kemiallisen kompleksisuuden alueet molekyylissä.
• Merkittävät osuudet, joista puuttuvat ekstensiiviset toistoyksiköt.
• Molekyylipaino minimissään 8 000 - 10 000 daltonia, vaikka hapteeneja, joiden molekyylipainot ovat niinkin alhaisia kuin 200 Da, on käytetty kantajaproteiinin läsnä 20 ollessa.
• Kyky tulla immuunijärjestelmän käsittelemäksi.
• Immunogeeniset alueet, jotka ovat alttiita vasta-ainetta muodostavalle mekanismille.
• Rakenne-elementit, jotka ovat riittävän erilaisia kuin isännällä.
• Peptidiantigeeneille alueet, jotka sisältävät vähintään 30 % immunogeenisiä 25 aminohappoja: K, R, E, D, Q, N.
• Peptidiantigeeneille merkittävät hydrofiiliset tai varautuneet tähteet.
Ihmisen immuunikatoviruksen HIV:n osoittamisen yhteydessä ongelma on, että viruksen antigeeniset kohdat muuttuvat alituisesti ja nopeasti. Esillä olevan keksinnön mukaisen 30 ratkaisun on määrä antaa käyttöön välineet biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin (BHAP) valmistamiseksi, joka polypeptidi sitoutuu spesifisesti p24- 7 polypeptidin vähintään kaksi tai kolme aminohappotähdettä pitkiin epitooppeihin, jotka olisi vaikea tai mahdoton osoittaa varsinaisilla vasta-aineilla. Siten saatuja BHAP:itä voidaan käyttää osoittamismenetelmissä samalla tavalla kuin vasta-aineita, ja ne ovat siten käyttökelpoisia ihmisen immuunikatoviruksen läsnäolon osoittamisessa biologisesta 5 näytteestä.
Esillä oleva tekniikka liittyy menetelmään ihmisen immuunikatoviruksen läsnäolon osoittamiseksi biologisesta näytteestä, joka menetelmä käsittää 10 a) saatetaan mainittu näyte tai sen fraktio kosketukseen biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin (BHAP) kanssa, joka on kohdennettu rationaalisesti sitoutumaan säilyneisiin rakennedeterminantteihin (COPOS), jotka ovat pääketjun ja vähintään kahden tai kolmen tai useamman aminohappotähteen sivuketjuatomien muodostamia lyhyissä, tyypillisesti alle kymmenen tähteen peptidialueissa HIV:n p24-polypeptidissä, 15 b) osoitetaan mainitun biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin ja p24:n tai sen fragmentin kompleksi, mainitun kompleksin läsnäolon tarkoittaessa HIV:n läsnäoloa mainitussa näytteessä.
20 Sitoutuvat COPOS-determinantit ovat edullisesti sijoittuneet seuraaviin säilyneisiin 5-9 -meeripeptideihin HIV:n p24-polypeptidissä: RTLNAWVK (SEQ ID NO:l), VGGHQAAMQ (SEQ ID NO:2), 25 WDRLHP (SEQ ID NO:3), P R G S D IA G (SEQ ID NO:4), G L N K IV (SEQ ID NO:5), V R M Y S P (SEQ ID NO:6), Q G P K E (SEQ ID NO:7), 30 FRDYVDRF (SEQ ID NO:8), L R A E Q (SEQ ID NO:9), 8 W M T E T L L (SEQ ID NO: 10), W M T D T L L (SEQ ID NO:l 1), Q N A N P D C (SEQ ID NO: 12), E E M M T A C (SEQ ID NO:13), ja 5 ACQGVGGP (SEQ ID NO: 14).
Keksintö ei kuitenkaan rajoitu vain näihin edellä oleviin polypeptideihin, koska alan ammattilaiselle on selvää, että muita HIV:n p24-polypeptidistä johdettuja ja tässä keksinnössä käyttökelpoisia epitooppeja voidaan löytää tunnettujen p24-sekvenssien tai 10 sekvenssien, joita tullaan löytämään, jatkotietokoneanalyysillä. Tietokoneella suoritettuja sekvenssin identtisyys vertailuja voidaan toteuttaa käyttämällä aminohappo- tai nukleotidisekvenssivertailualgoritmia, esimerkiksi sellaisia, jotka ovat tunnettuja alan ammattilaiselle. Voidaan esimerkiksi käyttää BLASTN-algoritmia.
15 Sitoutuva COPOS-determinantti koostuu edullisesti 2-3,2-4,2-5,2-6,3-4,3-5,3-6, 2 - 7 tai 3 - 7 vierekkäisestä tai ei-peräkkäisestä aminohappotähteestä. Edullisemmin, sitoutuva COPOS-determinantti koostuu 2, 3, 4, 5, 6 tai 7 vierekkäisestä tai ei-peräkkäisestä aminohappotähteestä.
20 Testattava biologinen näyte on edullisesti verinäyte. Mainittu näyte tai sen fraktio alistetaan edullisesti olosuhteille, jotka denaturoivat näytteessä olevat polypeptidit ennen edellä olevan menetelmän vaiheen a) suorittamista.
Esillä oleva keksintö antaa käyttöön menetelmän biomuokatun, korkean affiniteetin 25 polypeptidin (BHAP) tuottamiseksi, joka polypeptidi kykenee sitoutumaan spesifisesti HIV: n p24-antigeenin säilyneessä alueessa olevaan vähintään kahdesta kolmeen vierekkäistä tai ei-peräkkäistä aminohappoa pitkään epitooppiin, joka menetelmä käsittää vaiheet: 30 a) valitaan p24-antigeenin tunnettujen aminohapposekvenssien tietokoneanalyysillä vähintään kaksi aminohappoa pitkä säilynyt alue p24-antigeenistä; 9 b) valmistetaan valittuun p24-antigeenin säilyneeseen alueeseen perustuva peptidi; c) saatetaan kosketukseen sitoutumisproteiineja ilmentävien partikkeleiden kirjasto 5 mainitun peptidin kanssa, mainittu kirjasto on edullisesti yksiketjuisten vasta-aineiden faagikirjasto; d) eristetään ne partikkelit, jotka ilmentävät sitoutumisproteiineja, joilla on sitoutumisaktiivisuutta mainittua peptidiä kohtaan; 10 e) alistetaan vaiheessa d) eristetyistä partikkeleista saatu tai johdettu nukleiinihappo mutageneesille; f) valmistetaan sitoutumisproteiineja ilmentävien partikkelien kirjasto vaiheesta e) 15 saatuihin partikkeleihin perustuen; g) saatetaan kosketukseen vaiheesta f) saatu kirjasto mainitun peptidin tai sen fragmentin kanssa; 20 h) eristetään ne partikkelit, jotka ilmentävät sitoutumisproteiineja, joilla on parantunut sitoutumisaktiivisuus mainittua peptidiä tai sen fragmenttia kohtaan; mainittu parantunut sitoutumisaktiivisuus voi olla esim. korkeampi affiniteetti tai parempi spesifisyys; i) toistetaan vaiheet e) - h) yhden tai useamman kerran; 25 j) otetaan vaiheesta i) saaduista partikkeleista biomuokattu, korkean affiniteetin polypeptidi, joka kykenee sitoutumaan spesifisesti HIV:n p24-antigeenin 2-7 vierekkäistä tai ei-peräkkäistä aminohappoa pitkään säilyneeseen epitooppiin.
30 Tässä käytetyt julkaisut ja muut materiaalit keksinnön taustan valaisemiseksi ja erityisesti lisäyksityiskohtien antamiseksi, mitä tulee sen käytäntöön, sisällytetään tähän viitteeksi.
10
Esillä olevaa keksintöä kuvataan edelleen seuraavissa esimerkeissä, joiden ei tarkoiteta rajoittavan keksinnön suojapiiriä.
ESIMERKIT
5 ESIMERKKI 1 COPOS-determinanttien tunnistamiseksi HIV-p24:stä asetettiin suuri joukko julkisista tietokannoista, kuten http://www.hiv.lanl.gov/content/index, saatavia yksittäisiä 10 aminohapposekvenssejä rinnakkain toistensa kanssa ja kunkin aminohappotähteen suhteellinen säilyneisyys arvioitiin. Tähän analyysiin perustuen myöhempään analyysiin valittiin peptidejä, jotka olivat tyypillisesti lyhyempiä kuin kymmenen tähdettä ja sisälsivät vähintään kaksi aminohappoa, jotka ovat säilyneitä useammassa kuin 99 %:ssa sekvensseistä (katso kuviota 1).
15
Sen jälkeen, kun näihin peptideihin sitoutuvat potentiaaliset BHAP-molekyylit valmistetaan, esimerkiksi seulomalla scFv-faagikirjastoja (Hoogenboom, Nature Biotechnology 23(9): 1 105 - 1 116, esittää katsauksen rekombinanttivasta-ainekirjastojen seulonnan perusperiaatteista), tunnistetaan tästä sitoutumisesta vastuussa olevat tähteet 20 käyttämällä peptidisiruteknologiaa. COPOS-determinantteina tullaan pitämään niitä BHAP:n tunnistusmotiiveja, jotka koostuvat erittäin säilyneistä HIV-p24-tähteiden sarjoista. Tällaiset sarjat koostuvat tyypillisesti kahdesta viiteen tähteestä, jotka voivat olla tai olla olematta asettuneina välittömästi toistensa viereen HIV-24-polypeptidiketjussa. Siten mikä tahansa kahden tai useamman tähteen yhdistelmä edellä 25 luetelluissa peptidisekvensseissä (SEQ ID nro: 1 - 14) on potentiaallinen COPOS käytettäväksi HIV-p24:n osoittamisessa.
ESIMERKKI 2 30 Affiniteettiin perustuvia valintamenetelmiä käyttäen yhden tai useamman potentiaalisen COPOS-determinantin sisältäviä synteettisiä peptidejä käytetään laajojen polypeptidejä 11 käsittävien kirjastojen seulomiseen, jotka polypeptidit voivat toimia BHAP-esiasteina. Esimerkiksi ETH-2-Gold-faagi-display-kirjasto, jonka ovat muodostaneet Neri ja työtoverit (Proteomics 5:2 340 - 2 350, 2005) ja joka sisältää kolme miljardia yksittäistä rekombinanttivasta-ainekloonia, seulotaan polypeptidien suhteen, jotka voivat toimia 5 spesifisesti vuorovaikutuksessa COPOS:n sisältävien peptidien kanssa. Useita kirjastoja, jotka sisältävät potentiaalisesti ligandia sitovia polypeptidejä perustuen ei-Ig:stä johdettuihin polypeptideihin, on myös olemassa (katso esim. Nature Biotechnology 23:1 257 - 1 268) tai voidaan suunnitella de novo, ja niitä käytetään polypeptidien seulomiseksi BHAP:iden kehittämiseksi. Sen lisäksi, että tällaisia BHAP-esiastekirjastoja 10 seulotaan synteettisillä peptideillä, affiniteettivalikoinnissa ligandeina käytetään rekombinanttiproteiineja, jotka sisältävät yhden tai useamman mahdollisen COPOS-determinantin, sekä denaturoituja HIV-kapsidiproteiineja (p24).
Jatkokehitystä varten valitaan BHAP-esiasteita, jotka sitoutuvat sekä denaturoituun 15 p24:ään että määriteltyyn COPOS:n sisältävään peptidiin. Aluksi selvitetään yksityiskohtaiset sitovat determinantit niiden COPOS:n sisältävissä kohdepeptideissä käyttämällä peptidisiruteknologiaa, kuten PepSpot™-peptidikalvoja, jotka JPT Peptide Technologies GmbH -yhtiö on kehittänyt, ja BHAP-esiasteet, jotka sitoutuvat näissä peptideissä oleviin maksimaalisesti säilyneisiin rakenteisiin (= bona fide COPOS-20 elementit), valikoidaan biomuokkauksen kautta tapahtuvaan kehitystyöhön. Näiden esi-BHAP:iden sitoutumisaffiniteetti maksimoidaan ja, jos on välttämätöntä, niiden sitoutumisspesifisyyttä suunnataan lisää p24:n maksimaalisesti säilyneisiin molekyylideterminantteihin (katso kuviota 1) uudelleen toistetun mutageneesin ja affmiteettiselektoinnin välityksellä, kuten keksijät ovat kuvanneet aikaisemmissa 25 tutkimuksissaan SCA-muokkaukseen liittyen (Biochemistry 41:12 729 - 12 738). Sekä satunnaismutageneesia virhealtista PCR:ää käyttämällä, kuten on kuvattu edellä viitatussa Biochemistry-artikkelissa, tai muita samanlaisia tekniikoita, että BHAP:issä olevien sitoutuvien pintojen kohdennettua mutageneesiä tai näiden lähestymistapojen yhdistelmiä käytetään. Parannettujen BHAP-molekyylien affiniteettiselektointiin ja monistumiseen 30 käytetään M13:sta johdettuun phasmidiin perustuvaa perinteistä faagi-display- 12 menetelmää, ja auttajabakteriofagin välittämää lähestymistapaa, mutta voidaan käyttää myös muita niihin liittyviä seulontamenetelmiä.
Sitoutumisaffiniteetit ja muut huomattavat ominaisuudet karakterisoidaan sitten 5 yksityiskohtaisesti. Optimaalisten BHAP:iden, joita sitten käytetään sellaisinaan tai erilaisina fuusioproteiinijohdannaisina uusien p24-osoitusmääritysten luomiseksi, ominaisuuksia ovat: 1) korkea affiniteetti lämpödenaturoidun HIV-p24-proteiinin suhteen, mikä tarkoittaa edullisesti dissosiaatiovakiota, joka on alempi kuin 10" M, 2) samankaltaisten COPOS-determinanttien absoluuttinen säilyneisyys useammassa kuin 10 99 %:ssa relevanteista viruskannoista ja 3) hyvä liukoisuus ja suuren mittakaavan rekombinanttituoton helppous.
Claims (6)
1. Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi, joka polypeptidi kykenee sitoutumaan spesifisesti HIV:n p24-antigeenin 2-7 vierekkäistä tai 5 ei-peräkkäistä aminohappoa pitkään säilyneeseen epitooppiin, joka menetelmä käsittää vaiheet: a) valitaan p24-antigeenin tunnettujen aminohapposekvenssien tietokoneanalyysillä vähintään kaksi aminohappoa pitkä säilynyt alue p24-antigeenistä; 10 b) valmistetaan p24-antigeenin valittuun säilyneeseen alueeseen perustuva peptidi; c) saatetaan kosketukseen sitoutumisproteiineja ilmentävien partikkelien kirjasto mainitun peptidin kanssa; 15 d) eristetään ne partikkelit, jotka ilmentävät sitoutumisproteiineja, joilla on sitoutumisaktiivisuutta mainittua peptidiä kohtaan; e) alistetaan vaiheessa d) eristetystä partikkelista tai partikkeleista saatu tai johdettu 20 nukleiinihappo mutageneesille; f) valmistetaan sitoutumisproteiineja ilmentävien partikkelien kirjasto vaiheesta e) saatuihin partikkeleihin perustuen; 25 g) saatetaan kosketukseen vaiheesta f) saatu kirjasto mainitun peptidin tai sen fragmentin kanssa; h) eristetään ne partikkelit, jotka ilmentävät sitoutumisproteiineja, joilla on parantunut sitoutumisaktiivisuus mainittua peptidiä tai sen fragmenttia kohtaan; 30 i) toistetaan vaiheet e) - h) yhden tai useamman kerran; j) otetaan vaiheesta i) saaduista partikkeleista biomuokattu, korkean affiniteetin polypeptidi, joka kykenee sitoutumaan spesifisesti HIV:n p24-antigeenin 2-7 vierekkäistä tai ei-peräkkäistä aminohappoa pitkään säilyneeseen epitooppiin. 5
2. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, jolloin mainittu kirjasto on yksiketjuisten vasta-aineiden faagikirjasto.
3. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, jolloin mainitun biomuokatun, korkean 10 affiniteetin polypcptidin affiniteetti on 10"12 - 10'15 M epitoopin suhteen.
4. Patenttivaatimuksen 1 mukainen menetelmä, jolloin mainittu peptidi on valittu ryhmästä, joka koostuu seuraavista peptideistä:
15 RTLNAWVK (SEQ ID NO:l), VGGHQAAMQ (SEQ ID NO:2), WDRLHP (SEQ ID NO:3), PRGSDIAG (SEQ ID NO:4), G L N K IV (SEQ ID NO:5),
20. R M Y S P (SEQ ID NO:6), Q G P K E (SEQ ID NO:7), FRDYVDRF (SEQ ID NO:8), L R A E Q (SEQ ID NO:9), WMTETLL (SEQ ID NO:10),
25 WMTDTLL (SEQ ID NO: 11), Q N A N P D C (SEQ ID NO: 12), E E M M T A C (SEQ ID NO: 13), ja ACQGVGGP (SEQ ID NO: 14). 30
5. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, jolloin epitooppi koostuu 2-3,2 -4, 2-5, 2 - 6, 3 - 4, 3 - 5 tai 3 - 6 vierekkäisestä tai ei-peräkkäisestä aminohappotähteestä.
6. Patenttivaatimuksen 4 mukainen menetelmä, jolloin epitooppi koostuu 2, 3, 4, 5 tai 6 5 vierekkäisestä tai ei-peräkkäisestä aminohappotähteestä.
Priority Applications (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI20075028A FI120376B (fi) | 2007-01-17 | 2007-01-17 | Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi |
| PCT/FI2008/050012 WO2008087254A2 (en) | 2007-01-17 | 2008-01-17 | Method for detection of human immunodeficiency virus |
| CA002675122A CA2675122A1 (en) | 2007-01-17 | 2008-01-17 | Method for detection of human immunodeficiency virus |
| EP08701712A EP2109772A4 (en) | 2007-01-17 | 2008-01-17 | METHOD FOR DETECTING HUMAN IMMUNE DISEASE VIRUS |
| AU2008206881A AU2008206881A1 (en) | 2007-01-17 | 2008-01-17 | Method for detection of human immunodeficiency virus |
| JP2009545963A JP2010516660A (ja) | 2007-01-17 | 2008-01-17 | ヒト免疫不全ウイルスの検出方法 |
| US12/522,838 US20100048407A1 (en) | 2007-01-17 | 2008-01-17 | Method for detection of human immunodeficiency virus |
| CN200880002505A CN101646944A (zh) | 2007-01-17 | 2008-01-17 | 检测人免疫缺陷病毒的方法 |
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FI20075028 | 2007-01-17 | ||
| FI20075028A FI120376B (fi) | 2007-01-17 | 2007-01-17 | Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| FI20075028A0 FI20075028A0 (fi) | 2007-01-17 |
| FI20075028L FI20075028L (fi) | 2008-07-18 |
| FI120376B true FI120376B (fi) | 2009-09-30 |
Family
ID=37745720
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| FI20075028A FI120376B (fi) | 2007-01-17 | 2007-01-17 | Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi |
Country Status (8)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US20100048407A1 (fi) |
| EP (1) | EP2109772A4 (fi) |
| JP (1) | JP2010516660A (fi) |
| CN (1) | CN101646944A (fi) |
| AU (1) | AU2008206881A1 (fi) |
| CA (1) | CA2675122A1 (fi) |
| FI (1) | FI120376B (fi) |
| WO (1) | WO2008087254A2 (fi) |
Family Cites Families (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NO314588B1 (no) * | 2000-09-04 | 2003-04-14 | Bionor Immuno As | HIV-peptider, antigener, vaksinesammensetning, immunoassay- testsett og en fremgangsmåte for å påvise antistoffer indusert av HIV |
| US6818392B2 (en) * | 2000-12-06 | 2004-11-16 | Abbott Laboratories | Monoclonal antibodies to human immunodeficiency virus and uses thereof |
| US6833441B2 (en) * | 2001-08-01 | 2004-12-21 | Abmaxis, Inc. | Compositions and methods for generating chimeric heteromultimers |
-
2007
- 2007-01-17 FI FI20075028A patent/FI120376B/fi not_active IP Right Cessation
-
2008
- 2008-01-17 AU AU2008206881A patent/AU2008206881A1/en not_active Abandoned
- 2008-01-17 CN CN200880002505A patent/CN101646944A/zh active Pending
- 2008-01-17 JP JP2009545963A patent/JP2010516660A/ja active Pending
- 2008-01-17 CA CA002675122A patent/CA2675122A1/en not_active Abandoned
- 2008-01-17 US US12/522,838 patent/US20100048407A1/en not_active Abandoned
- 2008-01-17 EP EP08701712A patent/EP2109772A4/en not_active Withdrawn
- 2008-01-17 WO PCT/FI2008/050012 patent/WO2008087254A2/en active Application Filing
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US20100048407A1 (en) | 2010-02-25 |
| JP2010516660A (ja) | 2010-05-20 |
| FI20075028A0 (fi) | 2007-01-17 |
| EP2109772A4 (en) | 2010-09-29 |
| WO2008087254A2 (en) | 2008-07-24 |
| AU2008206881A1 (en) | 2008-07-24 |
| CA2675122A1 (en) | 2008-07-24 |
| WO2008087254A8 (en) | 2009-07-30 |
| EP2109772A1 (en) | 2009-10-21 |
| FI20075028L (fi) | 2008-07-18 |
| CN101646944A (zh) | 2010-02-10 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| CN112010966B (zh) | 一种针对新冠病毒棘突蛋白非rbd区的单克隆抗体及其应用 | |
| Pomplun et al. | De novo discovery of high-affinity peptide binders for the SARS-CoV-2 spike protein | |
| KR102229225B1 (ko) | 사스-코로나바이러스-2 표면의 스파이크 단백질에 결합하는 사스-코로나바이러스 감염증의 진단용 결합 분자 | |
| CN107022027B (zh) | Hiv-1广谱中和抗体及其用途 | |
| Klasse | How to assess the binding strength of antibodies elicited by vaccination against HIV and other viruses | |
| US7049060B2 (en) | HCV anti-core monoclonal antibodies | |
| EP0759037B1 (en) | Antigen/antibody specificity exchanger | |
| Kim et al. | Developing a SARS-CoV-2 antigen test using engineered affinity proteins | |
| Gazarian et al. | Mimotope peptides selected from phage display combinatorial library by serum antibodies of pigs experimentally infected with Taenia solium as leads to developing diagnostic antigens for human neurocysticercosis | |
| Palacios-Rodríguez et al. | Collection of phage–peptide probes for HIV-1 immunodominant loop-epitope | |
| KR102008609B1 (ko) | 지카 바이러스의 비구조단백질 1에 대한 특이 항체를 생산하는 하이브리도마 및 이로부터 생성된 항체, 이의 용도 | |
| FI120376B (fi) | Menetelmä biomuokatun, korkean affiniteetin polypeptidin valmistamiseksi | |
| FI120349B (fi) | Menetelmä fuusiopolypeptidin valmistamiseksi | |
| CN117720650A (zh) | 抗人呼吸道合胞病毒抗体及其应用 | |
| US11739137B2 (en) | Single domain antibodies to SARS-CoV-2 nucleocapsid protein | |
| Liu et al. | Bispecific monoclonal antibodies against a viral and an enzyme: utilities in ultrasensitive virus ELISA and phage display technology | |
| Zhang et al. | Mimotopes selected by biopanning with high-titer HIV-neutralizing antibodies in plasma from Chinese slow progressors | |
| JPH04505621A (ja) | Ｔリンパ球向性レトロウイルス単クローン抗体 | |
| Fujimori et al. | Epitope analysis of the cerebrospinal fluid IgG in HTLV-I associated myelopathy patients using phage display method | |
| RU2794141C2 (ru) | Однодоменные наноантитела против шиповидного белка вируса SARS-CoV-2 | |
| EP4194054A1 (en) | Camelid antibodies for use in therapy and diagnosis | |
| Burciaga-Flores et al. | A New Approach in DENV Diagnostic based on Linear Peptides Obtained by Phage Display | |
| RU2380378C2 (ru) | Антитело или его фрагмент, имеющие нейтрализующую активность в отношении вич | |
| Schoen et al. | Development of broadly neutralizing antibody mimitopes for characterization of CRF01_AE HIV-1 antibody responses | |
| TWI532838B (zh) | 蓖麻子毒素融合瘤細胞株、其單株抗體、及包含該單株抗體的免疫檢測試劑及套組 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| FG | Patent granted |
Ref document number: 120376 Country of ref document: FI |
|
| MM | Patent lapsed |