FI103751B - Mikrobien vastaisia koostumuksia - Google Patents

Description

1 103751

Mikrobien vastaisia koostumuksia Tämä keksintö koskee mikrobien vastaisia koostumuksia, jotka sisältävät jodidi- ja tiosyanaattianioneja, 5 oksidoreduktaasientsyymiä, nimittäin glukoosioksidaasia, ja sitä vastaavaa hapetettavissa olevaa substraattia, D-glukoosia. Tällaiset koostumukset voivat edullisesti sisältää lisäksi peroksidaasia, kuten laktoperoksidaasia. Näillä koostumuksilla on erinomaiset antimikrobiominaisuu-10 det bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

On tunnettua, että jodidi- ja tiosyanaattianionit voivat hapettua vetyperoksidin (H202) läsnä ollessa hape-tustuotteiksi, jotka ovat tehokkaita bakteeri-inhibiitto-reita. Näitä hapetusreaktioita voivat katalysoida peroksi-15 daasit, kuten laktoperoksidaasi, ja tunnetaan laktoperok sidaasia sisältäviä bakteerien vastaisia järjestelmiä. H202 voidaan hyvin saada peroksldinluovuttajasta, kuten nat-riumperkarbonaatista, tai sitä voidaan tuottaa in situ oksidoreduktaasientsyymillä, kuten glukoosioksidaasilla, 20 glukoosin, veden ja hapen läsnä ollessa. Tavanomaiset järjestelmät, jotka perustuvat jodidi- tai tiosyanaattianio-nien hapetukseen H202:lla, tuottavat tunnetusti koostumuksia, joilla on lyhytaikainen bakterisidinen aktiivisuus ja jotka soveltuvat käytettäviksi desinfiointiaineina, esi-25 merkiksi iholle, tai piilolinssien sterilointiin, maidon säilyvyyden parantamiseen tai hammashygienia-aineina.

EP-hakemusjulkaisussa 0 307 376 (EWOS AG) esitetään lyhytvaikutteinen mikrobisidinen koostumus, joka sisältää jodidia ja laktoperoksidaasia ja/tai piparjuuriperoksidaa-30 siä yhdessä vetyperoksidinluovuttajan kanssa. Peroksidin-' : luovuttaja voi mahdollisesti olla glukoosin ja glukoosi- peroksidaasin yhdistelmä, mutta se voi olla myös mm. mag-nesiumperoksidi tai karbamidiperoksidi. Kun koostumukseen sisällytetään glukoosioksidaasia, sitä on läsnä korkein-35 taan noin 100 ky/1 (yksikköä/1). Koostumusten on osoitettu 2 103751 olevan tehokkaita vain bakteereja vastaan ja niiden sanotaan olevat aktiivisia noin 24 tuntia ilman vaikutuksen alaisina.

Tällaisten koostumusten komponenttien suhteellisten 5 osuuksien merkitystä ei kuitenkaan ole tätä ennen täysin ymmärretty, eikä siksi ole ollut mahdollista kehittää ha-petusjärjestelmää, joka saa aikaan pitkitetyn laajakirjöisen aktiivisuuden bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

Tämän hakemuksen tekijä on nyt havainnut, että mai-10 nitunlaisten komponenttien, erityisesti jodidi- ja tiosya-naattianionien, pitoisuus ja suhde vaikuttaa olennaisesti mainitunlaisten järjestelmien mikrobien vastaiseen aktiivisuuteen. Kunkin olennaisen komponentin määrän ja suhteellisen osuuden huolellinen valinta antaa tulokseksi 15 mikrobien vastaisia koostumuksia, joilla on edullisia ominaisuuksia .

Niinpä tämä keksintö koskee mikrobien vastaisia koostumuksia, jotka sisältävät jodidianioneja ja tiosya-: naattianioneja massasuhteessa 0,1:1 - 50:1 ja massan mu- 20 kaan laskettuna yhteispitoisuutena vähintään 5 mg/kg näitä anioneja, vähintään 0,2 g/kg D-glukoosia ja vaikuttavan määrän oksidoreduktaasientsyymi-glukoosioksidaasia. Nämä koostumukset sisältävät vähintään 150 ky/kg glukoosioksi-daasia, vaikka pienemmätkin pitoisuudet, esimerkiksi 25 25 ky/kg, voivat olla hyväksyttäviä koostumuksissa, jotka sisältävät lisäksi vähintään yhtä hapettumisenestoainetta, kuten kuvataan yksityiskohtaisesti jäljempänä.

Keksinnön yhdessä edullisessa suoritusmuodossa mikrobien vastaiset koostumukset sisältävät lisäksi peroksi-30 daasia, kuten esimerkiksi laktoperoksidaasia, myeoloperok-sidaasia tai piparjuuriperoksidaasia. Erityisen edulliset keksinnön mukaiset koostumukset sisältävät vähintään 10 ky/kg laktoperoksidaasia.

Kaikki entsyymiaktiivisuusyksiköt (ky), joihin täs-35 sä viitataan, ovat kansainvälisiä aktiivisuusyksiköitä, 3 103751 joka yksikkö on määritelmän mukaan entsyymimäärä, joka tarvitaan katalysoimaan substraatin muuttuminen nopeudella 1,0 μιηοΐ/min lämpötilassa 25 °C optimaalisissa olosuhteissa. Kaikki pitoisuudet, johin tässä viitataan, ovat määriä 5 kilogrammaa kohden koko koostumusta.

Tässä käytettynä termin "mikrobien vastainen koostumus" piiriin kuuluvat koostumukset, joilla on biosidinen ja/tai biostaattinen aktiivisuus erityyppisiä mikro-organismeja vastaan, joihin kuuluvat esimerkiksi gram-negatii-10 viset bakteerit, kuten Escherichia coli ja Pseudomonas aeruginosa, gram-positiiviset bakteerit, kuten Staphylococcus aureus ja Propionibacterium acnes, homeet, kuten Aspergillus niger ja Penicillium funiculosum, hiivat, kuten Candida alibicans, Saccharomyces cerevisiae ja Pityro-15 sporum ovale, dermatofyyttiset sienet, kuten Trichophyton rubrum, mikrolevät, kuten Chlorella spp. ja Spyrogyra spp., ja virukset, kuten Herpes-virus ja Picorna-virus.

Sekä jodidi- että tiosyanaattianionien on havaittu olevan keksinnön mukaisten koostumusten välttämättömiä 20 komponentteja sen takaamiseksi, että koostumuksella on homeiden ja hiivojen vastainen aktiivisuus tekniikan tasoa vastaavien koostumusten bakteerien vastaisen aktiivisuuden lisäksi. Jodidi- ja tiosyanaattianioneja sisällytetään keksinnön mukaisiin koostumuksiin yleensä suolojen muo-25 dossa. Soveltuviin jodidisuoloihin kuuluvat alkalimetal-lisuolat, kuten kaliumjodidi ja natriumjodidi ja niiden seokset. Soveltuviin tiosyanaattisuoloihin kuuluvat esimerkiksi tiosyanaatin kalium-, natrium-, ammonium-, rauta (III)- ja kupari(I)suolat ja niiden seokset. Jodi-30 dianionipitoisuus on edullisesti vähintään 5 mg/kg ja tio-:* syanaattianionipitoisus vähintään 2 mg/kg. Jodidianionien massasuhde tiosyanaattianioneihin on edullisesti alueella 0,2:1 - 20:1, edullisemmin 0,5:1 - 15:1, erityisesti 1:1 - 5:1, ja anionien yhteispitoisuus on edullisesti vä-35 hintaan 10 mg/ kg.

4 103751

Oksidoreduktaasientsyymi, glukoosioksidaasi, katalysoi H202:n tuotantoa D-glukoosin hapettumisen kautta veden ja hapen läsnä ollessa. Sen luokitus on E.C.1.1.3.4. (IUPAC) ja se määritellään tässä kansainvälisillä yksi-5 köillä (ky; entsyymimäärä, joka tarvitaan katalysoimaan reaktio, jossa hapettuu 1,0 mikromoolia β-D-glukoosia minuutissa pH:n ollessa 7,0 ja lämpötilassa 25 °C). Glukoo-sioksidaasia on saatavana kaupallisesti lukuisista lähteistä, esimerkiksi Sturge-ABM:Itä kauppanimellä Glucox 10 P200 (2 000 ky/ml) ja Glucox PS (75 ky/ml). Tämän hakemuk sen tekijät ovat havainneet, että sekä keksinnön mukaisissa koostumuksissa käytettävien jodidi- ja tiosyanaatti-anionien pitoisuudet että niiden suhteet ja glukoosioksi-daasipitoisuus ovat ratkaisevan tärkeitä homeiden ja hii-15 vojen tehokkaan torjumisen kannalta. Keksinnön mukaiset koostumukset, jotka sisältävät glukoosioksidaasia suurempina pitoisuuksina kuin 150 ky/kg, saavat yllättävästi aikaan erinomaisen suojan bakteerien, homeiden ja hiivojen . kasvua vastaan. Vertailukoostumuksilla, jotka sisältävät ' 20 pienempinä pitoisuuksina, esimerkiksi 75 ky/kg, glukoosi oksidaasia, on riittävä antibakteerinen aktiivisuus, mutta ne eivät merkittävästi vaikeuta homeiden ja hiivojen kasvua. Mikrobien vastaista aktiivisuutta mahdollisesti parantavien muiden aineiden, esimerkiksi hapettumisenesto-25 aineiden, poissa ollessa tällaiset koostumukset eivät siten ole hyväksyttävissä laajakirjoisiksi mikrobien vastaisiksi aineiksi.

Glukoosioksidaasin hapetettavissa olevaa substraattia, nimittäin D-glukoosia, sisällytetään keksinnön mukai-30 siin koostumuksiin yleensä vähintään pitoisuudeksi 0,5 g/ ” kg, edullisesti vähintään 1 g/kg, edullisemmin vähintään 2 g/kg. Ammattimiehet ymmärtänevät, että D-glukoosia voidaan lisätä sellaisenaan tai sitä voidaan muodostaa in situ keksinnön mukaisissa koostumuksissa sopivista esias-35 teista, esimerkiksi D-glukoosia sisältävän oligomeerin tai , 103751 polymeerin hajoamisen tuloksena. Soveltuvia esiasteita, kuten sakkaroosia tai tärkkelystä, voidaan käyttää yksinään tai seoksena D-glukoosin kanssa, ja ne saattavat edullisesti tukea pitempiaikaista mikrobien vastaista ak-5 tiivisuutta, kuin mitä saadaan aikaan pelkällä D-glukoo-silla. Glukoosioksidaasin kahta muuta välttämätöntä substraattia, vettä ja happea, on yleensä läsnä ympäristössä, joissa koostumuksia on määrä käyttää.

Jodidi- ja tiosyanaattianionien hapettumistehoa 10 H202:n läsnä ollessa voidaan parantaa lisäämällä pieniä määriä peroksidaasientsyymiä, kuten laktoperoksidaasia. Niinpä tämän keksinnön mukaiset koostumukset sisältävät edullisesti lisäksi vähintään 10 ky/kg, edullisesti vähintään 100 ky/kg, laktoperoksidaasia. Laktoperoksidaasin 15 luokitus on E.C.1.17.1.7 (IUPAC), ja se määritellään tässä kansainvälisillä yksiköillä (ky; entsyymimäärä, joka tarvitaan katalysoimaan reaktio, jossa pelkistyy 1,0 mikro-moolia H202:a minuutissa pH:n ollessa 7,0 ja lämpötilassa 25 °C). Laktoperoksidaasia on saatavana kaupallisesti lu-20 kuisista lähteistä, esimerkiksi Swedish Dairies Associationilta (275 ky/mg). Se voidaan lisätä esimerkiksi kylmäkuivatun jauheen muodossa tai suolaa, esimerkiksi 1,8 tai 12 % NaCl:a, sisältävässä vesiliuoksessa. Tämän keksinnön mukaiset koostumukset, jotka sisältävät lisäksi . 25 laktoperoksidaasia, estävät yllättävästi tiettyjen formu- latyyppien mikrobiologisen pilaantumisen, joita on tähän asti ollut vaikea saada säilymään tavanomaisten kemiallisten säilytteiden avulla.

Keksinnön mukaisten mikrobien vastaisten koostumus-30 ten olennaiset komponentit ovat kaikki peräisin luonnossa esiintyvistä järjestelmistä. Keksintö tarjoaa siten käyttöön "luonnollisen" mikrobien vastaisen koostumuksen, jota voidaan käyttää korvaamaan tai täydentämään tähän asti käytettyjä tavanomaisia kemiallisia säilytteitä.

103751 6

Keksinnön mukaisiin koostumuksiin voidaan haluttaessa sisällyttää muita aineita, jotka voivat täydentää tai edistää niiden mikrobien vastaista aktiivisuutta, esimerkiksi muita entsyymejä, kuten laktoferriini, tai suolo-5 ja, kuten kalsiumkloridia. Tämän hakemuksen tekijät ovat yllättävästi havainneet, että keksinnön mukaisten koostumusten mikrobien vastaista aktiivisuutta edistää sellaisten aineiden lisääminen, joilla on hapettumista estävä aktiivisuus. Tyypillisiin hapettumisenestoaineisiin kuulu-10 vat esimerkiksi butyloitu hydroksianisoli, butyloitu hyd-roksitolueeni, α-tokoferoli ja sen esterit, askorbiinihap-po ja sen suolat ja esterit, gallushappo ja sen suolat ja esterit, esimerkiksi propyyligallaatti, kinonit, kuten 2,5-di(tert-butyyli)hydrokinoni, propolit, flavenoidipi-15 toiset materiaalit, kuten kversetiini, rikkipitoiset materiaalit, kuten dilauryyli-3,3-tiodipropionaatti ja distea-ryyli-3,3 -1iopropionaatti, ja niiden seokset. Keksinnön mukaiset koostumukset, jotka sisältävät vähintään yhtä ha-: pettumisenestoainetta, voivat haluttaessa sisältää glu- 20 koosioksidaasia alennettuina pitoisuuksina, esimerkiksi vähintään 25 ky/kg, edullisesti vähintään 75 ky/kg, ja ne sisältävät jodidi- ja tiosyanaattianioneja edullisesti massasuhteessa 0,1:1 - 20:1. Edullisiin hapettumisenestoaineisiin kuuluvat butyloitu hydroksianisoli, butyloitu 25 hydroksitolueeni, α-tokoferoli ja sen esterit ja askor- biinihappo ja sen suolat ja esterit, ja niitä käytetään edullisesti vähintään pitoisuutena 1 mg/kg, edullisemmin vähintään 50 mg/kg. α-tokoferolin ja sen estereiden käyttö "luonnollisina" hapettumisenestoaineina on erityisen edul-30 lista.

Tämän keksinnön yhtenä puolena tarjotaan käyttöön konsentroituja, suurin piirtein reagoimattomassa muodossa olevia koostumuksia, joita voidaan säilyttää pitkiä aikoja ennen käyttöä. Keksinnön mukaisissa konsentroiduissa koos-35 tumuksissa glukoosioksidaasi pidetään yleensä fysikaali- 7 103751 sesti erotettuna vähintään yhdestä substraatistaan, nimittäin D-glukoosista, vedestä tai hapesta, niin että H202:n tuotanto on suurin piirtein estynyt varastoinnin aikana. Fysikaalinen erotus voidaan saada aikaan esimerkiksi käyt-5 tämällä sopivaa formulointimenetelmää, varastointiolosuhteita tai pakkausta tavanomaisella tavalla. Ymmärrettäneen kuitenkin, että ennen varastointia väkevöidyt koostumukset voivat sisältää ainakin yhtä substraattia pienenä pitoisuutena, joka riittää edistämään reaktiota alkuvaiheessa 10 mutta on riittämätön pitkittämään aktiivisuutta halutuissa varastointiolosuhteissa. Tämä alkuvaiheen reaktio voi edullisesti saada aikaan tämän keksinnön mukaisten konsentroitujen koostumusten riittävän itsesäilytysvaikutuk-sen. Itsesäilytyksestä on erityistä etua keksinnön mukai-15 sissa vesipohjaisissa konsentraateissa, jotka voivat muuten vaatia tavanomaisten kemiallisten säilytteiden käyttöä mikrobiologisen pilaantumisen välttämiseksi säilytyksen aikana. Tämän keksinnön mukaiset suurin piirtein reagoi-: mattomat konsentroidut koostumukset on tarkoitettu laimen- 20 nettaviksi ja aktivoitaviksi juuri ennen käyttöä sekoittamalla perusteellisesti glukoosioksidaasi ja sen substraatit, niin että saadaan koostumuksia, joilla on halutut mikrobien vastaiset (Muinaisuudet.

Keksinnön mukaiset konsentroidut koostumukset si-25 sältävät mahdollisesti lisäksi sopivia kantaja- ja/tai jatkeaineita. Koostumukset voivat edullisesti sisältää vähintään yhtä puskurointiainetta pH:n alenemisen minimoimiseksi, jota voi muuten tapahtua konsentroidun koostumuksen aktivoinnin jälkeen. Konsentroidut koostumukset voi-30 daan toimittaa pakkauksina, jotka sisältävät yhden tai useampia massaltaan tai tilavuudeltaan panos- tai yksikkö-annostukseen sopivia erillisiä yksiköitä.

Keksinnön mukaiset konsentroidut koostumukset voivat käsittää kaikkien edellä mainittujen välttämättömien 35 komponenttien suurin piirtein vedettömiä seoksia, mahdol- 103751 8 lisesti yhdistettyinä sopiviin vedettömiin kantaja- tai jatkeaineisiin. Tällaiset koostumukset vovat olla esimerkiksi jauheiden, puristettujen tablettien, kapseleiden tai vedettömien liuosten, tahnojen tai suspensioiden muodossa.

5 Koostumukset voidaan säilyttää vedettömissä olosuhteissa, esimerkiksi eksikkaattoreissa, ilmatiiviisti suljetuissa säiliöissä, kuten pusseissa, tai pulloissa, joihin on imetty tyhjiö, ampulleissa tai pumppupakkauksissa. Tällaisten koostumusten aktivoituminen tapahtuu lisättäessä 10 ne sopivaan vesipitoiseen laimennusaineeseen.

Konsentroidut vesipitoiset koostumukset, mahdollisesti yhdistettyinä sopiviin kantaja- tai jatkeaineisiin, voidaan pakata ja pitää ennen käyttöä suurin piirtein anaerobisissa olosuhteissa. Ne voivat olla esimerkiksi 15 liuosten, suspensioiden, tahnojen tai geelien muodossa. Tällaista koostumusten aktivoituminen tapahtuu päästettäessä pakkaukseen ilmaa ennen laimennusta ja käyttöä.

Koostumukset voidaan vaihtoehtoisesti toimittaa i kahden tai useamman fysikaalisesti erotetun faasin muodos- 20 sa, jolloin glukoosioksidaasia estetään pääsemästä kosketukseen D-glukoosin kanssa, ennen kuin juuri ennen käyttöä. Tämän keksinnön mukaiset koostumukset voivat olla esimerkiksi kahden tai useamman jauheen, nesteen, tahnan tai geelin muodossa, jolloin glukoosioksidaasi ja D-glu-25 koosi pidetään erillisissä faaseissa, kunnes nämä kaksi ainetta saatetaan fysikaalisesti yhteen ennen käyttöä. Muihin esimerkkeihin kuuluvat kaksikerroksiset tabletit, jotka liuotetaan ennen käyttöä, ja suspensiot, joissa glukoosioksidaasi tai D-glukoosi on kapseloituna, kunnes se 30 vapautetaan esimerkiksi sekoittamalla voimakkaasti tai lisäämällä komponenttia, joka rikkoo kapselit.

Tämän keksinnön mukaisilla mikrobien vastaisilla koostumuksilla on käyttöä erityisesti säilytteinä, jotka estävät monien erilaisten tuotteiden, kuten esimerkiksi 35 kosmeettisten, toaletti- ja farmaseuttisten formuloiden, 9 103751 kotitalous- ja teollisuustuotteiden, kuten esimerkiksi pesuaineiden, ja elintarvikkeiden, kuten esimerkiksi maidon ja maitotuotteiden ja eläinten ruokien, mikrobiologisen pilaantumisen.

5 Keksinnön mukaisia koostumuksia sisällytetään edul lisesti säilytteinä muuten tavanomaisiin formuloihin, jotka soveltuvat esimerkiksi paikallisesti käytettäviksi tai farmaseuttiseen käyttöön. Yksittäisiä komponentteja voidaan lisätä eri aikoina tällaisten tuotteiden formuloinnin 10 aikana tai ne voidaan lisätä yhdessä, edullisesti keksinnön mukaisen konsentroidun koostumuksen muodossa, formu-lointiprosessin aikana tai sen lopussa.

Keksinnön mukainen tyypillinen säilyväksi tehty koostumus sisältää 15 (A) 0,5 - 200 mg/kg jodidianioneja; (B) 2 - 100 mg/kg tiosyanaattianioneja; (C) 0,2 - 100 g/kg D-glukoosia; (D) vaikuttavan määrän glukoosioksidaasia, : jolloin jodidianionien ja tiosyanaattianionien välinen 20 massasuhde on 0,1:1 - 50:1 ja anionien yhteispitoisuus vähintään 5 mg/kg, yhdistettyinä sopivaan kantaja- tai jatkeaineeseen. Tällaisten koostumusten pH on yleensä 3-9, edullisesti 3 - 7 ja edullisemmin 4-7. Koostumukset sisältävät edullisesti (E) 10 - 100 000, edullisemmin , 25 100 - 25 000, edullisimmin 250 - 10 000 ja erityisesti 500 - 700 ky/kg laktoperoksidaasia.

Keksinnön mukaiset säilyviksi tehdyt koostumukset sisältävät 150 - 4 000, edullisesti 200 - 3 000, edullisemmin 300 - 2 500 ky/kg glukoosioksidaasia ja 1,5 - 50, 30 erityisesti 2,5 - 10 g/kg D-glukoosia. Koostumukset, jotka sisältävät lisäksi vähintään yhtä hapettumisenestoainetta, esimerkiksi 1-10 000, edullisesti 50-5 000 mg/kg buty-loitua hydroksitolueenia, α-tokoferolia tai sen estereitä tai askorbiinihappoa tai sen estereitä tai suoloja, voivat 35 kuitenkin sisältää glukoosioksidaasia pienempinä pitoi- 10 103751 suuksina, esimerkiksi 25-4 000, edullisesti 75 - 3 000 ky/kg. Säilyviksi tehdyt koostumukset voivat edullisesti sisältää lisäksi 0,1 - 600 mg/kg laktoferriiniä.

Edullisissa säilyviksi tehdyissä koostumuksissa 5 jodidi- ja tiosyanaattianionien välinen massasuhde 0,2:1 -20:1, edullisemmin 0,5:1 - 15:1, erityisesti 1:1 - 5:1, ja anionien yhteispitoisuus on 5 - 200, edullisesti 10 - 150 mg/kg. Jodidianionipitoisuus on edullisesti 1 - 200, edullisemmin 2 - 150, erityisesti 5-75 mg/kg. Tiosyanaatti-10 anionipitoisuus on edullisesti 1 - 100, edullisemmin 2 -75, erityissti 5-50 mg/kg.

Keksinnön mukaisiin säilyviksi tehtyihin koostumuksiin kuuluvat kosmeettiset tuotteet, kuten esimerkiksi ihovoiteet, lotionit ja pohjavoiteet; toalettituotteet, 15 kuten esimerkiksi puhdistusmaidot, saippuat ja shampoot; ja farmaseuttiset valmisteet, kuten esimerkiksi salvat, voiteet, lotionit, siirapit ja suspensiot. Koostumukset voivat käsittää esimerkiksi vesi- tai öljyliuoksia tai : -dispersioita, öljy vedessä tai vesi öljyssä -emulsioita, 20 tahnoja, geelejä tai kiinteitä aineita. Tällaisissa valmisteissa käyttökelpoiset paikallisesti tai farmaseuttisesti hyväksyttävät kantaja- ja jatkeaineet lienevät ammattimiesten tuntemia.

Säilytekäyttönsä lisäksi tämän keksinnön mukaiset 25 mikrobien vastaiset koostumukset voivat olla aktiivisena komponenttina monissa erilaisissa tuotteissa, jotka vaativat voimakasta bakteerien, homeiden ja/tai hiivojen vastaista aktiivisuutta. Esimerkkeihin tällaisista tuotteista kuuluvat 30 a) deodorantit, esimerkiksi roll-on- tai puikkofor- muloiden muodossa olevat paikalliseen antoon tarkoitetut tuotteet; b) esimerkiksi lotionien muodossa olevat bakteerien vastaiset ihonpuhdistusaineet; 11 103751 c) esimerkiksi lotionien tai voiteiden muodossa olevat aknen hoitoon tarkoitetut valmisteet; d) esimerkiksi shampoiden tai lotionien muodossa olevat hilseen hoitoon tarkoitetut valmisteet; 5 e) hampaidenhoitovalmisteet, esimerkiksi yleiseen suuhygieniaan tarkoitetut suuvedet ja erityisesti sellaiset, joilla on plakin vastaisia ominaisuuksia, ja hampai-denpuhdistustuotteet, kuten hammastahnat, hammasjauheet, purukumit ja pastillit; 10 f) kyllästetyt materiaalit, esimerkiksi haavasi- teet, ommelmateriaalit ja hammaslanka; g) silmille tarkoitetut valmisteet, esimerkiksi silmänhuuhteluaineet ja piilolinssien huuhtomiseen ja/tai sterilointiin tarkoitetut liuokset; ja 15 h) sterilointiaineet, esimerkiksi tuttipulloja ja kirurgisia tai hammaslääkärin instrumentteja varten.

Keksinnön mukaisten mikrobien vastaisten koostumusten käyttö suuhygieniatuotteissa on erityisen edullista.

: Laajakirjöinen mikrobien vastainen vaikutus on olennaisena 20 vaatimuksena tällaisille tuotteille, sillä spesifisyys jonkin määrätyn mikro-organismiryhmän suhteen saattaa mahdollistaa opportunististen mikrobien runsaan esiintymisen. Organoleptisistä ja turvallisuussyistä olisi lisäksi edullista käyttää pieninä pitoisuuksina yhtä tai useampaa . 25 luonnossa esiintyvää ainetta, jos tällä tavalla pystyttäi siin saavuttamaan tyydyttävä teho. Erityisesti moniin tavanomaisissa suuhygieniatuotteissa käytettäviin aktiivisiin aineosiin liittyy epämiellyttävä haju, maku ja/tai suutuntuma, mikä rajoittaa niiden käyttöä.

30 On ajateltavissa joukko suuhygieniavalmisteita, joissa keksinnön mukaisia mikrobien vastaisia koostumuksia on sisällytetty tavanomaisiin hampaidenhoitovalmisteisiin, kuten suuvesiin, kurlausvesiin ja hammaspuhdisteisiin plakkia torjuvaksi aineeksi ja/tai yleiseksi antiseptisek-35 si aineeksi esimerkiksi hammasproteesien puhdistustablet- 103751 12 teihin tai -liuoksiin. Tämän keksinnön mukaiset suuhygie-niakoostumukset voivat haluttaessa sisältää yhtä tai useampaa alalla tavanomaisesti käytettävää aktiivista aineosaa. Niihin kuuluvat esimerkiksi muut plakintorjunta-5 aineet, kuten bromikloropreeni, triklosaani, setyylipyri-diniumkloridi ja klooriheksidiinisuolat; fluoridi-ioniläh-teet, kuten natriumfluoridi, natriummonofluorifosfaatti ja amiinifluoridit; hammaskiventorjunta-aineet, kuten sinkki-suolat, edullisesti sinkkisitraatti, ja vesiliukoiset py-10 rofosfaattisuolat, edullisesti alkalimetallipyrofosfaatit; ja hampaiden herkkyyttä vähentävät aineet, mukaan luettuina kaliumsuolat, kuten kaliumnitraatti ja kaliumkloridi, ja strontiumsuolat, kuten strontiumkloridi ja strontium-asetaatti.

15 Tämän keksinnön mukaiset koostumukset voidaan vaih toehtoisesti toimittaa konsentroidussa muodossa, esimerkiksi jauheena, vedettömänä liuoksena tai poretablettifor-mulana, jotka soveltuvat laimennettaviksi vedellä ennen käyttöä esimerkiksi hammaslääkärin instrumenttien steri- 20 lointiaineena. Keksinnön mukaisten mikrobien vastaisten koostumusten yksi edullinen käyttötarkoitus on hammasharjojen puhdistusaineena, joka on suunniteltu vähentämään hammasharjojen harjasosien mikrobikontaminaatiota liottamalla niitä yön yli esimerkiksi joka 1. -14. käyttöpäi- 25 vänä. Tällä tavalla voidaan saavuttaa olennainen kontaminaation väheneminen ilman merkittävää tahrautumista, värjäytymistä tai muuta hammasharjaan kohdistuvaa haittavaikutusta. Tämän keksinnön mukaisten koostumusten niin kutsutut "aktiivikäyttötarkoitukset" saattavat vaatia olen-30 naisten komponenttien korkeampia pitoisuuksia kuin pelkän . säilytevaikutuksen aikaansaantiin tarvittavat. Komponent tien edulliset pitoisuudet ovat esimerkiksi yleensä 1 -50, erityisesti 2-20, erityisemmin 5-15 kertaa korkeampia kuin edellä mainitut pitoisuudet, joita tarvitaan 35 saamaan aikaan riittävä laajakirjöinen mikrobien vastainen 13 103751 aktiivisuus koostumuksissa, joissa säilyteaktiivisuus on toivottava.

Keksinnön mukainen tyypillinen "aktiivikäyttöön" tarkoitettu koostumus sisältää: 5 (A) 10 - 500, edullisesti 25 - 300 mg/kg jodidiani- oneja; (B) 5 - 200, edullisesti 10 - 150 mg/kg tiosyanaat-tianioneja; (C) 0,2 - 100, edullisesti 2,5 - 50 g/kg D-glukoo- 10 siä; (D) glukoosioksidaasia, edullisesti 150 - 20 000, edullisemmin 500 - 20 000, erityisesti 700 - 12 00 ky/kg glukoosioksidaasia; ja haluttaessa (E) 100 - 100 000, edullisesti 500 - 70 00 ky/kg 15 laktoperoksidaasia, jolloin jodidianionien ja tiosyanaattianionien välinen massasuhde on 0,2:1 - 20:1, edullisesti 0,5:1 -15:1, edullisemmin 1:1 - 5:1, ja anionien yhteispitoisuus .· vähintään 25 mg/kg, edullisesti 25 - 500 mg/kg, yhdistet- 20 tyinä sopivaan kantaja- tai jatkeaineeseen.

Ymmärrettäneen, että keksinnön mukaisia konsentroituja koostumuksia voidaan laimentaa joko aktiivi- tai säi-lytekäyttöä varten. Niinpä konsentroidut koostumukset voivat sisältää komponentteja A, B, C, D ja E seuraavina suh-25 teellisinä määrinä: « (A) 0,0005 - 0,5 g jodidianioneja; (B) 0,002 - 0,2 g tiosyanaattianioneja; (C) 0,2 - 100 g D-glukoosia; (D) 25 - 20 000 ky glukoosioksidaasia; 30 (E) mahdollisesti 10 - 100 000 ky laktoperoksidaa- ‘ siä; ja jodidianonien ja tiosyanaattianionien välinen massa-suhde on 0,1:1 - 50:1 ja anionien yhteispitoisuus vähintään 25 mg/kg.

103751 14

Tiettyjen keksinnön mukaisten koostumusten mikrobien vastainen aktiivisuus on osoitettu käyttämällä seu-raavia, bakteereja, hiivoja ja homeita edustavia testior-ganismeja: 5 (i) Pseudomonas aeruginosa NCIB 8626 (ii) Staphylococcus aureus NCIB 9518 (iii) Escherichia coli NCIB 8545 (iv) Candida albicans ATCC 10231 (v) Aspergillus niger ATCC 16404 10 (i) - (iv) : Kullakin edellä mainituista organis meista (i) - (iv) inokuloitiin 100 ml Tryptone Soya Broth -alustaa (TSB) ja inkuboitiin lämpötilassa 32 °C 24 tuntia pyöröravistimella. 1 ml primaariviljelmää siirrettiin 100 ml uutta TSB-alustaa sisältävään pulloon ja inkuboitiin 15 32 °C:ssa 22 tuntia pyöröravistimella. 0,2 ml tuloksena olevaa organismin (i), (ii) tai (iii) viljelmää tai 10 ml organismin (iv) viljelmää pipetoitiin steriilille 0,45 μττηη kalvolle, joka oli ennalta pesty kahdesti 10 ml :11a Minimal Salts Medium -alustaa (MSM). Kalvo pestiin kahdes-20 ti 10 ml :11a MSM-alustaa, siirrettiin steriiliin pulloon, joka sisälsi 10 ml MSM-alustaa ja lasihelmiä, ja sekoitettiin kieputtamalla 1 minuutti, jolloin saatiin inokulaat-ti, joka sisälsi noin 1,0 * 10B pesäkkeenmuodostusyksikköä (cfu) millilitraa kohden.

25 (v) Organismista (v) tehtiin alaviljelmä Saboraud

Dextrose -agarvinopinnalle 300 ml:n lääkeastiassa ja inkuboitiin lämpötilassa 25 °C 7 vuorokautta. Pipetoitiin 40 ml MSM-alustaa, joka sisälsi 0,05 % polyoksietyleeni-sorbitaanimono-oleaattia (Tween 80), vinopinnalle A. ni-30 ger -itiöiden suspendoimiseksi. Suspensio pipetoitiin ·, 0,45 μπί:n kalvolle ja pestiin kalvo kahdesti 10 ml :11a MSM-alustaa. Kalvo siirettiin steriiliin pulloon, joka sisälsi 3 ml MSM-alustaa ja lasihelmiä, ja sekoitettiin kieputtamalla 1 minuutti, jolloin saatiin inokulaatti, 15 103751 joka sisälsi noin 1,0 - 108 pesäkkeenmuodostusyksikköä (cfu) millilitraa kohden.

Kaikki inokulaatit valmistettiin käyttöpäivänä ja säilytettiin lämpötilassa 4 °C.

5 Kunkin testiorganismin kohdalla inokuloitiin 10 g testattavaa tuotetta 0,1 ml:11a inokulaattia ja sekoitettiin perusteellisesti. Inokuloituja näytteitä inuboitiin lämpötilassa 25 - 30 °C testin ajan. Otettiin 1 ml:n näytteitä sopivin väliajoin ja siirrostettiin ne sopivasti 10 laimennettuina Tryptone Soya Agar -alustalle. Organismeja (i) - (iii) inkuboitiin 3 vuorokautta lämpötilassa 32 °C ja organismeja (iv) ja (v) 5 vuorokautta lämpötilassa 25 °C.

Tehokas bakteerien vastainen aktiivisuus vastasi 15 sellaista solumäärän laskua, että määrä oli tuhannesosa alkuperäisestä 48 tunnin kuluttua ja kaikki solut olivat kuolleet 7 vuorokauden kuluttua ja sitä myöhempinä näyt-teenottoaikoina. Tehokas homeiden ja hiivojen vastainen : aktiivisuus vastasi sellaista solumäärän laskua, että so- 20 lumäärä oli sadasosa alkuperäisestä 14 vuorokauden kuluttua eikä ollut suurempi myöhempinä näytteenottoaikoina. Tässä käytetty ilmaus "riittävä suoja edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan" vastaa koostumusnäytteen tehokasta bakteerien, hiivojen ja homeiden vastaista ak-25 tiivisuutta, kun testit tehdään ja tulokset analysoidaan edellä kuvatulla tavalla. Näytteitä, jotka eivät läpäise tätä testiä, ei pidetä "riittävän säilyvinä".

Määrättyjen keksinnön mukaisten koostumusten bio-staattinen aktiivisuus in vitro on osoitettu käyttämällä 30 sopivia testiorganismeja, kuten esimerkiksi seuraavia: ·, (a) Staphylococcus aureus FDA ja NCIB 9518 (b) Pseudomonas aeruginosa NCIB 11338 (c) Candida albicans PH 239 (d) Trichophyton rubrum WB 2 35 (e) Trichophyton mentagrophytes PHL 515 103751 16 (f) Trichophyton interdigitale PHL 80 (g) Propionibacterium acnes NCTC 737 (h) Pityrosporum ovale (i) Streptococcus mutans NCTC 10449 5 (j) Streptococcus salivarius NCIB 8883

Valmistettiin kustakin organismista tuore viljelmä käyttämällä sopivaa ravintoalustaa ja sopivia viljelyolosuhteita. Sekoitettiin sopiva testiorganismi-inokulaatti (esimerkiksi 0,1 ml yön yli TSB:ssä kasvatettua bakteeri-10 viljelmää) perusteellisesti sopivaan sulatettuun ravinto-agariin (esimerkiksi 30 ml Tryptone Soya Agaria) lämpötilassa 45 °C ja kaadettiin alustat petrimaljoihin.

Kun inokuloidut agarmaljat oli jäähdytetty, leikattiin niihin kaksi rinnakkaista syvennystä kutakin tuotetta 15 varten käyttämällä steriiliä korkkiporaa. Syvennykset täytettiin testattavalla tuotteella ja inkuboitiin sopivassa lämpötilassa sopivan pituinen aika mikrobikasvun mahdollistamiseksi (esimerkiksi lämpötilassa 37 °C 18 - 24 tun-j tia bakteerien ollessa kyseessä; lämpötilassa 25 °C 3 - 5 20 vuorokautta sienten ollessa kyseessä). Mitattiin syvennyksiä ympäröivä estovyöhyke ja verrattiin sitä vyöhykkeeseen, joka saadaan aikaan vertailukelpoisella tuotteella, esimerkiksi samanlaisella formulalla, joka sisältää aineosaa, jolla tiedetään oleva biostaattinen aktiivisuus in 25 vivo, biostaattisen in vitro -aktiivisuuden arvioimiseksi kvalitatiivisesti.

Biostaattinen aktiivisuus on osoitettu in vitro edellä mainittuja organismeja (a) - (j) vastaan. Nämä or ganismit voivat liittyä hilseeseen [erityisesti organismit 30 (h) ja (a-FDA)], plakkiin [erityisesti organismit (i) ja ' (j) ] , ja akneen [erityisesti organismit (g) ja (a-FDA)] .

Aktiivisuus organismia (a) vastaan voi olla myös osoituksena deodoranttiaktiivisuudesta.

Määrättyjen tämän keksinnön mukaisten koostumusten 35 plakin vastainen aktiivisuus on myös osoitettu seuraavas- 17 103751 ti. Ohuita alumiiiniliuskoja käytettiin "keinotekoisen hampaan" pintana, jolle kasvatettiin pieneltä määrältä luovuttajia peräisin olevaa plakkia. Kasvua edistettiin muodostamalla olosuhteet, jotka muistuttavat normaalia 5 suuympäristöä (sylki, ravintoaineet, pH ja lämpötila), kahden vuorokauden ajaksi simuloiden kahden aterian nauttimista ja vähäravintoista nukkumisjaksoa. Alumiinilius-koja (ja plakkia) käsiteltin 1 minuutti keksinnön mukaisen koostumuksen liuoksella, joka sisälsi tislattua vettä ja 10 tuoretta sylkeä, tai vertailunäytteellä, joka sisälsi tislattua vettä ja tuoretta sylkeä (6 erillistä liuskaa kussakin testi- ja vertailuryhmässä). Huuhtelun jälkeen liuskoille jäänyt plakki dispergoitiin ultraäänikäsittelyllä ja käytettiin tuloksena olevien plakkisuspensioiden optis-15 ta tiheyttä aallonpituudella 570 nm (2 rinnakkaislukemaa liuskaa kohden) arvioitaessa plakkikasvuston prosentuaalinen väheneminen vertailuliuskoihin nähden. Tulosten tilastollinen merkitsevyys arvioitiin käyttämällä kahden näyt-: teen t-testiä.

20 Keksintöä valaistaan seuraavin sitä rajoittamatto min esimerkein 1-51. Vertailuesimerkit A - C eivät ole osa tätä keksintöä.

1β 103751

Esimerkki 1 - Ioniton emulsio Määrä/lOOg tuotetta 1) Stearyylipolyoksietyleenialkoholi 5 (myydään kauppanimellä Brij 72) 2,0 g 2) Stearyylipolyoksietyleenialkoholi (myydään kauppanimellä Brij 721) 1,0 g 3) Valkoinen pehmeä parafiini 1,5 g 4) Vaalea nestemäinen parafiini 4,0 g 5) Setyylialkoholi 4,0 g 6) Jogurttijauhe 1,0 g 7) Glukoosioksidaasi (myydään kauppa- 75 ky nimellä Glucox P200) (37,5 μΐ, 2 ky/μΐ) 8) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 15 9) NaSCN 1,7 mg (12 ppm SCN') 10) KI 1,6 mg (12 ppm I") • 11) Laktoperoksidaasi 550 ky 20 (2 mg, 275 ky/mg) 20 ppm 12) Vesi 100 g:ksi

Komponentit 1-5 sulatettiin yhdessä lämpötilassa :' 25 65 - 70 °C. Vesi, D-glukoosi ja jogurttijauhe kuumennet tiin lämpötilaan 65 - 70 “C ja lisättiin sitten öljyfaa-siin käyttämällä voimakkaasti leikkaavaa sekoitinta (Sil-verson) 10 minuuttia. Emulsio jäähdytettiin lämpötilaan 30 eC ja sekoitettiin joukkoon komponentit 7 ja 9-11 30 (liuotettuina ennalta pieneen määrän vettä), jolloin saa-tiin voide.

Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

Vertailuesimerkit A

35 Esimerkin 1 mukaisesta formulasta on vaikea tehdä säilyvä käyttämällä tavanomaisia säilytejärjestelmiä, eikä 19 103751 se komponenttien 7-11 poissa ollessa läpäissyt biologista testausta edustavien bakteerien, hiivojen ja homeiden suhteen.

AI. Jodidi- ja tiosyanaatti-ionien tarve 5 Vertailuformulat, joista jätettiin pois joko jodidi (komponentti 10) tai tiosyanaatti (komponentti 9), olivat suojattuja edustavien bakteerien suhteen mutta vain heikosti suojattuja edustavia hiivoja ja suojaamattomia edustavia homeita vastaan, mikä osoittaa, että sekä jodidi-10 että tiosyanaatti-ioneja tarvitaan laajakirjöisen mikrobien vastaisen aktiivisuuden saavuttamiseksi.

A2. Glukoosioksidaasin ja laktoperoksidaasin tarve Vertailuformulat, joista entsyymikomponentit 7 ja 11 oli jätetty pois, eivät läpäisseet mikrobiologista tes-15 tausta edustavien bakteerien, hiivojen ja homeiden suh teen.

Esimerkki 2 - Ioniton emulsio

Esimerkissä 1 kuvatun formulan komponentit 7, 9, 10 ja 11 korvattiin seuraavilla erilaisilla pitoisuuksilla 20 kutakin: Määrä/lOOg tuotetta

Komponentti 7 (glukoosioksidaasi) 37,5 ky (18,75 μΐ, 2 ky/μΐ) 25 5 ppm

Komponentti 9 (NaSCN) 0,7 mg ( 5 ppm SCN' )

Komponentti 10 (KI) 3,3 mg ( 25 ppm I") 30 Komponentti 11 (laktoperoksidaasi) 137,5 ky [ (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia 35 bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan. Jodidia suurempina 103751 20 pitoisuuksina (50 ja 100 ppm) sisältävät formulat olivat myös riittävästi suojattuja pilaantumista vastaan.

Vertailuesimerkit B

Bl. Viisikomponenttisen järjestelmän tarve 5 Valmistettiin vertailuformuloita, joista jätettiin pois esimerkin 2 mukaisen formulan glukoosioksidaasi (komponentti 7), tiosyanaatti (komponentti 9) ja/tai laktoper-oksidaasi (komponentti 10), ja testattiin mikrobiologisesti aktiivisuus edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita 10 vastaan.

Hyvä aktiivisuus bakteereja mutta vain heikko aktiivisuus hiivoja ja homeita vastaan havaittin, kun tiosyanaatti ja laktoperoksidaasi jätettiin pois. Kaikkien kolmen komponentin lisääminen paransi merkittävästi bak-15 teerien vastaista aktiivisuutta, ja hiivojen ja homeiden vastainen aktiivisuus oli lisäksi erinomainen.

B2. Glukoosioksidaasipitoisuuden alentamisen vaikutukset

Esimerkissä 2 kuvatun formulan komponentti 7 (glu- 20 koosioksidaasi) korvattiin pienemmillä glukoosioksidaasi- pitoisuuksilla, 150 tai 75 ky/kg (2 tai 1 ppm). Nämä formulat olivat riittävästi suojattuja edustavia bakteereja ja hiivoja vastaan, mutta eivät läpäisseet hometestiä.

Vertailuformula, joka sisälsi 150 ky/kg (2 ppm) . 25 glukoosioksidaasia ja 200 ppm CaCl2:a, oli kuitenkin riit tävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

Esimerkit 3 - 17 - Komponenttien pitoisuuksien optimointi ionittomassa emulsiossa 30 Esimerkissä 1 kuvatun formulan komponentit 7, 9, 10 ja 11 korvattiin joko suuremmilla tai pienemmillä pitoisuuksia kutakin 16-elementtisessä yhdistelykokeessa. Kunkin komponentin pitoisuudet olivat seuraavat: 2i 103751

Komponentti 7 - glukoosioksidaasi 37,5 tai 112,5 ky/100 g (GO) (5 tai 15 ppm)

Komponentti 9 - NaSCN 0,7 tai 3,5 mg/100 g (5 tai 25 ppm SCN~) 5 Komponentti 10 - KI 0,7 tai 3,3 mg/100 g (5 tai 25 ppm KI")

Komponentti 11 - laktoperoksi- 137,5 tai 687,5 ky/100 g daasi (LP) (5 tai 25 ppm) 10 Formulat testattiin mikrobiologisesti sen ajan mää rittämiseksi, joka tarvitaan edustavien bakteerien, hiivojen ja homeiden solumäärän 0 saavuttamiseen (tappoaika). Tulokset esitetään taulukossa 1.

Tulosten tilastollinen analysointi osoittaa, että 15 glukoosioksidaasi- ja laktoperoksidaasipitoisuuksien ollessa vakioita tehokkaimmat jodidi- ja tiosyanaattipitoi-suudet ovat seuraavat:

Glukoosioksi- Laktoperoksi- Jodidi Tiosyanaatti 20 daasi (ppm) daasi (ppm) (ppm) (ppm) 15 10 28,5 - 25 12,5 - 20 10 15 21,5 - 25 5 - 10 5 5 23,5 - 25 6,5 - 12,5 ♦ 22 103751

Taulukko 1

Saiaerfckl Ko^Kmonttl (ppa) Tappamisen pKKtepiste (h tai d) 11 9 7 JO P._3._C._ (LP) (sa ^) (OO) (l“) aeruginosa auraus alblcana nlger 5 3 5 5 5 5 2.5 h 1« h NK 18 d * 25 5 5 5 2.5 h 14 h NK 9 d

5 5 25 5 5 38 h 3 d NK NK

6 25 25 5 s 20 h 48 h NK NK

10 7 5 5 15 5 2.5 h 14 h NK 14 d

β 25 5 15 5 2,5 h 14 h 21 d NK

9 5 25 15 5 38 h 4 d 17 d 28 d

10 25 25 15 5 29 h 4 d NK NK

2 5 5 5 25 2.5 h 2.5 h Id 2d 15 11 25 5 5 25 2.5 h 2.5 h 12 h 12 h 12 5 25 5 25 2.5 h 26 h 6 d 2d 13 25 25 5 25 2.5 h 26 h 10 d Id 14 5 5 15 25 2,5 h 5 h 12 h 2d 15 25 5 15 25 2.5 h 2.5 h 12 h 30 h 20 16 5 25 15 25 2.5 h 26 h 21 d 48 h 17 25 25 15 25 2.5 h 14 h 12 h 12 h NK * tappamista el ollut saatu aikaan 28 vuorokauden kuluttua.

Esimerkki 18 - Anioninen emulsio 25 Määrä/lOOg tuotetta 1) Akryylihappokopolymeeri 0,35 g (myydään kauppanimellä Junlon PW110) 2) Tetranatrium-EDTA (myydään 0,1 g 30 kauppanimellä Sequestrene Na4) 3) Glyseriini 2,0 g 4) Glyseraatti-akryylihappolymeerin, propyleeniglykolin, metyyliparabeenin ja propyylipara- beenin seos (myydään kauppanimellä Lubrajel) 2,0 g 35 5) 1,4-butyleeniglykoli 3,0 g 6) Hydrattu taliglyseridisitraatti (myydään kauppanimellä Grindtek CA-P) 2,0 g 7) Vaalea nestemäinen parafiini 6,0 g 8) Valkoinen pehmeä parafiini 2,0 g 40 9) Auringonkukkaöljy 2,0 g 23 103751 10) Setyylialkoholi 1,0 g 11) Rasvahappostearaatti (myydään kauppanimellä Cetlol SN) 2,5 g 12) KOH 0,14 g 5 13) Glukoosioksidaasi 37,5 ky (myydään kauppanimellä (18,75 μΐ, 2 ky/μΐ)

Glucox P200) 5 ppm 14) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 15) NaSCN 0,7 mg 10 (5 ppm SCN') 16) KI 3,3 mg (25 ppm I") 17) Laktoperoksidaasl 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 15 18) Vesi 100 g:ksi Pääosa vedestä (komponentti 18) kuumennettiin lämpötilaan 80 °C, lisättiin komponentti 1 ja dispergoitiin seos yhtenäiseksi käyttämällä voimakkaasti leikkaavaa se-20 koitinta (Silverson) 30 min. Lisättiin komponentit 2-5 ja seos kuumennettiin lämpötilaan 75 eC. Komponentit 6 -11 sekoitettiin yhteen, kuumennettiin lämpötilaan 75 °C ja sekoitettiin vesiseokseen käyttämällä voimakkaasti leikkaavaa sekoitinta 5 minuuttia. Lisättiin komponentti 12, 25 homogenoitiin seos käyttämällä voimakkaasti leikkaavaa sekoitinta vielä 5 minuuttia ja jäähdytettiin se sitten lämpötilaan 30 eC. Lisättiin komponentit 13 - 17 (liuotettuina ennalta pieneen määrään vettä) ja lisättiin seokseen vettä, niin että massaksi tuli 100 g, jolloin saatiin 30 voide.

. Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan kuukauden ajan huoneenlämpötilassa .

Vertailuesimerkit C

35 Valmistettiin vertailuformuloista, joista jätet

tiin pois yksi komponenteista glukoosioksidaasi, KI, NaSCN

24 103751

Ja laktoperoksidaasi Ja testattiin ne edustavien bakteerien, hiivojen Ja homeiden suhteen. Tuloksista voidaan tehdä seuraava yhteenveto: (i) Glukoosioksidaasin jättäminen pois johti hyl-5 käämiseen p. aeruginosa ja C. albicans -testeissä.

(ii) Jodidin jättäminen pois johti hylkäämiseen hiiva- ja hometesteissä.

(iii) Tiosyanaatin jättäminen pois johti hylkäämiseen hometestissä.

10 (iv) Laktoperoksidaasin jättäminen pois ei merkit tävästi heikentänyt suojausaktiivisuutta bakteereja, hiivoja eikä homeita vastaan.

Nämä tulokset osoittavat, että vähintään neljä komponenttia, nimittäin glukoosioksidaasi, glukoosi, jodidi 15 ja tiosyanaatti, ovat välttämättömiä komponentteja laaja-kirjöisen mikrobien vastaisen aktiivisuuden aikaansaamiseksi. Vaikka laktoperoksidaasi on välttämätön komponentti esimerkin 1 mukaisessa jogurttipitoisessa ionittomassa : formulassa, se ei näytä olevan välttämätön esimerkin 18 20 mukaisen anionisen emulsioformulan laajakirjöisen suojauksen kannalta.

Esimerkki 19 - Anioninen emulsio

Valmistettiin esimerkin 18 mukainen formula lisäten 50 mg/100 g tuotetta (500 ppm) butyloitua hydroksitoluee-25 nia öljyfaasiin (komponentit 6 - 11).

Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan 9 kuukauden ajan huoneenlämpötilassa.

Esimerkki 20 - Anioninen emulsio 30 Esimerkissä 18 kuvatun formulan komponentti 15 kor vattiin 1,4 mg:11a NaSCN:a (10 ppm SCN").

Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan 6 kuukauden ajan huoneenlämpötilassa.

i 25 103751

Sen lisäksi, että esimerkin 20 mukaisella formulalla oli hyvä pitkäaikainen mikrobien vastainen aktiivisuus edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan, sille tehtiin myös lyhytaikainen mikrobiologinen testaus monia 5 erilaisia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan seuraavasti :

Bakteerit - näytteenottoajankohdat 2, 4, 24 ja 72 tuntia:

Micrococcus flavus 10 Staphylococcus aureus NCIB 9518

Streptococcus faecalis NCTC 8213 Pseudomonas aeruginosa NCTC 6750 Pseudomonas fluorescens NCIB 9046 Proteus vulgaris NCTC 4635 15 Escherichia coli NCTC 5934

Klebsiella aerogenes NCTC 418 Enterobacter cloacae 146 Salmonella typhimurium NCTC 74 : Serratia marcescens 20 Hiivat ja homeet - näytteenottoajankohdat 0, 3, 7 ja 14 vuorokautta:

Candida albicans ATCC 10231 Saccharomyces cerevisiae NCYC 87 Stachybotrys atra IMI 82021 ,· 25 Myrothecium verrucaria IMI 45541

Aspergillus niger ATCC 16404 Cladosporium herbarium 1030 Penicillium funiculosum IMI 87160 Trichoderma viride 1096 30 Tällä formulalla oli erinomainen aktiivisuus kuta kin edellä mainittua mikrobia vastaan verrattuna vertailu-formulaan, josta oli jätetty pois komponentit 13 - 17.

103751 26

Esimerkki 21 - Ioniton emulsio Määrä/100g tuotetta 1) Behenyylidimetyylibentsyyliammonium- 5 kloridin ja propyleeniglykolin seos (myydään kauppanimellä Behenyl BDQP) 1,0 g 2) Polyoksietyleenistearyylistearaatti (myydään kauppanimellä Arlatone 985) 2,0 g 3) Polyoksietyleenistearyylieetteri 10 (myydään kauppanimellä Brij 76) 1,6 g 4) Glyserolistearaatti (myydään kauppanimellä

Monostearin NSE Edible Bibby) 2,0 g 5) Setyylialkoholi 1,2 g 6) Mineraaliöljy (myydään kauppanimellä 15 Klearol AB&L) 3,0 g 7) PVP-heksadekeenikopolymeeri (myydään kauppanimellä Unimer U151) 0,4 g 8) Dimetikoni (myydään kauppanimellä ! Silicone Fluid Flll/20) 2,0 g 20 9) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 37,5 ky

Glucox P200) (18,75 μΐ, 2 ky/μΐ) 5 ppm 10) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 11) NaSCN 0,7 mg .25 (5 ppm SCN'1) 12) KI 3,3 mg (25 ppm I'1) 13) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 30 5 ppm , 14) Vesi 100 g:ksi

Komponentit 7 ja 14 sekoitettiin ja kuumennettiin lämpötilaan 65 - 70 °C. Komponentit 1-6 ja 8 sekoitet-35 tiin ja kuumennettiin lämpötilaan 65 - 70 °C ja lisättiin 27 103751 sitten vesiseokseen käyttämällä voimakkaasti leikkaavaa sekoitinta (Silverson) 10 minuuttia. Emulsio jäähdytettiin nopeasti lämpötilaan 30 - 35 °C ja lisättiin sitten komponentit 9-13 (liuotettuina ennalta pieneen määrään vet-5 tä) , jolloin saatiin voide.

Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

Esimerkki 22 - Ioniton emulsio

Esimerkissä 21 kuvatun formulan komponentit 11 ja 10 12 korvattiin suuremmilla pitoisuuksilla kutakin niistä seuraavasti:

Komponentti 11 -NaSCN 4,2 mg (30 ppm SCN")

Komponentti 12 - KI 6,6 mg 15 (50 ppm r1) Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan 6 kuukauden ajan huoneenlämpötilassa.

Esimerkki 23 - Shampoo 20 Määrä/100 g tuotetta 1) NaCl 2,5 g 2) Sitruunahappomonohydraatti 50 mg 3) Natriumlauret-2-sulfaatti (23-%:inen liuos, 25 joka sisältää 0,07 % formaldehydiä) 25 g 4) Dietanoliamidiseos (myydään kauppanimellä

Empilan CDE) 1 g 5) Butyloitu hydroksitolueeni 5 mg 6) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 37,5 ky 30 Glucox P200) (18,75 μΐ, 2 ky/μΐ) : 5 ppm 7) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 8) NaSCN 0,7 mg (5 ppm SCN1) 103751 28 9) ΚΙ 3,3 mg (25 ppm I"1) 10) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 5 ppm 11) Vesi 100 g:ksi

Komponentit 1 ja 2 liuotettiin 55 %:iin vedestä (komponentti 11). Komponentti 3 sekoitettiin liuokseen ja 10 seos kuumennettiin lämpötilaan 35 °C. Komponentti 4 lämmitettiin lämpötilaan 35 °C ja komponentti 5 liuotettiin siihen sekoittaen. Komponenttien 4 ja 5 liuos sekoitettiin vesiseokseen, jatkettiin sekoitusta 10 minuuttia ja jäähdytettiin seos sitten nopeasti lämpötilaan 25 - 30 °C. 15 Lisättiin komponentit 6 - 10, säädettiin pH tarvittaessa arvoon 5 - 6 ja säädettiin seoksen massa 100 g:ksi, jolloin saatiin shampoo.

Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia . bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan 12 kuukautta huo- 20 neen lämpötilassa.

Esimerkit 24 ja 25 - Puikkodeodorantit Määrä/100g tuotetta 1) Natriumstearaatti 6,0 g 25 2) Butyleeniglykoli 70,8 g 3) Oleyylialkoholi (myydään kauppanimellä Νονοί) 5,0 g 4) Sorbitoli 8,0 g 5) Tetranatrium-EDTA (myydään kauppanimellä

Sequestrene Na4) 0,05 g 30 6) Glukoosioksidaasi (myydään 375 tai 1 125 ky kauppanimellä Glucox P200) (188 tai 563 μΐ, 2 ky/μΐ) 50 tai 150 ppm 7) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 8) NaSCN 7,0 mg 35 (50 ppm SCN*1) 103751 29 9) ΚΙ 33 mg (250 ppm I'1) 10) Laktoperoksidaasi 1 375 ky (5 mg, 275 ky/mg) 5 50 ppm 11) Vesi 100 g:ksi

Komponentit 2, 3, 4, 5, 7 ja 11 kuumennettiin lämpötilaan 75 °C, lisättiin komponentti 1 ja sekoitettiin 10 seosta voimakkaasti leikkaavalla sekoittimella (Silverson) 10 minuuttia. Lisättiin komponentit 6, 8, 9 ja 10 (liuotettuina ennalta pieneen määrään vettä) suunnilleen lämpötilassa 45 °C, säädettiin seoksen massa halutuksi vedellä ja sekoitettiin hyvin ennen kaatamista deodoranttipuikkoi-15 hin.

Kummallakin formulalla oli alussa hyvä biostaatti-nen aktiivisuus in vitro kahta S. aureus -kantaa vastaan. Esimerkki 26 - Aurinkovoide : Määrä/100g 20 tuotetta 1) Syklometikoni (myydän kauppanimellä

Silicone Fluid 344DC) 6,0 g 2) Silikonikopolyolin ja syklometikonin seos (myydään kauppanimellä Silicone Fluid 3225C) 10,0 g 25 3) Setyylidimetikoni (myydän kauppanimellä

Abil B9801) 2,0 g 4) Etoksyloitu hydrattu risiiniöljy (myydän kauppanimellä Arlacel 989) 3,0 g 5) Isopropyylipalmitaatti 5,0 g 30 6) Vaalea nestemäinen parafiini 5,0 g 7) Alumiinistearaatilla päällystetty titaanidioksidi (myydän kauppanimellä MT100T) 7,5 g 8) 1,3-butyleeniglykoli 3,0 g 9) NaCl 1,0 g äo 103751 10) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 37,5 ky

Glucox P200) (18,75 μΐ, 2 ky/μΐ) 5 ppm 11) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 5 12) NaSCN 0,7 mg ( 5 ppm SCN'1) 13) KI 3,3 mg (25 ppm I"1) 14) Laktoperoksidaasi 137,5 ky 10 (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm 15) Vesi 100 g:ksi

Komponentti 7 lisättiin komponentteihin 1-6 käyt-15 tämällä voimakkaasti leikkaavaa sekoitinta (Silverson). Komponentit 8, 9 ja 15 lisättiin hitaasti sekoittaen koko ajan ja lisättiin sitten komponentit 10 - 14. Seos homogenoitiin käyttämällä Silverson-sekoitinta 5 minuuttia, jol- : loin saatiin voide.

• « 20 Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan kuukauden ajan huoneenlämpötilassa .

Esimerkki 27 - Hilseshampoo Määrä/lOOg 25 tuotetta 1) Natriumlauret-2-sulfaatti (23-%:inen liuos, joka sisältää 0,07 % formaldehydiä) 55 g 2) Sinkkisulfaatti 0,1 g 3) Dietanoliamidiseos (myydään kauppanimellä 30 Empilan CDE) 5,0 g 4) Steariinihappo (toalettilaatu) 1,0 g 5) Mono- ja distearaattien seos (myydään kauppanimellä Empilan EGMS) 3,0 g 6) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 187,5 ky 35 Glucox P200) (93,75 μΐ, 2 ky/μΐ) 25 ppm 103751 31 7) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 8) NaSCN 3,5 mg (25 ppm SCN'1) 9) KI 16,5 mg 5 (125 ppm I*1) 10) Laktoperoksidaasi 3 437,5 ky (12,5 mg, 275 ky/mg) 125 ppm 11) Vesi 100 g:ksi 10

Komponentit 1, 2 ja 11 kuumennettiin yhdessä lämpötilaan 70 °C. Komponentit 3-5 kuumennettiin yhdessä lämpötilaan 70 °C ja lisättiin sitten vesiseokseen ja sekoitettiin 10 minuuttia. Seos jäähdytettiin nopeasti huoneen-15 lämpötilaan ja lisättiin komponentit 6-10, jolloin saatiin shampoo.

Tällä formulalla oli hyvä biostaattinen aktiivisuus in vitro alussa ja kahden kuukauden varastoinnin jälkeen S. aureusta ja kahta Pltyrosporxm ovale -kantaa vastaan. 20 Esimerkki 28 - Hilseshampoo

Esimerkissä 27 kuvatun formulan komponentit 6, 8, 9 ja 10 korvattiin erilaisilla pitoisuuksilla kutakin seuraavasti :

Komponentti 6 (glukoosioksidaasi) 750 ky 25 (375 μΐ, 2 ky/ml) 100 ppm

Komponentti 8 (NaSCN) 16,8 mg (120 ppm SCN’1)

Komponentti 9 (KI) 15,8 mg 30 (120 ppm I'1)

Komponentti 10 (laktoperoksidaasi) 5 500 ky (20 mg, 275 ky/mg) 200 ppm 103751 32 Tällä formulalla oli hyvä biostaattinen aktiivisuus in vitro alussa ja kahden kuukauden varastoinnin jälkeen S. aureusta (FDA) ja kahta Pityrosporum ovale -kantaa vastaan.

5 Esimerkki 29 - Roll-on-deodorantti Määrä/lOOg tuotetta 1) Tetranatrium-EDTA (myydään kauppanimellä

Sequestrene Na4) 0,1 g 10 2) Stearaattiseos (myydään kauppanimellä

Cithrol GMS A/S) 3,0 g 3) Etoksyloitu rasva-alkoholi (myydään kauppanimellä Cromul EM 085) 2,5 g 4) Vaalea nestemäinen parafiini 3,0 g 15 5) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 750 ky

Glucox P200) (375 μΐ, 2 ky/μΐ) 100 ppm 6) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g : 7) NaSCN 16,8 mg 20 (120 ppm SCN'1) 8) KI 15,8 mg (120 ppm I"1) 9) Laktoperoksidaasi 5 500 ky (20 mg, 275 ky/mg) 25 200 ppm 10) Vesi 100 g:ksi

Komponentit 2, 3 ja 4 sekoitettiin ja lisättiin komponentin 1 liuokseen vedessä. Lisättiin komponentit 5 30 ja 9, jolloin saatiin deodoranttilotion.

Tällä formulalla oli alussa hyvä biostaattinen aktiivisuus in vitro kahta S. aureus -kantaa vastaan. Esimerkit 30 ja 31 - Roll-on-deodorantit Esimerkissä 29 kuvatun formulan komponentit 5, 7, 8 35 ja 9 korvattiin erilaisilla pitoisuuksilla kutakin seuraavasti : j 103751 33

Komponentti 5 (glukoosioksidaasi) 375 tai 1 125 ky (188 tai 563 μΐ, 2 ky/ml) 50 tai 150 ppm

Komponentti 7 (NaSCN) 7 mg 5 (50 ppm SCN1)

Komponentti 8 (KI) 33 mg (250 ppm I'1)

Komponentti 9 (laktoperoksidaasi) 1 375 ky (5 mg, 275 ky/mg) 10 50 ppm

Kummallakin formulalla oli alussa hyvä biostaatti-nen aktiivisuus in vitro kahta S. aureus -kantaa vastaan. Esimerkki 32 - Glykolipenslausaine aknen hoitoon 15 Määrä/100 g tuotetta 1) Propyleeniglykoli 50 g 2) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 750 ky : Glucox P200) (375 μΐ, 2 ky/μΐ)

• I

20 100 ppm 3) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 4) NaSCN 16,8 mg (12 0 ppm SCN'1) 5) KI 15,8 mg 25 (120 ppm I'1) 6) Laktoperoksidaasi 5 500 ky (20 mg, 275 ky/mg) 200 ppm 7) Vesi 100 g:ksi 30 • · • Komponentit 1-7 dispergoitiin tasaisesti, jolloin saatiin glykolipenslausaine.

Tällä formulalla oli alussa ja 3 kuukauden varastoinnin jälkeen hyvä biostaattinen aktiivisuus in vitro 35 kahta S. aureus -kantaa ja Prop, acnesia, C. albinasia, 103751 34

Trich. rubrumia, Trich. mentagrophytesiä ja Trich. inter-digitalea vastaan.

Esimerkki 33 - Glykolipenslausaine aknen hoitoon

Esimerkissä 32 kuvatun formulan komponentit 2, 4, 5 5 ja 6 korvattiin erilaisilla pitoisuuksilla kutakin seuraavasti :

Komponentti 2 (glukoosioksidaasi) 1 125 ky (563 μΐ, 2 ky/ml) 150 ppm 10 Komponentti 3 (NaSCN) 7 mg (50 ppm SCN'1)

Komponentti 5 (KI) 33 mg (250 ppm I'1)

Komponentti 6 (laktoperoksidaasi) 1 375 ky 15 (5 mg, 275 ky/mg) 50 ppm Tällä formulalla oli alussa ja 3 kuukauden varastoinnin jälkeen hyvä biostaattinen aktiivisuus in vitro kahta S. aureus -kantaa ja Prop, acnesia, C. albinasia, 20 Trich. rubrumia, Trich. mentagrophytesiä ja Trich. inter-digitalea vastaan.

Esimerkki 34 - Sterilointiliuos - konsentroitu tabletti Määrä/100 glopul- 25 lista tuotetta 1} Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 187,5 ky

Glucox PS) (2,5 mg, 75 ky/mg) 25 ppm 2) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 30 3) NaSCN 7,0 mg : (50 ppm SCN'1) 4) KI 10 mg (75 ppm I'1) 5) Laktoperoksidaasi 687,5 ky 35 (2,5 mg, 275 ky/mg) 103751 35 25 ppm 6) Sitruunahappo 1 072 mg 7) Polyvinyylipyrrolidoni 30 mg 8) Natriumvetykarbonaatti (rakeinen) 1 406 mg 5 Komponentit 2 ja 6 sekoitettiin ja rakeistettiin yhdessä isopropyylialkoholin ja polyvinyylipyrrolidonin (komponentti 7) kanssa. Rakeet kuivattiin, seulottiin ja sekoitettiin komponenttien 1, 3, 4, 5 ja 8 kanssa. Seos puristettiin tabletointikoneessa konsentroiduksi steri-10 lointiainetabletiksi (3 g) . Yksi sterilointiainetabletti liuotettiin veteen (100 ml) juuri ennen käyttöä, jolloin saatiin sterilointiaineliuos.

Esimerkki 35 - Sterilointiliuos - konsentroitu tabletti 15 Määrä/100 g lopul lista tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 187,5 ky

Glucox PS) (2,5 mg, 75 ky/mg) . 25 ppm 20 2) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 3) NaSCN 7,0 mg (50 ppm SCN"1) 4) KI 10 mg (75 ppm I'1) 25 5) Laktoperoksidaasi 687,5 ky (2,5 mg, 275 ky/mg) 25 ppm 6) Viinihappo 1 169 mg 7) Natriumvetykarbonaatti (rakeinen) 1 309 mg 30 8) Polyvinyylipyrrolidoni 30 mg

Komponentit 2 ja 6 sekoitetaan ja rakeistetaan yh dessä isopropyylialkoholin ja polyvinyylipyrrolidonin (komponentti 8) kanssa. Rakeet kuivataan, seulotaan ja 3 5 sekoitetaan komponenttien 1, 3, 4, 5 ja 7 kanssa. Seos 103751 36 puristetaan tabletointikoneessa konsentroiduksi steriloin-tiainetabletiksi (3 g). Yksi sterilointiainetabletti liuotetaan veteen (100 ml) juuri ennen käyttöä, jolloin saadaan sterilointiaineliuos.

5 Esimerkki 36 - Sterilointiliuos - konsentroitu tab letti Määrä/100 g lopullista tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 187,5 ky 10 Glucox PS) (2,5 mg, 75 ky/mg) 25 ppm 2) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 3) NaSCN 7,0 mg

(50 ppm SCN M

15 4) KI 10 mg (75 ppm I'1) 5) Laktoperoksidaasi 687,5 ky (2,5 mg, 275 ky/mg) 2 5 ppm 20 6) Adipiinihappo 1 152 mg 7) Natriumvetykarbonaatti (rakeinen) 1 326 mg

Komponentit 1-7 seulotaan ja sekoitetaan ja seos puristetaan tabletointikoneessa konsentroiduksi steriloin-25 tiainetabletiksi (3 g). Yksi sterilointiainetablett! liuo tetaan veteen (100 ml) juuri ennen käyttöä, jolloin saadaan sterilointiaineliuos.

Esimerkki 37 - Sterilointiliuos - konsentroitu liuos 30 Määrä/100 g lopul- I lista tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 187,5 ky

Glucox PS) (2,5 mg, 75 ky/mg) 2 5 ppm 35 2) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 103751 37 3) NaSCN 7, O mg (50 ppm SCN_1) 4) ΚΙ 10 mg (75 ppm I'1) 5 5) Laktoperoksidaasi 687,5 ky (2,5 mg, 275 ky/mg) 25 ppm 6) Propyleeniglykoli 9 488 mg 10 Komponentit 1-5 liuotetaan perusteellisesti kom ponenttiin 6 sekoittaen, jolloin saadaan 10 g konsentroitua sterilointiaineliuosta. 10 g konsentroitua steriloin-tiaineliuosta annostellaan mitallisesta annostelupullosta tai annostelupumppupakkauksesta tai muovi- tai lasipullos-15 ta laimennettavaksi 90 ml:11a vettä, jolloin saadaan ste-rilointiaineliuos.

Esimerkki 38 - Sterilointiliuos - konsentroitu jauhe . Määrä/100 g lopul- 20 lista tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 187,5 ky

Glucox PS) (2,5 mg, 75 ky/mg) 25 ppm 2) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 25 3) NaSCN 7,0 mg (50 ppm SCN1) 4) KI 10 mg (75 ppm I"1) 5) Laktoperoksidaasi 687,5 ky 30 (2,5 mg,275 ky/mg) i 25 ppm 6) Esigeeliytetty viskoteetiltaan alhainen tärkkelys 1 493 mg 38 1 0 3 7 51

Komponentit 1-6 seulotaan ja sekoitetaan, ja konsentroitu sterilointijauhe on kätevä pakata foliolla vuorattuun pussiin, vesiliukoiseen pussiin tai vesiliukoiseen polymeerikapseliin. Konsentroitu jauhe liuotetaan 100 5 ml:aan vettä juuri ennen käyttöä, jolloin saadaan steri-lointiaineliuos.

Esimerkki 39 - Sterilointiliuos - kahden pakkauksen järjestelmä, esimerkiksi jauhe ja neste Määrä/100 g lopul- 10 lista tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 187,5 ky

Glucox PS ) (2,5 mg, 75 ky/mg) 25 ppm 2) NaSCN 7,0 mg 15 (50 ppm SCN'1) 3) KI 10 mg (75 ppm I'1) 4) Laktoperoksidaasi 687,5 ky (2,5 mg, 275 ky/mg) 20 25 ppm 5) Natriumkloridi 5 000 mg 6) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 7) Propyleeniglykoli 30 g 8) Vesi 64,5 ml 25

Komponentit 1-5 seulotaan ja sekoitetaan, ja jauhe on kätevä pakata foliolla vuorattuun pussiin, vesiliukoiseen pussiin tai vesiliukoiseen polymeerikapseliin. Komponentit 6-8 sekoitetaan yhteen ja jauhe sekoitetaan 30 nesteseokseen juuri ennen käyttöä, jolloin saadaan steri-: lointiaineliuos.

Esimerkki 40 - Plakkia vähentävä liuos Määrä/100 g tuotetta 35 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 75 ky 103751 39

Glucox P200) (37,5 μΐ, 2 ky/μΐ) 10 ppm 2) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 3) NaSCN 1,4 mg 5 (10 ppm SCN"1) 4) KI 6,7 mg (50 ppm I"1) 5) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 10 5 ppm 6) Propyleeniglykoli 100 g:ksi

Komponentit 1-5 liuotettiin komponenttiin 6 juuri ennen käyttöä liuoksen valmistamiseksi, joka sisältää kom-15 ponentteja pitoisuutena, jota voitaisiin käyttää hammastahnan valmistamiseen.

1 ml tätä valmistetta (vastaa suunnilleen tyypillistä hampaiden puhdistamiseen käytettävää hammastahna-annosta) sekoitettiin 9 ml:aan tislattua vettä ja 10 ml:aan 20 sylkeä. Vertailunäytteenä käytettiin seosta, joka sisälsi 10 ml sylkeä ja 10 ml tislattua vettä. Esimerkin 43 mukainen plakintorjuntaliuos sai aikaan tilastollisesti merkitsevän (p < 0,05) vähenemisen (42 %) plakkikasvustossa alu-miiniliuskoilla verrattuna vertailuliuskoihin.

25 Esimerkki 41 - Plakkia vähentävä hammasjauhe Määrä/100 g tuotetta 1) Dikalsiumfosfaattidihydraatti 74,5 g 2) Saostettu kalsiumkarbonaatti 23,0 g 30 3) Natriumlauryylisulfaatti 1,0 g : 4) Natriummonofluorifosfaatti 0,8 g 5) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 75 ky

Glucox PS) (1 mg, 75 ky/mgl) 10 ppm 35 6) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 103751 40 7) NaSCN 1,4 mg (10 ppm SCN'1) 8) KI 6,7 mg (50 ppm I'1) 5 9) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm 10) Maute 1,0 g 11) Natriumsakariini 0,2 g 10

Komponentit 1-11 seulotaan ja sekoitetaan, jolloin saadaan esimerkin 41 mukainen plakkia vähentävä hammas j auhe.

Esimerkki 42 - Ikeniä hoitava hammasjauhe 15 Määrä/100 g tuotetta 1) Dikalsiumfosfaattidihydraatti 71,i g 2) Saostettu kalsiumkarbonaatti 20,0 g 3) Natriumlauryylisulfaatti 1,0 g 20 4) Tetranatriumpyrofosfaatti 2,55 g 5) Tetrakaliumpyrofosfaatti 3,1 g 6) D-glukoosi (monohydraatti) 0,5 g 7) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 25 5 Ppm 8) NaSCN 1,4 mg (10 ppm SCN'1) 9) KI 6,7 mg (50 ppm I'1) 30 10) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 75 : Glucox PS) (1 mg, 75 ky/mg) 10 ppm 11) Maute 1,0 mg 12) Natriumsakariini 0,2 g 103751 41

Komponentit 1 - 12 seulotaan ja sekoitetaan, jolloin saadaan esimerkin 42 mukainen ikeniä hoitava hammas-j auhe.

Esimerkki 43 - Ikeniä hoitava suuvesi - konsentroi-5 tu tablettiformula Määrä/100 g lopullista tuotetta 1) Sitruunahappo 718 mg 2) Rakeinen natriumvetykarbonaatti 943 mg 10 3) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 4) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm 5) NaSCN 1,4 mg 15 (10 ppm SCN'1) 6) KI 6,7 mg (50 ppm I'1) 7) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 75 ky , Glucox PS) (1 mg, 75 ky/mg) 20 10 ppm 8) Sinkkisitraatti 100 mg 9) Maute 200 mg 10) Natriumsakariini 30 mg 25 Komponentit 1-10 seulotaan ja sekoitetaan ja seos puristetaan tabletointikoneessa, jolloin saadaan konsentroituja 0,5 g:n suuvesitabletteja. Yksi tabletti liuotetaan 20 ml:aan vettä juuri ennen käyttöä, jolloin saadaan esimerkin 43 mukainen suuvesi.

30 Esimerkki 44 - Pureskeltava plakkia vähentävä tab letti Määrä/100 g tuotetta 1) Sitruunahappo 0,5 g 35 2) Magnesiumstearaatti 1 g 103751 42 3) D-glukoosi (monohydraatti) 500 mg 4) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm 5 5) NaSCN 1,4 mg (10 ppm SCN'1) 6) κι 6,7 mg (50 ppm I'1) 7) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 75 ky 10 Glucox PS) (1 mg, 75 ky/mg) 10 ppm 8) Maute 2 g 9) Väriaine 0,2 g 10) Sorbitoli (suoraan puristettavissa oleva 15 rakeinen sorbitoli, jota myydään kauppanimellä Sorbit Instant) 100 g:ksi

Komponentit 1-10 seulotaan ja sekoitetaan ja seos ” puristetaan tabletointikoneessa, jolloin saadaan esimerkin 20 44 mukaisia pureskeltavia 1 g:n tabletteja.

Esimerkki 45 - Konsentroitu liuos Määrä/100 g tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 3 750 ky 25 Glucox P200) (1,875 ml, 2 000 ky/ml) 500 ppm 2) D-glukoosi (vedetön) 40 g 3) NaSCN 420 mg (3 000 ppm SCN1) 30 4) KI 660 mg . (5 000 ppm I'1) 5) Laktoperoksidaasi 13 750 ky (50 mg, 275 ky/mg) 500 ppm 35 6) Vesi 100 g-.ksi 103751 43

Komponentit 1-6 sekoitetaan yhteen, jolloin saadaan 100 g konsentroitua liuosta. 10 g konsentroitua liuosta annostellaan mitallisesta annostelupullosta tai annostelupumppupakkauksesta tai muovi- tai lasipullosta ja 5 sekoitetaan perusteellisesti 1 kg:aan säilyväksi tehtävää formulaa.

Esimerkki 46 - Kahdessa pakkauksessa oleva konsen- traatti Määrä/100 g 10 tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 37 500 ky

Glucox P200) (18,75 ml, 2 000 ky/ml) 5 000 ppm 2) D-glukoosi (vedetön) 25 mg 15 3) NaSCN 4,2 g (30 000 ppm SCN'1) 4) KI 6,6 g (50 000 ppm I'1) ; 5) Laktoperoksidaasi 137 500 ky 20 (500 mg,275 ky/mg) 5 000 ppm 6) Vesi 100 g:ksi 7) D-glukoosi (vedetön) 400 g : 25 Komponentit 1-6 sekoitetaan yhteen, jolloin saa daan 100 g konsentroitua liuosta. Komponentti 7 on kätevä pakata vettä läpäisemättömään pussiin. Konsentroitu liuos ja pussin sisältö sekoitetaan perusteellisesti 500 kg.-aan säilyväksi tehtävää formulaa.

3 0 Esimerkki 47 - Kahdessa pakkauksessa oleva konsent- raatti Määrä/100 g tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 3 750 ky 35 Glucox P200) (1,875 ml, 2 000 ky/ml) 103751 44 500 ppm 2) D-glukoosi (vedetön) 25 mg 3) NaSCN 0,42 g (3 000 ppm SCN"1) 5 4) KI 0,66 g (5 000 ppm I'1) 5) Laktoperoksidaasi 13 750 ky (50 mg, 275 ky/mg) 500 ppm 10 6) a-tokoferyyliasetaatti 25 g 7) Vesi 100 g:ksi 8) D-glukoosi (vedetön) 40 g

Komponentit 1-7 sekoitetaan yhteen, jolloin saa-15 daan 100 g konsentroitua liuosta. Komponentti 8 on kätevä pakata vettä läpäisemättömään pussiin. Konsentroitu liuos ja pussin sisältö sekoitetaan perusteellisesti 50 kg:aan säilyväksi tehtävää formulaa.

‘1 Esimerkki 48 - Farmaseuttiseen käyttöön kantajaksi 20 tarkoitettu siirappi Määrä/100 g tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 56 ky

Glucox P200) (28 μΐ, 2 ky/μΐ) 2 5 7,5 ppm 2) D-glukoosi (vedetön) 0,5 g 3) NaSCN 4,2 mg (30 ppm SCN1) 4) KI 6,6 mg 30 (50 ppm I1) : 5) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm 6) Sakkaroosi 66,7 g 35 7) Puhdistettu vesi (BP) 100 g:ksi 103751 45 Pääosa vedestä (komponentti 7) kuumennettiin lämpötilaan 60 °C, lisättiin komponentti 6 ja seosta sekoitettiin, kunnes liukeneminen oli tapahtunut. Komponentit 1 -5 lisättiin jäähdytettyyn seokseen, jota sekoitettiin, ja 5 täytettin 100 g:ksi, jolloin saatiin farmaseuttiseen käyttöön kantajaksi sopiva siirappi.

Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

Esimerkki 49 - Puskuroitu voide kantajaksi far-10 maseuttiseen käyttöön Määrä/100 g tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 56 ky

Glucox P200) (28 μΐ, 2 ky/μΐ) 15 7,5 ppm 2) D-glukoosi (vedetön) 0,5 g 3) NaSCN 4,2 mg (30 ppm SCN'1) *: 4) KI 6,6 mg 20 (50 ppm I"1) 5) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm 6) Emu1goiva vaha BP 9 g : 25 7) Nestemäinen parafiini BP 6 g 8) Valkoinen pehmeä parafiini BP 15 g 9) Natriumfosfaatti (vedetön) 1 g 10) Sitruunahappomonohydraatti BP 0,5 g 11) Puhdistettu vesi BP 100 g:ksi 30 ; Komponentit 6-8 sulatettiin yhdessä. Komponentit 9 ja 10, jotka oli liuotettu pääosaan vedestä, sekoitettiin joukkoon ja seos homogenoitiin voimakkaasti leikkaa-valla sekoittimellä. Komponentit 1-5 sekoitettiin jouk-35 koon ja seoksen massa säädettiin 100 g:ksi, jolloin saa- 103751 46 tiin farmaseuttiseen käyttöön kantajaksi soveltuva puskuroitu voide.

Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

5 Esimerkki 50 - Vesipohjainen voide kantajaksi far maseuttiseen käyttöön Määrä/100 g tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 56 ky 10 Glucox P200) (28 μΐ, 2 ky/μΐ) 7,5 ppm 2) D-glukoosi (vedetön) 0,5 g 3) NaSCN 4,2 mg (30 ppm SCN"1) 15 4) KI 6,6 mg (50 ppm I"1) 5) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm 20 6) Emulgoiva vaha BP 9 g 7) Nestemäinen parafiini BP 6 g 8) Valkoinen pehmeä parafiini BP 15 g 9) Puhdistettu vesi BP 100 g:ksi 25 Komponentit 6-8 sulatettiin yhdessä. Pääosa ve destä sekoitettiin joukkoon ja seos homogenoitiin voimakkaasti leikkaavalla sekoittimella. Komponentit 1-5 sekoitettiin joukkoon ja seoksen massa säädettiin 100 g-.ksi, jolloin saatiin farmaseuttiseen käyttöön kantajaksi sovel-30 tuva vesipohjainen voide.

. Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

103751 47

Esimerkki 51 - Silmälotion Määrä/100 g tuotetta 1) Glukoosioksidaasi (myydään kauppanimellä 56 ky 5 Glucox P200) (28 μΐ, 2 ky/μΐ) 7,5 ppm 2) D-glukoosi (vedetön) 0,5 g 3) NaSCN 4,2 mg (3 0 ppm SCN"1) 10 4) KI 6,6 mg (50 ppm I'1) 5) Laktoperoksidaasi 137,5 ky (0,5 mg, 275 ky/mg) 5 ppm 15 6) Hamamelisvesi BP 13,0 g 7) Natriumsitraatti BP 1,0 g 8) Sitruunahappomonohydraatti BP 0,01 g 9) Puhdistettu vesi BP 100 g:ksi · · 20 Komponentit 1-9 sekoitettiin yhteen, jolloin saa tiin silmälotion.

Tämä formula oli riittävästi suojattu edustavia bakteereja, hiivoja ja homeita vastaan.

Claims (20)

103751 48 Pa ten 11ivaatimukset

1. Mikrobien vastaisia koostumuksia, tunne -tut siitä, että ne sisältävät jodidianioneja ja tio- 5 syanaattianioneja massasuhteessa 0,1:1 - 50:1 ja massan mukaan laskettuna yhteispitoisuutena vähintään 5 mg/kg näitä anioneja, vähintään 0,2 g/kg D-glukoosia ja joko a) vähintään 150 ky/kg glukoosioksidaasia; tai b) vähintään 25 ky/kg glukoosioksidaasia ja vähin- 10 tään yhtä hapettumisenestoainetta.

2. Patenttivaatimuksen 1 mukaisia mikrobien vastaisia koostumuksia, tunnetut siitä, että ne sisältävät lisäksi vaikuttavan määrän yhtä tai useampaa perok-sidaasia.

3. Patenttivaatimuksen 2 mukaisia mikrobien vastai sia koostumuksia, tunnetut siitä, että ne sisältävät vähintään 10 ky/kg laktoperoksidaasia.

4. Minkä tahansa edeltävän patenttivaatimuksen mukaisia mikrobien vastaisia koostumuksia, tunnetut 20 siitä, että niiden jodidianionipitoisuus on vähintään 5 mg/kg ja tiosyanaattianionipitoisuus vähintään 2 mg/kg.

5. Minkä tahansa edeltävän patenttivaatimuksen mukaisia mikrobien vastaisia koostumuksia, tunnetut siitä, että niissä jodidianionien ja tiosyanaattianionien 25 välinen massasuhde on 0,1:1 - 20:1.

6. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-5 mukaisia mikrobien vastaisia koostumuksia, tunnetut siitä, että ne sisältävät vähintään yhtä hapettumisenestoainetta .

7. Patenttivaatimuksen 6 mukaisia mikrobien vastai- : siä koostumuksia, tunnetut siitä, että hapettumi- senestoaine valitaan butyloidun hydroksianisolin, buty-loidun hydroksitolueenin, α-tokoferolin ja sen estereiden ja askorbiinihapon ja sen suolojen ja estereiden joukosta. 35

8. Säilyväksi tehty koostumus, tunnettu siitä, että se sisältää 103751 49 (A) 0,5 - 200 mg/kg jodidianioneja; (B) 2 - 100 mg/kg tiosyanaattianioneja; (C) 0,2 - 100 g/kg D-glukoosia; (D) joko a) 150 - 4 000 ky/kg glukoosioksidaasia 5 tai b) 25-4 000 ky/kg glukoosioksidaasia ja vähintään yhtä hapettumisenestoainetta, jolloin jodidianionien ja tiosyanaattianionien välinen massasuhde on 0,1:1 - 50:1 ja anionien yhteispitoisuus vähintään 5 mg/kg, yhdistettyinä sopivaan kantaja- tai 10 jatkeaineeseen.

9. Patenttivaatimuksen 8 mukainen säilyväksi tehty koostumus, tunnettu siitä, että se sisältää lisäksi (E) 10 - 100 000 ky/kg laktoperoksidaasia.

10. Patenttivaatimuksen 8 tai 9 mukainen säilyväksi tehty koostumus, tunnettu siitä, että siinä jodi-dianionien ja tiosyanaattianionien välinen massasuhde on 0,1:1 - 20:1.

11· Patenttivaatimuksen 8 mukainen säilyväksi tehty 20 koostumus, tunnettu siitä, että anionien yhteis pitoisuus on 5 - 200 mg/ kg.

12. "Aktiivikäyttöön" tarkoitettu mikrobien vastainen koostumus, tunnettu siitä, että se sisältää (A) 10 - 500 mg/kg jodidianioneja; : 25 (B) 5 - 200 mg/kg tiosyanaattianioneja; (C) 0,2 - 100 g/kg D-glukoosia; (D) 150 - 20 000 y/kg glukoosioksidaasia; jolloin jodidianionien ja tiosyanaattianionien välinen massasuhde on 0,2:1-20:1 ja anionien yhteispitoisuus 30 vähintään 25 mg/kg, yhdistettyinä sopivaan kantaja- tai . jatkeaineeseen.

13. Patenttivaatimuksen 12 mukainen mikrobien vastainen koostumus, tunnettu siitä, että se sisältää lisäksi 10 - 100 000 ky/kg laktoperoksidaasia.

14. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-7 mukaisia mikrobien vastaisia koostumuksia, tunnetut 103751 50 siitä, että ne ovat konsentroidussa ja suurin piirtein reagoimattomassa muodossa.

15. Konsentroituja mikrobien vastaisia koostumuksia, jotka on tarkoitettu laimennettaviksi, niin että saa- 5 daan minkä tahansa patenttivaatimuksista 1-13 mukainen koostumus, tunnetut siitä, että ne sisältävät komponentteja A, B, C, D ja E seuraavina suhteellisina määrinä: (A) 0,0005 - 0,5 g jodidianioneja; 10 (B) 0,002 - 0,2 g tiosyanaattianioneja; (C) 0,2 - 100 g D-glukoosia; (D) 25 - 20 000 ky glykoosioksidaasia; (E) mahdollisesti 10 - 100 000 ky laktoperoksidaa- sia; 15 jolloin jodidianionien ja tiosyanaattianionien välinen massasuhde on 0,1:1 - 50:1 ja anionien yhteispitoisuus vähintään 25 mg/kg, ja joka on suurin piirtein reagoimattomassa muodossa.

16. Patenttivaatimuksen 14 tai 15 mukaisia konsen- 20 troituja koostumuksia, jotka ovat yksikkömuodossa.

17. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 1 - 7 ja 14 - 16 mukaisen mikrobien vastaisen koostumuksen käyttö säilytteenä.

18. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 14 - 16 mu- : : 25 kaisen konsentroidun koostumuksen käyttö minkä tahansa patenttivaatimuksista 8-11 mukaisen säilyväksi tehdyn koostumuksen valmistukseen.

19. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 14 - 16 mukaisen konsentroidun koostumuksen käyttö mikrobien vas- 30 täisenä aktiivisena aineosana.

20. Minkä tahansa patenttivaatimuksista 14 - 16 mukaisen konsentroidun koostumuksen käyttö minkä tahansa patenttivaatimuksista 12 - 14 mukaisen mikrobien vastaisen koostumuksen valmistukseen. Sl 103751