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ES2986042T3 - Péptido y su uso en la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y del dolor - Google Patents

Péptido y su uso en la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y del dolor Download PDF

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ES2986042T3
ES2986042T3 ES19949541T ES19949541T ES2986042T3 ES 2986042 T3 ES2986042 T3 ES 2986042T3 ES 19949541 T ES19949541 T ES 19949541T ES 19949541 T ES19949541 T ES 19949541T ES 2986042 T3 ES2986042 T3 ES 2986042T3
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Abstract

Se proporciona un péptido y su uso en la preparación de un fármaco para tratar enfermedades inflamatorias y dolor. En particular, se proporciona un péptido y su uso en la preparación de un fármaco para tratar enfermedades inflamatorias, en donde el péptido incluye una secuencia de aminoácidos como se muestra en SEQ ID NO: 1, y el fármaco contiene una dosis efectiva del péptido y un portador farmacéuticamente aceptable. También se proporciona el uso del péptido como fármaco para tratar el dolor, en donde el fármaco contiene una dosis efectiva del péptido y un portador farmacéuticamente aceptable. Se confirma que la administración del péptido puede reducir eficazmente el índice inflamatorio y la administración del péptido puede aliviar eficazmente el dolor. (Traducción automática con Google Translate, sin valor legal)

Description

DESCRIPCIÓN
Péptido y su uso en la preparación de medicamentos para el tratamiento de enfermedades inflamatorias y del dolor
La presente invención se refiere a un péptido que puede utilizarse para tratar una enfermedad inflamatoria y el dolor, y a su uso en la elaboración de un medicamento para tratar una enfermedad inflamatoria.
Las respuestas inflamatorias, que incluyen enrojecimiento, hinchazón, calor y dolor, se refieren a una serie de respuestas fisiológicas del tejido corporal a estímulos tales como lesiones o infecciones patógenas. La respuesta inflamatoria es una de las reacciones de un organismo ante un patógeno exógeno y es una de las respuestas inmunitarias beneficiosas para el organismo. Sin embargo, la inflamación que dura mucho tiempo, es decir, la inflamación crónica, puede causar varias enfermedades inflamatorias, como la polinosis, la periodontitis, la artritis reumatoide, etc. Las citocinas ejercen una influencia reguladora sobre la inflamación. Varias citocinas intervienen en la respuesta inflamatoria. El factor de necrosis tumoral (TNF, por sus siglas en inglés) es una citocina multifuncional que promueve la proliferación de macrófagos o monocitos durante la respuesta inflamatoria y activa la expresión de citocinas en la respuesta inflamatoria posterior; por lo tanto, es una citocina proinflamatoria. Entre todas las citocinas, el factor de necrosis tumoral-a (TNF-a) se utiliza habitualmente como indicador para evaluar la inflamación. Además, la interleucina-6 también actúa como una sustancia proinflamatoria, que atrae muchos monocitos y macrófagos a la zona afectada y provoca respuestas inflamatorias.
La Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (IASP, por sus siglas en inglés) define el dolor como una experiencia sensorial y emocional desagradable asociada a un daño tisular real o potencial. El dolor es la sensación desagradable del sistema nervioso. Los tipos comunes de dolor incluyen: el dolor nociceptivo, el dolor neuropático, el dolor simpático, el dolor psicógeno, etc. Además, el dolor también puede distinguirse por las partes del cuerpo, por el tiempo, como agudo o crónico, por la patogénesis y por las características fisiológicas. Entre todos los dolores, el agudo dura menos tiempo y suele ser la señal de alarma de una lesión tisular. Por lo tanto, este tipo de dolor desaparecerá tras la recuperación del tejido. El dolor crónico dura más tiempo y no suele ser la señal de una lesión tisular, sino la señal de enfermedades. Es probable que los pacientes con dolor crónico tengan trastornos depresivos, sean autistas o irascibles, y que requieran costes sociales elevados. Por lo tanto, el tratamiento del dolor siempre ha sido un problema médico importante.
El documento de patente WO2013/173941 A1 divulga un péptido analgésico. Los documentos de patente WO 2020/024988 A1 y WO 2016/165101 A1 divulgan péptidos pequeños con efecto médico. Zheng et al.(Journal of Pharmacological Sciences,136(4), 242-248) enseñan que la neurotropina (NTP) es un agente bioactivo no proteico extraído de la piel inflamada de conejos inoculados con el virus vaccinia, que se utiliza ampliamente para el tratamiento del dolor crónico. Saito y Sinohara(The Journal of Biochemistry,109(1), 158-162) enseñan la secuencia de aminoácidos de la a-1-antiproteinasa F de conejo. Además, Beck et al.(The Journal of Peptide Research,57(6), 528-538) y Dick et al.(Biotechnology and Bioengineering,97(3), 544-553) enseñan algunos ejemplos de péptidos compuestos de Glp.
Teniendo en cuenta que existe una necesidad urgente de desarrollar nuevos analgésicos antiinflamatorios, la presente invención proporciona un péptido que puede utilizarse para tratar una enfermedad inflamatoria y el dolor. Además, la presente invención proporciona el uso del péptido para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, en el que el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, y el medicamento comprende una cantidad eficaz del péptido y un portador aceptable desde el punto de vista farmacológico. Además, el péptido puede utilizarse para tratar el dolor. Por lo tanto, la presente invención también proporciona el uso de un péptido para la elaboración de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad inflamatoria, en el que el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1, y el medicamento comprende una cantidad eficaz del péptido y un portador aceptable desde el punto de vista farmacéutico.
La presente invención proporciona además un péptido para tratar una enfermedad inflamatoria, en el que el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ iD NO: 1.
La presente invención proporciona además un péptido para tratar el dolor, en el que el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de Se Q iD NO: 1.
La presente invención proporciona además un método para tratar una enfermedad inflamatoria, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido, en el que el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.
La presente invención proporciona además un método para tratar el dolor, que comprende administrar a un sujeto que lo necesite una cantidad terapéuticamente eficaz de un péptido, en el que el péptido consiste en la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1.
Preferiblemente, el péptido está constituido por la secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO: 1. Preferiblemente, de conformidad con la presente invención, el "portador aceptable desde el punto de vista farmacológico" incluye los siguientes, aunque no se limita a ellos: disolventes, emulgentes, agentes de suspensión, desintegrantes, agentes aglutinantes, excipientes, agentes estabilizantes, diluyentes, agentes gelificantes, conservantes, lubricantes, tensoactivos y otros portadores similares o los portadores que sean adecuados para la presente invención.
Preferiblemente, la enfermedad inflamatoria mencionada anteriormente incluye espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis reumática, artritis reumatoide, artritis traumática, artritis piógena, artritis gotosa, artritis tuberculosa, artropatía neuropática y artritis hemofílica.
Preferiblemente, el dolor mencionado anteriormente incluye dolor neuropático, dolor inflamatorio, dolor musculoesquelético, dolor postoperatorio, dolor oncológico, dolor agudo y dolor crónico.
Preferiblemente, el dolor inflamatorio mencionado anteriormente incluye dolor de espondilitis anquilosante, dolor de osteoartritis, dolor de artritis reumática, dolor de artritis reumatoide, dolor de artritis traumática, dolor de artritis piógena, dolor de artritis gotosa, dolor de artritis tuberculosa, dolor de artropatía neuropática y dolor de artritis hemofílica.
El medicamento mencionado puede ser una forma de dosificación enteral o parenteral. La forma de dosificación enteral incluye los siguientes, aunque no se limita a ellos: comprimidos con recubrimiento entérico, comprimidos multicapa, comprimidos recubiertos de azúcar, comprimidos sublinguales, comprimidos masticables, trociscos, cápsulas, sustancias pulverulentas, jarabes, soluciones, emulsiones, suspensiones, mucílagos, magmas, extractos fluidos, extractos, soluciones alcohólicas, elixires y tinturas, etc., en forma de dosificación oral y en enema. La forma de dosificación parenteral incluye los siguientes, aunque no se limita a ellos: forma de dosificación para inyección, ungüentos, lociones, linimentos y aerosoles.
Preferiblemente, la cantidad eficaz oscila entre 0,0008 |ig/kg y 815 |ig/kg.
Preferiblemente, el péptido de la presente solicitud se administra con una frecuencia de una vez al mes a una vez al día. Más preferiblemente, el péptido de la presente solicitud se administra con una frecuencia de dos veces al mes a dos veces a la semana. Más preferiblemente, el péptido de la presente solicitud se administra con una frecuencia de una vez a la semana.
Más preferiblemente, el péptido de la presente solicitud se administra con la cantidad eficaz mencionada anteriormente una vez a la semana.
De conformidad con la presente invención, la cantidad eficaz se calcula basándose en la concentración del péptido SEQ ID NO: 1 que oscila entre 0,01 |ig/kg y 10 mg/kg en las realizaciones de la presente descripción y de conformidad con el documento de orientación "Estimating the Maximum Safe Starting Dose in Initial Clinical Trials for Therapeutics in Adult Healthy Volunteers" publicado por la Administración de Alimentos y Medicamentos de los Estados Unidos (FDA, por sus siglas en inglés). Para una persona adulta con un peso corporal (PC) de 60 kg, la dosis se puede convertir según los siguientes criterios: 12,3 x dosis humana recomendada por kg de peso corporal por día = 1 x dosis de ratón.
Más preferiblemente, la cantidad eficaz oscila entre 0,008 |ig/kg y 410 |ig/kg.
Más preferiblemente, la cantidad eficaz oscila entre 0,008 |ig/kg y 0,25 |ig/kg.
Más preferiblemente, la cantidad eficaz oscila entre 0,025 |ig/kg y 0,25 |ig/kg.
Más preferiblemente, la cantidad eficaz oscila entre 80 |ig/kg y 410 |ig/kg.
Más preferiblemente, la cantidad eficaz oscila entre 80 |ig/kg y 250 |ig/kg.
Preferiblemente, la forma de dosificación enteral es una forma de dosificación oral.
Preferiblemente, la forma de dosificación parenteral es una forma de dosificación inyectable.
De conformidad con la presente invención, "tratar" se refiere a administrar el péptido de la presente invención a un paciente con el fin de conseguir el efecto del tratamiento, donde el efecto del tratamiento se refiere a curar, mitigar, mejorar o aliviar una enfermedad o los síntomas relacionados a ella. De conformidad con la presente invención, el tratamiento de una enfermedad inflamatoria hace referencia a la mejora de los síntomas relacionados con la inflamación, que se evalúa por la reducción de los indicadores de inflamación en algunas realizaciones. De conformidad con la presente invención, el tratamiento del dolor hace referencia a la mejora de los síntomas relacionados con el dolor, que se evalúa por el aumento del umbral de percepción del dolor en algunas realizaciones; o por el aumento del umbral de retirada de la pata (PWT, por sus siglas en inglés) en algunas realizaciones.
De conformidad con la presente invención, el término "cantidad eficaz" se refiere a una dosis para la reacción biológica deseada, es decir, una dosis para el efecto de tratamiento deseado.
En los dibujos
La FIG. 1 muestra la concentración sérica de TNF-a en ratones tras la administración de 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 cada semana (grupo experimental) desde la 4a semana hasta la 12a semana en comparación con el grupo de control.
La FIG. 2 muestra la concentración sérica de IL-6 en ratones tras la administración de 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 cada semana (grupo experimental) desde la 4a semana hasta la 12a semana en comparación con el grupo de control.
La FIG. 3 muestra el cambio en el PWT de la pata trasera ipsilateral de los ratones a medida que pasa el tiempo tras la administración de 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 (grupo experimental) en comparación con el grupo de morfina (10 mg/kg).
La FIG. 4 muestra el cambio en el PWT de la pata contralateral de los ratones a medida que pasa el tiempo tras la administración de 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 (grupo experimental) en comparación con el grupo de morfina (10 mg/kg).
La FIG. 5 muestra el PWT de la pata trasera ipsilateral de los ratones tras la administración de 1 mg/kg y de 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 cada semana desde la 4a semana hasta la 12a semana en comparación con el grupo de control.
La FIG. 6 muestra el PWT de la pata trasera contralateral de los ratones tras la administración de 1 mg/mL y de 3 mg/mL del péptido de SEQ ID NO: 1 cada semana desde la 4a semana hasta la 12a semana en comparación con el grupo de control.
La FIG. 7 muestra el PWT de la pata trasera ipsilateral de los ratones tras la administración de 0,3 |ig/kg, de 1 |ig/kg y de 3 |ig/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 respectivamente, en comparación con el grupo de control.
La FIG. 8 muestra el PWT de la pata contralateral de los ratones tras la administración de 0,3 |ig/kg, de 1 |ig/kg, y de 3 |ig/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 respectivamente, en comparación con el grupo de control.
La FIG. 9 muestra la actividad antinociceptiva del péptido de SEQ ID NO: 1 en la prueba de retorcimiento inducida por ácido acético y el efecto máximo posible del péptido de SEQ ID NO: 1 en la prueba de movimiento de la cola.
Los medios técnicos adoptados para lograr la finalidad predeterminada de la presente invención se explican con más detalle en los dibujos adjuntos, en los siguientes ejemplos de preparación y en los ejemplos de la presente invención.
Ejemplode preparación 1
Se aplicaron la estrategia Fmoc estándar y el sintetizador de péptidos por microondas para sintetizar el péptido de Glp-Glu-Thr-Ala-Val-Ser-Ser-His-Glu-Gln-Asp utilizado en la presente invención, en el que el Glp es ácido piroglutámico (ácido carboxílico de pirrolidona) (número CAS: 98-79-3). En general, la resina Wang (0,6 mmol/g de carga) precargada con residuos D-aminoácidos se pesó en un recipiente de reacción y se añadió con DMF fresco (10-15 mL) antes de la síntesis y estaba lista para hincharse. El tiempo de hinchamiento se fijó en 3 minutos (min) en el sintetizador de péptidos por microondas.
Tanto el primer grupo Fmoc como los posteriores se quitaron con 5 mL de piperidina al 20% en DMF, que sirvió como solución para el paso "DEP", mediante un proceso de desprotección estándar (primera etapa: temperatura de 75 °C, potencia de 155 W y tiempo de mantenimiento de la temperatura de 15 segundos; segunda etapa: temperatura de 90 °C, potencia de 30 W y tiempo de mantenimiento de la temperatura de 50 segundos), para liberar el grupo amina N-terminal.
A continuación, se añadió 0,5 M de N,N'-diisopropilcarbodiimida (DIC) en DMF para activar el extremo C-terminal (paso "ACT"), y se utilizó el aminoácido deseado (Fmoc-AA(cadena lateral protegida)-OH) en una cantidad cinco veces superior (con una concentración de 0,2 M en DMF) y 1,0 M de Oxyma en DMF para la reacción de acoplamiento (paso “AA”). Se procesó la reacción de acoplamiento estándar (primera etapa: temperatura de 75 °C, potencia de 170 W y tiempo de mantenimiento de la temperatura de 15 segundos; segunda etapa: temperatura de 90 °C, potencia de 30 W y tiempo de mantenimiento de la temperatura de 230 segundos). Después de realizar el paso “AA” durante unos 4 minutos, la resina Wang se lavó con solución DMF. Se repitieron los pasos de DEP-ACT-AA para construir un péptido desde el extremo C-terminal hasta el extremo N-terminal.
Finalmente, el péptido se separó del soporte sólido tratándolo con un 95% de TFA, un 2,5% de H<2>O y un 2,5% de TIPS en un baño de hielo y dejándolo a temperatura ambiente durante 2 horas. El filtrado se recogió tras la filtración, se añadió éter helado para la precipitación y se centrifugó para eliminar el sobrenadante. A continuación, se añadió el éter para lavar el precipitado. Los pasos anteriores mencionados se repitieron de 3 a 6 veces. Se extrajo el precipitado final y se liofilizó para obtener un producto blanco similar a un flóculo, que es el producto final. La pureza del producto final se determinó mediante cromatografía líquida de alta resolución, y el peso molecular y la secuencia se analizaron mediante LC-MS/MS.
Ejemplode preparación 2
La artritis se indujo en ratones ICR(Institute of Cáncer Research; Instituto de Investigación del Cáncer, en español) (de 8 a 12 semanas, con un peso corporal de 20 a 25 g, de BioLASCO Taiwán) de la siguiente manera: a cada ratón se le inyectó en la articulación del tobillo derecho 1 mg/mL de adyuvante completo de Freund (CFA, por sus siglas en inglés) de forma continua una vez a la semana con una cantidad de 5 |iL. La primera inyección se administró en la semana 0. Tras 4 inyecciones, se indujo en los ratones ICR una inflamación a largo plazo y un tobillo hinchado en la articulación delantera unilateral del tobillo durante al menos 12 semanas, y también se indujo una hiperalgesia mecánica bilateral de forma continua durante al menos 12 semanas, lo que sirvió como modelo clínico de artritis reumatoide que sufre dolor crónico a largo plazo.
Ejemplode preparación 3
Para realizar los experimentos de dolor nociceptivo y dolor crónico generalizado inducido por ácido, los ratones machos C57BL/6JNarl (con un peso corporal de 20 a 25 g) fueron alojados en un ambiente con control de temperatura (24 0,5 °C) y un ciclo de luz-oscuridad de 12 horas (luces encendidas de 08:00-20:00) y se les permitió acceso libre a comida estándar de laboratorio y agua del grifo. Se dejó que los animales se aclimataran durante 20 a 30 minutos antes de las manipulaciones experimentales. Los procedimientos de cuidado y manipulación de los animales se adoptaron de conformidad con las directrices de la Asociación Internacional para el Estudio del Dolor (IASP) para los animales utilizados en la investigación del dolor, y los procedimientos fueron aprobados por el Comité de Ética en la Investigación con Animales.
Experimento 1
A los ratones delEjemplode preparación 2 se les administró por vía oral 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 disuelto en agua estéril en la 4a semana, y luego se les administró de forma continua el péptido una vez a la semana hasta la 12a semana. Estos ratones constituyeron el grupo experimental, que estaba compuesto por 6 ratones. Por otra parte, los ratones a los que se les administró agua constituyeron el grupo de control, también compuesto por 6 ratones. Los ratones del grupo experimental y del grupo de control fueron sacrificados en la 12a semana tras la administración. La recogida de suero se realizó por punción cardíaca. Para determinar y recoger la concentración sérica de TNF-a y de IL-6 de los ratones del grupo experimental y del grupo de control se utilizó el kit Quantikine ELISA de TNF-a en ratones (R&D System, MTA00B), el kit Quantikine ELISA de IL-6 en ratones (R&D System, M600B) y el ensayo inmunoenzimático (ELISA). De los resultados se desprende que la concentración sérica de TNF-a de los ratones del grupo experimental, sometidos a una administración por vía oral prolongada del péptido de SEQ ID NO: 1, había disminuido hasta un nivel fuera del rango detectable, es decir, no detectado (ND) (FIG. 1). Además, la concentración sérica de IL-6 en el grupo experimental disminuyó en comparación con el grupo de control (FIG. 2). Por lo tanto, el péptido de SEQ ID NO: 1 de la presente invención puede en efecto reducir el indicador inflamatorio sistémico, lo que demuestra que el péptido de SEQ ID NO: 1 de la presente invención puede en efecto tratar la enfermedad inflamatoria, especialmente la inflamación sistémica crónica resultante de la artritis reumatoide.
Experimento 2
A los ratones delEjemplode preparación 2 se les administró por vía oral 10 mg/kg de morfina, un analgésico opioide, en la 4a semana, y se utilizaron como grupo control positivo. Por otra parte, los ratones a los que se les administró por vía oral 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 disuelto en agua esterilizada formaron el grupo experimental. Tanto el grupo de control positivo de morfina como el grupo experimental estaban compuestos por 6 ratones. Se determinó el umbral de retirada de la pata (PWT) de los ratones a los 0 min, a los 30 min, a los 60 min, a los 90 min y a los 120 min tras la administración con el filamento de von Frey.
Los resultados del experimento se muestran en la FIG. 3 y en la FIG. 4. Tras la administración con SEQ ID NO: 1, los valores del PWT de la pata trasera ipsilateral y de la pata contralateral de los ratones en ambos grupos mostraron una tendencia creciente similar al grupo de control positivo de morfina. Por lo tanto, esto demuestra que el péptido de SEQ ID NO: 1 de la presente solicitud tiene un efecto antinociceptivo similar al de la morfina, pero se requirió una cantidad menor. Además, se pudo observar que el mejor efecto antinociceptivo se mostró a los 90 min tras la administración tanto en el grupo experimental como en el grupo de morfina. A los 90 minutos, en el grupo de morfina, el valor del PWT de la pata trasera ipsilateral de los ratones aumentó de 0,085+0,015 g a 0,64+0,089 g (tal y como se muestra en la FIG. 3), y el valor del PWT de la pata contralateral de los ratones aumentó de 0,43+0,033 g a 1,96+0,488 g (tal y como se muestra en la FIG. 4), mientras que en el grupo experimental, el valor del PWT de la pata trasera ipsilateral de los ratones aumentó de 0,07 g a 0,9+0,156 g (tal y como se muestra en la FIG. 3) y el valor del PWT de la pata contralateral de los ratones aumentó de 0,5+0,047 g a 1,35+0,193 g (tal y como se muestra en la FIG. 4). Además, el efecto antinociceptivo empezó a disminuir a los 120 min de la administración.
Experimento 3
A los ratones delEjemplode preparación 2 se les administró por vía oral 1 mg/kg o 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1 disuelto en el agua esterilizada en la 4a semana, y luego se les administró de forma continua el péptido una vez a la semana hasta la 12a semana, lo cual se indica con las flechas grises en las FIG. Los cuatro tiempos de inyección de CFA para los ratones delEjemplode preparación 2 se indican con flechas negras en la FIG. 5 y en la FIG. 6. Los dos grupos de dosificación estaban compuestos por 6 ratones. Los ratones a los que se les administró agua por vía oral se utilizaron como grupo de control. El grupo de control también estaba compuesto por 6 ratones. El valor de PWT se midió con el filamento de von Frey a los 90 min después de la administración.
Los resultados experimentales se muestran en la FIG. 5 y en la FIG. 6. Tras la administración por vía oral de 1 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1, el valor del PWT de la pata trasera ipsilateral aumentó de 0,09 g a 0,5 -1 g (tal y como se muestra en la FIG.5), y el valor del PWT de la pata contralateral aumentó de 0,4 g en la 3a semana a 0,6-1,2 g (tal y como se muestra en la FIG.6). Tras la administración por vía oral de 3 mg/kg del péptido de SEQ ID NO: 1, el valor de PWT de la pata trasera ipsilateral aumentó de 0,09 g en la 3a semana a 0,63-1 g (tal y como se muestra en la FIG.5), y el valor del PWT de la pata contralateral aumentó de 0,4 g a 0,87-1,27 g (tal y como se muestra en la FIG. 6). Por lo tanto, los resultados del experimento mostraron que los efectos antinociceptivos de 1 mg/kg y de 3 mg/kg de péptido de SEQ ID NO: 1 fueron similares tras la administración a largo plazo.
Experimento 4
Se proporcionaron 24 ratones delEjemplode preparación 2. A los ratones se les administró 0,3 |ig/kg, 1 |ig/kg o 3 |ig/kg de péptido de SEQ ID NO: 1 respectivamente. Cada grupo de dosificación estaba compuesto por 6 ratones. A los otros 6 ratones se les administró agua por vía oral, los cuales formaron el grupo de control. El valor del PWT se midió a los 90 min después de la administración con el filamento de von Frey.
Los resultados se muestran en la FIG. 7 y en la FIG. 8. Tras la administración por vía oral del 0,3 |ig/kg de péptido de SEQ ID NO: 1, el valor del PWT de la pata trasera ipsilateral de los ratones aumentó de 0,065 g a 1 g, y el valor del PWT de la pata contralateral aumentó de 0,32 g a 1 g. Tras la administración por vía oral de 1 |ig/kg del péptido de SEQ ID NO: 1, el valor del PWT de la pata trasera ipsilateral de los ratones aumentó de 0,065 g a 0,6 g, y el valor del PWT de la pata contralateral aumentó de 0,32 g a 1,4 g. Tras la administración por vía oral de 3 |ig/kg del péptido de SEQ ID NO: 1, el valor del PWT de la pata trasera ipsilateral de los ratones aumentó de 0,065 g a 0,16 g, y el valor del PWT de la pata contralateral aumentó de 0,32 g a 1 g. Los resultados experimentales mostraron que el péptido de SEQ ID NO: 1 en dosis de 0,3 |ig/kg a 3 |ig/kg tiene el efecto antinociceptivo tras su administración por vía oral.
Experimento 5
El ensayo de constricción abdominal inducida por ácido se realizó de acuerdo con H. O. Collier, L. C. Dinneen, C. A. Johnson, C. Schneider y su artículo “The abdominal constriction response and its suppression by analgesic drugs in the mouse” (1968)(British Journal of pharmacology and chemotherapy,32(2), 295-310). En general, los ratones delEjemplode Preparación 3 se colocaron en una pequeña cámara de observación y se les dejó habituarse durante 20 min. Se administró por vía oral a los ratones agua destilada (como grupo de control vehículo) o el péptido de SEQ ID NO: 1 en diferentes concentraciones (0,1 |ig/kg, 0,3 |ig/kg, 1 |ig/kg, 0,01 mg/kg, 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg y 10 mg/kg) 10 min antes de la inyección de ácido acético al 1% (300 |iL) que indujo una respuesta de "retorcimiento" (constricción abdominal) indicativa de dolor visceral. El grupo de control vehículo y los grupos de administración, a los que se les administró el péptido de SEQ ID NO: 1, comprendían de 5 a 12 ratones cada uno. Se contó el número de constricciones abdominales en los 30 minutos posteriores a la inyección del ácido y se calculó el número medio de constricciones de los ratones de cada grupo. El efecto antinociceptivo del retorcimiento inducido por ácido se presentó como actividad antinociceptiva en %:
(el número medio de constricciones de los ratones del grupo de control vehículo - el número medio de constricciones de los ratones del grupo de administración) / (el número medio de constricciones de los ratones del grupo de control vehículo) x 100%.
Experimento 6
La prueba de movimiento de la cola con calor radiante se modificó de acuerdo con F. E. D'Amour, D. L. Smith y su artículo “A method for determining loss of pain sensation” (1941)(The Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics72, 74-79). Los 5 a 12 ratones delEjemplode Preparación 3 se colocaron y aclimataron en los inmovilizadores durante 30 minutos antes de la prueba de movimiento de la cola. Se utilizó un radiómetro infrarrojo de flujo térmico (Ugo Basile, Italia, cat. n° 37300) para calibrar y mantener el aparato. Se aplicó un estímulo a la cola del ratón en un punto situado a 2 cm de la punta, y el tiempo que tardó el ratón en retirar la cola de la fuente de calor se definió como la latencia de movimiento de la cola. Para limitar el riesgo de daño tisular, el tiempo límite se estableció en 30,1 segundos (s). La intensidad del calor se ajustó de modo que las latencias basales se situaran entre 5 y 8 s para la mayoría de los animales. La latencia se registró cada 10 min durante el periodo de tiempo indicado (10-90 min) tras la administración por vía oral con diferentes dosis del péptido de SEQ ID NO: 1 (0,01 |ig/kg, 0,03 |ig/kg, 0,1 |ig/kg, 0,3 |ig/kg, 1 |ig/kg, 0,01 mg/kg, 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg y 10 mg/kg). A continuación, se calculó la latencia media durante 10-90 min. Según L. S. Harris y A. K. Pierson en “Some Narcotic Antagonists in the Benzomorphan Series” (1964)(The Journal of Pharmacology andExperimental Therapeutics143, 141-148), el efecto antinociceptivo en la prueba de movimiento de la cola se presentó en "%MPE"(máximum possible effect;efecto máximo posible, en español) según la fórmula:
%MPE = (latencia postfármaco - latencia prefármaco) / (tiempo límite - latencia prefármaco) x 100%.
Los resultados del Experimento 5 y del Experimento 6 se muestran en la FIG. 9. Las dosis de 1 |ig/kg y de 10 mg/kg del<péptido de SEQ ID NO: 1 mostraron el mejor efecto antinociceptivo en el experimento de retorcimiento inducido por ácido,>mientras que 0,1 |ig/kg, 0,3 |ig/kg, 0,1 mg/kg, 1 mg/kg, 3 mg/kg, y 10 mg/kg mostraron el mejor efecto antinociceptivo en la prueba de movimiento de la cola con calor radiante. Por lo tanto, el péptido de SEQ ID NO: 1 de la presente invención tiene efecto antinociceptivo tanto en alta concentración como en baja concentración.
En consecuencia, el péptido de la presente invención tiene el efecto de tratar una enfermedad inflamatoria, especialmente<la artritis reumatoide, y el efecto de tratar el dolor, especialmente el dolor resultante de la artritis reumatoide.>
Las realizaciones anteriores son solo realizaciones preferidas de la presente invención y no pretenden limitar la presente invención en ningún aspecto. La invención se expone en el juego de reivindicaciones adjunto.

Claims (6)

Reivindicaciones
1. Un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:1 para su uso en el tratamiento de una enfermedad inflamatoria.
2. El péptido para su uso según la reivindicación 1, en el que la enfermedad inflamatoria comprende espondilitis anquilosante, osteoartritis, artritis reumática, artritis reumatoide, artritis traumática, artritis piógena, artritis gotosa, artritis tuberculosa, artropatía neuropática y artritis hemofílica.
3. Un péptido que consiste en una secuencia de aminoácidos de SEQ ID NO:1 para su uso en el tratamiento del dolor.
4. El péptido para su uso según la reivindicación 3, en el que el dolor comprende dolor neuropático, dolor inflamatorio, dolor musculoesquelético, dolor postoperatorio, dolor oncológico, dolor agudo y dolor crónico.
5. El péptido para su uso según la reivindicación 4, en el que el dolor inflamatorio comprende dolor de espondilitis anquilosante, dolor de osteoartritis, dolor de artritis reumática, dolor de artritis reumatoide, dolor de artritis traumática, dolor de artritis piógena, dolor de artritis gotosa, dolor de artritis tuberculosa, dolor de artropatía neuropática y dolor de artritis hemofílica.
6. El péptido según la reivindicación 1 o la reivindicación 3, en el que una cantidad eficaz del péptido oscila entre 0,0008 |ig/kg y 815 |ig/kg.
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