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ES2845143T3 - Composición de trombina estable - Google Patents

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ES2845143T3
ES2845143T3 ES05380229T ES05380229T ES2845143T3 ES 2845143 T3 ES2845143 T3 ES 2845143T3 ES 05380229 T ES05380229 T ES 05380229T ES 05380229 T ES05380229 T ES 05380229T ES 2845143 T3 ES2845143 T3 ES 2845143T3
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Abstract

Procedimiento para la preparación de una composición de trombina que comprende trombina purificada, en la que la trombina purificada tiene una actividad específica igual o mayor a 1500 UI de trombina/mg de proteína y una potencia igual o mayor a 500 UI de trombina/ml, se estabiliza por adición y mezcla con albúmina humana y una sal neutra que es cloruro sódico, en la que la concentración de albúmina humana en la composición de trombina previa a la nanofiltración es de entre 0,05 y 1% (p/v) y la concentración de cloruro sódico en la composición de trombina previa a la nanofiltración es de al menos 0,05 molar y el pH entre 5,0-8,5, subsecuentemente aplicando a la solución una doble nanaofiltración en serie por filtros de tamaño de poro nominal de 15 nm, en la que la composición de trombina es nanofiltrada con buena productividad hasta más de 15 millones de UI de trombina por m2 y una recuperación de trombina de más del 90%, en la que el material nanofiltrado no requiere de posterior tratamiento para ajuste de la composición final, evitando cualquier riesgo de contaminación cruzada.

Description

DESCRIPCIÓN
Composición de trombina estable
La presente invención se refiere a una composición de trombina estable en solución para uso terapéutico, como componente de adhesivos de fibrina u otros usos hemostáticos, que puede ser sometida a doble nanofiltración para retener virus, y que puede ser conservada en estado liofilizado o congelado.
ANTECEDENTES
La trombina es una serín-proteasa, generada en la sangre en circulación por activación de su precursor inactivo, la protrombina. Su papel es fundamental en el proceso de la coagulación, escindiendo la molécula de fibrinógeno en monómeros de fibrina para la formación del coágulo de fibrina, para mantener la hemostasia. Por ello la trombina encuentra aplicaciones terapéuticas como agente hemostático local y como componente de los adhesivos de fibrina (compuestos mayoritariamente por fibrinógeno y trombina como principios activos).
La trombina utilizada tradicionalmente ha sido de origen animal (bovina o equina). Estas preparaciones han sido, en muchos casos, origen de reacciones inmunológicas debidas a la sobrecarga de proteínas heterólogas. En los últimos años se ha procedido a la purificación de trombina humana, a partir de plasma humano, con grados de purificación relevantes; y más recientemente se ha posibilitado la obtención de trombina humana de origen recombinante, a escala industrial, con una actividad idéntica a la de la trombina de origen plasmático [Biochem. (Tokyo) 2004 May;135(5):577-582] o incluso de origen transgénico.
Las soluciones de trombina purificada, cualquiera que sea su origen, plantean problemas de estabilidad tanto en las etapas finales del proceso de producción como en su almacenamiento para comercialización (estabilidad de producto final), pudiéndose dar una pérdida importante de actividad si no se estabiliza adecuadamente.
Por otra parte la trombina, como producto de origen biológico, debe ser sometida a etapas específicas de eliminación de agentes patógenos, asociados al material de partida en el caso de origen plasmático o asociados a los medios de cultivo en productos recombinantes o a los organismos productores en producto transgénico. La tendencia actual es la inclusión de al menos dos etapas complementarias de eliminación de virus.
Entre los métodos de reducción de la carga viral utilizados en los procesos de purificación de proteínas plasmáticas cabe destacar, por su amplia utilización y contrastada eficiencia:
- Tratamientos térmicos. Presentan un potencial reductor de la carga viral efectivo tanto para los virus envueltos como para los no envueltos. Su eficiencia está directamente relacionada con la estabilidad térmica de la proteína y estabilizante adicionado, debiendo evitar además alteraciones en la molécula de proteína que induzcan la formación de neoantigenicidad.
[CPMP /Note for guidance on plasma derived products (CPMP/BWP/269/95rev. 3) January 2001].
- T ratamientos con solventes orgánicos (OSD). Por su gran eficiencia en la inactivación de los virus con cubierta lipídica es un tratamiento de amplia utilización y que puede considerarse de referencia para estos tipos de virus. Por el contrario no tienen efecto sobre los virus sin cubierta lipídica, como los Parvovirus y Virus de la Hepatitis A [Burnouf T. Blood Reviews (2000) 14, 94-110; Martinowitz U. Curr. Opin. Hematol. (1996) 3, 395-402].
- La filtración de soluciones a través de filtros de un tamaño de poro capaz de retener partículas víricas es un método cuya utilización se ha extendido en los últimos años ya que es un procedimiento físico que en principio no presenta capacidad potencial para alterar la estructura de las proteínas y si una eficiente capacidad de eliminación de la carga viral, en función del tamaño de poro empleado. Este tamaño de poro vendrá especialmente condicionado por la dimensión espacial de la molécula de proteína a filtrar (que debe atravesar el filtro). La filtración por filtros de 15 nm puede garantizar una reducción significativa de los virus no envueltos de pequeño tamaño, como el virus de la Hepatitis A y el Parvovirus, comprendidos entre los 20 y 30 nm. La posibilidad de realizar una filtración en serie por dos filtros de 15 nm incrementaría los niveles de reducción de la carga viral y con ello el nivel de seguridad frente a estos virus. Si esta nanofiltración se lleva a cabo en una etapa final, que evite operaciones posteriores de concentración y ajuste de composición de la solución, se anula la posibilidad de una contaminación accidental del producto nanofiltrado.
Se pueden citar además los siguientes documentos:
La patente ES 2108738 (Michalski), que describe un procedimiento de preparación de trombina, establece una formulación que combina el tampón gluconato con 2 g/l de albúmina, 5 g/l de sacarosa y 60 mM de CaCl2 , indicando que la albúmina, la sacarosa y el calcio son esenciales para la estabilización durante la manipulación en solución (estabilidad 24 horas), la congelación y posterior liofilización.
La solicitud PCT WO 99/23111 (Haemacure), que describe un proceso de obtención de fibrinógeno y de trombina como componentes de un adhesivo de fibrina, especifica que es esencial para preservar la actividad de trombina la adición de albúmina inmediatamente después de elución. La concentración de albúmina añadida para la estabilización y formulación es del 2 %.
DESCRIPCIÓN DE LA INVENCIÓN
Los inventores han desarrollado un procedimiento de preparación de una composición de trombina que comprende trombina purificada, en la que la trombina purificada tiene una actividad específica igual o mayor a 1500 UI de trombina/mg de proteína y una potencia igual o mayor a 500 UI de trombina/ml, se estabiliza por adición y mezcla con albúmina humana y una sal neutra que es cloruro sódico, en la que la concentración de albúmina humana en la composición de trombina previa a la nanofiltración es de entre 0,05 y 1 % (p/v) y la concentración de cloruro sódico en la composición de trombina previa a la nanofiltración es de al menos 0,05 molar y el pH entre 5,0-8,5, subsecuentemente aplicando a la solución una doble nanaofiltración en serie por filtros de tamaño de poro nominal de 15 nm, en la que la composición de trombina es nanofiltrada con buena productividad hasta más de 15 millones de UI de trombina por m2 y una recuperación de trombina de más del 90%, en la que el material nanofiltrado no requiere de posterior tratamiento para ajuste de la composición final, evitando cualquier riesgo de contaminación cruzada.
En esta composición de trombina, la albúmina actúa como estabilizante y preserva la actividad de trombina durante la manipulación en líquido, en el proceso de nanofiltración, así como durante la liofilización o congelación. Asimismo, la albúmina tiene efecto como amortiguadora de pH y da compactación a la pastilla liofilizada. En cuanto a la sal neutra, como el cloruro sódico, actúa solubilizando la trombina y mantiene la isotonía de la solución, ya que a baja fuerza iónica la trombina es muy insoluble y precipita.
El efecto amortiguador de pH y también el de compactación y solubilización del liofilizado puede complementarse mediante la adición de un agente solubilizante y/o un amortiguador de pH, como la glicina, el citrato o el acetato sódicos.
Los inventores han determinado que son necesarias concentraciones de albúmina superiores al 0,05%, y la presencia de cloruro sódico. La concentración de cloruro sódico debe ser al menos 0,05 molar, y mejor aún si es aproximadamente isotónica ó 0,15 molar. De esta forma la solución de trombina puede ser doblemente nanofiltrada por filtros de tamaño de poro nominal de 15 nm, con buena productividad (hasta 15 millones de UI de trombina por m2 de área de nanofiltración, o carga superior) y sin observarse pérdidas significativas de actividad (recuperación de trombina > 90%). El material nanofiltrado se esteriliza por membrana de 0,2 pm y se dosifica asépticamente en envase apropiado (viales, botellas, jeringas, etc.) y se congela a < -18oC para su posterior liofilización, o bien su conservación en el propio estado congelado. En este último caso, es posible el ajuste de la fórmula mediante la adición de una solución de cloruro cálcico a la trombina antes de congelar, sin que por ello quede afectada su estabilidad.
Esta solución de trombina se aplica a un sistema de doble nanofiltración de tamaño de poro nominal de 15 nm. El tipo de nanofiltro utilizado se comercializa con la denominación Planova 15N® (de Asahi-Kasei) y se halla en la configuración de cartucho de fibra hueca, de celulosa regenerada, con diferentes áreas de filtración. En las condiciones específicas de formulación es posible llevar a cabo la doble nanofiltración de forma simultánea mediante la conexión en serie de los dos nanofiltros, de forma que el filtrado del primero alimenta al segundo y sin que por ello se alteren las condiciones de nanofiltración recomendadas por el fabricante de dichos nanofiltros, que corresponden a una presión diferencial positiva inferior a 1,0 bar y preferentemente entre 0,2 bar y 1,0 bar, en cada nanofiltro. La capacidad de nanofiltración por filtro puede ser superior a los 30 l/m2, aunque para conseguir una eficiente reducción de los virus más diminutos (parvovirus) se aplica preferentemente no más de 30 litros de solución por m2, y más preferentemente entre 5-30 l/m2.
El líquido nanofiltrado puede dosificarse a la potencia nominal de aproximadamente 500 UI/ml sin manipulación adicional puesto que ya se encuentra ajustado a la fórmula final, sea para su liofilización o posterior congelación.
Para el ajuste de la fórmula final es posible, cuando se requiera, la adición de, por ejemplo, aminoácidos, como la glicina a una concentración entre el 0,01 y 0,1 Molar, de sales de ácidos carboxílicos, como el citrato o el acetato sódicos a una concentración de, por ejemplo, 10 mM y de cloruro cálcico o sales equivalentes (habitualmente entre 20 y 60 mM). La formulación resultante sigue siendo nanofiltrable y estable durante este proceso.
El producto obtenido es estable tanto liofilizado como congelado, durante largo período de tiempo. El liofilizado incluso puede opcionalmente someterse a inactivación vírica por calor a alta temperatura y corto período de exposición, por ejemplo durante 0,5-8 horas entre 90-115oC, y preferentemente 1 -2 horas a aproximadamente 100oC.
En esta composición la trombina se ha ajustado a una potencia nominal igual o superior a 500 UI de trombina por ml de solución y la albúmina humana se ajusta a una concentración superior al 0,05% (p/v) y preferentemente entre el 0,1% y 1% (p/v). La concentración de cloruro sódico debe ser al menos 0,05 molar, y mejor aún si es aproximadamente isotónica ó 0,15 molar.
Esta composición de trombina puede ser filtrada por doble nanofiltro en serie hasta un tamaño de poro nominal igual o inferior a 35 nm y preferentemente 15 nm, pudiendo filtrarse hasta 30 litros de solución por m2 de área de filtración de cada nanofiltro.
Esta composición de trombina, liofilizada, puede ser tratada por calor en seco durante / hora a 8 horas entre 90-115 oC, y preferentemente durante 1 -2 horas a 100 oC.
A continuación se revelan varios ejemplos no limitativos de la invención.
Ejemplo 1:
Una trombina purificada (lote T-1006) con una actividad específica >1500 UI/mg de proteína total, se dializó por membranas de ultrafiltración de 10 kDa frente a unos 5 volúmenes de una solución que contenía NaCl 75 mM, glicina 50 mM y acetato sódico 10 mM a pH 6,5, concentrándose al final a 654 UI de trombina/ml de solución. Posteriormente se estabilizó por adición de albúmina humana (Albúmina Grifols 20%) hasta el 0,25%.
La solución así estabilizada se congeló a <-20oC hasta iniciar las pruebas de nanofiltración. Se estudió el efecto de la prefiltración (clarificación) previa sobre la doble nanofiltración hasta 15 nm de tamaño de poro nominal, empleando nanofiltros de celulosa regenerada cupramonio (Planova 15N®, de Asahi-Kasei). Para ello se descongelaron tres alícuotas de la solución estabilizada en un baño de agua a 20±2 oC de forma que la temperatura del producto al final se hallaba entre 2-8oC, la actividad de trombina entre 591,0 y 614,5 UI/ml, y la proteína total entre 2,54 y 2,80 mg/ml. Se procedió a prefiltrar independientemente las soluciones por 3 tipos de filtro de diferente tamaño de poro: 0,22 pm (PVDF, de Millipore), 0,1 pm (PVDf , de Pall Corp.) y 35 nm (celulosa regenerada-cupramonio, Planova 35N® de Asahi-Kasei); y posteriormente por doble nanofiltro de 15 nm (2 x Planova 15N® de 0,001 m2) de forma simultánea, efectuándose un post-lavado final con el equivalente a un 20-28% del volumen inicial de producto. Se comprobó la viabilidad del proceso y el efecto de la prefiltración en cuanto a la relación de aplicación obtenida (kg/m2), evolución o incremento de la presión transmembrana (TMP) durante la nanofiltración, proteína total, actividad de trombina y su recuperación.
Las condiciones de la prueba y los resultados obtenidos son los siguientes:
Figure imgf000004_0001
Del estudio se deduce que la prefiltración del material formulado, previamente congelado a <-20oC, no tiene ningún efecto diferencial sobre la doble nanofiltración por 15 nm dentro del rango estudiado de 0,22 pm a 35 nm de tamaño de poro, en cuanto a incremento de TMP durante la nanofiltración para una relación de aplicación y caudal de filtrado aproximadamente iguales. Tampoco existen diferencias significativas en cuanto a proteína, actividad y % de recuperación entre las pruebas realizadas. Asimismo, se demuestra la viabilidad de la doble nanofiltración por 15 nm con la fórmula de producto desarrollada conteniendo trombina altamente purificada y albúmina, además de cloruro sódico, glicina y acetato sódico, con valores de relación de aplicación > 30 kg/m2 y recuperaciones superiores al 96%, en todos los casos.
Ejemplo 2:
Se estudió la posibilidad de someter el producto final desecado por liofilización a un tratamiento térmico a muy alta temperatura y corta exposición. Partiendo del mismo lote de producto purificado se procedió a la formulación en dos composiciones distintas: Fórmula A: aprox. 500 UI/ml de trombina de proteína, albúmina al 1%, acetato sódico 10 mM y cloruro sódico 75 mM. Fórmula B: aprox. 500 UI/mL de trombina, manitol al 2%, histidina 10 mM, PEG-3350 a 0,03%, y cloruro sódico 175 mM.
Las composiciones fueron nanofiltradas por 15 nm, y el producto nanofiltrado se liofilizó en viales de 10 ml, efectuándose una desecación final de 24 h a 37oC en condiciones de vacío máximo del equipo (<0,1 mbar) quedando una humedad residual inferior al 1%.
Los viales obtenidos se sometieron a tratamiento térmico a temperaturas de 100 oC, 105 oC, 110 oC y 115 oC, durante períodos de / h, 1 h, 2 h, 4 h y 8 h, determinándose posteriormente la actividad de trombina. Los porcentajes de recuperación de actividad respecto al producto inicial sin someter a tratamiento térmico se muestran a continuación.
Figure imgf000005_0002
Los resultados mostrados en la tabla anterior ponen de relieve el efecto termo-protector de la albúmina y se deduce que es posible calentar hasta aproximadamente un máximo de 4 horas a temperatura de 100-105 oC, 2 horas a 110oC y 1 hora a 115oC, con una recuperación de actividad del 90±5% ó superior.
Ejemplo 3: Con objeto de evaluar la estabilidad del producto liofilizado se realizan las siguientes preparaciones de producto final.
Figure imgf000005_0001
Estas preparaciones se almacenaron a 5 y 30 oC y muestras de ellas se analizaron a diferentes períodos de tiempo, no observándose signos de inestabilidad en los parámetros analizados y obteniendo las siguientes recuperaciones de actividad (%):
Figure imgf000006_0001
Ejemplo 4: Con objeto de evaluar la estabilidad del producto congelado se realizan las siguientes preparaciones de producto final.
Figure imgf000006_0002
Figure imgf000007_0001
Estas preparaciones se almacenaron a -18 oC y muestras de ellas se analizaron a diferentes períodos de tiempo, no observándose signos de inestabilidad en los parámetros analizados y obteniendo las siguientes recuperaciones de actividad (%):
Figure imgf000007_0003
De algunas de estas preparaciones se ha estudiado además la estabilidad en solución a 5 y 25 oC, no observando signos de inestabilidad en los parámetros analizados y obteniendo las siguientes recuperaciones de actividad (%):
Figure imgf000007_0002

Claims (6)

REIVINDICACIONES
1. Procedimiento para la preparación de una composición de trombina que comprende trombina purificada, en la que la trombina purificada tiene una actividad específica igual o mayor a 1500 UI de trombina/mg de proteína y una potencia igual o mayor a 500 UI de trombina/ml, se estabiliza por adición y mezcla con albúmina humana y una sal neutra que es cloruro sódico, en la que la concentración de albúmina humana en la composición de trombina previa a la nanofiltración es de entre 0,05 y 1 % (p/v) y la concentración de cloruro sódico en la composición de trombina previa a la nanofiltración es de al menos 0,05 molar y el pH entre 5,0-8,5, subsecuentemente aplicando a la solución una doble nanaofiltración en serie por filtros de tamaño de poro nominal de 15 nm, en la que la composición de trombina es nanofiltrada con buena productividad hasta más de 15 millones de UI de trombina por m2 y una recuperación de trombina de más del 90%, en la que el material nanofiltrado no requiere de posterior tratamiento para ajuste de la composición final, evitando cualquier riesgo de contaminación cruzada.
2. Procedimiento, según la reivindicación 1, caracterizado porque la albúmina humana tiene una concentración previa a la nanofiltración entre 0,1% y 1% (p/v).
3. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 2, caracterizado por someter la solución a proceso de congelación.
4. Procedimiento, según cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, caracterizado por someter la solución a liofilizado.
5. Procedimiento, según la reivindicación 4, caracterizado porque el producto liofilizado es tratado por calor en seco durante un tiempo comprendido entre 30 minutos y 8 horas a una temperatura comprendida entre 90 oC y 115oC.
6. Procedimiento, según la reivindicación 5, caracterizado porque la composición de trombina liofilizada es tratada por calor seco durante un tiempo de 1 -2 horas a 100oC.
REFERENCIAS CITADAS EN LA DESCRIPCIÓN
Esta lista de referencias citada por el solicitante es únicamente para mayor comodidad del lector. No forman parte del documento de la Patente Europea. Incluso teniendo en cuenta que la compilación de las referencias se ha efectuado con gran cuidado, los errores u omisiones no pueden descartarse; la EPO se exime de toda responsabilidad al respecto.
Documentos de patentes citados en la descripción
• ES 2108738 • WO 9923111 A
Literatura no patente citada en la descripción
• Biochem. (Tokyo), May 2004, vol. 135 (5), 577-582 • BURNOUF T. Blood Reviews, 2000, vol. 14, 94-110 • CPMP /Note for guidance on plasma derived products • MARTINOWITZ U. Curr. Opin. Hematol, 1996, vol. (CPMP/BWP/269/95rev. 3), January 2001 3, 395-402
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Families Citing this family (20)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US20090186395A1 (en) * 2006-06-26 2009-07-23 Israel Nur Virus Removal by Nanofiltration
WO2009109194A2 (en) 2008-02-29 2009-09-11 Ferrosan A/S Device for promotion of hemostasis and/or wound healing
AU2009236960A1 (en) 2008-04-16 2009-10-22 The Chemo-Sero-Therapeutic Research Institute Method of producing thrombin-immobilized bioabsorbable sheet preparation
WO2011151384A1 (en) * 2010-06-01 2011-12-08 Baxter International Inc. Process for making dry and stable hemostatic compositions
WO2011151400A1 (en) 2010-06-01 2011-12-08 Baxter International Inc. Process for making dry and stable hemostatic compositions
CN103037845B (zh) 2010-06-01 2015-11-25 巴克斯特国际公司 用于制备干燥、稳定的止血组合物的方法
RU2657955C2 (ru) 2012-03-06 2018-06-18 Ферросан Медикал Дивайсиз А/С Контейнер под давлением, содержащий гемостатическую пасту
BR112014030962A2 (pt) 2012-06-12 2017-06-27 Ferrosan Medical Devices As métodos para preparação e para reconstituição de uma composição seca adequada para uso em hemostase e cicatrização de feridas, e, kit hemostático
US9149529B2 (en) * 2012-10-24 2015-10-06 Orthovita, Inc. Stable compositions containing thrombin and methods for preparation and use thereof
KR102223275B1 (ko) * 2012-12-03 2021-03-09 옴릭스 바이오파머슈티컬스 리미티드 트롬빈 용액 및 이의 사용 방법
US9212357B2 (en) * 2012-12-03 2015-12-15 Omrix Biopharmaceuticals Ltd. Thrombin solution and methods of use thereof
WO2014202760A2 (en) 2013-06-21 2014-12-24 Ferrosan Medical Devices A/S Vacuum expanded dry composition and syringe for retaining same
BR112016013322B1 (pt) 2013-12-11 2020-07-21 Ferrosan Medical Devices A/S métodos para preparação de uma composição seca e para reconstituir uma composição seca, composição seca, uso de uma composição seca, e, kit
RU2715235C2 (ru) 2014-10-13 2020-02-26 Ферросан Медикал Дивайсиз А/С Сухая композиция для использования при гемостазе и заживлении ран
US10653837B2 (en) 2014-12-24 2020-05-19 Ferrosan Medical Devices A/S Syringe for retaining and mixing first and second substances
CN107249623A (zh) * 2015-03-13 2017-10-13 大利纬众生物科技股份有限公司 稳定凝血酶的方法及其组合物
AU2016290433B2 (en) 2015-07-03 2018-05-24 Ferrosan Medical Devices A/S Syringe for mixing two components and for retaining a vacuum in a storage condition
AU2019266529B2 (en) 2018-05-09 2024-05-23 Ethicon Inc. Method for preparing a haemostatic composition
WO2023115427A1 (en) 2021-12-23 2023-06-29 Guangzhou Bioseal Biotech Co., Ltd. Spray dried thrombin
MX2024008243A (es) 2021-12-30 2024-09-04 Baxter Int Soluciones de fibrinogeno y trombina para un sellador de fibrina y un kit de sellador de fibrina.

Family Cites Families (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS5639782A (en) * 1979-09-04 1981-04-15 Dai Ichi Pure Chem Co Ltd Stabilization of thrombin
US4696812A (en) * 1985-10-28 1987-09-29 Warner-Lambert Company Thrombin preparations
JPS63243032A (ja) * 1987-03-27 1988-10-07 Green Cross Corp:The トロンビンの加熱処理方法
JPH0813750B2 (ja) * 1990-03-01 1996-02-14 持田製薬株式会社 経口用トロンビン製剤
FR2679251B1 (fr) * 1991-07-18 1993-11-12 Nord Assoc Essor Transfusion San Procede de preparation d'un concentre de thrombine humaine destine a un usage therapeutique.
WO1993013208A1 (en) * 1991-12-31 1993-07-08 Zymogenetics, Inc. Methods for producing thrombin
US5506127A (en) 1994-09-21 1996-04-09 Proba; Zbigniew Therapeutic grade thrombin produced by chromatography
GB9503750D0 (en) * 1995-02-24 1995-04-12 Common Services Agency Thrombin preparation
JPH10215875A (ja) * 1997-02-06 1998-08-18 Mitsubishi Chem Corp 蛋白質の精製方法
US5981254A (en) 1997-10-30 1999-11-09 Haemacure Corporation Process for producing thrombin from plasma
JP4399615B2 (ja) * 1999-09-27 2010-01-20 シスメックス株式会社 トロンビンの安定化手段および組成物
DE10022092A1 (de) * 2000-05-08 2001-11-15 Aventis Behring Gmbh Stabilisiertes Protein-Präparat und Verfahren zu seiner Herstellung

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Publication number Publication date
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