ES2732291T3

ES2732291T3 - Péptidos terapéuticos

Info

Publication number: ES2732291T3
Application number: ES14727241T
Authority: ES
Inventors: Steven Thomas Dock; Andrew James Carpenter; Hunter, Iii; Yulin Wu; Ved P Srivastava
Original assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
Current assignee: GlaxoSmithKline Intellectual Property Development Ltd
Priority date: 2013-05-02
Filing date: 2014-04-30
Publication date: 2019-11-21
Anticipated expiration: 2034-04-30
Also published as: RU2015144632A; BR112015027528A2; CA2909045C; EP2992008A1; KR20160003848A; MX2015015249A; CN105263957A; EA201591839A1; JP2016519130A; AR096162A1; PE20151808A1; AU2014261111B2; US9441023B2; CA2909045A1; UY35548A; HK1214829A1; US20160108098A1; EP2992008B1; AU2014261111A1; TW201534616A

Abstract

Un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos: ProLysProGluXaa1 ProGlyXaa 2 AspAlaSerXaa 3 GluGluXaa 4Xaa5 Xaa6TyrTyrAlaXaa7LeuArgXaa8TyrXaa9AsnTrpXaa10ThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:2) o una sal del mismo, en la que: Xaa1 es Ala, His o Ser; Xaa2 es Glu o Lys; Xaa3 es Pro o Ala; Xaa4 es Leu o Trp; Xaa5 es Asn, Ala o Thr; Xaa6 es Arg o Lys; Xaa7 es Ser, Asp o Ala; Xaa8 es Hiso Lys; Xaa9 es Leu o Ile; y Xaa10 es Val o Leu.

Description

DESCRIPCIÓN

Péptidos terapéuticos

Campo de la invención

La presente invención se refiere a péptidos terapéuticos útiles en el tratamiento de la obesidad y trastornos metabólicos. Más específicamente, la presente invención se refiere a nuevos análogos del Péptido YY (pYy ) y su uso. Antecedentes de la invención

La prevalencia de obesidad en los Estados Unidos está aumentando, con el 35,7% de los adultos considerados obesos (IMC > 30) y el 68,8% considerados con sobrepeso (IMC > 25) en 2009-2010. Véase, por ejemplo, Flegal y col. (2012) JAMA 307(5):491-7. En todo el mundo, más de 300 millones de personas se consideran obesas. Las enfermedades relacionadas con la obesidad, incluyendo Diabetes Mellitus tipo 2, hipertensión, cardiopatía, enfermedad articular y algunos tipos de cáncer han aumentado en prevalencia a medida que la población ha crecido más.

La prevención de la obesidad a través de la dieta y el ejercicio es de importancia crítica para controlar estas tendencias, pero una vez que los pacientes se vuelven obesos, la resistencia del cuerpo a perder peso puede ser considerable. La dieta y el ejercicio por sí solos pueden ser insuficientes para provocar un cambio significativo de peso en pacientes con obesidad grave, y tanto la terapia farmacológica como la cirugía han demostrado ser eficaces como ayudas adicionales para la pérdida de peso. La prevención y el tratamiento de la obesidad son áreas de elevada necesidad médica insatisfecha, con pocos medicamentos actualmente disponibles para la terapia de pérdida de peso crónica. El péptido YY (PYY) pertenece a la familia de péptidos plegados en PP junto con el polipéptido pancreático y el neuropéptido Y, que tienen un papel en el control del apetito. Véase, por ejemplo, Schwartz y col. (2002) Nature:418(6898):595-7. PYY se secreta como un polipéptido de cadena lineal de 36 aminoácidos y, a continuación, se escinde por la dipeptidil peptidasa IV para producir PYY (3-36). Se sugiere que el ayuno y las concentraciones postprandiales de PYY en individuos con obesidad mórbida después de la cirugía de derivación gástrica desempeñan un papel en su pérdida de peso dramática. Véase, por ejemplo, le Roux (2006) Ann Surg.243(1):108-14. Se ha demostrado que la infusión periférica de PYY (3-36) aumenta el gasto de energía y las tasas de oxidación de la grasa en sujetos obesos y delgados. Véanse, por ejemplo, Batterham y col. (2003) N Engl J Med. 349(10):941-8, y Sloth y col. (2007) Am J Physiol Endocrinol Metab.: 293(2):E604-9. La administración de una pulverización nasal PYY (3-36) redujo la ingesta calórica diaria de individuos obesos en 2713 kJ, lo que dio como resultado una pérdida de peso de 0,6 kg durante un período de estudio de seis días. Véase, por ejemplo, Gantz y col. (2007) J Clin Endocrinol Metab.

92(5):1754-7. Estos resultados demuestran que los sujetos obesos conservan la sensibilidad a PYY (3-36), en contraste con la leptina, donde la resistencia limita su utilidad terapéutica en la obesidad. El documento WO 2006/066024 desvela determinados polipéptidos que pertenecen a la familia de péptidos plegados en PP y que tienen, por ejemplo, al menos un 50% de identidad de secuencia con PYY (3-36) y también su uso para tratar o prevenir afecciones que incluyen obesidad y diabetes.

Por consiguiente, sigue existiendo la necesidad en la técnica de composiciones de PYY mejoradas para uso en el tratamiento de la obesidad y trastornos relacionados con la obesidad.

Breve sumario de la invención

La presente invención se refiere a nuevos análogos de PYY que tienen un perfil terapéutico mejorado cuando se comparan con PYY humano natural. Estos nuevos análogos de PYY son útiles en el tratamiento de la obesidad, de la diabetes y de otros trastornos.

En resumen, en un aspecto, la presente invención proporciona un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos:

ProLysProGluXaaiProGlyXaa²AspAlaSerXaa³GluGluXaa⁴Xaa⁵Xaa⁶TyrTyrAla Xaa7LeuArgXaa8TyrXaag AsnTrpXaaioThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:2) o una sal del mismo, en la que:

Xaa¹es Ala, His o Ser;

Xaa²es Glu o Lys;

Xaa₃es Pro o Ala;

Xaa₄es Leu o Trp;

Xaa₅es Asn, Ala o Thr;

Xaa₆es Arg o Lys;

Xaa₇es Ser, Asp o Ala;

Xaa₈es Hiso Lys;

Xaa^ges Leu o Ile; y

Xaaio es Val o Leu.

En otro aspecto, la invención proporciona un polipéptido seleccionado entre el grupo que consiste en:

ProLysProGluATaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:3),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:4),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:5),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:6),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:7),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ IDNO:8),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:9),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgLysTyrl_euAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:10),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO: 11),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrl_euAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:12),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:13),

ProLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:14),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AlaLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:15),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:16), ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO: 17),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAlaArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:18),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO: 19),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:20),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:21),

ProLysProGluSerProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:22),

ProLysProGluSerProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:23),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:24),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAlaLysTyrTyrAla

AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:25),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:26),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:27),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpAlaLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:28),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:29),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluLeuAlaArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:30), ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:31),

ProLysProGluSerProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpThrLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:32),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:33),

ProLysProGluHisProGlyGluAspAlaSerProGluGluTrpAlaLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:34),

ProLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerAlaGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:35),

ProLysProGluSerProGlyGluAspAlaSerProGluGluTrpThrLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:36),

y

P roLys P roG lu Al a P noG I y Glu As pAI aSer Pro GI u GI u T rp As n ArgTyrTyrAI a AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGInArgTyr-NHí (SEQ ID NO:37),

En otro aspecto, la invención proporciona una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de la invención En otro aspecto más, la invención incluye un vector de expresión que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de la invención.

En un aspecto adicional, la invención abarca una célula hospedadora que contiene un vector de expresión que comprende una molécula de ácido nucleico que codifica un polipéptido de la invención.

En otro aspecto, la invención proporciona una combinación farmacéutica que comprende un nuevo polipéptido PYY de la invención y exendín-4.

En otro aspecto más, la presente invención proporciona una combinación farmacéutica que comprende un nuevo polipéptido PYY de la presente invención y g Lp -1.

En un aspecto adicional, la presente invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un nuevo polipéptido PYY de la invención y uno o más excipientes farmacéuticamente aceptables.

En un aspecto adicional, la presente invención abarca un nuevo polipéptido PYY o una combinación farmacéutica de la invención para su uso en el tratamiento de un trastorno metabólico seleccionado de: obesidad, diabetes mellitus de Tipo 2, diabetes de tipo 1, diabetes gestacional, hiperglucemia, tolerancia alterada a la glucosa y deficiencia de células beta.

Breve descripción de los dibujos

La Figura 1 muestra los efectos del péptido que se muestra en el Ejemplo 5 (Análogo n.° 5), PYY (3-36)NH2 (PYY3-36) y exendín-4 por separado y en combinación sobre los cambios en el peso corporal en ratas Long Evans (LE) obesas inducidas por la dieta ( DIO).

La Figura 2 muestra los efectos del péptido que se muestra en el Ejemplo 5 (Análogo n.° 5), PYY (3-36)NH2 (PYY3-36) y exendín-4 por separado y en combinación sobre los cambios en la composición corporal en ratas LE DIO. Descripción detallada de la invención

La invención proporciona nuevos análogos de PYY que tienen un perfil terapéutico mejorado cuando se comparan con PYY humano natural. Los nuevos análogos de PYY de la invención muestran efectos mejorados sobre la ingesta de alimentos en comparación con la secuencia de PYY natural.

En un aspecto, los nuevos análogos de PYY consisten en la secuencia de amino ácidos:

ProLysProGluXaaiProGlyXaa²AspAlaSerXaa³GluGluXaa⁴Xaa⁵Xaa⁶TyrTyrAla

XaazLeuArgXaasTyrXaag AsnTrpXaaioThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:2)

o una sal de la misma, en la que:

Xaa¹es Ala, His o Ser;

Xaa2 es Glu o Lys;

Xaa3 es Pro o Ala;

Xaa4 es Leu o Trp;

Xaa⁵es Asn, Ala o Thr;

Xaa6 es Arg o Lys;

Xaa⁷es Ser, Asp o Ala;

Xaa8 es Hiso Lys;

Xaa9 es Leu o Ile; y

Xaa10 es Val o Leu.

Los nuevos polipéptidos de la invención muestran un aumento estadísticamente significativo en la reducción de la ingesta de alimentos en un modelo animal de obesidad magra y/o inducida por la dieta en comparación con PYY humano (3-36). Preferentemente, los polipéptidos de la invención reducen la ingesta de alimentos en un modelo animal de obesidad magra y/o inducida por la dieta en al menos un 20%, al menos un 30% o al menos un 40%. Más preferentemente, los polipéptidos reducen la ingesta de alimentos en un modelo animal de obesidad magra y/o inducida por la dieta en al menos un 50 %.

En otro aspecto, la invención proporciona un polipéptido seleccionado entre el grupo que consiste en: ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArg-Tyr-NH2 (SEQ ID NO:3),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:4),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:5),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

AspLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:6),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:7),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ IDNO:8),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:9),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

AspLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NQ:10), ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:11),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:12),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:13),

ProLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:14),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AlaLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:15),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:16),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGInArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:17),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

AspLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:20),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:21),

ProLysProGluSerProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:23),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:24), ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAlaLysTyrTyrAla

AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:25),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

AspLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:26),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:27),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpAlaLysTyrTyrAla

AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:28),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:29),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluLeuAlaArgTyrTyrAla

SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:30),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:31),

ProLysProGluSerProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpThrLysTyrTyrAla

AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:32),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:33),

ProLysProGluHisProGlyGluAspAlaSerProGluGluTrpAlaLysTyrTyrAla

AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:34),

ProLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerAlaGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:35),

ProLysProGluSerProGlyGluAspAlaSerProGluGluTrpThrLysTyrTyrAla

AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:36),

y

ProLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH²(SEQ ID NO:37).

La invención abarca sales de los polipéptidos citados, que incluyen sales farmacéuticamente aceptables. Ejemplo de tales sales incluyen, pero sin limitación, incluyendo ácidos y bases inorgánicas y orgánicas, incluyendo, pero sin limitación, sulfúrico, cítrico, maleico, acético, oxálico, clorhidrato, bromhidrato, yodhidrato, nitrato, sulfato, bisulfito, fosfato, fosfato ácido, sales de isonicotinato, acetato, lactato, salicilato, citrato, citrato ácido, tartrato, oleato, tannato, pantotenato, bitartrato, ascorbato, succinato, maleato, gentisinato, fumarato, gluconato, glucaronato, sacarato, formiato, benzoato, glutamato, metanosulfonato, etanosulfonato, bencenosulfonato, p-toluenosulfonato y pamoato (es decir, 1,1'-metilen-bis-(2-hidroxi-3-naftoato)). También se incluyen sales formadas con grupos amino libres tales como, por ejemplo, ácidos clorhídrico, fosfórico, acético, trifluoroacético, oxálico y tartárico. También se incluyen sales que pueden formarse con grupos carboxi libres tal como, por ejemplo, sales de sodio, potasio, amonio, sodio, litio, calcio, hidróxidos de hierro, isopropilamina, trietilamina, 2-etilamino etanol, histidina y procaína.

Los polipéptidos de la invención se pueden preparar utilizando técnicas de expresión recombinante convencionales o de síntesis química de péptidos conocidas en la técnica. Véase, por ejemplo, Chan, Weng C., y Peter D. White, eds. Fmoc Solid Phase Peptide Synthesis: A Practical Approach. Nueva York: Oxford UP, 2000 y Howl, John, ed. Peptide Synthesis and Applications (Methods in Molecular Biology). Totowa, NJ: Humana, 2005.

La divulgación también describe que las composiciones y combinaciones farmacéuticas de la invención son útiles para el tratamiento de trastornos metabólicos que incluyen, por ejemplo, hiperglicemia, tolerancia alterada a la glucosa, deficiencia de células beta, diabetes( incluyendo diabetes de tipo 1, diabetes de tipo 2 y diabetes gestacional), enfermedad de esteatosis hepática no alcohólica, esteatosis hepática, síndrome de ovario poliquístico, hiperlipidemia y síndrome metabólico. Las composiciones y combinaciones farmacéuticas pueden usarse para tratar la obesidad o enfermedades caracterizadas por comer en exceso y para la supresión del apetito. Los procedimientos comprenden administrar a un sujeto una cantidad terapéuticamente eficaz de una composición de la invención a un sujeto que lo necesite, preferentemente un sujeto humano.

La divulgación también describe otros trastornos que pueden tratarse con las composiciones y combinaciones de la invención que incluyen, pero sin limitación, resistencia a la insulina, deficiencia de insulina, hiperinsulinemia, hiperglucemia, dislipidemia, hiperlipidemia, hipercetonemia, hiperglucagonemia, pancreatitis, neoplasias pancreáticas, enfermedades cardiovasculares, hipertensión, enfermedad de la arteria coronaria, aterosclerosis, fallo renal, neuropatía (p.ej., neuropatía autonómica, neuropatía parasimpática y polineuropatía), retinopatía diabética, cataratas, enfermedades endocrinas y apnea del sueño, síndrome de ovario poliquístico, neoplasias de la mama, colon, próstata, recto y ovario, osteoartritis por esteatosis del hígado.

La divulgación también describe los procedimientos para regular la sensibilidad a la insulina en un paciente, así como los procedimientos para aumentar la captación de glucosa por una célula, y los procedimientos para regular la sensibilidad a la insulina de una célula, utilizando los conjugados o fusiones de la invención. También se describen procedimientos para estimular la síntesis y liberación de insulina, potenciar la sensibilidad del tejido adiposo, muscular o hepático hacia la captación de insulina, estimular la captación de glucosa, ralentizar el proceso digestivo, ralentizar el vaciado gástrico, inhibir la secreción de ácido gástrico, inhibir la secreción de enzimas pancreáticas, reducir el apetito, inhibición de la ingesta de alimentos, modificar el gasto de energía o bloquear la secreción de glucagón en un paciente, que comprende administrar a dicho paciente una composición de la invención, por ejemplo que comprende administrar al menos una dosis de una composición, p.ej., una composición farmacéutica o combinación farmacéutica de la presente invención.

La divulgación también proporciona el uso de una composición de la invención en la fabricación de un medicamento para el tratamiento de una enfermedad metabólica tal como aquellos descritos en el presente documento. La descripción también se refiere al uso de cualquiera de las composiciones descritas en el presente documento para uso en terapia.

Los polipéptidos de la presente invención y sus sales pueden emplearse solos o en combinación con otros agentes terapéuticos (una "combinación farmacéutica") para el tratamiento de las afecciones mencionadas anteriormente. La divulgación describe que, el polipéptido de la presente invención y el agente o agentes terapéuticos adicionales se administran juntos, o, el polipéptido de la invención y el agente o agentes terapéuticos adicionales se administran por separado. Cuando se administra por separado, la administración se puede producir simultanea o secuencialmente, en cualquier orden. Las cantidades de los polipéptidos de la presente invención y el/los otro(s) agente(s) terapéutico(s) y los momentos relativos de administración se seleccionarán para lograr el efecto terapéutico combinado deseado. La administración en combinación de un compuesto de la presente invención con otros agentes de tratamiento puede ser en combinación por administración concomitantemente en: (1) una composición farmacéutica unitaria que incluye ambos agentes terapéuticos; o (2) composiciones farmacéuticas separadas, incluyendo cada una uno de los agentes terapéuticos. Como alternativa, la combinación puede administrarse por separado de una manera secuencial en la que un agente de tratamiento se administra primero y el otro segundo o viceversa. Dicha administración secuencial puede ser cercana en el tiempo o remota en el tiempo.

En una realización, las combinaciones farmacéuticas de la invención incluyen un polipéptido de acuerdo con la invención y un exendín-4 (véase, por ejemplo, la Patente de Estados Unidos N.° 5.424.286). Exendin-4 (Ex -4) y sus análogos que son útiles para la presente invención incluyen Byetta® y Bydureon® (exenatida), Victoza® (liraglutida), lixisenatida, LY2189265 (dulaglutida), PF-4856883, ZYD-1, y HM11260C (exendín LAPS) así como las descritas en las publicaciones de patente PCT WO 99/25728 (Beeley y col.), WO 99/25727 (Beeley y col.), WO 98/05351 (Young y col.), WO 99/40788 (Young y col.), WO 99/07404 (Beeley y col.) y WO 99/43708 (Knudsen y col.).

En otra realización, las combinaciones farmacéuticas de la invención incluyen un polipéptido de acuerdo con la invención y GLP-1 (véase, por ejemplo, Gutniak, M., y col. (1992) N. Engl. J. Bled. 326:1316-22), o un fragmento o análogo del mismo, por ejemplo, GLP-1(7-37), GLP-1(7-36), GLP-1(7-35), GLP-1(7-38), GLP-1(7-39), GLP-1(7-40), GLP-1(7-41).

Otros análogos de GLP-1 se describen en la Solicitud de Patente Internacional N.° 90/11299, que se refiere a fragmentos peptídicos que comprenden GLP-1 (7-36) y derivados funcionales del mismo y tienen una actividad insulinotrópica que excede la actividad insulinotrópica de GLP-1 (1-36) o GLP-1 (1-37) y para su uso como agentes insulinotrópicos.

La solicitud de patente internacional Número WO 91/11457 (Buckley y col.) desvela análogos de los péptidos GLP-1 activos, GLP-1 (7-34), GLP-1(7-35), GLP-1 (7-36) y GLP-1 (7-37) que también pueden ser útiles como fármacos GLP-1 de acuerdo con la presente invención.

La divulgación se refiere a procedimientos de tratamiento en los que se administra una "cantidad terapéuticamente eficaz" de un polipéptido de la invención a un sujeto que necesita dicho tratamiento. La expresión "cantidad terapéuticamente eficaz" significa cualquier cantidad que, en comparación con un sujeto correspondiente que no ha recibido tal cantidad, de como resultado un tratamiento mejorado, la curación o la mejora de una enfermedad, trastorno o efecto secundario, o una disminución en la velocidad de avance de una enfermedad o trastorno. Como reconocerán los expertos en el campo, una cantidad eficaz de agente terapéutico variará con muchos factores, que incluyen la edad y el peso del paciente, la condición física del paciente, el nivel de azúcar en la sangre, el nivel de peso que se obtendrá y otros factores.

Una cantidad terapéuticamente eficaz de un polipéptido de la presente invención es la cantidad requerida para suprimir el apetito en el sujeto en un grado deseado. La dosis diaria eficaz de supresión del apetito de los compuestos estará generalmente en el intervalo de aproximadamente 0,01 pg a aproximadamente 500 pg/día, preferentemente de aproximadamente 0,05 pg a aproximadamente 100 pg/día y más preferentemente de aproximadamente 1 pg a aproximadamente 50 pg/día, lo más preferentemente de aproximadamente 5 pg a aproximadamente 25 pg/día, para un paciente de 70 kg, administrado en una sola dosis o en dosis divididas.

En un aspecto, la invención proporciona una composición farmacéutica que comprende un polipéptido de la invención y un transportador farmacéuticamente aceptable.

Las composiciones farmacéuticas y las combinaciones farmacéuticas de la invención pueden administrarse por cualquier vía, incluyendo intravenosa, intraperitoneal, subcutánea e intramuscular, oral, tópica, transmucosa o por inhalación pulmonar. Por ejemplo, los polipéptidos de la invención se pueden proporcionar en forma de formulaciones adecuadas para administración parenteral (incluyendo la administración intravenosa, intramuscular y subcutánea), nasal u oral.

Los procedimientos para formular y suministrar polipéptidos para diversas vías de administración son conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Swain y col. (2013) Recent Pat. Biotechnol. 1 de febrero de 2013, Epub delante de la impresión, Hovgaard, Lars, Sven Froklaer y Marco Van De Weert, eds. Pharmaceutical Formulation Development of Peptides and Proteins. 2a ed. Boca Raton: CRC Press, 2012 y Van Der Walle, Chris, ed. Peptide and Protein Delivery. Londres: Academic, 2011.

En un aspecto, la divulgación se refiere a una formulación de liberación lenta. Dichas formulaciones permiten que se administren cantidades terapéuticamente eficaces del polipéptido o polipéptidos terapéuticos en el torrente sanguíneo durante muchas horas o días después de la inyección o el suministro al espacio subcutáneo.

Las formulaciones de liberación lenta de la invención pueden incluir uno o más polímeros útiles para retrasar la liberación del polipéptido terapéutico. Ejemplos no limitantes de tales polímeros incluyen poli (ácido poliláctico-coglicólico) PLGA, policaprolactona, polidioxanona, carbonato de politrimetileno, polianhídridos, PEG-PLGA, ácido poliglutámico, terftalato de polietilenglicol/terftalato de polibutileno/terftalato de polibutileno, copolímero de poli (aminoácido) -Leu/Glu, carbonatos de politirosina, poliesteramidas, micelas poliméricas basadas en poli (alfa aminoácido), polihidroxipropilmetacrilamida, polialquilcianoacrilato, colágeno, ácido hialurónico, albúmina, carboximetilcelulosa, fleximer, quitosán, maltodextrina, dextrano o dextrano sulfato,

En un aspecto, la divulgación se refiere al suministro de polipéptidos de la invención a través de un dispositivo en miniatura, tal como una bomba de infusión implantable que está diseñada para proporcionar una infusión continua o intermitente de fármacos a largo plazo. Tales dispositivos pueden usarse para administrar un polipéptido terapéutico de la invención por vía intravenosa, vías intraarterial, subcutánea, intraperitoneal, intratecal, epidural o intraventricular. Dichos dispositivos pueden ser erosionables, no erosionables y/o duraderos. Ejemplos no limitantes de tales dispositivos incluyen el dispositivo Durasert ™ (pSivida), el sistema de suministro osmótico DUROS® (Intarcia Therapeutics), la tecnología de polímeros MedLaunch ™ (Endo Health).

Otros dispositivos que podrían usarse de acuerdo con la presente invención incluyen la bomba SnychroMed® (Medtronic) y la bomba de infusión Codman® 3000 (Johnson & Johnson), el sistema de suministro V-Go® (Valeritas), la bomba OmniPod® (Insulet) y el JewelPump ™ (Debiotech).

Los polipéptidos de la invención se pueden administrar en una formulación de gel in situ. Dichas formulaciones se administran generalmente como líquidos que forman un gel ya sea por disipación del disolvente orgánico miscible con agua o por agregación de dominios hidrófobos presentes en la matriz. Ejemplos no limitantes incluyen la tecnología FLUID CRYSTAL (Camurus) y la tecnología SABER (Durect), y las formulaciones descritas en los números de serie de las patentes de EE. UU. 5612051, 5714159, 6413539, 6004573 y 6117949.

Los polipéptidos terapéuticos de la invención también pueden encapsularse en una formulación farmacéutica basada en microesferas adecuada para inyección subcutánea. Ejemplos no limitantes de formulaciones basadas en microesferas para el suministro de péptidos incluyen Chroniject ™ (Oakwood Labs), Medusa® (Flamel's), Q-Sphera (Q-CHIP), así como los descritos los números de serie de las patentes de EE. UU. 4675189, 6669961, y Amin y col. (2001) J of Controlled Release 73: 49-57.

La formulación puede contener agentes antibacterianos o antifúngicos como el meta-cresol, alcohol bencílico, parabenos (metil, propil, butil, clorobutanol, fenol, sales fenilmercúricas tales como acetato, borato o nitrato o ácido sórbico.

Las composiciones de esta invención pueden liofilizarse para su almacenamiento y reconstituirse en un transportador adecuado antes de su uso. Se puede emplear cualquier procedimiento de liofilización adecuado (por ejemplo, secado por pulverización, secado de la costra) y/o técnicas de reconstitución. En una realización particular, La invención proporciona una composición que comprende un polipéptido liofilizado (criodesecado) como se describe en el presente documento.

En determinados aspectos, la invención proporciona un ácido nucleico que codifica un polipéptido de la invención y vectores de expresión recombinantes que contienen tales ácidos nucleicos. Los vectores de expresión recombinantes de la invención incluyen un ácido nucleico que codifica un polipéptido de la invención unido operativamente a uno más elementos de control de la expresión tales como, por ejemplo, un promotor.

También se incluyen células hospedadoras que contienen un ácido nucleico o un vector de expresión recombinante que codifica un polipéptido de la invención. Las células hospedadoras adecuadas de acuerdo con la invención incluyen tanto células hospedadoras procariotas como células hospedadoras eucariotas. Las posibles células hospedadoras incluyen, pero sin limitación, células hospedadoras de mamíferos, células hospedadoras bacterianas (por ejemplo, E. coli), células hospedadoras de levadura y células hospedadoras vegetales.

Los ácidos nucleicos y los vectores de expresión recombinantes que codifican un polipéptido de la invención pueden introducirse en una célula hospedadora adecuada para crear una célula hospedadora recombinante utilizando cualquier procedimiento apropiado para la célula hospedadora seleccionada, por ejemplo, transformación, transfección, electroporación o infección. En algunas realizaciones, el ácido nucleico o el vector de expresión recombinante se integra en el genoma de la célula hospedadora. La célula hospedadora recombinante resultante se puede mantener en condiciones adecuadas para la expresión (por ejemplo, en presencia de un inductor, en un animal adecuado, en medios de cultivo adecuados complementados con sales apropiadas, factores de crecimiento, antibióticos, suplementos nutricionales, etc.), mediante la cual se produce el polipéptido codificado. Si se desea, se puede aislar o recuperar el péptido o polipéptido codificado.

La divulgación proporciona además un procedimiento para producir un polipéptido de la presente invención en el que el procedimiento comprende mantener una célula hospedadora tal como las descritas anteriormente que comprenden un ácido nucleico o un vector de expresión recombinante que codifica un polipéptido de la invención en condiciones adecuadas para la expresión de dicho ácido nucleico o vector de expresión recombinante. Los procedimientos para la expresión recombinante de polipéptidos en células hospedadoras son bien conocidos en la técnica. Véase, por ejemplo, Rosalyn M. Bill, ed. Recombinant Protein Production in Yeast: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology, Vol. 866), Humana Press 2012; James L. Hartley, ed. Protein Expression in Mammalian Cells: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology), Humana Press 2012, Loic Faye y Veronique Gomord, eds. Recombinant Proteins From Plants: Methods and Protocols (Methods in Molecular Biology), Humana Press 2008; y Argelia Lorence, ed. Recombinant Gene Expression (Methods in Molecular Biology), Humana press 2011.

En determinados aspectos, los ácidos nucleicos de la invención están "aislados". Los ácidos nucleicos a los que se hace referencia en el presente documento como "aislados" son ácidos nucleicos que se han separado de otro material (por ejemplo, otros ácidos nucleicos como el ADN genómico, ADNc y/o ARN) en su entorno original (por ejemplo, en células o en una mezcla) de ácidos nucleicos tal como una biblioteca). Un ácido nucleico aislado se puede aislar como parte de un vector de expresión recombinante.

Los siguientes ejemplos están destinados solo afines ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la invención de ninguna manera.

Ejemplos

Los ejemplos hacen uso de las siguientes abreviaturas:

uma unidad de masa atómica

Fmoc 9-fluorenilmetoxicarbonilo

HBTU Hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametil uronio

HCTU Hexafluorofosfato de 2-(6-cloro-1-H-benzotriazol-1-il) -1,1,3,3-tetrametilaminio

DMF N,N-dimetilformamida

NMM N-metilmorfolina

DIPEA N,N-diisopropiletilamina

TFA ácido trifluoroacético

Trt tritilo

f-Bu ferc-butilo

Boc ferc-butilcarbonilo

Pbf 2,2,4,6,7-pentametildihidro-benzofuran-5-sulfonilo

MAL maleimida

PBS solución salina tamponada con fosfato

ivDde 1-(4,4-dimetil-2,6-dioxociclohexilideno) -3-metilbutilo

MALDI desorción/ionización mediante láser asistida por matriz

BMPS N-p-maleimidopropiloxisuccinimida éster

DODT 2,2 '-(etilendioxi)dietanotiol

TIPS triisopropilsilano

MPA ácido mercaptopropiónico

tr tiempo de retención

RPM revoluciones por minuto

Síntesis de péptidos

Los péptidos mostrados en los siguientes ejemplos se sintetizaron mediante procedimientos en fase sólida utilizando una estrategia Fmoc con activación de hexafluorofosfato de 2-(1H-benzotriazol-1-il) -1,1,3,3-tetrametil uronio (HBTU) o hexafluorofosfato de 2-(6- cloro-1-H-benzotriazol-1-il)-1,1,3,3-tetrametilaminio (HCTU) (5 veces en exceso molar) en N, N-dimetilformamida (DMF) y N-metilmorfolina (NMM) como base, 20% de piperidina/DMF para la desprotección de Fmoc, en un sintetizador de péptidos automatizado (modelo Prelude u Overture; Protein Technologies, Tucson, AZ). La resina fue Rink Amide MBHA LL (Novabiochem) o Rink Amide AM LL (Novabiochem) con una carga de 0,29 -O, 38 mmol/g en una escala de 20 - 400 pmol. Los grupos de protección de la cadena lateral utilizados fueron Trt para Asn, Gln, Cys y His; t-Bu para Ser, Thr y Tyr; Boc para Lys y Trp; Of-Bu para Asp y Glu; y Pbf para Arg. La escisión de péptido-resina se completó con una mezcla de ácido trifluoroacético (TFA):anisol:agua:triisopropilsilano (88:5:5:2). El péptido en bruto se precipitó en dietil éter frío, el dietil éter se decantó y los sólidos se trituraron nuevamente con dietil éter frío. Los sólidos en bruto se purificaron, a continuación, por HPLC de fase inversa en una columna ID de Waters XBridge™ BEH 130, C18, 10 pm, 130Á, 30 x 250 mm, utilizando un gradiente dentro de los intervalos de 5 -75% de acetonitrilo/agua con 0,1% de TFA durante más de 30 - 45 minutos a un caudal de 30 ml/min, A - 215 nm.

Condiciones LC/MS

Procedimiento A: Realizado utilizando una columna Phenomenex UPLC Aeris™ Peptide XB C18, 1,7 pm, 2,1 X 100 mm o una columna ACQUITY BEH300 o BEH130 C18, 1,77 pm, 2,1 X 100 mm con 5 - 65% de acetonitrilo/agua con 0,05% de TFA durante más de 30 minutos con un caudal de 0,5 ml/min, A - 215 nm, 280 nm.

Condiciones de HPLC C18:

Procedimiento A: Realizado utilizando una columna Waters XBridge ™ BEH130 C18, 5 pm, 4,6 X 250 mm, con 5 - 70 % de acetonitrilo/agua con 0,1 % de TFA durante más de 15 minutos con un caudal de 1,5 ml/min, 40° C, A -215 nm, 280 nm.

Procedimiento B: Realizado utilizando una columna Waters XBridge ™ BEH130 C18, 5 pm, 4,6 X 250 mm, 5 -75 % de acetonitrilo/agua con 0,1 % de TFA durante más de 20 minutos con un caudal de 1,5 ml/min, A - 215 nm, 280 nm.

Procedimiento C: Realizado utilizando una columna Waters XBridge ™ BEH130 C18, 5 pm, 4,6 X 250 mm, 20 -37,5 % de acetonitrilo/agua con 0,1 % de TFA durante más de 15 minutos con un caudal de 1,0 ml/min, 60° C, A -215 nm, 280 nm.

Procedimiento D: Realizado utilizando una columna Waters XBridge ™ BEH300 C18, 5 pm, 4,6 X 250 mm, 5 -70 % de acetonitrilo/agua con 0,1 % de TFA durante más de 15 minutos con un caudal de 1,5 ml/min, A - 215 nm, 280 nm.

Ejemplo 1. PKPEAPGKDASPEELNRYYASLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:3)

El ejemplo 1 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1369 uma y (M+4)/4 - 1027 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4105 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,90 min) para el péptido aislado (25 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 2. PKPEAPGKDASPEELNRYYASLRKYLNWLTRQRY-NH²(SEQ ID NO:4)

El ejemplo 2 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 -1371 uma y (M+4)/4 - 1028 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4111 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,46 min) para el péptido aislado (20 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 3. PKPEAPGKDASPEELNRYYASLRHYLNWLTRQRY-NH²(SEQ ID NO:5)

El ejemplo 3 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1374 uma y (M+4)/4 -1031 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4120 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,42 min) para el péptido aislado (16 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 4. PKPEAPGKDASPEEWNRYYADLRKYLNWLTRQRY-NH²(SEQ ID NO:6)

El ejemplo 4 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1405 uma y (M+4)/4 - 1054 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4212 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,54 min) para el péptido aislado (18 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 5. PKPEAPGKDASPEEWNRYYADLRHYLNWLTRQRY-NH²(SEQ ID NO:7)

El Ejemplo 5 se preparó en una escala de 6X50 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1407 uma y (M+4)/4 -1056 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4221 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,27 min) para el péptido aislado (180 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Alternativamente, el ejemplo 5 se preparó mediante síntesis manual utilizando un reactor encamisado de 250 ml que se enfrió a 15 °C. La Resina LL de Rink Amide AM (100-200 mallas, 13,8 g, 0,29 mmol/g de carga) se hinchó con DMF (50 ml) 3 veces durante 10 min cada una con rociado de nitrógeno. El grupo Fmoc se eliminó con piperidina al 20% en DMF (200 ml) más de 5 min con rociado de nitrógeno, seguido de piperidina al 20% en DMF (200 ml) más de 12 min con rociado de nitrógeno. La resina se lavó, a continuación, con DMf (100 ml) y, a continuación, dos veces con DMF (100 ml) durante 1 min con rociado de nitrógeno. Después de la desprotección de Fmoc y el lavado con DMF, se añadió el primer aminoácido (100 ml, solución 200 mM en DMF), seguido de una solución DIPEA (50 ml, solución 800 mM en DMF). Se añadió una solución de HCTU en DMF (50 ml, 400 mM) durante un período de 12 minutos a través de una bomba peristáltica. Después de un mínimo de 15 minutos, se realizó un test de Kaiser en una alícuota de resina para asegurar la reacción completa. La resina se lavó, a continuación, con DMF (100 ml) y, a continuación, dos veces con DMF (100 ml) durante 1 min con rociado de nitrógeno. Esta secuencia (desprotección de Fmoc con 20% de piperidina/DMF; lavados; acoplamiento de aminoácidos; test de Kaiser; lavados) se realizó para la secuencia restante del péptido, a excepción de la histidina en la posición 24. Las soluciones de aminoácidos (His) y DIPEA se enfriaron a ~ 10 °C y se agregaron al reactor. El enfriador del reactor se ajustó a 5 °C y la mezcla de reacción se enfrió a 6,3 °C en -15 min. Se añadió gota a gota una solución enfriada (~ 10 °C) de HCTU en DMF (50 ml) durante un período de 25 minutos a través de una bomba peristáltica a 2 ml/min, tiempo durante el cual la solución se calentó a 7,8 °C. Después de 15 minutos, un test de Kaiser mostró la reacción completa. Los aminoácidos restantes se acoplaron utilizando el protocolo convencional. Al finalizar la síntesis (la prolina 1 se acopló), la resina se lavó, a continuación, dos veces con DMF (100 ml) durante 1 minuto con rociado de nitrógeno, a continuación, se lavó tres veces con DCM (200 ml) durante 5 minutos con rociado de nitrógeno, y, a continuación, finalmente, tres veces con metanol (200 ml) durante 5 minutos con rociado de nitrógeno. La resina se secó con rociado de nitrógeno durante 30 minutos para obtener 37,5 g de resina seca. La resina se escindió en porciones. Se hincharon diez gramos de resina con 120 ml de DMF durante 45 minutos con rociado de nitrógeno. La DMF se drenó y el Fmoc N-terminal final se eliminó con piperidina al 20% en DMF (150 ml) durante 5 min con rociado de nitrógeno, seguido de piperidina al 20% en DMF (150 ml) más de 12 min con rociado de nitrógeno. La resina se lavó, a continuación, con DMF (100 ml) y, a continuación, dos veces con DMF (100 ml) durante 1 min con rociado de nitrógeno, a continuación, se lavó tres veces con DCM (120 ml) durante 5 minutos con rociado de nitrógeno, y, a continuación, finalmente, tres veces con metanol (120 ml) durante 5 minutos con rociado de nitrógeno. La resina se secó con rociado de nitrógeno durante 30 min. La escisión del péptido de la resina se realizó utilizando 100 - 120 ml de cóctel de escisión: TFA:fenol:DODT:agua:TIPS (90:2,5:2,5:2,5:2,5) durante 2,5 - 3 h. Los filtrados se dividieron en recipientes y se trataron con dietil éter frío. Los recipientes se centrifugaron durante 10 min a 3000 RPM y se coló el sobrenadante. El material se trató con dietil éter frío nuevamente, se agitó y, a continuación, se centrifugó durante otros 10 minutos a 3000 RPM. El sobrenadante se coló de nuevo. Los sólidos de los recipientes se combinaron utilizando TFA acuoso al 0,1% y se liofilizaron para dar el lote 1. La resina se sometió a segunda escisión utilizando el mismo procedimiento para dar el lote 2. Este proceso (desprotección de Fmoc; lavados; escisión de la resina, trituración/resuspensión y liofilización se repitieron tres veces con ~ 9 g de resina para proporcionar un total de ~ 11 g de péptido en bruto después de la liofilización. Este material se disolvió en TFA acuoso al 0,1% para dar una concentración aproximada de 75 mg/ml y el material se purificó por HPLC de fase inversa utilizando inyecciones múltiples (entre 2 y 3 ml cada una) utilizando el siguiente gradiente de etapas: 5 - 41,25% de acetonitrilo/agua con TFA al 0,1% durante 75 min; Prep C18 de XBridge™, 50 x 250 mm, 10 pm, caudal de 50 ml/min. Se combinaron las fracciones que contenían el producto con > 93% de pureza (Procedimiento C de HPLC). Las fracciones impuras (pureza de -88 - 93%) también se recogieron y se volvieron a someter a las condiciones de purificación. Todas las fracciones puras (> 93%) se combinaron y se liofilizaron para dar el péptido deseado en forma de un sólido blanco. Se determinó una pureza de >93% mediante HPLC C18 (Procedimiento C de HPLC C18, tr = 14,12 min) para el péptido aislado (2,8 g, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Se realizó un intercambio de sal de TFA a HOAc utilizando el Ejemplo 5 preparado por sintetizador de péptidos y síntesis manual utilizando una columna Agilent StratoSpheres™ PL-HCO³MP SPE de 2 x 60 ml. La columna se equilibró tratando primero con 50 ml de MeOH, seguido de 50 ml de agua DI. A continuación, se trató la columna con 2 x 50 ml de HOAc 1 N y luego con 2 x 50 ml de HOAc 0,1 N, y se monitorizó el filtrado para asegurar un pH ~ 3 (papel de pH). Una solución del Ejemplo 5 (-3,5 g que incluye 2,8 g preparada como se describe anteriormente y 0,7 g derivada de lotes preparados previamente) en HOAc 0,1 N se dividió en partes iguales entre las columnas de SPE y, a continuación, se eluyó con 5 x 50 ml de HOAc 0,1 N. La columna se lavó, a continuación, con 5 x 50 ml de MeOH. Las fracciones de metanol que contenían el producto (según lo determinado por HPLC, Procedimiento C) se concentraron a través de un evaporador rotatorio hasta ~ 40 ml, que se añadió a los lavados con HOAc 0,1 N. La solución se liofilizó durante 3 días para proporcionar el péptido aislado deseado en forma de un sólido blanco. Se determinó una pureza de >95% mediante h Pl C C18 (Procedimiento C de HPLC C18, tr = 14,14 min) para el péptido aislado (2,95 g, como la sal de ácido acético 8).

Ejemplo 6. PKPEAPGKDASPEEWNRYYASLRKYLNWLTRQRY-NH²(SEQ ID NO:8)

El ejemplo 6 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1395 uma y (M+4)/4 - 1047 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4184 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,45 min) para el péptido aislado (18 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 7. PKPEAPGKDASPEEWNRYYASLRHYLNWLTRQRY-NH²(SEQ ID NO:9)

El ejemplo 7 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1398 uma y (M+4)/4 - 1049 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4193 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,47 min) para el péptido aislado (27 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 8. PKPEAPGKDASPEEWNRYYADLRKYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:10)

El ejemplo 8 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1400 uma y (M+4)/4 - 1050 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4198 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,35 min) para el péptido aislado (21 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 9. PKPEAPGKDASPEEWNRYYADLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:11)

El ejemplo 9 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1403 uma y (M+4)/4 - 1052 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4207 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,36 min) para el péptido aislado (22 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 10. PKPEAPGKDASPEEWNRYYASLRKYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:12)

El ejemplo 10 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 -1391 uma y (M+4)/4 - 1043 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4170 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,23 min) para el péptido aislado (23 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 11. PKPEAPGKDASPEEWNRYYASLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:13)

El ejemplo 11 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1393 uma y (M+4)/4 - 1045 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4179 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,24 min) para el péptido aislado (22 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 12. PKPEAPGEDASPEELNRYYASLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:14)

El ejemplo 12 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1369 uma y (M+4)/4 - 1027 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4106 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,60 min) para el péptido aislado (22 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 7).

Ejemplo 13. PKPEHPGKDASPEEWNRYYAALRKYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:15)

El ejemplo 13 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1407 uma y (M+4)/4 - 1056 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4220 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,46 min) para el péptido aislado (22 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 14. PKPEHPGKDASPEELNKYYAALRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:16)

El ejemplo 14 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1377 uma y (M+4)/4 - 1033 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4128 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,88 min) para el péptido aislado (27 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 15. PKPEHPGKDASPEELNRYYASLRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:17)

El ejemplo 15 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 -1391 uma y (M+4)/4 - 1044 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4172 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,77 min) para el péptido aislado (29 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 16. PKPEHPGKDASPEELARYYASLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:18)

El ejemplo 16 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1377 uma y (M+4)/4 - 1033 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4129 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,89 min) para el péptido aislado (30 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 17. PKPEHPGKDASPEEWNRYYASLRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:19)

El ejemplo 17 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. El sólido en bruto aislado se agitó durante varias horas en 8 ml de ácido acético al 25% para minimizar el aducto de triptófano CO²formado durante la escisión de la resina. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 -1416 uma y (M+4)/4 - 1062 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4245 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante h PlC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,88 min) para el péptido aislado (35 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 18. PKPEHPGKDASPEEWNRYYADLRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:20)

El ejemplo 18 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. El sólido en bruto aislado se agitó durante varias horas en 8 ml de ácido acético al 25% para minimizar el aducto de triptófano CO²formado durante la escisión de la resina. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1425 uma y (M+4)/4 - 1069 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4273 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante h PlC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,98 min) para el péptido aislado (17 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 19. PKPEHPGKDASPEEWNRYYADLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:21)

El ejemplo 19 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. El sólido en bruto aislado se agitó durante varias horas en 8 ml de ácido acético al 25% para minimizar el aducto de triptófano CO²formado durante la escisión de la resina. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1425 uma y (M+4)/4 - 1069 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4273 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,98 min) para el péptido aislado (34 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 20. PKPESPGKDASPEEWNRYYADLRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:22)

El ejemplo 20 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1408 uma y (M+4)/4 - 1057 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4223 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,30 min) para el péptido aislado (28 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 21. PKPESPGKDASPEEWNRYYADLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:23)

El ejemplo 21 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1408 uma y (M+4)/4 - 1057 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4223 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,68 min) para el péptido aislado (28 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 22. PKPEHPGKDASPEEWNRYYADLRHYLNWLTRQRY-NH²(SEQ ID NO:24)

El ejemplo 22 se preparó en una escala de 40 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. El sólido en bruto aislado se agitó durante varias horas en 8 ml de ácido acético al 25% para minimizar el aducto de triptófano CO²formado durante la escisión de la resina. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1430 uma y (M+4)/4 - 1073 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4287 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante h PlC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,65 min) para el péptido aislado (24 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 23. PKPEHPGKDASPEEWAKYYAALRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:25)

El ejemplo 23 se preparó en una escala de 40 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. El sólido en bruto aislado se agitó durante varias horas en 8 ml de ácido acético al 25% para minimizar el aducto de triptófano CO²formado durante la escisión de la resina. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1386 uma y (M+4)/4 - 1040 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4158 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante h PlC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,28 min) para el péptido aislado (20 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 24. PKPEAPGKDASPEEWNRYYADLRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:26)

El ejemplo 24 se preparó en una escala de 40 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. El sólido en bruto aislado se agitó durante varias horas en 8 ml de ácido acético al 25% para minimizar el aducto de triptófano CO²formado durante la escisión de la resina. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1403 uma y (M+4)/4 - 1053 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4207 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante h PlC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,22 min) para el péptido aislado (28 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 25. PKPEHPGKDASPEEWNRYYASLRKYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:27)

El ejemplo 25 se preparó en una escala de 40 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. El sólido en bruto aislado se agitó durante varias horas en 8 ml de ácido acético al 25% para minimizar el aducto de triptófano CO²formado durante la escisión de la resina. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 -1412 uma y (M+4)/4 - 1060 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4236 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante h Pl C C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,09 min) para el péptido aislado (21 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 26. PKPEHPGKDASAEEWAKYYAALRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:28)

El ejemplo 26 se preparó en una escala de 20 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1378 uma y (M+4)/4 - 1034 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4132 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,44 min) para el péptido aislado (19 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 27. PKPEAPGKDASAEEWNRYYASLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:29)

El ejemplo 27 se preparó en una escala de 20 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1385 uma y (M+4)/4 - 1039 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4153 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,31 min) para el péptido aislado (16 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 28. PKPEHPGKDASAEELARYYASLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:30)

El ejemplo 28 se preparó en una escala de 20 |jmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1368 uma y (M+4)/4 - 1027 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4103 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,27 min) para el péptido aislado (14 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Ejemplo 29. PKPEAPGKDASAEEWNRYYASLRKYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:31)

El ejemplo 29 se preparó en una escala de 20 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1382 uma y (M+4)/4 - 1037 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4144 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,31 min) para el péptido aislado (27 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 30. PKPESPGKDASAEEWTKYYAALRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:32)

El ejemplo 30 se preparó en una escala de 20 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 -1371 uma y (M+4)/4 - 1029 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4112 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 9,59 min) para el péptido aislado (33 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 31. PKPEAPGKDASPEELNRYYASLRKYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:33)

El ejemplo 31 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. El sólido en bruto aislado se agitó durante varias horas en 8 ml de ácido acético al 25% para minimizar el aducto de triptófano CO²formado durante la escisión de la resina. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1366 uma y (M+4)/4 - 1025 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4097 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante h PlC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,93 min) para el péptido aislado (21 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 32. PKPEHPGEDASPEEWAKYYAALRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:34)

El ejemplo 32 se preparó en una escala de 20 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1387 uma y (M+4)/4 -1041 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4159 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante LC/MS (Procedimiento A de LC/MS, tr = 13,58 min) para el péptido aislado (9,4 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Ejemplo 33. PKPEAPGEDASAEEWNRYYASLRHYLNWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:35)

El ejemplo 33 se preparó en una escala de 20 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1385 uma y (M+4)/4 - 1039 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4154 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante LC/MS (Procedimiento A de LC/MS, tr = 13,35 min) para el péptido aislado (7,7 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 7).

Ejemplo 34. PKPESPGEDASPEEWTKYYAALRHYINWVTRQRY-NH²(SEQ ID NO:36)

El ejemplo 34 se preparó en una escala de 20 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 -1381 uma y (M+4)/4 - 1036 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4139 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante LC/MS (Procedimiento A de LC/MS, tr = 13,98 min) para el péptido aislado (8,2 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 7).

Ejemplo 35. PKPEAPGEDASPEEWNRYYADLRHYLNWLTRQRY-NH²(SEQ ID NO:37)

El ejemplo 35 se preparó en una escala de 20 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1408 uma y (M+4)/4 - 1056 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4222 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante LC/MS (Procedimiento A de LC/MS, tr = 13,84 min) para el péptido aislado (7,5 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 7).

Los ejemplos 36-43 hacen referencia a los siguientes intermedios:

Intermedio 1

a-[3-(3-male¡m¡do-1-oxoprop¡l)am¡no]propil-w-metox¡, polioxietileno (disponible de NOF Corporation o JenKEM Technology EE.UU. Inc.)

Intermedio 3

Intermedio 4

Intermedio 5

N-succinimidil-3-maleinimidopropionato

Intermedio 6

M-SH-40K, disponible de JenKem Technology EE.UU. Inc.

Intermedio 7

Intermedio 8

Intermedio 9

Intermedio 10

Intermedio 11

El intermedio 1 se preparó en una escala de 400 îmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1377 uma y (M+4)/4 - 1033 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4128 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento B de HPLC C18, tr = 10,98 min) para el péptido aislado (76 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 7).

Una mezcla de Intermedio 1 (24,1 mg, 4,89 ^mol) e Intermedio 2 (NOF Corporation, ME-400MA, 226 mg, 5,14 ^mol) en 3,5 ml de tampón PBS 1X a pH 7,4 se agitó durante 45 minutos, tiempo durante el cual la reacción se hizo homogénea. A continuación, la reacción se diluyó con una solución de MeOH al 20% en HCl acuoso 0,1 M y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (medios de Sefarosa FF, NaCl 1 M al 5-50% en metanol al 20%/HCl acuoso 10 mM y en más de 5 volúmenes de columna, caudal 5 ml/min, A - 254 nm). El conjugado purificado se desaló utilizando cromatografía de exclusión por tamaño (columna de desalinización GE HiPrep 26/10, ácido acético 0,1 M, A - 254 nm) para proporcionar un sólido blanco después de la liofilización. La masa molecular del péptido aislado se confirmó mediante la distribución de iones de fragmentos positivos con el vértice a 47379 uma (MALDI). El ejemplo 36 (107 mg, como la sal de ácido acético 7) dio un tiempo de retención igual a 9,95 min usando una HPLC de exclusión por tamaño (columna Phenomenex BioSep-SEC-S3000, 7,8 x 300 mm, 5 ^m, 50 % de acetonitrilo/agua con TFA al 0,5 % durante 20 min, caudal 0,75 ml/min, A - 220 nm).

Ejemplo 37

El intermedio 3 se preparó en una escala de 40 ^mol como un sólido blanco usando el procedimiento general, excepto que la lisina en la posición 8 del péptido se protegió con un grupo ivDde y la prolina en la posición 1 se protegió con un Boc. Después del acoplamiento del último aminoácido (prolina 1), se eliminó el ivDde con tratamientos repetidos de hidracina al 4% en DMF y se acopló Fmoc-Cys(Trt)-OH. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1464 uma y (M+4)/4 - 1098 urna, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4390 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento D de HPLC C18, tr = 9,61 min) para el péptido aislado (32 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Una mezcla de Intermedio 3 (10 mg, 1,85 pmol) e Intermedio 2 (JenKem Technology EE.UU.Inc., 74 mg, 1,85 pmol) en 5 ml de tampón PBS 1X a pH 7,4 se agitó durante la noche, tiempo durante el cual la reacción se hizo homogénea. A continuación, la reacción se diluyó con 5 ml de MeOH al 20% en HCl acuoso 10 mM y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (medios de Sefarosa FF, NaCl 1 M al 0 - 60 % en metanol al 20%/HCl acuoso 10 mM en más de 7 volúmenes de columna, caudal 5 ml/min, A - 254 nm). El conjugado purificado se desaló usando cromatografía de exclusión por tamaño (columna de desalinización fina Sephadex G 25, ácido acético 0,1 M, A - 254 nm) para proporcionar un sólido blanco después de la liofilización. La masa molecular del péptido aislado se confirmó mediante la distribución de iones de fragmentos positivos con el vértice a 44568 uma (m A l D i). El ejemplo 37 (35 mg, como la sal de ácido acético 9) dio un tiempo de retención igual a 11,58 min usando una HPLC de exclusión por tamaño (columna Phenomenex BioSep-SEC-S3000, 7,8 x 300 mm, 5 pm, NaCl 0,15 mM en PBS 30 mM durante más de 20 min, pH 6,8, caudal 0,75 ml/min, A - 215 nm).

Ejemplo 38

El intermedio 4 se preparó en una escala de 40 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general, excepto que la lisina en la posición 8 del péptido se protegió con un grupo ivDde y la prolina en la posición 1 se protegió con un Boc. Después del acoplamiento del último aminoácido (prolina 1), el ivDde se eliminó con tratamientos repetidos de hidracina al 4% en DMF y el enlazador se acopló utilizando el reactivo éster de succinimida activado, Intermedio 5, N-p-maleimidopropiloxisuccinimida éster, sin el uso de activador (HCTU) o base(NMM). La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1442 uma y (M+4)/4 - 1082 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4323 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de Hp Lc C18, tr = 8,79 min) para el péptido aislado (29 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Una mezcla de Intermedio 4 (10 mg, 1,91 pmol) e Intermedio 6 (JenKem Technology EE.UU. Inc., 76 mg, 1,91 pmol) en 5 ml de tampón PBS 1X a pH 7,4 se agitó durante la noche, tiempo durante el cual la reacción se hizo homogénea. A continuación, la reacción se diluyó con 5 ml de MeOH al 20% en HCl acuoso 10 mM y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (medios de Sefarosa FF, NaCl 1 M al 0 - 60 % en metanol al 20%/HCl acuoso 10 mM en más de 7 volúmenes de columna, caudal 5 ml/min, A - 254 nm). El conjugado purificado se desaló usando cromatografía de exclusión por tamaño (columna de desalinización fina Sephadex G 25, ácido acético 0,1 M, A - 254 nm) para proporcionar un sólido blanco después de la liofilización. La masa molecular del péptido aislado se confirmó mediante la distribución de iones de fragmentos positivos con el vértice a 44346 uma (MAlDi). El ejemplo 38 (27 mg, como la sal de ácido acético 8) dio un tiempo de retención igual a 12,19 min usando una HPLC de exclusión por tamaño (columna Phenomenex BioSep-SEC-S3000, 7,8 x 300 mm, 5 pm, NaCl 0,15 mM en PBS 30 mM durante más de 20 min, pH 6,8, caudal 0,75 ml/min, A - 215 nm).

Ejemplo 39

El intermedio 7 se preparó en una escala de 40 |jmol como un sólido blanco usando el procedimiento general, excepto que la lisina en la posición 8 del péptido se protegió con un grupo ivDde mientras la prolina en la posición 1 se protegió con un Boc. Después del acoplamiento del último aminoácido (prolina 1), se eliminó el ivDde con tratamientos repetidos de hidracina acuosa al 4% en DMF y se acoplaron Fmoc-Gly-OH y Fmoc-Cys(Trt)-OH. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1433 uma y (M+4)/4 - 1075 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4298 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante LC/MS (Procedimiento A de LC/MS, tr = 13,68 min) para el péptido aislado (28,4 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Una mezcla de Intermedio 7 (10,1 mg, 1,94 jmol) e Intermedio 2 (JenKem Technology EE.UU. Inc., 78 mg, 1,94 jmol) en 10 ml de tampón PBS 1X a pH 7,4 se agitó durante la noche. A continuación, la reacción se diluyó con 10 ml de una solución de MeOH al 20 % en HCl acuoso 10 mM y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (medios de Sefarosa FF, NaCl 1 M al 0 - 60 % en metanol al 20 %/Hcl acuoso 10 mM en más de 7 volúmenes de columna, caudal 5 ml/min, A - 215 nm). El conjugado purificado se desaló usando cromatografía de exclusión por tamaño (columna fina Sephadex G 25 de 50 x 130 mm, ácido acético 0,1 M, A - 254 nm) para proporcionar un sólido blanco después de la liofilización. La masa molecular del péptido aislado se confirmó mediante la distribución de iones de fragmentos positivos con el vértice a 44384 uma (MALDI). El ejemplo 39 (26,7 mg, como la sal de ácido acético 8) dio un tiempo de retención igual a 12,30 min usando una HPLC de exclusión por tamaño (columna Phenomenex BioSep-SEC-S3000, 7,8 x 300 mm, 5 jm , NaCl 0,15 mM en PBS 30 mM durante más de 20 min, pH 6,8, caudal 0,75 ml/min, A - 215 nm), y un tiempo de retención igual a 12,31 min por HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18).

Ejemplo 40

El intermedio 8 se preparó en una escala de 40 jm ol como un sólido blanco usando el procedimiento general, excepto que la lisina en la posición 8 del péptido se protegió con un grupo ivDde mientras la prolina en la posición 1 se protegió con un Boc. Después del acoplamiento del último aminoácido (prolina 1), se eliminó el ivDde con tratamientos repetidos de hidracina acuosa al 4% en DMF y se acoplaron Fmoc-Gly-OH y Fmoc-Cys(Trt)-OH. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1440 uma y (M+4)/4 - 1080 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4318 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante LC/MS (Procedimiento A de LC/MS, tr = 13,16 min) para el péptido aislado (39 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 9).

Una mezcla de Intermedio 8 (10,43 mg, 1,95 jm ol) e Intermedio 2 (JenKem Technology EE.UU. Inc., 86 mg, 2,15 jm ol) en 10 ml de tampón PBS 1X a pH 7,4 se agitó durante 2 h. A continuación, la reacción se diluyó con 10 ml de una solución de MeOH al 20% en HCl acuoso 10 mM y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (medios de Sefarosa FF, NaCl 1 M al 0 - 60 % en metanol al 20%/HCl acuoso 10 mM en más de 7 volúmenes de columna, caudal 5 ml/min, A - 215 nm). El conjugado purificado se desaló usando cromatografía de exclusión por tamaño (columna fina Sephadex G 25 de 50 x 130 mm, ácido acético 0,1 M, A - 254 nm) para proporcionar un sólido blanco después de la liofilización. La masa molecular del péptido aislado se confirmó mediante la distribución de iones de fragmentos positivos con el vértice a 44514 uma (MALDI). El ejemplo 40 (35 mg, como la sal de ácido acético 9) dio un tiempo de retención igual a 14,90 min usando una HPLC de exclusión por tamaño (columna Phenomenex BioSep-SEC-S3000, 7,8 x 300 mm, 5 |jm, NaCI 0,15 mM en PBS 30 mM durante más de 20 min, pH 6,8, caudal 0,75 ml/min, A - 215 nm), y un tiempo de retención igual a 12,08 min por HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18).

Ejemplo 41.

El intermedio 9 se preparó en una escala de 40 jm ol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1407 uma y (M+4)/4 - 1056 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4220 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18, tr = 8,98 min) para el péptido aislado (30 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Una mezcla de Intermedio 9 (13,2 mg, 2,57 jm ol) e Intermedio 2 (JenKem Technology EE.UU. Inc., 113 mg, 2,83 jm ol) en 5 ml de tampón PBS 1X a pH 7,4 se agitó durante 1 hora, tiempo durante el cual la reacción se hizo homogénea. A continuación, la reacción se diluyó con 5 ml de MeOH al 20% en HCl acuoso 10 mM y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (medios de Sefarosa FF, NaCl 1 M al 0 - 60 % en metanol al 20%/HCl acuoso 10 mM en más de 7 volúmenes de columna, caudal 5 ml/min, A - 254 nm). El conjugado purificado se desaló usando cromatografía de exclusión por tamaño (columna de desalinización fina Sephadex G 25, ácido acético 0,1 M, A -254 nm) para proporcionar un sólido blanco después de la liofilización. La masa molecular del péptido aislado se confirmó mediante la distribución de iones de fragmentos positivos con el vértice a 44239 uma (Ma Ld I). El ejemplo 41 (41 mg, como la sal de ácido acético 8) dio un tiempo de retención igual a 9,20 min usando una HPLC de exclusión por tamaño (columna Phenomenex BioSep-SEC-S3000, 7,8 x 300 mm, 5 jm , NaCl 0,15 mM en PBS 30 mM durante más de 20 min, pH 6,8, caudal 0,75 ml/min, A - 215 nm).

Ejemplo 42.

El intermedio 10 se preparó en una escala de 40 jm ol como un sólido blanco usando el procedimiento general, excepto que la lisina en la posición 8 del péptido se protegió con un grupo ivDde mientras la prolina 1 se protegió con un Boc. Después del acoplamiento del último aminoácido (prolina 1) se eliminó el ivDde con tratamientos repetidos de hidracina acuosa al 4% en DMF y se acopló ácido Trt-mercaptopropiónico (MPA). La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 -1416 uma y (M+4)/4 -1062 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4246 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante LC/MS (Procedimiento A de LC/Ms , tr = 13,88 min) para el péptido aislado (22,2 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Una mezcla de Intermedio 10 (10,2 mg, 1,98 jm ol) e Intermedio 2 (JenKem Technology EE.UU. Inc., 87 mg, 2,18 jm ol) en 10 ml de tampón PBS 1X a pH 7,4 se agitó durante la noche. A continuación, la reacción se diluyó con 10 ml de una solución de MeOH al 20 % en HCl acuoso 10 mM y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (medios de Sefarosa FF, NaCl 1 M al 0 - 60 % en metanol al 20 %/HCl acuoso 10 mM en más de 7 volúmenes de columna, caudal 5 ml/min, A - 215 nm). El conjugado purificado se desaló usando cromatografía de exclusión por tamaño (columna fina Sephadex G 25 de 50 x 130 mm, ácido acético 0,1 M, A - 254 nm) para proporcionar un sólido blanco después de la liofilización. La masa molecular del péptido aislado se confirmó mediante la distribución de iones de fragmentos positivos con el vértice a 44392 uma (MALDI). El ejemplo 42 (32,2 mg, como la sal de ácido acético 8) dio un tiempo de retención igual a 13,83 min usando una HPLC de exclusión por tamaño (columna Phenomenex BioSep-SEC-S3000, 7,8 x 300 mm, 5 pm, NaCl 0,15 mM en PBS 30 mM durante más de 2o min, pH 6,8, caudal 0,75 ml/min, A - 215 nm), y un tiempo de retención igual a 12,06 min por HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC C18).

Ejemplo 43.

El intermedio 11 se preparó en una escala de 35 pmol como un sólido blanco usando el procedimiento general. La masa molecular del péptido aislado se confirmó por los iones del fragmento (M+3)/3 - 1378 uma y (M+4)/4 - 1034 uma, que corresponde a un péptido con el peso molecular precursor de 4133 uma (ESI-MS, Procedimiento A LC/MS). Se determinó una pureza de> 90% mediante LC/MS (Procedimiento A de LC/MS, tr = 13,77 min) para el péptido aislado (13 mg, como la sal del ácido trifluoroacético 8).

Una mezcla de Intermedio 11 (9,54mg, 1,89pmol) e Intermedio 2 (JenKem Technology EE.UU. Inc., 83mg, 2,08 pmol) en 10 ml de una solución de tampón PBS 1X a pH 7,4 se agitó a temperatura ambiente durante la noche. A continuación, la reacción se diluyó con 10ml de una solución de MeOH al 20 % en HCl acuoso 10 mM y se purificó por cromatografía de intercambio iónico (medios de Sefarosa FF, NaCl 1 M al 0 -60 % en metanol al 20 %/HCl acuoso 10 mM en más de 7 volúmenes de columna, caudal 5 ml/min, A - 215 nm). El conjugado purificado se desaló usando cromatografía de exclusión por tamaño (columna fina Sephadex G 25 de 50 x 130 mm, ácido acético 0,1 M, A - 254 nm) para proporcionar un sólido blanco después de la liofilización. La masa molecular del péptido aislado se confirmó mediante la distribución de iones de fragmentos positivos con el vértice a 44117 uma (MALDI). El ejemplo 43 (32 mg, como la sal de ácido acético 8) dio un tiempo de retención igual a 10,65 min usando una HPLC de exclusión por tamaño (columna Phenomenex BioSep-SEC-S3000, 7,8 x 300 mm, 5 pm, NaCl 0,15 mM en PBS 30 mM durante más de 20 min, pH 6,8, caudal 0,75 ml/min, A - 215 nm), y un tiempo de retención igual a 12,10 min por HPLC C18 (Procedimiento A de HPLC c 18).

EJEMPLOS BIOLÓGICOS

Potencia de los análogos de PYY en el receptor del neuropéptido Y humano de tipo 2

La potencia relativa de los análogos de PYY en el receptor del neuropéptido Y humano de tipo 2 se determinó utilizando un ensayo de melanóforos esencialmente como se describe en Jayawickreme y col. (2005) Current Protocols in Pharmacology 12.9.1-12.

Efectos de los análogos de PYY sobre la ingesta de alimentos

La ingesta de alimentos acumulada después de 6 h se determinó para los análogos de PYY en ratones C57BL/6 obesos magros (Modelo A) o inducidos por la dieta (DIO) (Modelo B) en un sistema BioDaQ para monitorización continua de la ingesta de alimentos (Research Diets Inc., New Brunswick, NJ). El Modelo A utilizó ratones C57BL/6 machos de 10 semanas de edad (Taconic, Germantown, Nueva York) alimentados con una comida normal (Purina PMI 5001), mientras que el Modelo B usó ratones C57BL/6 machos de 25 semanas de edad alimentados con una comida alta en grasa al 45% durante 20 semanas. (Research Diets D12451). Los ratones se colocaron individualmente en las jaulas de BioDaQ y se aclimataron durante un mínimo de 6 días y se les permitió el acceso ad ¡ibitum a alimentos y agua. Aproximadamente 1 hora antes de que se apagara la luz, los animales se dosificaron por vía subcutánea con vehículo (tampón de acetato 20 mM, pH 4,9 o DMSO al 20% en agua) o análogos disueltos en el vehículo (1 mg/kg) (8 animales por grupo). Una vez que se había dosificado a todos los animales, las puertas de alimentación se abrieron proporcionando un acceso ad ¡ibitum a los alimentos. Se monitorizó y recogió la ingesta continua de alimentos durante 15 horas. La ingesta de alimentos por hora, así como la ingesta de alimentos acumulada de 6 y 15 horas, se resumió como % de inhibición en relación con los vehículos control. Los datos se analizaron en JMP 6.0.0 (SAS Institute, Cary, NC) utilizando una prueba t de varianza combinada frente a grupos tratados con PYY(3-36)NH²humano. Se consideró que los valores de p <0,05 indicaban una diferencia significativa entre los grupos de tratamiento.

La Tabla 1 muestra la potencia en el receptor del neuropéptido Y humano y la reducción en la ingesta de alimentos para los análogos de PYY mostrados en los Ejemplos 1-35.

La Tabla 2 muestra ejemplos de análogos de PYY que tienen potencia en el receptor del neuropéptido Y humano pero que no muestran una reducción de la ingesta de alimentos mayor que PYY(3-36)NH humano en el punto de tiempo de 6 h.

Efectos del Ejemplo 5 en combinación con Exendín-4 sobre el peso corporal, la composición corporal y la reducción de la ingesta de alimentos

Se realizó un estudio de eficacia in vivo crónico (41 días) en un modelo de roedor para la obesidad (rata Long Evans con obesidad inducida por la dieta (DIO)) para investigar la eficacia y la durabilidad del Ejemplo 5 individualmente y en combinación con exendín-4 como agentes anti-obesidad.

Se utilizaron ratas Long Evans (LE) obesas inducidas por la dieta macho (DIO) (Harlan Laboratories, Inc., Indianapolis, IN) y, comenzando desde el destete (aproximadamente 3 semanas de edad), las ratas se alimentaron con una comida alta en grasa (Teklad TD 95217, 40% kcal de grasa, Harlan Laboratories, Madison, WI). Las ratas tenían 17 semanas de edad al inicio del estudio. Las ratas se alojaron 1 por jaula y se les dio acceso ad libitum a comida TD.95217 y agua, se mantuvieron en un ciclo de luz/oscuridad de 12 h de 5:00 AM a 5:00 PM a 21 ° C y 50% de humedad relativa y se les permitió aclimatarse durante al menos 7 días antes de las mediciones de referencia. Las mediciones de referencia de masa grasa y masa no grasa se tomaron 3 días antes del inicio de la infusión de péptidos y en el día 40 del tratamiento utilizando un instrumento QMR (Echo Medical Systems, Houston, TX). Las ratas se asignaron al azar de acuerdo con su porcentaje de masa de grasa corporal en 6 grupos: (1) vehículo (agua estéril, n=8), (2) Exendín-4 (DE⁵⁰=0,15 mg/kg/día, n=8), (3) Ejemplo 5 (DE⁵⁰=0,03 mg/kg/día, n=8), (4) PYY(3-36)NH2 (1,5 mg/kg/día, n=8), (5) Exendín-4+ Ejemplo 5 (n=8) y (6) Exendín-4+ PYY(3-36)NH2 (n=8). Las bombas miniosmóticas AIZET® (6 semanas; Modelo 2006, Durect Corporation, Cupertino, CA) se llenaron en condiciones estériles con vehículo o péptido un día antes de la cirugía. Cada rata se implantó con dos bombas osmóticas por vía subcutánea en la región de la escápula que contienen vehículo o péptido de acuerdo con su grupo de tratamiento. El peso corporal y la ingesta de alimentos se midieron dos veces por semana, comenzando tres días antes del período de tratamiento de 41 días. En el día 41 de tratamiento, la sangre completa se recogió con un palillo cardíaco bajo anestesia con isoflurano. A continuación, se prepararon plasma y suero a partir de sangre completa para el análisis químico del suero. Todos los datos se presentan como la media ±SEM. Los datos se analizaron en Prism (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA) o Excel utilizando una prueba T de Student para comparar cada grupo con el grupo de control apropiado. Se consideró que los valores de p <0,05 indicaban una diferencia significativa entre los grupos de tratamiento.

Todos los procedimientos se realizaron de conformidad con la Ley de Bienestar Animal, las regulaciones del USDA y se aprobaron por el Institutional Animal Care and Use Committee de GlaxoSmithKline.

En ratas DIO, la administración del Ejemplo 5 en la DE⁵⁰para la pérdida de peso durante 40 días dio como resultado una pérdida de peso del -6,1% (p <0,05), mientras que el PYY(3-36)NH2 natural en la DE⁵⁰dio como resultado una pérdida de peso del -1,3% (p = 0,46). ) frente al vehículo (Figura 1). La combinación del Ejemplo 5 y la exendín-4 en dosis combinadas de DE⁵⁰durante 40 días dio como resultado una pérdida de peso sostenida y significativa de -30,9% frente al vehículo (p <0,05), que superó con creces el efecto aditivo esperado basado en la pérdida de peso de exendín-4 y el Ejemplo 5 cuando se administraron solos (-11,3% y -6,1%, respectivamente, con una pérdida de peso aditiva proyectada de -17,4%). Mientras que, el PYY(3-36)NH2 natural en combinación con exendín-4 dio como resultado una pérdida de peso del -10,2% en comparación con el vehículo, que era subaditivo basado en la pérdida de peso de exendín-4 y PYY(3-36)NH2 cuando se administra solo (-11,3% y -1,3%, con una pérdida de peso aditiva proyectada de -12,6%).

Los cambios en la composición corporal se debieron principalmente a la pérdida de masa grasa corporal, con algunos cambios en la masa no grasa y reflejaron los cambios en el peso corporal en todos los grupos de tratamiento (Figura 2). De manera específica, los animales tratados con el Ejemplo 5 perdieron - 34,2 gramos de masa grasa a partir del vehículo control (p <0,05), los animales con PYY(3-36)NH2 perdieron -10,9 gramos de masa grasa (p = 0,12 frente al vehículo control) y los animales tratados con exendín-4 perdieron -55,8 gramos de masa grasa (p <0,05 frente al vehículo control) durante el período de tratamiento. La combinación del Ejemplo 5 exendín-4 tuvo un efecto más que aditivo sobre la masa grasa, donde la combinación perdió -110,1 gramos (p <0,05 frente al vehículo control), que fue significativamente mayor que el valor de aditividad previsto de -90 gramos (p < 0,05) (Figura 3). En cambio, PYY(3-36)NH2 en combinación con exendín-4 dio como resultado una pérdida de masa grasa de -54,0 gramos frente al vehículo (p <0,05), que fue menor que el valor de aditividad previsto de -66,7 gramos.

Además, se observó una inhibición del -57,1% de la ingesta de alimentos acumulada (p <0,05 frente al vehículo control) cuando el Ejemplo 5 se administró conjuntamente con exendín-4 en comparación con la inhibición del -18,8% (p = 0,87 frente al vehículo control) con la combinación PYY(3-36)NH2 exendín-4. Parece haber una eficacia más que aditiva con la combinación del Ejemplo 5 exendín-4 basada en la inhibición de la ingesta de alimentos de cada péptido administrado solo (-11,5% y -20,1%, respectivamente, con una inhibición de la ingesta de alimentos aditiva proyectada de -31,6 %). En cambio, la combinación de PYY(3-36)NH2 natural exendín-4 dio como resultado una inhibición de la ingesta de alimentos subaditiva basada en la inhibición de la ingesta de alimentos de cada péptido administrado solo (-0,7% para PYY(3-36)NH2 y -20,1% para exendin-4, con una inhibición de la ingesta de alimentos aditiva proyectada de -20,8 %).

El Ejemplo 23 en combinación con exendín-4 causa efectos más que aditivos en los parámetros de glucosa en ratas ZDF diabéticas

Se realizó un estudio de eficacia in vivo crónico (26 días) en un modelo de roedor para diabetes (rata Zucker Diabetic Fatty (ZDF)) para investigar la eficacia y la durabilidad del Ejemplo 23 individualmente y en combinación con exendín-4 como agentes antidiabetes.

Las ratas ZDF macho tenían 12 semanas de edad al inicio del estudio (Charles River, Inc., Boston, MA). Las ratas ZDF se alojaron 1 por jaula y se les dio acceso ad libitum a la dieta (Purina PMI 5008) y agua, se mantuvieron en un ciclo de luz/oscuridad de 12 horas de 5:00 A.M. a 5:00 P.M. a 21 °C y 50% de humedad relativa y se permitió que se aclimataran durante al menos 6 días antes de las mediciones de referencia y 10 días antes de las cirugías. Las mediciones de referencia de masa grasa y masa no grasa se tomaron 3 días antes del inicio de la infusión de péptidos y en el día 26 del tratamiento utilizando un instrumento QMR (Echo Medical Systems, Houston, TX). Las muestras de sangre se tomaron mediante un corte de la cola para medir los valores de glucosa alimentados y los valores de % de HbA1c dos días antes del inicio de la dosificación del fármaco; estos datos se utilizaron para aleatorizar a los animales en 7 grupos: (1) Vehículo control magro (solución salina tamponada con fosfato estéril (PBS), pH 4,9, n=8), (2) Vehículo control de ZDF (PBS estéril, pH 4,9, n=8), (3) Exendín-4 (DE²⁰= 0,00 55 mg/kg/día, n=8), (4) Ejemplo 23 (DE²⁰=0,02 mg/kg/día, n=8), (5) PYY(3-36)NH²(0,02 mg/kg/día, n=8), (6) Exendín-4+ Ejemplo 23 (n=4) y (7) Exendín-4+ PYY(3-36)NH²(n=8). Las bombas miniosmóticas AIZET® (4 semanas; Modelo 2006, Durect Corporation, Cupertino, CA) se llenaron en condiciones estériles con vehículo o péptido un día antes de la cirugía. Se realizó una implantación quirúrgica similar de las minibombas como se describe para las ratas DIO anteriormente (excepto que a los animales se les inyectó ID con lidocaína (0,1 ml de lidocaína al 0,125%). El peso corporal y la ingesta de alimentos se midieron dos veces por semana, comenzando 3 días antes del período de tratamiento de 26 días. En el día 26 de tratamiento, la sangre completa se recogió con un palillo cardíaco bajo anestesia con isoflurano. La sangre completa se utilizó para determinar el % de HbA1c y el suero se usó para medir la glucosa. Los datos se analizaron en Prism (GraphPad Software, Inc., La Jolla, CA) o Excel utilizando una prueba T de Student para comparar cada grupo con el grupo de control apropiado. Se consideró que los valores de p <0,05 indicaban una diferencia significativa entre los grupos de tratamiento.

La Tabla 3 muestra los cambios de glucosa y HbA1c glicosilada desde el inicio y a partir de los animales ZDF de vehículo control (AA) después del tratamiento crónico (26 días) con el Ejemplo 23, PYY(3-36)NH², o exendín-4 individualmente o en combinación. Individualmente, soloexendín-4 y el Ejemplo 23 lograron un descenso de glucosa estadísticamente significativo a partir del vehículo control (AA -53,9 y -54,5 mg/dl, respectivamente; p<0,05) en comparación con PYY(3-36)NH²(AA-33,1; p= 0,11). El tratamiento con la combinación del Ejemplo 23 y la combinación de exendín-4 a dosis de DE²⁰para la reducción de HbA1c durante 26 días dio como resultado una reducción AA significativa de la glucosa de -152,3 mg/dl (p <0,05 frente al vehículo control), que excedió el efecto aditivo esperado basado en reducción de la glucosa de exendín-4 y el Ejemplo 23 cuando se administran solos (AA -53,9 y -54,5 mg/dl, con una disminución de la glucosa aditiva proyectada de -108,4 mg/dl frente al vehículo control). Los niveles de AA% de HbA1c reflejaron de cerca los cambios de glucosa en todos los grupos de tratamiento, sin embargo, ninguno de los grupos se consideró estadísticamente significativo.

Tabla 3. Cambios en la glucosa y HbA1c después de 26 días de tratamiento con el Ejemplo 23 y/o exendín-4 individualmente y en combinación en ratas ZDF

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Organización Solicitante

Calle: 980 Great West Road

Ciudad: Brentford

Estado: Middlesex

País: Reino Unido

Código Postal: TW8 9SG

Número de Teléfono:

Número de Fax:

Dirección de correo electrónico:

<110> Nombre de la Organización: GlaxoSmithKline Intellectual Property (No. 2) Ltd.

Solicitante Individual

Calle:

Ciudad:

Estado:

País:

Código Postal:

Número de Teléfono:

Número de Fax:

Dirección de correo electrónico:

<110> Apellido: Dock

<110> Nombre: Steven

<110> Inicial del segundo nombre:

<110> Sufijo:

Solicitante Individual

Calle:

Ciudad:

Estado:

País:

Código Postal:

Número de Teléfono:

Número de Fax:

Dirección de correo electrónico:

<110> Apellido: Carpenter

<110> Nombre: Andrew

<110> Inicial del segundo nombre:

<110> Sufijo:

Solicitante Individual

Calle:

Ciudad:

Estado:

País:

Código Postal:

Número de Teléfono:

Número de Fax:

Dirección de correo electrónico:

<110> Apellido: Hunter

<110> Nombre: Robert

<110> Inicial del segundo nombre:

<110> Sufijo:

Solicitante Individual

Calle:

Ciudad:

Estado:

País:

Código Postal:

Número de Teléfono:

Número de Fax:

Dirección de correo electrónico:

<110> Apellido: Srivstava

<110> Nombre: Ved

<110> Inicial del segundo nombre:

<110> Sufijo:

Solicitante Individual

Calle:

Ciudad:

Estado:

País:

Código Postal:

Número de Teléfono:

Número de Fax:

Dirección de correo electrónico:

<110> Apellido: Yulin

<110> Nombre: Wu

<110> Inicial del segundo nombre:

<110> Sufijo: Proyecto de Solicitud

<120> Título: PÉPTIDOS TERAPÉUTICOS

<130> Referencia del archivo de la solicitud: PR65431

<140> Número de Solicitud Actual:

<141> Fecha de presentación Actual: _-_-_ Solicitudes Anteriores

<150> Número de Solicitud Anterior: US 61/818.624 <151> Fecha de presentación anterior: 02/05/2013 Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEXPGXDA SXEEXXXYYA XLRXYXNWXT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

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Descripción de la Secuencia:

Característica

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Otra información: X = A, H o S

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Otra información: X = P o A

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Característica

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Característica

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Característica

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Otra información: X = V o L

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Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEXPGXDA SXEEXXXYYA XLRXYXNWXT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

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Otra información: X = P o A

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Característica

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Otra información: X = L o W

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Otra información: X = N, A o T

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Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 2:

<221> Característica Clave: MISC_FEATURE <222> Localización Desde: 17

<222> Localización Hasta: 17

Otra información: X = R o K

Unión de CDS: No

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 2:

<221> Característica Clave: MISC_FEATURE <222> Localización Desde: 21

<222> Localización Hasta: 21

Otra información: X = S, D o A

Unión de CDS: No

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 2:

<221> Característica Clave: MISC_FEATURE <222> Localización Desde: 24

<222> Localización Hasta: 24

Otra información: X = H o K

Unión de CDS: No

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 2:

<221> Característica Clave: MISC_FEATURE <222> Localización Desde: 26

<222> Localización Hasta: 26

Otra información: X = L o I

Unión de CDS: No

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 2:

<221> Característica Clave: MISC_FEATURE <222> Localización Desde: 29

<222> Localización Hasta: 29

Otra información: X = V o L

Unión de CDS: No

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 2:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEELNRYYA SLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 3

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 3:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEELNRYYA SLRKYLNWLT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 4

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 4:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEELNRYYA SLRHYLNWLT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 5

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 5:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA DLRKYLNWLT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 6

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 6:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYLNWLT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 7

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 7:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA SLRKYLNWLT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 8

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 8:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA SLRHYLNWLT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 9

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 9:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA DLRKYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 10

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 10:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 11

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 11:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA SLRKYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 12

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 12:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA SLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 13

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 13:

<221> Característica Clave: MOD RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGEDA SPEELNRYYA SLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 14

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 14:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWNRYYA ALRKYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 15

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 15:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEELNKYYA ALRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 16

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 16:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEELNRYYA SLRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 17

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 17:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEELARYYA SLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 18

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 18:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWNRYYA SLRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 19

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 19:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 20

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 20:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 21

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 21:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPESPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 22

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 22:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPESPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 23

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 23:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYLNWLT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 24

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 24:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWAKYYA ALRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 25

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 25:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 26

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 26:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWNRYYA SLRKYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 27

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 27:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SAEEWAKYYA ALRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 28

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 28:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SAEEWNRYYA SLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 29

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 29:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SAEELARYYA SLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 30

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 30:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SAEEWNRYYA SLRKYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 31

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 31:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPESPGKDA SAEEWTKYYA ALRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 32

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 32:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEELNRYYA SLRKYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 33

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 33:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGEDA SPEEWAKYYA ALRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO:34

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO:34:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGEDA SAEEWNRYYA SLRHYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 35

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 35:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPESPGEDA SPEEWTKYYA ALRHYINWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 36

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 36:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGEDA SPEEWNRYYA DLRHYLNWLT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 37

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 37:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYLNWLT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 38

Descripción de la Secuencia:

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGCDA SAEEWNRYYA SLRHYLNWVT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 39

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 39:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 8

<222> Localización Hasta: 8

Otra información: El resto se modifica como se ilustra en la memoria descriptiva. Unión de CDS: No

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 39:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWNRYYA DLRHYLNWLT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 40

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 40:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 8

<222> Localización Hasta: 8

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 40:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEELNRYYA SLRHYLNWVT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 41

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 41:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 8

<222> Localización Hasta: 8

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 41:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPESPGKDA SPEEWTKYYA ALRHYINWVT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 42

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 42:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 8

<222> Localización Hasta: 8

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 42:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGKDA SPEEWAKYYA ALRHYINWVT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 43

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 43:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 8

<222> Localización Hasta: 8

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 43:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGCDA SPEEWNRYYA SLRHYLNWVT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 44

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 44:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 8

<222> Localización Hasta: 8

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 44:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGCDA SPEEWAKYYA ALRHYINWVT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 45

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 45:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 8

<222> Localización Hasta: 8

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 45:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGCDA SPEEWNRYYA SLRKYLNWVT RQNY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 46

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 46:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

IKPEAPLSKQ LEEEAVRYYA SLRHYLNLVT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 47

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 47:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGEDA SPKEWNRYYA SLRKYLNWVT RQRY 34

<212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 48

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 48:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGEDA SPEELNRYHA ALRAYLNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 49

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 49:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGEDA SPEELNRYYA ALRAYLNLVT RQKY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 50

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 50:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEHPGEDA SPEELNRYYA ALRAYLNLVT KQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 51

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 51:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PQPESPGCNA SPEELAKYHA ALRHYVNLIT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 52

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 52:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

IKPPYPGCDA SPEEQNKYYA SLRAYWNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 53

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 53:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPESPGSNA SPEDWAKYQA AVRHYVNLIT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 54

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 54:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PEPEHPGCDA SPEDQNKYHA SLRKYLNWVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 55

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 55:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

IKPPEPGCDA SPEEQNKYYA SLRHYWNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 56

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 56:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

IEPEAPGEDA SPEELNRYYA SLRHYLNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 57

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 57:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPESPGSDA SPEDLAKYHA AVRHYVNLIT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 58

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 58:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGCDA SPEEWNRYYA SLRKYLNWVT RQHY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 59

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 59:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPVAPGCDA SPAELNRQYS DLRNYWNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 60

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 60:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

IQPEAPGEDA SPEELNRYYA SLRHYLNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 61

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 61:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPESPGKDA SPEDLAKYHA AVRHYVNLIT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 62

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 62:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PQPESPEGNA SPEDWACYHA AVRHYVNLIT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 63

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 63:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

IHPEAPGEDA SPEELNRYYA SLRHYLNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 64

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 64:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

IKPEAPGEDA SPEQLMAQYA SLRHYLNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 65

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 65:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPLSKQ LEEEAVRYYA SLRHYLNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 66

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 66:

<221> Característica Clave: MOD_RES

<222> Localización Desde: 34

<222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN

Unión de CDS: No

Secuencia

<213> Nombre del Organismo: Secuencia Artificial

<400> Cadena de secuencia Anterior:

PKPEAPGCDA SPEELNRYQA SLRHYLNLVT RQRY 34 <212> Tipo: PRT

<211> Longitud: 34

Nombre de la Secuencia: SEQ ID NO: 67

Descripción de la Secuencia:

Característica

Secuencia: SEQ ID NO: 67:

<221> Característica Clave: MOD_RES <222> Localización Desde: 34 <222> Localización Hasta: 34

Otra información: AMIDACIÓN Unión de CDS: No

Claims

REIVINDICACIONES

1. Un polipéptido que consiste en la secuencia de aminoácidos:

ProLysProGluXaai ProG lyXa^ AspAlaSerXaa3GluGluXaa⁴Xaa⁵Xaa6TyrTyrAlaXaa7LeuArgXaa8TyrXaa9AsnTrpXaai0ThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:2) o una sal del mismo, en la que:

Xaai es Ala, His o Ser;

Xaa²es Glu o Lys;

Xaa³es Pro o Ala;

Xaa4 es Leu o Trp;

Xaa5 es Asn, Ala o Thr;

Xaa6 es Arg o Lys;

Xaa⁷es Ser, Asp o Ala;

Xaa8 es Hiso Lys;

Xaa9 es Leu o Ile; y

Xaai0 es Val o Leu.

2. El polipéptido de la reivindicación 1, que se selecciona del grupo que consiste en:

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:3),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:4),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:5),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:6),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:7),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ IDNO:8),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla

SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:9),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO: 10),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO: 11), ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:12),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:13),

ProLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:14),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AlaLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:15),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:16),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:17),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAlaArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:18),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:19),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAlaLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrlleAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:25),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrIleAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:26),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpAlaLysTyrTyrAla AlaLeuArgHisTyrIleAsnTrpValThrArgGInArgTyr-Nhh (SEQ ID NO:28),

ProLysProGluHisProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluLeuAlaArgTyrTyrAla SerLeuArgHisTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:30),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerAlaGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:31),

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluLeuAsnArgTyrTyrAla SerLeuArgLysTyrLeuAsnTrpValThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:33),

y

ProLysProGluAlaProGlyGluAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2 (SEQ ID NO:37).

3. El polipéptido de la reivindicación 2, que consiste en la secuencia de aminoácidos:

ProLysProGluAlaProGlyLysAspAlaSerProGluGluTrpAsnArgTyrTyrAla AspLeuArgHisTyrLeuAsnTrpLeuThrArgGlnArgTyr-NH2(SEQ ID NO:7).

4. Una forma de sal del polipéptido de la reivindicación 3.

5. Una forma de sal del polipéptido de acuerdo con la reivindicación 4, en la que dicha sal es la sal de acetato.

6. Una combinación farmacéutica que comprende un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y un exendín-4 o GLP-1.

7. Una composición farmacéutica que comprende un polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-5 y un transportador farmacéuticamente aceptable.

8. Un polipéptido de acuerdo con las reivindicaciones 1-5 o una combinación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7 para su uso en terapia.

9. Un polipéptido de acuerdo con las reivindicaciones 1-5 o una combinación farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 6 o una composición farmacéutica de acuerdo con la reivindicación 7 para su uso en el tratamiento de un trastorno metabólico seleccionado de: obesidad, diabetes mellitus de Tipo 2, diabetes de tipo 1, diabetes gestacional, hiperglucemia, tolerancia alterada a la glucosa y deficiencia de células beta.

10. Una molécula de ácido nucleico que codifica una secuencia de polipéptido de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1-3.

11. Un vector de expresión que comprende una molécula de ácido nucleico de acuerdo con la reivindicación 10.

12. Una célula hospedadora que contiene un vector de expresión de acuerdo con la reivindicación 11.