ES2539835T3 - Pirazolilaminopiridinas como inhibidores de FAK - Google Patents

Abstract

2-([5-Cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]-N-(metiloxi)benzamida, que es un compuesto de fórmula (Ia)**Fórmula** o una sal del mismo.

Description

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Tratamientos

Los compuestos y composiciones de la invención se usan para tratar enfermedades de proliferación celular. Las patologías que pueden tratarse por los métodos y composiciones que se proporcionan en la presente memoria incluyen, pero sin limitación, cáncer, enfermedad autoinmune, trastornos fúngicos, artritis, rechazo de injertos, enfermedad inflamatoria del intestino, proliferación inducida después de procedimientos médicos incluyendo, pero sin limitación, cirugía, angioplastia y similares. Se aprecia que, en algunos casos, las células pueden no estar en un estado de hiper-o hipoproliferación (estado anormal) y aún así requerir tratamiento. Por ejemplo, durante la curación de heridas, las células pueden estar proliferando “Normalmente”, pero puede desearse un aumento de la proliferación. Por lo tanto, una realización incluye la aplicación a células o individuos aquejados o que se verán aquejados de forma inminente con uno cualquiera de estos trastornos o estados. Estos compuestos también pueden usarse para tratar la degeneración macular asociada con la neovascularización, tal como AMD.

Las composiciones y métodos proporcionados en la presente memoria se consideran particularmente útiles para el tratamiento de cánceres incluyendo tumores tales como carcinomas de piel, mama, cerebro, cervical, carcinomas testiculares, etc. Son particularmente útiles en el tratamiento de tumores metastásicos o malignos. Más particularmente, los cánceres que pueden tratarse mediante las composiciones y métodos de la invención incluyen, pero sin limitación, tipos tumorales tales como carcinomas y sarcomas astrocíticos, de mama, cervicales, colorrectales, endometriales, esofágicos, gástricos, de cabeza y cuello, hepatocelulares, laríngeos, pulmonares, orales, de ovario, próstata y tiroides. Más específicamente, estos compuestos pueden usarse para tratar: sarcoma cardiaco (angiosarcoma, fibrosarcoma, rabdomiosarcoma, liposarcoma), mixoma, rabdomioma, fibroma, lipomas y teratoma; pulmón: carcinoma broncogénico (de células escamosas, de células pequeñas no diferenciado, de células grandes no diferenciado, adenocarcinoma), carcinoma alveolar (bronquiolar), adenoma bronquial, sarcoma, linfoma, hamartoma condromatoso, mesotelioma; gastrointestinal: esófago (carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, leiomiosarcoma, linfoma), estómago (carcinoma, linfoma, leiomiosarcoma), páncreas (adenocarcinoma de ductal, insulinoma, glucagonoma, gastrinoma, tumores carcinoides, vipoma), intestino delgado (adenocarcinoma, linfoma, tumores carcinoides, sarcoma de Kaposi, leiomioma, hemangioma, lipoma, neurofibroma, fibroma), intestino grueso (adenocarcinoma, adenoma tubular, adenoma velloso, hamartoma, leiomioma); tracto genitourinario: riñón (adenocarcinoma, tumor de Wilm (nefroblastoma), linfoma, leucemia), vejiga y uretra (carcinoma de células escamosas, carcinoma de células de transición, adenocarcinoma), próstata (adenocarcinoma, sarcoma), testículo (seminoma, teratoma, carcinoma embrionario, teratocarcinoma, coriocarcinoma, sarcoma, carcinoma de células intersticiales, fibroma, fibroadenoma, tumores adenomatoides, lipoma); hígado: hepatoma (carcinoma hepatocelular), colangiocarcinoma, hepatoblastoma, angiosarcoma, adenoma hepatocelular, hemangioma; hueso: sarcoma osteogénico (osteosarcoma), fibrosarcoma, histiocitoma fibroso maligno, condrosarcoma, sarcoma de Ewing, linfoma maligno (sarcoma de células del retículo), mieloma múltiple, cordoma tumoral de células gigantes maligno, osteocondroma (exostosis osteocartilaginosa), condroma benigno, condroblastoma, condromixofibroma, osteoma osteoide y tumores de células gigantes; sistema nervioso: cráneo (osteoma, hemangioma, granuloma, xantoma, osteítis deformante), meninges (meningioma, meningiosarcoma, gliomatosis), cerebro (astrocitoma, meduloblastoma, glioma, ependimoma, germinoma (pinealoma), glioblastoma multiforme, oligodendroglioma, schwannoma, retinoblastoma, tumores congénitos), neurofibroma de medula espinal, meningioma, glioma, sarcoma); ginecológico: útero (carcinoma endometrial), cuello del útero (carcinoma cervical, displasia cervical pretumoral), ovarios (carcinoma ovárico) (cistoadenocarcinoma seroso, cistoadenocarcinoma mucinoso, carcinoma no clasificado), tumores de células de la granulosa-teca, tumores de células de Sertoli-Leydig, disgerminoma, teratoma maligno), vulva (carcinoma de células escamosas, carcinoma intraepitelial, adenocarcinoma, fibrosarcoma, melanoma), vagina (carcinoma de células claras, carcinoma de células escamosas, sarcoma botrioide (rabdomiosarcoma embrionario), carcinoma de trompas de Falopio; hematológico: sangre (leucemia mieloide (aguda y crónica), leucemia linfoblástica aguda, leucemia linfocítica crónica, enfermedades mieloproliferativas, mieloma múltiple, síndrome mielodisplásico), enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin (linfoma maligno); piel: melanoma maligno, carcinoma de células basales, carcinoma de células escamosas, sarcoma de Kaposi, nevus displásico o mola, lipoma, angioma, dermatofibroma, queloides, psoriasis; y glándulas suprarrenales: neuroblastoma. Por lo tanto, la expresión “célula cancerosa”, como se proporciona en la presente memoria, incluye una célula afectada por uno cualquiera o relacionada con las afecciones identificadas anteriormente.

En comparación con derivados de 2,4-diaminopiridina relacionados descritos en otra parte, los compuestos de la presente invención contienen una función éster de ácido hidroxámico en el anillo de 4-aminofenilo en la posición 2 y un aminopirazol en la posición 2 en el anillo de piridina. La función éster de ácido hidroxámico en el anillo de fenilo en comparación con la amida correspondiente aumenta la potencia frente a la FAK del orden de 2,5 veces, particularmente in vitro, y mejora la selectividad por FAK con respecto a otras enzimas. El pirazol reduce la reactividad en el citocromo P450. Por lo tanto, la combinación de la construcción de éster de ácido hidroxámico en el anillo de fenilo con un aminopirazol en posición 2 en el anillo de piridina proporciona compuestos con mayor seguridad y eficacia con respecto a otros inhibidores de FAK tales como los derivados de 2,4-diaminopiridina.

Los compuestos aquí descritos pueden combinarse con o co-administrarse con otros agentes terapéuticos, particularmente agentes que pueden aumentar la actividad o el tiempo de disposición de los compuestos. Las terapias de combinación comprenden la administración de al menos un compuesto descrito y el uso de al menos otro método de tratamiento. En una realización, las terapias de combinación de acuerdo con la invención comprenden la administración de al menos un compuesto descrito y terapia quirúrgica. En una realización, las terapias de

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combinación comprenden la administración de al menos un compuesto descrito y radioterapia. En una realización, las terapias de combinación comprenden la administración de al menos un compuesto descrito y al menos un agente de cuidados paliativos (por ejemplo, al menos un agente antiemético). En una realización, las terapias de combinación comprenden la administración de al menos un compuesto descrito y al menos otro agente quimioterapéutico. En una realización particular, la invención comprende la administración de 2-[(5-cloro-2-{[3-metil1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]-N-(metilloxi)benzamida o una sal del mismo farmacéuticamente aceptable y al menos un agente antineoplásico.

Mediante la expresión “co-administración” y derivados de la misma como se usa en la presente memoria, se entiende la administración simultánea o cualquier forma de administración secuencial separada de un compuesto que inhibe la FAK, como se describe en la presente memoria, y un ingrediente o ingredientes activos adicionales, que se sabe que son útiles en el tratamiento de cánceres, incluyendo quimioterapia y tratamiento de radiación. La expresión ingrediente o ingredientes activos adicionales, como se usa en la presente memoria, incluye cualquier compuesto o agente terapéutico que se sabe que o que demuestra propiedades ventajosas cuando se administra a un paciente que necesita tratamiento para un cáncer. Preferiblemente, si la administración no es simultánea, los compuestos se administran con una estrecha proximidad en el tiempo entre sí. Además, no importa si los compuestos se administran en la misma forma de dosificación, por ejemplo, un compuesto puede administrarse por vía tópica y otro compuesto puede administrarse por vía oral.

Típicamente, cualquier agente antineoplásico que tenga actividad frente a un tumor susceptible que se trate puede co-administrarse en el tratamiento de cánceres especificados en la presente invención. Pueden encontrarse ejemplos de dichos agentes en Cancer Principles and Practice of Oncology de V.T. Devita and S. Hellman (editors), 6ª edición (15 de febrero de 2001), Lippincott Williams & Wilkins Publishers. Un especialista en la técnica sería capaz de discernir las combinaciones de agentes que serían útiles basándose en las características particulares de los fármacos y el cáncer implicado. Los agentes antineoplásicos típicos útiles en la presente invención incluyen, pero sin limitación, agentes anti-microtúbulos tales como diterpenoides y alcaloides de la vinca; complejos de coordinación de platino; agentes alquilantes tales como mostazas nitrogenadas, oxazafosforinas, alquilsulfonatos, nitrosoureas y triacenos; agentes antibióticos tales como antraciclinas, actinomicinas y bleomicinas; inhibidores de la topoisomerasa II tales como epipodofilotoxinas; antimetabolitos tales como análogos de purina y pirimidina y compuestos anti-folato; inhibidores de la topoisomerasa I tales como camptotecinas; hormonas y análogos hormonales; inhibidores de la ruta de transducción de señales; inhibidores de la angiogénesis o de tirosina quinasa no asociada a receptores; agentes inmunoterapéuticos; agentes proapoptóticos e inhibidores de la señalización del ciclo celular.

Típicamente, cualquier agente quimioterapéutico que tenga actividad contra un neoplasma susceptible de tratarse puede utilizarse en combinación con los compuestos de la invención, siempre que el agente particular sea clínicamente compatible con la terapia que emplea un compuesto de la invención. Los agentes antineoplásicos típicos útiles en la presente invención incluyen, pero sin limitación: agentes alquilantes, antimetabolitos, antibióticos antitumorales, agentes antimitóticos, inhibidores de la topoisomerasa I y II, hormonas y análogos hormonales; retinoides, inhibidores de la ruta de transducción de señales incluyendo inhibidores del crecimiento celular o de la función de factores de crecimiento, inhibidores de la angiogénesis e inhibidores de serina/treonina quinasa u otras quinasas; inhibidores de quinasa dependiente de ciclina; terapias antisentido y agentes inmunoterapéuticos incluyendo monoclonales, vacunas u otros agentes biológicos.

Los inhibidores de la ruta de transducción de señales son los inhibidores que bloquean o inhiben un proceso químico que provoca un cambio intracelular. Como se usa en la presente memoria, este cambio es la proliferación, diferenciación o supervivencia celular. Los inhibidores de la ruta de transducción de señales útiles en la presente invención incluyen, pero sin limitación, inhibidores de tirosina quinasas asociadas a receptores, tirosina quinasas no asociadas a receptores, bloqueantes del dominio SH2/SH3, serina/treonina quinasas, fosfatidil inositol-3-OH quinasas, señalización de mioinositol y oncogenes Ras. En las composiciones y métodos descritos anteriormente pueden emplearse inhibidores de la ruta de transducción de señales en combinación con los compuestos de la invención.

También pueden encontrar utilidad en la presente invención inhibidores de la angiogénesis que son inhibidores de quinasas asociadas a receptores. Anteriormente se han descrito inhibidores de la angiogénesis relacionados con VEGFR y TIE-2 en relación con los inhibidores de la transducción de señales (ambos son tirosina quinasas asociadas a receptores). Pueden usarse otros inhibidores en combinación con los compuestos de la invención. Por ejemplo, también pueden resultar útiles en combinación con los compuestos de la invención anticuerpos anti-VEGF que no reconocen VEGFR (la tirosina quinasa asociada a receptores), pero se unen al ligando; inhibidores de molécula pequeña de integrina (alfav beta3) que inhiben la angiogénesis; endostatina y angiostatina (no-RTK). Un ejemplo de un anticuerpo contra VEGFR es bevacizumab (AVASTIN).

Están en desarrollo varios inhibidores de receptores de factores de crecimiento e incluyen antagonistas de ligandos, anticuerpos, inhibidores de tirosina quinasa, oligonucleótidos antisentido y aptámeros. Cualquiera de estos inhibidores de receptores de factores de crecimiento puede emplearse en combinación con los compuestos de la invención en cualquiera de las composiciones y métodos/usos descritos en la presente memoria. El trastuzumab (Herceptin) es un ejemplo de un anticuerpo anti-erbB2 inhibidor de la función de factores de crecimiento. Un

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la vinca semisintético. La vinorelbina está indicada como un agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos tales como cisplatino en el tratamiento de diversos tumores sólidos, particularmente cáncer pulmonar no microcíticos, de mama avanzado y de próstata que no responde a tratamiento con hormonas. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de la vinorelbina.

Los complejos de coordinación de platino son agentes anticancerosos sin especificidad de fase que interaccionan con el ADN. Los complejos de platino entran en las células tumorales, experimentan acuación y forman entrecruzamientos intra-e intercatenarios con el ADN causando efectos biológicos adversos en el tumor. Los ejemplos de complejos de coordinación de platino incluyen, pero sin limitación, cisplatino y carboplatino.

El cisplatino, cis-diaminodicloroplatino, está disponible en el mercado como PLATINOL como una solución inyectable. El cisplatino está indicado principalmente en el tratamiento de cáncer testicular y ovárico metastásico y cáncer de vejiga avanzado. Los efectos secundarios limitantes de la dosis principales del cisplatino son nefrotoxicidad, que puede controlarse mediante hidratación y diuresis, y ototoxicidad.

El carboplatino, diamino [1,1-ciclobutano-dicarboxilato(2-)-O,O’] de platino está disponible en el mercado como PARAPLATIN como una solución inyectable. El carboplatino está indicado principalmente en el tratamiento de primera y segunda línea del carcinoma de ovario avanzado. La supresión de la médula ósea es la toxicidad limitante de la dosis del carboplatino.

Los agentes alquilantes son agentes anticancerosos sin especificidad de fase y electrófilos fuertes. Típicamente, los agentes alquilantes forman enlaces covalentes, por alquilación, con el ADN a través de restos nucleófilos de la molécula de ADN tales como grupos fosfato, amino, sulfhidrilo, hidroxilo, carboxilo e imidazol. Dicha alquilación altera la función del ácido nucleico ocasionando la muerte celular. Los ejemplos de agentes alquilantes incluyen, pero sin limitación, mostazas nitrogenadas tales como ciclofosfamida, melfalán y clorambucilo; alquil sulfonatos tales como busulfán; nitrosoureas tales como carmustina; y triacenos tales como dacarbazina.

La ciclofosfamida, 2-óxido de 2-[bis(2-cloroetil)amino]tetrahidro-2H-1,3,2-oxazafosforina monohidrato está disponible en el mercado como una solución inyectable o comprimidos conocidos como CYTOXAN. La ciclofosfamida está indicada como un agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de linfomas malignos, mieloma múltiple y leucemias. Los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de la ciclofosfamida son alopecia, náuseas, vómitos y leucopenia.

El melfalán, 4-[bis(2-cloroetil)amino]-L-fenilalanina, está disponible en el mercado como una solución inyectable o comprimidos conocidos como ALKERAN. El melfalán está indicado para el tratamiento paliativo del mieloma múltiple y el carcinoma epitelial no resecable. La supresión de la médula ósea es el efecto secundario limitante de la dosis más común del melfalán.

El clorambucilo, ácido 4-[bis(2-cloroetil)amino]bencenobutanoico, está disponible en el mercado como comprimidos LEUKERAN. El clorambucilo está indicado para el tratamiento paliativo de leucemia linfática crónica y linfomas malignos tales como linfosarcoma, linfoma folicular gigante y enfermedad de Hodgkin. La supresión de la médula ósea es el efecto secundario limitante de la dosis más común del clorambucilo.

El busulfán, dimetanosulfonato de 1,4-butanodiol, está disponible en el mercado como comprimidos MYLERAN. El busulfán está indicado para el tratamiento paliativo de la leucemia mielógena crónica. La supresión de la médula ósea es el efecto secundario limitante de la dosis más común del busulfán.

La carmustina, 1,3-[bis(2-cloroetil)-1-nitrosourea, está disponible en el mercado como viales individuales de material liofilizado como BiCNU. La carmustina está indicada para el tratamiento paliativo como agente único o en combinación con otros agentes para tumores cerebrales, mieloma múltiple, enfermedad de Hodgkin y linfomas no-Hodgkin. La mielosupresión retardada es el efecto secundario limitante de la dosis más común de la carmustina.

La dacarbazina, 5-(3,3-dimetil-1-triazeno)-imidazol-4-carboxamida, está disponible en el mercado como viales individuales de material conocido como DTIC-Dome. La dacarbazina está indicada para el tratamiento del melanoma maligno metastásico, y en combinación con otros agentes para el tratamiento de segunda línea de la enfermedad de Hodgkin. Los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de la dacarbazina son náuseas, vómitos y anorexia.

Los antibióticos antineoplásicos son agentes sin especificidad de fase que se unen o se intercalan con el ADN. Típicamente, dicha acción produce complejos de ADN estables o una rotura de la cadena que altera la función normal de los ácidos nucleicos conduciendo a la muerte celular. Los ejemplos de agentes antineoplásicos antibióticos incluyen, pero sin limitación, actinomicinas tales como dactinomicina, antraciclinas tales como daunorubicina y doxorubicina; y bleomicinas.

La dactinomicina, también conocida como actinomicina D, está disponible en el mercado en forma inyectable como COSMEGEN. La dactinomicina está indicada para el tratamiento del tumor de Wilm y el rabdomiosarcoma. Los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de la dactinomicina son náuseas, vómitos y anorexia.

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La daunorubicina, hidrocloruro de (8S-cis)-8-acetil-[(3-amino-2,3,6-tridesoxi--L-lixo-hexopiranosil)oxi]-7,8,9,10tetrahidro-6,8,11-trihidroxi-1-metoxi-5,12-naftacenodiona, está disponible en el mercado como una forma inyectable liposomal conocida como DAUNOXOME o como un inyectable conocido como CERUBIDINE. La daunorubicina está indicada para la inducción de remisión en el tratamiento de leucemia no linfocítica aguda y sarcoma de Kaposi asociado con VIH avanzado. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de la daunorubicina.

La doxorubicina, hidrocloruro de (8S,10S)-10-[(3-amino-2,3,6-tridesoxi--L-lixo-hexopiranosil)oxi]-8-glicoloil, 7,8,9,10-tetrahidro-6,8,11-trihidroxi-1-metoxi-5,12 naftacenodiona, está disponible en el mercado como una forma inyectable conocida como RUBEX o ADRIAMYCIN RDF. La doxorubicina está indicada principalmente para el tratamiento de la leucemia linfoblástica aguda y de la leucemia mieloblástica aguda, pero también es un componente útil en el tratamiento de algunos tumores sólidos y linfomas. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común de la doxorubicina.

La bleomicina, una mezcla de antibióticos glicopeptídicos citotóxicos aislados a partir de una cepa de Streptomyces verticillus, está disponible en el mercado como BLENOXANE. La bleomicina está indicada como un tratamiento paliativo, como un agente único o en combinación con otros agentes, del carcinoma de células escamosas, linfomas y carcinomas testiculares. Los efectos secundarios limitantes de la dosis más comunes de la bleomicina son toxicidades pulmonares y cutáneas.

Los inhibidores de la topoisomerasa II incluyen, pero sin limitación, epipodofilotoxinas.

Las epipodofilotoxinas son agentes antineoplásicos con especificidad de fase derivados de la mandrágora. Las epipodofilotoxinas afectan típicamente a células en las fases S y G2 del ciclo celular por formación de un complejo ternario con la topoisomerasa II y el ADN causando roturas de la cadena de ADN. Las roturas de la cadena se acumulan y se produce la muerte celular. Los ejemplos de epipodofilotoxinas incluyen, pero sin limitación, etopósido y tenipósido.

El etopósido, 9[4,6-0-(R)-etiliden--D-glucopiranósido de 4’-desmetil-epipodofilotoxina, está disponible en el mercado como una solución inyectable o cápsulas con el nombre VePESID y se conoce comúnmente como VP-16. El etopósido está indicado como agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de cáncer testicular y pulmonar no microcítico. La mielosupresión es el efecto secundario más común del etopósido. La incidencia de leucopenia tiende a ser más grave que la trombocitopenia.

El tenipósido, 9[4,6-0-(R)-teniliden--D-glucopiranósido] de 4’-desmetil-epipodofilotoxina, está disponible en el mercado como una solución inyectable con el nombre VUMON y se conoce comúnmente como VM-26. El tenipósido está indicado como agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de la leucemia aguda en niños. La mielosupresión es el efecto secundario limitante de la dosis más común del tenipósido. El tenipósido puede inducir tanto leucopenia como trombocitopenia.

Los agentes neoplásicos antimetabolito son agentes antineoplásicos con especificidad de fase que actúan en la fase S (síntesis de ADN) del ciclo celular inhibiendo la síntesis de ADN o inhibiendo la síntesis de bases de purina o pirimidina y limitando de esta manera la síntesis de ADN. Por consiguiente, la fase S no avanza y se produce la muerte celular. Los ejemplos de agentes antineoplásicos antimetabolito incluyen, pero sin limitación, fluorouracilo, metotrexato, citarabina, mecaptopurina, tioguanina y gemcitabina.

El 5-fluorouracilo, 5-fluoro-2-(1H,3H)pirimidinadiona, está disponible en el mercado como fluorouracilo. La administración de 5-fluorouracilo conduce a la inhibición de la síntesis de timidilato y también se incorpora tanto en el ARN como en el ADN. El resultado típicamente es la muerte celular. El 5-fluorouracilo está indicado como agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de carcinomas de mama, colon, recto, estómago y páncreas. Los efectos secundarios limitantes de la dosis de 5-fluorouracilo son mielosupresión y mucositis. Otros análogos de fluoropirimidina incluyen 5-fluorodesoxiuridina (floxuridina) y monofosfato de 5fluorodesoxiuridina.

La citarabina, 4-amino-1--D-arabinofuranosil-2(1H)-pirimidinona, está disponible en el mercado como CYTOSARU y se conoce comúnmente como Ara-C. Se piensa que la citarabina presenta especificidad de fase celular en la fase S inhibiendo la elongación de cadena de ADN por incorporación terminal de citarabina en la cadena de ADN en crecimiento. La citarabina está indicada como agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de la leucemia aguda. Otros análogos de citidina incluyen 5-azacitidina y 2’,2’-difluorodesoxicitidina (gemcitabina). La citarabina induce leucopenia, trombocitopenia y mucositis.

La mercaptopurina, 1,7-dihidro-6H-purina-6-tiona monohidrato, está disponible en el mercado como PURINETHOL. La mercaptopurina presenta especificidad de fase celular en la fase S inhibiendo la síntesis de ADN mediante un mecanismo aún no especificado. La mercaptopurina está indicada como agente único o en combinación con otros agentes quimioterapéuticos en el tratamiento de la leucemia aguda. La mielosupresión y la mucositis gastrointestinal son los efectos secundarios esperados de la mercaptopurina a altas dosis. Un análogo de mercaptopurina útil es la azatioprina.

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una combinación de los mimos; la reacción se realiza ventajosamente a una temperatura elevada, por ejemplo, en condiciones de calentamiento a reflujo, o usando un aparato de microondas. El catalizador ácido está presente típicamente en una cantidad de 10-30% en moles con respecto al compuesto de fórmula (I).

Esquema 1

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N

imagen8(R2)p imagen9N R1 R1 imagen10(R2)p R11 imagen11Nimagen12R13NH2 imagen13R12

imagen14R1 imagen15(R2)pI(Br) L N N(III)

imagen16(V) NH2N N

imagen17R3 L

imagen18NNQimagen19Y H Q imagen20Y imagen21R3 imagen22R11 imagen23NR13 HH

imagen24R3QR3 Z

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R3

R3

(II) (IV) (I)

5 Los compuestos de fórmula (VIII) pueden prepararse convenientemente por los métodos indicados en el Esquema 1, pero partiendo con una antranilamida (VI) apropiada, como se indica en el Esquema 2.

Esquema 2

R12

R1

imagen26NN

imagen27NH2

imagen28R11 Nimagen29R13R12

R1

imagen30I(Br)

imagen31 imagen32R1L NH2N NN

imagen33R3

N

Limagen34ON N

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imagen36R3 R11 imagen37Nimagen38R13 N

H

R3 HH

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imagen40ON

imagen41ONR3 R3

(VI) (VII) (VIII)

10 El compuesto (VI) puede contener sustituyentes adicionales. Por ejemplo, como se muestra en el Esquema 3, la benzoxazina (IX), que está disponible en el mercado o se sintetiza usando técnicas convencionales en la técnica, puede someterse a apertura del anillo con una amina para formar la benzamida (X), que después puede experimentar una adición con el compuesto (III) para producir el compuesto de fórmula (XI).

Esquema 3

R1

imagen42(R2)p imagen43R3 imagen44(R2)imagen45N

p

imagen46R1 imagen47(R2)pHN

I(Br) L NR3 HN

imagen48H2N

imagen49R3

imagen50N

LON H

imagen51R3 R3 ON

15 (IX) (X) (XI) R3 OOO

Un compuesto de fórmula (XII) puede prepararse haciendo reaccionar un compuesto de fórmula (II) con un compuesto de fórmula (XIII). Esta reacción puede realizarse como se ha descrito en el Esquema 1. Después, los compuestos de fórmula (XII) pueden hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (XIV) para dar compuestos de fórmula (I). La reacción puede realizarse en un disolvente inerte, en presencia de un catalizador de metal y un

20 ligando apropiado.

Esquema 4

R12

R1

imagen52NN

imagen53R12 LN

R1 imagen54R11

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imagen57R1 imagen58(R2)pH2N

I(Br) imagen59N

imagen60NH2N N

imagen61R3Q

imagen62N

imagen63N

H2N

R11

Nimagen64R13 NY

H

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R3 imagen66HH

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R3

R3 Q QY

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R3 R3

(II) (XII) (I)

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Algunos compuestos de fórmula (I) también pueden prepararse como se indica en el Esquema 5. El grupo amino del compuesto de fórmula (XV) puede hacerse reaccionar primero con diceteno seguido de acilación y tratamiento con una hidrazina. Después, el compuesto de fórmula (XVI) puede obtenerse por tratamiento con ácido y después hacerse reaccionar con un compuesto de fórmula (II) para dar un compuesto de fórmula (I). Esta última reacción puede realizarse como se describe en el Esquema 1.

Esquema 5

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imagen79 imagen80R1 H2N

R1 O

imagen81 imagen82(R2)p

R3

imagen83R1

O

imagen84 imagen85QYN

(II)

N

1)

N I(Br) imagen86N I(Br) H2N

imagen87N

R11 imagen88NNHimagen89R3 imagen90N N

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2) Ac2O

R11 H H

imagen92R3Q

3) R11NHNH2

Z 4) H+ R3

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(XV) (XVI) (I)

Los compuestos de fórmula (V) pueden prepararse por condensación de una hidrazina sustituida (XVIII) con la ciano-cetona apropiada (XVII), por ejemplo, de acuerdo con los procedimientos de Honma, T. et al. J. Med. Chem.

10 2002, Vol. 44 (26), 4628-4640 o Adachi, I. et al. Chemical & Pharmaceutical Bulletin 1987, 35(8), 3235-52 como se muestra en el Esquema 6.

Esquema 6

R11

H2N

R13

N

O

H

N

R12 imagen94

imagen95N R13 N NH2

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R11

(XVII) (V)

Esquema 7

15 Un compuesto de fórmula (XXI) también puede prepararse como se muestra en el Esquema 7. El nitrilo de fórmula

(XIV) puede hidrolizarse para dar un ácido carboxílico de fórmula (XX) y después acoplarse con una amina para dar compuestos de fórmula (XXI).

R12

R1

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R1

imagen104I(Br)

imagen105 imagen106R1L NH2N N

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N

NR11 imagen108Nimagen109R13 N

N H

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HH N N

(VI) (XVIII) (XIV)

R3

imagen111R12 HN imagen112R12 imagen113

imagen114R1 imagen115R3 R13 imagen116(R2)

R1 p

N

imagen117N N R11

N

imagen118NH HH

NNR13 N NN

R11 H

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O OH

ON R3

(XXI)(XX)

PARTE EXPERIMENTAL

20 Ensayo bioquímico de la actividad de la FAK

Ensayo 1: Se adquirió FAK marcada con GST (marcada con glutatión S-transferasa) en Invitrogen (PV3832) (www.invitrogen.com). La actividad de FAK se midió por control de la fosforilación de un sustrato peptídico (Ac-RRRRRRSETDDYAEIID-NH2; (SEC ID Nº 1), es decir, Ac-Arg-Arg-Arg-Arg-Arg-Ser-Glu-Thr-Asp-Asp-Tyr-Ala-Glu-Ile-Ile-Asp-NH2) en presencia de un ATP radiomarcado. Para medir los inhibidores de FAK, se prepararon primero

25 compuestos como una solución madre 10 x en DMSO al 10%. Se añadió una pequeña porción de cada solución (4

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l) a una placa de 96 pocillos (Corning, 3884). Se preparó una solución de GST-FAK 6 nM en tampón de reacción 1,1x que contenía HEPES 44 mM, pH = 7,2, MgCl2 11 mM, MnCl2 2,2 mM, DTT 1,1 mM y Tween-20 al 0,011%. Después, se preincubaron 20 l de la solución de GST-FAK 6 nM con los compuestos durante 30 min a temperatura ambiente. La reacción se inició por adición de 16 l de sustratos (péptido 62,5 M, ATP 5 M y 33P--ATP a ~0,02 mCi/ml) preparados en el tampón de reacción anterior. Se dejó que la reacción continuara durante 90 min antes de interrumpirse con 40 l de H3PO4 al 1%. Una porción de la mezcla de reacción (60 l) se transfirió a una placa con filtro de fosfo-celulosa (Millipore; www.millipore.com, MAPHNOB50) y se incubó durante 20 minutos. La placa se filtró, se lavó tres veces usando 150 l de H3PO4 al 0,5% y se secó a 50ºC durante 30 min. Después de la adición de 60 l de Microscint-20 a la placa, se midió la radiactividad usado un TopCount (PerkinElmer, www.PerkinElmer.com).

Ensayo 2: Se preparó Flag-His-TEV-FAK1 en el laboratorio. Se expresó FAK humana de longitud completa usando baculovirus en células Sf9 con marcadores FLAG-6xHis N-terminales seguido de un sitio de escisión TEV (FLAG6xHis-TEV-huFAK). La actividad de FAK se midió monitorizando la fosforilación del sustrato LANCE Ultra NH2(ULight)-CSETDDYAEIID-COOH (SEC ID Nº: 2) (C = cisteína, S = serina, E = ácido glutámico, T = treonina, D = ácido aspártico, Y = tirosina, A = alanina, I = isoleucina) (adquirido en Perkin Elmer Life Sciences). Para medir inhibidores de FAK, se prepararon primero compuestos como una solución madre 100X en DMSO al 100%. Una pequeña porción de cada solución de compuesto (50 nl) se añadió a una placa de microtitulación de volumen reducido de 384 pocillos negros (Greiner 784076). Se preparó una solución de Flag-His-TEV-FAK1 1,2 nM en tampón de reacción 1X que contenía Tris/Tris-HCl 40 mM, MgCl2 10 mM, CHAPS 1 mM a un pH de 7,5, con DTT 1 mM añadido. Se añadieron 2,5 l de la solución de Flag-FAK 1,2 nM a las placas y se preincubaron con los compuestos durante 30 min a temperatura ambiente. Después se añadieron 2,5 l de solución de sustrato (0,1 M de sustrato específico P2 FAK-tide (Lance Ultra NH2-(ULight)-CSETDDYAEIID-COOH (SEC ID Nº: 2) de Perkin Elmer), ATP 10 M y el tampón de reacción 1x descrito anteriormente) a la placa para iniciar la reacción. Después de incubar durante 120 minutos a temperatura ambiente, la reacción se interrumpió por la adición de 5 l de EDTA 20 mM y anticuerpos Eu-anti-pTyr 5 nM en tampón de detección LANCE 1X. Después de una incubación de 30 minutos a temperatura ambiente, la placa se leyó en un Perkin Elmer Viewlux con un filtro de excitación a 320-340 nm y se midió la emisión a 615 nm y 665 nm. La proporción de 665 nm/615 nm se usa para la normalización de los datos.

La siguiente Tabla A proporciona datos específicos para un compuesto del ejemplo presentado a continuación procesado en los dos ensayos anteriores. Estos datos se generaron en al menos un proceso en el ensayo indicado; los procesos de ensayo repetidos pueden haber proporcionado o pueden dar lecturas que varían en cierto grado de estos datos.

Tabla A

Ejemplo Nº

Ensayo 1 FAK TRF PXC50 Ensayo 2 FAK H 31284A TRF PXC50

1

9,4 8,7

Ejemplos Químicos

Los siguientes ejemplos químicos tienen propósitos ilustrativos y no pretenden limitar el alcance de la presente invención. Los compuestos se nombraron usando el programa informático ACD Name (Advanced Chemistry Development, www.acdlabs.com).

Se hizo funcionar un espectrómetro de masas de cuadrupolo único PE Sciex API 150 (PE Sciex, Thornhill, Ontario, Canadá) usando ionización por electronebulización en el modo de detección de iones positivos. El gas de nebulización se generó a partir de un generador de aire cero (Balston Inc., Haverhill, MA; www.parker.com) y se suministró a 448,16 kPa (65 psi) y el gas protector era nitrógeno de alta pureza suministrado desde un recipiente de nitrógeno líquido Dewar a 344,74 kPa (50 psi). El voltaje aplicado a la aguja de electronebulización fue de 4,8 kV. el orificio se ajustó a 25 V y el espectrómetro de masas se examinó a una velocidad de 0,5 exploraciones/seg usando una masa de etapa de 0,2 amu y recolección de datos de perfil.

Método A, LCMS. Se introducen muestras en el espectrómetro de masas usando un automuestreador CTC PAL (LEAP Technologies, Carrboro, NC) equipado con una jeringa hamilton de 10 l que realizó la inyección en una válvula de inyección Valco de 10 puertos. La bomba de HPLC era una Shimadzu LC-10ADvp (Shimadzu Scientific Instruments, Columbia, MD) accionada a 0,3 ml/min y con un gradiente lineal de 4,5% de A a 90% de B en 3,2 min con un mantenimiento de 0,4 min. La fase móvil se componía de 100% de (H2O con TFA al 0,02%) en el recipiente A y 100% de (CH3CN con TFA al 0,018%) en el recipiente B. La fase estacionaria es Aquasil (C18) y las dimensiones de la columna son 1 mm x 40 mm. La detección se realizó por UV a 214 nm, dispersión de luz evaporativa (ELSD) y MS.

Método B, LCMS. Como alternativa, se usó un sistema de HPLC analítica Agilent 1100 con una LC/MS y se accionó a 1 ml/min con un gradiente lineal de 5% de A a 100% de B en 2,2 min con un mantenimiento de 0,4 min. La fase

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móvil se componía de 100% de (H2O con TFA al 0,02%) en el recipiente A y 100% de (CH3CN con TFA al 0,018%) en el recipiente B. La fase estacionaria fue Zobax (C8) con un tamaño de partículas de 3,5 m y las dimensiones de la columna fueron 2,1 mm x 50 mm. La detección se realizó por UV a 214 nm, dispersión de luz evaporativa (ELSD) y MS.

Método B, LCMS. Como alternativa, se usó un MDSSCIEX API 2000 equipado con una columna capilar de (50 x 4,6 mm, 5 m). El análisis por HPLC se realizó en un sistema de UPLC Agilent-1200 series equipado con una columna Zorbax SB-C18 (50 x 4,6 mm, 1,8 m) eluyendo con CH3CN:tampón acetato de amonio. Las reacciones se realizaron en el microondas (CEM, Discover).

Los espectros de 1H RMN (en lo sucesivo "RMN") se registraron a 400 MHz usando un instrumento Bruker AVANCE 400 MHz, usando un administrador ACD Spect ver. 10 para el reprocesamiento. Las multiplicidades indicadas son: s = singlete, d = doblete, t = triplete, c = cuadruplete, m = multiplete, dd = doblete de dobletes, dt = doblete de tripletes, etc y a indica una señal ancha.

HPLC analítica: Los productos se analizaron por un sistema de Cromatografía Analítica Agilent 1100, con una columna Zorbax XDB-C18 de 4,5 x 75 mm (3,5 m) a 2 ml/min con un gradiente de 4 min de CH3CN al 5% (ácido fórmico al 0,1%) a CH3CN al 95% (ácido fórmico al 0,1%) en H2O (ácido fórmico al 0,1%) y un mantenimiento de 1 min.

HPLC preparativa: Los productos se purificaron usando un sistema de cromatografía preparativa Gilson con una columna YMC CombiPrep ODS-A de 75 x 30 mm de D.I. (5 m) (www.aguas.com) a 50 ml/min con un gradiente de 10 min de CH3CN al 5% (ácido fórmico al 0,1%) a CH3CN al 95% (ácido fórmico al 0,1%) en H2O (ácido fórmico al 0,1%) y un mantenimiento de 2 min; como alternativa, los productos se purificaron usando un sistema de Cromatografía Preparativa Agilent 1100, con una columna Gemini C18 de 100 x 30 mm (5 m) a 60 ml/min con un gradiente de 10 min de CH3CN al 5% (ácido fórmico al 0,1%) a CH3CN al 95% (ácido fórmico al 0,1%) en H2O (ácido fórmico al 0,1%) y un mantenimiento de 2 min.

La cromatografía preparativa de fase normal se realizó usando un Sistema Analogix IntelliFlash 280 con columnas SuperFlash Sepra Si 50. Como alternativa, la HPLC de fase inversa se realizó en Agilent usando una columna Zorbax SB -C18 (21,2 x 250 mm, 7 mm) eluyendo con CH3CN:tampón acetato de amonio (10 M) a pH 6,8.

Ejemplos

Intermedio 1

Ácido 2-[(2,5-dicloro-4-piridinil)amino]benzoico

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Una mezcla de 2,5-dicloro-4-yodopiridina (10 g, 36,5 mmol), ácido 2-aminobenzoico (4,85 g, 35,4 mmol), DPEPhos [bis(2-difenilfosfinofenil)éter] (1,6 g, 2,97 mmol), acetato de paladio (II) (160 mg, 0,713 mmol) y K3PO4 (20 g, 94 mmol) se desgasificó y se calentó a 120ºC (temperatura del baño de aceite) durante 20 h. Después de 20 h, el análisis LCMS mostró que aún quedaba 33% de material de partida (en relación con el producto deseado). A la mezcla se le añadieron 160 mg más de Pd(OAc)2 y se calentó a 120ºC durante 24 h más. El LCMS mostró que la conversión se había completado. La mezcla se enfrió a temperatura ambiente seguido de filtración, lavando con EtOAc. Los sólidos se acidificaron a pH = 7-8 seguido de filtración. Sin embargo, la mezcla era una pasta y los sólidos recogidos no pudieron secarse completamente. Los sólidos (11 g) se acidificaron con HCl 6 N a pH = 1. La pasta resultante se filtró y se lavó con agua y TBME. El sólido se secó al vacío sobre P2O5 durante 2 días para dar el compuesto del título (7,32 g, rendimiento de 60,2%). MS: M(C12H8Cl2N2O2) = 283,11, (M+H)+ = 283,8; 1H RMN (400 MHz, DMSO)  ppm 13,6 (s, 1 H) 10,2 (s, 1 H) 8,3 (s, 1 H) 8,0 (d, 1 H) 7,6 (c, 2 H) 7,3 (s, 1 H) 7,2 (m, 1 H).

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Ejemplo de Referencia A 2-({5-cloro-2-[(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)amino]-4-piridinil}amino)-N-(metiloxi)benzamida

N

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a) 2-[(2,5-Dicloro-4-piridinil)amino]-N-(metiloxi)benzamida

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imagen133O

Un recipiente se cargó con ácido 3-[(2,5-dicloro-4-piridinil)amino]benzoico (1,0 g, 3,53 mmol), hidrocloruro de 1-(3dimetilaminopropil)-3-etilcarbodiimida (677 mg, 3,53 mmol) e hidroxibenzotriazol (HOBT) (541 mg, 3,53 mmol) en N,N-dimetilformamida (DMF, 7,0 ml) y se agitó a temperatura ambiente durante 30 min. A esta solución se le añadió hidrocloruro de metoxilamina (0,3 g, 3,53 mmol) y la mezcla de reacción se agitó durante 10 min más. La mezcla de reacción se enfrió a 0ºC usando un baño de hielo. A esta mezcla de reacción se le añadió diisopropiletilamina (1,2 ml, 7,06 mmol) y la mezcla se agitó a temperatura ambiente una noche. Después de la concentración al vacío, el residuo se trató usando una solución acuosa saturada de NaHCO3 y CH2Cl2. La fase orgánica se lavó con salmuera, después se secó sobre MgSO4 y se filtró. El CH2Cl2 se retiró por evaporación rotatoria. El material en bruto se cargó sobre una columna de gel de sílice y se eluyó con MeOH en CH2Cl2 con NH4OH al 0,1%, dando el producto deseado 2-[(2, 5-dicloro-4-piridinil) amino]-N-(metiloxi)benzamida (850 mg, 2,72 mmol, rendimiento de 77%) MS: M(C13H11Cl2N3O2) = 312,15, (M+H)+ = 312, 314; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d)  ppm 9,57 (s a, 1 H) 8,72 (s, 1 H) 8,22 (s, 1 H) 7,51 -7,67 (m, 3H) 7,25 (s, 1 H) 7,07 -7,21 (m, 1 H) 3,92 (s, 3 H).

b) 2-({5-Cloro-2-[(1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-il)amino]-4-piridinil}amino)-N-(metiloxi)benzamida

Un tubo para microondas de 20 ml se cargó con 2-[(2,5-dicloro-4-piridinil)amino]-N-(metiloxi)benzamida (100 mg, 0,320 mmol), 1-etil-3-metil-1H-pirazol-5-amina (60,1 mg, 0,481 mmol), carbonato de cesio (313 mg, 0,961 mmol), 1,4-dioxano (5,0 ml) y THF (1,0 ml). La mezcla de reacción se desgasificó con nitrógeno durante 10 min. Después, se añadieron (±)-2,2′-bis(difenilfosfino)-1,1′-binaftaleno (19,95 mg, 0,032 mmol) y acetato de paladio (II) (3,60 mg, 0,016 mmol) en una cantidad mínima de 1,4-dioxano. El tubo se cerró herméticamente y la mezcla de reacción se calentó en un horno de microondas 160ºC durante 40 min. La suspensión resultante se enfrió a temperatura ambiente y se filtró a través de celite. El filtrado se evaporó a sequedad y la mezcla de reacción en bruto se purificó por HPLC de fase inversa para dar el compuesto del título en forma de un sólido (16 mg, rendimiento del 24%) MS: M(C19H21ClN6O2) = 400,86, (M+H)+ = 401; 1H RMN (400 MHz, MeOD)  ppm 7,92 (s, 1 H) 7,44 -7,66 (m, 3 H) 7,11 7,25 (m, 1 H) 6,61 (s, 1 H) 5,99 (s, 1 H) 3,98 (c, J = 7,3 Hz, 2 H) 3,80 (s, 3 H) 2,21 (s, 3 H) 1,32(t, J = 7,2 Hz, 3 H).

Ejemplo 1a

2-[(5-Cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]-N-(metiloxi)benzamida

imagen134Cl

N N imagen135 imagen136NN

N HH Himagen137N O O

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Un tubo para microondas se cargó con 2-[(2,5-dicloro-4-piridinil)amino]-N-(metiloxi)benzamida (70 mg, 0,224 mmol), {3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-amina (70 mg, 0,503 mmol) y carbonato de cesio (230 mg, 0,706 mmol). La mezcla de reacción se desgasificó con nitrógeno durante 10 min. Al mismo tiempo, se añadieron BINAP (50 mg,

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0,080 mmol) y acetato de paladio (II) (10 mg, 0,045 mmol). La mezcla de reacción se calentó en un microondas a 160ºC durante 40 min. El material en bruto se purificó por HPLC de fase inversa (Gilson) eluyendo con CH3CN/H2O con ácido fórmico al 0,1%, dando un compuesto del título (15 mg, 15%); MS: M(C20H23ClN6O2) = 414,89, (M+H)+ = 415, 416; 1H RMN (400 MHz, CLOROFORMO-d)  ppm 9,42 (s a, 1 H) 8,71 (s a, 1 H) 8,02 (s, 1 H) 7,54 (s a, 1H) 7,06 (t, J = 7,5 Hz, 1 H) 6,48 (s, 1 H) 6,32 (s a, 1 H) 5,86 (s, 1 H) 4,47 (dt, J = 13,4, 6,7 Hz, 1 H) 3,92 (s, 3 H) 2,26 (s, 3 H) 1,41 -1,43 (d, J = 6,6 Hz, 2H).

Intermedio 2

2-[(2,5-Dicloro-4-piridinil)amino]benzonitrilo

imagen139Cl

N

Cl

N H

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N

La solución de 2,5-dicloro-4-yodopiridina (100 g, 365 mmol), 2-aminobenzonitrilo (43,1 g, 365 mmol) y trifosfato potásico (233 g, 1095 mmol) en 1,4-dioxano (2,5 l) se desgasificó con una corriente de N2. A esta solución se le añadieron DPEPhos (15,73 g, 29,2 mmol) y acetato de paladio (3,28 g, 14,60 mmol). La mezcla de reacción se agitó a la temperatura de reflujo durante 18 horas. La solución se filtró a través de 1,27 cm (0,5 pul) de celite y 0,51 cm (0,2 pulgadas) de sílice. La solución se evaporó. El sólido se suspendió en el éter dietílico y se filtró. El éter dietílico se concentró y el sólido resultante se filtró. Se aisló 2-[(2,5-dicloro-4-piridinil)amino]benzonitrilo (80 g, 288 mmol, rendimiento de 79%) en forma de un sólido de color naranja. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6) d ppm 6,49 (s, 1 H) 7,50 (td, J = 7,58, 1,01 Hz, 1 H) 7,56 (d, J = 7,58 Hz, 1 H) 7,80 (td, J = 7,83, 1,77 Hz, 1 H) 7,95 (dd, J = 7,83, 1,52 Hz, 1 H) 8,26 (s, 1 H) 9,05 (s a, 1 H); HPLC Tr = 2,88 min, MS (ESI): 263,9, 265,9 [M+H]+.

Intermedio 3

2-[(5-Cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]benzonitrilo

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N

La solución de 2-[(2,5-dicloro-4-piridinil)amino]benzonitrilo (110 g, 396 mmol), 3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5amina (55,1 g, 396 mmol) y carbonato de cesio (387 g, 1187 mmol) en 1,4-dioxano (2,5 l) se desgasificó con una corriente de N y se añadió 2,2'-bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftilo (BINAP) (19,71 g, 31,7 mmol) seguido de acetato de paladio (3,55 g, 15,83 mmol). La mezcla de reacción se calentó a reflujo durante una noche en una atmósfera de N2. La mezcla de reacción se filtró y el líquido se concentró. Se añadió acetato de etilo (1500 ml) seguido de HCl 1 M (1000 ml). Las capas se separaron. El acetato de etilo se lavó con HCl 1 M hasta que no se observó producto por HPLC (1000 ml en total, 1 x). Las fases de HCl se combinaron y se lavaron de nuevo con acetato de etilo (3 x 1000 ml) hasta que el pico del producto era relativamente puro en la capa de HCl. Después, la capa de HCl se basificó con NaOH (50 p/p seguido de 1 M) a pH ~4 dando como resultado una solución turbia. Se añadió acetato de etilo (2000 ml) y las capas se separaron. El acetato de etilo se lavó con salmuera y se evaporó. Después de la neutralización -tras la adición de acetato de etilo -, la mezcla de reacción se filtró para conseguir un poco de producto. Además, el aislamiento del producto durante la evaporación puede realizarse por filtración del sólido de color blanco, que procede de las aguas madre. Todos los sólidos y productos evaporados se combinaron. Se aisló 2[(5-cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]benzonitrilo (80 g, 207 mmol, rendimiento de 52,4%) en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)  ppm 1,24 (d, J = 6,57 Hz, 6 H) 2,08 (s, 3 H) 4,34 (quintuplete, J = 6,57 Hz, 1 H) 5,87 (s, 1 H) 5,97 (s, 1 H) 7,41 (td, J = 7,58, 1,01 Hz, 1 H) 7,47 (d, J = 8,08 Hz, 1 H) 7,75 (td, J = 7,83, 1,52 Hz, 1 H) 7,90 (dd, J = 7,83, 1,52 Hz, 1 H) 7,94 (s, 1 H) 8,42 (d, J = 17,43 Hz, 2 H); HPLC Tr = 2,36 min, MS (ESI): [M+H]+ = 367,1, 368,1.

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Intermedio 4

Ácido 2-[(5-cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]benzoico

imagen143Cl

N N imagen144 imagen145NN

N HH imagen146O OH

Se disolvió 2-[(5-cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]benzonitrilo (80 g, 218 mmol) en 1,4-dioxano (1,5 l) y se añadió NaOH 1 M (1500 ml, 1500 mmol). La suspensión se calentó a reflujo durante una noche. Después de enfriar a TA, se añadió acetato de etilo (1 l) y las capas se separaron. La capa se agua se lavó con 1 l de acetato de etilo. Las dos capas orgánicas se combinaron y se lavaron de nuevo con NaOH 0,1 M (1 l) hasta que no se observó más cantidad de producto en la capa orgánica. Después, los productos orgánicos se desecharon. Después, los productos acuosos combinados se lavaron con 1 l de acetato de etilo. Después, la capa de agua se acidificó con ácido acético (muy lentamente a pH ~ 7). El sólido se filtró y se aisló ácido 2-[(5-cloro-2-{[3metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]benzoico (67 g, 165 mmol, rendimiento de 76%) en forma de un sólido de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)ppm 1,28 (d, J = 6,57 Hz, 6 H) 2,11 (s, 3 H) 4,41 (quintuplete, J = 6,57 Hz, 1 H) 5,96 (s, 1 H) 6,83 (s, 1 H) 7,09 (ddd, J = 8,02, 5,12, 3,03 Hz, 1 H) 7,40 (1 H) 7,52 7,61 (m, 2 H) 7,91 -8,16 (m, 2 H) 8,55 (s, 1 H) 10,17 (s a, 1 H) 13,64 (s a, 1 H); HPLC Tr = 2,35 min, MS (ESI): [M+H]+ = 386,1.

Ejemplo 1b

2-[(5-Cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]-N-(metiloxi)benzamida

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A una solución de ácido 2-[(5-cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5-il]amino}-4-piridinil)amino]benzoico (67 g, 174 mmol) y 1-hidroxibenzotriazol (29,3 g, 191 mmol) en N,N-dimetilformamida (700 ml) se le añadió N-(3dimetilaminopropil)-N’-etilcarbodiimida (36,6 g, 191 mmol) y la solución se agitó durante 30 minutos. Se añadió hidrocloruro de O-metilhidroxilamina (15,95 g, 191 mmol) y la solución se agitó durante 15 minutos más, después la solución se enfrió a 0ºC y se añadió gota a gota diisopropiletilamina (91 ml, 521 mmol). La mezcla de reacción se agitó durante una noche a temperatura ambiente. Se añadió agua (4000 ml) y la solución se acidificó con ácido acético (20 ml). La solución se extrajo con 2 x 2 l de acetato de etilo. El producto orgánico se lavó con agua (1 l) y salmuera, se secó sobre MgSO4, se filtró y se evaporó. Se aisló 2-[(5-cloro-2-{[3-metil-1-(1-metiletil)-1H-pirazol-5il]amino}-4-piridinil)amino]-N-(metiloxi)benzamida (74 g, 164 mmol, rendimiento de 94%, pureza de 92%) en forma de una espuma de color amarillo. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6)  ppm 1,27 (d, J = 6,57 Hz, 6 H) 2,10 (s, 3 H) 3,71 (s, 3 H) 4,39 (quintuplete, J = 6,51 Hz, 1 H) 5,93 (s, 1 H) 6,66 (s, 1 H) 7,08 -7,19 (m, 1 H) 7,49 -7,64 (m, 3 H) 7,98 (s, 1 H) 8,50 (s, 1 H) 9,50 (s, 1 H) 11,93 (s, 1 H).; HPLC Tr = 2,13 min, MS (ESI): [M+H]+ = 415,1.

Purificación de los Productos del Ejemplo 1a y 1b

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Claims (1)

1. imagen1