ES2391974T3

ES2391974T3 - Procedimientos y composiciones para el tratamiento de trastornos gastrointestinales

Info

Publication number: ES2391974T3
Application number: ES04776513T
Authority: ES
Inventors: Mark G. Currie; Shalina Mahajan-Miklos; Jing Sun Li
Original assignee: Ironwood Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Ironwood Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2003-06-13
Filing date: 2004-06-14
Publication date: 2012-12-03
Anticipated expiration: 2024-06-14
Also published as: EP2526958A1; EP1644021B1; PL1644021T3; US20140296163A1; US20100234301A1; EP3342420A1; US20120196797A1; PT1644021E; EP1644021A2; WO2005016244A2; CA2529307A1; JP2007501866A; CA2529307C; US20120108525A1; US8101579B2; US20160168201A1; US20130338063A9; DK1644021T3; WO2005016244A3; US20140329765A1

Abstract

Uso de un polipéptido para la preparación de una composición farmacéutica para tratar el síndrome del intestino irritable o estreñimiento, en el que el polipéptido comprende la secuencia de aminoácidos Asn Asp Glu Cys Glu Leu Cys Val Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Leu.

Description

Procedimientos y composiciones para el tratamiento de trastornos gastrointestinales CAMPO TECNICO [0001] Esta divulgacion se refiere a procedimientos y composiciones para tratar trastornos gastrointestinales, obesidad, insuficiencia cardiaca congestiva, hiperplasia prostatica benigna y otros trastornos. ANTECEDENTES [0002] El sindrome del intestino irritable (SII) es un trastorno cronico comun del intestino que afecta a de 20 a 60 millones de individuos en EE.UU. solo (Lehman Brothers, Global Healthcare-Irritable Bowel Syndrome Industry Update, septiembre de 1999). El SII es el trastorno mas comun diagnosticado por gastroenterologos (28% de los pacientes examinados) y representa el 12% de las visitas a medicos de atencion primaria (Camilleri 2001 Gastroenterology 120:652-668). En EE.UU., el impacto economico del SII se estima en 25 billones de $ anualmente, por los costes directos de uso de asistencia sanitaria y los costes indirectos de absentismo laboral (Talley 1995 Gastroenterology 109:1736-1741). Los pacientes con SII tienen tres veces mas absentismo laboral e informan una calidad de vida reducida. Las personas que lo padecen pueden ser incapaces o reticentes a asistir a eventos sociales, mantener un empleo o viajar incluso distancias cortas (Drossman 1993 Dig Dis Sci 38:1569-1580). Hay una tremenda necesidad medica sin cumplir en esta poblacion ya que existen pocas opciones de prescripcion para tratar el SII. [0003] Los pacientes con SII padecen dolor abdominal y un ritmo intestinal alterado. Se han definido tres subgrupos de pacientes con SII basandose en el habito intestinal predominante: con estrefimiento predominante (SII-E), con diarrea predominante (SII-D) o alternante entre los dos (SII-A). El calculo aproximado de individuos que padecen SII-E oscila del 20-50% de los pacientes con SII con el 30% frecuentemente citado. A diferencia de los otros dos subgrupos que tienen una relacion de sexo similar, el SII-E es mas comun en mujeres (relacion de 3:1) (Talley y col. 1995 Am J Epidemiol 142:76-83). [0004] La definicion y los criterios de diagnostico para SII se han formalizado en los "Criterios de Roma" (Drossman y col. 1999 Gut 45:Suppl II:1-81), que son bien aceptado en la practica clinica. Sin embargo, la complejidad de los sintomas no se ha explicado por anomalias anatomicas o cambios metabolicos. Esto ha conducido a la clasificacion del SII en trastorno GI funcional, que se diagnostica basandose en los criterios de Roma y la evaluacion limitada para excluir enfermedad organica (Ringel y col. 2001 Annu Rev Med 52: 319-338). El SII se considera que es un trastorno "biopsicosocial" resultante de una combinacion de tres mecanismos interactuantes: motilidad intestinal alterada, un aumento de la sensibilidad del intestino o colon a estimulos dolorosos (sensibilidad visceral) y factores psicosociales (Camilleri 2001 Gastroenterology 120:652-668). Recientemente ha habido un aumento de pruebas de una funcion de la inflamacion en la etiologia de SII. Los informes indican que los subconjuntos de pacientes con SII tienen aumentos pequefos, pero significativos, en celulas inflamatorias colonicas y mastocitos, aumento de oxido nitrico (NO) y oxido nitrico sintasa inducible (iNOS) y expresion alterada de citocinas inflamatorias (revisado por Talley 2000, Medscape Coverage of DDW Week). [0005] Una revision del sindrome del intestino irritable se facilita por Drossman y col. (Gastroenterology, 2002, 123, 2108-2131). [0006] El documento WO 02/078683 desvela agonistas peptidicos del receptor de guanilato ciclasa que se ensefa que son utiles en el tratamiento de inflamacion de tejido y carcinogenesis. RESUMEN DE LA INVENCION [0007] La presente invencion proporciona un polipeptido para su uso en el tratamiento de sindrome del intestino irritable o estrefimiento, en el que el polipeptido comprende la secuencia de aminoacidos Asn Asp Glu Cys Glu Leu Cys Val Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Leu. [0008] Mas generalmente, la presente divulgacion caracteriza composiciones y procedimientos relacionados para tratar SII y otros trastornos y afecciones gastrointestinales, por ejemplo, trastornos de motilidad gastrointestinal, trastornos gastrointestinales funcionales, enfermedad por reflujo gastroesofagico (ERGE), reflujo duodenogastrico, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, pirosis funcional, dispepsia (incluyendo dispepsia funcional o dispepsia no ulcerosa), gastroparesia, pseudo-obstruccion intestinal cronica (o pseudoobstruccion colonica), y trastornos y afecciones asociadas a estrefimiento, por ejemplo, estrefimiento asociado al uso de analgesicos de opiaceos, estrefimiento posquirurgico y estrefimiento asociado a trastornos neuropaticos, ademas de otras afecciones y trastornos. Las composiciones caracterizan peptidos que activan el receptor de guanilato ciclasa C (GC-C).

[0009] La presente divulgacion tambien caracteriza composiciones y procedimientos relacionados para tratar obesidad, insuficiencia cardiaca congestiva e hiperplasia prostatica benigna (HPB).

[0010] Sin desear quedar ligado a teoria particular alguna, en el caso del SII y otros trastornos gastrointestinales, los peptidos son utiles debido a que pueden aumentar la motilidad gastrointestinal. Sin desear quedar ligado a teoria particular alguna, en el caso del SII y otros trastornos gastrointestinales, los peptidos son utiles, en parte, debido a que pueden disminuir la inflamacion.

[0011] Sin desear quedar ligado a teoria particular alguna, en el caso del SII y otros trastornos gastrointestinales, los peptidos tambien son utiles debido a que pueden disminuir el dolor gastrointestinal o dolor visceral.

[0012] La presente divulgacion caracteriza composiciones farmaceuticas que comprenden ciertos peptidos que pueden activar el receptor de guanilato-ciclasa C (GC-C). Dentro de la divulgacion estan composiciones farmaceuticas que comprenden un peptido de la divulgacion, ademas de composiciones de combinacion que comprenden un peptido de la divulgacion y uno o mas agentes terapeuticos adicionales, por ejemplo, un agente para tratar estrefimiento (por ejemplo, un activador de canales de cloruro tal como SPI-0211; Sucampo Pharmaceuticals, Inc.; Bethesda, MD; o un laxante tal como MiraLax; Braintree Laboratories, Braintree MA) o algun otro trastorno gastrointestinal. Ejemplos de agentes terapeuticos adicionales incluyen: agentes reductores acidos tales como inhibidores de la bomba de protones (por ejemplo, omeprazol, esomeprazol, lansoprazol, pantorazol y rabeprazol), bloqueantes de receptores de H2 (por ejemplo, cimetidina, ranitidina, famotidina y nizatidina), agentes pro-motilidad tales como agonistas de motilina (por ejemplo, GM-611 o fumarato de mitemcinal), agonistas de receptores de 5HT (por ejemplo, agonistas de receptores de 5HT4 tales como Zelnorm®; y agonistas de receptores de 5HT3 tales como MKC-733), antagonistas de receptores de 5HT (por ejemplo, antagonistas de receptores de 5HT1, 5HT2, 5HT3 (por ejemplo, alosetron) o 5HT4), agonistas de receptores muscarinicos, agentes antiinflamatorios, antiespasmodicos, antidepresivos, agentes analgesicos de accion central tales como agonistas de receptores de opioides, antagonistas de receptores de opioides (por ejemplo, naltrexona), agentes para el tratamiento de enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa (por ejemplo, Traficet-ENT (ChemoCentryx, Inc.; San Carlos, CA)), agentes que tratan dolor gastrointestinal o visceral, e inhibidores de GMPc fosfodiesterasa (por ejemplo, motapizona, zaprinast y sulindac sulfona). Los peptidos de la divulgacion tambien pueden usarse en combinacion con agentes tales como tianeptina (Stablon®) y otros agentes descritos en el documento U.S. 6.683.072, ester de eter nonaetilenglicolmetilico de acido (E)-4 (1,3bis(ciclohexilmetil)-1,2,34,-tetrahidro-2,6-diono-9H-purin-8-il)cinamico y compuestos relacionados descritos en el documento WO 02/067942. Los peptidos tambien pueden usarse en combinacion con tratamientos que conllevan la administracion de microorganismos utiles en el tratamiento de trastornos gastrointestinales tales como SII. Probactrix® (The BioBalance Corporation; New York, NY) es un ejemplo de una formulacion que contiene microorganismos utiles en el tratamiento de trastornos gastrointestinales. Los peptidos tambien pueden usarse en combinacion con purgantes que extraen liquidos del intestino (por ejemplo, Visicol®, una combinacion de fosfato de sodio monobasico monohidratado y fosfato de sodio dibasico anhidro).

[0013] Ademas, las composiciones farmaceuticas pueden incluir uno o mas agentes seleccionados del grupo que consiste en: bloqueantes de canales de Ca (por ejemplo, ziconotida), antagonistas de receptores de 5HT completos o parciales (por ejemplo, antagonistas de receptores de 5HT3 (por ejemplo, alosetron, ATI-7000; Aryx Therapeutics, Santa Clara CA), 5HT4, 5HT2 y 5HT1), agonistas de receptores de 5HT completos o parciales (incluyendo agonistas de receptores de 5HT3, 5HT2, 5HT4 (por ejemplo, tegaserod, mosaprida y renzaprida) y 5HT1), agonistas de receptores de CRF (NBI-34041), agonistas de adrenorreceptores -3, agonistas de receptores de opioides (por ejemplo, loperamida, fedotozina, fentanilo, naloxona, naltrexona, metil-nalozona, nalmefeno, cipridima, beta-funaltrexamina, naloxonazina, naltrindol, nor-binaltorfimina, morfina, difeniloxilato, pentapeptido encefalina, asimadolina y trimebutina), antagonistas de receptores de NK1 (por ejemplo, ezlopitant y SR-14033), agonistas de receptores de CCK (por ejemplo, loxiglumida), antagonistas de receptores de NK1, antagonistas de receptores de NK3 (por ejemplo, talnetant, osanetant (SR-142801) o SSR-241586), inhibidores de la recaptacion de norepinefrina-serotonina (NSRI; por ejemplo, milnacipran), agonistas de receptores de vanilloides y cannabinoides (por ejemplo, arvanil), sialorfina, peptidos relacionados con sialorfina que comprenden la secuencia de aminoacidos QHNPR, por ejemplo VQHNPR VRQHNPR; VRGQHNPR VRGPQHNPR VRGPRQHNPR; VRGPRRQHNPR; y compuestos o peptidos de RQHNPR que son inhibidores de neprilisina, frakefamida (H-Tyr-D-Ala-Phe(F)-Phe-NH2; documento WO 01/019849 A1), loperamida, Tyr-Arg (kiotorfina), agonistas de receptores de CCK (ceruleina), peptidos de conotoxina, analogos de peptidos de timulina, loxiglumida, dexloxiglumida (el isomero R de loxiglumida) (documento WO 88/05774). Estos peptidos y compuestos pueden administrarse con los peptidos de la divulgacion (simultaneamente o secuencialmente). Tambien pueden ligarse covalentemente a un peptido de la divulgacion para crear conjugados terapeuticos.

[0014] La presente divulgacion tambien caracteriza procedimientos para tratar diversos trastornos gastrointestinales administrando un peptido que actua de agonista parcial o completo del receptor de GC-C. El peptido contiene hasta cuatro cisteinas que forman uno o dos enlaces disulfuro. En ciertos casos, los enlaces

disulfuro estan sustituidos por otras reticulaciones covalentes y en algunos casos las cisteinas estan sustituidas por otros residuos para proporcionar reticulaciones covalentes alternativas. Los peptidos tambien pueden incluir al menos un sitio de escision de tripsina o quimiotripsina y/o un peptido analgesico del extremo carboxi o molecula pequefa, por ejemplo, AspPhe o algun otro peptido analgesico. Cuando esta presente dentro del peptido, el peptido analgesico o molecula pequefa puede ir precedido de un sitio de escision de quimiotripsina o tripsina que permite la liberacion del peptido analgesico o molecula pequefa. Los peptidos y procedimientos de la divulgacion tambien son utiles para tratar dolor e inflamacion asociada a diversos trastornos, que incluyen trastornos gastrointestinales. Ciertos peptidos incluyen un sitio de escision de quimiotripsina o tripsina funcional localizado de forma que se permita la inactivacion del peptido tras la escision. Ciertos peptidos que tienen un sitio de escision funcional experimentan escision e inactivacion gradual en el tubo digestivo, y esto se desea en algunos casos. En ciertos peptidos, un sitio de quimiotripsina funcional esta alterado, aumentando la estabilidad del peptido in vivo (por ejemplo, guanilina).

[0015] La presente divulgacion tambien caracteriza procedimientos para tratar otros trastornos tales como insuficiencia cardiaca congestiva e hiperplasia prostatica benigna administrando un peptido o molecula pequefa (parenteralmente o por via oral) que actua de agonista del receptor de GC-C. Tales agentes pueden usarse en combinacion con peptidos natriureticos (por ejemplo, peptido natriuretico auricular, peptido natriuretico cerebral o peptido natriuretico de tipo C), un diuretico o un inhibidor de enzima conversora de angiotensina.

[0016] La presente divulgacion tambien caracteriza procedimientos y composiciones para aumentar la motilidad intestinal. La motilidad intestinal implica distensiones y contracciones coordinadas espontaneas del estomago, intestinos, colon y recto para mover el alimento por el tracto gastrointestinal durante el proceso digestivo.

[0017] El peptido puede contener aminoacidos del extremo carboxi o del extremo amino adicionales o ambos. Por ejemplo, el peptido puede incluir una secuencia del extremo amino que facilita la produccion recombinante del peptido y se escinde antes de la administracion del peptido a un paciente. El peptido tambien puede incluir otros aminoacidos del extremo amino o del extremo carboxi. En algunos casos, los aminoacidos adicionales protegen el peptido, estabilizan el peptido o alteran la actividad del peptido. En algunos casos, algunos o todos de estos aminoacidos adicionales se eliminan antes de la administracion del peptido a un paciente. El peptido puede incluir 1, 2, 3, 4, 5, 10, 15, 20, 25, 30, 40, 50, 60, 70 80, 90, 100 o mas aminoacidos en su extremo amino o extremo carboxi o ambos. El numero de aminoacidos flanqueantes no necesita ser el mismo. Por ejemplo, puede haber 10 aminoacidos adicionales en el extremo amino del peptido y ninguno en el extremo carboxi.

[0018] En ciertos casos, los peptidos incluyen tanto uno como dos o mas aminoacidos negativamente cargados contiguos (por ejemplo; Asp o Glu) o uno o dos o mas residuos positivamente cargados contiguos (por ejemplo, Lys o Arg) o uno o dos o mas aminoacidos positivamente o negativamente cargados contiguos en el extremo carboxi. En estos casos, todos los aminoacidos flanqueantes en el extremo carboxi estan tanto positivamente como negativamente cargados. En otros casos, los aminoacidos cargados del extremo carboxi van precedidos de una Leu. Por ejemplo, las siguientes secuencias de aminoacidos pueden afadirse al extremo carboxi del peptido: Asp; Asp Lys; Lys Lys Lys Lys Lys Lys; Asp Lys Lys Lys Lys Lys Lys; Leu Lys Lys; y Leu Asp. Tambien es posible simplemente afadir Leu en el extremo carboxi.

[0019] En un primer aspecto, la presente divulgacion caracteriza un polipeptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) en la que:

Xaa1 es Ser, Asn, Tyr, Ala, Gln, Pro, Lys, Gly o Thr o esta ausente; Xaa2 es His, Asp, Glu, Ala, Ser, Asn, Gly o esta ausente; Xaa3 es Thr, Asp, Ser, Glu, Pro, Val o Leu; Xaa5 es Asp, Ile o Glu; Xaa6 es Ile, Trp o Leu; Xaa7 es Cys, Ser o Tyr; Xaa8 es Ala, Val, Thr, Ile, Met o esta ausente; Xaa9 es a) cualquier aminoacido, b) Phe, Tyr, Asn, Trp, c) un aminoacido distinto de Phe, Trp o Tyr, d) aminoacido no aromatico o e) esta ausente; Xaa10 es Ala, Val, Met, Thr o Ile; Xaa11 es Ala o Val; Xaa13 es Ala o Thr; Xaa14 es Gly, Ala o Ser; Xaa15 es Cys, Tyr o esta ausente; y Xaa16 es: a) Trp, Tyr o Phe para crear un sitio de escision de quimiotripsina; b) Lys o Arg para crear un sitio de escision de tripsina; c) esta ausente o d) His o Leu o Ser.

[0020] En algunos casos, Xaa1 va precedido de Lys o Tyr.

[0021] En ciertos casos, una Cys esta sustituida por cualquier aminoacido distinto de Cys. Ciertos polipeptidos tales tendran menos enlaces disulfuro.

[0022] En un aspecto relacionado, la presente divulgacion caracteriza una composicion que comprende un polipeptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) en la que: Xaa1 es Ser, Asn, Tyr, Ala, Gln, Pro, Lys, Gly o Thr o esta ausente; Xaa2 es His, Asp, Glu, Ala, Ser, Asn, Gly, Pro o esta ausente; Xaa3 es Thr, Asp, Ser, Glu, Pro, Val o Leu; Xaa5 es Asp, Ile o Glu; Xaa6 es Ile, Trp o Leu; Xaa7 es Cys, Ser

: o Tyr, Xaa8 es Ala, Val, Thr, Ile, Met o esta ausente; Xaa9 es Phe, Tyr, Asn, Trp, un aminoacido distinto de Phe, Trp

: o Tyr, es un aminoacido no aromatico o esta ausente; Xaa10 es Ala, Val, Met, Thr o Ile; Xaa1 es Ala o Val; Xaa13 es Ala o Thr; Xaa14 es Gly, Ala o Ser; Xaa15 es Cys, Tyr o esta ausente; y Xaa16 es: a) Trp, Tyr o Phe para crear un sitio de escision de quimiotripsina; b) Lys o Arg para crear un sitio de escision de tripsina; c) esta ausente o d) His o Leu o Ser y un vehiculo farmaceuticamente aceptable. En aspectos relacionados, la presente divulgacion caracteriza un comprimido, pildora, capsula que comprende el peptido farmaceuticamente aceptable.

[0023] En un aspecto relacionado, la presente divulgacion caracteriza un polipeptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) en la que:

Xaa1 es Asn, cualquier aminoacido o esta ausente; Xaa2 es Asp, Glu, cualquier aminoacido o esta ausente; Xaa3 es Asp o Glu; Xaa5 es cualquier aminoacido o Glu; Xaa6 es cualquier aminoacido o Leu; Xaa7 es Cys; Xaa8 es cualquier aminoacido o Val; Xaa9 es Asn, Gln, Tyr; Xaa10 es cualquier aminoacido o Val; Xaa11 es cualquier aminoacido o Ala; Xaa13 es cualquier aminoacido o Thr; Xaa14 es cualquier aminoacido o Gly; Xaa15 es Cys; y Xaa16 es cualquier aminoacido, Leu o esta ausente.

[0024] En un aspecto relacionado, la presente divulgacion caracteriza un polipeptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Asn1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Glu5 Leu6 Xaa7 Val8 Asn9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Thr13 Xaa14 Xaa15 Leu16

Xaa2 es Asp o Glu; Xaa3 es Asp o Glu; Xaa4 es Cys o Mpt (mercaptoprolina) o Pen (penicilamina) o Dpr (acido diaminopropionico) o Asp o Glu; Xaa7 es Cys o Mpt (mercaptoprolina) o Pen (penicilamina) o Dpr (acido diaminopropionico) o Asp o Glu; Xaa10 es Val o Pro; Xaa11 es Ala o Aib (acido alfa-aminobutirico); Xaa12 es Cys o Mpt (mercaptoprolina) o Pen (penicilamina) o Dpr (acido diaminopropionico) o Asp o Glu; Xaa14 es Gly o Ala; y Xaa15 es Cys o Mpt (mercaptoprolina) o Pen (penicilamina) o Dpr (acido diaminopropionico) o Asp o Glu.

[0025] En ciertos casos, si Xaa15 es distinto de Cys o esta ausente, Xaa7 es Ser o un aminoacido distinto de Cys.

[0026] En ciertos casos, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11 o 12 de Xaa1, Xaa2, Xaa3, Xaa5, Xaa6, Xaa7, Xaa8, Xaa9, Xaa10, Xaa11, Xaa13, Xaa14 y Xaa16 son cualquier aminoacido distinto de Cys.

[0027] En ciertos casos, Xaa9 es cualquier aminoacido distinto de Gln. En otros casos, si Xaa2 y Xaa3 son Glu, Xaa9 es cualquier aminoacido distinto de Gln.

[0028] En ciertos casos, Xaa1 y Xaa2 estan ausentes; Xaa3 es Thr; Xaa5 es Glu; Xaa6 es Ile o Leu; Xaa8 es Ala, Val o Ile; Xaa9 es Phe o Tyr; Xaa10 es Ala o Val; Xaa11 es Ala; Xaa13 es Ala o Thr; Xaa14 es Gly; y Xaa16 es Trp, Tyr, Phe, Lys, Arg o esta ausente.

[0029] En ciertos casos, el polipeptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa10 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) no se escinde despues de Xaa9 por quimiotripsina. En estos casos:

Xaa1 es Ser, Asn, Tyr, Ala, Gln, Pro, Lys, Gly o Thr o esta ausente; Xaa2 es His, Asp, Glu, Ala, Ser, Asn o Gly o esta ausente; Xaa3 es Thr, Asp, Ser, Glu, Pro, Val o Leu o esta ausente; Xaa5 es Asp, Ile o Glu; Xaa6 es Ile, Trp o Leu; Xaa7 es Cys, Ser o Tyr; Xaa8 es Ala, Val, Thr, Ile, Met o esta ausente; Xaa9 es tanto: a) cualquier aminoacido distinto de Phe y Tyr, b) cualquier aminoacido distinto de Phe, Tyr y Trp, c) cualquier aminoacido distinto de Phe, Tyr, Trp, Ile, Leu y Val; d) cualquier aminoacido distinto de Phe, Tyr, Trp, Ile, Leu, Val y His; d) cualquier aminoacido no aromatico como e) esta ausente; Xaa10 es Ala, Val, Met, Thr o Ile; Xaa11 es Ala o Val; Xaa13 es Ala o Thr; Xaa14 es Gly, Ala o Ser; Xaa15 es Cys, Tyr o esta ausente; y Xaa16 es: a) Trp, Tyr o Phe para crear un sitio de escision de quimiotripsina; b) Lys o Arg para crear un sitio de escision de tripsina; c) esta ausente o d) His o Leu o Ser.

[0030] Ademas, la presente divulgacion caracteriza variantes de Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) que no se escinden despues de Xaa9 por quimiotripsina debido a la adicion de una lisina del extremo amino. Un ejemplo de una molecula tal es una variante de guanilina humana que tiene una lisina del extremo amino: KPGTCEICAYAACTGC.

[0031] En ciertos casos del peptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) que no se escinde despues de Xaa9 por quimiotripsina, Xaa7 y Xaa15 son ambos Cys.

[0032] Tambien estan dentro de la presente divulgacion variantes de PGTCEICAYAACTGC (guanilina humana) en las que Y esta sustituido por cualquier aminoacido distinto de a) Phe; b) cualquier aminoacido distinto de Phe y Trp; c) cualquier aminoacido distinto de Phe, Trp, Ile, Leu y Val; d) cualquier aminoacido distinto de Phe, Trp, Ile, Leu, Val y His; e) cualquier aminoacido no aromatico o f) esta ausente.

[0033] En ciertos casos, el polipeptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) no se escinde despues de Xaa9 por tanto quimiotripsina como tripsina. En estos casos en los que:

Xaa1 es Ser, Asn, Tyr, Ala, Gln, Pro, Lys, Gly o Thr o esta ausente; Xaa2 es His, Asp, Glu, Ala, Ser, Asn o Gly o esta ausente; Xaa3 es Thr, Asp, Ser, Glu, Pro, Val o Leu o esta ausente; Xaa5 es Asp, Ile o Glu; Xaa6 es Ile, Trp o Leu; Xaa7 es Cys, Ser o Tyr; Xaa8 es Ala, Val, Thr, Ile, Met o esta ausente; Xaa9 es tanto: a) cualquier aminoacido distinto de Lys, Arg, Phe y Tyr, b) cualquier aminoacido distinto de Lys, Arg, Phe, Tyr, y Trp, c) cualquier aminoacido distinto de Lys, Arg, Phe, Tyr, Trp, Ile, Leu y Val; d) cualquier aminoacido distinto de Lys, Arg, Phe, Tyr, Trp, Ile, Leu, Val, y His; como e) esta ausente; Xaa10 es Ala, Val, Met, Thr o Ile; Xaa11 es Ala o Val; Xaa13 es Ala o Thr; Xaa14 es Gly, Ala o Ser; Xaa15 es Cys, Tyr o esta ausente; y Xaa16 es: a) Trp, Tyr o Phe para crear un sitio de escision de quimiotripsina; b) Lys o Arg para crear un sitio de escision de tripsina; c) esta ausente o d) His o Leu o Ser.

[0034] En ciertos casos del peptido que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) que no se escinde despues de Xaa9 por quimiotripsina o tripsina, Xaa7 y Xaa15 son ambos Cys.

[0035] Variantes utiles de PGTCEICAYAACTGC (guanilina humana) que no deben escindirse por quimiotripsina incluyen:

PGTCEICASAACTGC PGTCEICATAACTGC

PGTCEICANAACTGC PGTCEICAQAACTGC PGTCEICARAACTGC PGTCEICAEAACTGC PGTCEICADAACTGC PGTCEICAGAACTGC PGTCEICAAAACTGC PGTCEICAMAACTGC

[0036] Variantes adicionales que no es probable que se escindan por quimiotripsina bajo ciertas condiciones incluyen:

PGTCEICAIAACTGC PGTCEICALAACTGC PGTCEICAVAACTGC PGTCEICAHAACTGC

[0037] La presente divulgacion tambien caracteriza variantes de delecion de cualquiera de los peptidos descritos en el presente documento en las que estan delecionadas uno, dos, tres o cuatro aminoacidos, distintos de una Cys. Si dos (o mas) aminoacidos estan delecionados y el peptido comprende la secuencia: Cysa Xaa Xaa Cysb Xaa Xaa Xaa Xaa Cysc Xaa Xaa Cysd, en algunos casos dos o mas deleciones pueden localizarse entre Cysa y Cysb

: o entre Cysb y Cysc o entre Cysc y Cysd. Por tanto, puede haber dos o mas deleciones entre dos Cys. Sin embargo, en otros casos, hay como maximo una delecion entre cada Cys, es decir, no hay mas de una delecion entre cada uno de Cysa y Cysb, Cysb y Cysc, y Cysc y Cysd. Por tanto, la presente divulgacion incluye cualquiera de los peptidos descritos en el presente documento que comprende la secuencia Cysa Xaa Xaa Cysb Xaa Xaa Xaa Xaa Cysc Xaa Xaa Cysd en la que: a) un aminoacido entre Cysa y Cysb esta delecionado; b) un aminoacido entre Cysb y Cysc esta delecionado; c) un aminoacido entre Cysc y Cysd esta delecionado; d) un aminoacido entre Cysa y Cysb esta delecionado y un aminoacido entre Cysb y Cysc esta delecionado; e) un aminoacido entre Cysa y Cysb esta delecionado y un aminoacido entre Cysc y Cysd esta delecionado; f) un aminoacido entre Cysb y Cysc esta delecionado y un aminoacido entre Cysc y Cysd esta delecionado; o g) un aminoacido entre Cysa y Cysb esta delecionado, un aminoacido entre Cysb y Cysc esta delecionado, y un aminoacido entre Cysc y Cysd esta delecionado. Ademas, pueden delecionarse uno o mas aminoacidos que preceden a una Cysa y/o uno o mas aminoacidos tras Cysd. Las diversas variantes de delecion son peptidos que se unen a y/o activan el receptor de GC-

C.

[0038] La presente divulgacion tambien caracteriza variantes de delecion de cualquiera de los peptidos descritos en el presente documento en las que estan delecionados uno, dos, tres o cuatro aminoacidos (o aminoacidos no naturales o analogos de aminoacidos naturales o no naturales), distintos de una Cys (o un aminoacido sustituido con Cys, por ejemplo, un aminoacido que puede formar un enlace covalente con otro aminoacido). Por tanto, variantes adicionales incluyen aquellas en las que una Cys esta sustituida con un aminoacido que puede formar un enlace covalente con otro aminoacido (por ejemplo, una Cys o un sustituto para la misma). Tales aminoacidos incluyen: Mpt (mercaptoprolina) o Pen (penicilamina) o Dpr (acido diaminopropionico). La FIG 1 incluye variantes de delecion de guanilina humana en las que uno, dos, tres o cuatro aminoacidos estan delecionados. Los aminoacidos delecionados estan entre Cysa y Cysd, ademas del extremo amino con respecto a Cysa.

[0039] La presente divulgacion tambien caracteriza variantes de insercion de cualquiera de los peptidos descritos en el presente documento en las que estan insertados uno, dos, tres o cuatro aminoacidos.

[0040] Si estan insertados dos (o mas) aminoacidos y el peptido comprende la secuencia: Cysa Xaa Xaa Cysb Xaa Xaa Xaa Xaa Cysc Xaa Xaa Cysd, en algunos casos dos o mas inserciones pueden localizarse entre Cysa y Cysb o entre Cysb y Cysc o entre Cysc y Cysd. Sin embargo, en otros casos, como maximo hay una insercion entre cada uno de Cysa y Cysb o entre Cysb y Cysc o entre Cysc y Cysd. Por tanto, la presente divulgacion incluye cualquiera de los peptidos descritos en el presente documento que comprende la secuencia Cysa Xaa Xaa Cysb Xaa Xaa Xaa Xaa Cysc Xaa Xaa Cysd en la que: a) un aminoacido esta insertado entre Cysa y Cysb; b) un aminoacido esta insertado entre Cysb y Cysc; c) un aminoacido esta insertado entre Cysc y Cysd; d) un aminoacido esta insertado entre Cysa y Cysb y un aminoacido esta insertado entre Cysb y Cysc; e) un aminoacido esta insertado entre Cysa y Cysb y un aminoacido esta insertado entre Cysc y Cysd; f) un aminoacido esta insertado entre Cysb y Cysc y un aminoacido esta insertado entre Cysc y Cysd o g) un aminoacido esta insertado entre Cysa y Cysb, un aminoacido esta insertado entre Cysb y Cysc, y un aminoacido esta insertado entre Cysc y Cysd. Ademas, pueden insertarse uno

o mas aminoacidos que preceden a Cysa y/o pueden insertarse uno o mas aminoacidos tras Cysd. Las inserciones pueden ser cualquier aminoacido que se produzca naturalmente o no naturalmente (por ejemplo, Gly o Ala) o analogo de aminoacido y, si hay mas de una insercion presente, pueden ser iguales o diferentes. Las diversas variantes de delecion son peptidos que se unen a y/o activan el receptor de GC-C.

[0041] Por ejemplo, la presente divulgacion incluye las siguientes variantes de insercion de PGTCGEICAYAACTGC (guanilina humana)

PGTCEGICAYAACTGC PGTCEIGCAYAACTGC PGTCEICGAYAACTGC PGTCEICAGYAACTGC PGTCEICAYGAACTGC PGTCEICAYAGACTGC PGTCEICAYAAGCTGC PGTCEICAYAACGTGC PGTCEICAYAACTGGC PGTCAEICAXAACTGC PGTCEAICAYAACTGC PGTCEIACAYAACTGC PGTCEICAAYAACTGC PGTCEICAYAAACTGC PGTCEICAYAACATGC PGTCEICAYAACTAGC PGTCEICAYAACTGAC PGTCAEICAAYAACTGC PGTCEAICAAYAACTGC PGTCEIACAAYAACTGC

[0042] Otras variantes de insercion de guanilina humana pueden tener hasta cuatro aminoacidos (es decir, 0, 1, 2, 3 o 4 aminoacidos naturales o no naturales) insertados despues de cada uno de los 15 aminoacidos en guanilina humana. Por tanto, la presente divulgacion incluye peptidos que tienen la secuencia: Pro Xaa(0-4) Gly Xaa(04) Thr Xaa(0-4) Cys Xaa(0-4) Glu Xaa(0-4) Ile Xaa(0-4) Cys Xaa(0-4) Ala Xaa(0-4) Tyr Xaa(0-4) Ala Xaa(0-4) Ala Xaa(0-4) Cys Xaa(0-4) Thr Xaa(0-4) Gly Xaa(0-4) Cys Xaa(0-4). Los aminoacidos insertados pueden ser cualquier aminoacido y pueden ser iguales o diferentes. En ciertos casos, los aminoacidos insertados son todos Gly o todos Ala o una combinacion de Gly y Ala.

[0043] La FIG. 2 representa variantes de insercion de guanilina humana en las que estan insertados uno, dos, tres o cuatro aminoacidos. Los aminoacidos insertados estan entre Cysa y Cysd, ademas del extremo amino con respecto a Cysa y el extremo carboxi con respecto a Cysd.

[0044] La presente divulgacion tambien caracteriza variantes de peptidos que tienen la secuencia Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa Xaa15 Xaa16 (Secuencia I), por ejemplo, variantes de guanilina humana de PGTCEICAYAACTGC en las que estan delecionadas hasta cuatro aminoacidos y/o estan insertadas hasta cuatro aminoacidos. Las inserciones y deleciones pueden ser entre Cys4 y Cys12 en la Secuencia I o pueden ser en el extremo amino con respecto a Cys4 y/o el extremo carboxi con respecto a Cys12 en la secuencia I.

[0045] Si Xaa16 es Trp, Tyr o Phe, el peptido tiene un sitio de escision de quimiotripsina que se localiza en una posicion en la que la escision liberara la porcion del peptido del extremo carboxi con respecto a Xaa16. Si Xaa16 es Lys o Arg, el peptido tiene un sitio de escision de tripsina que se localiza en una posicion en la que la escision liberara la porcion del peptido del extremo carboxi con respecto a Xaa16. Por tanto, si el peptido incluye un peptido analgesico del extremo carboxi con respecto a Xaa16, el peptido se liberara en el tubo digestivo tras la exposicion a la proteasa apropiada. Entre los peptidos analgesicos que pueden incluirse en el peptido estan: AspPhe, endomorfina-1, endomorfina-2, nocistatina, dalargina, lupron, sustancia P y otros peptidos analgesicos descritos en el presente documento.

[0046] Si Xaa1 o el aminoacido del extremo amino del peptido de la presente divulgacion (por ejemplo, Xaa2 o Xaa3), es Trp, Tyr o Phe, el peptido tiene un sitio de escision de quimiotripsina que se localiza en una posicion en la que la escision liberara la porcion del peptido del extremo amino con respecto a Xaa1 (o Xaa2 o Xaa3) junto con Xaa1, Xaa2 o Xaa3. Si Xaa1 o el aminoacido del extremo amino del peptido de la divulgacion (por ejemplo, Xaa2 o Xaa3) es Lys o Arg, el peptido tiene un sitio de escision de tripsina que se localiza en una posicion en la que la escision liberara la porcion del peptido del extremo amino con respecto a Xaa1 junto con Xaa1, Xaa2 o Xaa3). Por tanto, por ejemplo, si el peptido incluye un peptido analgesico del extremo amino con respecto a Xaa1, el peptido se liberara en el tubo digestivo tras la exposicion a la proteasa apropiada. Entre los peptidos analgesicos que pueden incluirse en el peptido estan: AspPhe, endomorfina-1, endomorfina-2, nocistatina, dalargina, lupron y sustancia P, y otros peptidos analgesicos descritos en el presente documento.

[0047] Los peptidos pueden conectarse, por ejemplo, ligarse covalentemente a cualquiera de una variedad de otros peptidos analgesicos o compuestos analgesicos. Por tanto, un peptido descrito en el presente documento puede ligarse a un segundo agente terapeutico, por ejemplo, un agente para tratar estrefimiento (por ejemplo, un activador de canales de cloruro tal como SPI-0211; Sucampo Pharmaceuticals, Inc.; Bethesda, MD; o un laxante tal como MiraLax; Braintree Laboratories, Braintree MA) o algun otro trastorno gastrointestinal. Ejemplos de un segundo agente terapeutico incluyen: agentes reductores acidos tales como inhibidores de la bomba de protones (por ejemplo, omeprazol, esomeprazol, lansoprazol, pantorazol y rabeprazol), bloqueantes de receptores de H2 (por ejemplo, cimetidina, ranitidina, famotidina y nizatidina), agentes pro-motilidad tales como agonistas de motilina (por ejemplo, GM-611 o fumarato de mitemcinal), agonistas de receptores de 5HT (por ejemplo, agonistas de receptores de 5HT4 tales como Zelnorm®; y agonistas de receptores de 5HT3 tales como MKC-733), antagonistas de receptores de 5HT (por ejemplo, antagonistas de receptores de 5HT1, 5HT2, 5HT3 (por ejemplo, alosetron) o 5HT4), agonistas de receptores muscarinicos, agentes antiinflamatorios, antiespasmodicos, antidepresivos, agentes analgesicos de accion central tales como agonistas de receptores de opioides, antagonistas de receptores de opioides (por ejemplo, naltrexona), agentes para el tratamiento de enfermedad inflamatoria del intestino, enfermedad de Crohn y colitis ulcerosa (por ejemplo, Traficet-ENT (ChemoCentryx, Inc.; San Carlos, CA)), agentes que tratan dolor gastrointestinal o visceral, e inhibidores de GMPc fosfodiesterasa (motapizona, zaprinast y suldinac sulfona). Los peptidos de la presente divulgacion tambien pueden ligarse a agentes tales como una tianeptina (Stablon®) y otros agentes descritos en el documento U.S. 6.683.072; ester de eter nonaetilenglicolmetilico de acido (E)4(1,3bis(ciclohexilmetil)-1,2,34,-tetrahidro-2,6-diono-9H-purin-8-il)cinamico y compuestos relacionados descritos en el documento WO 02/067942. Los peptidos pueden ligarse a un agente seleccionado del grupo que consiste en: bloqueantes de canales de Ca (por ejemplo, ziconotida), antagonistas de receptores de 5HT completos o parciales (por ejemplo, antagonistas de receptores de 5HT3 (por ejemplo, alosetron, ATI-7000; Aryx Therapeutics, Santa Clara CA), 5HT4, 5HT2 y 5HT1), agonistas de receptores de 5HT completos o parciales (incluyendo agonistas de receptores de 5HT3, 5HT2, 5HT4 (por ejemplo, tegaserod, mosaprida y renzaprida) y 5HT1), agonistas de receptores de CRF (NBI-34041), agonistas de adrenorreceptores -3, agonistas de receptores de opioides (por ejemplo, loperamida, fedotozina, fentanilo, naloxona, naltrexona, metil-nalozona, nalmefeno, cipridima, beta funaltrexamina, naloxonazina, naltrindol, nor-binaltorfimina, morfina, difeniloxilato, pentapeptido encefalina, asimadolina y trimebutina), antagonistas de receptores de NK1 (por ejemplo, ezlopitant y SR-14033), agonistas de receptores de CCK (por ejemplo, loxiglumida), antagonistas de receptores de NK1, antagonistas de receptores de NK3 (por ejemplo, talnetant, osanetant (SR-142801) o SSR-241586), inhibidores de la recaptacion de norepinefrinaserotonina (NSRI; por ejemplo, milnacipran), agonistas de receptores vanilloides y cannabinoides (por ejemplo, arvanil), sialorfina, peptidos relacionados con sialorfina que comprenden la secuencia de aminoacidos QHNPR, por ejemplo, VQHNPR VRQHNPR; VRGQHNPR; VRGPQHNPR; VRGPRQHNPR VRGPRRQHNPR y compuestos o peptidos de RQHNPR que son inhibidores de neprilisina, frakefamida (H-Tyr-D-Ala-Phe(F)-Phe-NH2; documento WO 01/019849 A1), loperamida, Tyr-Arg (kiotorfina), agonistas de receptores de CCK (ceruleina), peptidos de conotoxina, analogos de peptidos de timulina, loxiglumida, dexloxiglumida (el isomero R de loxiglumida) (documento WO 88/05774) y otros peptidos analgesicos o compuestos.

[0048] Pueden interponerse espaciadores de aminoacidos, no aminoacidos, peptidos y no peptidos entre un peptido de la divulgacion y un peptido que tiene alguna otra funcion biologica, por ejemplo, un peptido analgesico o un peptido usado para tratar obesidad. El ligador puede ser uno que se escinde de los peptidos flanqueantes in vivo

o uno que sigue ligado a los peptidos flanqueantes in vivo. Por ejemplo, como espaciador puede usarse glicina, beta-alanina, glicil-glicina, glicil-beta-alanina, acido gamma-aminobutirico, acido 6-aminocaproico, L-fenilalanina, Ltriptofano y glicil-L-valil-L-fenilalanina (Chaltin y col. 2003 Helvetica Chimica Acta 86:533-547; Caliceti y col. 1993 FARMCO 48:919-32) como pueden polietilenglicoles (Butterworth y col. 1987 J. Med. Chem 30:1295-302) y derivados de maleimida (King y col. 2002 Tetrahedron Lett. 43:1987-1990). Diversos otros ligadores se describen en la bibliografia (Nestler 1996 Molecular Diversity 2:35-42; Finn y col. 1984 Biochemistry 23:2554-8; Cook y col. 1994 Tetrahedron Lett. 35:6777-80; Brokx y col. 2002 Journal of Controlled Release 78:115-123; Griffin y col. 2003 J. Am. Chem. Soc. 125:6517-6531; Robinson y col. 1998 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95:5929-5934).

[0049] Los peptidos pueden incluir la secuencia de aminoacidos de un peptido que se produce naturalmente en una especie de vertebrado (por ejemplo, mamifero) o en una especie bacteriana. Ademas, los peptidos pueden ser peptidos que se producen no naturalmente parcialmente o completamente. Tambien estan dentro de la divulgacion peptidomimeticos correspondientes a los peptidos de la divulgacion.

[0050] Cuando estan completamente plegados, los enlaces disulfuro estan presentes entre la primera y tercera cisteinas y entre la segunda y cuarta cisteinas, por ejemplo, hay un enlace disulfuro entre Cys4 y Cys12 y un enlace disulfuro entre Xaa7 y Xaa15 (si Xaa7 es una Cys y Xaa15 es una Cys). En algunos casos, el peptido solo tiene un enlace disulfuro, por ejemplo, entre la primera y tercera cisteinas (es decir, Cys4 y Cys12; se corresponde con la primera y segunda cisteinas si Xaa7 es distinto de Cys). En ciertos casos, uno o mas Cys pueden reemplazarse por Mpt (mercaptoprolina) o Pen (penicilamina) o Dpr (acido diaminopropionico) o algun otro aminoacido que pueda unirse covalentemente a otro aminoacido (por ejemplo, Cys, Mpt, Pen o Dpr). En algunos casos, uno o ambos miembros de un par de residuos de Cys que normalmente forman un enlace disulfuro pueden reemplazarse por homocisteina, 3-mercaptoprolina (Kolodziej y col. 1996 Int J Pept Protein Res 48:274); , -dimetilcisteina (Hunt y col.

1993 Int J Pept Protein Res 42:249) o acido diaminopropionico (Smith y col. 1978 J Med Chem 21:117) para formar reticulaciones internas alternativas en las posiciones de los enlaces disulfuro normales.

[0051] Ademas, uno o mas enlaces disulfuro pueden reemplazarse por reticulaciones covalentes alternativas, por ejemplo, un enlace amida, un enlace ester, un enlace alquilo, un enlace tioester, un puente de lactama, un enlace carbamoilo, un enlace urea, un enlace tiourea, un enlace ester de fosfonato, un enlace alquilo y enlace alquenilo, un eter, un enlace tioeter o un enlace amino. Por ejemplo, Ledu y col. (Proceedings Nat�l Acad. Sci. 100:11263-78, 2003) describe procedimientos para preparar reticulaciones de lactama y amida. Schafmeister y col.

(J. Am. Chem. Soc. 122:5891, 2000) describen reticulaciones estables, todas de carbono. En algunos casos, la generacion de tales reticulaciones alternativas requiere sustituir los residuos de Cys con otros residuos tales como Lys o Glu o aminoacidos que se producen no naturalmente.

[0052] En ciertos casos, uno o mas aminoacidos pueden reemplazarse por un aminoacido que se produce no naturalmente o un analogo de aminoacido que se produce naturalmente o no naturalmente. Por ejemplo, un aminoacido aromatico puede reemplazarse por 3,4-dihidroxi-L-fenilalanina, 3-yodo-L-tirosina, triyodotironina, Ltiroxina, fenilglicina (Phg) o nor-tirosina (norTyr). Phg y norTyr y otros aminoacidos que incluyen Phe y Tyr pueden estar sustituidos por, por ejemplo, un halogeno, -CH3, -OH, -CH2NH3, -C(O)H, -CH2CH3, -CN, -CH2CH2CH3, -SH u otro grupo.

[0053] Otros ejemplos de aminoacidos no naturales incluyen: un analogo no natural de tirosina; un analogo no natural de glutamina; un analogo no natural de fenilalanina; un analogo no natural de serina; un analogo no natural de treonina; un alquilo, arilo, acilo, azido, ciano, halogeno, hidracina, hidrazida, hidroxilo, alquenilo, alquinilo, eter, tiol, sulfonilo, seleno, ester, tioacido, borato, boronato, fosfo, fosfono, fosfina, heterociclico, enona, imina, aldehido, hidroxilamina, aminoacido sustituido con ceto o amino o cualquier combinacion de los mismos; un aminoacido con un reticulante fotoactivable; un aminoacido marcado con espin; un aminoacido fluorescente; un aminoacido con un grupo funcional novedoso; un aminoacido que interactua covalentemente o no covalentemente con otra molecula; un aminoacido de union a metal; un aminoacido que contiene metal; un aminoacido radiactivo; un aminoacido fotoenjaulado y/o fotoisomerizable; una biotina o analogo de biotina que contiene aminoacido; un aminoacido glucosilado o modificado con hidrato de carbono; un aminoacido que contiene ceto; aminoacidos que comprenden polietilenglicol o polieter; un aminoacido sustituido con atomo pesado (por ejemplo, un aminoacido que contiene deuterio, tritio, 13C, 15N o 18O); un aminoacido quimicamente escindible o fotoescindible; un aminoacido con una cadena lateral alargada; un aminoacido que contiene un grupo toxico; un aminoacido sustituido con azucar, por ejemplo, una serina sustituida con azucar o similares; un aminoacido que contiene azucar ligada a carbono; un

azido-L-fenilalanina; una p-acil-L-fenilalanina; una p-benzoil-L-fenilalanina; una L-fosfoserina; una fosfonoserina; una fosfonotirosina; una p-yodo-fenilalanina; una 4-fluorofenilglicina; una p-bromofenilalanina; una p-amino-Lfenilalanina; una isopropil-L-fenilalanina; L-3-(2-naftil)alanina; un analogo de fenilalanina que contiene amino, isopropilo u O-alilo; una dopa, O-metil-L-tirosina; un aminoacido glucosilado; una p-(propargiloxi)fenilalanina, dimetillisina, hidroxi-prolina, acido mercaptopropionico, metil-lisina, 3-nitro-tirosina, norleucina, acido piroglutamico, Z (carbobenzoxilo), -acetil-lisina, -alanina, derivado de aminobenzoilo, acido aminobutirico (Abu), citrulina, acido aminohexanoico, acido aminoisobutirico, ciclohexilalanina, d-ciclohexilalanina, hidroxiprolina, nitro-arginina, nitrofenilalanina, nitro-tirosina, norvalina, carboxilato de octahidroindol, ornitina, penicilamina, tetrahidroisoquinolina, aminoacidos protegidos con acetamidometilo y un aminoacido pegilado. Otros ejemplos de aminoacidos no naturales pueden encontrarse en los documentos U.S. 20030108885, U.S. 20030082575 y las referencias citadas en su interior.

[0054] En algunos casos, un aminoacido puede reemplazarse por un aminoacido no esencial que se produce naturalmente, por ejemplo, taurina.

[0055] Los procedimientos para fabricar peptidos que contienen aminoacidos no naturales pueden encontrarse en, por ejemplo, los documentos U.S. 20030108885, U.S. 20030082575, Deiters y col., J Am Chem Soc. (2003) 125:11782-3, Chin y col., Science (2003) 301:964-7, y las referencias citadas en su interior.

[0056] Los peptidos que incluyen aminoacidos no naturales tambien pueden prepararse usando los procedimientos descritos en el documento WO02086075.

[0057] Los peptidos de la presente divulgacion pueden modificarse usando modificaciones convencionales. Las modificaciones pueden producirse en el extremo amino (N-), carboxi (C-), internamente o una combinacion de cualquiera de lo precedente. En un caso de la divulgacion, puede haber mas de un tipo de modificacion en el peptido. Las modificaciones incluyen, pero no se limitan a: acetilacion, amidacion, biotinilacion, cinnamoilacion, farnesilacion, formilacion, miristoilacion, palmitoilacion, fosforilacion (Ser, Tyr o Thr), estearoilacion, succinilacion, sulfurilacion y ciclacion (por puentes disulfuro o ciclacion de amidas), y modificacion por Cy3 o Cy5. Los peptidos de la presente divulgacion tambien pueden modificarse por 2,4-dinitrofenilo (DNP), DNP-lisina, modificacion por 7amino-4-metil-cumarina (AMC), fluoresceina, NBD (7-nitrobenz-2-oxa-1,3-diazol), p-nitro-anilida, rodamina B, EDANS (acido 5-((2-aminoetil)amino)naftaleno-1-sulfonico), dabcilo, dabsilo, dansilo, Texas Red, FMOC y Tamra (tetrametilrodamina). Los peptidos de la presente divulgacion tambien pueden conjugarse con, por ejemplo, BSA o KLH (hemocianina de lapa californiana).

[0058] La presente divulgacion tambien caracteriza un polipeptido purificado que comprende, que consiste en

o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) en la que:

Xaa1 es cualquier aminoacido o esta ausente; Xaa2 es cualquier aminoacido o esta ausente; Xaa3 es cualquier aminoacido o esta ausente; Xaa5 es Glu; Xaa6 es Tyr, Trp, Phe o Leu; Xaa7 es Cys; Xaa8 es cualquiera de los 20 aminoacidos que se producen naturalmente distintos de Cys o esta ausente; Xaa9 es cualquiera de los 20 aminoacidos que se producen naturalmente; Xaa10 es Pro o Gly; Xaa11 es cualquiera de los 20 aminoacidos que se producen naturalmente; Xaa13 es Thr, Val o Gly; Xaa14 es Gly o Ala; Xaa15 es Cys; y Xaa16 es cualquiera de los 20 aminoacidos que se producen naturalmente o esta ausente.

[0059] En diversos casos: Xaa9 es Asn; Xaa11 es Ala o Thr; Xaa8 esta ausente; y Xaa16 es Tyr.

[0060] En otros casos, Xaa4 va inmediatamente precedido de una secuencia de aminoacidos seleccionada de: Ser His Thr; Pro Ser Thr; Thr; Pro Asp Pro; Ile Ala Glu Asp Ser His Thr; Ile Ala Gln Asp Pro Ser Thr; Ala Asn Thr; Asn Thr; Asp Pro Asn Thr; Lys Asn Thr; Pro Asn Thr; Ile Ala Gln Asp Pro Asn Thr; Lys Pro Asn Thr; Asp Pro Gly Thr; Glu Asp Pro Gly Thr; Pro Gly Thr; Pro Ala Thr; Val Ala Ala Arg Ala Asp Leu; Gly Asp Asp; Asn Asp Glu; Gln Glu Asp; Asn Asp Asp; Arg Thr Ile Ala Asn Asp Asp; Thr Ile Ala Asn Asp Asp; Asp Asp; Arg Thr Met Asp Asn Asp Glu; Arg Thr Ile Ala Gly Asp Asp; Arg Thr Ile Ala Asn Asp; Asp; Glu Asp; Arg Ser Ile Ser Gln Glu Asp; Thr Asp Glu; Arg Thr Ile Ala Thr Asp Glu; Glu; Ile Ile Thr Pro Pro Asp Pro; Gln Glu Leu; Lys Asp Asp; Gln Glu Glu; Arg Tyr Ile Asn Gln Glu Glu; Ala Ser Ser Tyr Ala Ser; y Thr Ser Ser Tyr Ala Ser.

[0061] La presente divulgacion caracteriza adicionalmente un polipeptido purificado que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) en la que:

Xaa1 es: a) Ser, Asn, Tyr, Ala, Gln, Pro, Lys, Gly o Thr o esta ausente; b) precedida de Lys o Tyr; c) cualquier aminoacido; d) esta ausente; e) cualquier aminoacido distinto de Cys; o f) Lys o Arg; Xaa2 es: a) His, Asp, Glu, Ala, Ser, Asn, Gly o esta ausente; b) His, Asp, Glu, Ala, Ser, Asn, Gly, Pro o esta ausente; c) Asp, Glu, cualquier aminoacido o esta ausente; d) Asp o Glu; e) cualquier aminoacido distinto de Cys; e) Glu; f) esta ausente; g) Trp, Tyr o Phe; o h) Lys o Arg; Xaa3 es: a) Thr, Asp, Ser, Glu, Pro, Val o Leu; Asp o Glu; b) cualquier aminoacido distinto de Cys; c) Glu; d) Thr; e) Thr, Asp, Ser, Glu, Pro, Val o Leu o esta ausente; f) Trp, Tyr o Phe; o g) Lys o Arg; Xaa4 es: Cys, Mpt (mercaptoprolina), Pen (penicilamina), Dpr (acido diaminopropionico), Asp o Glu; Xaa5 es: a) cualquier aminoacido; b) Glu, Asp, Gln, Gly o Pro; c) Glu; d) Glu o Asp; e) Asp, Ile o Glu; f) cualquier aminoacido; o g) cualquier aminoacido distinto de Cys; Xaa6 es: a) Leu, Ile, Val, Ala, Lys, Arg, Trp, Tyr o Phe; b) Leu, Ile, Val, Lys, Arg, Trp, Tyr o Phe; Leu, Ile, Lys, Arg, Trp, Tyr o Phe; c) Leu, Ile, Val, Trp, Tyr o Phe; d) Trp, Tyr, Phe o Leu; e) Leu, Ile o Val; f) Ile, Trp o Leu; g) Trp, Tyr o Phe; h) Ile o Leu; i) Tyr, j) cualquier aminoacido; k) cualquier aminoacido excepto Leu; 1) cualquier aminoacido aromatico natural o no natural; o m) cualquier aminoacido distinto de Cys; Xaa7 es: a) Cys, Ser o Tyr; Cys; b) Cys, Mpt (mercaptoprolina), Pen (penicilamina), Dpr (acido diaminopropionico), Asp o Glu; c) Ser; o d) un aminoacido distinto de Cys; Xaa8 es: a) Ala, Val o Ile; b) Ala, Val, Thr, Ile, Met o esta ausente; c) cualquier aminoacido; d) Val; e) cualquier aminoacido distinto de Cys; o t) esta ausente; Xaa9 es: a) cualquier aminoacido; b) cualquier aminoacido distinto de Phe y Tyr; c) cualquier aminoacido distinto de Phe, Tyr, y Trp; d) cualquier aminoacido distinto de Phe, Tyr, Trp, Ile, Leu y Val; e) cualquier aminoacido distinto de Phe, Tyr, Trp, Ile, Leu, Val, y His; f) cualquier aminoacido distinto de Gln; g) cualquier aminoacido distinto de Lys, Arg, Phe, Tyr, y Trp; h) cualquier aminoacido distinto de Lys, Arg, Phe, Tyr, Trp, Ile, Leu y Val; i) cualquier aminoacido distinto de Lys, Arg, Phe, Tyr, Trp, Ile, Leu, Val, y His; j) cualquier aminoacido no aromatico; k) esta

ausente; 1) Phe, Tyr, Asn o Trp; m) Asn, Tyr, Asp o Ala; n) Asn, Gln o Tyr; o) Phe o Tyr; p) Asn; o q) cualquier aminoacido distinto de Cys; Xaa10 es: a) Ala, Pro o Gly; b) Pro o Gly; c) Pro; d) Ala, Val, Met, Thr o Ile; e) cualquier aminoacido; f) Val; g) Val o Pro; h) Ala o Val; i) cualquier aminoacido distinto de Cys; j) Pro; o k) Gly; Xaa11 es: a) cualquier aminoacido; b) Ala, Leu, Ser, Gly, Val, Glu, Gln, Ile, Leu, Lys, Arg o Asp; c) Ala o Gly; d) Ala; e) Ala o Val; f) cualquier aminoacido; g) Ala o Aib (acido alfa-aminobutirico); h) cualquier aminoacido distinto de Cys; i) Ala o Thr; o j) Thr. Xaa12 es: a) Cys, Mpt (mercaptoprolina), Pen (penicilamina), Dpr (acido diaminopropionico), Asp o Glu; o b) cualquier aminoacido distinto de Cys; Xaa13 es: a) Thr, Ala, Asn, Lys, Arg o Trp; b) Thr, Ala, Lys, Arg o Trp; c) cualquier aminoacido; d) cualquier aminoacido no aromatico; e) Thr, Ala o Trp; f) Trp, Tyr o Phe; g) Thr o Ala; h) cualquier aminoacido; i) Thr; j) cualquier aminoacido distinto de Cys; k) Thr, Val o Gly; 1) Thr o Val, m) Thr o Gly, n) Val o Thr; o) Val; p) Thr; o q) Gly; Xaa14 es: a) Gly, Pro o Ala; b) Gly; c) cualquier aminoacido; d) Gly, Ala o Ser; e) Gly o Ala; f) cualquier aminoacido distinto de Cys; o g) Ala; Xaa15 es: a) Cys, Tyr o esta ausente; b) Cys; c) Cys, Mpt (mercaptoprolina), Pen (penicilamina), Dpr (acido diaminopropionico), Asp, Glu; o d) cualquier aminoacido distinto de Cys o esta ausente; y Xaa16 es: a) Trp, Tyr, Phe, Asn, Ile, Val, His o Leu; b) Trp, Tyr, Phe, Asn o Leu; c) Trp, Tyr, Phe o Leu; d) Trp, Tyr o Phe; e) Leu, Ile o Val; f) His, Leu o Ser; g) Tyr o Leu; Lys o Arg; h) His; i) cualquier aminoacido, j) Leu o esta ausente; k) Trp, Tyr, Phe, Lys, Arg o esta ausente; 1) esta ausente; m) cualquier aminoacido distinto de Cys; o n) Tyr.

[0062] Tambien se caracteriza un polipeptido purificado que comprende, que consiste en o que consiste esencialmente en la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Xaa4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Xaa12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (Secuencia I) en la que:

Xaa1 es cualquier aminoacido o esta ausente; Xaa2 es cualquier aminoacido o esta ausente; Xaa3 es cualquier aminoacido o esta ausente; Xaa4 es Cys, Mpt (mercaptoprolina), Pen (penicilamina), Dpr (acido diaminopropionico), Asp o Glu; Xaa5 es Glu; Xaa6 es Tyr, Trp, Phe o Leu; Xaa7 es Cys, Mpt (mercaptoprolina), Pen (penicilamina), Dpr (acido diaminopropionico), Asp o Glu; Xaa8 es cualquier aminoacido distinto de Cys o esta ausente; Xaa9 es cualquier aminoacido; Xaa10 es Pro o Gly; Xaa11 es cualquier aminoacido; Xaa12 es Cys, Mpt (mercaptoprolina), Pen (penicilamina), Dpr (acido diaminopropionico), Asp o Glu; Xaa13 es Thr, Val o Gly; Xaa14 es Gly o Ala; Xaa15 es Cys, Mpt (mercaptoprolina), Pen (penicilamina), Dpr (acido diaminopropionico), Asp o Glu; y Xaa16 es cualquier aminoacido o esta ausente.

[0063] Los diversos peptidos pueden estar presentes con un contraion. Contraiones utiles incluyen sales de: acetato, bencenosulfonato, benzoato, edetato de calcio, camsilato, carbonato, citrato, edetato (EDTA), edisilato, embonato, esilato, fumarato, gluceptato, gluconato, glutamato, glicolilarsanilato, hexilresorcinato, yoduro, bromuro, cloruro, hidroxinaftoato, isetionato, lactato, lactobionato, estolato, maleato, malato, mandelato, mesilato, mucato, napsilato, nitrato, pantotenato, fosfato, salicilato, estearato, succinato, sulfato, tartrato, teoclato, acetamidobenzoato, adipato, alginato, aminosalicilato, anhidrometilencitrato, ascorbato, aspartato, canforato, caprato, caproato, caprilato, cinnamato, ciclamato, dicloroacetato, formiato, gentisato, glucuronato, glicerofosfato, glicolato, hipurato, fluoruro, malonato, napadisilato, nicotinato, oleato, orotato, oxalato, oxoglutarato, palmitato, pectinato, polimero de pectinato, feniletilbarbiturico, picrato, propionato, pidolato, sebacato, rodanida, tosilato y tannato.

[0064] En un segundo aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento terapeutico o profilactico que comprende administrar una composicion que comprende un peptido purificado que comprende, que consiste esencialmente o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I. Para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, el peptido puede administrarse por via oral, por supositorio rectal o parenteralmente.

[0065] En diversos casos, el paciente padece un trastorno gastrointestinal; el paciente padece un trastorno seleccionado del grupo que consiste en: un trastorno gastrointestinal de motilidad, sindrome del intestino irritable, un trastorno gastrointestinal funcional, enfermedad por reflujo gastroesofagico, reflujo duodenogastrico, pirosis funcional, dispepsia, dispepsia funcional, dispepsia no ulcerosa, gastroparesia, pseudo-obstruccion intestinal cronica, pseudo-obstruccion colonica, obesidad, insuficiencia cardiaca congestiva o hiperplasia prostatica benigna; la composicion se administra por via oral; el peptido comprende 150, 140, 130, 120,110, 100, 90, 80, 70, 60, 50, 40 o

30 o menos aminoacidos. En otros casos, el peptido comprende 20 o menos aminoacidos, y el peptido comprende no mas de 5 aminoacidos antes de Cys4. En otros casos, el peptido comprende no mas de 20, 15, 10 o 5 peptidos despues de Cys15. En ciertos casos, Xaa16 es un sitio de escision de quimiotripsina o tripsina y un peptido analgesico esta presente inmediatamente tras Xaa16.

5 [0066] Entre los peptidos utiles estan aquellos que comprenden, que consisten en o que consisten esencialmente en cualquiera de las siguientes secuencias de aminoacidos:

SHTCEICAFAACAGC (guanilina de zarig�eya);

10 PGTCEICAYAACTGC (guanilina humana); PSTCEICAYAACAGC (guanilina de cerdo); PNTCEICAYAACTGC (guanilina de rata); PDPCEICANAACTGCL (guanilina de anguila europea, deducida); NDDCELCVNVACTGCL (uroguanilina humana);

15 QEECELCINMACTGY (linfoguanilina de zarig�eya); GDDCELCVNVACTGCS (uroguanilina de cerdo); NDECELCVNIACTGC (uroguanilina de cobaya); TDECELCINVACTGC (uroguanilina de rata); QEDCELCINVACTGC (uroguanilina de zarig�eya);

20 MPSTQYIRRPASSYASCIWCTTACASCHGRTTKPSLAT (EAST 1); MPSTQYIRRPASSYASCIWCATACASCHGRTTKPSLAT; MPSTQYIRRPTSSYASCIWCATACASCHGRTTKPSLAT; MPSTQYIRRPTSSYASCIWCATVCASCHGRTTKPSLAT; MPSTQYIRRPASSYASCIWYATACASCHGRTTEPSLAT;

25 QEECELSINMACTGY (analogo de linfoguanilina de zarig�eya); YDECEICMFAACTGC (guanilina de anguila japonesa); VCEICAFAACTGC (guanilina de pez cebra, deducida); ADLCEICAFAACTGCL (renoguanilina de anguila japonesa, deducida); PGTCEICAYAACTGCL;

30 PGTCEICAYAACTGCL; PGTCEICAYAACTGCLKK; PNTCEICAYAACTGCKKKKKK; PNTCEICAYAACTGCD; PNTCEICAYAACTGCDK;

35 YPNTCEICAYAACTGC; KNTCEICAYAACTGC; KPNTCEICAYAACTGC; EDPGTCEICAYAACTGC; VTVQDG NFSFSLESVK KLKDLQEPQE PRVGKLRNFA PIPGEPVVPI LCSNPNFPEE LKPLCKEPNA

40 QEILQRLEEIAEDPGTCEICAYAACTGC; DPGTCEICAYAACTGC;

45 NDECELCVNVACTGCL; ECELCVNVACTGCL; EDCELCINVACTGC; NDDCELCVACTGCL; FKTLRTIANDDCELCVNVACTGCL; FKTLRTIANDDCLCVNVACTGCL; DDCELCVNVACTGCL; DCELCVNVACTGCL; CELCVNVACTGCL; KDDCELCVNVACTGCL; PNTCEICANPACTGC.

[0067] Los peptidos pueden incluir la secuencia de aminoacidos de un peptido que se produce naturalmente en una especie de vertebrado (por ejemplo, mamifero) o en una especie bacteriana. Ademas, los peptidos pueden ser peptidos que no se producen parcialmente o completamente naturalmente.

[0068] En un tercer aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar un paciente que padece estrefimiento, procedimiento que comprende administrar una composicion que comprende un peptido que comprende, que consiste esencialmente o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I. Los criterios clinicamente aceptados que definen el estrefimiento varian de la frecuencia de defecaciones, la consistencia de las heces y la facilidad de defecacion. Una definicion comun de estrefimiento es menos de tres defecaciones por semana. Otras definiciones incluyen heces anormalmente duras o defecacion que requiere excesivo esfuerzo (Schiller 2001 Aliment Pharmacol Ther 15:749-763). El estrefimiento puede ser idiopatico (estrefimiento funcional o estrefimiento de transito lento) o secundario a otra causa que incluye trastornos neurologicos, metabolicos o endocrinos. Estos trastornos incluyen diabetes mellitus, hipotiroidismo, hipertiroidismo, hipocalcemia, esclerosis multiple, enfermedad de Parkinson, lesiones de la medula espinal, neurofibromatosis, neuropatia autonomica, enfermedad de Chagas, enfermedad de Hirschsprung y fibrosis quistica. El estrefimiento tambien puede ser el resultado de cirugia o debido al uso de farmacos tales como analgesicos (como opioides), antihipertensores, anticonvulsivos, antidepresivos, antiespasmodicos y antipsicoticos.

[0069] En diversos casos, el estrefimiento esta asociado al uso de un agente terapeutico; el estrefimiento esta asociado a un trastorno neuropatico; el estrefimiento es estrefimiento posquirurgico; el estrefimiento esta asociado a un trastorno gastrointestinal, el estrefimiento es idiopatico (estrefimiento funcional o estrefimiento de transito lento); el estrefimiento esta asociado a trastorno neuropatico, metabolico o endocrino (por ejemplo, diabetes mellitus, hipotiroidismo, hipertiroidismo, hipocalcemia, esclerosis multiple, enfermedad de Parkinson, lesiones de la medula espinal, neurofibromatosis, neuropatia autonomica, enfermedad de Chagas, enfermedad de Hirschsprung o fibrosis quistica). El estrefimiento tambien puede ser el resultado de cirugia o debido al uso de farmacos tales como analgesicos (por ejemplo, opioides), antihipertensores, anticonvulsivos, antidepresivos, antiespasmodicos y antipsicoticos.

[0070] En un cuarto aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar un paciente que padece un trastorno gastrointestinal, procedimiento que comprende administrar al paciente una composicion que comprende un peptido purificado que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I.

[0071] En diversos casos, el paciente padece un trastorno gastrointestinal; el paciente padece un trastorno seleccionado del grupo que consiste en: un trastorno gastrointestinal de motilidad, sindrome del intestino irritable, un trastorno gastrointestinal funcional, enfermedad por reflujo gastroesofagico, pirosis funcional, dispepsia, dispepsia funcional, dispepsia no ulcerosa, gastroparesia, pseudo-obstruccion intestinal cronica, pseudo-obstruccion colonica; enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa, enfermedad inflamatoria del intestino, pseudo-obstruccion colonica, obesidad, insuficiencia cardiaca congestiva e hiperplasia prostatica benigna.

[0072] En un quinto aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para aumentar la motilidad gastrointestinal en un paciente, procedimiento que comprende administrar al paciente una composicion que comprende un peptido purificado que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I.

[0073] En un sexto aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para disminuir el dolor gastrointestinal o dolor visceral en un paciente, procedimiento que comprende administrar al paciente una composicion que comprende un peptido purificado que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I. [0074] En un septimo aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para aumentar la actividad de un receptor de guanilato ciclasa (GC-C) intestinal en un paciente, procedimiento que comprende administrar al paciente una composicion que comprende un peptido purificado que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I.

[0075] En un octavo aspecto, la presente divulgacion caracteriza una molecula de acido nucleico aislada que comprende una secuencia de nucleotidos que codifica un peptido que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I.

[0076] En un noveno aspecto, la presente divulgacion caracteriza una composicion que comprende un polipeptido purificado que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I. En un caso, la composicion es una composicion farmaceutica.

[0077] En un decimo aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar obesidad, procedimiento que comprende administrar una composicion que comprende un peptido purificado que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I. El peptido puede administrarse en combinacion con uno o mas agentes para el tratamiento de obesidad, por ejemplo, el fragmento de hormona intestinal peptido YY3-36 (PYY3-36) (N. Engl. J. Med. 349:941, 2003; ikpeapge daspeelnry yaslrhylnl vtrqry) o una variante del mismo, glp-1 (peptido 1 similar al glucagon), exendina-4 (un inhibidor de glp-1), sibutramina, fentermina, fendimetrazina, clorhidrato de benzofetamina (Didrex), orlistat (Xenical), clorhidrato de dietilpropiona (Tenuate), fluoxetina (Prozac), bupropiona, efedra, cromo, tamarindo malabar, benzocaina, fuco (Fucus vesiculosus), quitosano, nomame herba, galega (ruda de cabra, lila francesa), acido linoleico conjugado, L-carnitina, fibra (psilio, plantago, fibra guar), cafeina, deshidroepiandrosterona, camedrio (Teucrium chamaedrys), B-hidroxi--metilbutirato, ATL-962 (Alizyme PLC) o piruvato. Un peptido util para tratar obesidad puede administrarse como co-terapia con un peptido de la presente divulgacion tanto como una molecula distinta como parte de una proteina de fusion con un peptido de la presente divulgacion. Por tanto, por ejemplo, PYY3-36 puede fusionarse con el extremo carboxi o amino de un peptido de la divulgacion. Una proteina de fusion tal puede incluir un sitio de escision de quimiotripsina o tripsina que puede permitir la escision para separar los dos peptidos. Un peptido util para tratar obesidad puede administrarse como co-terapia con electroestimulacion (vease el documento U.S. 20040015201).

[0078] En un undecimo aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar insuficiencia cardiaca congestiva, procedimiento que comprende: administrar al paciente una composicion que comprende un peptido purificado que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I. El peptido puede administrarse en combinacion con uno o mas agentes para el tratamiento de insuficiencia cardiaca congestiva, por ejemplo, un peptido natriuretico tal como peptido natriuretico auricular, peptido natriuretico cerebral o peptido natriuretico tipo C), un diuretico o un inhibidor de enzima conversora de angiotensina.

[0079] En un duodecimo aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar hiperplasia prostatica benigna, procedimiento que comprende: administrar al paciente una composicion que comprende un peptido purificado que comprende, que consiste esencialmente en o que consiste en la secuencia de aminoacidos de secuencia I. El peptido puede administrarse en combinacion con uno o mas agentes para el tratamiento de HPB, por ejemplo, un inhibidor de 5-alfa reductasa (por ejemplo, finasterida) o un inhibidor alfa adrenergico (por ejemplo, doxazosina).

[0080] En un decimotercer aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar un paciente que padece un trastorno gastrointestinal, procedimiento que comprende administrar al paciente una composicion que comprende un agonista completo o parcial del receptor de GC-C. En diversos casos, el paciente padece un trastorno gastrointestinal; o el paciente padece un trastorno seleccionado del grupo que consiste en: un trastorno gastrointestinal de motilidad, sindrome del intestino irritable, un trastorno gastrointestinal funcional, enfermedad por reflujo gastroesofagico, pirosis funcional, dispepsia, dispepsia funcional, dispepsia no ulcerosa, gastroparesia, pseudo-obstruccion intestinal cronica y pseudo-obstruccion colonica.

[0081] En un decimocuarto aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar un paciente que padece estrefimiento, procedimiento que comprende administrar una composicion que comprende un agonista completo o parcial del receptor de GC-C.

[0082] En un decimoquinto aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para aumentar la motilidad gastrointestinal en un paciente, procedimiento que comprende administrar al paciente una composicion que comprende un agonista completo o parcial del receptor de GC-C. [0083] En un decimosexto aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para disminuir el dolor gastrointestinal o dolor visceral en un paciente, procedimiento que comprende administrar al paciente una composicion que comprende un agonista completo o parcial del receptor de GC-C.

[0084] En un decimoseptimo aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar insuficiencia cardiaca congestiva, procedimiento que comprende administrar un agonista completo o parcial del receptor de GC-C. Los agonistas de GC-C pueden actuar en el rifon y la glandula suprarrenal para controlar natriuresis, potasiuresis y diuresis, reduciendose asi la formacion de liquido asociado a insuficiencia cardiaca congestiva (Lorenz y col. J Clin Invest 112:1138, 2003; Carrithers y col. Kidney Int 65:40, 2004). El agonista puede administrarse en combinacion con uno o mas agentes para el tratamiento de insuficiencia cardiaca congestiva (por ejemplo, un peptido natriuretico tal como peptido natriuretico auricular, peptido natriuretico cerebral o peptido natriuretico tipo C), un diuretico o un inhibidor de enzima conversora de angiotensina.

[0085] En un decimoctavo aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar HPB, procedimiento que comprende administrar un agonista completo o parcial del receptor de GC-C. Agonistas de GC-C que actuan en la prostata pueden reducir la hipertrofia celular y complicaciones asociadas a hipertrofia celular. El agonista puede administrarse en combinacion con uno o mas agentes para el tratamiento de HPB, por ejemplo, un inhibidor de 5-alfa reductasa (por ejemplo, finasterida) o un inhibidor alfa adrenergico (por ejemplo, doxazosina).

[0086] En un decimonoveno aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento para tratar obesidad, procedimiento que comprende administrar un agonista completo o parcial del receptor de GC-C. El agonista puede administrarse en combinacion con uno o mas agentes para el tratamiento de obesidad, por ejemplo, sibutramina.

[0087] Los peptidos y agonistas del receptor de GC-C pueden usarse para tratar estrefimiento o motilidad intestinal disminuida, digestion lenta o vaciamiento lento del estomago. Los peptidos pueden usarse para aliviar uno

o mas sintomas de SII (meteorismo, dolor, estrefimiento), ERGE (reflujo acido en el esofago), reflujo duodenogastrico, dispepsia funcional, gastroparesia (nauseas, vomitos, meteorismo, vaciamiento gastrico retardado) y otros trastornos descritos en el presente documento.

[0088] Criterios clinicamente aceptados que definen el estrefimiento varian de la frecuencia de defecaciones, la consistencia de las heces y la facilidad de defecacion. Una definicion comun de estrefimiento es menos de tres defecaciones por semana. Otras definiciones incluyen heces anormalmente duras o defecacion que requiere excesivo esfuerzo (Schiller 2001, Aliment Pharmacol Ther 15:749-763). El estrefimiento puede ser idiopatico (estrefimiento funcional o estrefimiento de transito lento) o secundario a otra causa que incluye trastornos neurologicos, metabolicos o endocrinos. Estos trastornos incluyen diabetes mellitus, hipotiroidismo, hipertiroidismo, hipocalcemia, esclerosis multiple, enfermedad de Parkinson, lesiones de la medula espinal, neurofibromatosis, neuropatia autonomica, enfermedad de Chagas, enfermedad de Hirschsprung y fibrosis quistica. El estrefimiento tambien puede ser el resultado de cirugia o debido al uso de farmacos tales como analgesicos (como opioides), antihipertensores, anticonvulsivos, antidepresivos, antiespasmodicos y antipsicoticos.

[0089] En un vigesimo aspecto, la presente divulgacion caracteriza moleculas de acido nucleico aisladas que comprenden o que consiste en una secuencia que codifica un peptido de la presente divulgacion. La presente divulgacion tambien caracteriza vectores, por ejemplo, vectores de expresion que incluyen tales moleculas de acidos nucleicos y pueden usarse para expresar un peptido de la presente divulgacion en una celula cultivada (por ejemplo, una celula eucariota o una celula procariota). El vector pueden incluir adicionalmente uno o mas elementos reguladores, por ejemplo, un promotor heterologo o elementos requeridos para la traduccion operativamente ligada a la secuencia que codifica el peptido. En algunos casos, la molecula de acido nucleico codificara una secuencia de aminoacidos que incluye la secuencia de aminoacidos de un peptido de la presente divulgacion. Por ejemplo, la molecula de acido nucleico puede codificar una preproteina o una preproproteina que puede procesarse para producir un peptido de la presente divulgacion.

[0090] Un vector que incluye una secuencia de nucleotidos que codifica un peptido de la invencion o un peptido o polipeptido que comprende un peptido de la presente divulgacion puede ser tanto ARN como ADN, mono o bicatenario, procariota, eucariota o virico. Los vectores pueden incluir transposones, vectores viricos, episomas (por ejemplo, plasmidos), insertos de cromosomas y cromosomas artificiales (por ejemplo, BAC o YAC). Huespedes bacterianos adecuados para la expresion del peptido o polipeptido codificado incluyen, pero no se limitan a, E. coli. Huespedes eucariotas adecuados incluyen levadura tal como S. cerevisiae, otros hongos, celulas de vertebrado, celulas de invertebrado (por ejemplo, celulas de insecto), celulas vegetales, celulas humanas, celulas de tejido humano y organismos eucariotas completos (por ejemplo, una planta transgenica o un animal transgenico). Ademas, el vector acido nucleico puede usarse para generar un virus tal como variolovacuna o baculovirus.

[0091] Como se observa anteriormente, la presente divulgacion incluye vectores y construcciones geneticas adecuadas para la produccion de un peptido de la presente divulgacion o un peptido o polipeptido que comprende un peptido tal. Generalmente, la construccion genetica tambien incluye, ademas de la molecula de acido nucleico codificante, elementos que permiten la expresion, tal como un promotor y secuencias reguladoras. Los vectores de expresion pueden contener secuencias de control de la transcripcion que controlan la iniciacion de la transcripcion, tal como secuencias de promotor, potenciador, operador y represor. Una variedad de secuencias de control de la transcripcion son muy conocidas para aquellos expertos en la materia y pueden ser funcionales en, pero no se limitan a, una celula de bacteria, levadura, planta o animal. El vector de expresion tambien puede incluir una secuencia reguladora de la traduccion (por ejemplo, una secuencia de 5� sin traducir, una secuencia de 3� sin traducir, un sitio de adicion de poli A o un sitio interno de entrada al ribosoma), una secuencia de corte y empalme o secuencia reguladora de corte y empalme, y una secuencia de terminacion de la transcripcion. El vector puede ser de replicacion autonoma o puede integrarse en ADN huesped.

[0092] La presente divulgacion tambien caracteriza celulas huesped aisladas que alojan una de las anteriores moleculas de acidos nucleicos y procedimientos para producir un peptido cultivando una celula tal y recuperando el peptido o un precursor del peptido. La recuperacion del peptido o precursor puede referirse a recoger la disolucion de crecimiento y no necesita implicar etapas de purificacion adicionales. Sin embargo, las proteinas de la presente divulgacion pueden purificarse usando tecnicas de purificacion convencionales tales como, pero no se limitan a, cromatografia de afinidad, termoprecipitacion, cromatografia de inmunoafinidad, precipitacion con sulfato de amonio, cromatografia de intercambio ionico, filtracion, electroforesis y cromatografia de interaccion hidrofoba.

[0093] En un vigesimoprimero aspecto, la presente divulgacion caracteriza un procedimiento de aumentar el nivel de guanosin 3�-monofosfato ciclico (GMPc) en un organo, tejido (por ejemplo, la mucosa intestinal) o celula (por ejemplo, una celula que lleva un receptor de GC-A) administrando una composicion que incluye un peptido de la presente divulgacion.

[0094] Los detalles de uno o mas casos de la divulgacion, por ejemplo, una o mas realizaciones de la invencion, se exponen en la descripcion y reivindicaciones adjuntas.

DIBUJOS

[0095]

La FIG. 1 representa variantes de delecion de guanilina humana en las que estan delecionados uno, dos, tres o cuatro aminoacidos. Los aminoacidos delecionados estan entre Cysa y Cysd, ademas del extremo amino con respecto a Cysa.

La FIG. 2 representa variantes de insercion de guanilina humana en las que estan insertadas uno, dos, tres o cuatro aminoacidos. Los aminoacidos insertados estan entre Cysa y Cysd, ademas del extremo amino con respecto a Cysa y el extremo carboxi con respecto a Cysd.

La FIG. 3 representa diversos polipeptidos que incluyen la secuencia de aminoacidos: Xaa1 Xaa2 Xaa3 Cys4 Xaa5 Xaa6 Xaa7 Xaa8 Xaa9 Xaa10 Xaa11 Cys12 Xaa13 Xaa14 Xaa15 Xaa16 (secuencia I) en la que:

DESCRIPCION DETALLADA

[0096] Los peptidos de la presente divulgacion se unen al receptor de guanilato ciclasa (GC-C), un regulador clave del equilibrio de liquidos y electrolitos en el intestino y rifon. Cuando se estimula, este receptor, que se localiza en la membrana apical de la superficie epitelial intestinal, produce un aumento en el GMP ciclico (GMPc) epitelial intestinal. Se cree que este aumento en GMPc produce una disminucion en la absorcion de agua y sodio y un aumento en la secrecion de ion cloruro y potasio, conduciendo a cambios en el transporte de liquidos intestinales y electrolitos y a un aumento de la motilidad intestinal. El receptor de GC-C intestinal posee una region de union a ligando extracelular, una region transmembrana, una region similar a proteina cinasa intracelular y un dominio catalitico de ciclasa. Las funciones propuestas para el receptor de GC-C son la homeostasis de liquidos y electrolitos, la regulacion de la proliferacion celular epitelial y la induccion de apoptosis (Shaibhubhai 2002 Curr Opin Drugs. Dis Devel 5:261-268).

[0097] Ademas de expresarse en celulas epiteliales gastrointestinales, GC-C se expresa en tejidos extraintestinales que incluyen rifon, pulmon, pancreas, pituitaria, suprarrenal, higado en desarrollo, corazon y tejidos reproductores masculinos y femeninos (revisado en Vaandrager 2002 Mol Cell Biochem 230:73-83). Esto sugiere que los agonistas de receptores de GC-C pueden usarse en el tratamiento de trastornos fuera del tubo GI, por ejemplo, insuficiencia cardiaca congestiva e hiperplasia prostatica benigna.

[0098] La grelina, una hormona peptidica secretada por el estomago, es un regulador clave del apetito en seres humanos. Los niveles de expresion de grelina se regulan por ayuno y por vaciamiento gastrico (Kim y col., 2003, Neuroreport 14:1317-20; Gualillo y col., 2003, FEBS Letts 552: 105-9). Por tanto, aumentando motilidad gastrointestinal, los agonistas de receptores de GC-C tambien pueden usarse para regular la obesidad.

[0099] En seres humanos, el receptor de GC-C se activa por guanilina (Gn) (patente de EE.UU. 5.969.097), uroguanilina (Ugn) (patente de EE.UU. 5.140.102) y linfoguanilina (Forte y col. 1999 Endocrinology 140:1800-1806).

[0100] Muchos trastornos gastrointestinales, que incluyen SII, estan asociados a dolor abdominal o visceral.

Ciertos de los peptidos de la presente divulgacion incluyen marcas analgesicas o antinociceptivas tales como la secuencia del extremo carboxi AspPhe inmediatamente tras Trp, Tyr o Phe (es decir, un sitio de escision de quimiotripsina) o tras Lys o Arg (un sitio de escision de tripsina). La quimiotripsina en el tubo intestinal escindira tales peptidos inmediatamente al extremo carboxi con respecto al residuo de Trp, Phe o Tyr, liberando el dipeptido, AspPhe. Se ha mostrado que este dipeptido tiene actividad analgesica en modelos animales (Abdikkahi y col. 2001 Fundam Clin Pharmacol 15:117-23; Nikfar y col. 1997, 29:583-6; Edmundson y col. 1998 Clin Pharmacol Ther 63:580-93). De este modo, tales peptidos pueden tratar tanto dolor como inflamacion. Otros peptidos analgesicos pueden estar presentes en el extremo carboxi del peptido (tras un sitio de escision) que incluye: endomorfina-1, endomorfina-2, nocistatina, dalargina, lupron y sustancia P. Como se describe en mayor detalle mas adelante, diversos peptidos analgesicos y compuestos pueden estar ligados covalentemente a o usarse en terapia de combinacion con los peptidos terapeuticos descritos en el presente documento.

[0101] En el cuerpo humano, una forma inactiva de quimiotripsina, el quimiotripsinogeno, se produce en el pancreas. Cuando esta enzima inactiva llega al intestino delgado se convierte en quimiotripsina activa por la escision de dos di-peptidos. La quimiotripsina activa escindira peptidos en el enlace peptidico en el lado del extremo carboxi de Trp, Tyr o Phe. La presencia de quimiotripsina activa en el tubo intestinal conducira a la escision de ciertos de los peptidos de la presente divulgacion que tienen un sitio de escision de quimiotripsina apropiadamente posicionado. Ciertos de los peptidos de la presente divulgacion incluyen Trp, Tyr o Phe inmediatamente seguidos de un peptido analgesico del extremo carboxi. Se espera que la escision de quimiotripsina libere al peptido analgesico del peptido de la presente divulgacion que tiene un sitio de escision de quimiotripsina apropiadamente posicionado a medida que el peptido pasa por el tubo intestinal.

[0102] El tripsinogeno, al igual que la quimiotripsina, es una serina proteasa que se produce en el pancreas y esta presente en el tubo digestivo. La forma activa, la tripsina, escindira peptidos que tienen Lys o Arg. La presencia de tripsina activa en el tubo intestinal conducira a la escision de ciertos de los peptidos de la presente divulgacion que tienen un sitio de escision de tripsina apropiadamente posicionado. Se espera que la escision de quimiotripsina libere al peptido analgesico del peptido de la presente divulgacion que tiene un sitio de escision de tripsina apropiadamente posicionado a medida que el peptido pasa por el tubo intestinal.

[0103] En algunos casos, los peptidos de la presente divulgacion se producen como una prepro proteina. La prepro proteina puede incluir cualquier secuencia prepro adecuada, que incluye, por ejemplo, mnafllsalc llgawaalag gvtvqdgnfs fslesvkklk dlqepqeprv gklrnfapip gepvvpilcs npnfpeelkp Ickepnaqei lqrleeiaed y mgcraasgll pgvavvllll lqstqsvyiq yqgfrvqles mkklsdleaq wapsprlqaq sllpavchhp alpqdlqpvc asqeassifk tlrtia o una secuencia conductora bacteriana tal como: mkksilfiflsvlsfspfaqdakpvesskekitleskkcniakksnksgpesmn. Si el peptido se produce por una celula bacteriana, por ejemplo, E. coli, la anterior secuencia conductora se escindira y el peptido maduro sera eficientemente secretado de la celula bacteriana. La patente de EE.UU. n� 5.395.490 describe vectores, sistemas de expresion y procedimientos para la eficiente produccion de ciertos peptidos maduros que tienen enlaces disulfuro en celulas bacterianas y procedimientos para conseguir la eficiente secrecion de tales peptidos maduros. Los vectores, sistemas de expresion y procedimientos descritos en la patente de EE.UU. n� 5.395.490 pueden usarse para producir los polipeptidos de la presente divulgacion.

Peptidos variantes

[0104] La presente divulgacion incluye peptidos variantes que pueden incluir una, dos, tres, cuatro o cinco o mas (por ejemplo, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 o 15) sustituciones de aminoacidos en comparacion con cualquiera de los peptidos descritos anteriormente. La(s) sustitucion (sustituciones) puede(n) ser conservativa(s) o no conservativa(s). Los aminoacidos que se producen naturalmente pueden estar sustituidos por D-isomeros de cualquier aminoacido, aminoacidos no naturales, analogos de aminoacidos naturales y no naturales, y otros grupos. Una sustitucion de aminoacidos conservativa produce la alteracion de un aminoacido por un aminoacido de accion similar o aminoacido de carga, polaridad o hidrofobia similar. En algunas posiciones, incluso sustituciones de aminoacidos conservativas pueden reducir la actividad del peptido. Una sustitucion conservativa puede sustituir un aminoacido que se produce naturalmente por un aminoacido que se produce no naturalmente. Entre las sustituciones de aminoacidos que se produce naturalmente, generalmente se consideran conservativas:

Para el aminoacido: Codigo Sustituir con cualquiera de

Alanina: Ala Gly, Cys, Ser

Arginina: Arg Lys, His

Asparagina: Asn Asp, Glu, Gln,

�cido aspartico: Asp Asn, Glu, Gln

Cisteina: Cys Met, Thr, Ser

Glutamina: Gln Asn, Glu, Asp

�cido glutamico: Glu Asp, Asn, Gln

Glicina: Gly Ala

Histidina: His Lys, Arg

Isoleucina: Ile Val, Leu, Met

Leucina: Leu Val, Ile, Met

Lisina: Lys Arg, His

Metionina: Met Ile, Leu, Val

Fenilalanina: Phe Tyr, His, Trp

Prolina: Pro

Serina: Ser Thr, Cys, Ala

Treonina: Thr Ser, Met, Val

Triptofano: Trp Phe, Tyr

Tirosina: Tyr Phe, His

Valina: Val Leu, Ile, Met

[0105] En algunos casos puede desearse tratar pacientes con un peptido variante que se une a y activa el receptor de GC-C intestinal, pero es menos activo o mas activo que la forma no variante del peptido. La actividad

5 reducida puede surgir de la reducida afinidad por el receptor o una capacidad reducida para activar el receptor una vez unido o la estabilidad reducida del peptido. El aumento de la actividad puede surgir del aumento de la afinidad por el receptor o un aumento de la capacidad para activar el receptor una vez unido o el aumento de la estabilidad del peptido.

10 [0106] En algunos peptidos, uno o ambos miembros de uno o ambos pares de residuos de Cys que normalmente forman un enlace disulfuro pueden reemplazarse por homocisteina, 3-mercaptoprolina (Kolodziej y col. 1996 Int J Pept Protein Res 48:274); , -dimetilcisteina (Hunt y col. 1993 Int J Pept Protein Res 42:249) o acido diaminopropionico (Smith y col. 1978 J Med Chem 21:117) para formar reticulaciones internas alternativas en las posiciones de los enlaces disulfuro normales.

15 Produccion de peptidos

[0107] Pueden producirse peptidos utiles tanto en bacterias que incluyen, sin limitacion, E. coli o en otros sistemas existentes para la produccion de peptidos o proteinas (por ejemplo, Bacillus subtilis, sistemas de expresion

20 de baculovirus usando celulas Sf9 de Drosophila, sistemas de expresion de levadura o fungicos filamentosos, sistemas de expresion de celulas de mamifero) como pueden sintetizarse quimicamente. [0108] Si el peptido o peptido variante va a producirse en bacterias, por ejemplo, E. coli, la molecula de acido nucleico que codifica el peptido tambien puede codificar una secuencia conductora que permite la secrecion del peptido maduro de la celula. Por tanto, la secuencia que codifica el peptido puede incluir la pre secuencia y la pro

25 secuencia de, por ejemplo, un peptido ST bacteriano que se produce naturalmente. El peptido maduro secretado puede purificarse a partir del medio de cultivo.

[0109] La secuencia que codifica un peptido de la presente divulgacion puede insertarse en un vector que puede liberar y mantener la molecula de acido nucleico en una celula bacteriana. La molecula de ADN puede 30 insertarse en un vector autonomamente replicante (vectores adecuados incluyen, por ejemplo, pGEM3Z y pDNAc3, y derivados de los mismos). El acido nucleico del vector puede ser un ADN bacteriano o de bacteriofago, tal como bacteriofago lambda o M13 y derivados de los mismos. La construccion de un vector que contiene un acido nucleico descrito en el presente documento puede ir seguida de transformacion de una celula huesped tal como una bacteria. Huespedes bacterianos adecuados incluyen, pero no se limitan a, E. coli, B. subtilis, Pseudomonas, Salmonella. La 35 construccion genetica tambien incluye, ademas de la molecula de acido nucleico codificante, elementos que permiten la expresion, tal como un promotor y secuencias reguladoras. Los vectores de expresion pueden contener secuencias de control de la transcripcion que controlan la iniciacion de la transcripcion, tal como secuencias de promotor, potenciador, operador y represor. Una variedad de secuencias de control de la transcripcion son muy conocidas para aquellos expertos en la materia. El vector de expresion tambien puede incluir una secuencia

40 reguladora de la traduccion (por ejemplo, una secuencia de 5� sin traducir, una secuencia de 3� sin traducir o un sitio interno de entrada al ribosoma). El vector puede ser de replicacion autonoma o puede integrarse en ADN huesped para garantizar la estabilidad durante la produccion de peptidos.

[0110] La secuencia codificante de proteinas que incluye un peptido de la presente divulgacion tambien puede fusionarse con un acido nucleico que codifica una marca de afinidad de polipeptido, por ejemplo, glutation Stransferasa (GST), proteina de union a maltosa E, proteina A, marca FLAG, hexa-histidina, marca myc o la marca HA de la gripe, con el fin de facilitar la purificacion. La marca de afinidad o fusion indicadora se une en el marco de lectura del peptido de interes con el marco de lectura del gen que codifica la marca de afinidad de forma que se genere una fusion de traduccion. La expresion del gen de fusion produce la traduccion de un unico polipeptido que incluye tanto el peptido de interes como la marca de afinidad. En algunos casos en los que se utilizan marcas de afinidad, la secuencia de ADN que codifica un sitio de reconocimiento de proteasa se fusionara entre los marcos de lectura para la marca de afinidad y el peptido de interes.

[0111] Tambien pueden usarse construcciones geneticas y procedimientos adecuados para la produccion de formas inmaduras y maduras de los peptidos y variantes de la presente divulgacion en sistemas de expresion de proteina distintos de bacterias, y muy conocidos para aquellos expertos en la materia, para producir peptidos en un sistema biologico.

[0112] Los peptidos maduros y las variantes de los mismos pueden sintetizarse por el procedimiento en fase solida usando un sintetizador de peptidos automatizado. Por ejemplo, el peptido puede sintetizarse en resina de Cyc(4-CH2 Bxl)-OCH2-4-(oximetil)-fenilacetamidometilo usando un programa de acoplamiento doble. Grupos protectores deben usarse apropiadamente para crear el patron de enlace disulfuro correcto. Por ejemplo, pueden usarse los siguientes grupos protectores: t-butiloxicarbonilo (grupos alfa-amino); acetamidometilo (grupos tiol de residuos de Cys B y E); 4-metilbencilo (grupos tiol de residuos de Cys C y F); bencilo (y-carboxil de acido glutamico y el grupo hidroxilo de treonina, si esta presente); y bromobencilo (grupo fenolico de tirosina, si esta presente). El acoplamiento se efectua con anhidrido simetrico de aminoacidos de t-butoxilcarbonilo o ester de hidroxibenzotriazol (para residuos de asparagina o glutamina), y el peptido se desprotege y se escinde del soporte solido en fluoruro de hidrogeno, sulfuro de dimetilo, anisol y p-tiocresol usando la relacion 8/1/1/0,5 (v/v/v/peso) a 0�C durante 60 min. Despues de eliminar el fluoruro de hidrogeno y el sulfuro de dimetilo por presion reducida y el anisol y el p-tiocresol por extraccion con eter etilico y acetato de etilo secuencialmente, los peptidos brutos se extraen con una mezcla de tampon fosfato de sodio 0,5 M, pH 8,0 y N,N-dimetilformamida usando la relacion 1/1, v/v. Entonces, el enlace disulfuro para los residuos de Cys B y E se forma usando sulfoxido de dimetilo (Tam y col. (1991) J. Am. Chem. Soc. 113:6657-62). Entonces, el peptido resultante se purifica por cromatografia de fase inversa. El enlace disulfuro entre los residuos de Cys C y F se forma disolviendo primero el peptido en 50% de acido acetico en agua. Se afade disolucion de yodo saturada en acido acetico glacial (1 ml de disolucion de yodo por 100 ml de disolucion). Despues de la incubacion a temperatura ambiente durante 2 dias en un recipiente de vidrio encerrado, la disolucion se diluye cinco veces con agua desionizada y se extrae cuatro veces con eter etilico para la eliminacion del yodo sin reaccionar. Despues de eliminar la cantidad residual de eter etilico mediante evaporacion rotatoria, la disolucion de producto bruto se liofiliza y se purifica por cromatografia de fase inversa sucesiva.

Ensayos de union de receptor de GC-C intestinal y de actividad

[0113] La capacidad de peptidos, peptidos variantes y otros compuestos para unirse a y activar el receptor de GC-C intestinal puede probarse usando la linea celular de carcinoma de colon humano T84 (Coleccion americana de cultivos tipo (Bethesda, Md.)).

[0114] Brevemente, celulas se cultivan a confluencia en placas de cultivo de 24 pocillos con una mezcla 1:1 de medio F12 de Ham y medio Eagle modificado por Dulbecco (DMEM), complementado con 5% de suero bovino fetal y se usan entre los pases 54 y 60.

[0115] Monocapas de celulas T84 en placas de 24 pocillos se lavan dos veces con 1 ml/pocillo de DMEM, luego se incuban a 37�C durante 10 min con 0,45 ml de DMEM que contiene isobutilmetilxantina (IBMX) 1 mM, un inhibidor de fosfodiesterasa de nucleotido ciclico. Entonces se afaden los peptidos de prueba (50 �l) y se incuban durante 30 minutos a 37�C. El medio se aspira y la reaccion se termina mediante la adicion de 0,5 ml de HCl 0,1 N helado. Las muestras se mantienen sobre hielo durante 20 minutos y luego se evaporan a sequedad usando una pistola de calor o centrifugacion a vacio. Las muestras secadas se resuspenden en 0,5 ml de tampon fosfato proporcionado en el kit Cayman Chemical Cyclic GMP EIA (Cayman Chemical, Ann Arbor, MI). El GMP ciclico se mide por EIA segun procedimientos brevemente explicados en el kit Cayman Chemical Cyclic GMP EIA.

[0116] Para el ensayo de union, monocapas de celulas T84 en placas de 24 pocillos se lavan dos veces con 1 ml/pocillo de DMEM (DMEM que contiene 0,05% de albumina de suero bovino y HEPES 25 mM, pH 7,2), luego se incuban durante 30 min a 37�C en presencia de peptido ST de E. coli radiactivamente marcado maduro y el material se prueba a diversas concentraciones. Entonces, las celulas se lavan 4 veces con 1 ml de DMEM y se solubilizan con 0,5 ml/pocillo de NaOH 1 N. Entonces, el nivel de radiactividad en el material solubilizado se determina usando procedimientos convencionales.

Ensayo de transito gastrointestinal (TGI) murino

[0117] Con el fin de determinar si un compuesto de prueba o un peptido aumenta la tasa de transito gastrointestinal, el compuesto de prueba puede probarse en el ensayo de transito gastrointestinal (TGI) murino (Moon y col. Infection and Immunity 25:127, 1979). En este ensayo, carbon vegetal, que puede visualizarse facilmente en el tubo gastrointestinal, se administra a ratones despues de la administracion de un compuesto de prueba. La distancia recorrida por el carbon vegetal se mide y se expresa como un porcentaje de la longitud total del colon.

[0118] Los ratones ayunan con acceso libre a agua durante 12 a 16 horas antes del tratamiento con peptido o tampon de control. Los peptidos se administran por via oral a 1 �g/kg-1 mg/kg de peptido en tampon (Tris 20 mM a pH 7,5) siete minutos antes de administrarseles una dosis oral de 5% de carbono activo (Aldrich 242276-250G). A los ratones de control se les administra tampon solo antes de administrarseles una dosis de carbono activo. Despues de 15 minutos, los ratones se sacrifican y se diseccionan sus intestinos desde el estomago hasta el ciego. La longitud total del intestino, ademas de la distancia recorrida desde el estomago hasta el frente del carbon vegetal, se mide para cada animal y los resultados se expresan como el porcentaje de longitud total del intestino recorrida por el frente del carbon vegetal. Los resultados se informan como el promedio de 10 ratones � desviacion estandar. Una comparacion de la distancia recorrida por el carbon vegetal entre los ratones tratados con peptido frente a los ratones tratados con vehiculo solo se realiza usando una prueba de la t de Student y se considera una diferencia estadisticamente significativa para P�0,05. Los controles positivos para este ensayo pueden incluir peptido ST natural comercialmente disponible (Sigma-Aldrich, St Louis, MO) y Zelnorm®, un farmaco aprobado para SII que es un agonista para el receptor de serotonina de 5HT4.

Modelo de raton lactante de secrecion intestinal (ensayo de SuMi)

[0119] Los peptidos de la presente divulgacion pueden probarse para su capacidad para aumentar la secrecion intestinal usando un modelo de raton lactante de secrecion intestinal. En este modelo, un compuesto de prueba se administra a ratones lactantes que tienen entre siete y nueve dias. Despues de sacrificarse los ratones se disecciona el tubo gastrointestinal desde el estomago hasta el ciego ("intestinos"). El resto ("cadaver"), ademas de los intestinos, se pesa y se calcula la relacion de peso de intestinos con respecto a cadaver. Si la relacion es superior a 0,09, puede concluirse que el compuesto de prueba aumenta la secrecion intestinal. Los controles para este ensayo puede incluir peptido ST natural y Zelnorm®

Modelo de retorcimiento de dolor inducido por fenilbenzoquinona

[0120] El modelo de retorcimiento de dolor inducido por PBQ puede usarse para evaluar la actividad de control del dolor de los peptidos y agonistas de receptores de GC-C de la presente divulgacion. Este modelo se describe por Siegmund y col. (1957 Proc. Soc. Exp. Bio. Med. 95:729-731). Brevemente, una hora despues de la dosificacion oral con un compuesto de prueba, por ejemplo, un peptido, morfina o vehiculo, el 0,02% de disolucion de fenilbenzoquina (PBQ) (12,5 ml/kg) se inyecta por via intraperitoneal en el raton. El numero de distensiones y retorcimientos se registran del 5� al 10� minuto despues de la inyeccion de PBQ, y tambien puede contarse entre el 35� y el 40� minuto y entre el 60� y el 65� minuto para proporcionar una evaluacion cinetica. Los resultados se expresan como el numero de distensiones y retorcimientos de dolor (media � EEM) y el porcentaje de variacion del umbral nociceptivo calculado a partir del valor medio del grupo tratado con vehiculo. La significancia estadistica de cualquier diferencia entre los grupos tratados y el grupo de control se determina por una prueba de Dunnett usando la varianza residual despues de un analisis unilateral de la varianza (P� 0,05) usando el software SigmaStat.

Modelos animales de hiperalgesia colonica

[0121] La hipersensibilidad a la distension colorrectal es una caracteristica comun en pacientes con SII y puede ser responsable del sintoma principal de dolor. Se han desarrollado modelos animales tanto inflamatorios como no inflamatorios de hiperalgesia visceral a distension para investigar el efecto de los compuestos sobre el dolor visceral en SII.

I. Modelo de alodinia rectal inducida por acido trinitrobencenosulfonico (TNBS)

[0122] Ratas Wistar macho (220-250 g) se medican previamente con 0,5 mg/kg de acepromazina inyectada intraperitonealmente (IP) y se anestesian por administracion intramuscular de 100 mg/kg de ketamina. Se implantan pares de electrodos de alambre de nicromo (60 cm de longitud y 80 �m de diametro) en el musculo estriado del abdomen, 2 cm lateralmente de la linea alba. Los extremos libres de los electrodos se exteriorizan en la parte trasera del cuello y se protegen por un tubo de plastico unido a la piel. Los registros electromiograficos (EMG) se empiezan 5 dias despues de la cirugia. La actividad electrica del musculo estriado abdominal se registra con una maquina de electroencefalografia (Mini VIII, Alvar, Paris, Francia) usando un breve tiempo constante (0,03 s) para eliminar sefales de baja frecuencia (�3 Hz).

[0123] Diez dias despues de la implantacion quirurgica se administra acido trinitrobencenosulfonico (TNBS) para inducir inflamacion rectal. El TNBS (80 mg kg-1 en 0,3 ml de 50% de etanol) se administra intrarrectalmente por un cateter de caucho de silicona introducido a 3 cm desde el ano bajo una ligera anestesia con eter dietilico como se ha descrito (Morteau y col. 1994 Dig Dis Sci 39:1239). Tras la administracion de TNBS, las ratas se colocan en tuneles de plastico en los que estan gravemente limitadas en movilidad durante varios dias antes de la distension colorrectal (DCR). El compuesto experimental se administra una hora antes de realizarse la DCR por insercion en el recto, a 1 cm del ano, de un balon de 4 cm de longitud hecho de un preservativo de latex (Gue y col., 1997 Neurogastroenterol. Motil. 9:271). El balon se fija en un cateter rigido tomado de una sonda de embolectomia (Fogarty). El balon unido al cateter se fija en la base de la cola. El balon, conectado a un barostato, se infla progresivamente por etapa de 15 mm de Hg, de 0 a 60 mm de Hg, durando etapa de hinchamiento 5 min. La evaluacion de la sensibilidad rectal, como se mide por EMG, se realiza antes (1-2 dias) y 3 dias tras la instilacion rectal de TNBS.

[0124] El numero de rafagas de espigas que se corresponden con contracciones abdominales se determina durante periodos de 5 min. El analisis estadistico del numero de contracciones abdominales y evaluacion de las relaciones de efectos de dosis se realiza por un analisis unilateral de varianza (ANOVA) seguido de un analisis a posteriori (pruebas de Student o de Dunnett) y regresion para DE50, si es apropiado.

II. Modelo de hiperalgesia inducida por tension

[0125] Ratas Wistar macho (200-250 g) se implantan quirurgicamente con electrodos de alambre de nicromo como en el modelo de TNBS. Diez dias despues de la implantacion quirurgica, el estres por inmovilizacion parcial (PRS) se realiza como se describe por Williams y col. durante dos horas (Williams y col. 1988 Gastroenterology 64:611). Brevemente, bajo ligera anestesia con eter dietilico, la parte delantera de los hombros, la parte delantera de las extremidades superiores y el tronco toracico se envuelven en un arnes de confinacion de cinta de papel para limitar, pero no para evitar, el movimiento del cuerpo. Los animales con estres de referencia de control se anestesiaron, pero no se envolvieron. Treinta minutos antes del final de la sesion de PRS, a los animales se les administra el compuesto de prueba o vehiculo. Treinta minutos a una hora despues de completarse el PRS, el procedimiento de distension DCR se realiza como se ha descrito anteriormente para el modelo de TNBS con barostato a presiones de 15, 30, 45 y 60 mm de Hg. El analisis estadistico en el numero de rafagas se determina y se analiza como en el modelo de TNBS anterior.

Administracion de peptidos y agonistas de receptores de GC-C

[0126] Para el tratamiento de trastornos gastrointestinales, los peptidos y agonistas de la presente divulgacion pueden administrarse por via oral, por ejemplo, como un comprimido o sello que contiene una cantidad predeterminada del principio activo; como una pella, gel, pasta, jarabe, bolo, electuario, suspension o capsula; como un polvo; como granulos; como una disolucion o una suspension en un liquido acuoso o un liquido no acuoso; como una emulsion liquida de aceite en agua o una emulsion liquida de agua en aceite; mediante una formulacion liposomica (vease, por ejemplo, el documento EP 736299); o en alguna otra forma. Las composiciones administradas por via oral pueden incluir aglutinantes, lubricantes, diluyentes inertes, lubricantes, agentes tensioactivos o dispersantes, aromatizantes y humectantes. Las formulaciones administradas por via oral tales como comprimidos pueden recubrirse y ranurarse opcionalmente y pueden formularse de manera que se proporcione liberacion sostenida, retrasada o controlada del principio activo en su interior. Los peptidos y agonistas pueden coadministrarse con otros agentes usados para tratar trastornos gastrointestinales que incluyen, pero no se limitan a, agentes supresores de acido tales como agonistas de receptores de histamina-2 (H2A) e inhibidores de la bomba de protones (PPI). Los peptidos y agonistas tambien pueden administrarse por supositorio rectal. Para el tratamiento de trastornos fuera del tubo gastrointestinal tal como insuficiencia cardiaca congestiva e hipertrofia prostatica benigna, los peptidos y agonistas pueden administrarse parenteralmente o por via oral.

[0127] Los peptidos descritos en el presente documento puede usarse solos o en combinacion con otros agentes. Por ejemplo, los peptidos pueden administrarse junto con uno o mas peptidos o compuestos analgesicos. El peptido y/o compuesto analgesico puede unirse covalentemente a un peptido descrito en el presente documento o puede ser un agente separado que se administra junto con o secuencialmente con un peptido descrito en el presente documento en una terapia de combinacion.

[0128] La terapia de combinacion puede lograrse administrando dos o mas agentes, por ejemplo, un peptido descrito en el presente documento y un peptido analgesico o compuesto, cada uno de los cuales se formula y administra por separado, o administrando dos o mas agentes en una unica formulacion. Otras combinaciones tambien estan englobadas por la terapia de combinacion. Por ejemplo, dos agentes pueden formularse juntos y administrarse conjuntamente con una formulacion separada que contiene un tercer agente. Aunque los dos o mas agentes en la terapia de combinacion pueden administrarse simultaneamente, no necesitan. Por ejemplo, la administracion de un primer agente (o combinacion de agentes) puede preceder a la administracion de un segundo agente (o combinacion de agentes) por minutos, horas, dias o semanas. Por tanto, los dos o mas agentes pueden administrarse en el plazo de minutos el uno con respecto al otro o dentro de 1, 2, 3, 6, 9, 12, 15, 18 o 24 horas el uno con respecto al otro o en el plazo de 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 12, 14 dias el uno con respecto al otro o en el plazo de 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 o 10 semanas el uno con respecto al otro. En algunos casos son posibles intervalos incluso mas largos. Aunque en muchos casos se desea que los dos o mas agentes usados en una terapia de combinacion esten presentes dentro del cuerpo del paciente al mismo tiempo, esto no necesita ser asi.

[0129] La terapia de combinacion tambien puede incluir dos o mas administraciones de uno o mas de los agentes usados en la combinacion. Por ejemplo, si el agente X y el agente Y se usan en una combinacion, podrian administrarse secuencialmente en cualquier combinacion una o mas veces, por ejemplo, en el orden X-Y-X, X-X-Y, Y-X-Y, Y-Y-X, X-X-Y-Y, etc.

[0130] Los agentes, solos o en combinacion, pueden combinarse con cualquier vehiculo o medio farmaceuticamente aceptable. Por tanto, pueden combinarse con materiales que no producen una reaccion adversa, alergica o de otro modo no deseada cuando se administran a un paciente. Los vehiculos o medios usados pueden incluir disolventes, dispersantes, recubrimientos, agentes promotores de la absorcion, agentes de liberacion controlada y uno o mas excipientes inertes (que incluyen almidones, polioles, agentes de granulacion, celulosa microcristalina, diluyentes, lubricantes, aglutinantes, agentes de disgregacion, y similares), etc. Si se desea, las dosificaciones de comprimido de las composiciones desveladas pueden recubrirse por tecnicas acuosas o no acuosas convencionales.

[0131] Las composiciones de la presente divulgacion tambien pueden incluir opcionalmente otros componentes terapeuticos, agentes antiapelmazantes, conservantes, edulcorantes, colorantes, aromas, desecantes, plastificantes, colorantes y similares. Cualquiera de tal componente opcional debe ser compatible con el compuesto de la divulgacion para asegurar la estabilidad de la formulacion.

[0132] La composicion puede contener otros aditivos segun se necesite, que incluyen, por ejemplo, lactosa, glucosa, fructosa, galactosa, trehalosa, sacarosa, maltosa, rafinosa, maltitol, melecitosa, estaquiosa, lactitol, palatinita, almidon, xilitol, manitol, mioinositol y similares, e hidratos de los mismos, y aminoacidos, por ejemplo alanina, glicina y betaina, y peptidos y proteinas, por ejemplo albumina.

[0133] Ejemplos de excipientes para su uso como los vehiculos farmaceuticamente aceptables y los vehiculos inertes farmaceuticamente aceptables y los componentes adicionales anteriormente mencionados incluyen, pero no se limitan a, aglutinantes, cargas, disgregantes, lubricantes, agentes antimicrobianos y agentes de recubrimiento tales como:

AGLUTINANTES: almidon de maiz, almidon de patata, otros almidones, gelatina, gomas naturales y sinteticas tales como goma arabiga, alginato de sodio, acido alginico, otros alginatos, tragacanto en polvo, goma guar, celulosa y sus derivados (por ejemplo, etilcelulosa, acetato de celulosa, carboximetilcelulosa calcica, carboximetilcelulosa sodica), polivinilpirrolidona, metilcelulosa, almidon pregelatinizado (por ejemplo, STARCH 1500® y STARCH 1500 LM®, comercializado por Colorcon, Ltd.), hidroxipropilmetilcelulosa, celulosa microcristalina (por ejemplo, AVICELT, tal como, AVICEL-PH-101T, -103T y -105T, comercializado por FMC Corporation, Marcus Hook, PA, EE.UU.) o mezclas de los mismos,

CARGAS: talco, carbonato calcico (por ejemplo, granulos o polvo), fosfato de calcio dibasico, fosfato de calcio tribasico, sulfato de calcio (por ejemplo, granulos o polvo), celulosa microcristalina, celulosa en polvo, dextratos, caolin, manitol, acido silicico, sorbitol, almidon, almidon pregelatinizado o mezclas de los mismos,

DISGREGANTES: agar-agar, acido alginico, carbonato calcico, celulosa microcristalina, croscarmelosa sodica, crospovidona, polacrilin potasio, glicolato sodico de almidon, almidon de patata o de tapioca, otros almidones, almidon pregelatinizado, arcillas, otras alginas, otras celulosas, gomas o mezclas de los mismos,

LUBRICANTES: estearato de calcio, estearato de magnesio, aceite mineral, aceite mineral ligero, glicerina, sorbitol, manitol, polietilenglicol, otros glicoles, acido estearico, laurilsulfato de sodio, talco, aceite vegetal hidrogenado (por ejemplo, aceite de cacahuete, aceite de semilla de algodon, aceite de girasol, aceite de sesamo, aceite de oliva, aceite de maiz y aceite de soja), estearato de cinc, oleato de etilo, laurato de etilo, agar, gel de silice siloide (AEROSIL 200, W.R. Grace Co., Baltimore, MD EE.UU.), un aerosol coagulado de silice sintetica (Degussa Co., Plano, TX, EE.UU.), un dioxido de silicio pirogeno (CAB-O-SIL, Cabot Co., Boston, MA, EE.UU.) o mezclas de los mismos,

AGENTES ANTIAPELMAZANTES: silicato de calcio, silicato de magnesio, dioxido de silicio, dioxido de silicio coloidal, talco o mezclas de los mismos,

AGENTES ANTIMICROBIANOS: cloruro de benzalconio, cloruro de bencetonio, acido benzoico, alcohol bencilico, butilparabeno, cloruro de cetilpiridinio, cresol, clorobutanol, acido deshidroacetico, etilparabeno, metilparabeno, fenol, alcohol feniletilico, fenoxietanol, acetato fenilmercurico, nitrato fenilmercurico, sorbato de potasio, propilparabeno, benzoato de sodio, deshidroacetato de sodio, propionato de sodio, acido sorbico, timerosal, timol o mezclas de los mismos, y

AGENTES DE RECUBRIMIENTO: carboximetilcelulosa de sodio, acetato-ftalato de celulosa, etilcelulosa, gelatina, esmalte farmaceutico, hidroxipropilcelulosa, hidroxipropilmetilcelulosa, ftalato de hidroxipropilmetilcelulosa, metilcelulosa, polietilenglicol, poli(acetato-ftalato de vinilo), shellac, sacarosa, dioxido de titanio, cera carnauba, cera microcristalina o mezclas de los mismos.

[0134] Los agentes tanto en su forma libre como de sal pueden combinarse con un polimero tal como acido polilactico-glicolico (PLGA), acido poli-(I)-lactico-glicolico-tartarico (P(I)LGT) (documento WO 01/12233), acido poliglicolico (documento U.S. 3.773.919), acido polilactico (documento U.S. 4.767.628), poli( -caprolactona) y poli(oxido de alquileno) (documento U.S. 20030068384) para crear una formulacion de liberacion sostenida. Tales formulaciones pueden usarse para implantes que liberan un peptido u otro agente durante un periodo de algunos dias, algunas semanas o varios meses dependiendo del polimero, el tamafo de particula del polimero y el tamafo del implante (vease, por ejemplo, el documento U.S. 6.620.422). Otras formulaciones y polimeros de liberacion sostenida para su uso en tales formulaciones se describen en los documentos EP 0 467 389 A2, WO 93/24150, U.S. 5.612.052, WO 97/40085, WO 03/075887, WO 01/01964A2, U.S. 5.922.356, WO 94/155587, WO 02/074247A2, WO 98/25642, U.S. 5.968.895, U.S. 6.180.608, U.S. 20030171296, U.S. 20020176841, U.S. 5.672.659, U.S. 5.893.985,

U.S.: 5.134.122, U.S. 5.192.741, U.S. 5.192.741, U.S. 4.668.506, U.S. 4.713.244, U.S. 5.445.832 U.S. 4.931.279,

U.S.: 5.980.945, WO 02/058672, WO 9726015, WO 97/04744 y US20020019446. En tales formulaciones de liberacion sostenida, las microparticulas de peptido se combinan con microparticulas de polimero. Uno o mas de los implantes de liberacion sostenida pueden colocarse en el intestino grueso, el intestino delgado o ambos. Los documentos U.S. 6.011.011 y WO 94/06452 describen una formulacion de liberacion sostenida que proporciona tanto polietilenglicoles (es decir, PEG 300 y PEG 400) como triacetina. El documento WO 03/053401 describe una formulacion que puede tanto potenciar la biodisponibilidad como proporcionar la liberacion controlada del agente dentro del tubo GI. Formulaciones de liberacion controlada adicionales se describen en los documentos WO 02/38129, EP 326 151, U.S. 5.236.04, WO 02/30398, WO 98/13029; U.S. 20030064105, U.S. 20030138488A1, U.S. 20030216307A1, U.S. 6.667.060, WO 01/49249, WO 01/49311, WO 01/49249, WO 01/49311 y U.S. 5.877.224.

[0135] Los agentes pueden administrarse, por ejemplo, por inyeccion intravenosa, inyeccion intramuscular, inyeccion subcutanea o inyeccion intraperitoneal; por administracion topica, sublingual, intraarticular (en las articulaciones), intradermica, bucal, oftalmica (incluyendo intraocular) o intranasal (incluyendo usando una canula); o por otras vias. Los agentes pueden administrarse por via oral, por ejemplo, como un comprimido o sello que contiene una cantidad predeterminada del principio activo; como un gel, sedimento, pasta, jarabe, bolo, electuario, suspension o capsula; como un polvo; como granulos; como una disolucion o una suspension en un liquido acuoso o un liquido no acuoso; como una emulsion liquida de aceite en agua o una emulsion liquida de agua en aceite; mediante una formulacion micelar (vease, por ejemplo, el documento WO 97/11682); mediante una formulacion liposomica (veanse, por ejemplo, los documentos EP 736299, WO 99/59550 y WO 97/13500); mediante formulaciones descritas en el documento WO 03/094886; o en alguna otra forma. Las composiciones administradas por via oral pueden incluir aglutinantes, lubricantes, diluyentes inertes, lubricantes, agentes tensioactivos o dispersantes, aromatizantes y humectantes. Las formulaciones administradas por via oral tales como comprimidos pueden opcionalmente recubrirse o ranurarse y pueden formularse de manera que se proporcione una liberacion sostenida, retrasada o controlada del principio activo en su interior. Los agentes tambien puede administrarse transdermicamente (es decir, mediante parches tipo deposito o tipo matriz, agujas hipodermicas, poracion termica, agujas hipodermicas, iontoforesis, electroporacion, ultrasonidos u otras formas de sonoforesis, inyeccion en chorro o una combinacion de cualquiera de los procedimientos precedentes (Prausnitz y col. 2004, Nature Reviews Drug Discovery 3:115-124)). Los agentes pueden administrarse usando tecnicas de inyeccion de particulas transdermicas de alta velocidad usando la formulacion de particulas de hidrogel descrita en el documento U.S. 20020061336. Formulaciones de particulas adicionales se describen en los documentos WO 00/45792, WO 00/53160 y WO 02/19989. Un ejemplo de una formulacion transdermica que contiene tirita y el promotor de absorcion dimetilisosorbida puede encontrarse en el documento WO 89/04179. El documento WO 96/11705 desvela formulaciones adecuadas para administracion transdermica. Los agentes pueden administrarse en la forma de un supositorio o por otros medios vaginales o rectales. Los agentes pueden administrarse en una formulacion transmembrana como se describe en el documento WO 90/07923. Los agentes pueden administrarse no invasivamente mediante las particulas deshidratadas descritas en el documento U.S. 6.485.706. El agente puede administrarse en una formulacion de farmaco con recubrimiento enterico como se describe en el documento WO 02/49621. Los agentes pueden administrarse intranasalmente usando la formulacion descrita en el documento U.S.

5.179.079. Las formulaciones adecuadas para inyeccion parenteral se describen en el documento WO 00/62759. Los agentes pueden administrarse usando la formulacion de caseina descrita en los documentos U. S. 20030206939 y WO 00/06108. Los agentes pueden administrarse usando las formulaciones de particula descritas en el documento

U.S. 20020034536.

[0136] Los agentes, solos o en combinacion con otros componentes adecuados, pueden administrarse por via pulmonar utilizando varias tecnicas que incluyen, pero no se limitan a, instilacion intratraqueal (administracion de disolucion en los pulmones por jeringuilla), administracion intratraqueal de liposomas, insuflacion (administracion de formulacion en polvo por jeringuilla o cualquier otro dispositivo similar a los pulmones) e inhalacion de aerosol. Los aerosoles (por ejemplo, nebulizadores de chorro o ultrasonicos, inhaladores de dosis medidas (MDI) e inhaladores de polvo seco (DPI)) tambien pueden usarse en aplicaciones intranasales. Las formulaciones de aerosol son dispersiones o suspensiones estables de material solido y gotitas liquidas en un medio gaseoso y pueden disponerse en propulsores aceptables presurizados tales como hidrofluroalcanos (HFA, es decir, HFA-134a y HFA227 o una mezcla de los mismos), diclorodifluorometano (u otros propulsores de clorofluorocarburos tales como una mezcla de los propulsores 11, 12 y/o 114), propano, nitrogeno y similares. Las formulaciones pulmonares pueden incluir potenciadores de la permeacion tales como acidos grasos, y sacaridos, agentes quelantes, inhibidores de enzimas (por ejemplo, inhibidores de proteasa), adyuvantes (por ejemplo, glicocolato, surfactina, Span 85 y nafamostat), conservantes (por ejemplo, cloruro de benzalconio o clorobutanol) y etanol (normalmente hasta el 5%, pero posiblemente hasta el 20%, en peso). El etanol se incluye comunmente en composiciones de aerosol ya que puede mejorar la funcion de la valvula de dosificacion y en algunos casos tambien mejora la estabilidad de la dispersion. Las formulaciones pulmonares tambien pueden incluir tensioactivos que incluyen, pero no se limitan a, sales biliares y aquellas descritos en el documento U.S. 6.524.557 y referencias en su interior. Los tensioactivos descritos en el documento U.S. 6.524.557, por ejemplo, una sal de acido graso C8-C16, una sal biliar, un fosfolipido

o alquilsacarido son ventajosos en que algunos de ellos tambien potencian supuestamente la absorcion del peptido en la formulacion. Tambien son adecuadas formulaciones en polvo seco que comprenden una cantidad terapeuticamente eficaz de compuesto activo mezclado con un vehiculo apropiado y adaptado para su uso a proposito de un inhalador de polvo seco. Los potenciadores de absorcion que pueden afadirse a las formulaciones de polvo seco de la presente divulgacion incluyen aquellos descritos en el documento U.S. 6.632.456. El documento WO 02/080884 describe procedimientos para la modificacion superficial de polvos. Las formulaciones de aerosol pueden incluir las desveladas en los documentos U.S. 5.230.884, U.S. 5.292.499, WO 017/8694, WO 01/78696, U.S. 2003019437, U.S. 20030165436 y WO 96/40089 (que incluyen aceite vegetal). Las formulaciones de liberacion sostenida adecuadas para inhalacion se describen en los documentos U.S. 20010036481A1, 20030232019A1 y U.S. 20040018243A1, ademas de en los documentos WO 01/13891, WO 02/067902, WO 03/072080 y WO 03/079885. Las formulaciones pulmonares que contienen microparticulas se describen en los documentos WO 03/015750, U.S. 20030008013 y WO 00/00176. Las formulaciones pulmonares que contienen polvo en estado vitreo estable se describen en los documentos U.S. 20020141945 y U.S. 6.309.671. Otras formulaciones de aerosol se describen en los documentos EP 1338272A1, WO 90/09781, U.S. 5.348.730, U.S. 6.436.367, WO 91/04011 y U.S. 6.294.153, mientras que el documento U.S. 6.290.987 describe una formulacion basada en liposomas que puede administrarse por aerosol u otros medios. Las formulaciones en polvo para inhalacion se describen en los documentos U.S. 20030053960 y WO 01/60341. Los agentes pueden administrarse intranasalmente como se describe en el documento U.S. 20010038824. Las disoluciones de medicamento en solucion salina tamponada y vehiculos similares se emplean comunmente para generar un aerosol en un nebulizador. Los nebulizadores simples operan en el principio de Bernoulli y emplean una corriente de aire u oxigeno para generar las particulas de espray. Nebulizadores mas complejos emplean ultrasonidos para crear las particulas de espray. Ambos tipos son muy conocidos en la tecnica y se describen en libros de texto estandar de la farmacia tales como Sprowls� American Pharmacy y Remington�s The Science and Practice of Pharmacy. Otros dispositivos para generar aerosoles emplean gases comprimidos, normalmente hidrofluorocarburos y clorofluorocarburos, que se mezclan con el medicamento y cualquier excipiente necesario en un recipiente presurizado. Estos dispositivos se describen asimismo en los libros de texto estandar tales como Sprowls y Remington.

[0137] Los agentes pueden ser un acido o base libre o una sal farmacologicamente aceptable de los mismos. Los solidos pueden disolverse o dispersarse inmediatamente antes de la administracion o antes. En algunos casos, las preparaciones incluyen un conservante para prevenir el crecimiento de microorganismos. Las formas farmaceuticas adecuadas para inyeccion pueden incluir disoluciones o dispersiones acuosas u organicas esteriles que incluyen, por ejemplo, agua, un alcohol, un disolvente organico, un aceite u otro disolvente o dispersante (por ejemplo, glicerol, propilenglicol, polietilenglicol y aceites vegetales). Las formulaciones pueden contener antioxidantes, tampones, bacteriostaticos y solutos que hacen que la formulacion sea isotonica con la sangre del receptor previsto, y suspensiones esteriles acuosas y no acuosas que pueden incluir agentes de suspension, solubilizantes, espesantes, estabilizadores y conservantes. Los agentes farmaceuticos pueden esterilizarse por esterilizacion por filtracion o por otros medios adecuados.

[0138] El agente puede fusionarse con inmunoglobulinas o albumina o incorporarse en un liposoma para mejorar la semivida. El agente tambien puede conjugarse con cadenas de polietilenglicol (PEG). Los procedimientos para la pegilacion y formulaciones adicionales que contienen conjugados de PEG (es decir, hidrogeles basados en PEG, liposomas modificados con PEG) pueden encontrarse en Harris y Chess, Nature Reviews Drug Discovery 2: 214-221 y las referencias en su interior. Los peptidos de la presente divulgacion tambien pueden conjugarse con, por ejemplo, grupos alquilo (por ejemplo, grupos alquilo C1-C20 lineales o ramificados); radicales de acido graso; y combinaciones de PEG, grupos alquilo y radicales de acido graso (vease la patente de EE.UU. 6.309.633; Soltero y col., 2001 Innovations in Pharmaceutical Technnology 106-110). El agente puede administrarse por un nanococleato o vehiculo de administracion de cocleato (BioDelivery Sciences International). Los agentes pueden administrarse transmucosamente (es decir, a traves de una superficie de la mucosa tal como la vagina, ojo o nariz) usando formulaciones tales como las descritas en el documento U.S. 5.204.108. Los agentes pueden formularse en microcapsulas como se describe en el documento WO 88/01165. El agente puede administrarse por via intra-oral usando las formulaciones descritas en los documentos U.S. 20020055496, WO 00/47203 y U.S. 6.495.120. El agente puede administrarse usando formulaciones en nanoemulsion descritas en el documento WO 01/91728A2.

[0139] Composiciones farmaceuticas adecuadas segun la presente divulgacion incluiran generalmente una cantidad del (de los) compuesto(s) activo(s) con un diluyente o excipiente farmaceutico aceptable tal como una disolucion acuosa esteril, para dar un intervalo de concentraciones finales, dependiendo del uso previsto. Las tecnicas de preparacion son generalmente muy conocidas en la tecnica como se ejemplifica por Remington�s Pharmaceutical Sciences (18� edicion, Mack Publishing Company, 1995).

[0140] Los agentes descritos en el presente documento y los agentes de terapia de combinacion pueden envasarse como un kit que incluye dosis unicas o multiples dosis de dos o mas agentes, cada uno envasado o formulado individualmente, o dosis unicas o multiples dosis de dos o mas agentes envasados o formulados en combinacion. Por tanto, uno o mas agentes pueden estar presentes en el primer recipiente, y el kit puede incluir opcionalmente uno o mas agentes en un segundo recipiente. El recipiente o recipientes se colocan dentro de un envase, y el envase puede incluir opcionalmente instrucciones de administracion o dosificacion. Un kit puede incluir componentes adicionales tales como jeringuillas u otros medios para administrar los agentes, ademas de diluyentes u otros medios para formulacion.

[0141] Los procedimientos para aumentar la estabilidad quimica y/o fisica de los agentes descritos en el presente documento se encuentran en los documentos U.S. 6.541.606, U.S. 6.068.850, U.S. 6.124.261, U.S. 5.904.935, y WO 00/15224, U.S. 20030069182 (mediante la adicion de nicotinamida), U.S. 20030175230A1, U.S. 20030175230A1, U.S. 20030175239A1, U.S. 20020045582, U.S. 20010031726, WO 02/26248, WO 03/014304, WO 98/00152A1, WO 98/00157A1, WO 90/12029, WO 00/04880 y WO 91/04743, WO 97/04796 y las referencias citadas en su interior.

[0142] Los procedimientos para aumentar la biodisponibilidad de los agentes descritos en el presente documento se encuentran en los documentos U.S. 6.008.187, U.S. 5.424.289, U.S. 20030198619, WO 90/01329, WO 01/49268, WO 00/32172 y WO 02/064166. Tambien puede usarse glicirrizato como potenciador de la absorcion (vease, por ejemplo, el documento EP397447). El documento WO 03/004062 trata los mimeticos Ulex europaeus I (UEA1) y UEA1 que pueden usarse para elegir como diana los agentes de la divulgacion para el tubo GI.

Agentes analgesicos

[0143] Los peptidos descritos en el presente documento pueden usarse en terapia de combinacion con un agente analgesico, por ejemplo, un compuesto analgesico o un peptido analgesico. El agente analgesico puede estar opcionalmente covalentemente unido a un peptido descrito en el presente documento. Entre los agentes analgesicos utiles estan: bloqueantes de canales de Ca, antagonistas de receptores de 5HT (por ejemplo, antagonistas de receptores de 5HT3, 5HT4 y 5HT1), agonistas de receptores de opioides (loperamida, fedotozina y fentanilo), antagonistas de receptores de NK1, agonistas de receptores de CCK (por ejemplo, loxiglumida), antagonistas de receptores de NK1, antagonistas de receptores de NK3, inhibidores de la recaptacion de norepinefrina-serotonina (NSRIS), agonistas de receptores vanilloides y cannabinoides, y sialorfina. Los agentes analgesicos en las diversas clases se describen en la bibliografia.

[0144] Entre los peptidos analgesicos utiles estan peptidos relacionados con sialorfina, que incluyen aquellos que comprenden la secuencia de aminoacidos QHNPR, que incluye: VQHNPR; VRQHNPR; VRGQHNPR; VRGPQHNPR; VRGPRQHNPR; VRGPRRQHNPR; y RQHNPR. Los peptidos relacionados con sialorfina se unen a neprilisina e inhiben la rotura mediada por neprilisina de sustancia P y Met-encefalina. Por tanto, los compuestos o peptidos que son inhibidores de neprilisina son agentes analgesicos utiles que pueden administrarse con los peptidos de la presente divulgacion en una co-terapia o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion, por ejemplo, por un enlace covalente. La sialofina y peptidos relacionados se describen en la patente de EE.UU. 6.589.750; documentos U.S. 20030078200 A1; y WO 02/051435 A2.

[0145] Los antagonistas y agonistas de receptores de opioides pueden administrarse con los peptidos de la presente divulgacion en co-terapia o ligados a un peptido de la presente divulgacion, por ejemplo, por un enlace covalente. Por ejemplo, se cree que los antagonistas de receptores de opioides tales como naloxona, naltrexona, metil-nalozona, nalmefeno, cipridima, beta-funaltrexamina, naloxonazina, naltrindol y nor-binaltorfimina son utiles en el tratamiento de SII. Puede ser util formular antagonistas de opioides de este tipo en una formulacion de liberacion retrasada y sostenida de forma que la liberacion inicial del antagonista sea en el intestino delgado medio a distal y/o colon ascendente. Tales antagonistas se describen en el documento WO 01/32180 A2. El pentapeptido de encefalina (HOE825; Tyr-D-Lys-Gly-Phe-L-homoserina) es un agonista de los receptores de opioides mu y delta y se cree que es util para aumentar la motilidad intestinal (Eur. J. Pharm. 219:445, 1992), y este peptido puede usarse conjuntamente con los peptidos de la presente divulgacion. Tambien es util la trimebutina que se cree que se une a receptores de opioides mu/delta/kappa y activan la liberacion de motilina y modulan la liberacion de gastrina, peptido intestinal vasoactivo, gastrina y glucagones. Los agonistas de receptores de opioides kappa tales como fedotozina, cetociclazocina y compuestos descritos en el documento WO 03/097051 A2 pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion. Ademas, pueden usarse agonistas de receptores de opioides mu tales como morfina, difeniloxilato, frakefamida (H-Tyr-D-Ala-Phe(F)-Phe-NH2; documento WO 01/019849 A1) y loperamida.

[0146] Tyr-Arg (kiotorfina) es un dipeptido que actua estimulando la liberacion de met-encefalinas para provocar un efecto analgesico (J. Biol. Chem. 262:8165, 1987). La kiotorfina puede usarse con o ligarse con los peptidos de la presente divulgacion.

[0147] Los agonistas de receptores de CCK tales como ceruleina de anfibios y otras especies son agentes analgesicos utiles que pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0148] Los peptidos de conotoxina representan una amplia clase de peptidos analgesicos que actuan en los canales de Ca regulados por voltaje, receptores de NMDA o receptores nicotinicos. Estos peptidos pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0149] Los analogos de peptidos de timulina (documento FR 2830451) pueden tener actividad analgesica y pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0150] Los antagonistas de receptores de CCK (CCKa o CCKb), que incluyen loxiglumida y dexloxiglumida (el isomero R de loxiglumida) (documento WO 88/05774), pueden tener actividad analgesica y pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0151] Otros agentes analgesicos utiles incluyen agonistas de 5-HT4 tales como tegaserod/zelnorm y lirexaprida. Tales agonistas se describen en: documentos EP1321142 A1, WO 03/053432A1, EP 505322 A1, EP 505322 B1, U.S. 5.510.353, EP 507672 A1, EP 507672 B1 y U.S. 5.273,983.

[0152] Los bloqueadores de canales de calcio tales como ziconotida y compuestos relacionados descritos en, por ejemplo, los documentos EP 625162B1, U.S. 5.364.842, U.S. 5.587.454, U.S. 5.824.645, U.S. 5.859.186, U.S. 5.994.305, U.S. 6.087.091, U.S. 6.136.786, WO 93/13128 A1, EP 1336409 A1, EP 835126 A1, EP 835126 B1, U.S. 5.795.864, U.S. 5.891.849, U.S. 6.054.429 y WO 97/01351 A1, pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0153] Diversos antagonistas de los receptores de NK-1, NK-2 y NK-3 (para una revision vease Giardina y col. 2003 Drugs 6:758) pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0154] Los antagonistas de receptores de NK1 tales como: aprepitant (Merck � Co Inc), vofopitant, ezlopitant (Pfizer, Inc.), R-673 (Hoffmann-La Roche Ltd), SR-14033 y compuestos relacionados descritos en, por ejemplo, los documentos EP 873753 A1, U.S. 20010006972 A1, U.S. 20030109417 A1 y WO 01/52844 A1 pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0155] Los antagonistas de receptores de NK-2 tales como nepadutant (Menarini Ricerche SpA), saredutant (Sanofi-Synthelabo), SR-144190 (Sanofi-Synthelabo) y UK-290795 (Pfizer Inc) pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0156] Los antagonistas de receptores de NK3 tales como osanetant (Sanofi-Synthelabo), talnetant y compuestos relacionados descritos en, por ejemplo, los documentos WO 02/094187 A2, EP 876347 A1, WO 97/21680 A1, U.S. 6.277.862, WO 98/11090, WO 95/28418, WO 97/19927, y Boden y col. (J Med Chem. 39:166475, 1996) pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0157] Los inhibidores de la recaptacion de norepinefrina-serotonina tales como milnacipran y compuestos relacionados descritos en el documento WO 03/077897 A1 pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0158] Los antagonistas de receptores vanilloides tales como arvanil y compuestos relacionados descritos en documento WO 01/64212 A1 pueden usarse con o ligarse a los peptidos de la presente divulgacion.

[0159] Si el analgesico es un peptido y esta ligado covalentemente a un peptido descrito en el presente documento, el peptido resultante tambien puede incluir al menos un sitio de escision de tripsina o quimiotripsina. Si esta presente dentro del peptido, el peptido analgesico puede ir precedido de (si esta en el extremo carboxi) o seguido de (si esta en el extremo amino) un sitio de escision de quimiotripsina o tripsina que permite la liberacion del peptido analgesico.

[0160] Ademas de peptidos relacionados con sialorfina, peptidos analgesicos incluyen: AspPhe, endomorfina1, endomorfina-2, nocistatina, dalargina, lupron, zicnotida y sustancia P.

Procedimientos de tratamiento

[0161] Los peptidos de la presente divulgacion puede usarse solos o en terapia de combinacion para el tratamiento o la prevencion de cancer, crecimientos precancerosos o crecimientos metastasicos. Por ejemplo, pueden usarse para la prevencion o el tratamiento de: cancer colorrectal/colorrectal metastatizado local, cancer del tubo gastrointestinal, cancer de pulmon, cancer o crecimientos precancerosos o crecimientos metastasicos de celulas epiteliales, polipos, carcinoma de mama, colorrectal, pulmon, ovario, pancreatico, prostatico, renal, de estomago, vejiga, higado, esofagico y testicular, carcinoma (por ejemplo, carcinoma de celulas basales, basoescamoso, de Brown-Pearce, ductal, tumor de Ehrlich, Krebs, celulas de Merkel, de pulmon de celulas pequefas o no pequefas, de celulas en avena, papilar, bronquiolar, de celulas escamosas, de celulas transicionales o Walker), leucemia (por ejemplo, de linfocitos B, de linfocitos T, HTLV, linfocitica aguda o cronica, de mastocitos o mieloide), histiocitonia, histiocitosis, enfermedad de Hodgkin, linfoma no Hodgkin, plasmacitoma, reticuloendoteliosis, adenoma, adenocarcinoma, adenofibroma, adenolinfoma, ameloblastoma, angioqueratoma, hiperplasia angiolinfoide con eosinofilia, angioma esclerosante, angiomatosis, apudoma, branquionia, sindrome carcinoide maligno, enfermedad cardiaca carcinoide, carcinosarcoma, cementoma, colangioma, colesteatoma, condrosarcoma, condroblastoma, condrosarcoma, cordoma, coristoma, craneofaringioma, crondrorna, cilindroma, cistadenocarcinoma, cistadenoma, cistosarcoma filoides, disgerminoma, ependimoma, sarcoma de Ewing, fibroma, fibrosarcoma, tumor de celulas gigantes, ganglioneuroma, glioblastoma, glomangioma, tumor de celulas granulosas, ginandroblastoma, hamartoma, hemangioendotelioma, hemangioma, hemangiopericitoma, hemangiosarcoma, hepatoma, tumor de celulas de islote, sarcoma de Kaposi, leiomioma, leiomiosarcoma, leucosarcoma, tumor de celulas de Leydig, lipoma, liposarcoma, linfangioma, linfangiomioma, linfangiosarcoma, meduloblastoma, meningioma, mesenquimioma, mesonefroma, mesotelioma, mioblastoma, mioma, miosarcoma, mixoma, mixosarcoma, neurilemoma, neuroma, neuroblastoma, neuroepitelioma, neurofibroma, neurofibromatosis, odontoma, osteoma, osteosarcoma, papiloma, paraganglioma, paraganglioma no cromafin, pinealoma, rabdomioma, rabdomiosarcoma, tumor de celulas de Sertoli, teratoma, tumor de celulas de teca y otras enfermedades en las que las celulas se han vuelto displasicas, inmortalizadas o transformadas.

[0162] Los peptidos de la presente divulgacion pueden usarse solos o en terapia de combinacion para el tratamiento o la prevencion de: poliposis adenomatosa familiar (PAF) (sindrome dominante autosomico) que precede a cancer de colon, cancer colorrectal no poliposico hereditario (CCNPH) y sindrome dominante autosomico heredado.

[0163] Para el tratamiento o la prevencion de cancer, crecimientos precancerosos y crecimientos metastasicos, los peptidos pueden usarse solos o en terapia de combinacion con radiacion o agentes quimioterapeuticos, un inhibidor de una fosfodiesterasa dependiente de GMPc o un inhibidor de ciclooxigenasa-2 selectivo (varios inhibidores de ciclooxigenasa-2 selectivos se describen en el documento WO02062369).

[0164] Los peptidos pueden ser para el tratamiento o la prevencion de inflamacion. Por tanto, pueden usarse solos o en combinacion con inhibidores de fosfodiesterasa dependiente de GMPc o un inhibidor de ciclooxigenasa-2 selectivo para el tratamiento de: inflamacion de organos, IBD (por ejemplo, enfermedad de Crohn, colitis ulcerosa), asma, nefritis, hepatitis, pancreatitis, bronquitis, fibrosis quistica, enfermedades intestinales isquemicas, inflamaciones/alergias intestinales, enfermedad celiaca, proctitis, gastroenteritis eosinofilica, mastocitosis y otros trastornos inflamatorios.

[0165] Los peptidos tambien pueden usarse solos o en terapia de combinacion para tratar o prevenir trastornos relacionados con insulina, por ejemplo: diabetes mellitus II, hiperglucemia, obesidad, trastornos asociados a alteraciones en la glucosa o transporte de electrolitos y secrecion de insulina en celulas o trastornos endocrinos. Tambien pueden usarse en el tratamiento de resistencia a insulina y disminucion posquirurgica y no poscirugia en la sensibilidad a insulina.

[0166] Los peptidos pueden usarse solos o en terapia de combinacion para prevenir o tratar trastornos respiratorios que incluyen inhalacion, ventilacion y trastornos por secrecion de moco, hipertension pulmonar, obstruccion cronica de vasos y vias respiratorias, y obstrucciones irreversibles de vasos y bronquios.

[0167] Los peptidos pueden usarse en terapia de combinacion con un inhibidor de fosfodiesterasa (ejemplos de tales inhibidores pueden encontrarse en el documento U.S. 6.333.354).

[0168] Los peptidos tambien pueden usarse solos o en terapia de combinacion para prevenir o tratar: retinopatia, nefropatia, angiopatia diabetica y formacion de edema.

[0169] Los peptidos tambien pueden usarse solos o en terapia de combinacion para prevenir o tratar trastornos neurologicos, por ejemplo, cefalea, ansiedad, trastornos del movimiento, agresividad, psicosis, convulsiones, ataques de panico, histeria, trastornos del suefo, depresion, trastornos esquizoafectivos, apnea del suefo, sindromes por deficit de atencion, perdida de memoria y narcolepsia. Tambien pueden usarse como un sedante. Los peptidos y peptidos detectablemente marcados pueden usarse como marcadores para identificar, detectar, estadificar o diagnosticar enfermedades y afecciones del intestino delgado, que incluyen:

enfermedad de Crohn, colitis, enfermedad inflamatoria del intestino, tumores, tumores benignos tales como tumores del estroma benignos, adenoma, angioma, polipos adenomatosos (pediculados y sesiles), tumores carcinoides malignos, tumores de celulas endocrinas, linfoma, adenocarcinoma, carcinoma del intestino anterior, intestino medio e intestino posterior, tumor del estroma gastrointestinal (TEGI), tal como leiomioma, leiomioma celular, leiomioblastoma y leiomiosarcoma, tumor nervioso autonomico gastrointestinal, sindromes de malabsorcion, enfermedades celiacas, diverticulosis, diverticulo de Meckel, diverticulos colonicos, megacolon, enfermedad de Hirschsprung, sindrome del intestino irritable, isquemia mesenterica, colitis isquemica, poliposis colonica por cancer colorrectal, sindrome de polipos, adenocarcinoma intestinal, sindrome de Liddle, miopatia de Brody, convulsiones infantiles y coreoatetosis.

[0170] Los peptidos pueden conjugarse con otra molecula (por ejemplo, una molecula de diagnostico o terapeutica) para elegir como diana celulas que llevan el receptor de GC-C, por ejemplo, lesiones por fibrosis quistica y celulas especificas que revisten el tubo intestinal. Por tanto, pueden usarse para elegir como diana restos radiactivos o terapeuticos para el intestino para ayudar en la obtencion de imagenes y el diagnostico o tratamiento de cancer colorrectal/metastatizado o colorrectal local y para administrar copias normales del gen supresor de tumor p53 al tracto intestinal.

[0171] Los peptidos pueden usarse solos o en terapia de combinacion para tratar disfuncion erectil.

[0172] Los peptidos pueden usarse solos o en terapia de combinacion para tratar trastornos del oido interno, por ejemplo, para tratar enfermedad de Meniere, que incluye sintomas de la enfermedad tales como vertigo, sordera parcial, tinitus, sensacion de plenitud en el oido, y para mantener la homeostasis de liquidos en el oido interno.

[0173] Los peptidos pueden usarse solos o en terapia de combinacion para tratar trastornos asociados a retencion de liquidos y de sodio, por ejemplo, enfermedades del sistema de transporte de electrolitosagua/electrolitos dentro del rifon, intestino y aparato urogenital, insuficiencia cardiaca congestiva, hipertension, hipotension, cirrosis hepatica y sindrome nefrotico. Ademas, pueden usarse para facilitar la diuresis o controlar el liquido intestinal.

[0174] Los peptidos pueden usarse solos o en terapia de combinacion para tratar trastornos asociados a secrecion de cloruro o bicarbonato, por ejemplo, fibrosis quistica.

[0175] Los peptidos pueden usarse solos o en terapia de combinacion para tratar trastornos asociados a la secrecion biliar. Ademas, pueden usarse para facilitar o controlar la secrecion de cloruro y liquido biliar en la vesicula biliar.

[0176] Los peptidos pueden usarse solos o en terapia de combinacion para tratar trastornos asociados a la regeneracion de celulas hepaticas.

Claims

REIVINDICACIONES

1. Uso de un polipeptido para la preparacion de una composicion farmaceutica para tratar el sindrome

del intestino irritable o estrefimiento, en el que el polipeptido comprende la secuencia de aminoacidos Asn Asp Glu 5 Cys Glu Leu Cys Val Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Leu.
2. El uso de la reivindicacion 1, en el que dicho sindrome del intestino irritable es sindrome del intestino irritable con estrefimiento predominante o sindrome del intestino irritable alternante.

10 3. El uso de la reivindicacion 1, en el que dicho estrefimiento es estrefimiento funcional, estrefimiento de transito lento, estrefimiento posquirurgico o estrefimiento debido al uso de analgesicos de opiaceos.
4. El uso de la reivindicacion 1, en el que el polipeptido consiste en secuencias de aminoacidos.

15 5. El uso de la reivindicacion 4, en el que dicho sindrome del intestino irritable es sindrome del intestino irritable con estrefimiento predominante o sindrome del intestino irritable alternante.
6. El uso de la reivindicacion 4, en el que dicho estrefimiento es estrefimiento funcional, estrefimiento

de transito lento, estrefimiento posquirurgico o estrefimiento debido al uso de analgesicos de opiaceos. 20
7. Un polipeptido para su uso en el tratamiento del sindrome del intestino irritable o estrefimiento, en el que el polipeptido comprende la secuencia de aminoacidos Asn Asp Glu Cys Glu Leu Cys Val Asn Val Ala Cys Thr Gly Cys Leu.