ES2336297B1

ES2336297B1 - Procedimiento de sintesis de pentasacaridos desprotegidos a partir deun pentasacarido precursos protegido.

Info

Publication number: ES2336297B1
Application number: ES200802855A
Authority: ES
Inventors: Rafael Ojeda Martinez De Castilla; Ivan Lopez-Belmonte Encina
Original assignee: Laboratorios Farmaceuticos Rovi SA
Current assignee: Laboratorios Farmaceuticos Rovi SA
Priority date: 2008-10-08
Filing date: 2008-10-08
Publication date: 2011-01-24
Anticipated expiration: 2028-10-08
Also published as: WO2010040880A1; ES2336297A1; US8822659B2; US20110306757A1

Abstract

Procedimiento de síntesis de pentasacáridos desprotegidos a partir de un pentasacárido precursor protegido, mediante un procedimiento de reacción en cinco etapas entre las cuales se incluye una N-sulfatación de grupos amino y una hidrogenólisis de grupos bencilo. Con este procedimiento se consigue una reducción drástica del tiempo total de síntesis en comparación con el proceso tradicionalmente utilizado, además de una elevada reproducibilidad del mismo, lo que permitiría su estandarización.

Description

Procedimiento de síntesis de pentasacáridos desprotegidos a partir de un pentasacárido precursor protegido.

Campo de la invención

La presente invención se refiere a un nuevo método de síntesis de pentasacáridos desprotegidos a partir de un pentasacárido precursor protegido.

Introducción

Las heparinas, un tipo de glicosaminoglicano altamente sulfatado, son compuestos ampliamente utilizados como anticoagulantes inyectables. Las heparinas se unen al inhibidor enzimático antitrombina (AT) causando un cambio conformacional en el mismo que da como resultado su activación. La AT activada desactiva entonces la trombina y otras proteasas implicadas en la coagulación sanguínea, sobre todo el factor Xa. La velocidad de desactivación de estas proteasas por la AT puede incrementarse hasta en un factor de 1000 debido a la unión de la heparina. A causa de la formación del complejo ternario AT- trombina-heparina, la actividad de las heparinas contra la trombina es dependiente de su tamaño. Esto ha dado lugar al desarrollo de heparinas de bajo peso molecular (LMWHs, del inglés "Low-molecular-weight heparins"), y, entre ellas, el fondaparinux. Este es un pentasacárido sintético, cuyo nombre químico es O-(2-amino-2-desoxi-2-sulfamido-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido \beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2-amino-2-desoxi-2-sulfamido-3,6-di-O-sulfo-D-\alpha-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 2-O-sulfo-\alpha-D-idopiranosiluró-
nico)-(1\rightarrow4)-metil 2-amino-2-desoxi-2-sulfamido-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranósido como sal decasódica, y que se representa por la siguiente fórmula química:

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Después de un estudio de la bibliografía existente para la síntesis de este pentasacárido y otros relacionados, especialmente por los grupos originales (Petitou y Van Boeckel), se observó que la síntesis de estos compuestos no ha sufrido muchos cambios desde los primeros procedimientos de síntesis descritos a principios de los 80. Esta poca variación en 25 años da una primera idea de la complejidad de esta síntesis.

En la mayoría de las patentes y publicaciones de la síntesis de este y otros oligosacáridos relacionados se lleva a cabo un procedimiento de síntesis en el que, tras una serie de pasos de reacción que habitualmente comprenden etapas de acoplamiento de oligosacáridos inferiores, se llega a un pentasacárido precursor del fondaparinux con la siguiente fórmula de Markush:

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en la que:

R_{1} puede ser cualquier grupo alquilo (C_{1}-C_{20}) ramifiacado o no ramificado o cíclico, por ejemplo metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilio, isobutilo, tert-butilo, pentilo, bencilo o ciclohexilo;

R_{2} puede ser azido o cualquier amina protegida por un grupo carbamato, tal como NH-Z, NH-Boc o NH-Troc;

R_{3} puede ser cualquier grupo acilo alifático ramificado o lineal (por ejemplo acetilo, levulinoilo...) o acilo aromático sustituido o sin sustituir (por ejemplo benzoilo...);

R_{4} puede ser cualquier grupo arilo sustituido o sin sustituir;

R_{5} puede ser cualquier grupo alquilo (C_{1}-C_{20}) ramificado o no ramificado o cíclico o cualquier arilo sustituido o sin sustituir.

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En una realización preferida de la invención R_{1} es metilo, R_{2} es azido o amina protegida por un grupo carbamato tal como NH-Z, R_{3} es acetilo, R_{4} es bencilo y R_{5} es metilo, lo que da lugar a un compuesto de la siguiente fórmula química, que representa al pentasacárido precursor protegido que es punto de partida preferido del procedimiento de la invención:

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A partir de este compuesto, denominado "compuesto 38", para obtener fondaparinux es preciso realizar unas etapas finales de desprotección/sulfatación. Estas etapas, ya conocidas de la técnica anterior, se pueden enumerar como sigue:

1.: Saponificación de los grupos éster y metoxicarbonilo, mediante tratamiento básico fuerte.

2.: O-sulfatación de los hidroxilos libres generados en la etapa anterior.

3.: Hidrogenólisis de los grupos bencilo y azido.

4.: N-sulfatación de las aminas generadas en la etapa anterior.

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(Esquema pasa a página siguiente)

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Este esquema de este proceso de desprotección/sulfatación conocido de la técnica anterior, partiendo del pentasacárido precursor protegido preferido, sería el siguiente:

Esquema I (técnica anterior)

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Sin duda una de las etapas clave de este proceso es la reducción simultánea de los grupos bencilo y azido mediante hidrogenólisis (etapa 3). Son conocidos los problemas de reproducibilidad que presentan este tipo de reducciones simultáneas de ambos grupos al no poder ser controladas las velocidades de reacción de ambas, lo que hace que un mayor avance de una interfiera negativamente en el progreso de la otra. Por este motivo, es difícil establecer un procedimiento estándar que asegure el final de la reacción, por lo que es necesario recurrir a un análisis continuo (eg, RMN, IR) de la misma para determinar el final de la reacción. Esto conlleva en muchos casos el tener que detener la reacción y volver a tener que ponerla en marcha si ésta no finalizó. Todo esto unido al hecho de tiempos de reacción excesivamente largos (2-6 días) hizo pensar a los inventores en la posibilidad de optimizar este proceso. Ejemplos de todo lo anterior se pueden ver en: EP0347964A1; EP0301618A2; van Boeckel C.A.A., Petitou M., Angew. Chem. Int. Ed. Engl, 1993, 32, 1671-1690; Petitou M., Jaury G., Derrien M., Choay J., Bioorg. Med. Chem. Lett., 1991, 1, 95-98; Petitou M., Jacquinet J.C., Duchaussoy P., Lederman I., Choay J., Torri G., Sinay P., Carbohydr. Res., 1986, 147, 221-236 ; Petitou M., Jacquinet J.C., Duchaussoy P., Lederman I., Choay J., Torri G., Sinay P., Carbohydr. Res., 1987, 167, 67-75; Petitou M., Duchaussoy P., Lederman L., Choay J., Sinay P., Carbohydr. Res., 1988, 179, 163-172; Beetz T., van Boeckel C.A.A., Tetrahedron Lett., 1986, 27, 5889-5892; Jacquinet J.C., Petitou M., Duchaussoy P., Lederman I., Choay J., Torri G., Sinay P., Carbohydr. Res., 1984, 130, 221-241; Ichikawa Y., Monden R., Kuzuhara H., Carbohydr. Res., 1988, 172, 37-64.

En la bibliografía se ha encontrado algún caso en el que se lleva a cabo una reducción selectiva de las azidas previa a la hidrogenólisis de los grupos bencilo (véase, por ejemplo, la publicación Chem. Eur. J. 2006, 12, 8664-8686; así como la publicación internacional W0/2003/022860 de Alchemia Pty Ltd. et al). La secuencia de reacciones empleada en estas reacciones sería la siguiente:

1.: Saponificación de los grupos éster y metoxicarbonilo.

2.: O-sulfatación de los hidroxilos libres generados en la etapa anterior.

3.: Reducción selectiva de los grupos azido.

4.: N-sulfatación de las aminas generadas en la etapa anterior.

5.: Hidrogenólisis de los grupos bencilo.

Mediante esta secuencia de reacciones se llega, aunque con un paso más, a productos finales con menores tiempos de reacción y con una mayor reproducibilidad en el proceso. Sin embargo, la aplicación de este proceso al caso de nuestro pentasacárido precursor protegido preferido no daría resultados satisfactorios, ya que la presencia de un grupo benciloxicarbonilo como grupo protector de una de las aminas no permitiría una N-sulfatación total. Como vemos la secuencia de reacciones descrita daría lugar a un nuevo producto y no a fondaparinux:

Esquema II (técnica anterior)

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En este caso particular, sería necesaria una última etapa de sulfatación de esa amina libre.

Por tanto, sería conveniente la existencia de un procedimiento de desprotección/sulfatación que, partiendo del pentasacárido precursor protegido preferido, diera lugar a pentasacáridos del tipo del fondaparinux con una mayor rapidez global de reacción y reproducibilidad que los procesos descritos hasta la fecha.

Resumen de la invención

El problema a ser resuelto por la presente invención es el de proporcionar un método alternativo de síntesis de pentasacáridos desprotegidos en el que, a partir de un pentasacárido precursor protegido, se llegue a pentasacáridos como el fondaparinux con un menor tiempo total de proceso y una mejor reproducibilidad del mismo.

La solución se basa en que los inventores han identificado que, introduciendo una etapa intermedia de reducción selectiva de los grupos azido, e invirtiendo el orden de las dos etapas subsiguientes (la N-sulfatación de los grupos amino y la hidrogenólisis de los grupos bencilo), se consigue una reducción drástica del tiempo total del proceso, ya que la hidrogenólisis simultánea del procedimiento tradicional requiere tiempos de reacción de entre 2 y 6 días, mientras que las etapas de reducción selectiva de las azidas y posterior hidrogenólisis duran 7 horas y 12 horas, respectivamente, además de una reproducibilidad del proceso que permitiría una estandarización del mismo, puesto que en las condiciones indicadas se puede tener la certeza que después de los procesos de 7 horas (reducción selectiva) y 12 horas (hidrogenólisis) se llega al producto deseado, algo que no es siempre así en el caso de la reducción total.

El experto en la técnica no encontraría obvia esta solución ya que el procedimiento habitual utilizado en la técnica para la fabricación de fondaparinux es el recogido en el Esquema I, que es el que es proceso más ampliamente utilizado en la técnica y que es reconocido que funciona, si bien con las limitaciones anteriormente indicadas, y por tanto sería el escogido por el experto en la técnica para fabricar fondaparinux. Una modificación de dicho proceso que pasara por invertir dos de las etapas de reacción más introducir una tercera etapa, como se propone en la presente invención, no podría considerarse en absoluto, desde ningún punto de vista, una variante obvia del proceso conocido.

De esta manera, un primer aspecto de la invención se dirige a un método para producir pentasacáridos desprotegidos, incluyendo el fondaparinux, a partir de un precursor protegido de la fórmula:

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en la que:

R_{2} puede ser azido o cualquier amina protegida por un grupo carbamato, tal como NH-Z, NH-Boc o NH-Troc, en el que al menos uno de los R_{2} debe ser un azido y al menos uno de los R_{2} debe ser un NH-Z;

R_{4} puede ser cualquier grupo arilo sustituido o sin sustituir;

El procedimiento de la invención comprende las siguientes etapas:

2.: O-sulfatación de los hidroxilos libres generados en la etapa anterior.

3.: Reducción selectiva de los grupos azido.

4.: Hidrogenólisis de los grupos bencilo.

5.: N-sulfatación de las aminas generadas en las etapas 3 y 4.

Este procedimiento puede esquematizarse de la siguiente manera:

Esquema III

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en la que:

R_{4} puede ser cualquier grupo arilo sustituido o sin sustituir;

R_{6} puede ser NH_{2} o NH-Z, siendo al menos uno de ellos NH-Z.

En el caso concreto de que el producto de partida sea el pentasacárido precursor protegido preferido (Compuesto 38), el esquema concreto sería el siguiente:

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Esta secuencia de reacciones se ha llevado a cabo con éxito con el precursor protegido pentasacarídico y se ha llegado a fondaparinux con una pureza similar a la de los procesos descritos pero, sobre todo, en un menor tiempo y con una reproducibilidad total en los distintos ensayos llevados a cabo.

Por último, cabe mencionar que el cambio en el orden de estas dos reacciones proporciona además ventajas desde el punto de vista práctico, ya que en este caso se lleva a cabo la N-sulfatación en medio acuoso, sin control de pH ni necesidad de atmósfera inerte o disolventes secos, lo que sin duda simplifica en gran medida el proceso.

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Descripción detallada de la invención

El procedimiento de síntesis de pentasacáridos desarrollado por los inventores ha sido puesto en práctica por los inventores como se describe a continuación:

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(1) Saponificación

O-(2-azido-3,4-di-O-bencil-2-desoxi-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-bencil-\beta-D-glucopiranosilu-
rónico)-(1\rightarrow4)-(2-azido-2-desoxi-D-\alpha-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 3-O-bencil-\alpha-D-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-metil 3-O-bencil-2-N-benciloxicarbonil-2-desoxi-\alpha-D-glucopiranósido (39)

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Sobre una disolución del compuesto 38 (266 mg, 145 \mumol) en THF (10 mL) a 0ºC, se añadieron H_{2}O_{2} al 30%, (5.8 mL) y una disolución acuosa 0.7M de LiOH (3.5 mL). Después de agitar durante 16 h a temperatura ambiente se añadieron MeOH (10 mL) y una disolución acuosa 4M de NaOH (3.8 mL). Después de otras 24 h, la reacción se neutralizó con HCl 6M. La mezcla de reacción se diluyó con H_{2}O y la fase acuosa se extrajo con CH_{2}Cl_{2}. La fase orgánica se lavó con Na_{2}SO_{3} al 10% y con H_{2}O, se secó y concentró para obtener 39 (200 mg, 89%).

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(2)O-sulfatación

O-(2-azido-3,4-di-O-bencil-2-desoxi-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-bencil-\beta-D-gluco-
piranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2-azido-2-desoxi-3,6-di-O-sulfo-D-\alpha-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 3-O-bencil-2-O-
sulfo-\alpha-D-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-metil 3-O-bencil-2-N-benciloxicarbonil-2-desoxi-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranósido (40 como sal heptasódica)

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Una suspensión de 39 (200 mg, 125 \mumol) y el complejo trióxido de azufre-trimetilamina (220 mg, 0.157 mmol) en N,N-dimetilformamida (10 mL) se agitó durante 24 a 60ºC. La mezcla se enfrió y sobre ella se añadió metanol (8 mL) y diclorometano (8 mL). La disolución se pasó por una columna Sephadex LH-20 en methanol/diclorometano (1:1), y posteriormente por una columna de intercambio iónico (Dowex 50WX4-Na^{+}) para dar lugar a 40 (228 mg, 85%).

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(3) Reducción selectiva de grupos azido

O-(2-amino-3,4-di-O-bencil-2-desoxi-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 2,3-di-O-bencil-\beta-D-glu-
copiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2-amino-2-desoxi-3,6-di-O-sulfo-D-\alpha-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 3-O-bencil-2-O-
sulfo-\alpha-D-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-metil 3-O-bencil-2-N-benciloxicarbonil-2-desoxi-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranósido (41A como sal heptasódica)

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El compuesto 40 (228 mg, 106 mmol), disuelto en THF (32 mL), se trató con una disolución acuosa 0.1M de NaOH (33 mL). Posteriormente se añadió una disolución 1M de PMe_{3} en THF (4.5 mL) y la reacción se agitó durante 8 h. La mezcla de reacción se neutralizó con una disolución acuosa 0.1M de HCl, se concentró y se purificó en Sephadex LH-20 en methanol/diclorometano (1:1) para dar lugar a 41A (205 mg, 92%).

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(4) Hidrogenólisis

O-(2-amino-2-desoxi-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido \beta-D-glucopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-(2-amino-2-desoxi-3,6-di-O-sulfo-D-\alpha-gluco?iranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 2-O-sulfo-\alpha-D-idopiranosilurónico)-(1\rightarrow4)-metil 2-amino-2-desoxi-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranósido (41 como sal heptasódica)

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40 (205 mg, 98 mmol) en metanol-H_{2}O0 (12 mL, 3:1) se hidrógeno en presencia de Pd(OH)_{2} sobre Carbón (20 wt.% Pd) (300 mg). La mezcla de reacción se filtró tras 8 h de agitación, el filtrado se concentró y el crudo de reacción se usó en la siguiente etapa sin ninguna purificación adicional.

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(5)N-sulfatación

O-(2-amino-2-desoxi-2-sulfamido-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido \beta-D-glucopiranosilurónico)-
(1\rightarrow4)-(2-amino-2-desoxi-2-sulfamido-3,6-di-O-sulfo-D-\alpha-glucopiranosil)-(1\rightarrow4)-O-(ácido 2-O-sulfo-\alpha-D-idopira-
nosilurónico)-(1\rightarrow4)-metil 2-amino-2-desoxi-2-sulfamido-6-O-sulfo-\alpha-D-glucopiranósido como sal decasódica (fondaparinux)

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Sobre una disolución del crudo anterior en H_{2}O (12 mL), se añadieron Na_{2}CO_{3} (100 mg) y el complejo trióxido de azufre-piridina (100 mg). Se llevaron a cabo una segunda, tercera y cuarta adición de Na_{2}CO_{3} (100 mg) y complejo trióxido de azufre-piridina (100 mg) a las 2, 4 y 6 h respectivamente. A las 16 h, la mezcla de reacción se purificó por Sephadex G-25 en H_{2}O/MeOH (9:1). Las fracciones que contenían el producto, se revinieron y concentraron a sequedad. Finalmente, el residuo se pasó a través de una Dowex 50WX4-Na. Las fracciones que contenían el producto, se reunieron y se liofilizaron para dar lugar a fondaparinux (115 mg, 68% desde el compuesto 41).

A modo de resumen, cabría enumerar las ventajas que presenta este proceso de 5 etapas frente al convencional de 4 etapas o incluso frente al originalmente descrito de 5 pasos:

1.: Reducción drástica del tiempo total del proceso ya que la hidrogenólisis simultánea requiere tiempos de reacción de entre 2 y 6 días, mientras que las etapas de reducción selectiva de las azidas y posterior hidrogenólisis duran, 7 horas y 12 horas, respectivamente.

2.: Reproducibilidad del proceso que permitiría una estandarización del mismo. En las condiciones indicadas se puede tener la certeza que después de los procesos de reducción selectiva y de hidrogenólisis se llega al producto deseado algo que no es siempre así en el caso de la reducción total, sin necesitar ningún control intermedio para confirmar la finalización de las distintas reacciones.

3.: Frente al proceso de 5 etapas de N-sulfatación anterior la hidrogenólisis, aquella requiere unas condiciones de sequedad y un calidad de disolventes que no es necesario (al hacerse en medio acuoso) en el caso que aquí se propone.

Claims

1. Método de fabricación de pentasacáridos a partir de un precursor protegido de la fórmula:

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en la que:

R_{1} es cualquier grupo alquilo (C_{1}-C_{20}) ramificado o no ramificado o cíclico, tal como metilo, etilo, propilo, isopropilo, butilio, isobutilo, tert-butilo, pentilo, bencilo o ciclohexilo;

R_{2} es azido o cualquier amina protegida por un grupo carbamato, tal como NH-Z, NH-Boc o NH-Troc, en el que al menos uno de los R_{2} es un azido y al menos uno de los R_{2} es un NH-Z;

R_{3} es cualquier grupo acilo alifático ramificado o lineal, tal como acetilo o levulinoilo, o un acilo aromático sustituido o sin sustituir, tal como benzoilo;

R_{4} es cualquier grupo arilo sustituido o sin sustituir;

R_{5} es cualquier grupo alquilo (C_{1}-C_{20}) ramificado o no ramificado o cíclico o cualquier arilo sustituido o sin sustituir;

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que comprende someter al citado precursor protegido a las siguientes etapas de reacción:

i): saponificación de grupos éster y metoxicarbonilo, en el que el citado compuesto precursor protegido se hace reaccionar con NaOH concentrado, dando lugar a un compuesto de la fórmula:

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\quad: en la que R_{2}, y R_{4} tienen los mismos significados anteriormente indicados;

ii): O-sulfatación de hidroxilos libres, en la que el compuesto resultante de la etapa (i) anterior se hace reaccionar con complejo trióxido de azufre-trimetilamina, dando lugar a un compuesto de la fórmula:

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\quad: en la que R_{2} y R_{4} tienen los mismos significados anteriormente indicados;

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iii): reducción selectiva de grupos azido, en la que el compuesto resultante de la etapa (ii) anterior se hace reaccionar con P(CH_{3})_{3}, dando lugar a un compuesto de la fórmula:

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\quad: en la que R_{4} tiene el mismo significado anteriormente indicado y R_{6} puede ser NH_{2} o NH-Z, siendo al menos uno de ellos NH-Z

iv): hidrogenólisis de grupos bencilo, en la que el compuesto resultante de la etapa (iii) anterior se hace reaccionar con Pd(OH)_{2} sobre carbono/20% peso Pd dando lugar a un compuesto de la fórmula:

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v): N-sulfatación de aminas, en la que el compuesto resultante de la etapa (iv) se hace reaccionar con complejo trióxido de azufre-piridina, dando lugar a un compuesto de la fórmula:

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2. Método de fabricación de pentasacáridos de acuerdo con la reivindicación 1, en el que R_{1} es metilo, R_{2} es NHZ o N_{3}, siendo al menos unos de los R_{2} un NHZ y al menos uno de los R_{2} un N_{3}, R_{3} es Ac, R_{4} es Bn, R_{5} es metilo y R_{6} es NH_{2} o NH-Z, siendo al menos uno de ellos NH-Z.

3. Método de fabricación de pentasacáridos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 ó 2, en el que la etapa (i) se lleva a cabo en medio THF a 0ºC, con adición de H_{2}O_{2} al 30% y una disolución acuosa de LiOH.

4. Método de fabricación de pentasacáridos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 3, en el que la etapa (ii) se lleva a cabo en N,N-dimetilformamida con agitación a una temperatura de 24 a 60ºC.

5. Método de fabricación de pentasacáridos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 4 anteriores, en el que la etapa (iii) se lleva a cabo en THF en medio básico.

6. Método de fabricación de pentasacáridos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 5 anteriores, en el que la etapa (iv) se lleva a cabo en medio metanol-H_{2}O.

7. Método de fabricación de pentasacáridos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 6 anteriores, en el que la etapa (v) se lleva a cabo en medio acuoso con adición de Na_{2}CO_{3}.

8. Método de fabricación de pentasacáridos de acuerdo con una cualquiera de las reivindicaciones 1 a 7 anteriores, en el después de la etapa (v) se lleva a cabo una purificación del producto obtenido en dicha etapa mediante cromatrografía de exclusión molecular en mezclas hidroalcohólicas.

9. Método de fabricación de pentasacáridos de acuerdo con la reivindicación 8 en el que el producto resultante de la purificación mediante cromatografía de exclusión molecular es sometido posteriormente a intercambio iónico hasta obtener la sal sódica del pentasacárido objetivo.