ES2295401T3 - Metodo de ensayo para la enfermedad de alzheimer. - Google Patents
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Abstract
Un método para diagnosticar la enfermedad de Alzheimer preclínica o clínica que comprende: (a) medir uno o varios de: (i) el nivel de ABeta40; (ii) el nivel de ABeta42; o (ii) la relación ABeta40/ABeta42; en una muestra de sangre de un sujeto obtenida en un intervalo de tiempo después de administrar a dicho sujeto una cantidad de un anticuerpo que se une específicamente a un epítopo contenido dentro de las posiciones 13-28 de ABeta o un anticuerpo que secuestra el péptido ABeta de su forma unida o circulante en la sangre y cambia el aclaramiento de las formas solubles y unidas de ABeta en el sistema nervioso central en plasma, en el que dicha cantidad es eficaz para cambiar los niveles de péptidos ABeta circulantes en la sangre de dicho sujeto cuando dicho sujeto está en una etapa preclínica o clínica de la enfermedad de Alzheimer; (b) comparar el nivel de ABeta40, ABeta42, o la relación ABeta40/ABeta42 en dicho sujeto con un valor de control de dichos niveles, en el que los niveles elevados de ABeta40, ABeta42, o la relación de ABeta40/ABeta42 en dicho sujeto comparado con los niveles de control o la relación identifica a dicho sujeto como en una etapa preclínica o clínica de la enfermedad de Alzheimer.
Description
Método de ensayo para la enfermedad de
Alzheimer.
La invención se refiere a un ensayo que permite
el diagnóstico preclínico y clínico de la enfermedad de Alzheimer.
El ensayo se basa en la evaluación de los niveles del péptido
beta-amiloide (A\beta) en el plasma después de la
administración de ciertos anticuerpos anti-A\beta
a un sujeto.
Un número de sintomatologías que causan déficits
cognoscitivos, aplopejías, hemorragias cerebrales y una debilitación
general mental parecen estar asociadas a las placas neuríticas y
cerebrovasculares en el cerebro que contiene el péptido
beta-amiloide (A\beta). Entre estas condiciones
están tanto la enfermedad de Alzheimer preclínica como clínica, el
síndrome de Down y la angiopatía amiloide cerebral (AAC) preclínica
y clínica. Las placas amiloides están formadas de péptidos beta
amiloides. Estos péptidos circulan por la sangre y por el fluido
cerebroespinal (FCE). El péptido A\beta en la forma circulante
está compuesto de 39-43 aminoácidos (en su mayoría
40 ó 42 aminoácidos) causando la división de una proteína precursora
común, la proteína precursora del amiloide, denominada
comúnmente
APP.
APP.
Hay pruebas que sugieren que A\beta puede ser
transportado de un lado a otro entre el cerebro y la sangre
(Ghersi-Egea, J-F., et al.,
J. Neurochem. (1996) 67: 880-883;
Zlokovic, B. V., et al., Biochem. Biophys. Res. Comm.
(1993) 67: 1034-1040; Shibata, M., et
al., J. Clin. Invest. (2000)
106:1489-1499. Además el A\beta en las
placas está en equilibrio con el A\beta soluble en el cerebro y la
sangre (Kawarabayashi, T., et al., J Neurosci. (2001)
21:372-381), DeMattos et al., Proc.
Nat'l. Acad. Sci USA (2001) 98:
8850-8855.
Como se describe en el documento WO01/4987, los
niveles circulantes totales del péptido A\beta en el FCE son
similares en individuos normales e individuos predispuestos a
exhibir los síntomas del Alzheimer. Sin embargo, los niveles de
A\beta_{42} son inferiores por regla general en individuos con
la enfermedad de Alzheimer (Nitsch, R. M., et al., Ann.
Neurol. (1995) 37:512-518). Se sabe que
el A\beta_{42} es más propenso a agregarse que el
A\beta_{40}, y que cuando esto resulta, se producen
consecuencias adversas tales como la deposición de A\beta en
placas amiloides, la conversión de A\beta en formas tóxicas, daño
neuronal e impedimentos conductuales tales como la demencia (Golde,
T. E., et al., Biochem. Biophys. Acta. (2000)
1502: 172-187).
El documento WO01/62801 titulado "Humanized
Antibodies That Sequester A\beta Peptide", presentado el 26 de
febrero de 2001, describe anticuerpos que no cruzan apreciablemente
la barrera sangre-cerebro y que secuestran péptidos
A\beta circulantes en fluidos biológicos. Estos anticuerpos han
sido descritos como útiles para el tratamiento preventivo y
terapéutico de condiciones asociadas con la formación de placas que
contienen A\beta difusas, neuríticas y cerebrovasculares en el
cerebro. La solicitud describe la administración de los anticuerpos
y luego la medición de los niveles circulantes del péptido A\beta
en la sangre para evaluar el progreso de la terapia. No hay ninguna
sugerencia clara, a pesar de que los niveles del péptido A\beta
después de la administración de los anticuerpos son diagnósticos de
la condición por sí mismos. La presente invención se basa en el
resultado sorprendente de que los mayores niveles tanto de
A\beta_{40} como de A\beta_{42} así como la relación
A\beta_{40}/A\beta_{42} tienen correlación con los niveles
de deposición del péptido A\beta en el cerebro cuando los
anticuerpos han sido administrados a un individuo. Así, la medida
de estos componentes en la sangre después de la administración del
anticuerpo proporciona un ensayo diagnóstico directo tanto para la
enfermedad de Alzheimer clínica y preclínica y los trastornos
neurológicos relacionados.
Hay publicaciones relevantes adicionales acerca
del comportamiento de los anticuerpos del péptido A\beta. Por
ejemplo, la publicación PCT WO99/27944 publicada el 10 de junio de
1999 describe métodos para inducir una respuesta inmune que reducen
los depósitos amiloides. La publicación Nº. W099/60024, publicada el
25 de noviembre de 1999, describe métodos para la eliminación del
amiloide usando anticuerpos antiamiloides. Publicaciones PCT
adicionales, incluyendo WO00/72880, WO00/72876 y WO00/77178 todas
describen varias actividades de anticuerpos del péptido
anti-A\beta. Los anticuerpos dirigidos al extremo
N-terminal de este péptido, según se cree, reducen
las placas en un modelo murino transgénico; la inmunización con el
amiloide por sí mismos es descrita según los anticuerpos son
diseñados para catalizar la hidrólisis del péptido.
Se ha demostrado que una ruta para el
metabolismo de A\beta es vía el transporte desde el SNC al plasma
(Zlokovic, B. V., et al., Proc. Natl. Acad. Sci. (USA)
(1996) 93: 4229-4234;
Ghersi-Egea, J-F., et al.,
J. Neurochem. (1996) 67: 880-883).
Además, se ha demostrado que A\beta en el plasma puede cruzar la
barrera sangre-cerebro y entrar en el cerebro
(Zlokovic, B. V., et al., Biochem. Biophys. Res. Comm.
(1993) 67: 1034-1040). También se ha
demostrado que la administración de ciertos anticuerpos de A\beta
policlonales y monoclonales disminuyen la deposición de A\beta en
las placas amiloides en el modelo de ratón transgénico
APP^{V717F} de la enfermedad de Alzheimer (Bard, F., et
al., Nature Med. (2000) 6:
916-919). Esto, como se decía, era debido a ciertos
anticuerpos anti-A\beta que cruzan la barrera
sangre-cerebro y a la estimulación de la
fagocitosis de las placas amiloides por las células microgliales. En
los experimentos de Bard, ensayos de cortes cerebrales ex
vivo mostraron que la presencia del anticuerpo de A\beta
añadido, con microglia exógenamente añadida, inducía la fagocitosis
de A\beta causando la eliminación de los depósitos de
A\beta.
Los niveles tanto de A\beta_{40} soluble
como de A\beta_{42} en FCE y sangre pueden ser detectados
fácilmente usando ensayos estandartizados usando anticuerpos
dirigidos contra epítopos a lo largo de la cadena de A\beta.
Tales ensayos han sido mencionados, por ejemplo, en las patentes de
EE.UU. N^{os}. 5.766.846, 5.837.672 y 5.593.846. Estas patentes
describen la producción de anticuerpos monoclonales murinos al
dominio central del péptido A\beta, y se ha publicado que tenían
epítopos alrededor y que incluían las posiciones 16 y 17. También
se han descrito anticuerpos dirigidos contra la región del extremo
N-terminal. Varios anticuerpos monoclonales fueron
evaluados que inmunorreacionaban con las posiciones
13-28 del péptido A\beta; estos no se unieron a
un péptido que representaba las posiciones 17-28,
así, de acuerdo con las patentes citadas, estableciendo que esto es
esta región, incluyendo las posiciones 16-17 (el
sitio de \alpha-secretasa) la que era el objetivo
de estos anticuerpos. Entre los anticuerpos conocidos que se unen
entre los aminoácidos 13 y 28 de A\beta están los anticuerpos 266
de ratón (m266), 4G8 y 1C2.
Ahora se ha encontrado que los anticuerpos que
son útiles para realizar los ensayos para el péptido A\beta, y
que son útiles en el tratamiento de condiciones asociadas con placas
amiloides en el cerebro pueden producir una respuesta que causa un
aumento marcado del nivel del péptido A\beta en sangre y que este
nivel puede ser usado como marcador diagnóstico para la enfermedad
de Alzheimer clínica y preclínica. Estos anticuerpos, que pueden o
no pueden ser humanizados, secuestran el péptido A\beta de su
forma unida y circulante en la sangre y cambian el aclaramiento de
las formas soluble y unida de A\beta en el sistema nervioso
central y el plasma. Estos anticuerpos, y sus fragmentos, se unen
específicamente a un epítopo entre los aminoácidos 13 y 28 de la
molécula A\beta. El CDR de estos anticuerpos puede ser derivado a
partir del anticuerpo monoclonal 266 de ratón (SEQ ID NO: 1 por SEQ
ID NO: 6). Los anticuerpos útiles incluyen los anticuerpos y sus
fragmentos, en los que las regiones variables tienen secuencias que
comprenden el CDR del anticuerpo de ratón 266 y las secuencias
marco humanas específicas (SEQ ID NO: 7 por SEQ ID NO: 10), en las
que los anticuerpos conservan aproximadamente las propiedades de
unión del anticuerpo de ratón y, tienen propiedades in vitro
e in vivo funcionalmente equivalentes con el anticuerpo de
ratón 266. Especialmente útiles son los anticuerpos humanizados y
sus fragmentos, en los que la cadena ligera es SEQ ID NO: 11 y la
cadena pesada es SEQ ID NO:12.
Así en un aspecto, la invención se refiere a un
método para diagnosticar la enfermedad de Alzheimer preclínica o
clínica que comprende:
(a) medir uno o varios de:
- (i)
- el nivel de A\beta_{40};
- (ii)
- el nivel de A\beta_{42}; o
- (iii)
- la relación A\beta_{40}/A\beta_{42};
en una muestra de sangre de un
sujeto obtenida en un intervalo de tiempo después de administrar a
dicho sujeto una cantidad de un anticuerpo que se une
específicamente a un epítopo contenido dentro de las posiciones
13-28 de A\beta o un anticuerpo que secuestra el
péptido A\beta de su forma unida y circulante en la sangre y
cambia el aclaramiento de las formas solubles y unidas de A\beta
en el sistema nervioso central en el plasma, en el que dicha
cantidad es eficaz para cambiar los niveles de los péptidos A\beta
circulantes en la sangre de dicho sujeto cuando dicho sujeto está
en una etapa preclínica o clínica de la enfermedad de Alzheimer;
y
(b) comparar el nivel de A\beta_{40},
A\beta_{42}, o la relación de A\beta_{40}/A\beta_{42}
en dicho sujeto con un valor de control de dichos niveles, en el que
los niveles elevados de A\beta_{40}, A\beta_{42}, o la
relación de A\beta_{40}/A\beta_{42} en dicho sujeto
comparado con los niveles de control o la relación identifica dicho
sujeto como en una etapa preclínica o clínica de la enfermedad de
Alzheimer.
Las Figuras 1 A, B y C son gráficos que muestran
los niveles de A\beta_{40} (Figura 1A), A\beta_{42} (Figura
1B) y la relación A\beta_{40}/A\beta_{42} (Figura 1C) en
plasma de ratones transgénicos antes de la administración del
anticuerpo m266, y la carencia de correlación con los depósitos de
A\beta en cerebro.
Las Figuras 2 A y B son gráficos que muestran a
A\beta_{40} en plasma (Figura 2A) y la relación
A\beta_{40}/A\beta_{42} en plasma (Figura 2B) en ratones
transgénicos una hora después de la inyección del anticuerpo m266, y
la correlación significativa con los depósitos de A\beta en
cerebro.
Las Figuras 3 A, B y C son gráficos que muestran
correlaciones significativas de los dos péptidos A\beta (Figuras
3A y 3B) y su relación (Figura 3C) con la deposición del péptido
A\beta en el cerebro 24 horas después de la inyección con el
anticuerpo monoclonal m266.
Las Figuras 4 A, B y C son gráficos que muestran
correlaciones significativas de las velocidades de entrada en la
circulación de los dos péptidos A\beta (Figuras 4A y 4B) y su
relación (Figura 4C) y la deposición del péptido A\beta en
ratones transgénicos.
Las Figuras 5 A y B son gráficos que muestran
una representación gráfica alternativa de los niveles de
A\beta_{40} en el plasma 24 horas (Figura 5A) y 1 hora (Figura
5B) después de la inyección de m266 correlacionado con el
porcentaje de hipocampo revestido por los depósitos de A\beta.
La Figura 6 es una tabla que muestra los
coeficientes de correlación de Pearson (Pearson r) y la
significación (el valor P) determinados entre los valores de
A\beta en plasma (antes y después de la inyección de m266) y
A\beta hipocámpico o carga amiloide.
Los péptidos A\beta que circulan en fluidos
biológicos humanos representan una región carboxi terminal de una
proteína precursora codificada en el cromosoma 21. Se ha publicado a
partir de los resultados de experimentos in vitro que el
péptido A\beta tiene una solubilidad pobre en soluciones
fisiológicas, ya que este contiene una extensión de los aminoácidos
hidrófobos que son una parte de la región que ancla a su precursor
más largo a las membranas lipídicas de las células. No es por eso
sorprendente que el péptido A\beta circulante normalmente esté
complejado con otros restos que le impiden agregarse. Esto ha
causado dificultades en la detección del péptido A\beta
circulante en fluidos
biológicos.
biológicos.
Los documentos de patente anteriormente
mencionados (patentes de EE.UU. N^{os}. 5.766.846, 5.837.672
y
5.593.846) describen la preparación de anticuerpos, incluyendo un anticuerpo monoclonal, denominado clon 266 (m266), que fue generado contra, y que se ha demostrado que se le une específicamente, un péptido que comprende los aminoácidos 13-28 del péptido A\beta. Los solicitantes han encontrado que después de la administración de m266 a ratones APP^{V717F}, un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer, se puede medir los niveles de los péptidos A\beta en circulación que son diagnósticos de los niveles de placas amiloides en el cerebro. Así, estos anticuerpos son útiles no sólo para llevar a cabo ensayos para péptidos A\beta circulantes en sí, sino que también para producir los niveles circulantes en sangre que son diagnósticos de la cantidad de placas amiloides en el cerebro, y así son útiles en identificar a individuos en las etapas clínicas y preclínicas de la enfermedad de Alzheimer. Un tal anticuerpo, m266, se une a la región media del péptido A\beta.
5.593.846) describen la preparación de anticuerpos, incluyendo un anticuerpo monoclonal, denominado clon 266 (m266), que fue generado contra, y que se ha demostrado que se le une específicamente, un péptido que comprende los aminoácidos 13-28 del péptido A\beta. Los solicitantes han encontrado que después de la administración de m266 a ratones APP^{V717F}, un modelo de ratón de la enfermedad de Alzheimer, se puede medir los niveles de los péptidos A\beta en circulación que son diagnósticos de los niveles de placas amiloides en el cerebro. Así, estos anticuerpos son útiles no sólo para llevar a cabo ensayos para péptidos A\beta circulantes en sí, sino que también para producir los niveles circulantes en sangre que son diagnósticos de la cantidad de placas amiloides en el cerebro, y así son útiles en identificar a individuos en las etapas clínicas y preclínicas de la enfermedad de Alzheimer. Un tal anticuerpo, m266, se une a la región media del péptido A\beta.
Por "anticuerpo monoclonal que se une a la
región media del péptido A\beta" se entiende un anticuerpo
monoclonal (Mab o Mabs) que se une a una secuencia de aminoácidos
que representa un epítopo contenido entre las posiciones
13-28 de A\beta. La región entera no tiene que ser
reconocida. Siempre que el anticuerpo se una al menos a un epítopo
dentro de esta región (especialmente, por ejemplo, incluyendo el
sitio de \alpha-secretasa 16-17 o
el sitio al cual el anticuerpo 266 se una), tales anticuerpos son
eficaces en el método de la invención.
Por "anticuerpo" se entiende un anticuerpo
monoclonal en sí, o uno de sus fragmentos inmunológicamente
eficaces, tales como sus fragmentos F_{ab}, F_{ab'} o
F_{(ab')2}. En algunos contextos, en este documento, los
fragmentos serán mencionados específicamente con énfasis; sin
embargo, será entendido que independientemente de si los fragmentos
son especificados, el término "anticuerpo" incluye tales
fragmentos así como las formas de cadena simple. Siempre que la
proteína conserve la capacidad de unirse específicamente a su
objetivo pretendido, y en este caso, secuestre el péptido A\beta
de sus proteínas de vehículo en la sangre, está incluido dentro del
término "anticuerpo". También se incluyen dentro de la
definición "anticuerpo" por ejemplo, las formas de cadena
simple, generalmente denominadas regiones F_{v}, de anticuerpos
con esta especificidad. Preferiblemente, pero no necesariamente,
los anticuerpos útiles en la invención son producidos
recombinantemente, según se requiera la manipulación de los
anticuerpos típicamente murinos u otros no humanos con la
especificidad apropiada para convertirlos en la forma humanizada.
Los anticuerpos pueden o no ser glicosilados, aunque sean preferidos
los anticuerpos glicosilados. Los anticuerpos son correctamente
reticulados vía los puentes disulfuro, como es conocido.
Se sabe que la unidad estructural del anticuerpo
básica comprende un tetrámero. Cada tetrámero está compuesto de dos
pares idénticos de cadenas de polipéptidos, teniendo cada par una
cadena "ligera" (aproximadamente 25 kDa) y una "pesada"
(aproximadamente 50-70 kDa). La parte del extremo
amino terminal de cada cadena incluye una región variable de
aproximadamente 100 a 110 o más aminoácidos principalmente
responsables del reconocimiento del antígeno. La parte del extremo
carboxi terminal de cada cadena define una región constante
principalmente responsable de la función efectora.
Las cadenas ligeras son clasificadas como gamma,
mu, alfa y lambda. Las cadenas pesadas son clasificadas como gamma,
mu, alfa, delta o epsilon, y definen el isotipo del anticuerpo como
IgG, IgM, IgA, IgD y IgE, respectivamente. Dentro de las cadenas
ligeras y pesadas, las regiones variables y constantes están unidas
por una región "J" de aproximadamente 12 o más aminoácidos,
incluyendo la cadena pesada también una región "D" de
aproximadamente 10 aminoácidos más.
Las regiones variables de cada par de cadena
ligera/pesada forman el sitio de unión del anticuerpo. Así, un
anticuerpo intacto tiene dos sitios de unión. Todas las cadenas
exhiben la misma estructura general de las regiones marco
relativamente conservadas (FR) unidas por tres regiones
hipervariables, también llamadas regiones determinantes de la
complementariedad o CDR. Las CDR de las dos cadenas de cada par se
alinean por las regiones marco, permitiéndose la unión a un epítopo
específico. Desde el extremo N-terminal al
C-terminal, tanto las cadenas ligeras como las
pesadas comprenden los dominios FR1, CDR1, FR2, CDR2, FR3, CDR3 y
FR4. La asignación de aminoácidos a cada dominio es conforme a las
convenciones conocidas [Kabat, "Sequences of Proteins of
Immunological Interest" National Institutes of Health, Bethesda,
Md., 1987 y 1991; Chothia, et al., J. Mol. Bio.
(1987) 196: 901-917; Chothia, et al.,
Nature (1989) 342: 878-883].
Como es bien conocido en la técnica, pueden ser
generados anticuerpos monoclonales fácilmente con la especificidad
apropiada mediante técnicas estándar de inmunización de mamíferos,
formando hibridomas a partir de células que producen anticuerpos de
dichos mamíferos o de otra manera inmortalizándolos, y cultivando
los hibridomas o las células inmortalizadas para evaluarlos por la
especificidad apropiada. En este caso, tales anticuerpos podrían
ser generados inmunizando a un ser humano, conejo, rata o ratón, por
ejemplo, con un péptido que representa un epítopo que abarca la
región 13-28 del péptido A\beta o su
sub-región apropiada. Los materiales para la
manipulación recombinante pueden ser obtenidos recuperando las
secuencias de nucleótidos que codifican el anticuerpo deseado a
partir del hibridoma u otra célula que lo produzca. Estas secuencias
de nucleótidos entonces pueden ser manipuladas para proporcionarlos
en forma humanizada, de ser deseado.
Puede ser deseable utilizar las formas
humanizadas de estos anticuerpos para proporcionar los niveles
circulantes deseados de los péptidos en sujetos humanos. Ya que la
administración es a corto plazo y sólo con objetivos diagnósticos,
esto puede no ser necesario, pero es claramente preferible evitar
cualquier posibilidad de una respuesta inmune, por eso el uso de
formas humanizadas es preferido. Por supuesto, para la realización
del ensayo de los niveles de A\beta ex vivo (por ejemplo,
por ELISA), pueden ser usadas formas murinas por sí mismas.
Por "anticuerpo humanizado" se entiende un
anticuerpo que está compuesto parcialmente o totalmente de
secuencias de aminoácidos derivadas de una línea germinal de
anticuerpo humano cambiando la secuencia de un anticuerpo que tiene
regiones determinantes de la complementariedad (CDR) no humanas. La
alteración más simple puede consistir simplemente en sustituir la
región constante de un anticuerpo humano para la región constante
murina, causando así una quimera humana/murina que puede tener una
inmunogenicidad suficientemente baja para ser aceptable para su uso
farmacéutico. Preferiblemente, sin embargo, la región variable del
anticuerpo y hasta la CDR también es humanizada por técnicas que
son conocidas en la técnica por ahora. Las regiones marco de las
regiones variables son sustituidas por las regiones marco humanas
correspondientes dejando la CDR no humana sustancialmente intacta,
o hasta sustituyendo la CDR con secuencias derivadas de un genoma
humano. Anticuerpos totalmente humanos son producidos en ratones
genéticamente modificados cuyos sistemas inmunológicos han sido
modificados para corresponder a sistemas inmunológicos humanos.
Como se menciona anteriormente, es suficiente para su uso en los
métodos de la invención emplear un fragmento inmunológicamente
específico del anticuerpo, incluyendo los fragmentos que
representan las formas de cadena simple.
Un anticuerpo humanizado así se refiere a un
anticuerpo que comprende un marco humano, al menos una CDR de un
anticuerpo no humano, y en el cual cualquier región constante
presente es sustancialmente idéntica a una región constante de
inmunoglobulina humana, es decir, al menos aproximadamente el
85-90%, preferiblemente al menos el 95% es
idéntica. A partir de ahí, todas las partes de un anticuerpo
humanizado, excepto posiblemente las CDR, son sustancialmente
idénticas a las partes correspondientes de una o varias secuencias
de inmunoglobulina humanas naturales. Por ejemplo, una
inmunoglobulina humanizada típicamente no abarcaría un anticuerpo
quimérico de región constante humana/región variable de ratón.
El diseño de inmunoglobulinas humanizadas puede
ser llevado a cabo como sigue. Cuando un aminoácido cae bajo la
categoría siguiente, el aminoácido de marco de una inmunoglobulina
humana que se use (inmunoglobulina aceptadora) es sustituido por un
aminoácido de marco de una inmunoglobulina no humana que proporcione
CDR (inmunoglobulina donadora): (a) el aminoácido en la región
marco humana de la inmunoglobulina aceptadora es inusual para la
inmunoglobulina humana en aquella posición, mientras que el
aminoácido correspondiente en la inmunoglobulina donadora es típico
para la inmunoglobulina humana en aquella posición; (b) la posición
del aminoácido es inmediatamente adyacente a una de las CDR; o (c)
cualquier átomo de la cadena lateral de un aminoácido de marco está
dentro de aproximadamente 5-6 ángstroms
(de-centro-a-centro)
de cualquier átomo de un aminoácido de CDR en un modelo de
inmunoglobulina tridimensional [Queen, et al., op.
cit., y Co, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA
(1991) 88:2869]. Cuando cada uno del aminoácido en la región
de marco humana de la inmunoglobulina aceptadora y un aminoácido
correspondiente en la inmunoglobulina donadora es inusual para la
inmunoglobulina humana en aquella posición, tal aminoácido es
sustituido por un aminoácido típico para la inmunoglobulina humana
en aquella
posición.
posición.
Un anticuerpo humanizado preferido es una forma
humanizada del anticuerpo de ratón 266. Las CDR de 266 humanizados
tienen las secuencias de aminoácidos siguientes:
CDR1 de cadena ligera:
\newpage
CDR2 de cadena ligera:
CDR3 de cadena ligera:
CDR1 de cadena pesada:
CDR2 de cadena pesada:
y, CDR3 de cadena
pesada:
Una región variable de cadena ligera preferida
de un anticuerpo humanizado de la presente invención tiene la
secuencia de aminoácidos siguiente, en la cual el marco es originado
a partir de los segmentos Vk de la línea germinal humana DPK18 y el
segmento de J Jkl, con varias sustituciones de aminoácidos en los
aminoácidos consenso en el mismo subgrupo V humano para reducir la
inmunogenicidad potencial:
en el
que:
Xaa en la posición 2 es Val o Ile;
Xaa en la posición 7 es Ser o Thr;
Xaa en la posición 14 es Thr o Ser;
Xaa en la posición 15 es Leu o Pro;
Xaa en la posición 30 es Ile o Val;
Xaa en la posición 50 es Arg, Gln o Lys;
Xaa en la posición 88 es Val o Leu;
Xaa en la posición 105 es Gln o Gly;
Xaa en la posición 108 es Lys o Arg; y
Xaa en la posición 109 es Val o Leu.
Una región variable de cadena pesada preferida
de un anticuerpo humanizado tiene la secuencia de aminoácidos
siguiente, en la cual el marco es originado a partir de los
segmentos de VH de la línea germinal humana DP53 y el segmento de J
JH4, con varias sustituciones de aminoácidos en los aminoácidos
consenso en el mismo subgrupo humano para reducir la
inmunogenicidad potencial:
en el
que:
Xaa en la posición 1 es Glu o Gln;
Xaa en la posición 7 es Ser o Leu;
Xaa en la posición 46 es Glu, Val, Asp o
Ser;
Xaa en la posición 63 es Thr o Ser;
Xaa en la posición 75 es Ala, Ser, Val, o
Thr;
Xaa en la posición 76 es Lys o Arg;
Xaa en la posición 89 es Glu o Asp; y
Xaa en la posición 107 es Leu o Thr.
Una región variable de cadena ligera
particularmente preferida de un anticuerpo humanizado tiene la
secuencia de aminoácidos siguiente, en la cual el marco es
originado a partir de los segmentos de Vk de la línea germinal
humana DPK18 y el segmento de J Jkl, con varias sustituciones de
aminoácidos en los aminoácidos consenso en el mismo subgrupo de V
humano para reducir la inmunogenicidad potencial:
Una región variable de cadena pesada
particularmente preferida de un anticuerpo humanizado tiene la
secuencia de aminoácidos siguiente, en la cual el marco es
originado a partir de los segmentos VH de la línea germinal humana
DP53 y el segmento de J JH4:
Una cadena ligera preferida para un anticuerpo
humanizado tiene la secuencia de aminoácidos:
\vskip1.000000\baselineskip
\newpage
Una cadena pesada preferida para un anticuerpo
humanizado de la presente invención tiene la secuencia de
aminoácidos:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
Otras secuencias son posibles para las cadenas
ligeras y pesadas para los anticuerpos humanizados y para los 266
humanizados. Las inmunoglobulinas puede tener dos pares de complejos
de cadena pesada/cadena ligera, comprendiendo al menos una cadena
una o varias regiones determinantes de la complementariedad de ratón
funcionalmente unidas a segmentos de región marco humanos.
Comenzando en la posición 56 de la región
variable de cadena pesada, tanto m266 como 266 humanizado contienen
la secuencia Asn-Ser-Thr. Esta
secuencia es un ejemplo de la señal de
Asn-X-Ser/Thr para la glicosilación
N-unida, en la que el Asn es el sitio de unión de
las cadenas de glicosilo N-unidas. Tanto m266 como
266 humanizado están extensivamente glicosilados en este sitio. Muy
impredecible y ventajosamente, la afinidad del 266 humanizado que
está desglicosado en la CDR2 de cadena pesada para el péptido
A\beta es notablemente más alta que la del 266 humanizado. La
CDR2 de cadena pesada del 266 desglicosado humanizado tiene las
secuencias de aminoácidos
siguientes:
siguientes:
\newpage
CDR2 de cadena pesada:
en la
que:
Xaa en la posición 7 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 8 no es ninguno Asp ni Pro y
Xaa en la posición 9 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 7 no
es Asn;
Xaa en la posición 8 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 7 es Asn y Xaa en la posición
9 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 8 es Asp o Pro; y
Xaa en la posición 9 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 7 es Asn y Xaa en la posición
8 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la posición 9 no es ni Ser ni
Thr;
Por "cualquier aminoácido" se entiende
cualquier aminoácido que ocurre naturalmente. Los aminoácidos que
ocurren naturalmente preferidos son Ala, Cys, Asp, Glu, Phe, Gly,
His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr, Val, Trp y
Tyr.
Un anticuerpo humanizado desglicosado preferido
es una forma humanizada de m266, en la que el CDR2 de cadena pesada
desglicosado es SEQ ID NO: 13, en el que:
Xaa en la posición 7 de SEQ ID NO: 13 es
seleccionado a partir del grupo que consiste en Ala, Cys, Asp, Glu,
Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr,
Val, Trp y Tyr, con tal de que si Xaa en la posición 8 no es ni Asp
ni Pro y Xaa en la posición 9 es Ser o Thr, entonces Xaa en la
posición 7 no es Asn;
Xaa en la posición 8 de SEQ ID NO: 13 es
seleccionado a partir del grupo que consiste en Ala, Cys, Asp, Glu,
Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr,
Val, Trp y Tyr, con tal de que si Xaa en la posición 7 es Asn y Xaa
en la posición 9 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 8 es Asp
o Pro;
Xaa en la posición 9 de SEQ ID NO: 13 es
seleccionado a partir del grupo que consiste en Ala, Cys, Asp, Glu,
Phe, Gly, His, Ile, Lys, Leu, Met, Asn, Pro, Gln, Arg, Ser, Thr,
Val, Trp, y Tyr, con tal de que si Xaa en la posición 7 es Asn y
Xaa en la posición 8 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la
posición 9 no es ni Ser ni Thr.
Una región variable de cadena pesada preferida
de un anticuerpo humanizado desglicosado tiene la secuencia de
aminoácidos siguiente, en la cual el marco es originado a partir del
segmento de VH de la línea germinal humana DP53 y el segmento de J
JH4, con varias sustituciones de aminoácido en los aminoácidos
consenso en el mismo subgrupo humano para reducir la
inmunogenicidad potencial y en la que el sitio de
N-glicosilación en la CDR2 de cadena pesada es
modificado de modo que no pueda ser
N-glicosilado:
en el
que:
Xaa en la posición 1 es Glu o Gln;
Xaa en la posición 7 es Ser o Leu;
Xaa en la posición 46 es Glu, Val, Asp o
Ser;
Xaa en la posición 56 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 57 no es ni Asp ni Pro y Xaa
en la posición 59 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 56 no es
Asn;
Xaa en la posición 57 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en la posición
58 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 57 es Asp o Pro; y
Xaa en la posición 58 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en la posición
57 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la posición 58 no es ni Ser
ni Thr;
Xaa en la posición 63 es Thr o Ser;
Xaa en la posición 75 es Ala, Ser, Val o
Thr;
Xaa en la posición 76 es Lys o Arg;
Xaa en la posición 89 es Glu o Asp; y
Xaa en la posición 107 es Leu o Thr.
Una región variable de cadena pesada
particularmente preferida de un anticuerpo desglicosado humanizado
tiene la secuencia de aminoácidos siguiente, en la cual el marco es
originado a partir del segmento VH de la línea germinal humana DP53
y el segmento de J JH4 y en el que el sitio de
N-glicosilación en la CDR2 de cadena pesada es
modificado de modo que no pueda ser
N-glicosilado:
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
en el
que:
Xaa en la posición 56 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 57 no es ni Asp ni Pro y Xaa
en la posición 59 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 56 no es
Asn;
\newpage
Xaa en la posición 57 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en la posición
58 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 57 es Asp o Pro; y
Xaa en la posición 58 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en la posición
57 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la posición 58 no es ni Ser
ni Thr.
Una cadena pesada preferida para un anticuerpo
humanizado desglicosado, en el que el sitio de
N-glicosilación en la CDR2 de cadena pesada es
modificado de modo que no pueda ser N-glicosilado,
tiene la secuencia de amino-
ácidos:
ácidos:
\vskip1.000000\baselineskip
en el
que:
Xaa en la posición 56 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 57 no es ni Asp ni Pro y Xaa
en la posición 59 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 56 no es
Asn;
Xaa en la posición 57 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en la posición
58 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 57 es Asp o Pro; y
Xaa en la posición 58 es cualquier aminoácido,
con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en la posición
57 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la posición 58 no es ni Ser
ni Thr.
Los anticuerpos de 266 desglicosados preferidos
que tienen la región variable pesada de acuerdo con SEQ ID NO: 14,
SEQ ID NO: 15, y SEQ ID NO: 16 son aquellos en los que:
Xaa en la posición 56 es seleccionado a partir
del grupo que consiste en Ala, Gly, His, Asn, Gln, Ser y Thr, con
tal de que si Xaa en la posición 58 es Ser o Thr, entonces Xaa en la
posición 56 no es Asn;
Xaa en la posición 57 es seleccionado a partir
del grupo que consiste en Ala, Gly, His, Asn, Gln, Ser y Thr; y
Xaa en la posición 58 es seleccionado a partir
del grupo que consiste en Ala, Gly, His, Asn, Gln, Ser y Thr, con
tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn, entonces Xaa en la
posición 58 no es ni Ser ni Thr.
Las secuencias preferidas para CDR2 (posiciones
56, 57 y 58) de la cadena pesada SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15, y
SEQ ID NO: 16 incluyen aquellas en las cuales sólo un aminoácido
simple es cambiado, aquellas en las cuales sólo dos aminoácidos son
cambiados, o todos los tres son cambiados. Es preferido sustituir
Asn en la posición 56. Es preferido sustituir Thr en la posición 58
con un aminoácido distinto a Ser. Es preferido no destruir el sitio
de N-glicosilación en la CDR2 de la cadena pesada de
266 sustituyendo Ser en la posición 57 con Pro o Asp. Sustituciones
conservadoras en las posiciones uno, dos o tres son las preferidas.
Las especies más preferidas son aquellas en las cuales Asn en la
posición 56 es sustituida por Ser o Thr. Los anticuerpos
particularmente preferidos son aquellos en los cuales Ser o Thr
están en la posición 56, Ser está en la posición 57, y Thr está en
la posición 58 de SEQ ID NO: 14, SEQ ID NO: 15 o SEQ ID NO: 16.
Las especies desglicosadas especialmente
preferidas son los anticuerpos que comprenden una cadena ligera de
SEQ ID NO: 11 y una cadena pesada de SEQ ID NO: 16, en la que en SEQ
ID NO: 16, Xaa en la posición 56 es Ser, Xaa en la posición 57 es
Ser, y Xaa en la posición 58 es Thr ("N56S"), o en la que en
SEQ ID NO: 16, Xaa en la posición 56 es Thr, Xaa en la posición 57
es Ser, y Xaa en la posición 58 es Thr ("N56T").
La producción de los anticuerpos útiles en la
invención típicamente implica técnicas recombinantes, como se
describe en el documento WO01/62801 citado anteriormente.
Los anticuerpos (incluyendo los fragmentos
inmnunológicamente reactivos) son administrados a un sujeto que se
evalúa en condiciones asociadas con depósitos de A\beta tales como
la enfermedad de Alzheimer clínica o preclínica, o angiopatía
amiloide clínica o preclínica, usando técnicas de administración
estándar, preferiblemente periféricamente (es decir no por
administración en el sistema nervioso central) por administración
intravenosa, intraperitoneal, subcutánea, pulmonar, transdérmica,
intramuscular, intranasal, bucal, sublingual o con supositorios.
Las composiciones para la administración son
diseñadas para ser apropiadas en el modo seleccionado de
administración, y excipientes farmacéuticamente aceptables tales
como agentes de dispersión, tampones, tensioactivos, conservantes,
agentes solubilizantes, agentes de isotonicidad, agentes
estabilizantes y similares son usados cuando sea apropiado. Las
última edición del Remington's Pharmaceutical Sciences, Mack
Publishing Co., Easton PA proporciona un compendio de técnicas de
formulación como son generalmente conocidas para los médicos. Puede
ser particularmente útil cambiar las características de solubilidad
de los anticuerpos que haciéndolos más lipófilos, por ejemplo,
encapsulándolos en liposomas o bloqueando los grupos polares.
La administración sistémica periférica por
inyección intravenosa o intraperitoneal o subcutánea es preferida.
Los vehículos adecuados para tales inyecciones son directos. Además,
sin embargo, la administración puede ser efectuada también a través
de las membranas mucosas mediante aerosoles nasales o supositorios.
Formulaciones adecuadas para tales modos de administración son
conocidas e incluyen típicamente los tensioactivos que facilitan la
transferencia para cruzar la membrana. Tales tensioactivos son
derivados a menudo a partir de esteroides o son lípidos catiónicos,
tales como cloruro de
N-[1-(2,3-dioleoil)propil]-N,N,N-trimetil-amonio
(DOTMA) o varios compuestos tales como colesterolhemisuccinato,
fosfatidilgliceroles y otros similares.
La concentración del anticuerpo humanizado en
formulaciones es tan baja como de aproximadamente el 0,1% a tan
alta como 15 o 20% en peso y será seleccionada principalmente basado
en los volúmenes del fluido, viscosidades, etcétera, etcétera,
conforme al modo particular de administración seleccionado. Así, una
composición típica para la inyección podría ser hecha para contener
1 mL de agua estéril tamponada de solución salina tamponada de
fosfato y 1-1000 mg, preferiblemente
10-100 mg, del anticuerpo humanizado. La formulación
podría ser filtrada en estéril después de la fabricación de la
formulación, o de otra manera hacerse microbiológicamente aceptable.
Una composición típica para la infusión intravenosa podría tener
volúmenes entre 1-250 mL de fluido, como solución
de Ringer estéril, y 1-100 mg por mL, o más en la
concentración del anticuerpo. Los agentes terapéuticos pueden ser
congelados o liofilizados para el almacenaje y ser reconstituidos en
un vehículo estéril adecuado antes del uso. La liofilización y la
reconstitución pueden conducir a grados variables de la pérdida de
actividad del anticuerpo (por ejemplo, con globulinas inmunes
convencionales, los anticuerpos de IgM tienden a tener una mayor
pérdida de actividad que los anticuerpos de IgG). Las dosificaciones
deberían ser ajustadas para compensar. El pH de la formulación será
seleccionado para equilibrar la estabilidad del anticuerpo (química
y física) y la comodidad al paciente cuando se le administre.
Generalmente, el pH entre 4 y 8 es tolerado.
Aunque los métodos precedentes parezcan los más
convenientes y en su mayor parte apropiados para la administración
de proteínas tales como anticuerpos humanizados, mediante una
adaptación adecuada, otras técnicas para la administración, tales
como la administración transdérmica y la administración oral, pueden
ser empleadas a condición de que la formulación apropiada sea
diseñada.
Además, puede ser deseable emplear formulaciones
de liberación controlada usando películas biodegradables y
matrices, o minibombas osmóticas, o sistemas de suministro basados
en perlas de dextrano, alginato o colágeno.
En resumen, hay formulaciones disponibles para
administrar los anticuerpos y son conocidas en la técnica y pueden
ser escogidas a partir de una variedad de opciones.
Los niveles de dosificación típicos pueden ser
optimizados usando técnicas clínicas estándar y serán dependientes
del modo de administración.
Después de la administración del anticuerpo al
sujeto, las muestras de sangre son retiradas en intervalos
periódicos en los sucesivos minutos, horas o días. Períodos de
tiempo adecuados pueden ser tan cortos como unos minutos, 10
minutos, 30 minutos, o 1 hora, varias horas, o se puede permitir
transcurrir días antes de la retirada de la muestra de sangre. La
medida después de menos de 3 horas es preferida. De ser deseado, la
fracción del plasma puede ser obtenida para su facilidad de
análisis. Técnicas analíticas estándar para el análisis de
A\beta_{40}, A\beta_{42} y su relación son usadas. Estas
técnicas son descritas, por ejemplo, en la patente de EE.UU. Nº.
5.766.846. Cualquier técnica adecuada para el análisis, sin embargo,
puede ser empleada, como separación cromatográfica,
inmunotransferencia, ensayos ELISA, ensayos homogéneos y otros por
el estilo.
La concentración de A\beta_{40},
A\beta_{42}, o su relación entonces es comparada con estos
valores en un control. Los controles típicos incluyen a individuos
conocidos que no tienen condiciones asociadas a placas amiloides,
tales como adolescentes o adultos muy jóvenes y además, controles
normales cognoscitivamente emparejados por edad son obtenidos
haciendo un promedio de valores de la población general. Mientras
que algunos controles normales cognoscitivamente emparejados por
edad de ancianos tienen AD preclínica, la mayor parte no. Así, los
valores promedios de tal población serán útiles y críticos para
obtener. El diseño de controles estándar es un procedimiento que es
conocido por el médico ordinario. Los individuos que tienen elevados
niveles de los péptidos indicados o de la relación de
A\beta_{40} a A\beta_{42} comparando con los valores de
control entonces son identificados por tener una alta probabilidad
de condiciones clínicas o preclínicas asociadas con la formación de
placas amiloides.
Los ejemplos siguientes son requeridos para
ilustrar, pero no para limitar la invención.
Los ejemplos siguientes en este documento
emplean, entre otros, un anticuerpo monoclonal murino denominado
"266" que fue preparado inicialemente por inmunización con un
péptido comprendido a partir de los restos 13-28
del péptido A\beta humano. Se confirmó que el anticuerpo
inmuno-reacciona con este péptido, pero como se ha
mencionado antes, no reaccionaba con el péptido que contiene sólo
los restos 17-28 del péptido humano A\beta, o en
cualquier otro epítopo dentro del péptido A\beta. La preparación
de este anticuerpo es descrita en la patente de EE.UU. Nº.
5.766.846. Como los ejemplos en este documento describen
experimentos conducidos en sistemas murinos, el uso de anticuerpos
monoclonales murinos es satisfactorio. Sin embargo, las formas
humanizadas de los anticuerpos con la inmunoespecificidad
correspondiente a la del anticuerpo 266 son preferidas.
Un modelo murino para la enfermedad de
Alzheimer, ratones transgénicos APP V717F, fue usado en este ensayo.
Estos ratones son descritos en Games, D., et al.,
Nature (1995) 373: 523-527; Bales, K.
R., et al., Nature Genet. (1997) 17:
263-264; y en Holtzman, D. M., et al.,
Proc. Natl. Acad. Sci. U. S. A. (2000) 97:
2892-2897. En este modelo, una forma mutante del gen
de APP humano es expresada y causa una forma de inicio precoz de la
enfermedad de Alzheimer familiar. Aunque los cerebros de estos
ratones parezcan normales al principio, la deposición de A\beta
en la forma de placas difusas y neuríticas ocurre a los
6-15 meses, aunque ratones homocigóticos para el
transgen muestran una variabilidad porque a los 9-14
meses de edad, algunos ratones desarrollan depósitos de A\beta
mientras que otros no lo hacen.
Fueron usados en este estudio 53 ratones
homocigóticos a los 12 meses.
Los niveles en plasma de A\beta_{40},
A\beta_{42}, y las relaciones A\beta_{40}/A\beta_{42}
fueron medidos por ELISA en el plasma de estos ratones antes de la
administración de 500 \mug de m266 y en diversos intervalos de
tiempo hasta 24 horas después de la administración de este
anticuerpo. Después de 24 horas, los ratones fueron sacrificados, y
la cantidad de deposición de A\beta en el cerebro fue evaluada en
el hipocampo y la corteza como se describe en DeMattos, et
al., Proc. Nat'l. Acad. Sci USA (2001) 98:
8850-8855, y se evaluaron como un porcentaje de
cerebro revestido por los depósitos de A\beta.
Como se muestra en las Figuras 1 A, B y C, si el
porcentaje de revestimiento de A\beta debido a la deposición en
el hipocampo es representado en el eje de abscisas frente a los
niveles de los péptidos y su relación en el plasma en el eje de
ordenadas antes de la administración del anticuerpo, no se encuentra
ninguna correlación. Independientemente de si el porcentaje de la
deposición de A\beta era esencialmente el cero (0) o más del 75%,
el promedio del nivel de A\beta_{40} era aproximadamente 250
(pg/ml) y de A\beta_{42} aproximadamente 400 (pg/ml). La
relación de A\beta_{40} frente a A\beta_{42} fue así de
aproximadamente 0,5-0,6.
Como se muestra en las Figuras 2 A y B, sin
embargo, el nievel en plasma de A\beta_{40} estaba fuertemente
correlacionado con el porcentaje de deposición A\beta en el
hipocampo una hora después de la inyección de m266, como hizo la
relación de A\beta_{40} a A\beta_{42}.
Las Figuras 3 A, B y C muestran resultados
similares obtenidos después de 24 horas de la inyección. Los niveles
obtenidos de A\beta_{40} y la relación
A\beta_{40}/A\beta_{42} estaba fuertemente correlacionada
con el % de deposición de A\beta en el hipocampo. Los niveles de
A\beta_{42} también estaban correlacionados con el % de la
deposición de A\beta, pero no fue así con los niveles de
A\beta_{40}.
Las Figuras 4 A, B y C muestran resultados
análogos en lo que concierne a la velocidad de entrada de los dos
péptidos A\beta en el plasma y los valores calculados para la
velocidad de entrada como una función de la relación de estos
péptidos. Las mejores correlaciones con la deposición de A\beta
fueron la velocidad de entrada de A\beta_{40} y la relación de
A\beta_{40}/A\beta_{42}.
Las Figuras 5 A y B muestran una presentación
alternativa de los datos para niveles plasma de A\beta_{40} 24
horas y 1 hora después de la inyección de m266. Cuando los ratones
fueron agrupados de acuerdo con un revestimiento bajo, medio o alto
de A\beta en el hipocampo, los animales con una deposición de
A\beta baja pudieron ser completamente distinguidos de aquellos
con una alta deposición como una función del nivel en plasma de
A\beta_{40}.
En un estudio similar al expuesto antes en el
Ejemplo 1, una cohorte de 49 ratones homocigóticos APP V717F fue
usada. Antes y después de la inyección de 500 \mug IV de m266,
fueron obtenidas muestras de plasma a los 5 minutos, 1 hora, 3
horas, 6 horas y 24 horas y fueron evaluados los niveles de
A\beta_{40} y A\beta_{42} como se describe en el Ejemplo 1.
Los ratones fueron sacrificados después de 24 horas y 1 hemisferio
fue evaluado por el porcentaje del área del hipocampo o la corteza
cingular ocupada por el péptido A\beta (usando la tinción por
inmunofluorescencia cuantitativa de A\beta) y el área ocupada por
el amiloide (por la tinción de tioflavina-S
(amiloide)). Las regiones del otro hemisferio fueron evaluadas para
el péptido A\beta mediante ELISA.
El coeficiente de correlación de Pearson
(Pearson r) y la significación (el valor P) fueron determinados
entre los valores de A\beta en plasma (antes y después de la
injección de m266) y el A\beta hipocámpico o la carga amiloide
usando el software de Prism GraphPad (versión 3.00 para Windows, San
Diego, EE.UU.). La carga de A\beta es definida como el porcentaje
del área del hipocampo revestida por depósitos de
A\beta-inmunorreactivos. La carga amiloide es
definida como el porcentaje del área de hipocampo revestido por
depósitos positivos de tioflavina-S. Las
correlaciones también fueron determinadas entre la acumulación de
A\beta en plasma a las 24 horas (el área bajo la curva, AUC) y la
carga de A\beta hipocámpico o la carga amiloide.
La figura 6 muestra los resultados obtenidos.
Brevemente, fue encontrado que los niveles de línea base (antes de
la inyección) de A\beta_{40}, A\beta_{42} y la relación
calculada de A\beta_{40}/A\beta_{42} antes de la inyección
con m266 no estaban correlacionados con el porcentaje de A\beta o
la deposición amiloide. Sin embargo, después de la administración
de m266, había correlaciones significativas entre A\beta_{40},
A\beta_{42}, y la relación de A\beta_{40}/A\beta_{42} en
plasma tanto con A\beta como con la carga amiloide en el
hipocampo y la corteza cingular.
El análisis estadístico de los resultados
permite la predicción exacta de la carga de A\beta hipocámpico en
estos ratones basado en los niveles en plasma de A\beta_{40} a
las 24 horas después de la inyección de m266.
<110> COMPAÑÍA ELY LILLY Y UNIVERSIDAD DE
WASHINGTON
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<120> MÉTODO DE ENSAYO PARA LA ENFERMEDAD
DE ALZHEIMER
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<130> 8792/292
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/334,987
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2001-10-23
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/313,221
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2001-08-17
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<150> 60/313,224
\vskip0.400000\baselineskip
<151>
2001-08-17
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<160> 16
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<170> PatentIn version 3.1
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 1
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Mus sp.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(16)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CDR1 DE CADENA LIGERA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 1
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Ser Ser Gln Ser Leu Ile Tyr Ser Asp Gly
Asn Ala Tyr Leu His}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 2
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Mus sp.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CDR2 DE CADENA LIGERA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 2
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Lys Val Ser Asn Arg Phe Ser}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Mus sp.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(9)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CDR3 DE CADENA LIGERA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 3
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Ser Gln Ser Thr His Val Pro Trp Thr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 4
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Mus sp.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(5)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CDR2 DE CADENA PESADA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 4
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Arg Tyr Ser Met Ser}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 5
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Mus sp.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(17)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CDR2 DE CADENA PESADA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 5
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Ile Asn Ser Val Gly Asn Ser Thr Tyr Tyr
Pro Asp Thr Val Lys}
\sac{Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 6
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 3
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Mus sp.
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(3)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CDR3 DE CADENA PESADA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 6
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gly Asp Tyr}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 7
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 113
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Anticuerpo humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(113)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> REGIÓN VARIABLE DE CADENA LIGERA DEL
ANTICUERPO HUMANIZADO
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (88)..(88)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 88 es Val o
Leu
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (105)..(105)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 105 es Gln o
Gly
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (108)..(108)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 108 es Lys o
Arg
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (109)..(109)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 109 es Val o
Leu
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (14)..(14)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 14 es Thr o
Ser
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (15)..(15)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 15 es Leu o
Val
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (30)..(30)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 30 es Ile o
Val
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (50)..(50)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 50 es Arg, Gln o
Lys
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (7)..(7)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 7 es Ser o
Thr
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (2)..(2)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 2 es Val o
Ile
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 7
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 8
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 112
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223>
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220> Anticuerpo humanizado
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(112)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> REGIÓN VARIABLE DE CADENA PESADA DEL
ANTICUERPO HUMANIZADO
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (76)..(76)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 76 es Lys o
Arg
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (89)..(89)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 89 es Glu o
Asp
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (107)..(107)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 107 es Leu o
Thr
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 1 es Glu o
Gln
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (7)..(7 )
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 7 es Ser o
Leu
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (46)..(46)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 46 es Glu, Val,
Asp o Ser
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (63)..(63 )
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 63 es Thr o
Ser
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (75)..(75)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 75 es Ala, Ser,
Val o Thr
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 8
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 9
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 113
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Anticuerpo humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(113)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> REGIÓN VARIABLE DE CADENA LIGERA DEL
ANTICUERPO HUMANIZADO
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 9
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 10
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 112
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Anticuerpo humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(112)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> REGIÓN VARIABLE DE CADENA PESADA DEL
ANTICUERPO HUMANIZADO
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 10
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 11
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 219
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Anticuerpo humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(219)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CADENA LIGERA DEL ANTICUERPO
HUMANIZADO
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 11
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 12
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 442
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Anticuerpo humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(442)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CADENA PESADA DEL ANTICUERPO
HUMANIZADO
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 12
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 13
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 17
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Variante de ratón
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(17)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> CDR2 DE CADENA PESADA
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (7) .. (7)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 7 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 8 no es ni Asp ni
Pro y Xaa en la posición 9 es Ser o Thr, entonces Xaa en la
posición 7 no es Asn
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (8)..(8)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 8 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 7 es Asn y Xaa en
la posición 9 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 8 es Asp o
Pro
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (9)..(9)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 9 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 7 es Asn y Xaa en
la posición 8 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la posición 9 no
es ni Ser ni Thr
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 13
\vskip1.000000\baselineskip
\sa{Gln Ile Asn Ser Val Gly Xaa Xaa Xaa Tyr Tyr
Pro Asp Thr Val Lys}
\sac{Gly}
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 14
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 112
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Anticuerpo humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(112)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Región variable de cadena pesada del
anticuerpo humanizado desglicosilado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (63)..(63)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 63 es Thr o
Ser
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(1)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 1 es Glu o
Gln
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (7)..(7)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 7 es Ser o
Leu
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (46)..(46)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 46 es Glu, Val,
Asp o Ser
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (56)..(56)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 56 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 57 no es ni Asp ni
Pro y Xaa en la posición 59 es Ser o Thr, entonces Xaa en la
posición 56 no es Asn
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (57)..(57)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 57 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en
la posición 58 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 57 es Asp
o Pro
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (58)..(58)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 58 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en
la posición 57 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la posición 58
no es ni Ser ni Thr
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (75)..(75)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 75 es Ala, Ser,
Val o Thr
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (76)..(76)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 76 es Lys o
Arg
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (89)..(89)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 89 es Glu o
Asp
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (107)..(107)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 107 es Leu o
Thr
\newpage
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 14
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 15
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 112
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Anticuerpo humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(112)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Región variable de cadena pesada del
anticuerpo humanizado desglicosilado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (56)..(56)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 56 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 57 no es ni Asp ni
Pro y Xaa en la posición 59 es Ser o Thr, entonces Xaa en la
posición 56 no es Asn
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (57)..(57)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 57 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en
la posición 58 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 57 es Asp
o Pro
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (58)..(58)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 58 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en
la posición 57 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la posición 58
no es ni Ser ni Thr
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 15
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<210> 16
\vskip0.400000\baselineskip
<211> 442
\vskip0.400000\baselineskip
<212> PRT
\vskip0.400000\baselineskip
<213> Secuencia artificial
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Anticuerpo humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (1)..(442)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Cadena pesada del anticuerpo
humanizado
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (56)..(56)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 56 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 57 no es ni Asp ni
Pro y Xaa en la posición 59 es Ser o Thr, entonces Xaa en la
posición 56 no es Asn
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (57)..(57)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 57 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en
la posición 58 es Ser o Thr, entonces Xaa en la posición 57 es Asp
o Pro
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<220>
\vskip0.400000\baselineskip
<221> CARACTERÍSTICA VARIABLE
\vskip0.400000\baselineskip
<222> (58)..(58)
\vskip0.400000\baselineskip
<223> Xaa en la posición 58 es cualquier
aminoácido, con tal de que si Xaa en la posición 56 es Asn y Xaa en
la posición 57 no es ni Asp ni Pro, entonces Xaa en la posición 58
no es ni Ser ni Thr
\vskip1.000000\baselineskip
\vskip0.400000\baselineskip
<400> 16
\vskip1.000000\baselineskip
Claims (11)
1. Un método para diagnosticar la enfermedad de
Alzheimer preclínica o clínica que comprende:
(a) medir uno o varios de:
- (i)
- el nivel de A\beta_{40};
- (ii)
- el nivel de A\beta_{42}; o
- (ii)
- la relación A\beta_{40}/A\beta_{42};
en una muestra de sangre de un
sujeto obtenida en un intervalo de tiempo después de administrar a
dicho sujeto una cantidad de un anticuerpo que se une
específicamente a un epítopo contenido dentro de las posiciones
13-28 de A\beta o un anticuerpo que secuestra el
péptido A\beta de su forma unida o circulante en la sangre y
cambia el aclaramiento de las formas solubles y unidas de A\beta
en el sistema nervioso central en plasma, en el que dicha cantidad
es eficaz para cambiar los niveles de péptidos A\beta circulantes
en la sangre de dicho sujeto cuando dicho sujeto está en una etapa
preclínica o clínica de la enfermedad de
Alzheimer;
(b) comparar el nivel de A\beta_{40},
A\beta_{42}, o la relación A\beta_{40}/A\beta_{42} en
dicho sujeto con un valor de control de dichos niveles, en el que
los niveles elevados de A\beta_{40}, A\beta_{42}, o la
relación de A\beta_{40}/A\beta_{42} en dicho sujeto
comparado con los niveles de control o la relación identifica a
dicho sujeto como en una etapa preclínica o clínica de la enfermedad
de Alzheimer.
2. El método de la reivindicación 1, en el que
dicho intervalo de tiempo es menos de 1 semana.
3. El método de la reivindicación 1, en el que
dicho intervalo de tiempo es menos o igual a 24 horas.
4. El método de la reivindicación 3, en el que
el intervalo de tiempo es menos o igual a 3 horas.
5. El método de la reivindicación 1, en el que
dicha administración era mediante inyección de dichos
anticuerpos.
6. El método de la reivindicación 1, en el que
el sujeto es un ser humano y el anticuerpo es un anticuerpo
humanizado o sus fragmentos.
7. El método de la reivindicación 6, en el que
el anticuerpo humanizado o sus fragmentos comprende una cadena
ligera de SEQ ID NO: 11 y una cadena pesada de SEQ ID NO: 12.
8. El método de la reivindicación 6, en el que
el anticuerpo humanizado o sus fragmentos comprenden una cadena
ligera de SEQ ID NO: 11 y una cadena pesada de SEQ ID NO: 16.
9. El método de la reivindicación 6, en el que
el anticuerpo humanizado o sus fragmentos comprenden una cadena
ligera que comprende una región variable de SEQ ID NO:7 y una cadena
pesada que comprende una región variable de SEQ ID NO: 14.
10. El método de la reivindicación 1, en el que
dicho anticuerpo es un fragmento.
11. El método de la reivindicación 1, en el que
el anticuerpo es un anticuerpo de cadena simple.
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| KR20160079891A (ko) * | 2013-11-20 | 2016-07-06 | 유니버시티 오브 아이오와 리써치 파운데이션 | 아밀로이드 침착의 치료를 위한 방법 및 조성물 |
| CN109187981A (zh) * | 2018-08-01 | 2019-01-11 | 万东山 | 一种快速检测β-淀粉样蛋白的量子点免疫层析试纸条与应用 |
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Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994010569A1 (en) * | 1992-10-26 | 1994-05-11 | Schenk Dale B | METHODS AND COMPOSITIONS FOR THE DETECTION OF SOLUBLE β-AMYLOID PEPTIDE |
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