ES2209417T3

ES2209417T3 - Analogos de los cannabinoides endogenos sinteticos y sus usos.

Info

Publication number: ES2209417T3
Application number: ES99913555T
Authority: ES
Inventors: Raphael Mechoulam; Esther Fride; Shimon Ben Shabat; Tzviel Sheskin; Aviva Breuer
Original assignee: Yissum Research Development Co of Hebrew University of Jerusalem
Current assignee: Yissum Research Development Co of Hebrew University of Jerusalem
Priority date: 1998-04-03
Filing date: 1999-03-30
Publication date: 2004-06-16
Anticipated expiration: 2019-03-30
Also published as: AU3165399A; CA2326766A1; ATE251103T1; EP1066235A1; EP1066235B1; AU765670B2; DE69911755D1; DE69911755T2; IL138690A0; US6531636B1; WO1999051560A1

Abstract

Un compuesto de la fórmula general: R1-CH2-O-CHR2R3 (I) en la que R1-CH2- representa un resto alquenilo derivado de un alcohol graso poliinsaturado de 16 a 28 átomos de carbono que contiene 2 a 6 dobles enlaces, en el que el primer doble enlace está situado en el C-3, C-6 o C-9 cuando se cuenta a partir del extremo libre de dicho resto alquenilo; R2 representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C1-C5 inferior; y R3 representa un grupo alcoxialquilo; o el grupo CHR2R3 representa un grupo 2-glicerilo; dichos grupos alquilo C1-C5 y alcoxialquilo pueden estar, independientemente, sustituidos con uno o más grupos hidroxilo, grupos amino o grupos alquilamino sobre uno cualquiera de sus átomos de carbono, y cada uno de dichos grupos hidroxilo puede estar adicionalmente sustituido para formar un éster o puede estar convertido en un grupo fosfonato o alquil-sulfonato.

Description

Análogos de los cannabinoides endógenos sintéticos y sus usos.

Declaración de la invención

La presente invención se refiere a los compuestos de la fórmula general (I), a un procedimiento para su preparación, a las composiciones farmacéuticas que contienen al menos un compuesto de la invención y a los diferentes usos de dichos compuestos.

Antecedentes de la invención

La anandamida y el 2-araquidonil-glicerol (2-Ara-Gl) representan los dos tipos de constituyentes cannabinoides endógenos descubiertos hasta ahora [Devane W.A. et al., Science 258:1946-1949 (1992a); Mechoulam R. et al., Biochem. Pharmacol. 50: 83-90 (1995); Mechoulam R. et al., US Patent No. 5.618.858 (correspondiente a IL 103932)]. Estos compuestos, y sus amidas y ésteres relacionados producen numerosos efectos que tienen potencial terapéutico [Mechoulam R. et al., Progress in Medicinal Chemistry 35: 501-545, GP Ellis Ed. (1998); Mechoulam R. (ed.), Cannabinoids as therapeutic agents, CRC Press Coca Raton Florida (1986)]. Se ha demostrado recientemente que la anandamida puede ser un modulador endógeno de la presión arterial [Wagner J. A. et al., Nature 390: 518-521 (1997)]. Cuando se administra a las ratas se ha demostrado que reduce la presión arterial [Varga K. et al., Eur. J. Pharmacol 278: 279-283 (1995)]. Estos hallazgos fueron confirmados por esta invención [véase la tabla 3]. Sin embargo, tanto la anandamida como el 2-araquidonil-glicerol son propensos a una hidrólisis enzimática fácil y rápida. Esto representa un serio inconveniente para su eventual uso como fármacos, entre otras cosas, porque las sustancias que son susceptibles de escisiones hidrolíticas pueden sufrir cambios en el tracto intestinal.

Han sido descritos procedimientos para sintetizar los análogos de lisofosfatidiletanolamina que inhiben la actividad de la renina [Turcotts J. G. et al., J. Med. Chem., 1975, Vol. 18, No. 12].

En esta invención se ha descubierto un nuevo grupo de derivados sintéticos relacionados del 2-araquidonil-glicerol que son estables a la hidrólisis. Estos son éteres derivados de alcoholes grasos de cadena larga (en particular el araquidoníl-alcohol). Estos compuestos se unen a los receptores cannabinoides CB_{1} y CB_{2} y presentan in vivo efectos similares a los de la anandamida y 2-Ara-Gl. Los compuestos descritos aquí reducen la presión intraocular en los conejos (un modelo para el glaucoma), reducen el dolor y los vómitos, bajan la presión arterial, presentan propiedades anti-inflamatorias, tienen efectos antiespásticos y pueden ser por tanto útiles en el tratamiento de la esclerosis múltiple. Además, el efecto de los nuevos compuestos es prolongado, lo que para algunas enfermedades es una clara ventaja.

Sumario de la invención

La presente invención se refiere a un compuesto de la fórmula general (I):

(I)R^{1}-CH_{2}-O-CHR^{2}R^{3}

en la que R^{1}-CH_{2}- representa un resto alquenilo derivado de un alcohol graso poliinsaturado de 16 a 28 átomos de carbono que contiene 2 a 6 dobles enlaces, en el que el primer doble enlace está situado en el C-3, C-6 o C-9 cuando se cuenta a partir del extremo libre de dicho resto alquenilo; R^{2} representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{5} inferior; y R^{3} representa un grupo alcoxialquilo; o el grupo CHR^{2}R^{3} representa un grupo 2-glicerilo; dichos grupos alquilo C_{1}-C_{5} y alcoxialquilo pueden estar, independientemente, sustituidos con uno o más grupos hidroxilo, grupos amino o grupos alquilamino sobre uno cualquiera de sus átomos de carbono, y dicho grupo hidroxilo puede estar adicionalmente sustituido para formar un éster o puede estar convertido en un grupo fosfonato o alquil-sulfonato.

Además, la invención se refiere a un procedimiento para preparar los compuestos de la invención, cuyo procedimiento comprende las etapas de (a) hacer reaccionar un compuesto de la fórmula general (II):

(II)R^{1}-CH_{2}-OH

en la que R^{1} es como se ha definido antes para los compuestos de la fórmula general (I), con un haluro de alquilsulfonilo o con un haluro de arilsulfonilo; (b) hacer reaccionar el producto obtenido en la etapa (a) o bien (i) con un alcohol de la fórmula general (III):

(III)R^{2}R^{3}CHOH

en la que R^{2} y R^{3} son como se han definido antes para los compuestos de la fórmula general (I), en presencia de una base; o bien (ii) con un alquiliden-glicerol o ariliden-glicerol que tiene al menos un grupo hidroxilo libre, en presencia de una base; y opcionalmente (c) cuando dicho producto de la etapa (a) se hace reaccionar en la etapa (b) con un resto de glicerol, el producto de dicha etapa (b) se hace reaccionar adicionalmente con un reactivo ácido para obtener el compuesto de la fórmula general (I).

También, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto de la invención y opcionalmente comprende además excipientes, adyuvantes, diluyentes y aditivos farmacéuticamente aceptables.

Breve descripción de las figuras

Figura 1: presenta una ilustración esquemática del procedimiento para preparar 2-O-araquidonil-glicerol, empleando los siguientes reactivos y condiciones: (a) cloruro de metanosulfonilo, piridina, temperatura ambiente (RT), 5 horas (h); (b) cis-1,3-bencilidenglicerol, KOH, 3 horas; (c) HCl:metanol (3:7) 20 horas.

Figura 2: presenta una ilustración esquemática de una segunda ruta para realizar el procedimiento de la invención, en la cual se pueden obtener éteres de 2-O-araquidonilo, en la que se emplean los siguientes reactivos y condiciones: (a) cloruro de metanosulfonilo, piridina, temperatura ambiente, 5 horas; (b) R-OH, KOH, 3 horas, donde R representa el grupo -CHR^{2}R^{3} como se ha definido aquí.

Figura 3: ilustra la inhibición competitiva de la unión de [^{3}H]HU-243 sobre el receptor CB_{1} por medio del HU-310 ( ), el % de cuentas (% Cont) indica el % en relación al testigo.

Figura 4: ilustra la inhibición competitiva de la unión de [^{3}H]HU-243 sobre el receptor CB_{2} por medio del HU-310 ( ), el % de cuentas indica el % en relación al testigo.

Figura 4: ilustra la estructura de algunos compuestos de la fórmula I.

Descripción detallada de la invención

Los cannabinoides son sustancias orgánicas presentes en Cannabis sativa, que tienen una variedad de propiedades farmacológicas. Los cannabinoides endógenos son derivados de ácidos grasos presentes en los mamíferos, que tienen propiedades farmacológicas similares a las de los cannabinoides de la planta. La presente invención se refiere a derivados no hidrolizables de los cannabinoides endógenos.

En particular, la invención se refiere a un compuesto de la fórmula general (I):

(I)R^{1}-CH_{2}-O-CHR^{2}R^{3}

en la que el resto R^{1}-CH_{2}- representa un resto alquenilo derivado de un alcohol graso poliinsaturado de 16 a 28 átomos de carbono, conteniendo el resto alquenilo 2 a 6 dobles enlaces, en el que el primer doble enlace está situado en el C-3, C-6 o C-9 cuando se cuenta a partir del extremo libre de dicho resto alquenilo; R^{2} representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{5} inferior; y R^{3} representa un grupo alcoxialquilo; o el grupo CHR^{2}R^{3} representa un grupo 2-glicerilo; donde dichos grupos alquilo C_{1}-C_{5} y dichos grupos alcoxialquilo pueden estar, independientemente, sustituidos con uno o más grupos hidroxilo, grupos amino o grupos alquilamino sobre uno cualquiera de sus átomos de carbono, y dicho grupo hidroxilo puede estar adicionalmente sustituido para formar un éster o puede estar convertido en un grupo fosfonato o alquil-sulfonato.

Preferiblemente, el resto alquenilo dentro del compuesto de la invención se selecciona del grupo constituido por octadecatrienilo, eicosapentenilo, docosahexenilo, eicosatrienilo o eicosatetraenilo.

Como se describe en los siguientes ejemplos, las realizaciones específicas de la invención, son 2-dihomo-\gamma-linolenil-gliceril-éter y araquidonil-2-isopropoxietil-éter y particularmente, 2-araquidonil-gliceril-éter (Fig. 5). Se ha demostrado que estos compuestos tienen un valor terapéutico ya que son capaces de unirse durante un prolongado periodo de tiempo a los receptores cannabinoides, CB_{1} y CB_{2}.

Los compuestos de la invención se pueden radiomarcar y emplear en numerosos procedimientos biológicos, clínicos y de diagnóstico. Como los derivados de la invención tienen la naturaleza química de un éter, son más estables que el cannabinoide endógeno, 2-araquidonil-glicerol y por tanto pueden permitir la observación de su perfil farmacológico durante un periodo de tiempo más largo en comparación con los correspondientes compuestos endógenos.

En un segundo aspecto, la invención se refiere a un procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula general (I):

(I)R^{1}-CH_{2}-O-CHR^{2}R^{3}

en la que R^{1}-CH_{2}- representa un resto alquenilo derivado de un alcohol graso poliinsaturado de 16 a 28 átomos de carbono con 2 a 6 dobles enlaces, con el primer doble enlace en la posición C-3, C-6 o C-9 contando a partir del extremo libre de dicho resto alquenilo; R^{2} representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{5} inferior; y R^{3} representa un grupo alcoxialquilo; o el grupo CHR^{2}R^{3} representa un grupo 2-glicerilo; donde dichos grupos alquilo C_{1}-C_{5} y alcoxialquilo pueden estar, independientemente, sustituidos con uno o más grupos hidroxilo, grupos amino o grupos alquilamino sobre uno cualquiera de los átomos de carbono, y dicho grupo hidroxilo puede estar adicionalmente sustituido para formar un éster o puede estar convertido en un grupo fosfonato o alquil-sulfonato, cuyo procedimiento comprende las etapas de: (a) hacer reaccionar un compuesto de la fórmula general (II):

(II)R^{1}-CH_{2}-OH

en la que R^{1} es como se ha definido antes, con un haluro de alquilsulfonilo o con un haluro de arilsulfonilo; (b) hacer reaccionar el producto obtenido en la etapa (a) o bien (i) con un alcohol de la fórmula general (III):

(III)R^{2}R^{3}CHOH

en la que R^{2} y R^{3} son como se han definido antes, en presencia de una base; o bien (ii) con un alquiliden-glicerol o ariliden-glicerol que tiene al menos un grupo hidroxilo libre, en presencia de una base; (c) opcionalmente, cuando dicho producto de la etapa (a) se hace reaccionar en la etapa (b) con un resto de glicerol, el producto de dicha etapa (b) se hace reaccionar adicionalmente con un reactivo ácido para obtener el compuesto de la fórmula general (I). Los dos modos de realizar el procedimiento de la invención se ilustran en las Fig. 1 y Fig. 2.

El haluro de alquilsulfonilo utilizado en el procedimiento de la invención es preferiblemente cloruro de metanosulfonilo, mientras que el haluro de arilsulfonilo es preferiblemente cloruro de para-toluenosulfonilo.

En el procedimiento de la invención, el alcohol preferido empleado es un isoalcoxi-alcohol, y más preferiblemente, 2-isopropoxi-alcohol o propanol. El ariliden-glicerol empleado es preferiblemente cis-1,3-benciliden-glicerol.

Según una realización de la invención, las etapas de reacción se llevan a cabo en presencia de KOH como base, a temperatura ambiente, bajo atmósfera de nitrógeno. Cuando es necesario usar un reactivo ácido, el reactivo preferido es una mezcla de HCl y metanol, preferiblemente en una proporción de 1:7.

Evidentemente, cualquier compuesto obtenido por el método de la invención, está dentro del alcance de la invención.

En un tercer aspecto, la invención se refiere a una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto de la fórmula general (I):

(I)R^{1}-CH_{2}-O-CHR^{2}R^{3}

en la que R^{1}-CH_{2}- representa un resto alquenilo derivado de un alcohol graso poliinsaturado de 16 a 28 átomos de carbono que contiene 2 a 6 dobles enlaces, en el que el primer doble enlace está en la posición C-3, C-6 o C-9 cuando se cuenta a partir del extremo libre de dicho resto alquenilo; R^{2} representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{5} inferior; y R^{3} representa un grupo alcoxialquilo; o el grupo CHR^{2}R^{3} representa un grupo 2-glicerilo; donde dichos grupos alquilo C_{1}-C_{5} y alcoxialquilo pueden estar, independientemente, sustituidos con uno o más grupos hidroxilo, grupos amino o grupos alquilamino sobre uno cualquiera de sus átomos de carbono, y dicho grupo hidroxilo puede estar adicionalmente sustituido para formar un éster o puede estar convertido en un grupo fosfonato o alquil-sulfonato, cuya composición puede comprender además excipientes, adyuvantes, aditivos, diluyentes y/o agentes conservantes, farmacéuticamente aceptables.

Las composiciones farmacéuticas de la invención se pueden usar para numerosos fines terapéuticos, entre otros, como composiciones anti-inflamatorias, antiasmáticas, analgésicas, hipotensivas, antieméticas o antiespasmódicas, como composiciones para tratar y o prevenir el glaucoma o la migraña, como composiciones para aliviar los síntomas de la esclerosis múltiple y composiciones estimulantes del estado de ánimo.

Según algunas realizaciones particulares de la invención, las composiciones comprenden como ingrediente activo 2-araquidonil-gliceril-éter, 2-dihomo-\gamma-linolenil-gliceril-éter, 2-isopropoxietil-éter, una combinación de los mismos o una combinación de los mismos con otros ingredientes terapéuticamente activos.

Las composiciones de la invención se pueden administrar y dosificar de acuerdo con las buenas prácticas médicas, teniendo en cuenta el estado clínico del paciente individual, el sitio y método de administración, la pauta de administración, la edad, sexo y peso corporal del paciente y otros factores conocidos por los médicos. La "cantidad farmacéuticamente eficaz" para los fines de esta invención se determina por tanto mediante consideraciones tales como las conocidas en la técnica. La cantidad debe ser eficaz para alcanzar una mejoría incluyendo pero sin limitarse a ellas, una mejor tasa de supervivencia o una recuperación más rápida, o una mejoría o la eliminación de los síntomas y otros indicadores que se seleccionan como medidas apropiadas por los expertos en la técnica, por ejemplo, inflamación, hipertensión, glaucoma y otros trastornos o síntomas.

Las dosis pueden ser dosis únicas o múltiples a lo largo de un periodo de varios días, pero son preferidas las dosis únicas.

La composición farmacéutica de la invención se puede administrar de diferentes modos y puede comprender, además del ingrediente activo, excipientes, diluyentes, adyuvantes, agentes conservantes y vehículos, farmacéuticamente aceptables. Las composiciones farmacéuticas se pueden administrar subcutánea o parenteralmente incluyendo la administración intravenosa, intraarterial, intramuscular e intraperitoneal, así como técnicas intratecales. También pueden ser útiles los implantes de las preparaciones farmacéuticas. Los excipientes, diluyentes, adyuvantes y vehículos, farmacéuticamente aceptables así como los excipientes de los implantes generalmente son agentes de carga sólidos o líquidos, inertes, no tóxicos, diluyentes, o material de encapsulación que no reaccionan con los ingredientes activos de la invención.

Cuando se administra la composición farmacéutica de la invención parenteralmente, generalmente será formulada en un forma farmacéutica inyectable de dosis unitaria (solución, suspensión, emulsión). Las formulaciones farmacéuticas adecuadas para inyección incluyen soluciones acuosas estériles y polvos estériles para reconstitución en soluciones inyectables estériles. El vehículo puede ser cualquier vehículo adecuado fisiológicamente aceptable, por ejemplo, agua o soluciones tampón acuosas. Además, se pueden añadir diferentes aditivos que mejoran la estabilidad, esterilidad y/o isotonicidad de las composiciones, incluyendo conservantes antimicrobianos, antioxidantes, agentes quelantes y tampones. La prevención de la acción de los microorganismos se puede asegurar por diferentes agentes antibacterianos y antifúngicos, por ejemplo parabenos, clorobutanol, fenol y ácido sórbico. En muchos casos será deseable incluir agentes isotónicos, por ejemplo, azúcares y cloruro de sodio. La absorción prolongada de la forma farmacéutica se puede conseguir por el uso de agentes que retrasan la absorción, por ejemplo, monoestearato de aluminio y gelatina. Según la presente invención, cualquier vehículo, diluyente, o aditivo usado tienen que ser compatibles con las composiciones.

Se pueden usar también formas convencionales, tales como la administración de la composición en forma de comprimidos, suspensiones, soluciones, emulsiones, cápsulas, polvos, y jarabes. Se prefieren las técnicas conocidas que liberan la composición oral o intravenosamente y mantienen la actividad biológica.

Según una realización preferida, las composiciones de la invención comprenden de 1 mg a 100 mg del ingrediente activo por forma farmacéutica unitaria.

En otro aspecto adicional, la invención se refiere al uso del compuesto de la fórmula general (I) como se ha definido antes, en la preparación de una composición farmacéutica. No obstante, el compuesto de la invención se puede usar con fines de diagnóstico bien conocidos por los expertos en la técnica y también descritos aquí brevemente antes. Para esto, el compuesto debe ser marcado mediante un resto marcador adecuado, tal como ^{3}H o ^{13}C.

La presente invención se define por las reivindicaciones, cuyos contenidos deben ser interpretados como parte de la divulgación de la memoria descriptiva.

La invención será descrita ahora de una forma ilustrativa, y se debe entender que la terminología que ha sido usada se pretende usar como aclaración de la descripción más que como limitación.

Obviamente, son posibles muchas modificaciones y variaciones de la presente invención a la vista de lo indicado anteriormente. Se debe entender, por tanto, que dentro del alcance de las reivindicaciones adjuntas, se puede poner en práctica la invención de forma distinta a la que se describe específicamente.

Ejemplos Ejemplo 1 Síntesis de 2-O-araquidonil-gliceril-éter (HU-310) (Figura 1)

Se enfrió a 0ºC, araquidonil-alcohol (0,34 mmol, 100 mg) en piridina seca (5 ml). Se añadió a la solución anterior cloruro de metanosulfonilo (0,52 mmol, 40 mg) bajo atmósfera de nitrógeno. Se dejó que la mezcla de reacción alcanzara lentamente la temperatura ambiente a la cual se continuó la reacción durante 5 horas. Se añadieron entonces a la mezcla de reacción, agua (20 ml) y éter (20 ml), tras lo cual se separó la fase orgánica, se lavó con ácido sulfúrico 2 N, seguidamente con agua y después con una solución de carbonato de potasio al 10%. Se secó la mezcla de reacción por evaporación de los disolventes para obtener el producto oleoso araquidonil-metanosulfonato (75 mg; rendimiento 59%) que presenta los siguientes espectros: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 5,34-5,41 (m, 8H), 4,23 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,00 (s, 3H), 2,75-2,84 (m, 6H), 2,04-2,12 (m,4H), 1,65-1,74 (m, 2H), 1,33-1,50 (m, 2H), 1,25-1,30 (m, 6H), 0,89 (t, J=7,2 Hz, 3H). IR (cm^{-1}): 2900, 2850, 1350, 1170, 940.

El producto oleoso obtenido como se ha descrito antes (0,22 mmol, 64 mg) se añadió a una mezcla de cis-1,3-bencilidenglicerol (0,214 mmol, 39 mg) e hidróxido de potasio (170 mg) en benceno seco (10 ml) y se dejó que reaccionara a temperatura ambiente, bajo atmósfera de nitrógeno. Se lavó después la mezcla con agua, seguido por una solución de ácido clorhídrico al 10% y después de nuevo con agua. Se secó a continuación la mezcla con sulfato de sodio tras lo cual se evaporó el disolvente y se sometió el producto a cromatografía en columna para dar el producto oleoso, 2-O-araquidonil-1,3-bencilidenglicerol (26 mg; rendimiento 33%). El producto obtenido presentó los siguientes espectros: ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 7,48-7,52 (m, 2H), 7,33-7,38 (m,3H), 5,54 (s, 1H), 5,32-5,41 (m, 8H), 4,32 (d, J=12,6 Hz, 2H), 4,03 (d, J=14,1 Hz, 2H), 3,55 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,25 (m, 1H), 2,75-2,84 (m, 6H), 2,04-2,18 (m, 4H), 1,60-1,70 (m, 2H), 1,20-1,38 (m, 8H), 0,88 (t, J=6,9 Hz, 3H). IR (cm^{-1}): 2900, 2850, 1450, 1380, 1340, 1150, 1100.

El aceite obtenido antes, 2-O-araquidonil-1,3-bencilidenglicerol, se disolvió después en una mezcla de metanol y ácido clorhídrico concentrado (7:3, 10 ml) y se dejó que reaccionara durante 3 horas, a temperatura ambiente, bajo atmósfera de nitrógeno, tras lo cual se evaporó el metanol a presión reducida y se separó el residuo ácido por destilación azeotrópica con benceno para obtener el producto deseado 2-O-araquidonil-gliceril-éter (denominado también aquí HU-310) en la forma de un aceite amarillento. El producto (35 mg; rendimiento 87%) dio los siguientes resultados: (1) ^{1}H NMR (CDCl_{3}) \delta 5,34-5,39 (m, 8H), 3,66-3,79 (m, 4H), 3,58 (t, J=6,6 Hz, 2H), 3,43-3,46 (m, 1H), 2,75-2,84 (m, 6H), 1,99-2,20 (m, 4H), 1,60-1,70 (m, 2H), 1,20-1,42 (m, 8H), 0,89 (t, J=6,9 Hz, 3H). IR (cm^{-1}): 3350, 290, 2850, 1440, 1040. (2) GC-MS (EI) después de sililación con BSTFA, presentó M^{+} a m/z 508, [M-15]^{+} a m/z 493, mientras que las m/z obtenidas fueron 405, 383, 272, 219, 150, 129, 103 y 73.

Otros éteres, tales como 2-dihomo-\gamma-linolenil-gliceril-éter (denominado también aquí HU-314) y araquidonil-2-isopropoxietil-éter (denominado también aquí HU-313) se prepararon haciendo reaccionar el araquidonil-metanosulfonato con un alcohol, tal como 2-isopropiloxi-etanol y propanol, respectivamente (Figura 2). Los productos se obtuvieron con buen rendimiento (60-70%).

Ejemplo 2 Ensayos biológicos y resultados Analgesia

Los nuevos compuestos preparados como se ha descrito anteriormente se evaluaron en cuanto a su potencia para reducir las respuestas en el ensayo de analgesia, según el método estándar del plato caliente, como se describe brevemente a continuación.

Los compuestos de la invención (HU-310, HU-313 y HU-314) se disolvieron en una mezcla detergente (Emulphor:etanol:solución salina (5.5:90)) y se administraron por inyección intravenosa en la vena caudal de los ratones con un volumen de inyección de 0,1 ml/10 g de peso corporal. Los resultados presentados en la tabla 1 indican que los tres compuestos de la invención son potentes agentes analgésicos, siendo el HU-310 el más potente.

TABLA 1 Reducción de las dosis de analgesia en ratones

Compuesto	Analgesia, ED_{50} (mg/kg)
HU-310	2,8
HU313	3,5
HU-314	4,6

Actividad antiemética

Los compuestos de la invención se evaluaron también en cuanto a su potencia como agentes antieméticos siguiendo el procedimiento descrito por Feigenbaum et al., [Eur. J. Pharmacol. 169: 159-165 (1989)], en el que se usaron como modelo palomas que padecen emesia causada por un fármaco antineoplásico (cisplatina).

En consecuencia, cada compuesto se disolvió en Emulphor (detergente):etanol:solución salina (5:5:90) y se administró subcutáneamente a las palomas. El volumen de inyección fue 1,0 ml/kg de peso corporal. La reducción de los vómitos con 2-O-araquidonil-gliceril-éter (HU-310) fue del 50% cuando se usaron 3,0 mg del ingrediente activo por kg de peso corporal. En el caso del 2-dihomo-\gamma-linolenil-gliceril-éter (HU-314) y araquidonil-2-isopropoxietil-éter (HU-313), se redujeron también los vómitos aunque en menor extensión.

Actividad antiglaucoma

Cada compuesto se evaluó además en cuanto a su potencia como agente para tratar y/o prevenir el glaucoma. Para esto, se indujo un glaucoma estable en conejos mediante la inyección en el ojo de \delta-quimiotripsina como se ha descrito por Mechoulam R. et al., [Mechoulam R. et al., The Therapeutic Potential of Marihuana, eds S. Cohen, R.C. Stillman Plenum Press, New York, pp 35-48 (1975)]. Se empleó como control, pilocarpina, un fármaco antiglaucomatoso estándar, que presentó una reducción de la presión intraocular (IOP) a una concentración de 0,01% en solución acuosa y proporcionó un periodo de retraso de 30 horas en la recuperación de la IOP original inducida por la quimiotripsina.

Los compuestos de la invención se disolvieron cada uno en una mezcla detergente (Emulphor:etanol:solución salina (5:5:90)) y después se diluyeron adicionalmente con solución salina hasta obtener las concentraciones deseadas. Se encontró que los compuestos eran activos en la reducción de la IOP. Cuando se administraron al ojo a una concentración de 0,1% retrasaron la recuperación de la IOP original inducida por la quimiotripsina en 4-10 horas.

Actividad anti-inflamatoria

Cada uno de los compuestos de la invención se evaluó en cuanto a su potencia para actuar como agente anti-inflamatorio, según el método descrito por Calhoun W. et al., [Calhoun W. et al., Agents and Actions, 21: 306-309 (1987)]. En el método, se sustituyó el agua por mercurio como medio de desplazamiento. Se inyectaron subcutáneamente en la superficie plantar de la pata trasera derecha de ratones hembra (20-25g) anestesiados con éter, el factor activador de las plaquetas (PAF) (1,0 \mug) o el ácido araquidónico (1,0 mg) disueltos en 50 \mug de una solución tampón salina que contiene 5% de etanol. El volumen del pie derecho se midió hasta el nivel del maleolo lateral mediante el desplazamiento de agua antes del tratamiento y 15 minutos después de la inyección del PAF o 30 minutos después de la inyección del ácido araquidónico. Para cada ratón se calculó el cambio del volumen de la pata. La Tabla 2 presenta la inhibición de la hinchazón de la pata inducida por el ácido araquidónico. Los valores obtenidos se miden como el aumento del volumen de la pata usando un pletismómetro. El grado de hinchazón se expresó como el porcentaje en los ratones tratados en comparación con la inhibición del edema de la pata en los testigos tratados con el vehículo (Emulphor:etanol:solución salina) (95% de significación por ANOVA, N = 5 ratones/grupo). Los animales testigos recibieron aceite de cacahuete (50 \mul). Los resultados demuestran claramente que ambos compuestos, HU310 y HU313 son potentes agentes anti-inflamatorios.

TABLA 2 Inhibición del edema de la pata inducido por ácido araquidónico^{a,b}

Dosis (mg/kg)	HU-310	HU-313
5	70,2	62,20
10	92,2	72,02
25	100,0	94,04

Hipertensión

Para evaluar la potencia de los compuestos de la presente invención como agentes antihipertensivos, se disolvió cada compuesto en una mezcla de etanol:Emulphor:solución salina (1.1:18) y se administró a ratas sin anestesiar, provistas de una cánula a través de la aorta (para la inyección) y otra cánula a través de la vena yugular (para las medidas de la presión arterial). La inyección de la solución salina o de la mezcla de disolución (etanol: Emulphor:solución salina) no mostró ningún efecto sobre la presión arterial media mientras que el compuesto HU-310 presentó un efecto significativo sobre la presión arterial. La Tabla 3 presenta el efecto de HU-310 en comparación con la anandamida (ANA) y el 2-Ara-Gl. Los siguientes datos indican que mientras que el cannabinoide endógeno 2-Ara-Gl indujo una hipotensión moderada de corta duración, el HU-310 indujo una disminución de la presión arterial significativamente más profunda y de más larga duración.

TABLA 3 Comparación de los efectos hipotensivos de ANA, 2-ARA-Gl, HU-310

Fármaco^{a}	Hipotensión máxima^{b}	Latencia del efecto	Tiempo de
	(mm Hg)	máximo (min)	recuperación (min)
ANA	15	2,0	7,0
2-Ara-Gl	34	7,2	13,0
HU-310	105	34,0	75,0
^{a} Dosis: 12 mg/kg
^{b} Los valores dados indican la diferencia entre la presión arterial media antes y después de la
administración del fármaco.

Unión de los compuestos de la invención a los receptores cannabinoides CB_{1} y CB_{2} Unión a CB_{1}

La unión de los compuestos activos al receptor CB_{1} se determinó según el procedimiento descrito por Devane et al., [Devane et al., J. Med. Chem. 35: 2065-2069 (1992b)], en cuanto a la preparación de la membrana sinaptosomial y al ensayo de unión al ligando. Según este método, la unión competitiva de los compuestos activos de la invención se determinó empleando [^{3}H]HU-243 que es la forma marcada de 5^{1}-(1,1-dimetilheptil)-7-hexahidrocannabinol descrito también por Devane et al., [Devane et al., (1992b) ibídem].

En principio, se homogenizaron 4 \mug de la membrana sinaptosomial en Tris-HCl 50 mM, MgCl_{2} 2 mM y EDTA 1 mM pH 7,4 para obtener la mezcla de unión que tiene una concentración final 60 pM, con la cual se determinó la Ki según el ensayo descrito por Devane et al., [Devane et al., (1992) ibídem]. El valor de Ki obtenido para HU-310 según este método fue 62,3 \pm 3,0 IC_{50}. Los valores de Ki se calcularon según la siguiente ecuación conocida: Ki-IC_{50}/(1+[L]/Kd), en la que IC_{50} es la concentración que reducirá la unión específica de un radioligando dado en un 50%; [L] es la concentración del radioligando usado en el ensayo y Kd es la constante de disociación para el radioligando (véase también la Fig. 3).

Unión a CB_{2}

La unión a los receptores CB_{2} de las células de riñón de mono verde africano (células COS) se determinó en primer lugar transfectando transitoriamente estas células con plásmidos adecuados que contienen una secuencia que codifica CB_{2} unida a un soporte (5 \mug por placa de 100 mm), usando el método de DEAE-dextrano [Avidor E. et al., J. Biol. Chem. 271: 21309-21315 (1996)]. Dos días más tarde, se lavaron las células con solución salina tamponada con fosfato (PBS), se rasparon, sedimentaron y conservaron a -80ºC, tras lo cual, el sedimento celular se homogenizó en Tris-HCl 50 mM, MgCl_{2} 5 mM y EDTA 2,5 mM pH 7,4. La mezcla que contiene el ligando se suplementó además con CaCl_{2} 10 mM para obtener la mezcla de unión, en la cual la concentración final del ligando radiomarcado [^{3}H]HU-243 fue 300 pM. La determinación de los valores de Ki se obtuvieron entonces como ha sido descrito por Rhee et al., [Rhee et al., J. Med. Chem. 40: 3228-3233 (1997)]. En consecuencia, el valor de Ki obtenido para HU-310 según este método fue 459,4 \pm 18,2 (Fig. 4).

La unión de 2-araquidonil-gliceril-éter a CB_{1} y CB_{2} se muestra en la Fig.3 y en la Fig. 4 respectivamente. Los resultados indican que HU-310 es un potente sustrato para los dos receptores cannabinoides CB_{1} y CB_{2}.

Claims

1. Un compuesto de la fórmula general:

(I)R^{1}-CH_{2}-O-CHR^{2}R^{3}

en la que

R^{1}-CH_{2}- representa un resto alquenilo derivado de un alcohol graso poliinsaturado de 16 a 28 átomos de carbono que contiene 2 a 6 dobles enlaces, en el que el primer doble enlace está situado en el C-3, C-6 o C-9 cuando se cuenta a partir del extremo libre de dicho resto alquenilo;

R^{2} representa un átomo de hidrógeno o un grupo alquilo C_{1}-C_{5} inferior; y

R^{3} representa un grupo alcoxialquilo;

o el grupo CHR^{2}R^{3} representa un grupo 2-glicerilo;

dichos grupos alquilo C_{1}-C_{5} y alcoxialquilo pueden estar, independientemente, sustituidos con uno o más grupos hidroxilo, grupos amino o grupos alquilamino sobre uno cualquiera de sus átomos de carbono, y cada uno de dichos grupos hidroxilo puede estar adicionalmente sustituido para formar un éster o puede estar convertido en un grupo fosfonato o alquil-sulfonato.

2. Un compuesto según la reivindicación 1, en el que dicho resto alquenilo se selecciona del grupo constituido por octadecatrienilo, eicosapentenilo, docosahexenilo, eicosatrienilo o eicosatetraenilo.

3. Un compuesto según la reivindicación 2, seleccionado del grupo constituido por 2-araquidonil-gliceril-éter, 2-dihomo-\gamma-linolenil-gliceril-éter y araquidonil-2-isopropoxietil-éter.

4. Un compuesto según la reivindicación 1, radiomarcado.

5. Un procedimiento para la preparación de un compuesto de la fórmula general (I):

(I)R^{1}-CH_{2}-O-CHR^{2}R^{3}

en la que

R^{1}-CH_{2}- representa un resto alquenilo derivado de un alcohol graso poliinsaturado de 16 a 28 átomos de carbono con 2 a 6 dobles enlaces, con el primer doble enlace en la posición C-3, C-6 o C-9 contando a partir del extremo libre de dicho resto alquenilo;

R^{3} representa un grupo alcoxialquilo;

o el grupo CHR^{2}R^{3} representa un grupo 2-glicerilo;

dichos grupos alquilo C_{1}-C_{5} y alcoxialquilo pueden estar, independientemente, sustituidos con uno o más grupos hidroxilo, grupos amino o grupos alquilamino sobre uno cualquiera de los átomos de carbono, y cada grupo hidroxilo puede estar adicionalmente sustituido para formar un éster o puede estar convertido en un grupo fosfonato o alquil-sulfonato,

cuyo procedimiento comprende las etapas de:

(a): hacer reaccionar un compuesto de la fórmula general (II):

(II)R^{1}-CH_{2}-OH

: en la que R^{1} es como se ha definido antes, con un haluro de alquilsulfonilo o con un haluro de arilsulfonilo;

(b): hacer reaccionar el producto obtenido en la etapa (a) o bien (i) con un alcohol de la fórmula general (III):

(III)R^{2}R^{3}CHOH

: en la que R^{2} y R^{3} son como se han definido antes, en presencia de una base;

: o bien (ii) con un alquiliden-glicerol o ariliden-glicerol que tiene al menos un grupo hidroxilo libre, en presencia de una base;

opcionalmente, cuando dicho producto de la etapa (a) se hace reaccionar en la etapa (b) con un resto de glicerol, el producto de dicha etapa (b) se hace reaccionar adicionalmente con un reactivo ácido para obtener el compuesto de la fórmula general (I).

6. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que dicho haluro de alquilsulfonilo es cloruro de metanosulfonilo.

7. Un procedimiento según las reivindicaciones 5 ó 6, en el que dicho haluro de arilsulfonilo es cloruro de para-toluenosulfonilo.

8. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que dicho alcohol es isoalcoxi-alcohol.

9. Un procedimiento según la reivindicación 8, en el que dicho alcohol es 2-isopropoxi-alcohol.

10. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que la reacción se lleva a cabo en presencia de KOH.

11. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que dicho ariliden-glicerol es cis-1,3-benciliden-glicerol.

12. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que dicho reactivo ácido es una mezcla de HCl y metanol.

13. Un procedimiento según la reivindicación 12, en el que la mezcla de HCl y metanol está en una proporción de 1:7.

14. Un procedimiento según la reivindicación 5, en el que dichas etapas de reacción se llevan a cabo a temperatura ambiente, bajo atmósfera de nitrógeno.

15. Una composición farmacéutica que comprende como ingrediente activo una cantidad terapéuticamente eficaz de al menos un compuesto de la fórmula general (I) como se ha definido en la reivindicación 1 o reivindicación 3.

16. Una composición según la reivindicación 15, en la que dicha composición comprende además excipientes, adyuvantes, aditivos, diluyentes y/o agentes conservantes, aceptables.

17. Una composición según las reivindicaciones 15 ó 16, en la que dicha composición es una composición anti-inflamatoria, antiasmática, analgésica, hipotensiva, antiemética o antiespasmódica, una composición para tratar y/o prevenir el glaucoma o la migraña, una composición para aliviar los síntomas de la esclerosis múltiple o una composición estimulante del estado de ánimo.

18. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 15-17, en la que dicho ingrediente activo se selecciona entre 2-araquidonil-gliceril-éter, 2-dihomo-\gamma-linolenil-gliceril-éter y araquidonil-2-isopropoxietil-éter.

19. Una composición según una cualquiera de las reivindicaciones 15-18, en una forma farmacéutica de dosis unitaria.

20. Una composición según la reivindicación 19, en la que la forma farmacéutica de dosis unitaria comprende de 1 mg a 100 mg del ingrediente activo.

21. El uso de un compuesto de la fórmula general (I) según la reivindicación 1, para la preparación de una composición farmacéutica.

22. Un compuesto de la fórmula general (I) según la reivindicación 1, para la fabricación de un medicamento para uso en diagnóstico, en el que dicho compuesto se marca con ^{3}H o ^{13}C.