EA025703B1 - Ферментный комплекс для получения пивоваренного затора - Google Patents
Ферментный комплекс для получения пивоваренного затора Download PDFInfo
- Publication number
- EA025703B1 EA025703B1 EA201171364A EA201171364A EA025703B1 EA 025703 B1 EA025703 B1 EA 025703B1 EA 201171364 A EA201171364 A EA 201171364A EA 201171364 A EA201171364 A EA 201171364A EA 025703 B1 EA025703 B1 EA 025703B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- enzyme
- beer
- enzyme complex
- activity
- genus
- Prior art date
Links
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 title claims abstract description 234
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 title claims abstract description 234
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 109
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 claims abstract description 53
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 claims abstract description 53
- 241000233866 Fungi Species 0.000 claims abstract description 19
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 claims description 230
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 claims description 130
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 82
- 235000013339 cereals Nutrition 0.000 claims description 59
- 244000005700 microbiome Species 0.000 claims description 45
- GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N N-[2-(1H-indol-3-yl)ethyl]-N-methylprop-2-en-1-amine Chemical compound CN(CCC1=CNC2=C1C=CC=C2)CC=C GXCLVBGFBYZDAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 41
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 26
- 108010059892 Cellulase Proteins 0.000 claims description 24
- 229940106157 cellulase Drugs 0.000 claims description 22
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 19
- 101710121765 Endo-1,4-beta-xylanase Proteins 0.000 claims description 17
- 102000004157 Hydrolases Human genes 0.000 claims description 14
- 108090000604 Hydrolases Proteins 0.000 claims description 14
- 108010008885 Cellulose 1,4-beta-Cellobiosidase Proteins 0.000 claims description 11
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 claims description 11
- 101710130006 Beta-glucanase Proteins 0.000 claims description 10
- 108010084185 Cellulases Proteins 0.000 claims description 10
- 102000005575 Cellulases Human genes 0.000 claims description 10
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims description 10
- 229920002134 Carboxymethyl cellulose Polymers 0.000 claims description 8
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- 239000001768 carboxy methyl cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 235000010948 carboxy methyl cellulose Nutrition 0.000 claims description 8
- 239000008112 carboxymethyl-cellulose Substances 0.000 claims description 8
- 229920002000 Xyloglucan Polymers 0.000 claims description 6
- 235000015041 whisky Nutrition 0.000 claims description 6
- 108010091371 endoglucanase 1 Proteins 0.000 claims description 5
- 108010091384 endoglucanase 2 Proteins 0.000 claims description 5
- 108010092450 endoglucanase Z Proteins 0.000 claims description 5
- 108010038658 exo-1,4-beta-D-xylosidase Proteins 0.000 claims description 5
- 238000012545 processing Methods 0.000 claims description 5
- 108010087427 Endo-1,3(4)-beta-Glucanase Proteins 0.000 claims description 4
- 239000002551 biofuel Substances 0.000 claims description 4
- 239000000446 fuel Substances 0.000 claims description 4
- 235000015203 fruit juice Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000021577 malt beverage Nutrition 0.000 claims description 3
- 235000014101 wine Nutrition 0.000 claims description 3
- 108010001817 Endo-1,4-beta Xylanases Proteins 0.000 claims description 2
- YERABYSOHUZTPQ-UHFFFAOYSA-P endo-1,4-beta-Xylanase Chemical compound C=1C=CC=CC=1C[N+](CC)(CC)CCCNC(C(C=1)=O)=CC(=O)C=1NCCC[N+](CC)(CC)CC1=CC=CC=C1 YERABYSOHUZTPQ-UHFFFAOYSA-P 0.000 claims description 2
- 229930182478 glucoside Natural products 0.000 claims 3
- 241000223259 Trichoderma Species 0.000 abstract 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 89
- 239000000047 product Substances 0.000 description 64
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 50
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 35
- 229920002498 Beta-glucan Polymers 0.000 description 31
- FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N (2s,3r,4s,5s,6r)-2-[(2r,4r,5r,6s)-4,5-dihydroxy-2-(hydroxymethyl)-6-[(2r,4r,5r,6s)-4,5,6-trihydroxy-2-(hydroxymethyl)oxan-3-yl]oxyoxan-3-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1[C@@H](CO)O[C@@H](OC2[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O FYGDTMLNYKFZSV-URKRLVJHSA-N 0.000 description 25
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 24
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 23
- 238000005360 mashing Methods 0.000 description 23
- 240000005979 Hordeum vulgare Species 0.000 description 22
- 235000007340 Hordeum vulgare Nutrition 0.000 description 22
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 21
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 21
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 18
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 17
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 17
- 239000000463 material Substances 0.000 description 16
- LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 3,5-dinitrosalicylic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC([N+]([O-])=O)=CC([N+]([O-])=O)=C1O LWFUFLREGJMOIZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 14
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 14
- 229920001221 xylan Polymers 0.000 description 14
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 13
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 13
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 12
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 12
- 229920001503 Glucan Polymers 0.000 description 11
- 150000004823 xylans Chemical class 0.000 description 11
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 10
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 10
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 10
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 10
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 10
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 108010032083 Glucan 1,4-beta-Glucosidase Proteins 0.000 description 9
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 9
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 9
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 9
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 9
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 9
- BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 4-nitrophenol Chemical compound OC1=CC=C([N+]([O-])=O)C=C1 BTJIUGUIPKRLHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 235000008694 Humulus lupulus Nutrition 0.000 description 7
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 7
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 7
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 7
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 7
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 7
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 7
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 7
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 7
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 description 7
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 7
- 229960003487 xylose Drugs 0.000 description 7
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 6
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 6
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 6
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 6
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 6
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 6
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 6
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 6
- 235000018185 Betula X alpestris Nutrition 0.000 description 5
- 235000018212 Betula X uliginosa Nutrition 0.000 description 5
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 5
- 235000014680 Saccharomyces cerevisiae Nutrition 0.000 description 5
- 230000002730 additional effect Effects 0.000 description 5
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 5
- 125000002791 glucosyl group Chemical group C1([C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O1)CO)* 0.000 description 5
- 229920001542 oligosaccharide Polymers 0.000 description 5
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 5
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 5
- 241000512259 Ascophyllum nodosum Species 0.000 description 4
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 240000006394 Sorghum bicolor Species 0.000 description 4
- 235000011684 Sorghum saccharatum Nutrition 0.000 description 4
- 239000012445 acidic reagent Substances 0.000 description 4
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 4
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 4
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 4
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 4
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 4
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 4
- 235000012907 honey Nutrition 0.000 description 4
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 4
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 4
- LJCNRYVRMXRIQR-UHFFFAOYSA-L potassium sodium tartrate Chemical compound [Na+].[K+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O LJCNRYVRMXRIQR-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 4
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 4
- 238000011160 research Methods 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 4
- 235000020357 syrup Nutrition 0.000 description 4
- 239000006188 syrup Substances 0.000 description 4
- 235000019640 taste Nutrition 0.000 description 4
- 229920002097 Lichenin Polymers 0.000 description 3
- 240000007594 Oryza sativa Species 0.000 description 3
- 235000007164 Oryza sativa Nutrition 0.000 description 3
- DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N Propylene glycol Chemical compound CC(O)CO DNIAPMSPPWPWGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 3
- 235000013334 alcoholic beverage Nutrition 0.000 description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 3
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 3
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 3
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000004464 cereal grain Substances 0.000 description 3
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 3
- 230000007071 enzymatic hydrolysis Effects 0.000 description 3
- 238000006047 enzymatic hydrolysis reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 3
- -1 for example Chemical compound 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 150000002482 oligosaccharides Chemical class 0.000 description 3
- 230000002335 preservative effect Effects 0.000 description 3
- 235000009566 rice Nutrition 0.000 description 3
- 238000010025 steaming Methods 0.000 description 3
- 235000007319 Avena orientalis Nutrition 0.000 description 2
- 244000075850 Avena orientalis Species 0.000 description 2
- 241000219310 Beta vulgaris subsp. vulgaris Species 0.000 description 2
- GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N D-Cellobiose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-CUHNMECISA-N 0.000 description 2
- 108010033128 Glucan Endo-1,3-beta-D-Glucosidase Proteins 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M Potassium chloride Chemical compound [Cl-].[K+] WCUXLLCKKVVCTQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 240000000111 Saccharum officinarum Species 0.000 description 2
- 235000007201 Saccharum officinarum Nutrition 0.000 description 2
- 241000209056 Secale Species 0.000 description 2
- 235000007238 Secale cereale Nutrition 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 2
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 2
- 244000062793 Sorghum vulgare Species 0.000 description 2
- 235000021536 Sugar beet Nutrition 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001476 alcoholic effect Effects 0.000 description 2
- LUEWUZLMQUOBSB-ZLBHSGTGSA-N alpha-maltotetraose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O[C@@H]2[C@H](O[C@H](O[C@@H]3[C@H](O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]3O)CO)[C@H](O)[C@H]2O)CO)[C@H](O)[C@H]1O LUEWUZLMQUOBSB-ZLBHSGTGSA-N 0.000 description 2
- 229940040526 anhydrous sodium acetate Drugs 0.000 description 2
- 235000013361 beverage Nutrition 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 238000013124 brewing process Methods 0.000 description 2
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 2
- 235000008504 concentrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 230000001461 cytolytic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 2
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 description 2
- 239000012467 final product Substances 0.000 description 2
- 238000005187 foaming Methods 0.000 description 2
- LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N methylparaben Chemical group COC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 LXCFILQKKLGQFO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000019713 millet Nutrition 0.000 description 2
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 2
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 150000004804 polysaccharides Chemical class 0.000 description 2
- LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L potassium sodium L-tartrate Chemical compound [Na+].[K+].[O-]C(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O LJCNRYVRMXRIQR-OLXYHTOASA-L 0.000 description 2
- 229940074439 potassium sodium tartrate Drugs 0.000 description 2
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 235000011006 sodium potassium tartrate Nutrition 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 230000009897 systematic effect Effects 0.000 description 2
- DBTMGCOVALSLOR-DEVYUCJPSA-N (2s,3r,4s,5r,6r)-4-[(2s,3r,4s,5r,6r)-3,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)-4-[(2s,3r,4s,5s,6r)-3,4,5-trihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-2-yl]oxyoxan-2-yl]oxy-6-(hydroxymethyl)oxane-2,3,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](CO)O[C@H](O)[C@@H]2O)O)O[C@H](CO)[C@H]1O DBTMGCOVALSLOR-DEVYUCJPSA-N 0.000 description 1
- WSWCOQWTEOXDQX-MQQKCMAXSA-M (E,E)-sorbate Chemical compound C\C=C\C=C\C([O-])=O WSWCOQWTEOXDQX-MQQKCMAXSA-M 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- 101710199313 Alpha-L-arabinofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 108010065511 Amylases Proteins 0.000 description 1
- 102000013142 Amylases Human genes 0.000 description 1
- 229920000189 Arabinogalactan Polymers 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 101710204694 Beta-xylosidase Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 235000008733 Citrus aurantifolia Nutrition 0.000 description 1
- 235000005979 Citrus limon Nutrition 0.000 description 1
- 244000131522 Citrus pyriformis Species 0.000 description 1
- 229920002261 Corn starch Polymers 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- 101100110026 Danio rerio ascl1b gene Proteins 0.000 description 1
- 229920001353 Dextrin Polymers 0.000 description 1
- 239000004375 Dextrin Substances 0.000 description 1
- 101100256850 Drosophila melanogaster EndoA gene Proteins 0.000 description 1
- 101710166469 Endoglucanase Proteins 0.000 description 1
- 101710156496 Endoglucanase A Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 241001466453 Laminaria Species 0.000 description 1
- 229920001543 Laminarin Polymers 0.000 description 1
- 239000005717 Laminarin Substances 0.000 description 1
- 240000003183 Manihot esculenta Species 0.000 description 1
- 235000016735 Manihot esculenta subsp esculenta Nutrition 0.000 description 1
- 101100385237 Mus musculus Creg1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101710148480 Putative beta-xylosidase Proteins 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000011941 Tilia x europaea Nutrition 0.000 description 1
- 101710158370 Xylan 1,4-beta-xylosidase Proteins 0.000 description 1
- 235000016383 Zea mays subsp huehuetenangensis Nutrition 0.000 description 1
- UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N [5-[3,5-dihydroxy-2-(1,3,4-trihydroxy-5-oxopentan-2-yl)oxyoxan-4-yl]oxy-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl (e)-3-(4-hydroxyphenyl)prop-2-enoate Chemical compound OC1C(OC(CO)C(O)C(O)C=O)OCC(O)C1OC1C(O)C(O)C(COC(=O)\C=C\C=2C=CC(O)=CC=2)O1 UGXQOOQUZRUVSS-ZZXKWVIFSA-N 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 229930094280 aldehydo-D-xylose Natural products 0.000 description 1
- 235000015107 ale Nutrition 0.000 description 1
- 108010084650 alpha-N-arabinofuranosidase Proteins 0.000 description 1
- 235000019418 amylase Nutrition 0.000 description 1
- 229940025131 amylases Drugs 0.000 description 1
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 1
- 235000019312 arabinogalactan Nutrition 0.000 description 1
- 229920000617 arabinoxylan Polymers 0.000 description 1
- 238000004167 beer analysis Methods 0.000 description 1
- 229940050390 benzoate Drugs 0.000 description 1
- WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N benzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC=CC=C1 WPYMKLBDIGXBTP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021028 berry Nutrition 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- 235000019636 bitter flavor Nutrition 0.000 description 1
- 230000000903 blocking effect Effects 0.000 description 1
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 238000006555 catalytic reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 235000020971 citrus fruits Nutrition 0.000 description 1
- 235000016213 coffee Nutrition 0.000 description 1
- 235000013353 coffee beverage Nutrition 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 235000009508 confectionery Nutrition 0.000 description 1
- 239000000470 constituent Substances 0.000 description 1
- 238000001816 cooling Methods 0.000 description 1
- 239000008120 corn starch Substances 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000019425 dextrin Nutrition 0.000 description 1
- 229940079919 digestives enzyme preparation Drugs 0.000 description 1
- 238000004821 distillation Methods 0.000 description 1
- 235000013399 edible fruits Nutrition 0.000 description 1
- 238000005265 energy consumption Methods 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 1
- 238000011194 good manufacturing practice Methods 0.000 description 1
- 230000005484 gravity Effects 0.000 description 1
- 229920001519 homopolymer Polymers 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 229910017053 inorganic salt Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960004903 invert sugar Drugs 0.000 description 1
- 235000021440 light beer Nutrition 0.000 description 1
- 239000004571 lime Substances 0.000 description 1
- 235000009973 maize Nutrition 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 1
- 239000004292 methyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010270 methyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960002216 methylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000001471 micro-filtration Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000020007 pale lager Nutrition 0.000 description 1
- 235000020004 porter Nutrition 0.000 description 1
- 230000008092 positive effect Effects 0.000 description 1
- 239000001103 potassium chloride Substances 0.000 description 1
- 235000011164 potassium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 1
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 1
- 230000001376 precipitating effect Effects 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000005070 ripening Effects 0.000 description 1
- 230000000630 rising effect Effects 0.000 description 1
- 235000013533 rum Nutrition 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 229920006395 saturated elastomer Polymers 0.000 description 1
- 235000020374 simple syrup Nutrition 0.000 description 1
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 1
- WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M sodium benzoate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)C1=CC=CC=C1 WXMKPNITSTVMEF-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000004299 sodium benzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010234 sodium benzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229940075554 sorbate Drugs 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 230000006641 stabilisation Effects 0.000 description 1
- 238000011105 stabilization Methods 0.000 description 1
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 239000010902 straw Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 235000019605 sweet taste sensations Nutrition 0.000 description 1
- 235000013529 tequila Nutrition 0.000 description 1
- 239000012085 test solution Substances 0.000 description 1
- 235000013522 vodka Nutrition 0.000 description 1
- 229940100445 wheat starch Drugs 0.000 description 1
- 210000005253 yeast cell Anatomy 0.000 description 1
- 150000008495 β-glucosides Chemical class 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/2437—Cellulases (3.2.1.4; 3.2.1.74; 3.2.1.91; 3.2.1.150)
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A23—FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
- A23L—FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
- A23L2/00—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof
- A23L2/02—Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof containing fruit or vegetable juices
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
- A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C5/00—Other raw materials for the preparation of beer
- C12C5/004—Enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C5/00—Other raw materials for the preparation of beer
- C12C5/004—Enzymes
- C12C5/006—Beta-glucanase or functionally equivalent enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12C—BEER; PREPARATION OF BEER BY FERMENTATION; PREPARATION OF MALT FOR MAKING BEER; PREPARATION OF HOPS FOR MAKING BEER
- C12C7/00—Preparation of wort
- C12C7/04—Preparation or treatment of the mash
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12H—PASTEURISATION, STERILISATION, PRESERVATION, PURIFICATION, CLARIFICATION OR AGEING OF ALCOHOLIC BEVERAGES; METHODS FOR ALTERING THE ALCOHOL CONTENT OF FERMENTED SOLUTIONS OR ALCOHOLIC BEVERAGES
- C12H6/00—Methods for increasing the alcohol content of fermented solutions or alcoholic beverages
- C12H6/02—Methods for increasing the alcohol content of fermented solutions or alcoholic beverages by distillation
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/14—Fungi; Culture media therefor
- C12N1/145—Fungal isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2405—Glucanases
- C12N9/2434—Glucanases acting on beta-1,4-glucosidic bonds
- C12N9/244—Endo-1,3(4)-beta-glucanase (3.2.1.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/14—Hydrolases (3)
- C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
- C12N9/2402—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2) hydrolysing O- and S- glycosyl compounds (3.2.1)
- C12N9/2477—Hemicellulases not provided in a preceding group
- C12N9/248—Xylanases
- C12N9/2482—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/02—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group
- C12P7/04—Preparation of oxygen-containing organic compounds containing a hydroxy group acyclic
- C12P7/06—Ethanol, i.e. non-beverage
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01004—Cellulase (3.2.1.4), i.e. endo-1,4-beta-glucanase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01006—Endo-1,3(4)-beta-glucanase (3.2.1.6)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Y—ENZYMES
- C12Y302/00—Hydrolases acting on glycosyl compounds, i.e. glycosylases (3.2)
- C12Y302/01—Glycosidases, i.e. enzymes hydrolysing O- and S-glycosyl compounds (3.2.1)
- C12Y302/01008—Endo-1,4-beta-xylanase (3.2.1.8)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/80—Penicillium
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/645—Fungi ; Processes using fungi
- C12R2001/885—Trichoderma
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Botany (AREA)
- Mycology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Nutrition Science (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Transplantation (AREA)
- Enzymes And Modification Thereof (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к улучшенному ферментному комплексу, обладающему совокупностью видов активности продукта экспрессии, полученного при ферментации микроорганизмов рода Trichoderma, в сочетании с одним или несколькими ферментами другого штамма гриба.
Description
Изобретение относится к улучшенному ферментному комплексу, обладающему совокупностью видов ферментативной активности продукта экспрессии, полученного при ферментации микроорганизмов рода ТпсНойсгта. в сочетании с одним или несколькими ферментами из других видов штамма гриба.
Предпосылки изобретения
Использование ферментов в производстве пива хорошо известно. Введение ферментов на стадии затирания для улучшения фильтруемости затора и увеличения выхода экстракта описано в АО 97/42302.
АО 2005118769 и АО 2005059084 относятся к стадии затирания и фильтрации в способе производства пива и к ферментным композициям для использования в таком способе.
АО 1999057325 относится к штаммам РешсШшт ГитсиШкит, к новым ферментным смесям, полученным из них, и к последовательности их нуклеиновой кислоты.
Однако, существует необходимость в улучшенных ферментных комплексах, полезных при производстве пищевых продуктов, например, на стадиях затирания, запаривания и фильтрации при производстве алкогольного напитка, такого как пиво или виски.
Цель изобретения
Целью вариантов осуществления по изобретению является предоставление улучшенного ферментного комплекса, обеспечивающего улучшенные способы производства при получении, например, пищевых продуктов, например, на стадиях затирания, запаривания и/или фильтрации при производстве алкогольного напитка, такого как пиво или виски, или биотоплива.
Краткое изложение сущности изобретения
Автор(ы) настоящего изобретения обнаружили, что при комбинации продукта экспрессии, полученного при ферментации видов микроорганизмов из рода ТпсНойегта и конкретных ферментов из любого другого вида грибов, получают улучшенные свойства ферментного комплекса.
Таким образом, в первом аспекте настоящее изобретение относится к ферментному комплексу, полученному при комбинации:
a) продукта экспрессии, полученного при ферментации видов микроорганизмов из рода ТпсНойегта; и
b) одного или нескольких ферментов из любого другого вида микроорганизмов из царства грибов, выбранного из ксиланазы (ЕС 3.2.1.8), целлюлазы (ЕС 3.2.1.4) и β-глюканазы (ЕС 3.2.1.6); и где по меньшей мере приблизительно 61% активности в-1,4-эндоглюкангидролазы, как измерено способом Анализ 1, как описано в настоящем описании, получают при ферментации микроорганизмов рода ТпсЬойегта.
Следует понимать, что любой другой вид из царства грибов относится к видам, отличающимся от видов из рода ТпсНойегта в а).
Во втором аспекте настоящее изобретение относится к ферментному комплексу, полученному при комбинации:
а) по меньшей мере приблизительно 61% продукта экспрессии, полученного при ферментации микроорганизмов рода ТпсНойегта; и
Ь) менее чем приблизительно 39% продукта экспрессии, полученного при ферментации другого гриба из рода РешсШшт; где процентные соотношения основаны на активности в-1,4-эндоглюкангидролазы, как измерено способом Анализ 1, как описано в настоящем описании.
В третьем аспекте настоящее изобретение относится к способу получения ферментного комплекса, где способ включает в себя стадии:
a) ферментации микроорганизмов рода ТпсНойегта в среде для получения ферментационного бульона;
b) ферментации микроорганизмов рода РешсШшт в среде для получения ферментационного бульона; и
c) выделения и комбинации каждого ферментного комплекса, полученного на стадии а) и Ь) в форме бесклеточного бульона при указанных ферментациях, для получения ферментного комплекса, где по меньшей мере приблизительно 61% активности в-1,4-эндоглюкангидролазы, как измерено способом Анализ 1, как описано в настоящем описании, получают при ферментации микроорганизмов рода ТпсЬойегта.
В следующем аспекте настоящее изобретение относится к использованию ферментного комплекса по изобретению в способе производства пивоваренного затора, например производства солодового напитка, такого как пиво, такого как солодовое пиво, и/или производства виски, и/или производства биотоплива.
В следующем аспекте настоящее изобретение относится к использованию ферментного комплекса по изобретению в производстве фруктового сока, вина, переработке зерна, производстве топливного спирта и питьевого спирта.
В следующем аспекте настоящее изобретение относится к ферментному комплексу, полученному при комбинации:
- 1 025703
a) продукта экспрессии, полученного при ферментации видов микроорганизмов из рода Тпсйобегта; и
b) одного или нескольких ферментов из любого другого вида из царства грибов, выбранных из семейства ксиланазы 11 (ЕС 3.2.1.8), целлюлазы (ЕС 3.2.1.4) и β-глюканазы (ЕС 3.2.1.6); и где по меньшей мере приблизительно 61% активности в-1,4-эндоглюкангидролазы, как измерено способом Анализ 1, как описано в настоящем описании, получают при ферментации микроорганизмов рода Тпсйобегта.
Краткое описание чертежей
Фиг. 1. - первое исследование затора в лабораторном масштабе, значения β-глюкана и объема фильтрата сусла.
Фиг. 2. - второе исследование затора в лабораторном масштабе - значения объемов фильтрата, остаточного β-глюкана и вязкости сусла (при 12 сП (МПа-с)).
Фиг. 3. - данные пилотного исследования фильтрации пивного сусла: общее время фильтрации пивного сусла, средняя скорость потока и общее нарастание давления. А - отрицательный контроль, контроль без фермента; В - ЬАМГЛЕХ® §црег при 0,20 кг/т; С - Тйе ЬАМГЛЕХ® ХС (ЬАМГЛЕХ® §црег 1,5+50% дополнительной активности Т. геехе!) при 0,133 кг/т.
Подробное описание изобретения
Пиво традиционно обозначают как алкогольный напиток, полученный из солода, например солода, полученного из ячменя, и необязательно, добавок, таких как зерно хлебных злаков, и с добавлением хмеля. В термин пиво включено любое ферментированное сусло, полученное посредством пивоварения и брожения содержащего крахмал материала, в основном полученного из зерна хлебных злаков, такого как осоложенный ячмень. Можно использовать также пшеницу, маис и рис.
Как применяют в настоящем документе, термин солодовый напиток включает в себя такие пенообразующие ферментированные солодовые напитки, как полностью осоложенное пиво, эль, сухое пиво, безалкогольное пиво, легкое пиво, пиво с низким содержанием алкоголя, низкокалорийное пиво, портер, крепкое темное пиво, стаут, солодовый раствор, безалкогольный солодовый раствор и т. п. Термин солодовые напитки включает в себя также непенящееся пиво и альтернативные солодовые напитки, такие как солодовые напитки с добавлением фруктов, например с добавлением цитрусов, например солодовые напитки с добавлением лимона, апельсина, лайма или ягод, солодовые напитки с добавлением алкогольных напитков, например солодовый раствор с добавлением водки, рома или текилы, или солодовые напитки с добавлением кофе, такие как солодовый раствор с добавлением кофеина и т. п.
Пиво можно получать из различных зерен, по существу, одинаковым способом. Все крахмалы зерна представляют собой гомополимеры глюкозы, в которых остатки глюкозы соединены либо альфа-1,4-, либо альфа-1,6-связями, с преобладанием первых.
Способ получения ферментированных солодовых напитков обычно обозначают пивоварением. Принципиальным сырьем, используемым при производстве этих напитков, являются вода, хмель и солод. Кроме того, добавки, такие как обычная кукурузная крупа, очищенная кукурузная крупа, измельченные пивные дрожжи, рис, сорго, очищенный кукурузный крахмал, ячмень, ячменный крахмал, лущеный ячмень, пшеница, пшеничный крахмал, обжаренные злаки, зерновые хлопья, рожь, овес, картофель, тапиока и сиропы, такие как кукурузный сироп, сироп из сахарного тростника, инвертный сахарный сироп, сиропы из ячменя и/или пшеницы и т. п., можно использовать в качестве источника крахмала. Крахмал в конечном итоге превращается в декстрины и сбраживаемые сахара.
По ряду причин солод, который в основном получают из избранных сортов ячменя, оказывает наибольший эффект на общий характер и качество пива. Во-первых, солод является первичным вкусовым веществом пива. Во-вторых, солод предоставляет основную часть сбраживаемого сахара. В-третьих, солод предоставляет белки, вносящие вклад в характер тела и пены пива. В-четвертых, солод обеспечивает необходимую ферментативную активность во время затирания.
Хмель также вносит значительный вклад в качество пива, включая вкус. В частности, хмель (или составляющие хмеля) добавляют желательные придающие горький привкус вещества к пиву. Кроме того, хмель действует как преципитирующие белок средства, предоставляя средства-консерванты и облегчая образование и стабилизацию пены.
Способ производства пива хорошо известен в данной области, но кратко, он включает в себя пять стадий: а) затирания и/или дополнительного запаривания, Ь) отделения и экстракции сусла, с) кипячения сусла и добавления хмеля в сусло, б) охлаждения, брожения и хранения и е) созревания, переработки и упаковки.
Как правило, на первой стадии размолотый или раздробленный солод смешивают с водой и поддерживают в течение некоторого периода времени при контролируемых температурах, чтобы позволить ферментам, присутствующим в солоде, превращать крахмал, присутствующий в солоде, в сбраживаемые сахара.
На второй стадии затор переносят в фильтрационный чан или фильтр для отделения затора, где жидкость отделяют от остатков зерна. Эту сладкую жидкость называют сусло, и оставшийся осадок зерен называют пивная дробина. Затор, как правило, подвергают экстракции, которая включает в себя
- 2 025703 добавление воды к затору для отделения оставшегося растворимого экстракта от пивной дробины.
На третьей стадии сусло интенсивно кипятят. Это стерилизует сусло и способствует развитию окраски, вкуса и запаха. Хмель добавляют в той же самой точке во время кипячения.
На четвертой стадии сусло охлаждают и переносят в ферментер, который содержит дрожжи, или в который добавляют дрожжи. Дрожжи превращают сахара посредством брожения в спирт и газ диоксид углерода; по окончании брожения ферментер охлаждают или ферментер можно охлаждать для остановки брожения. Дрожжи выпадают в осадок хлопьями, и их удаляют.
На последней стадии пиво охлаждают и сохраняют в течение периода времени, в ходе которого пиво осветляется и развивается его вкус, и любой материал, который может повредить внешнему виду, вкусу и сроку хранения пива, осаждается. Перед упаковкой пиво насыщают углекислым газом и, необязательно, фильтруют и пастеризуют.
После брожения получают напиток, который обычно содержит от приблизительно 2 до приблизительно 10 мас.% спирта. Несбраживаемые углеводы не подвергаются превращению во время брожения и составляют большинство растворенных твердых веществ в конечном пиве.
Этот остаток остается из-за неспособности амилаз солода гидролизовать альфа-1,6-связи крахмала. Несбраживаемые углеводы вносят приблизительно 50 калорий на 12 унций (0,3549 л) пива.
В последнее время происходила широко распространенная популяризация полученных способом пивоварения напитков, называемых легкими видами пива, видами пива с уменьшенным содержанием калорий или низкокалорийными видами пива, в частности, на рынке США. Как определяют в США, эти виды пива содержат на 30% меньше калорий, чем нормальное пиво производителя.
Дополнительную информацию по общепринятым способам пивоварения, так же как определения для терминов, используемых в области технологии пивоварения, для использования по настоящему изобретению, можно найти в Тесйпо1оду Вгеушд аиб МаШпд ^ойдапд Кип/е оИ 1Нс Кекеагсй аиб ТеасНид 1и8Ши1е оИ Вгеушд, Вегйп (УЪВ), 2пб геуйеб Ебйюп 1999, ΙδΒΝ 3-921690-39-0 или 3гб ебйюп (2004): ΙδΒΝ 3-921690-49-8.
Определения.
Термин ферментный комплекс, как применяют в настоящем документе, обозначает в настоящем контексте, по существу, бесклеточную композицию, содержащую несколько ферментов, обладающих различной ферментативной активностью и/или классифицированных под различными номерами Комиссией по ферментам (ЕС номерами). Когда ферментный комплекс получен при ферментации, он представляет собой, по существу, бесклеточный ферментационный бульон, необязательно, концентрированный ферментационный бульон, который включен в конечный продукт. Следует понимать, что термин ферментный комплекс включает в себя также композицию, содержащую несколько ферментов, полученных посредством двух или более отдельных процессов ферментации, в которых также могут участвовать различные микроорганизмы. В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс представляет собой совместимый с пищевыми продуктами ферментный комплекс, что означает, что его можно использовать для получения пищевых продуктов.
В некоторых аспектах изобретения ферментный комплекс по изобретению обладает побочными видами активности, необходимыми для деградации очень сложных соединений, например в заторе в процессе пивоварения. Термин побочная активность относится в настоящем контексте к видам активности фермента по отношению к другим субстратам, не являющимся его главным субстратом, или он относится к другим видам активности, которыми может обладать ферментный комплекс, отличным от его главной активности.
В одном аспекте изобретения ферментный комплекс по изобретению обладает по меньшей мере 5 различными видами побочной активности.
В одном аспекте изобретения ферментный комплекс по изобретению обладает по меньшей мере 10 различными видами побочной активности.
В одном аспекте изобретения ферментный комплекс по изобретению обладает по меньшей мере 15 различными видами побочной активности.
В одном аспекте изобретения ферментный комплекс по изобретению обладает по меньшей мере 20 различными видами побочной активности.
Ксиланазы классифицируют в ЕС 3.2.1.8, ЕС 3.2.1.32, ЕС 3.2.1.136 и ЕС 3.2.1.156.; активность можно измерять, например, как описано в Анализе 2.
Эндо-1,4-в-ксиланазу классифицируют как ЕС 3.2.1.8. Фермент вызывает эндогидролиз 1,4-β-Όксилозидиновых связей в ксиланах.
Термин ксиланаза семейства 11, как применяют в настоящем документе, относится к эндо-1,4-вксиланазе, классифицируемой как ЕС 3.2.1.8, которая вызывает эндогидролиз 1,4-в-Э-ксилозидиновых связей в ксиланах и которую классифицируют как ксиланазу семейства 11 согласно В. НепгйхаО А с1а881йсабоп оИ д1усо§у1 йубго1а8е8 Ьакеб оп атшо ашб хесщепсе ЧтбапПех. Вюсйет. 1. 280 (1991), рр. 309-316.
В одном аспекте ферментный комплекс по изобретению обладает активностью эндо-1,4-вксиланазы, как измерено в Анализе 2, как описано ниже под заголовком Анализы.
- 3 025703
Анализ 2 можно проводить при рН 3,5 или рН 5 и 50°С с использованием ксилана в качестве субстрата, или его можно проводить при различных значениях рН и температуры для дополнительной характеризации и спецификации ферментов. Активность фермента рассчитывают по увеличению оптической плотности, вызванному ксилозой, при 540 нм на единицу времени.
Одну единицу активности ксиланазы определяют в настоящем документе как количество фермента (нормализованное по общему объему анализируемой смеси), дающее увеличение ДООО540нм-мин-1 В условиях Анализа 2 (рН 3,5 и 50°С).
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс по изобретению обладает активностью ксиланазы по меньшей мере приблизительно 5000, например, по меньшей мере приблизительно 6000, например, по меньшей мере приблизительно 7000, например, по меньшей мере приблизительно 8000, например, по меньшей мере приблизительно 8500 ед./г, как измерено в Анализе 2.
Ферментный комплекс по изобретению обладает целлюлолитической активностью. Систематическим наименованием целлюлазы является 4-(1,3;1,4)-в-О-глюкан-4-глюканогидролаза, и целлюлолитические ферменты или целлюлазы классифицируют в ЕС 3.2.1.4. Целлюлаза осуществляет эндогидролиз (1^4)-3-Э-глюкозидных связей, например, в целлюлозе, лихенине и β-Ό-глюканах злаков, и может также гидролизовать 1,4-связи в β-Ό-глюканах, содержащих также 1,3-связи. Целлюлаза имеет также другие названия, такие как эндо-1, 4-в-О-глюканаза, в-1,4-глюканаза, в-1,4-эндоглюкангидролаза, целлюлаза А, целлюлозин АР, эндоглюканаза Ό, щелочная целлюлаза, целлюлаза А3, целлюдекстриназа, 9,5 целлюлаза, авицелаза, панцеллаза 88 и 1,4-(1,3;1,4)-в-Э-глюкан-4-глюканогидролаза.
В одном аспекте изобретения активность целлюлазы ферментного комплекса по изобретению измеряют в Анализе 1, как описано ниже под заголовком Анализы.
В следующих аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью β-глюканазы, определяемой, как описано в Анализе 7.
Стандартный анализ проводят при рН 5,0, и его можно проводить при различных значениях рН для дополнительной характеризации и спецификации ферментов.
Одну единицу активности эндо-1,3(4)-в-глюканазы определяют как количество фермента, образующее 1 мкмоль глюкозных эквивалентов в минуту в условиях анализа (рН 5,0 (или как указано) и 50°С).
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс по изобретению обладает активностью β-глюканазы по меньшей мере приблизительно 10000, например, по меньшей мере приблизительно 12000, например, по меньшей мере приблизительно 14000, например, по меньшей мере приблизительно 15000, например, по меньшей мере приблизительно 18000 ед./г, как измерено в Анализе 7.
β-глюканаза или бета-глюканаза, как применяют в настоящем документе, относится к эндо1,3(4)-бета-глюканазе ЕС 3.2.1.6. Катализирует эндогидролиз (1^3)- или (1^4)-связей в бета-Όглюканах, когда остаток глюкозы, восстанавливающая группа которого вовлечена в связь, подлежащую гидролизу, сам является замещенным в С-3.
В следующих аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью ламинариназы, определенной, как описано в Анализе 3.
Ламинариназа может представлять собой эндо-1,3(4)-бета-глюканазу, классифицированную в Е.С. 3.2.1.6, или глюкан-эндо-1,3-бета-О-глюкозидазу, классифицированную в Е.С. 3.2.1.39. Эндо-1,3(4)-бетаглюканаза с альтернативными наименованиями ламинариназа, эндо-1,3-бета-глюканаза, эндо-1,4-бетаглюканаза классифицирована в Е.С. 3.2.1.6. Субстраты включают в себя ламинарии, лихенин и Όглюканы злаков, и фермент катализирует эндогидролиз (1^3)- или (1^4)-связей в бета-О-глюканах, когда остаток глюкозы, восстанавливающая группа которого вовлечена в связь, подлежащую гидролизу, сам является замещенным в С-3. Глюкан-эндо-1,3-бета-О-глюкозидаза с альтернативными наименованиями (1^3)-бета-глюкан-эндогидролаза, эндо-1,3-бета-глюканаза и ламинариназа классифицирована в Е.С. 3.2.1.39 и гидролизует (1^3)-бета-О-глюкозидные связи в (1^3)-бета-О-глюканах, например, в таких субстратах, как ламинарии, парамилон и пачиман.
В некоторых аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью арабинаназы. Арабинаназу классифицируют как ЕС 3.2.1.99. Системным наименованием является 5-а-Ь-арабинан-5-аЬ-арабинаногидролаза, но она имеет несколько других наименований, таких как арабинан-эндо-1,5-а-Ьарабинозидаза и эндо-1,5-а-Ь-арабинаназа, эндо-а-1,5-арабаназа, эндо-арабаназа, 1,5-а-Ь-арабинан и 1,5α-Ь-арабинаногидролаза. Арабиназа осуществляет эндогидролиз (1^5)-а-арабинофуранозидных связей в (1^5)-арабинанах. Арабинаназа также действует на арабинан.
В одном аспекте изобретения активность арабиназы ферментного комплекса по изобретению измеряют в Анализе 4, как описано ниже под заголовком Анализы. Анализ можно проводить при рН 3,5 и 50°С с использованием арабинана сахарной свеклы в качестве субстрата, и его можно проводить при различных значениях рН и температуры для дополнительной характеризации и спецификации ферментов. Активность фермента рассчитывают по увеличению оптической плотности при 540 нм в единицу времени.
- 4 025703
Одну единицу активности арабиназы определяют как количество фермента (нормализованное по общему анализируемому объему), дающее увеличение ΔΘΌ540 нм-мин-1 в условиях анализа (рН 3,5 и 50°С).
В некоторых аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью бета-Эглюкозидглюкогидролазы. Бета-О-глюкозидглюкогидролаза относится к ферментам Е.С. 3.2.1.21.
В некоторых аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью β-ксилозидазы. β-ксилозидаза или ксилан-1,4-бета-ксилозидаза относится к ферментам Е.С. 3.2.1.37. β-ксилозидаза катализирует гидролиз (1^4)-бета-Э-ксиланов с удалением последовательных остатков Ό-ксилозы с невосстанавливающих концов.
В одном аспекте изобретения активность целлобиогидролазы ферментного комплекса по изобретению измеряют в Анализе 6, как описано ниже под заголовком Анализы. Стандартный анализ проводят при рН 5,0, и его можно проводить при различных значениях рН для дополнительной характеризации и спецификации ферментов.
Одну единицу активности целлобиогидролазы определяют как количество фермента, образующее 1 мкмоль п-нитрофенола из п-нитрофенил-в-Э-целлобиопиранозида в минуту в условиях анализа (рН 5,0 (или как указано) и 50°С).
В некоторых аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью целлобиогидролазы. Целлобиогидролаза или 1,4-бета-целлобиозидаза целлюлозы относится к ферментам ЕС 3.2.1.91. 1,4-бета-целлобиозидаза целлюлозы катализирует гидролиз 1,4-бета-Э-глюкозидных связей в целлюлозе и целлотетраозе, высвобождая целлобиозу с невосстанавливающих концов цепей.
В одном аспекте изобретения активность арабинофуранозидазы ферментного комплекса по изобретению измеряют в Анализе 5, как описано ниже под заголовком Анализы. Стандартный анализ можно проводить при рН 5,0 и 50°С, и его можно проводить при различных значениях рН и температуры для дополнительной характеризации и спецификации ферментов.
Одну единицу активности α-Ν-арабинофуранозидазы определяют как количество фермента, образующее 1 мкмоль п-нитрофенола из п-нитрофенил-а-Ь-арабинофуранозида в минуту в условиях анализа (рН 5,0 и 50°С (или как указано)).
В некоторых аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью α-Νарабинофуранозидазы. α-Ν-арабинофуранозидаза или альфа-Л-арабинофуранозидаза относится к ферментам ЕС 3.2.1.55. α-Ν-арабинофуранозидаза катализирует гидролиз концевых невосстанавливающих остатков альфа-Ь-арабинофуранозида в альфа-Ь-арабинозидах.
В некоторых аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью глюкан-1,4бета-глюкозидазы. Глюкан-1,4-бета-глюкозидаза или глюкан-1,4-бета-глюкозидаза относится к ферментам Е.С. 3.2.1.74. Глюкан-1,4-бета-глюкозидаза катализирует гидролиз (1^4)-связей в (1^4)-бета-Эглюканах с удалением последовательных единиц глюкозы.
В некоторых аспектах ферментный комплекс по изобретению обладает активностью, специфической для ксилоглюкана экзо-бета-1,4-глюканазы. Специфическая для ксилоглюкана экзо-бета-1,4глюканаза относится к ферментам Е.С. 3.2.1.155. Специфическая для ксилоглюкана экзо-бета-1,4глюканаза катализирует экзогидролиз (1^-4)-бета-Э-глюкозидных связей в ксилоглюкане.
Ферментный комплекс в производственном аспекте можно использовать в способе, включающем в себя уменьшение вязкости водного раствора, содержащего гидролизат крахмала.
Ферментный комплекс можно также использовать в способе, включающем в себя фильтрацию водного раствора, содержащего гидролизат крахмала. В некоторых вариантах осуществления водный раствор, содержащий гидролизат крахмала, представляет собой затор для производства пива, и в других вариантах осуществления водный раствор, содержащий гидролизат крахмала, представляет собой композицию для пищевого продукта.
Альтернативно, ферментный комплекс по настоящему изобретению можно использовать для производства фруктового сока, вина, переработки зерна, производства топливного спирта, такого как биоэтанол, и питьевого спирта.
В некоторых вариантах осуществления биоэтанол производят из сельскохозяйственного исходного сырья, такого как сахарный тростник, картофель, кукуруза, пшеница, сорго и т. д., или из целлюлозного материала, такого как кукурузная солома, просо прутьевидное или другой растительный материал. В обоих случаях сбраживаемые сахара экстрагируют из сырья и сбраживают посредством микроорганизмов до спирта, который подвергают дистилляции и который можно использовать в качестве транспортного топлива. Ферментный комплекс по настоящему изобретению можно использовать в этом производстве биотоплива. Комплекс ферментов можно добавлять, чтобы улучшать экстракцию полисахаридов из сырья, способствовать деградации полисахаридов до сбраживаемых сахаров и/или чтобы улучшать параметры переработки, такие как отделение жидкостей от твердых веществ, характеристики текучести и перекачиваемость.
Способ по изобретению можно использовать в затирании любой крупки. По изобретению крупка может содержать любой растительный материал, содержащий крахмал и/или сахар, который можно по- 5 025703 лучить из любого растения и части растения, включая клубни, корни, стебли, листья и семена.
В некоторых вариантах осуществления крупка содержит зерно, например зерно ячменя, пшеницы, ржи, овса, кукурузы, риса, зернового сорго, пшена и сорго, и более предпочтительно по меньшей мере 10 или более предпочтительно по меньшей мере 15, даже более предпочтительно по меньшей мере 25 или наиболее предпочтительно по меньшей мере 35, например, по меньшей мере 50, по меньшей мере 75, по меньшей мере 90 или даже 100% мас./мас. крупки сусла получено из зерна.
В некоторых вариантах осуществления крупка содержит осоложенное зерно, такое как ячменный солод. Предпочтительно по меньшей мере 10 или более предпочтительно по меньшей мере 15, даже более предпочтительно по меньшей мере 25 или наиболее предпочтительно по меньшей мере 35, например, по меньшей мере 50, по меньшей мере 75, по меньшей мере 90 или даже 100% мас./мас. крупки сусла получено из осоложенного зерна.
Термин ферментация обозначает в настоящем контексте продукцию веществ, таких как ферменты, посредством выращивания микроорганизмов в культуре.
Как применяют в настоящем документе, термин солод понимают как любое осоложенное зерно злаков, таких как ячмень.
Термин добавка понимают как часть крупки, которая не является ячменным солодом. Добавка может представлять собой любой богатый углеводами материал.
Термин затор понимают как водную суспензию крахмала, включающую, например, размолотый ячменный солод, размолотый ячмень и/или другую добавку или их комбинацию, смешанные с водой для последующего разделения на сусло+пивная дробина.
Термин разделение затора понимают как отделение сусла от пивной дробины, например, фильтрацией пивного сусла или фильтрацией затора.
Термин фильтрация пива понимают как процесс разделения, при котором клетки дрожжей и другие вызывающие мутность материалы, еще присутствующие в пиве, удаляют, например, способами с использованием микрофильтрации или мембраны.
Препарат ферментного комплекса, например, в форме ингредиента пищевого продукта, полученный по настоящему изобретению, может находиться в форме раствора или в форме твердого вещества в зависимости от использования, и/или способа использования, и/или способа введения. Форма твердого вещества может находиться либо в форме порошка высушенного фермента, либо в форме гранулированного фермента.
В одном аспекте изобретение относится к препарату ферментного комплекса, содержащему ферментный комплекс по изобретению, носитель и, необязательно, стабилизатор и/или консервант для фермента.
В дополнительном аспекте изобретения носитель для фермента выбран из группы, состоящей из глицерина или воды.
В следующем аспекте препарат содержит стабилизатор. В одном аспекте стабилизатор выбран из группы, состоящей из неорганических солей, полиолов, сахаров и их комбинаций. В одном аспекте стабилизатор представляет собой неорганическую соль, такую как хлорид калия. В другом аспекте полиол представляет собой глицерин, пропиленгликоль или сорбит. В другом аспекте сахар представляет собой низкомолекулярный углевод, в частности любой из нескольких сладких на вкус, таких как глюкоза, фруктоза и сахароза.
В дополнительном аспекте препарат содержит консервант. В одном аспекте консервант представляет собой метилпарабен, пропилпарабен, бензоат, сорбат или другие одобренные для применения в пищевых продуктах консерванты или их смесь.
Конкретные варианты осуществления изобретения
Как описано выше, настоящее изобретение относится к ферментному комплексу, полученному при комбинации:
a) продукта экспрессии, полученного при ферментации видов микроорганизмов из рода ТпсНобегша; и
b) одного или нескольких ферментов из любого другого вида микроорганизмов из царства грибов, выбранного из ксиланазы (ЕС 3.2.1.8), целлюлазы (ЕС 3.2.1.4) и бета-глюканазы (ЕС 3.2.1.6); и где по меньшей мере приблизительно 61% активности бета-1,4-эндоглюкангидролазы, как измерено способом Анализ 1, как описано в настоящем описании, получают при ферментации микроорганизмов рода Тпсйойегта.
В некоторых вариантах осуществления по меньшей мере приблизительно 62, например, по меньшей мере приблизительно 63, например, по меньшей мере приблизительно 64, например, по меньшей мере приблизительно 65, например, по меньшей мере приблизительно 66, например, по меньшей мере приблизительно 68, например, по меньшей мере приблизительно 69% активности бета-1,4эндоглюкангидролазы, как измерено способом Анализ 1, как описано в настоящем описании, получают при ферментации микроорганизмов рода ТпсНобегша.
В некоторых вариантах осуществления не более чем приблизительно 90, например, не более чем приблизительно 85, например, не более чем приблизительно 80, например, не более чем приблизительно
- 6 025703
75, например, не более чем приблизительно 70, например, не более чем приблизительно 65% активности бета-1,4-эндоглюкангидролазы, как измерено способом Анализ 1, как описано в настоящем описании, получают при ферментации микроорганизмов рода ТпсНобегта.
В некоторых вариантах осуществления один или несколько ферментов из различных грибов в ферментном комплексе по изобретению представляет собой продукт экспрессии, полученный при ферментации этих различных грибов.
В некоторых вариантах осуществления различные грибы происходят из рода РеШсШШт.
В некоторых вариантах осуществления продукт экспрессии, полученный при ферментации различных грибов, содержит ксиланазу, такую как ксиланаза, отличающаяся от ксиланазы, полученной из микроорганизмов рода ТпсНобегта. В некоторых вариантах осуществления продукт экспрессии, полученный при ферментации различных грибов, содержит ксиланазу семейства 11, такую как ксиланаза семейства 11, отличающаяся от ксиланазы семейства 11, полученной из микроорганизмов рода ТпсНобегта.
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс по изобретению обладает активностью одного или нескольких ферментов, выбранных из списка, состоящего из эндо-1,4-в-ксиланазы, эндо-1,3(4)-в-глюканазы, целлюлазы, ламинариназы, эндо-1,5-а-Ь-арабинаназы, бетаЮ-глюкозидглюкогидролазы, β-ксилозидазы, целлобиогидролазы, глюкан-1,4-бета-глюкозидазы, специфической для ксилоглюкана экзо-бета-1,4-глюканазы и α-Ν-арабинофуранозидазы.
В некоторых вариантах осуществления продукт экспрессии, полученный при ферментации видов микроорганизмов из рода ТпсНобегта, происходит из одной отдельной культуры микроорганизмов вида ТпсНобегта теекет
В некоторых вариантах осуществления продукт экспрессии, полученный при ферментации микроорганизмов видов из рода РешсШшт, происходит из одной отдельной культуры микроорганизмов вида РешсШшт ГиШсШокит.
В некоторых вариантах осуществления отдельная культура, используемая для ферментации, не является генетически модифицированной.
В некоторых вариантах осуществления продукт экспрессии, полученный при ферментации микроорганизмов видов из рода ТпсНобегта, получают при глубинной ферментации.
В некоторых вариантах осуществления продукт экспрессии, полученный при ферментации микроорганизмов рода ТпсНобегта, происходит из микроорганизмов вида ТпсНобегта теекет
В некоторых вариантах осуществления продукт экспрессии, полученный при ферментации другого гриба, происходит из одной отдельной культуры микроорганизмов вида РешсШшт ГишсШокит.
В некоторых вариантах осуществления продукт экспрессии, полученный при ферментации, происходит из микроорганизмов вида дикого типа.
В некоторых вариантах осуществления штамм, используемый для получения ферментного комплекса по изобретению, представляет собой ТпсНобегта гееке1, депонированный согласно Будапештскому договору в Американской коллекции типовых культур (АТСС®) 1Р, Ысеикшд апб §етуюек, 10801 ИшуегкПу ВоШетагб, Мапаккак, νίτ^ίηία 20110-2209, υδΑ с наименованием штамма СС Се11и1оке А83 С1СС 0004, М03000004 и обозначением патентного депонирования в АТСС РТА-1001, от имени Эашксо Α/δ с датой 5 мая 2009 г., или его производное, или потомство. (Депозит тестирован Международным депозитарием: Американская коллекция типовых культур (АТСС®), Мапаккак, νΑ, υδΑ 14 мая 2009 г. и на эту дату, семена/штамм(ы) являлись жизнеспособными).
В некоторых вариантах осуществления штамм, используемый для получения ферментного комплекса по изобретению, представляет собой РешсШшт ГишсШокит, депонированный согласно Будапештскому договору в Международном микологическом институте под номером ΙΜΙ 378536, или его производное или потомство.
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс по изобретению обладает активностью фермента по меньшей мере приблизительно 3000, например, по меньшей мере приблизительно 4000, например, по меньшей мере приблизительно 5000, например, по меньшей мере приблизительно 6000, например, по меньшей мере приблизительно 7000 ед./г как измерено в Анализе 1, как описано в настоящем описании, полученного при ферментации микроорганизмов рода ТпсНобегта.
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс по изобретению обладает общей активностью ферментов по меньшей мере приблизительно 4000, например, по меньшей мере приблизительно 5000, например, по меньшей мере приблизительно 6000, например, по меньшей мере приблизительно 7000, например, по меньшей мере приблизительно 8000, например, по меньшей мере приблизительно 9000, например, по меньшей мере приблизительно 10000, например, по меньшей мере приблизительно 11000, например, по меньшей мере приблизительно 12000 ед./г, как измерено в Анализе 1, как описано в настоящем описании.
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс по изобретению состоит приблизительно из 3100 ед./г из РешсШшт ГишсШокит и приблизительно 5200 ед./г из ТпсНобегта гееке1, где указанное количество единиц/г определяют в Анализе 1, как описано в настоящем описании.
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс по изобретению состоит приблизи- 7 025703 тельно из 2362 ед./г из РетсШшт Гишси1охит и приблизительно 5315 ед./г из Тпсйобсгта гссхсг где указанное количество единиц/г определяют в Анализе 1, как описано в настоящем описании. В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс по изобретению обладает спецификациями продукта 'ΈΑΜΙΝΕΧ® ХС, как определено в настоящем документе.
В дополнительном аспекте штамм Тпсйобсгта гссхсг используемый по изобретению, обладает характеристиками, по существу, идентичными характеристикам Тпсйобсгта гссхсг депонированного согласно Будапештскому договору в Американской коллекции типовых культур (АТСС) с наименованием штамма СС С’сШйохс Α83 С1СС 0004, М03000004, депонированного Эашхсо Α/δ на дату 5 мая 2009 г.
В следующем аспекте штамм представляет собой штамм Тпсйобсгта гссхсг депонированный согласно Будапештскому договору в Американской коллекции типовых культур (АТСС) с наименованием штамма СС С’сШйохс Α83 С1СС 0004, М03000004, депонированный Эашхсо Α/δ на дату 5 мая 2009 г.
В контексте настоящего изобретения фраза характеристики, по существу, идентичные означает, что штамм обладает одной или несколькими (предпочтительно всеми) характеристиками Тпсйобсгта гссхсг депонированного согласно Будапештскому договору в Американской коллекции типовых культур (АТСС), Патентный депозитарий, 10801 ипКсгхйу Β1νά., Мапаххах. νΑ 20110 с наименованием штамма СС Сс11и1охс Α83 С1СС 0004, М03000004, депонированного Эашхсо Α/δ на дату 5 мая 2009 г.
Как описано выше, настоящее изобретение относится к использованию ферментного комплекса по изобретению в способе получения затора для пивоварения, например в производстве солодового пива и/или в производстве виски. Следующие варианты осуществления являются, в частности, относящимися к способу получения пивоваренного затора.
В некоторых конкретных вариантах осуществления ферментный комплекс по настоящему изобретению не получают при комбинации продукта экспрессии полученного при ферментации микроорганизмов вида Тпсйобсгта гссхш и продукта экспрессии, полученного при ферментации микроорганизмов вида РсшсШшт Гитси1охит, где соотношение активности бета-1,4-эндоглюкангидролазы, происходящей из РсшсШшт Гитси1охит и из Тпсйобсгта гссхсг составляет от приблизительно 0,25/0,75 до 0,37/0,63, например, от приблизительно 0,26/0,74 до 0,36/0,64, например, от приблизительно 0,27/0,73 до 0,35/0,65, например, от приблизительно 0,28/0,72 до 0,34/0,66, например, от приблизительно 0,29/0,71 до 0,33/0,67, например, от приблизительно 0,30/0,70 до 0,32/0,68, например, от приблизительно 0,31/0,69.
В некоторых конкретных вариантах осуществления ферментный комплекс по настоящему изобретению получают при комбинации продукта экспрессии, полученного при ферментации микроорганизмов вида Тпсйобсгта гссхсг и продукта экспрессии, полученного при ферментации микроорганизмов видов РсшсШшт ГитсШохит, где соотношение активности бета-1,4-эндоглюкангидролазы, полученной из Рспюййит Гитси1охит и из Тпсйобсгта гссхсг составляет от приблизительно 0,25/0,75 до 0,37/0,63, например, от приблизительно 0,26/0,74 до 0,36/0,64, например, от приблизительно 0,27/0,73 до 0,35/0,65, например, от приблизительно 0,28/0,72 до 0,34/0,66, например, от приблизительно 0,29/0,71 до 0,33/0,67, например, от приблизительно 0,30/0,70 до 0,32/0,68, например, от приблизительно 0,31/0,69.
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс используют в заторе, чтобы способствовать фильтрации пивного сусла, и/или фильтрации затора, и/или фильтрации пива.
В некоторых вариантах осуществления ферментный комплекс используют в заторе, чтобы способствовать разделению затора.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение количества остаточного βглюкана в сусле, например, уменьшение по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 20 или по меньшей мере на 30% по сравнению с контролем без фермента, или по меньшей мере на 2, 5 или 10% по сравнению с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® διιρ^.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение вязкости, например вязкости сусла, например уменьшение по меньшей мере на 2,5, по меньшей мере на 5 или по меньшей мере на 7,5% по сравнению с контролем без фермента.
В некоторых вариантах осуществления присутствует увеличение циклов пивоварения/сутки, например увеличение по меньшей мере на 5, например, по меньшей мере на 10, или по меньшей мере на 20% по сравнению с контролем без фермента, или по меньшей мере на 2,5, по меньшей мере на 5, или по меньшей мере на 10% по сравнению с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® διιρ^ с такой же или сравнимой активностью фермента на основе компонента РсшсШшт Гитси1охит.
В некоторых вариантах осуществления присутствует улучшенная фильтруемость.
В некоторых вариантах осуществления присутствует улучшенное разделение затора.
В некоторых вариантах осуществления присутствует увеличенная скорость потока во время разделения затора, например увеличение по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 15, или по меньшей мере на 20% по сравнению с контролем без фермента, или по меньшей мере на 2,5, по меньшей мере на 5 или по меньшей мере на 10% по сравнению с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® διιρ^.
Следует понимать, что указанную скорость потока определяют как среднюю скорость потока, рассчитанную по общему времени разделения.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение времени промывания дробины
- 8 025703 или экстракции, например уменьшение по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 15 или по меньшей мере на 20% по сравнению с контролем без фермента или с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение общего времени фильтрации пивного сусла.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение общего времени разделения затора, например уменьшение по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 10, или по меньшей мере на 15% по сравнению с контролем без фермента, или по меньшей мере на 2,5, по меньшей мере на 5 или по меньшей мере на 10% по сравнению с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение среднего ΔΡ через фильтрующий слой во время рециркуляции затора поверх фильтрующего слоя и/или во время процесса фильтрации пивного сусла.
Следует понимать, что ΔΡ относится к падению давления на протяжении слоя.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение среднего ΔΡ через поверхность разделения во время рециркуляции затора поверх фильтрующего слоя и/или во время процесса фильтрации пивного сусла.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение среднего ΔΡ через поверхность разделения во время процесса разделения затора, например уменьшение по меньшей мере на 5, по меньшей мере на 10 или по меньшей мере на 15% по сравнению с контролем без фермента или с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег.
В некоторых вариантах осуществления не присутствует изменений в мутности сусла.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение количества пентозанов в сусле.
В некоторых вариантах осуществления присутствует улучшенный выход экстракта.
В некоторых вариантах осуществления присутствует увеличенная скорость потока во время фильтрации пива.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение давления, нарастающего через фильтр с течением времени во время фильтрации пива, например уменьшение по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 20 или по меньшей мере на 25% по сравнению с контролем без фермента или с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение помутнения пива, например уменьшение по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 20 или по меньшей мере на 25% по сравнению с контролем без фермента или с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег.
В некоторых вариантах осуществления не присутствует уменьшения стабильности пены.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение количества β-глюкана в пиве, например уменьшение по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 20 или по меньшей мере на 25% по сравнению с контролем без фермента или с контролем с использованием ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег.
В некоторых вариантах осуществления присутствует уменьшение количества пентозанов в пиве, например уменьшение по меньшей мере на 10, по меньшей мере на 20 или по меньшей мере на 25% по сравнению с контролем без фермента.
В некоторых вариантах осуществления менее чем приблизительно 0,5 кг ферментного комплекса на тонну крупки используют в способе получения пивоваренного затора, например для получения солодового пива и/или для получения виски. В некоторых вариантах осуществления используют менее чем приблизительно 0,4 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например используют менее чем приблизительно 0,3 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, используют менее чем приблизительно 0,25 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, используют менее чем приблизительно 0,2 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, используют менее чем приблизительно 0,19 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, используют менее чем приблизительно 0,18 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, менее чем приблизительно 0,17 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, менее чем приблизительно 0,16 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, менее чем приблизительно 0,15 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, менее чем приблизительно 0,14 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, менее чем приблизительно 0,13 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, менее чем приблизительно 0,12 кг ферментного комплекса на тонну крупки, например, менее чем приблизительно 0,11 кг ферментного комплекса на тонну крупки.
Следует понимать, что штамм грибов, используемый по изобретению, может представлять собой культуру вышеупомянутого депонированного штамма, но может также представлять собой штамм, обладающий свойствами, по существу, идентичными свойствам вышеупомянутого выделенного и депонированного штамма. В предпочтительном варианте осуществления штамм представляет собой депонированный штамм или его потомство.
Продукт экспрессии, полученный при ферментации видов микроорганизмов из рода ТпсНойегта, используемый по настоящему изобретению, может происходить из любого Тпсйойегта, такого как
- 9 025703
ТпсНобегта геекек например композиция Се11ис1ак1®„ доступная из Νονοζνιηοδ Α/δ. Се11ис1ак1® оказывает выраженный эффект уменьшения вязкости на растворимые целлюлозные субстраты. Альтернативно, можно использовать ΕΑΜΙΝΕΧ® ВС, коммерческий препарат целлюлазы, продуцированный ТпсНобсгша ГСС5С1 и доступный из Эап1ксо Α/δ.
Продукт экспрессии, полученный при ферментации видов микроорганизмов из рода РешсШшт, используемый по настоящему изобретению, может происходить из любого РешсШшт, такого как Решсй1шт ГишсиШкиш. В некоторых вариантах осуществления штамм представляет собой РешсШшт ГитсиШ8ит, депонированного согласно Будапештскому договору в Международном микологическом институте под номером ΙΜΙ 378536, или его производное, или потомство. Альтернативно, РешсШшт ГшисиШкит является таким, как описано в νθ 9957325. В некоторых альтернативных вариантах осуществления ΕΑΜΙΝΕΧ® С2К (полученный из Иашксо Α/δ), продукт экспрессии, происходящий из РешсШшт Гитси1окит, используют по изобретению.
ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^ представляет собой ферментный продукт для пивоварения для использования в заторе, чтобы способствовать фильтрации пивного сусла или фильтрации затора. Продукт ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^ представляет собой смесь двух различных ферментных продуктов ферментации - целлюлазы РешсШшш ГишсиШкиш и целлюлазы ТпсНобегта геекек ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^ получают из Иашксо Α/δ. Компонент РешсШшт ГипШиШкиш включают для гидролиза солюбилизированных β-глюканов и ксиланов, уменьшения вязкости сусла и улучшения фильтрации пивного сусла или фильтрации затора; компонент ТпсНобегта гееке! включают для получения низкого уровня, измеренного (способом анализа бетаглюканов со смешанными связями Μедаζуше) β-глюкана в сусле, и для увеличения скорости фильтрации пива.
ΕΑΜΙΝΕΧ® ВС - продукт(ы) Т. теекец используемые для улучшения фильтрации пива, полученные из Иашксо Α/δ.
Продукт ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^ определяют, как полученный из
1575 ед./г (определено в Анализе 1) из концентрата РешсШшт ГишсиШкиш;
2362 ед./г (определено в Анализе 1) из ТпсНобегта геекек
Это округляют в меньшую сторону до 3900 ед./г в конечной спецификации продукта ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^.
Спецификация ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^ представляет собой активность целлюлазы >3900 ед./г (определено в Анализе 1) рН 3,7-4,2, микроорганизмы, спецификации стандартные, стабилизирован 0,25%-ным бензоатом натрия.
ΕΑΜΙΝΕΧ® XС определяют, как полученный из ферментного комплекса, полученного при комбинации продукта экспрессии, полученного при ферментации вида ТпсНобегта теекец и продукта экспрессии, полученного при ферментации вида РешсШшт ГишсиШкиш, где соотношение активности бета-1,4эндоглюкангидролазы, происходящей из РешсШшт ГишсиШкиш и из ТпсНобегта геекек составляет приблизительно от 0,25/0,75 до 0,37/0,63, например ферментный комплекс, где приблизительно 2363 ед./г (активность измерена в Анализе 1) происходит из концентрата РешсШшт ГишсиШкиш; и приблизительно 5315 ед./г (активность измерена в Анализе 1) происходит из ТпсНобегта геекек В этом конкретном варианте осуществления продукт ΕΑΜΙΝΕΧ® XС дает соотношение РешсШшт ГитсиШкит/ТпсНобегта 0,31/0,69 на основании единиц активности, как измерено в Анализе 1, как описано под заголовком Анализы.
Пример 1. Исследование затора в лабораторном масштабе 1.
Активность ферментов.
Продукт ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^, смешанный для этого конкретного эксперимента.
Номинальная активность 3937 СΜС ед./г. Измеренная активность 3682 СΜС ед./г (активность измерена способом Анализа 1) в дозе 0,2 кг/т крупки, дающая 736400 СΜС ед./т крупки (=0,736 ед./г крупки).
Принимая определение продукта ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^ 0,40хпродукт Р. ГишсиШкиш и 0,60хпродукт Т. тееке1 на основании активности СΜС, как измерено в Анализе 1:
вклад в активность Р. ГитсиШкит 0,295 СΜС ед./г крупки, вклад в активность Т. Кееке1 0,442 СΜС ед./г крупки.
ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^ (0,200 кг/т крупки)+50% активности компонента Г. тееке1 (ΕΑΜΙΝΕΧ® ΧΟ):
3682 СΜС ед./г (активность измерена в Анализе 1) в дозе 0,2 кг/т крупки+0,09534 г компонента Т. тееке1 (12539 СΜС ед./г, по Анализу 1)/г продукта ΕΑΜΙΝΕΧ® δиρе^, дающие 975494 СΜС ед./т крупки (=0,975 ед./г крупки), вклад в активность Р. ГитсиШкит 0,295 СΜС ед./г крупки, вклад в активность Т. тееке1 (0,442+0,239) СΜС ед./г=0,681 СΜС ед./г крупки.
Соотношение вклада Р. ГишсиШкиш/Т. тееке1 в исследовании затора с ΕΑΜΙΝΕΧ® XС в лабораторном масштабе 1 0,30/0,70.
- 10 025703
Тестирование ЬЛМГИЕХ® §црег (0,200 кг/т крупки) по сравнению с Ь-ΛΜΙΝΕΧ® §црег (0,200 кг/т крупки)+50% активности компонента Т. гееке1 в 10% ячменного затора Рассей (90% солода Рассей: 10% ячменя Ра\усей): - 50 г крупки в общем количестве 250 г воды. Профиль затирания: использовали 50 г смешанной крупки, размолотой до 0,5 мм, и добавляли 190 мл воды при 67°С. Температурный цикл затирания составлял 60 мин при 65°С, затем 10 мин при 72°С. Затем заторы охлаждали, доводили до массы 250 г и фильтровали через гофрированную фильтровальную бумагу (Ейего1 12).
По сравнению с продуктом ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег для ферментного раствора ЬЛМШЕХ® §ирег (0,200 кг/т крупки) с добавлением 50% дополнительной активности компонента Т. гееке1 показано уменьшенное количество остаточного β-глюкана в сусле (см. фиг. 1).
Уменьшенное количество остаточного β-глюкана в сусле указывает на возможность уменьшения вязкости, последующего увеличения разделения/фильтрации сусла и возможность увеличения количества циклов пивоварения/сутки.
Увеличение фильтрации (см. фиг. 1).
Увеличение фильтрации указывает на положительный потенциал увеличения продолжительности циклов фильтрации без прерываний (например, разрыхлений), что, в свою очередь, может уменьшать общее время фильтрации и, таким образом, приводить к увеличению количества циклов пивоварения/сутки.
Пример 2. Исследование затора в лабораторном масштабе 2.
Активность ферментов.
ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег.
4380 СМС ед./г (активность рассчитана по вкладу отдельного компонента) в дозе 0,2 кг/т крупки, дающая 876000 СМС и/т крупки (=0,876 ед./г крупки).
Компонент Р. ЕцшсШокит, вносящий вклад 2069 СМС ед./г (по Анализу 1), соответствующий 0,414 СМС ед./г крупки.
Компонент Т. гееке1, вносящий вклад 2311 СМС ед./г (по Анализу 1), соответствующий 0,462 СМС ед./г крупки.
Соотношение вклада Р. £итси1о8ит/Т. гееке1 в продукт ЙАМШЕХ® 8ирег в этом исследовании составляет 0,47/0,52.
ЬАМГОТХ® ХС (ЙАМШЕХ® 8ирег, концентрированный в 1,5 раза+добавление 50% дополнительной активности компонента Т. геекеД
8304 СМС ед./г (активность рассчитана по вкладу отдельного компонента) в дозе 0,133 кг/т крупки, дающая 1104432 СМС ед./т крупки (=1,104 ед./г крупки).
Компонент Р. ЕишсШокит, вносящий вклад 3104 СМС ед./г (по Анализу 1), соответствующий 0,413 СМС ед./г крупки.
Компонент Т. геекец вносящий вклад 5200 СМС ед./г (по Анализу 1), соответствующий 0,692 СМС ед./г крупки.
Соотношение вклада Р. £птси1о8ит/Т. гееке1 в исследовании затора с ЙАМШЕХ® ХС в лабораторном масштабе 2 0,37/0,63.
Тестирование ЙАМШЕХ® 8ирег (0,200 кг/т крупки) по сравнению с ЙАМШЕХ® ХС (0,133 кг/т крупки) в смешанной крупке 25,8% солода 8рП/ и 74,2% солода Рйкиег - затор. Профиль затирания: 50 г крупки осолаживали в 150 г воды и следовали программе затирания, приведенной в табл. 1.
Таблица 1
Программа затирания в лабораторном масштабе
| Программа затирания | ||
| Затирание | при 50’С | более 10 минут |
| Выдержка | при 50 °С | в течение 20 минут |
| Нагревание | до 65“С | более 15 минут |
| Выдержка | при 65°С | в течение 30 минут |
| Нагревание | до 7б°С | более 15 минут |
| Выдержка | при | в течение 15 минут и затем отзаторивание |
В конце затирания 30 мл горячей воды (при 76°С) добавляли к каждому затору, и заторы фильтровали горячими с использованием фильтровальной бумаги Ейего1 12.
По сравнению с продуктом ЙАМШЕХ® 8ирег (в дозе 0,2 кг/т крупки) для ферментного раствора ЙАМШЕХ® ХС (в дозе 0,133 кг/т крупки) показали уменьшение концентраций остаточного β-глюкана в сусле (см. фиг. 2).
Важность уменьшения концентрации β-глюкана в сусле неясна, однако теории связывают уменьшенное содержание β-глюкана в сусле с уменьшенной вязкостью сусла. При том, что разделение затора
- 11 025703 является ограничивающим фактором в процессе пивоварения, полученное положительное увеличение может увеличить производительность пивоваренного завода посредством увеличения количества циклов пивоварения/сутки благодаря уменьшению времени, потраченного на разделение затора.
Увеличение объемов фильтрации с течением времени (см. фиг. 2).
Более высокие скорости фильтрации положительно уменьшают время, потраченное на фильтрацию, что потенциально приводит к увеличению производительности пивоваренного завода посредством увеличения количества циклов пивоварения/сутки.
Уменьшение вязкости сусла (см. фиг. 2).
Уменьшенная вязкость сусла обладает положительным потенциалом увеличения скоростей фильтрации и, таким образом, увеличения производительности пивоваренного завода.
Пример 3. Пилотные исследования пивоварения.
Ферментные композиции, такие же, как в исследовании затора в лабораторном масштабе 2.
Тестирование ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирет (эквивалент 0,200 кг/т крупки) и ΕΑΜΙΝΕΧ® ХС (ΕΑΜΙΝΕΧ® 8ирет, концентрированный в 1,5 раза+добавление 50% дополнительной активности компонента Т. тее8е1) (0,133 кг/т крупки). Пилотное исследование пивоваренного затирания проводили с использованием 31 кг смешанной крупки 25,8% солода δρίΐζ и 74,2% солода РШиег в объеме затора 110 л. Профиль затирания показан в табл. 2.
Таблица 2
Пилотный профиль пивоваренного затирания
| Стадия | Время | Общее время | Температура |
| (мин.) | (мин.) | (’С) | |
| 0 | 0 | 50 | |
| Затирание | 10 | 10 | 50 |
| Выдержка | 20 | 30 | 50 |
| Нагревание | 15 | 45 | 65 |
| Выдержка | 30 | 75 | 65 |
| Нагревание | 15 | 90 | 76 |
| Выдержка | 15 | 105 | 76 |
Пилотные исследования пивоваренного затирания.
По сравнению с ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирет добавление ΕΑΜΙΝΕΧ® ХС в процесс затирания приводит к уменьшению времени промывания пивной дробины вплоть до 13% (см. табл. 3). Уменьшение времени промывания пивной дробины вносит положительный вклад в уменьшение времени, затраченного на разделение сусла, и таким образом, обладает потенциалом для увеличения производительности пивоваренного завода посредством увеличения количества циклов пивоварения/сутки.
Уменьшению общего времени фильтрации пивного сусла вплоть до 8% по сравнению с ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирет и вплоть до 20% по сравнению с водным контролем (без добавления фермента) (см. табл. 3 и фиг. 3).
При том, что процесс фильтрации пивного сусла является ограничивающим фактором в процессе пивоварения, уменьшение времени фильтрации пивного сусла обладает потенциалом для увеличения производительности пивоваренного завода посредством увеличения количества циклов пивоварения/сутки.
Увеличению средней скорости потока, рассчитанной либо как среднее для скоростей потока, измеряемых непрерывно в процессе фильтрации пивного сусла, либо как Общий профильтрованный объем на Общее время фильтрации пивного сусла (см. табл. 3 и фиг. 3).
Увеличение средней скорости потока может положительно уменьшать общее время, затраченное на разделение сусла, и таким образом, потенциально увеличивать производительность пивоваренного завода.
Уменьшению среднего ΔΡ через фильтрующий слой вплоть до 19% в процессе фильтрации пивного сусла (см. табл. 3).
Потенциально, уменьшение среднего ΔΡ через фильтрующий слой может приводить к уменьшению необходимости разрыхления фильтрующего слоя и увеличению объема, профильтрованного с течением времени. Оба фактора обладают положительным потенциалом для уменьшения времени фильтрации пивного сусла и, таким образом, для увеличения производительности пивоваренного завода.
Уменьшению давления, нарастающего во время рециркуляции затора над фильтрующим слоем (вплоть до 22%) и во время фильтрации пивного сусла (вплоть до 24%) (см. табл. 3).
Уменьшение давления, нарастающего во время как рециркуляции, так и фильтрации пивного сусла, обладает потенциалом вносить вклад в увеличение фильтрации, и, таким образом, уменьшение общего времени фильтрации пивного сусла. И снова это может приводить к увеличению производительности пивоваренного завода. Наблюдаемый эффект является особенно сильным, поскольку увеличенная ско- 12 025703 рость фильтрации в норме связана с увеличением давления - и настоящие данные показывают увеличение фильтрации и в то же время уменьшение нарастающего давления.
Отсутствию изменений в мутности сусла (см. табл. 3).
Мутность не изменяется, что является положительным, поскольку увеличенная мутность может являться фактором, приводящим к выбору запуска разрыхления. Разрыхление занимает много времени и может увеличивать общее время разделения сусла и, таким образом, уменьшает производительность пивоваренного завода.
Уменьшению общего нарастающего давления во время фильтрации пивного сусла вплоть до 24% (см. табл. 3 и фиг. 3).
Уменьшение общего нарастающего давления во время разделения сусла может увеличивать скорость фильтрации и, таким образом, увеличивать производительность пивоваренного завода посредством уменьшения времени, затраченного на процесс разделения сусла.
Отсутствию разрыхления фильтрующего слоя, инициированного нарастающим давлением. Как обозначено (1) внизу табл. 3, только обязательное разрыхление вводили при включении ЬАМГЛЕХ® ХО на стадии затирания (обозначено (1) в табл. 3).
Уменьшение времени промывания пивной дробины вносит вклад в уменьшение общего времени фильтрации пивного сусла и потенциальное увеличение количества циклов пивоварения/сутки.
Таблица 3
Пилотные исследования пивоваренного затирания обобщение данных фильтрации пивного сусла
| Контроль | ЬАМ1ЫЕХ® Зирег | ΏΑΜΙΝΕΧ® ХС | ||
| Дата | 16- Октябрь- 08 | 21-Октябрь- 08 | 28- Октябрь-08 | |
| Варка по.: | 73 | 75 | 79 | |
| Солод РИвпег | (КГ) | 23, 0 | 23,0 | 23,0 |
| Солод 3ρϊ£ζ | (кг) | 8,0 | 8,0 | 8, 0 |
| Общее количество крупки | (КГ) | 31,0 | 31,0 | 31,0 |
| Время первого сусла | (мин) | 35,50 | 25,00 | 25, 50 |
| Время 1-го промывания пивной дробины | (мин) | 8, 00 | 7, 50 | 7, 50 |
| Время 2-го промывания пивной дробины | (мин) | 6, 00 | 17, 00 | 11,17 |
| Время 3-го промывания пивной дробины | (мин) | 16,50 | 6, 00 | 5, 83 |
| Время 4-го промывания пивной дробины | (мин) | 6, 50 | 6, 00 | 6, 00 |
| Время 5-го промывания пивной дробины | (мин) | 7, 50 | 8, 00 | 8, 17 |
| Время промываний пивной дробины | (мин) | 44,50 | 44,50 | 38, 67 |
| Общее время фильтрования пивного сусла | (мин) | 80,00 | 69,50 | 64,17 |
| Средняя скорость потока | (л/час) | 126,3 | 136, 8 | 139,4 |
| Средняя скорость потока* | (л/час) | 111,6 | 128, 6 | 139,3 |
| Среднее ΔΡ | (бар и. д. ) | 169 | 179 | 145 |
| Нарастание Р - рециркуляция | (бар и. д. ) | 104 | 93 | 73 |
- 13 025703
| Нарастание Р - фильтрование пивного сусла | (бар и.д. ) | 555 | 396 | 300 |
| Нарастание Р — общее | (бар и.д.) | 659 | 489 | 373 |
| Разрыхления (Iе сусло + промывания пивной. дробины)** | 1 + 1 | 0 + 1 | 0+ < 1) |
- по общему объему и общему времени фильтрации пивного сусла;
** - 1 - обозначает разрыхление, инициированное нарастающим давлением, 0 - обозначает отсутствие разрыхления, (1) - обозначает обязательное разрыхление, начатое с ручного управления в начале 2-го промывания пивной дробины, если его не было ранее.
Результат анализа образцов сусла из заторов с добавлением ЬАМГЛЕХ® ХО в процессе затирания: уменьшение количества β-глюкана в сусле, как измерено способом анализа бета-глюканов со смешанными связями Меда/уте (ссылка К-ВОЬи в каталоге Мсда/утс. согласующаяся со стандартным методом АОАС 9 95.16) (см. табл. 4). Уменьшение количества остаточного β-глюкана в сусле может приводить к положительному уменьшению вязкости сусла, таким образом увеличивая фильтрацию и производительность пивоваренного завода посредством увеличения количества циклов пивоварения/сутки.
Увеличение количества экстракта вплоть до 2,3% (см. табл. 4).
Увеличение количества экстракта может приводить к положительному увеличению производительности пивоваренного завода - больше продукта производят из такого же количества сырья - иными словами, к увеличению производительности пивоваренного завода более рентабельным образом.
Таблица 4
Пилотные анализы пивоваренного сусла
| Исследование по. | Образец | Экстракт | [β-глюкан] |
| (°П <°Р) ) | (мг/л) | ||
| 73 | Комбинированное сусло | 14,11 | 1163 |
| 75 | Комбинированное сусло | 14, 18 | 588 |
| 79 | Комбинированное сусло | 14,34 | 187 |
- отрицательный контроль: контроль без фермента;
- ЬАМ1ЫЕХ® 8ирег при 0,20 кг/т;
- Т.АМ1ХЕХ® ХО при 0,133 кг/т.
Пилотная пивоваренная фильтрация пива.
По сравнению с ЬАМГПЕХ® §ирет добавление ЬАМГПЕХ® ХО в процесс затирания приводит к увеличению скорости потока во время фильтрации пива (см. табл. 5).
Увеличение скорости потока во время фильтрации пива оказывает положительный эффект на увеличение фильтрационной емкости и таким образом, потенциально, на уменьшение (ограничение) необходимости в дополнительной емкости буферного танка разлива (ВВТ) (ВВТ представляют собой резервуары под давлением, используемые для хранения пива после фильтрации до разлива. Эти резервуары способны поддерживать стабильное давление, исключая потерю диоксида углерода и предупреждая образование пены).
Значительному уменьшению давления, нарастающего через фильтр с течением времени (см. табл. 5). Уменьшение давления, нарастающего через фильтр с течением времени, положительно увеличивает продолжительность цикла фильтрации между очистками. Это положительным образом ограничивает очистку в затратах пространства, воды и энергии. Уменьшается также количество необходимого фильтрующего материала, что приводит к экономии затрат. Более длительные циклы фильтрации между очистками положительным образом уменьшают потерю пива, возникающую из-за запуска и остановки процесса фильтрации пива.
- 14 025703
Таблица 5
Обобщение данных фильтрации пива при пилотном пивоварении
| 73 | 75 | 79 | ||||||
| Объем | Поток | ΔΡ | Объем | Поток | ΔΡ | Объем | Поток | ΔΡ |
| (л) | (л/ | (бар | (1) | (л/ | (бар | (л) | (л/ | (бар |
| час) | и.д. ) | час) | и.д.) | час) | и.д.) | |||
| 0, 0 | 95,0 | 1, 90 | 0, 0 | 106, 0 | 1, 70 | 0, 0 | 130, 0 | 1, 00 |
| 2, 0 | 60,0 | 4,20 | 5, 0 | 115, 0 | 2, 60 | 5, 0 | 120,0 | ι, оо |
| 3, 0 | 125, 0 | 2,30 | 10, 0 | 123, 0 | 3, 20 | 10,0 | 116,0 | 0, 80 |
| 7, 0 | 115, 0 | 2,50 | 15, 0 | 118, 0 | 3, 50 | 14, 0 | 116,0 | 1, 40 |
| 11,0 | 109, 0 | 4,20 | 20, 0 | 119, 0 | 3, 90 | 18,0 | 119,0 | 1, 60 |
| 15, 0 | 81,0 | 4, 10 | 25, 0 | 116, 0 | 4, 20 | 22,0 | 118, 0 | 1, 85 |
| 20, 0 | 64,0 | 4,10 | 30, 0 | 105, 0 | 4, 30 | 26,0 | 119,0 | 2, 10 |
| 25, 0 | 52,0 | 4,10 | 35, 0 | 99, 0 | 4,30 | 30,0 | 119,0 | 2, 20 |
| 30, 0 | 22,0 | 4,20 | 40, 0 | 92, 0 | 4, 20 | 34, 0 | 120, 0 | 2, 30 |
| 32, 0 | 8, 0 | 4,20 | 38,0 | 118,0 | 2, 45 | |||
| 33, 0 | 0, 0 | 4,20 | 42, 0 | 117, 0 | 2, 60 | |||
| 44, 0 | 117, 0 | 2, 75 |
- отрицательный контроль: контроль без фермента;
- ΕΑΜΙΝΕΧ® 8ирег при 0,20 кг/т;
- ΕΑΜΙΝΕΧ® ΧΟ при 0,133 кг/т.
Анализы пива при пилотном пивоварении.
Анализы пива, полученного из заторов с добавлением ΕΑΜΙΝΕΧ® ХО в процесс затирания, показывают уменьшение количества бета-глюкана в пиве (см. табл. 6).
Уменьшение количества β-глюкана в пиве может положительным образом уменьшать вязкость пива и таким образом, увеличивать цикл фильтрации и уменьшать расход вспомогательного фильтрующего материала и приспособлений (снижение затрат).
Уменьшение мутности пива (см. табл. 6).
Основной вклад в мутность пива может быть связан с не относящимся к бета-глюкану материалом. Уменьшенное количество β-глюкана в пиве может также вносить положительный вклад в уменьшение мутности пива, придавая положительный внешний вид пиву.
Отсутствие уменьшения стабильности пива (см. табл. 6 - значение пеностойкости).
Стабильность пены пива не уменьшалась при использовании концентрации ΕΑΜΙΝΕΧ® §ирег больше в 1,5 раза+добавления 50% дополнительной активности компонента Т. гее§е1. Это является положительным, поскольку может присутствовать фактор риска по отношении к внешнему виду и качеству пива.
Можно ожидать уменьшения количества пентозанов в пиве. Уменьшение количества пентозанов в пиве может вносить положительный вклад в увеличение фильтрации пива.
Таблица 6
Анализы пива при пилотном пивоварении
| 73 Контроль | 75 Стандарт | 79 Тест | ||
| Удельная плотность | 1,0101 | 1,0114 | 1,0111 | |
| [ β-глкжан] | (мг/л) | 389 | 209 | 133 |
| Мутность: Радиометр | (ЕБС) | 2,70 | 1, 55 | 1, 00 |
| Мутность: НасЬ | (ЕВС) | 2,40 | ι, 13 | 0, 68 |
| Значение пеностойкости | (О) | 90 | 108 | 136 |
| Тест ускоренного старения | (ЕБС) | 1,80 | 0, 25 | 0, 20 |
- отрицательный контроль: контроль без фермента;
- ΕΑΜΙΝΕΧ® 8ирег при 0,20 кг/т;
- ΕΑΜΙΝΕΧ® ХО при 0,133 кг/т.
Пример 4. Полномасштабные исследования пивоварения.
Исследование линии 1.
Исследование проводили на композиции 31,6% ячменной крупки с использованием 9500 кг крупки
- 15 025703 на варку (3000 кг ячменя, 6500 кг солода).
Как показано в табл. 7, хорошие результаты наблюдали с ЬАМГИЕХ® ХО по отношению к разделению затора. Уменьшение времени фильтрации пивного сусла обладает потенциалом увеличения производительности пивоваренного завода посредством увеличения количества циклов пивоварения/сутки.
Таблица 7
Производительность пивоваренного завода по разделению затора
| ПИВОВАРЕННЫЙ ЗАВОД | |||
| ЪАМ1ЫЕХ® | кг/варку | Время разделения затора, АН | Общее время разделения затора, АО |
| I - Контроль | |||
| Зирег | 2 | 100 | 129 |
| Зирег | 2 | 108 | 100 |
| II - Гест | |||
| ХО | 14 | 93 | 86 |
| хо | 14 | 94 | 87 |
| Аи - Условная единица |
Исследование линии 2.
Исследование проводили на композиции 28% ячменной крупки с использованием 12300 кг крупки на варку (3500 кг ячменя, 8800 кг солода).
Как показано в табл. 8, хорошие результаты наблюдали с ЬАМГИЕХ® ХО по отношению к фильтрации пива.
Увеличение количества циклов фильтрации пива между очистками обладает потенциалом увеличения производительности пивоваренного завода посредством уменьшения времени, затраченного на очистку, и увеличения количества циклов фильтрации пива, пивоварения/сутки. Кроме того, увеличение количества циклов фильтрации пива приводит к экономии затрат и уменьшенному потреблению энергии, и уменьшает потерю пива, возникающую из-за запуска и остановки процесса фильтрации пива. Уменьшение расхода вспомогательного фильтрующего материала и приспособлений (уменьшение расхода кизельгура) приводит к непосредственному снижению затрат.
Таблица 8
Производительность пивоваренного завода по фильтрации пива
| ФИЛЬТРАЦИЯ ПИВА | |||
| ЬАМ1ЫЕХ® | кг/варку | Время фильтрации, АО | Расход кизельгура, Аи |
| I - Контроль | |||
| Зирег | 2 | 100 | 100 |
| II - Тест | |||
| ХС | 14 | 148 | 48 |
| ХС | 14 | 138 | 76 |
| АО - Условная единица |
Как представлено в табл. 9, анализы пива, полученные для линии 2 с добавлением ЬАМГИЕХ® ХО в процесс затирания показали уменьшение количества бета-глюкана в пиве.
Уменьшение количества β-глюкана в пиве может положительным образом уменьшать вязкость пива и таким образом увеличивать количество циклов фильтрации и уменьшать расход вспомогательного фильтрующего материала и приспособлений (снижение затрат).
Можно ожидать уменьшения количества пентозанов в пиве.
Уменьшение количества пентозанов в пиве может вносить положительный вклад в увеличение фильтрации пива посредством уменьшения вязкости.
Уменьшение динамической вязкости пива.
Уменьшение динамической вязкости пива может положительным образом увеличивать количество циклов фильтрации и уменьшать расход вспомогательного фильтрующего материала и приспособлений (снижение затрат). Увеличение количества циклов фильтрации может также увеличивать производительность пивоваренного завода посредством увеличения количества циклов фильтрации пива/сутки.
- 16 025703
Таблица 9
Анализы пива при полномасштабном пивоварении, линия 2
| Анализы (Условные единицы) | ЬАШИЕХ® Зирег - 0,163 кг/тонну крупки | ΣΑΜΙΝΕΧ® Зирег ХС - 0,113 кг/тонну крупки |
| Динамическая вязкость (7000°) | 100 | 95, 7 |
| β-глюкан | 100 | 3,30 |
Обобщение - дозы активности фермента, используемые в исследованиях.
Данные приведены в соотношении РР/ТК, которое представляет собой только соотношение вклада каждого компонента в общую активность. РР представляет собой вклад, внесенный РетсШшт £итси1о8ит, и ТК - вклад, внесенный Тпсйобегта геезег
Таблица 10
Активности ферментов СМС, используемые в различных исследованиях/примерах
| ЪАМтаЕХ® Зирег | ΣΑΜΙΝΕΧ® ХС | |
| Соотношение РГ/ТЕ | Соотношение РГ/ТЕ | |
| Исследование затора в лабораторном масштабе 1 | 0,4/0,6 | 0,30/0,70 |
| Исследование затора в лабораторном масштабе 2 | 0,47/0,52 | 0,37/0,63 |
| Пилотное исследование пивоварения | 0,47/0,52 | 0,37/0,63 |
| Полномасштабное исследование пивоварения, линия 1 | 0,4/0,6 | 0,31/0,69 |
| Полномасштабное исследование пивоварения, линия 2 | 0,4/0,6 | 0,31/0,69 |
Анализы.
Анализ 1. Способ активности целлюлазы с ΌΝ8 (способ с ΌΝ8 СМС).
Систематическое наименование 1,4-(1,3; 1,4)-в-О-глюкан-4-глюканогидролаза.
Номер ΙϋΒ ЕС 3.2.1.4.
Принцип.
Анализ целлюлазы основан на ферментативном эндогидролизе 1, 4-в-О-глюкозидных связей в карбоксиметилцеллюлозе (СМС), в-1,4-глюкане. Продукты реакции (в-1,4-глюкановые олигосахариды) определяли колориметрически посредством измерения полученного увеличения количества восстанавливающих групп с использованием реагента 3,5-динитросалициловой кислоты. Активность фермента рассчитывали по связи между концентрацией восстанавливающих групп, в качестве глюкозных эквивалентов, и оптической плотностью при 540 нм.
Анализ проводили при рН 5,0, но его можно проводить при различных значениях рН для дополнительной характеризации и спецификации ферментов.
Определение единицы.
Одну единицу активности целлюлазы определяют как количество фермента, образующее 1 мкмоль глюкозных эквивалентов в минуту в условиях анализа (рН 5,0 (или как указано) и 50°С).
Материалы.
Карбоксиметилцеллюлоза. Поставщик: Меда/уте Ыб. №. продукта: СМ-Се11и1о8е. 4М Ό-глюкоза чда. Поставщик: Мегск Ыб (ΒΌΗ). №. продукта 10117. М.А. 180,16 Ацетат натрия безводный чда. Поставщик: Мегск Ыб (ΒΌΗ). №. продукта: 10236. М.А.: 82,03.
Уксусная кислота (ледяная) чда. Поставщик: Мегск Ыб (ΒΌΗ). №. продукта 10001. МА. 60,05.
3,5-динитросалициловая кислота СРК (3,5-динитро-2-гидроксибензойная кислота). Поставщик: Мегск Ыб (ΒΌΗ). №. продукта 28235.
Гранулы гидроксида натрия чда. Поставщик: Мегск Ыб (ΒΌΗ). №. продукта: 10252. М.А. 40,00.
(+)-тартрат калия-натрия чда. Поставщик: Мегск Ыб (ΒΌΗ). №. продукта: 10219. М.А. 282,22.
1,5% мас./об. раствор - раствор карбоксиметилцеллюлозы (СМС) в буфере 0,1М ацетате натрия, рН 5,0 (раствор субстрата).
Раствор 3,5-динитросалициловой кислоты (ΌΝ8). 20 г/л ΌΝ8 в буфере, содержащем 32 г/л гранул гидроксида натрия и 600 г/л (+)-тартрата калия-натрия.
- 17 025703
Стандартный раствор глюкозы (0,50 мг/мл).
Способ.
Ферментный комплекс разводили с получением образцов и получали стандартную кривую для глюкозы, как показано на фиг. 2, с использованием концентраций глюкозы 0, 0,125, 0,25, 0,375 и 0,5 мг/мл.
0,25 мл раствора фермента смешивали с 1,75 мл раствора субстрата (1,5% мас./об.) при 50°С, и реакцию останавливали через 10 мин добавлением раствора ΌΝδ. За этим следовало нагревание до 95°С в течение 5 мин.
Измеряли оптическую плотность различных образцов при 540 НМ (ОИ540 нм).
Расчет.
Активность фермента определяют по стандартной кривой, как показано на фиг. 2.
Активность рассчитывали следующим образом:
——— /Ах —ί— х 103 х — х-х О . , -1 -к т 180.16 V ί
Активность (ед.мл или ед.г )= где Т=ДОИ540 нм ТЕСТ=ОИ540 нм ТЕСТ-ОИ540 нм НУЛЬ; т - наклон стандартной кривой (приблизительно 1,0);
с - пересечение оси у стандартной кривой (всегда отрицательное и приблизительно -0,02);
180,16 - молекулярная масса глюкозы;
103 - для перевода в мкмоль;
А - анализируемый объем, мл;
V - объем фермента, мл;
- время анализа, мин;
И - действительная кратность разведения фермента (например, для 1 г, разведенного до 1 л, И=1000).
Анализ 2. Эндо-1,4-в-ксиланаза (способ с ΌΝδ и ксиланом древесины березы).
Принцип.
Реакция, катализируемая эндо-1,4-в-ксиланазой, включает в себя эндогидролиз 1,4-β-Όксилозидиновых связей в ксилане (например, ксилане древесины березы или замещенных ксиланах злаков, таких как арабиноксилан пшеницы), образующих в-1,4-ксилановые олигосахариды.
Продукты реакции ф-1,4-ксилановые олигосахариды) определяли колориметрически посредством измерения полученного увеличения количества восстанавливающих групп с использованием реагента
3,5-динитросалициловой кислоты. Активность фермента рассчитывают по связи между концентрацией восстанавливающих групп в качестве ксилозных эквивалентов и оптической плотностью при 540 нм.
Стандартный анализ проводили при рН 3,5, но его можно проводить при различных значениях рН для дополнительной характеризации и спецификации ферментов.
Определение единицы.
Одну единицу активности эндо-1,4-в-ксиланазы определяют как количество фермента, образующее 1 мкмоль ксилозных эквивалентов в минуту в условиях анализа (рН 3,5 (или как указано) и 50°С).
Материалы.
См. список материалов, приведенный выше для анализа активности целлюлазы.
Ксилан древесины березы. Поставщик: §1§та СЬетюа1 Со. Νο. продукта: X 0502.
И(+)-ксилоза чда. Поставщик: Мегск Ь1й (ВИН). Νο. продукта: 10372 Μ. V.: 150,13.
1,5% мас./об. раствор - раствор ксилана древесины березы в буфере 0,1 ацетате натрия, рН 4,0 (раствор субстрата).
Стандартный раствор ксилозы (0,50 мг/мл).
Способ.
1,75 мл раствора ксилана древесины березы смешивали с 0,25 мл разведенного раствора фермента при 50°С в течение 10 мин, реакцию останавливали добавлением 2 мл раствора ΌΝδ с последующим нагреванием до 95°С в течение 5 мин. Измеряли оптическую плотность при 540 нм (ОИ540 нм).
Стандартную кривую получали для 0,125, 0,250, 0,375, 0,500 мг/мл ксилозы.
Расчет.
Активность рассчитывали следующим образом:
Г-с . 1 1 1 „
-хдх-хЮ х—х—хО
Активность (ед.мл-1 или ед.г-1)= т 15013 ν * где Т=ДОИ540 нм ТЕСТ=ОИ540 нм ТЕСТ-ОИ540 нм НУЛЬ; т - наклон стандартной кривой (приблизительно 1,0);
с - пересечение оси у стандартной кривой (всегда отрицательное и приблизительно -0,02);
150,13 - молекулярная масса ксилозы;
103 - для перевода в мкмоль;
А - анализируемый объем, мл;
V - объем фермента, мл;
- 18 025703 ΐ - время анализа, мин;
Ό - действительная кратность разведения фермента (например, для 1 г, разведенного до 1 л, ϋ=1000).
Анализ 3. Ламинариназа (способ с ΌΝδ и ламинарином).
Принцип.
Реакция, катализируемая ламинариназой, включает в себя эндогидролиз 1,3-глюкозидных связей в
1.3- в-Э-глюканах. Субстраты включают в себя ламинарии, парамилон и пачиман. Продукты реакции (β1.3- глюкановые олигосахариды) определяют колориметрически посредством измерения полученного увеличения количества восстанавливающих групп с использованием реагента 3,5-динитросалициловой кислоты. Активность фермента рассчитывают по связи между концентрацией восстанавливающих групп в качестве глюкозных эквивалентов и оптической плотностью при 540 нм.
Анализ проводили при рН 5,0 и 50°С, но его можно проводить при различных значениях рН и температуры для дополнительной характеризации и спецификации ферментов.
Определение единицы.
Одну единицу активности ламинариназы определяют как количество фермента, образующее 1 мкмоль глюкозных эквивалентов в мин в условиях анализа (рН 5,0 и 50°С (или как указано)).
Материалы.
См. материалы, приведенные выше для анализа активности целлюлазы.
Ламинарии (из Ьапипапа άΐ§ΐΐ а! а). Поставщик: Еадта-Айпск Со. НФ. Νο. продукта: Ь 9634.
1,00% мас./об. раствор - раствор ламинарина (раствор субстрата в буфере 0,1М ацетате натрия, рН
5,0).
1,75 мл раствора ламинарина смешивали с 0,25 мл разведенного раствора фермента при 50°С в течение 10 мин, и реакцию останавливали добавлением 2 мл раствора ΌΝδ.
Стандартную кривую получали с использованием раствора глюкозы 0, 0,125, 0,25, 0,5 и 0,75 мг/мл.
Измеряли оптическую плотность при 540 нм (ΟΌ540 нм).
Расчет.
Активность рассчитывали следующим образом:
Т - с , 1 .„, 1 1 _
-х Ах-хЮ х —х-хО
Активность (ед.мл-1 или ед.г-1)= т 180.16 ν ι где Τ=ΔΟΌ640 нм ТЕСТ ΟΙ% нм ТЕСТ-ОШ-ю нм НУЛЬ; т - наклон стандартной кривой (приблизительно 1,0);
с - пересечение оси у стандартной кривой (всегда отрицательное и приблизительно -0,03);
180,16 - молекулярная масса глюкозы;
103 - для перевода в мкмоль;
А - анализируемый объем, мл;
V - объем фермента, мл; ΐ - время анализа, мин;
Ό - кратность разведения фермента (например, для 1 г, разведенного до 1 л, Ό=1000).
Анализ 4. Анализ арабиназы.
Принцип.
Анализ активности арабиназы основан на колориметрическом определении посредством измерения полученного увеличения количества восстанавливающих групп с использованием реагента 3,5динитросалициловой кислоты. Активность фермента рассчитывали по связи между концентрацией восстанавливающих групп в качестве арабинозных эквивалентов и оптической плотностью при 540 нм.
Анализ проводили при рН 3,5, но его можно проводить при различных значениях рН для дополнительной характеризации и спецификации ферментов.
Определение единицы.
Одну единицу активности арабиназы (арабинаназа (эндо-1,5-альфа-Ь-арабинаназа)) определяют как количество фермента, образующее 1 мкмоль арабинозных эквивалентов в минуту в условиях анализа (рН 3,5 (или как указано) и 50°С).
Материалы.
Арабинан сахарной свеклы Меда/уте.
Арабиноза §1§та А3131 М. V.: 150,1.
Ацетат натрия безводный чда. Поставщик: Мегск ЬЙ (ΒΌΗ), Νο. продукта: 10236. Μ.\ν.: 82,03.
Уксусная кислота (ледяная) чда. Поставщик: Мегск ЬЙ (ΒΌΗ), Νο. продукта: 10001. Μ.ν.: 60,05.
3,5-динитросалициловая кислота СРК (3,5-динитро-2-гидроксибензойная кислота). Поставщик: Мегск ЬЙ (ΒΌΗ), Νο. продукта: 28235.
Гранулы гидроксида натрия чда. Поставщик: Мегск ЬЙ (ΒΌΗ), Νο. продукта: 10252. Μ.ν.: 40,00 (+)-тартрат калия-натрия чда. Поставщик: Мегск ЬЙ (ΒΌΗ), Νο. продукта: 10219. МАС 282,22.
1,5% мас./об. раствор - раствор арабинана в буфере 0,1М ацетате натрия, рН 3,5 (раствор субстрата).
- 19 025703
Раствор 3,5-динитросалициловой кислоты (ΌΝ8). 20 г/л ΌΝ8 в буфере, содержащем 32 г/л гранул гидроксида натрия и 600 г/л (+)-тартрата калия-натрия.
Стандартный раствор арабиназы (0,50 мг/мл).
Способ.
Ферментный комплекс разводили с получением образцов и получали стандартную кривую для глюкозы с использованием концентраций арабиназы 0, 0,125, 0,25, 0,375 и 0,5 мг/мл.
0,25 мл раствора фермента смешивали с 1,75 мл раствора субстрата (1,5% мас./об.) при 50°С, и реакцию останавливали через 10 мин добавлением раствора ΌΝδ. За этим следовало нагревание до 95°С в течение 5 мин.
Измеряли оптическую плотность при 540 нм (ΟΌ540 нм) различных образцов.
Расчет.
Активность фермента рассчитывали следующим образом:
7-с . 1 ,Лз 1 1 _
-хАх-хЮ х —х-хО
Активность (ед.мл-1 или ед.г-1)= т 15013 ν 1 где Τ=ΔΟΌ540 нм ТЕСТ ОШ нм ТЕСТ-ОО540 нм НУЛЬ; т - наклон стандартной кривой (приблизительно 1,0);
с - пересечение оси у стандартной кривой (всегда отрицательное и приблизительно -0,02);
150,13 - молекулярная масса арабиназы;
103 - для перевода, мкмоль;
А - анализируемый объем, мл;
V - объем фермента, мл; ΐ - время анализа, мин;
Ό - действительная кратность разведения фермента (например, для 1 г, разведенного до 1 л, Ό=1000).
Анализ 5. Анализ арабинофуранозидазы.
Реакция, катализируемая α-Ν-арабинофуранозидазой, включает в себя гидролиз концевой связи аЬ-арабинозидов в невосстанавливающем остатке α-Ь-арабинофуранозида. Фермент действует на а-Ьарабинофуранозиды, α-Ь-арабинаны, содержащие (1,3)- и/или (1,5)-связи, арбиноксиланы и арабиногалактаны.
Анализ α-Ν-арабинофуранозидазы основан на ферментативном гидролизе п-нитрофенил-а-Ьарабинофуранозида. Анализ проводят дву хточечным способом, а не способом непрерывного мониторирования. Расчет активности фермента основан на измерениях, полученных только в начале и конце периода инкубации. Продукт реакции, п-нитрофенол, определяют колориметрически (после доведения рН). Активность фермента рассчитывают по связи между концентрацией п-нитрофенола и оптической плотностью при 400 нм.
Получение раствора разведенного фермента:
Получают все растворы ферментов из порошкообразных или жидких препаратов ферментов с помощью дистиллированной в стеклянной посуде воды. Минимизируют ошибки анализа при разведении, исключая большие ступени разведения, включающие малые объемы или массы. При получении разведений ферментов более точным является, даже в случае жидкого образца, взвешивание исходного образца фермента. Если это сделано, в случае жидких образцов, в связи с этим необходимо измерить удельную плотность жидкости при 20°С.
Поскольку анализ проводят двухточечным способом, а не способом непрерывного мониторирования, является важным способ обеспечения линейности в пределах периода инкубации с различными ферментными системами и в различных условиях. В условиях анализа, стандартных по отношению к концентрации субстрата, рН, температуре и времени анализа, показано, что анализ является линейным в диапазоне ΔΟ^540 нм ТЕСТ (Т)=0,20-1,50. Однако, при надлежащей производственной практике, анализ проводят в определенном диапазоне ΔΟ^540 нм ТЕСТ (Т)=0,400-0,800.
Способ.
Для каждого образца фермента исследование включает в себя три анализа: тестовые (ТЕСТ) анализы в двух повторах и анализ в нулевой точке (НУЛЬ). В данном способе описан анализ одного образца фермента.
| ТЕСТ | НУЛЬ | |
| Буфер 0,2 М ацетат натрия, рН 5,0 | 1,0 0 мл | 1,00 мл |
| Дистиллированная в стеклянной посуде вода | 1,00 мл | 1,00 мл |
| Раствор п-нитрофенил-а-Ь- арабинофураноеида | 1,00 мл | 1,00 мл |
0,25 мл раствора разведенного фермента добавляли к растворам при 50°С, реакцию останавливали
- 20 025703 через 10 мин добавлением 4 мл раствора 0,4М глицина, рН 10,8 (останавливающий реагент).
Оптическую плотность измеряли при 400 нм при 25°С по сравнению с нулевым значением для воды.
Определение ΟΌ400 нм ТЕСТ для измеренных в двух повторах ТЕСТ.
Определение ΟΌ400 нм НУЛЬ.
Расчет.
ΔΟϋ400 нм ТЕСТ (Т) °1Е нм ТЕСТ-ОО400 нм НУЛЬ
Единицы (мкмоль.мин-1)- 18300 «Ю© ί
Единицы г — \ П
Активность (ед.мл-1 или ед.г-1)- с где Τ-ΟΌ400 нм ТЕСТ-ОП400 нм НУЛЬ;
18300 - молярный коэффициент поглощения для п-нитрофенола (длина пути 1 см);
V - 7,25 (общий объем жидкости в тесте в мл), ΐ-10 мин;
ед.-1 мкмоль-мин-1;
Е-0,25 (объем разведенного образца фермента в мл);
Ό - кратность разведения фермента (например, для 1 г, разведенного до 1 л, Ό-1000).
Анализ 6. Анализ целлобиогидролазы.
Принцип.
Реакция, катализируемая целлобиогидролазой, включает в себя гидролиз 1,4-3-О-глюкозидных связей в целлюлозе и целлотетраозе с высвобождением целлобиозы с невосстанавливающих концов цепей.
Анализ целлобиогидролазы основан на ферментативном гидролизе п-нитрофенил-β-Όцеллобиопиранозида. Продукт реакции, п-нитрофенол, определяют колориметрически (после доведения рН). Активность фермента рассчитывают по связи между концентрацией п-нитрофенола и оптической плотностью при 400 нм.
Анализ проводят в пределах определенного линейного диапазона ΔΟΌ540 НМ ТЕСТ (Т)-0,400-0,800.
Способ.
Для каждого образца фермента исследование включает в себя три анализа: тестовые (ТЕСТ) анализы в двух повторах и анализ в нулевой точке (НУЛЬ). В данном способе описан анализ одного образца фермента.
| ТЕСТ | НУЛЬ | |
| Буфер 0,2 Н ацетат натрия, рН 5,0 | 1,00 мл | 1,00 мл |
| Дистиллированная в стеклянной посуде вода | 1,00 мл | 1,00 мл |
| Раствор п-нитрофенил-β-ϋ- целлобиопиранозида | 1,00 мл | 1,00 мл |
0,25 мл раствора разведенного фермента добавляли к тестируемому раствору при 50°С, через 30 мин 4 мл раствора 0,4М глицина, рН 10,8 (останавливающий реагент) добавляли в каждую пробирку.
Оптическую плотность измеряли при 20°С при 400 нм в стеклянной кювете 1 см по сравнению с нулевым значением для воды.
Определение ΟΌ400 нм ТЕСТ для измеренных в двух повторах ТЕСТ.
Определение ΟΌ400 нм НУЛЬ.
Расчет.
ΔΟϋ400 нм ТЕСТ (Т)-°О400 нм ТЕСТ-О0400 нм НУЛЬ
Г , V с . -к 16300' «зоо ”
Единицы (мкмоль.мин )Единицы >
Активность (ед.мл-1 или ед.г-1)где Τ-ΟΌ400 нм ТЕСТ-Ο^400 нм НУЛЬ;
18300 - молярный коэффициент поглощения для п-нитрофенола (длина пути 1 см); ν-7,25 (общий объем жидкости в тесте в мл);
1000 - для перевода в литры;
106 - для перевода в мкмоль;
!-30 (мин);
ед.-1 мкмоль-мин-1;
Е-0,25 (объем разведенного образца фермента в мл);
Ό - кратность разведения фермента (например, для 1 г, разведенного до 1 л, Ό-1000).
- 21 025703
Анализ 7. Анализ β-глюканазы.
Принцип.
Реакция, катализируемая эндо-1,3(4)-в-глюканазой, включает в себя эндогидролиз 1,3- или 1,4глюкозидных связей в β-Ό-глюканах, когда остаток глюкозы, восстанавливающая группа которого вовлечена в связь, подлежащую гидролизу, сам является замещенным в С-3. Субстраты включают в себя βΌ-глюканы, ламинарии и лихенин злаков. По определению этот фермент отличается от ЕС 3.2.1.39 (эндо1,3-в-глюканаза или ламинариназа).
Анализ эндо-1,3(4)-в-глюканазы основан на ферментативном гидролизе 1,3- или 1,4-глюкозидных связей в β-глюкане ячменя, β-1,3 (4)-глюкане. Продукты реакции (β-1, 3(4)-глюкановые олигосахариды) определяют колориметрически посредством измерения полученного увеличения концентрации восстанавливающих групп с использованием реагента 3,5-динитросалициловой кислоты. Активность фермента рассчитывают по связи между концентрацией восстанавливающих групп в качестве глюкозных эквивалентов и оптической плотности при 540 нм.
В этом анализе после добавления реагента ΌΝδ и перемешивания анализируемые пробирки помещали в баню с кипящей водой (минимум 95°С) и инкубировали точно 15 мин. Это отличается от анализов ферментов на основе ΌΝδ с другими субстратами, где период инкубации составляет 5 мин. Это изменение влияет также на диапазон значений ΔΘΌ540 нм ТЕСТ (Т), приемлемых для тестирования.
В то время как стандартный анализ проводят при рН 5,0 его можно проводить при различных значениях рН для дополнительной характеризации и спецификации ферментов. В этом случае изменяется только рН буферных растворов (указанных ниже).
Необходимые реагенты.
Во всех случаях, за исключением бета-глюкана, важными являются идентичность и чистота реагентов, а не поставщик.
Бета-глюкан (ячмень; средняя вязкость), Меда/уте Ый, по. продукта Р-ВСВМ, вязкость 20-30 сСт (2-3 х10-5 м2/с).
Ό-глюкоза чда, Мегск Ый (ΒΌΗ), Νο. продукта 10117, МАУ. 180,16.
Ацетат натрия безводный чда, Мегск Ый (ΒΌΗ), по. продукта 10236, МАУ. 82,03.
Уксусная кислота (ледяная) чда, Мегск Ый (ΒΌΗ), по. продукта 10001, МАУ. 60,05.
3,5-динитросалициловая кислота ОРК (3,5-динитро-2-гидроксибензойная кислота), Мегск Ый (ΒΌΗ), по. продукта 28235.
Гранулы гидроксида натрия чда, Мегск Ый (ΒΌΗ), по. продукта 10252, МАУ. 40,00.
(+)-тартрат калия-натрия чда, Мегск Ый (ΒΌΗ), по. продукта 10219, МАУ. 282,22.
Реагенты.
1,5% мас./об. раствор в буфере 0,1М ацетате натрия рН 5,0 бета-глюкан (ячмень).
Раствор 3,5-динитросалициловой кислоты (ΌΝδ): 10 г ΌΝδ, 16 г гранул гидроксида натрия, 300 г (+)-тартрата калия-натрия растворяли в 1000 мл дистиллированной в стеклянной посуде воды.
Буфер 1М ацетат натрия, рН 5,0.
Стандартный раствор глюкозы (1,000 мг/мл).
Способ.
Для каждого образца фермента исследование включает в себя три анализа: тестовые (ТЕСТ) анализы в двух повторах и анализ в нулевой точке (НУЛЬ). Необходима также стандартная кривая для глюкозы.
0,25 мл раствора разведенного фермента добавляли к 1,75 раствора бета-глюкана при 50°С, 2 мл раствора ΌΝδ добавляли через 10 мин, и пробирки помещали при 95°С минимум на 15 мин. Охлаждали до 25°С в воде.
Добавляли 10 мл дистиллированной в стеклянной посуде воды, и измеряли оптическую плотность при 540 нм (ΟΌ540 нм) с использованием кюветы с длиной пути 1 см.
Определение ΟΌ540 нм ТЕСТ для измеренных в двух повторах ТЕСТОВ.
Определение ΟΌ540 нм НУЛЬ.
Определение ΟΌ540 нм СТАНДАРТОВ для 0,125, 0,250, 0,500, 0,750 мг/мл глюкозы. СТАНДАРТЫ сравнивали с образцом СТАНДАРТ с 0,00 мг/мл глюкозы (или все сравнивали с водой).
Расчет.
Определение ΔΟΌ540 нм ТЕСТ (Т) ΟΙλ. нм ТЫ'Т-ΟΙλ, нм НУЛЬ.
Активность рассчитывали следующим образом:
Т-С * 1 ,п3 1 1 „
-х А х-х1 Ох — х-хО
Активность (ед.мл-1 или ед.г-1)= т 180.16 V ( где Т ΑΟΙΚ нм ТЕСТ=Ο^540 нм ТЕСТ-Ο^540 нм НУЛЬ; т - наклон стандартной кривой (приблизительно 1,0);
с - пересечение оси у стандартной кривой (всегда отрицательное и приблизительно -0,02);
180,16 - молекулярная масса глюкозы;
- 22 025703
103 - для перевода в мкмоль;
А - анализируемый объем в мл, использовали 2,00 мл;
V - объем фермента в мл, использовали 0,25 мл; ΐ - время анализа в минутах, использовали 10 мин;
И - кратность разведения фермента (например, для 1 г, разведенного до 1 л, И=1000).
Claims (14)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Ферментный комплекс для получения пивоваренного затора, где ферментный комплекс получен при комбинацииa) ферментного продукта экспрессии, обладающего активностью в-1,4-эндоглюкангидролазы, полученного при ферментации видов микроорганизмов из рода Тпсйобегта; иb) по меньшей мере одного фермента, полученного из гриба рода РетсШшт, выбранного из ксиланазы (ЕС 3.2.1.8), целлюгазы (ЕС 3.2.1.4) и β-глюканазы (ЕС 3.2.1.6), и где по меньшей мере приблизительно 61% активности в-1,4-эндоглюкангидролазы, как измерено ферментативным эндогидролизом 1,4-в-И-глюкозидных связей в карбоксиметилцеллюлозе, получают при ферментации микроорганизмов рода Тпсйобегта, как указано в а).
- 2. Ферментный комплекс по п.1, где указанный по меньшей мере один фермент, полученный из гриба рода РетсШшт, представляет собой ферментный продукт экспрессии, полученный при ферментации указанного гриба рода РетсШшт.
- 3. Ферментный комплекс по любому из пп.1 и 2, где ферментный продукт экспрессии, полученный при ферментации указанного гриба рода РетсШшт, содержит ксиланазу.
- 4. Ферментный комплекс по любому из пп.1-3, содержащий активность по меньшей мере одного фермента, выбранного из группы, состоящей из эндо-1,4-в-ксиланазы, эндо-1,3(4)-в-глюканазы, целлюлазы, ламинариназы, эндо-1,5-а-Ь-арабинаназы, β-Ό-глюкозилглюкогидролазы, β-ксилозидазы, целлобиогидролазы, глюкан-1,4-в-глюкозидазы, специфической для ксилоглюкана экзо-в-1,4-глюканазы и αΝ-арабинофуранозидазы.
- 5. Ферментный комплекс для получения пивоваренного затора, полученный при комбинацииa) по меньшей мере приблизительно 61% ферментного продукта экспрессии, обладающего активностью в-1,4-эндоглюкангидролазы, полученного при ферментации микроорганизмов рода Тпсйобегта; иb) менее чем приблизительно 39% ферментного продукта экспрессии, полученного при ферментации гриба из рода РетсШшт, выбранного из ксиланазы (ЕС 3.2.1.8), целлюлазы (ЕС 3.2.1.4) и βглюканазы (ЕС 3.2.1.6); где процентные соотношения основаны на активности β-1,4эндоглюкангидролазы, как измерено ферментативным эндогидролизом 1,4-β-^-глюкозидных связей в карбоксиметилцеллюлозе.
- 6. Ферментный комплекс по любому из пп.1-5, где указанный ферментный продукт экспрессии, полученный при ферментации микроорганизмов рода Тпсйобегта, происходит из микроорганизмов вида Тпсйобегта геекей
- 7. Ферментный комплекс по любому из пп.1-6, где указанный ферментный продукт экспрессии, полученный при ферментации гриба рода РетсШшт, происходит из отдельной культуры вида РетсШшт ИитсШокит.
- 8. Ферментный комплекс по любому из пп.1-7, обладающий активностью фермента по меньшей мере приблизительно 3000, например, по меньшей мере приблизительно 4000, например, по меньшей мере приблизительно 5000, например, по меньшей мере приблизительно 6000, например, по менышей мере приблизительно 7000 ед./г как измерено ферментативным эндогидролизом 1,4-β-^-глюкозидных связей в карбоксиметилцеллюлозе, полученного при ферментации рода Тпсйобегта.
- 9. Ферментный комплекс по любому из пп.1-8, обладающий общей активностью фермента по меньшей мере приблизительно 4000 ед./г, как измерено ферментативным эндогидролизом 1,4-β-^-глюкозидных связей в карбоксиметилцеллюлозе.
- 10. Способ получения ферментного комплекса по любому из пп.1-9, где способ содержит стадииa) ферментации микроорганизмов рода Тпсйобегта в среде для получения ферментационного бульона;b) ферментации микроорганизмов рода РетсШшт в среде для получения ферментационного бульона; иc) выделения и комбинации каждого ферментного комплекса, полученного на стадиях а) и Ь), в форме бесклеточного бульона после указанных ферментаций для получения ферментного комплекса, где по меньшей мере приблизительно 61% активности β-1,4-эндоглюкангидролазы, как измерено ферментативным эндогидролизом 1,4-β-^-глюкозидных связей в карбоксиметилцеллюлозе, получают при ферментации рода Тпсйобегта, полученных в стадии а).
- 11. Ферментный комплекс для получения пивоваренного затора, полученный способом по п.10.
- 12. Применение ферментного комплекса по любому из пп.1-9 при производстве пивоваренного за- 23 025703 тора, таком как производство солодового напитка, пива, например солодового пива, и/или в производстве виски, и/или в производстве биотоплива.
- 13. Применение по п.12 для фильтрации пивного сусла, и/или затора, и/или фильтрации пива.
- 14. Применение ферментного комплекса по любому из пп.1-9 при производстве фруктового сока, вина, переработке зерна, производстве топливного спирта и питьевого спирта.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US17616209P | 2009-05-07 | 2009-05-07 | |
| EP09159680 | 2009-05-07 | ||
| PCT/EP2010/056259 WO2010128140A1 (en) | 2009-05-07 | 2010-05-07 | Enzyme complex from trichoderma reesei and p. funiculosum enzymes |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201171364A1 EA201171364A1 (ru) | 2012-04-30 |
| EA025703B1 true EA025703B1 (ru) | 2017-01-30 |
Family
ID=41017111
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201171364A EA025703B1 (ru) | 2009-05-07 | 2010-05-07 | Ферментный комплекс для получения пивоваренного затора |
Country Status (13)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US10119129B2 (ru) |
| EP (2) | EP2427550B1 (ru) |
| JP (1) | JP5876823B2 (ru) |
| CN (1) | CN102482657B (ru) |
| AR (1) | AR076661A1 (ru) |
| AU (1) | AU2010244397B2 (ru) |
| BR (1) | BRPI1012166B1 (ru) |
| CA (1) | CA2761008C (ru) |
| EA (1) | EA025703B1 (ru) |
| MX (1) | MX2011011724A (ru) |
| PL (1) | PL2427550T3 (ru) |
| UA (1) | UA106372C2 (ru) |
| WO (1) | WO2010128140A1 (ru) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN102363772B (zh) * | 2011-08-23 | 2013-03-20 | 北京挑战生物技术有限公司 | 一种酸性纤维素酶egi及其基因和应用 |
| EA201790153A3 (ru) * | 2011-09-14 | 2017-09-29 | ДюПон НЬЮТРИШН БАЙОСАЙЕНСИЗ АпС | Ферменты |
| CN104334738B (zh) | 2012-03-30 | 2019-01-29 | 诺维信北美公司 | 生产发酵产物的方法 |
| ES2935920T3 (es) | 2012-03-30 | 2023-03-13 | Novozymes North America Inc | Procesos de elaboración de productos de fermentación |
| WO2013166405A2 (en) | 2012-05-04 | 2013-11-07 | Archer Daniels Midland Company | Cellulolytic enzyme enhancement of dry grind corn processing and ethanol production |
| CN103194345B (zh) * | 2013-03-06 | 2014-06-18 | 湖南鸿鹰生物科技有限公司 | 一种新型高效啤酒固体复合酶 |
| WO2014140165A1 (en) | 2013-03-14 | 2014-09-18 | Dsm Ip Assets B.V. | Cell wall deconstruction enzymes of paecilomyces byssochlamydoides and uses thereof |
| WO2015110504A1 (en) * | 2014-01-23 | 2015-07-30 | Novozymes A/S | Variants of gh family 5 endoglucanase and polynucleotides encoding same |
| CN104911163B (zh) * | 2015-07-10 | 2018-03-23 | 青岛蔚蓝生物集团有限公司 | 一种耐高温木聚糖酶突变体及其应用 |
| JP2017038604A (ja) * | 2016-09-28 | 2017-02-23 | デュポン ニュートリション バイオサイエンシス エーピーエス | 酵素 |
| RU2733294C1 (ru) | 2016-11-18 | 2020-10-01 | Балтика Брюэрис - Парт Оф Зе Карлсберг Груп | Способ получения зернового солода и солодовый продукт, полученный таким способом |
| WO2024163288A1 (en) * | 2023-02-01 | 2024-08-08 | International N&H Denmark Aps | Novel methods and compositions for improving mash filterabililty and yield in brewing |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997042301A1 (en) * | 1996-05-03 | 1997-11-13 | Gist-Brocades B.V. | Method for making wort having improved filterability and/or increased yield |
| WO1999057325A2 (en) * | 1998-05-06 | 1999-11-11 | Rhone-Poulenc Animal Nutrition S.A. | Enzymes mixture |
| WO2004087889A1 (en) * | 2003-04-04 | 2004-10-14 | Novozymes A/S | Mash viscosity reduction |
| WO2005059084A1 (en) * | 2003-12-19 | 2005-06-30 | Novozymes A/S | Mashing process |
| WO2005118769A1 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Novozymes A/S | Mashing process and enzyme composition useful therein |
| WO2008023060A1 (en) * | 2006-08-25 | 2008-02-28 | Novozymes A/S | Fermentation process |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EA000002B1 (ru) | 1996-05-07 | 1997-09-30 | Владимир Михайлович Шемякин | Алкогольный напиток и способ его получения |
| DE19732751A1 (de) | 1997-07-30 | 1999-02-04 | Henkel Kgaa | Neue Beta-Glucanase aus Bacillus |
-
2010
- 2010-05-07 EA EA201171364A patent/EA025703B1/ru not_active IP Right Cessation
- 2010-05-07 PL PL10721415T patent/PL2427550T3/pl unknown
- 2010-05-07 JP JP2012509050A patent/JP5876823B2/ja active Active
- 2010-05-07 MX MX2011011724A patent/MX2011011724A/es active IP Right Grant
- 2010-05-07 AU AU2010244397A patent/AU2010244397B2/en active Active
- 2010-05-07 EP EP10721415.7A patent/EP2427550B1/en active Active
- 2010-05-07 US US13/318,850 patent/US10119129B2/en active Active
- 2010-05-07 EP EP18206607.6A patent/EP3524674A1/en not_active Withdrawn
- 2010-05-07 CN CN201080027095.6A patent/CN102482657B/zh active Active
- 2010-05-07 BR BRPI1012166-8A patent/BRPI1012166B1/pt active IP Right Grant
- 2010-05-07 AR ARP100101565A patent/AR076661A1/es active IP Right Grant
- 2010-05-07 WO PCT/EP2010/056259 patent/WO2010128140A1/en active Application Filing
- 2010-05-07 CA CA2761008A patent/CA2761008C/en active Active
- 2010-07-05 UA UAA201114463A patent/UA106372C2/ru unknown
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1997042301A1 (en) * | 1996-05-03 | 1997-11-13 | Gist-Brocades B.V. | Method for making wort having improved filterability and/or increased yield |
| WO1999057325A2 (en) * | 1998-05-06 | 1999-11-11 | Rhone-Poulenc Animal Nutrition S.A. | Enzymes mixture |
| WO2004087889A1 (en) * | 2003-04-04 | 2004-10-14 | Novozymes A/S | Mash viscosity reduction |
| WO2005059084A1 (en) * | 2003-12-19 | 2005-06-30 | Novozymes A/S | Mashing process |
| WO2005118769A1 (en) * | 2004-06-03 | 2005-12-15 | Novozymes A/S | Mashing process and enzyme composition useful therein |
| WO2008023060A1 (en) * | 2006-08-25 | 2008-02-28 | Novozymes A/S | Fermentation process |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| ANONYMOUS: "Danisco's food & beverage enzyme team to launch LAMINEX Super 3G, a new brewing enzyme", pages 1 - 3, XP002545726, Retrieved from the Internet <URL:http://www.danisco.com/cms/connect/corporate/media%20relations/news/archive/2009/may/businessupdate_289_en.htm> [retrieved on 20091005] * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| US10119129B2 (en) | 2018-11-06 |
| AR076661A1 (es) | 2011-06-29 |
| UA106372C2 (en) | 2014-08-26 |
| CN102482657B (zh) | 2015-02-25 |
| BRPI1012166A2 (pt) | 2015-09-22 |
| MX2011011724A (es) | 2011-12-08 |
| WO2010128140A1 (en) | 2010-11-11 |
| EA201171364A1 (ru) | 2012-04-30 |
| AU2010244397A1 (en) | 2011-11-24 |
| CA2761008C (en) | 2019-06-25 |
| US20120270263A9 (en) | 2012-10-25 |
| CN102482657A (zh) | 2012-05-30 |
| BRPI1012166B1 (pt) | 2020-10-27 |
| EP2427550A1 (en) | 2012-03-14 |
| JP5876823B2 (ja) | 2016-03-02 |
| JP2012525831A (ja) | 2012-10-25 |
| EP2427550B1 (en) | 2018-12-26 |
| PL2427550T3 (pl) | 2019-09-30 |
| CA2761008A1 (en) | 2010-11-11 |
| EP3524674A1 (en) | 2019-08-14 |
| US20120058510A1 (en) | 2012-03-08 |
| AU2010244397B2 (en) | 2013-12-19 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA025703B1 (ru) | Ферментный комплекс для получения пивоваренного затора | |
| JP6084617B2 (ja) | 酵素 | |
| RU2376347C2 (ru) | Способ затирания | |
| US20150337247A1 (en) | Enzymes | |
| DK2379717T3 (en) | A process for the preparation of an enzyme product, | |
| DK2427550T3 (en) | ENZYM COMPLEX FROM TRICHODERMA REESEI AND P. FUNICULOSUM ENZYMER | |
| JP2017038604A (ja) | 酵素 | |
| Makuru | Evaluation of recombinant yeast strains expressing a xylanase, amylase or an endo-glucanase in brewing |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM |