EA019043B1 - Новый конъюгат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (г-ксф) с полиэтиленгликолем - Google Patents
Новый конъюгат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (г-ксф) с полиэтиленгликолем Download PDFInfo
- Publication number
- EA019043B1 EA019043B1 EA201101035A EA201101035A EA019043B1 EA 019043 B1 EA019043 B1 EA 019043B1 EA 201101035 A EA201101035 A EA 201101035A EA 201101035 A EA201101035 A EA 201101035A EA 019043 B1 EA019043 B1 EA 019043B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- csf
- conjugate
- peg
- unmodified
- granulocyte colony
- Prior art date
Links
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 title claims description 31
- 239000002202 Polyethylene glycol Substances 0.000 title claims description 5
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 title 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 claims abstract description 91
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims abstract description 24
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 24
- 229940079593 drug Drugs 0.000 claims abstract description 16
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 13
- 208000004235 neutropenia Diseases 0.000 claims abstract description 10
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims abstract description 10
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 claims abstract 8
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 5
- 230000006320 pegylation Effects 0.000 claims description 5
- FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N D-Mannitol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-KVTDHHQDSA-N 0.000 claims description 3
- 229930195725 Mannitol Natural products 0.000 claims description 3
- 239000000594 mannitol Substances 0.000 claims description 3
- 235000010355 mannitol Nutrition 0.000 claims description 3
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 claims description 3
- 229920000136 polysorbate Polymers 0.000 claims description 3
- 235000017281 sodium acetate Nutrition 0.000 claims description 3
- BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 2-(3-fluorophenyl)-1,3-oxazole-4-carbaldehyde Chemical compound FC1=CC=CC(C=2OC=C(C=O)N=2)=C1 BDKLKNJTMLIAFE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 229960000583 acetic acid Drugs 0.000 claims description 2
- 210000003714 granulocyte Anatomy 0.000 claims description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 2
- 229940087562 sodium acetate trihydrate Drugs 0.000 claims description 2
- 239000008215 water for injection Substances 0.000 claims description 2
- LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N Ethylene glycol Chemical compound OCCO LYCAIKOWRPUZTN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 2
- 235000011054 acetic acid Nutrition 0.000 claims 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 claims 1
- 230000002281 colonystimulating effect Effects 0.000 claims 1
- 125000003827 glycol group Chemical group 0.000 claims 1
- WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N hydroxyacetaldehyde Natural products OCC=O WGCNASOHLSPBMP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 229960001855 mannitol Drugs 0.000 claims 1
- 229950008882 polysorbate Drugs 0.000 claims 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 claims 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 abstract description 4
- 102100039619 Granulocyte colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 93
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 27
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 27
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 27
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 16
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 15
- 101000746367 Homo sapiens Granulocyte colony-stimulating factor Proteins 0.000 description 13
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 13
- 238000001819 mass spectrum Methods 0.000 description 13
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 12
- 239000002158 endotoxin Substances 0.000 description 10
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 9
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 9
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 8
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 8
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 8
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 8
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 8
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 8
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 7
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 7
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 7
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 7
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 7
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 7
- 239000007974 sodium acetate buffer Substances 0.000 description 7
- 239000002594 sorbent Substances 0.000 description 7
- WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N Acetonitrile Chemical compound CC#N WEVYAHXRMPXWCK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 6
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 6
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 6
- MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N dodecyl hydrogen sulfate Chemical compound CCCCCCCCCCCCOS(O)(=O)=O MOTZDAYCYVMXPC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 229940043264 dodecyl sulfate Drugs 0.000 description 6
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 6
- 238000004007 reversed phase HPLC Methods 0.000 description 6
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 5
- 230000009471 action Effects 0.000 description 5
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 5
- 229920001427 mPEG Polymers 0.000 description 5
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 5
- 238000002264 polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 5
- -1 polyoxyethylene Polymers 0.000 description 5
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 5
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 5
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 4
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 4
- 108010029961 Filgrastim Proteins 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 229960004177 filgrastim Drugs 0.000 description 4
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 4
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 4
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 4
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 4
- FDRPZJWMPZUHBN-UHFFFAOYSA-N triazin-2-ium;chloride Chemical compound Cl.C1=CN=NN=C1 FDRPZJWMPZUHBN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N (2,5-dioxopyrrolidin-1-yl) hydrogen carbonate Chemical compound OC(=O)ON1C(=O)CCC1=O ZJIFDEVVTPEXDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 3
- 108010062867 Lenograstim Proteins 0.000 description 3
- MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N Oxalic acid Chemical compound OC(=O)C(O)=O MUBZPKHOEPUJKR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920002684 Sepharose Polymers 0.000 description 3
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 3
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 3
- 239000007853 buffer solution Substances 0.000 description 3
- 238000011088 calibration curve Methods 0.000 description 3
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 3
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N citric acid Chemical compound OC(=O)CC(O)(C(O)=O)CC(O)=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 3
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 3
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 3
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 3
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 3
- 150000002500 ions Chemical class 0.000 description 3
- 229960002618 lenograstim Drugs 0.000 description 3
- 201000002364 leukopenia Diseases 0.000 description 3
- 231100001022 leukopenia Toxicity 0.000 description 3
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 3
- 239000000546 pharmaceutical excipient Substances 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 150000005846 sugar alcohols Chemical class 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 2,5-dihydroxybenzoic acid Chemical compound OC(=O)C1=CC(O)=CC=C1O WXTMDXOMEHJXQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 2-amino-2-(hydroxymethyl)propane-1,3-diol;hydron;chloride Chemical compound Cl.OCC(N)(CO)CO QKNYBSVHEMOAJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N Ascorbic acid Chemical compound OC[C@H](O)[C@H]1OC(=O)C(O)=C1O CIWBSHSKHKDKBQ-JLAZNSOCSA-N 0.000 description 2
- ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N Butyraldehyde Chemical class CCCC=O ZTQSAGDEMFDKMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 2
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 201000003793 Myelodysplastic syndrome Diseases 0.000 description 2
- 108091006006 PEGylated Proteins Proteins 0.000 description 2
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010015078 Pregnancy-Associated alpha 2-Macroglobulins Proteins 0.000 description 2
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 108010090804 Streptavidin Proteins 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 2
- 150000001299 aldehydes Chemical class 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 description 2
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 2
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 2
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 2
- 229920005549 butyl rubber Polymers 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 238000005341 cation exchange Methods 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 239000003638 chemical reducing agent Substances 0.000 description 2
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 2
- 230000003749 cleanliness Effects 0.000 description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 2
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 2
- 239000003599 detergent Substances 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 239000000975 dye Substances 0.000 description 2
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 2
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 2
- RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N glutathione Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(=O)N[C@@H](CS)C(=O)NCC(O)=O RWSXRVCMGQZWBV-WDSKDSINSA-N 0.000 description 2
- 150000004676 glycans Chemical class 0.000 description 2
- 231100000086 high toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 230000003301 hydrolyzing effect Effects 0.000 description 2
- 239000003018 immunosuppressive agent Substances 0.000 description 2
- 229940124589 immunosuppressive drug Drugs 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 2
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 2
- 238000011835 investigation Methods 0.000 description 2
- 238000004255 ion exchange chromatography Methods 0.000 description 2
- 238000012454 limulus amebocyte lysate test Methods 0.000 description 2
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 2
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 2
- 125000003588 lysine group Chemical class [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 2
- 238000004949 mass spectrometry Methods 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 150000002772 monosaccharides Chemical class 0.000 description 2
- 230000003039 myelosuppressive effect Effects 0.000 description 2
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 2
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 2
- 229920006254 polymer film Polymers 0.000 description 2
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 2
- 229920001282 polysaccharide Polymers 0.000 description 2
- 239000005017 polysaccharide Substances 0.000 description 2
- 229920000036 polyvinylpyrrolidone Polymers 0.000 description 2
- 235000013855 polyvinylpyrrolidone Nutrition 0.000 description 2
- QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N propylparaben Chemical compound CCCOC(=O)C1=CC=C(O)C=C1 QELSKZZBTMNZEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012460 protein solution Substances 0.000 description 2
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 2
- 150000008163 sugars Chemical class 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 150000003918 triazines Chemical class 0.000 description 2
- DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N β‐Mercaptoethanol Chemical compound OCCS DGVVWUTYPXICAM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 2-acetyloxypropanoic acid Chemical compound OC(=O)C(C)OC(C)=O WTLNOANVTIKPEE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 2-methylbutyric acid Chemical compound CCC(C)C(O)=O WLAMNBDJUVNPJU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- QXZGLTYKKZKGLN-UHFFFAOYSA-N 4-(2,5-dioxopyrrolidin-1-yl)oxy-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC(=O)CCC(=O)ON1C(=O)CCC1=O QXZGLTYKKZKGLN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M Butyrate Chemical compound CCCC([O-])=O FERIUCNNQQJTOY-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000222122 Candida albicans Species 0.000 description 1
- 206010007134 Candida infections Diseases 0.000 description 1
- 208000025212 Constitutional neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 241000699802 Cricetulus griseus Species 0.000 description 1
- 208000000280 Cyclic neutropenia Diseases 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N D-Glucitol Natural products OC[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-FSIIMWSLSA-N 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N D-arabinitol Chemical compound OC[C@@H](O)C(O)[C@H](O)CO HEBKCHPVOIAQTA-QWWZWVQMSA-N 0.000 description 1
- FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N D-glucitol Chemical compound OC[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)CO FBPFZTCFMRRESA-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 description 1
- 229920002307 Dextran Polymers 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N Dextrotartaric acid Chemical compound OC(=O)[C@H](O)[C@@H](O)C(O)=O FEWJPZIEWOKRBE-JCYAYHJZSA-N 0.000 description 1
- KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N EDTA Chemical compound OC(=O)CN(CC(O)=O)CCN(CC(O)=O)CC(O)=O KCXVZYZYPLLWCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N Fumaric acid Chemical compound OC(=O)\C=C\C(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-OWOJBTEDSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 1
- 108010024636 Glutathione Proteins 0.000 description 1
- SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N Hexa-Ac-myo-Inositol Natural products CC(=O)OC1C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C(OC(C)=O)C1OC(C)=O SQUHHTBVTRBESD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 1
- 206010051645 Idiopathic neutropenia Diseases 0.000 description 1
- 206010052210 Infantile genetic agranulocytosis Diseases 0.000 description 1
- 108010002386 Interleukin-3 Proteins 0.000 description 1
- 102100039064 Interleukin-3 Human genes 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N L-histidine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N L-threonine Chemical compound C[C@@H](O)[C@H](N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-GBXIJSLDSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241001529936 Murinae Species 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 229920003171 Poly (ethylene oxide) Polymers 0.000 description 1
- NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N Propionic aldehyde Chemical group CCC=O NBBJYMSMWIIQGU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N Raffinose Natural products O(C[C@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O[C@@]2(CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O1)[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-RMMQSMQOSA-N 0.000 description 1
- 102000007056 Recombinant Fusion Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010008281 Recombinant Fusion Proteins Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M Sodium acetate Chemical compound [Na+].CC([O-])=O VMHLLURERBWHNL-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N Sulfur Chemical compound [S] NINIDFKCEFEMDL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N Tartaric acid Natural products [H+].[H+].[O-]C(=O)C(O)C(O)C([O-])=O FEWJPZIEWOKRBE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- 208000007536 Thrombosis Diseases 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N UNPD196149 Natural products OC1C(O)C(CO)OC1(CO)OC1C(O)C(O)C(O)C(COC2C(C(O)C(O)C(CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- 239000008351 acetate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000013543 active substance Substances 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 125000000217 alkyl group Chemical group 0.000 description 1
- XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N aluminium Chemical compound [Al] XAGFODPZIPBFFR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052782 aluminium Inorganic materials 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 210000004102 animal cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000000843 anti-fungal effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 229940121375 antifungal agent Drugs 0.000 description 1
- 239000003963 antioxidant agent Substances 0.000 description 1
- 235000006708 antioxidants Nutrition 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000010323 ascorbic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960005070 ascorbic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011668 ascorbic acid Substances 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 238000009534 blood test Methods 0.000 description 1
- 239000001045 blue dye Substances 0.000 description 1
- 238000009835 boiling Methods 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 238000010322 bone marrow transplantation Methods 0.000 description 1
- UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N bromophenol blue Chemical compound C1=C(Br)C(O)=C(Br)C=C1C1(C=2C=C(Br)C(O)=C(Br)C=2)C2=CC=CC=C2S(=O)(=O)O1 UDSAIICHUKSCKT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000006172 buffering agent Substances 0.000 description 1
- 238000004364 calculation method Methods 0.000 description 1
- 201000003984 candidiasis Diseases 0.000 description 1
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 1
- 239000002738 chelating agent Substances 0.000 description 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 210000004978 chinese hamster ovary cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 238000004590 computer program Methods 0.000 description 1
- 239000006184 cosolvent Substances 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 150000004985 diamines Chemical class 0.000 description 1
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 1
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 1
- 150000002016 disaccharides Chemical class 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 1
- 231100000673 dose–response relationship Toxicity 0.000 description 1
- 239000006196 drop Substances 0.000 description 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 1
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 1
- 230000007717 exclusion Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 239000004811 fluoropolymer Substances 0.000 description 1
- 229920002313 fluoropolymer Polymers 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000012362 glacial acetic acid Substances 0.000 description 1
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 1
- 229960003180 glutathione Drugs 0.000 description 1
- 150000002337 glycosamines Chemical class 0.000 description 1
- 150000004820 halides Chemical class 0.000 description 1
- 230000000633 hematostimulatory effect Effects 0.000 description 1
- HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N histidine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CN=CN1 HNDVDQJCIGZPNO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052739 hydrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 229920001477 hydrophilic polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N inositol Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O)[C@@H]1O CDAISMWEOUEBRE-GPIVLXJGSA-N 0.000 description 1
- 229960000367 inositol Drugs 0.000 description 1
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 230000035800 maturation Effects 0.000 description 1
- 238000002483 medication Methods 0.000 description 1
- HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N meso ribitol Natural products OCC(O)C(O)C(O)CO HEBKCHPVOIAQTA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 1
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 1
- 150000007522 mineralic acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N monothioglycerol Chemical compound OCC(O)CS PJUIMOJAAPLTRJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 description 1
- 239000002736 nonionic surfactant Substances 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000006408 oxalic acid Nutrition 0.000 description 1
- 206010033675 panniculitis Diseases 0.000 description 1
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 description 1
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N phenyl(114C)methanol Chemical compound O[14CH2]C1=CC=CC=C1 WVDDGKGOMKODPV-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 1
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920005862 polyol Polymers 0.000 description 1
- 150000003077 polyols Chemical class 0.000 description 1
- 229940068977 polysorbate 20 Drugs 0.000 description 1
- 229940068965 polysorbates Drugs 0.000 description 1
- 239000001267 polyvinylpyrrolidone Substances 0.000 description 1
- 239000003755 preservative agent Substances 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 230000000069 prophylactic effect Effects 0.000 description 1
- 239000004405 propyl p-hydroxybenzoate Substances 0.000 description 1
- 235000010232 propyl p-hydroxybenzoate Nutrition 0.000 description 1
- 229960003415 propylparaben Drugs 0.000 description 1
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 1
- 230000002797 proteolythic effect Effects 0.000 description 1
- 229940024999 proteolytic enzymes for treatment of wounds and ulcers Drugs 0.000 description 1
- MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N raffinose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO[C@@H]2[C@@H]([C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O2)O)O1 MUPFEKGTMRGPLJ-ZQSKZDJDSA-N 0.000 description 1
- 238000005932 reductive alkylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N scyllo-inosotol Natural products OC1C(O)C(O)C(O)C(O)C1O CDAISMWEOUEBRE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000001632 sodium acetate Substances 0.000 description 1
- BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N sodium cyanoborohydride Chemical compound [Na+].[B-]C#N BEOOHQFXGBMRKU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Substances [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000000600 sorbitol Substances 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M stearalkonium chloride Chemical compound [Cl-].CCCCCCCCCCCCCCCCCC[N+](C)(C)CC1=CC=CC=C1 SFVFIFLLYFPGHH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 238000011146 sterile filtration Methods 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 238000003860 storage Methods 0.000 description 1
- 210000004304 subcutaneous tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L succinate(2-) Chemical compound [O-]C(=O)CCC([O-])=O KDYFGRWQOYBRFD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 229910052717 sulfur Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011593 sulfur Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011975 tartaric acid Substances 0.000 description 1
- 235000002906 tartaric acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229940035024 thioglycerol Drugs 0.000 description 1
- VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N trans-butenedioic acid Natural products OC(=O)C=CC(O)=O VZCYOOQTPOCHFL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000004043 trisaccharides Chemical class 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045136 urea Drugs 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 238000005303 weighing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- C07K14/52—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- C07K14/53—Colony-stimulating factor [CSF]
- C07K14/535—Granulocyte CSF; Granulocyte-macrophage CSF
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
- A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
- A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
- A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
- A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Toxicology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Abstract
Настоящее изобретение относится к фармацевтике и медицине, а именно к новым физиологически активным конъюгатам гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ) общей формулыгде n - целые значения от 681 до 1000; m представляет собой целое число ≥4; NαН-Г-КСФ представляет собой гранулоцитарный колониестимулирующий фактор. Также изобретение относится к лекарственным средствам, содержащим заявляемый конъюгат формулы (I), фармацевтическим композициям, применению конъюгата формулы (I) для получения лекарственного средства и лекарственным средствам, обладающим активностью гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, способу профилактики и/или лечения нейтропении, контейнеру, включающему фармацевтическую композицию или лекарственное средство, и набору.
Description
Настоящее изобретение относится к фармацевтике и медицине, а именно к новым физиологически активным конъюгатам гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (Г-КСФ), в частности к новым конъюгатам Г-КСФ с полиэтиленгликолем, пригодным для медицинского применения, например для лечения лейкопений, преимущественно различных видов нейтропений у больных, получающих миелосупрессивную химиотерапию при онкологических заболеваниях, для лечения миелодиспластического синдрома, улучшения переносимости иммуносупрессивных препаратов при пересадке костного мозга, улучшения иммунного статуса у пациентов, страдающих СПИД и другими инфекциями.
Г-КСФ является гемопоэтическим фактором роста, стимулирующим пролиферацию, дифференцировку и созревание гранулоцитов (Мс1са1Г. 1992). Введение экзогенного Г-КСФ вызывает быстрое, специфичное и дозозависимое увеличение нейтрофилов в периферической крови (\Ме11е е! а1., 1985; Найипд е! а1., 1995).
Ген Г-КСФ человека был клонирован и экспрессирован в бактериальных и животных клетках, в результате были получены и очищены различные препараты рекомбинантных Г-КСФ (№1§а1а е! а1., 1986; 8онха е! а1.,1986; Коша18и е! а1., 1987).
Известны два препарата рекомбинантных Г-КСФ человека - филграстим и ленограстим, полученные из клеток Е.сой и клеток китайского хомячка соответственно. Филграстим состоит из 175 аминокислот, имеет ту же аминокислотную последовательность, что и природный белок, но содержит дополнительный остаток метионина на Ν-конце молекулы. Ленограстим состоит из 174 аминокислот, его аминокислотная последовательность полностью соответствует таковой природного Г-КСФ человека.
Лекарственные препараты, содержащие рекомбинантный человеческий Г-КСФ (рчГ-Г-КСФ), применяются в клинической практике для лечения различных лейкопений, в частности нейтропений, возникающих после химиотерапии, идиопатической, врожденной и циклической нейтропений, для лечения тяжелых инфекций в комбинации с антибиотиками, а также нейтропений у больных СПИДом (Мойпеих, 2004).
При клиническом применении эффективность действия препаратов, содержащих рчГ-КСФ, ограничена быстрым всасыванием из подкожных тканей, относительно низкой стабильностью, коротким периодом полувыведения, высокой иммуногенностью и токсичностью (Машковский, 2006; бе \νίί е! а1., 1996). В результате, использование рчГ-КСФ требует ежедневного введения и проведения неоднократного мониторинга эффективности, в данном случае - клинического анализа крови с подсчетом лейкоцитарной формулы.
Терапевтическая эффективность препаратов Г-КСФ может быть повышена при использовании препаратов пролонгированного действия, в которых нативная молекула белка химически связана с монометокси полиэтиленгликолем (мПЭГ). ПЭГилирование Г-КСФ приводит к улучшению фармакокинетики; увеличению времени полувыведения, уменьшению клиренса, снижению колебаний концентрации в крови; снижению иммуногенности и токсичности, увеличению активности ίη у1уо, увеличению стабильности (МоБпеих, 2003; Мойпеих, 2004).
Биологические свойства конъюгатов ПЭГ -Г-КСФ в значительной степени зависят от молекулярной массы и типа используемых активированных мПЭГ, функциональные группы которых различаются по способности модифицировать различные аминокислотные остатки белка и по типу образуемых с белком химических связей (КоЬейк е! а1., 2002). При получении ПЭГилированных белков наиболее широкое применение нашли активированные мПЭГи, способные связываться со свободными аминогруппами белков (сукцинимидилкарбонатные, сукцинимидилсукцинатные, трезилатные и др).
Из уровня техники известны различные конъюгаты ПЭГ-Г-КСФ.
В патенте И8 2007/0014762 описано получение конъюгатов ПЭГ-Г-КСФ с использованием различных активированных мПЭГ с молекулярной массой 5000 Да, в частности мПЭГ-сукцинимидил бутаноата, мПЭГ -сукцинимидил пропионата, мПЭГ-сукцинимидил α-метилбутаноата. Для получения конъюгата использовали рчГ-КСФ, полученный из клеток СНО (ленограстим), содержащий несколько точечных замен аминокислот в различных положениях. Реакцию конъюгирования проводили при рН 7-9. Полученный конъюгат ПЭГ-Г-КСФ состоял из нескольких позиционных изомеров, в которых ПЭГ связывался с эпсилон-аминогруппами лизинов и с альфа-аминогруппой Ν-концевой аминокислоты. Очистку полученного конъюгата проводили при помощи метода ионообменной хроматографии с использованием сорбента 8Р-сефароза. Данные об активности и чистоте полученных конъюгатов в патенте отсутствуют.
Недостатками полученного конъюгата являются:
1) низкая молекулярная масса мПЭГ, присоединенного к Г-КСФ;
2) образование нескольких позиционных изомеров, в которых ПЭГ был связан с молекулой Г-КСФ через свободные аминогруппы различных лизинов и Ν-концевой аминокислоты.
В патенте ЕР 0401384 описаны конъюгаты ПЭГ-Г-КСФ, полученные при использовании мПЭГ линейной и разветвленной структуры с молекулярной массой 4500-10000 Да, активированных различными реактивными группами (сукцинимидилкарбонатной, триазинхлоридной и полиоксиэтилендиаминовой). Полученные конъюгаты ПЭГ-Г-КСФ обладали пролонгированным действием ίη у1уо, причем степень пролонгации зависела от молекулярной массы присоединенного ПЭГ. Время полужизни конъюгата ПЭГ(10000)-Г-КСФ и ^модифицированного Г-КСФ составляло 7,05 и 1,79 ч соответственно.
- 1 019043
Недостатками полученных конъюгатов являются:
1) сукцинимидилкарбонатные производные мПЭГ могут связываться со всеми стерически доступными свободными аминогруппами белка, в результате чего получаемые конъюгаты ПЭГ -Г -КСФ состоят из нескольких позиционных изомеров;
2) триазинхлоридные производные мПЭГ помимо свободных аминогрупп способны связываться с функциональными группами других аминокислот - серина, тирозина, треонина и гистидина, что приводит к появлению множества изомеров, часть из которых характеризуется нестабильной связью. Более того, триазиновые производные в настоящее время не используются из-за их высокой токсичности (Уегопеке & Раки!, 2005).
В патенте ЕР 0335423 описаны конъюгаты Г-КСФ с триазин-хлорид производным мПЭГ ПЭГ с молекулярной массой от 300-30000 Да. Полученные конъюгаты ПЭГ-Г-КСФ обладали пролонгированным действием, их удельная специфическая активность составляла от 11 до 60% от активности немодифицированного Г-ГКСФ.
Недостатками полученных конъюгатов являются:
1) низкая удельная специфическая активность;
2) использование триазинхлоридных производных мПЭГ, в результате чего образуется целый ряд позиционных изомеров, часть из которых характеризуется нестабильной связью. Более того, триазиновые производные в настоящее время не используются из-за их высокой токсичности (Уегопеке & Раки!, 2005).
В качестве прототипа настоящего изобретения был выбран конъюгат ПЭГ-Г-КСФ, описанный в патенте И8 5824784 (пример 2). В патенте описана реакция восстановительного алкилирования Г-КСФ с использованием линейного мПЭГ с молекулярной массой от 6000 до 25, активированного пропиональдегидной группой (АБЭ-тРЕС). Реакцию ПЭГилирования проводили при рН 5. В этих условиях присоединение ПЭГ происходило избирательно через альфа-аминогруппу Ν-концевой аминокислоты. По описанному методу был получен конъюгат Г-КСФ с ПЭГ с молекулярной массой 20 кДа, который в настоящее время применяется в клинике для лечения нейтропений различной этиологии - препарат Неуластим (фирма .НоГГтапп-Ба Роейе. Швейцария). Очистку полученного конъюгата ПЭГ-Г-КСФ проводили при помощи ионообменной хроматографии на колонке с сорбентом 8-Сефароза НР. Биологическая активность полученного очищенного конъюгата ПЭГ-Г-КСФ составляла 68% от нативного Г-КСФ. Содержание немодифицированного Г-КСФ в полученном конъюгате составляло не более 5%. Фармакокинетические параметры полученного конъюгата были лучше, чем у немодифицированного Г-КСФ. В экспериментах на животных было показано, что введение конъюгата ПЭГ -Г-КСФ приводило к повышению уровня лейкоцитов в крови, причем конъюгат ПЭГ-Г-КСФ обладал более пролонгированным действием по сравнению с немодифицированным Г-КСФ. При однократном введении конъюгата ПЭГ-Г-КСФ содержание лейкоцитов крови животных достигало максимума через 1 день после введения, этот уровень сохранялся в течение суток и затем уровень лейкоцитов снижался до исходного уровня через 4 дня после введения. При введении немодифицированного Г-КСФ максимальный уровень лейкоцитов в крови животных наблюдался через 1 день после введения, затем содержание лейкоцитов быстро снижалось.
Недостатками полученного конъюгата являются:
1) низкая удельная активность полученного конъюгата, составляющая 68% от активности немодифицированного Г-КСФ;
2) наличие немодифицированного Г-КСФ в составе конъюгата.
Задача настоящего изобретения состояла в получении нового стабильного высокоочищенного конъюгата ПЭГилированного Г-КСФ с более высокой активностью, с более пролонгированным действием, улучшенной стабильностью, с улучшенными фармакокинетическими параметрами, с оптимальным сочетанием параметров молекулярной массы ПЭГ и специфической активности, с высокой степенью чистоты, пригодного для создания лекарственного препарата медицинского назначения, способствующего расширению арсенала лекарственных средств заданной направленности, фармацевтической композиции на основе заявляемого конъюгата.
Поставленная задача решается созданием новой молекулы функционально активного конъюгата ПЭГ-Г-КСФ с активностью Г-КСФ, в котором линейная молекула ПЭГ с молекулярной массой от 30000 Да связана с молекулой Г-КСФ стабильной связью строго через альфа аминогруппу Ν-концевой аминокислоты (метионина) так, что общая формула конъюгата ПЭГ-Г-КСФ с линейным мПЭГ представляет собой следующее соединение (I):
П ' 111 где η - целое значение от 681 до 1000;
т - целое число >4;
Г-КСФ - природный или рекомбинантный полипептид, обладающий активностью Г-КСФ.
В полученном конъюгате линейный ПЭГ с молекулярной массой 30000-40000 Да связан с альфа
- 2 019043 аминогруппой Ν-концевой аминокислоты Г-КСФ.
Избирательность модификации Г-КСФ строго по альфа-аминогруппе Ν-концевой аминокислоты достигается за счет использования альдегид-активированных мПЭГ общей формулы (II) и проведения реакции ПЭГ илирования при рН <5:
снДо-сн2-сн2До4сн24— с/θ (П) где η - целые значения от 681 до 1000, так что молекулярная масса ПЭГ составляет примерно 3000040000 Да;
т - целое число >4;
Оптимальное соотношение параметров молекулярной массы ПЭГ и специфической гемостимулирующей активности достигается за счет использования активированного мПЭГ (II) со значением т >4, что приводит к более эффективному взаимодействию заявляемого конъюгата с рецепторами и более высокой биологической активности.
Снижение иммуногенности, токсичности и улучшение фармакокинетических параметров достигается за счет увеличения молекулярной массы присоединенного ПЭГ.
Новым по сравнению с прототипом является следующее.
1. Для получения конъюгата ПЭГ-Г-КСФ использованы альдегидные производные активированных мПЭГ формулы 2.
2. Структурная формула конъюгата ПЭГ -Г -КСФ.
3. Увеличение молекулярной массы конъюгата ПЭГ -ИФН за счет размера присоединенного ПЭГ.
4. Более высокий уровень удельной специфической активности.
5. Улучшенные фармакокинетические параметры.
Заявляемый конъюгат ПЭГ-Г-КСФ является высокоочищенным препаратом, с пролонгированным действием, характеризуется высокой специфической биологической активностью (не менее 84-94% от немодифицированного Г-КСФ), чистотой по белку не менее 97%, высокой термостабильностью, повышенной резистентностью к действию протеолитических ферментов, улучшенными фармакокинетическими параметрами.
Также в настоящее изобретение входят фармацевтические композиции, содержащие в качестве активного ингредиента заявляемый конъюгат ПЭГ-Г-КСФ в эффективном количестве, данные композиции могут также включать фармацевтически приемлемые носители, буферные агенты (органические и неорганические кислоты и их соли, например буферы на основе лимонной кислоты, сукцинатный, винно-кислый, фумаратный, глюконовый, щавелево-кислый, молочно-кислый, ацетатный буферы), стабилизаторы (многоатомные спирты сахаров, аминокислоты, органические сахара или спиртовые сахара, инозитол, ПЭГ, аминокислотные полимеры, серосодержащие восстанавливающие агенты, такие как мочевина, глутатион, тиоглицерол и т.д., полипептиды с низкой молекулярной массой, белки, такие как человеческий сыворочный альбумин, иммуноглобулины, гидрофильные полимеры, такие как поливинилпирролидон, моносахариды, такие как манноза, ксилоза, фруктоза, глюкоза, дисахариды, такие как лактоза, мальтоза, сахароза, трисахариды, такие как раффиноза, и полисахариды, такие как декстран), консерванты (фенол, бензиловый спирт, мета-кризол, метилпарабен, пропилпарабен, октадецилдиметилбензил аммоний хлорид, галогениды бензалканов, алкил парабены), антиоксиданты (метионин, витамин Е, аскорбиновая кислота), изотонирующие агенты (многоатомные спирты сахаров, хлорид натрия, сорбитол, маннитол, арабитол, ксилитол и т.д.), неионные сурфактанты и детергенты (полисорбаты, полиоксамеры, полиолы, твин), сорастворители, наполнители (крахмал), хелатирующие агенты (например, ЭДТА). Данные фармацевтические композиции могут применяться в виде различных форм, например лиофилизата, водной формы (инъекции, аэрозоли, капли и т.п.).
Также в настоящее изобретение входят лекарственные средства на основе заявляемого конъюгата, в частности средства, применяемые для лечения лейкопений, преимущественно различных видов нейтропений.
Заявляемый пегилированный Г-КСФ, а также фармацевтические композиции и лекарственные средства на его основе, может использоваться для лечения нейтропений у больных, получающих миелосупрессивную химиотерапию при онкологических заболеваниях, для лечения миелодиспластического синдрома, улучшения переносимости иммуносупрессивных препаратов при пересадке костного мозга, улучшения иммунного статуса у пациентов, страдающих СПИД и другими инфекциям, в частности для противогрибковой терапии, в особенности для лечения системного или инвазивного кандидоза.
Конъюгат формулы (I) с необязательным фармакологически приемлемым наполнителем, разбавителем и/или фармацевтически приемлемыми вспомогательными веществами вводят внутривенно, подкожно, внутримышечно или каким-либо другим подходящим способом. Путь введения варьируют в зависимости, например, от симптомов и возраста, частоту введения и интервал между введениями варьируют в зависимости от заболевания и его тяжести или от цели (терапевтическое или профилактическое
- 3 019043 использование), эффективное количество активного начала ПЭГ-Г-КСФ выбирается с учетом вышеизложенных факторов.
Для получения заявляемого конъюгата ПЭГ -Г-КСФ был использован высокоочищенный рекомбинантный Г-КСФ человека (филграстим) производства ЗАО Биокад и бутиральдегидные производные мПЭГ формулы (II) с молекулярной массой 30000-40000 Да.
Реакцию конъюгирования проводили при рН ниже 5,0 в присутствии восстанавливающего агента при температуре, равной или ниже 20°С. Молярное соотношение ПЭГ/белок составляло 2,5-5/1. Контроль образования конъюгата ПЭГ-Г-КСФ проводили при помощи электрофореза в полиакриламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДДС) в восстанавливающих условиях и обратнофазной высокоэффективной хроматографии (ОФ ВЭЖХ). Очистку моноПЭГ-Г-КСФ от продуктов реакции, немодифицированного Г-КСФ и от нежелательных форм ПЭГ-Г-КСФ, содержащих две и более молекулы ПЭГ на молекулу белка, проводили при помощи хроматографии на катионообменных сорбентах. Элюцию конъюгата моноПЭГ-ИФН проводили градиентом концентрации хлористого натрия от 0,05 до 0,2 М в буферном растворе с рН ниже 5. Очищенный препарат моноПЭГ-Г-КСФ диализовали против 1050 мМ буферного раствора с рН 4-5, добавляли соли, или полисахариды, или многоатомные спирты, или поливинилпирролидоны, или моносахариды, или аминосахара, или белки, или аминокислоты и неионные детергенты и хранили в пластиковых или стеклянных флаконах с силиконизированной поверхностью при температуре 4±2°С.
Для характеристики полученного конъюгата моноПЭГ-Г-КСФ исследовали его чистоту, гомогенность, физико-химические, биологические и фармакокинетические параметры в сравнении с немодифицированным Г-КСФ.
Предлагаемое изобретение иллюстрируется фигурами графического изображения, где представлены:
Фиг. 1. Кинетика образования конъюгата ПЭГ-Г-КСФ.
Фиг. 2. Обратнофазная ВЭЖХ конъюгата ПЭГ -Г-КСФ на колонке Буштейу С4 (4,6x4,бх 150 мм).
Фиг. 3. Гель-фильтрационная ВЭЖХ конъюгата ПЭГ-Г-КСФ на колонке ТБК С30003\УХ (30 смх7,8 мм).
Фиг. 4. Электрофоретический анализ конъюгата ПЭГ-Г-КСФ в сравнении немодифицированным ГКСФ.
Фиг. 5. МЛБО1 масс-спектры ^модифицированного Г-КСФ (А) и конъюгата ПЭГ-Г-КСФ (В).
Фиг. 6. Сравнение масс-спектров триптических пептидов Г-КСФ (А) и конъюгата ПЭГ-Г-КСФ (В).
Фиг. 7. Исследование термостабильности ПЭГ-Г-КСФ (зеленая линия) и немодифицированного ГКСФ (красная линия) при температуре 50±2°С.
Фиг. 8. Исследование стабильности конъюгата ПЭГ-Г-КСФ (зеленая линия) и немодифицированного Г-КСФ (красная линия) при обработке трипсином.
Фиг. 9. Определение иммунореактивности конъюгата ПЭГ-Г-КСФ (зеленая линия) в сравнении с немодифицированным Г-КСФ (красная линия).
Фиг. 10. Фармакокинетика конъюгата ПЭГ-Г-КСФ (зеленая линия) в сравнении с немодифицированным Г-КСФ (красная линия).
Примеры конкретного выполнения способа получения ПЭГ-Г-КСФ и исследования его свойств приведены ниже.
Пример 1. Получение очищенного рчГ-КСФ (филграстима).
Выделение и очистку рчГ-КСФ проводили, как описано в патенте ЕЙ 2278870.
Пример 2. Получение конъюгата ПЭГ-Г-КСФ.
К 2300 мл буферного раствора (50 мМ ацетат натрия, рН 5,0±0,2), содержащего 2500 мг очищенного рчГ-КСФ, полученного по п.1, добавляли 50 мл 1 М раствора цианборгидрида натрия, перемешивали и добавляли 10 г сухого бутиральдегидного производного монометокси ПЭГ (мПЭГ) с молекулярной массой 30000 Да. Пробу инкубировали 22 ч при постоянном перемешивании при температуре 20±2°С. Через различные промежутки времени из реакционной смеси отбирали аликвоты по 50 мкл и анализировали кинетику образования конъюгата ПЭГ-Г-КСФ при помощи метода электрофореза (ЭФ) в полиакриламидном геле (ПААГ) в присутствии додецилсульфата натрия (ДДС) в редуцирующих условиях. Для этого к отобранной пробе добавляли 1/3 объема буфера, содержащего 125 мМ Трис-НС1, рН 6,8, 20% глицерин, 3% ДДС, 15% 2-меркаптоэтанола, 0,005% бромфенолового синего, и нагревали 3 мин на кипящей водяной бане. Пробы в объеме 5 мкл вносили в лунки подготовленных пластин ПААГ и проводили электрофорез в 12,5% ПААГ в присутствии ДДС. По окончании электрофореза гель окрашивали при помощи Кумасси Е-250. Кинетика образования конъюгата ПЭГ-Г-КСФ представлена на фиг. 1. В момент времени, когда содержание ПЭГ-Г-КСФ составляло более 70%, реакционную смесь разводили 3 раза 10 мМ натрий ацетатным буфером, рН 4,8±0,2.
Пример 3. Очистка конъюгата моноПЭГ-Г-КСФ.
Разбавленный раствор, полученный в примере 2, наносили на колонку с катиоонообменным сорбентом (СМ-сефароза, 300 мл), уравновешенным 10 мМ натрий ацетатным буфером, рН 4,8 (буфер А), со
- 4 019043 скоростью 10 мл/мин. Колонку с сорбентом промывали 1500 мл буфера А. Элюцию связавшегося с сорбентом конъюгата ПЭГ -Г-КСФ проводили 6000 мл буфера А, содержащего градиент концентрации №1С1 от 0 до 0,2 М, со скоростью 5 мл/мин, собирая фракции объемом 50 мл. В полученных фракциях измеряли оптическую плотность при 280 и 260 нм, определяли концентрацию белка и проводили анализ при помощи методов обратнофазной ВЭЖХ и ЭФ в ПААГ, как описано в примере 2. Фракции, содержащие моноПЭГилированный конъюгат ПЭГ-Г-КСФ с чистотой более 95%, объединяли, диализовали против 10 объемов 1,6 мМ натрий ацетатного буфера, рН 4,0±0,2, проводили стерильную фильтрацию и хранили при температуре 4±2°С.
Пример 4.
Определение чистоты конъюгата ПЭГ-Г-КСФ при помощи метода обратно-фазной высокоэффективной жидкостной хроматографии (ОФ ВЭЖХ)
Конъюгат ПЭГ-Г-КСФ, полученный по п.3, разводили 20 мМ натрий-ацетатным буфером рН 5,0 до концентрации 0,3 мг/мл и 100 мкл полученной пробы вносили на колонку 8утте1гу С4 (4,6x150 мм). Исследование проводили на хроматографе Вгссхс фирмы \Са1ег8 при 214 нм. Из результатов, представленных на фиг. 2, следует, что конъюгат ПЭГ-Г-КСФ представляет собой препарат высокой степени чистоты. Из представленной хроматограммы видно, что с сорбента Зуттейу С4 белок элюируется одним симметричным пиком, доля которого составляет 98,85%. Незначительные УФ-поглощающие примеси, элюирующиеся до и после мажорного пика белка, составляют в сумме <1,15%. Таким образом, из представленных данных следует, что по данным обратнофазовой ВЭЖХ чистота заявляемого конъюгата ПЭГ -Г-КСФ составляет >98%.
Пример 5.
Определение чистоты конъюгата ПЭГ-Г-КСФ при помощи метода гель-фильтрационной (эксклюзионной) высокоэффективной жидкостной хроматографии (ГФ ВЭЖХ).
Конъюгат ПЭГ-Г-КСФ, полученный по п.3, разводили 20 мМ натрий-ацетатным буфером рН 5,0 до концентрации 0,3 мг/мл и 100 мкл полученной пробы вносили на колонку Т8К О30008\УХ (30 смх7,8 мм). Исследование проводили на хроматографе Вгеехе фирмы \Са1ег8 при 220 нм. Результаты исследования представлены на фиг. 3. Видно, что исследуемый образец ПЭГ-Г-КСФ выходит с колонки одним, четко выраженным симметричным пиком, составляющим 98,47%. Из результатов, представленных на фиг. 3, следует, что заявляемый конъюгат ПЭГ-Г-КСФ не содержит свободного немодифицированного Г-КСФ. Содержание высокомолекулярных агрегатов в заявляемом конъюгате не превышает 1,53%. Чистота заявляемого конъюгата ПЭГ-Г-КСФ по данным ГФ ВЭЖХ составляет более 98%.
Пример 6.
Определение уровня эндотоксинов в конъюгате ПЭГ-Г-КСФ.
Содержание бактериальных эндотоксинов (БЭ) в пробе конъюгата ПЭГ-Г-КСФ, полученного по п.3, определяли ίη νίΐτο с помощью ЛАЛ-теста (модификация гель-тромб тест) в соответствии с требованиями ОФС 42-0002-00. В работе использовали диагностический многокомпонентный набор фирмы Аз8ОС1а1е8 οί САРЕ СОИ, 1пс. ЛАЛ-реактив РУКОТЕЬЬ® с чувствительностью 0,03 ЕЭ/мл, контрольный стандарт эндотоксина (КСЭ, 0,5 мкг во флаконе), воду для ЛАЛ-теста. Из резульатов, представленных в табл. 1, видно, что содержание БЭ в пробе конъюгата ПЭГ-Г-КСФ составляет менее 3 единиц эндотоксина (еЭ) на 1 мг белка, что гораздо ниже уровня БЭ, допустимого для медицинских препаратов на основе рекомбинантных белков.
Таблица 1
Содержание бактериальных эндотоксинов в конъюгате ПЭГ -Г-КСФ
| Препарат коньюгата ПЭГ-Г-КСФ | Содержание бактериальных эндотоксинов (еЭ/мг белка) |
| ПЭГ-Г-КСФ, полученный по п.З | <3,0 |
Пример 7.
Электрофоретический анализ конъюгата ПЭГ-Г-КСФ в сравнении с немодифицированным Г-КСФ.
Пробу конъюгата ПЭГ-Г-КСФ, полученную по п.3, анализировали методом электрофореза в ПААГ, как описано в п.2. Электрофорез проводили с нагрузкой на лунку 40 мкг белка в нередуцирующих условиях. Окраску белков в геле проводили красителем Кумасси В-250. Одновременно проводили электрофорез немодифицированного Г-КСФ. Конъюгат ПЭГ-Г-КСФ был представлен одной высокомолекулярной полосой (фиг. 4, трек 1). Из электрофореграмм конъюгата ПЭГ-Г-КСФ и немодифицированного ГКСФ, представленных на фиг. 4, видно, что конъюгат ПЭГ-Г-КСФ имеет более высокую молекулярную массу, чем Г-КСФ (фиг. 4, сравнить треки 1 и 2). Следует отметить, что методом ЭФ точное значение молекулярной массы для ПЭГилированных белков определить нельзя, так как присоединение гидрофильной молекулы ПЭГ к белку значительно увеличивает радиус Стокса образовавшегося комплекса. В результате продвижение комплекса ПЭГ-белок в геле замедляется и значение его молекулярной массы оказывается значительно выше, чем сумма молекулярных масс немодифицированного белка и ПЭГ.
- 5 019043
Пример 8.
Определение молекулярной массы конъюгата ПЭГ -Г -КСФ в сравнении с немодифицированным Г КСФ методом масс-спектрометрии.
мкл пробы конъюгата ПЭГ-Г-КСФ, полученного по п.3, и 0,3 мкл раствора 2,5дигидроксибензойной кислоты (Л1бг1сй. 10 мгхмл-1 в 20% ацетонитриле в воде с 0,5% ТФУ) смешивали и высушивали на воздухе. Аналогичным способом готовили пробу немодифированного Г-КСФ.
Масс-спектры были получены на ΜΑΓΌΙ-времяпролетном масс-спектрометре ИНтайех II ВК.ИКЕК. (Германия), оснащенном УФ-лазером (N6). Масс-спектры получены в режиме положительных ионов, в линейном режиме, погрешность измерения средней массы не превышает 10-15 Да.
Результаты по масс-спектрометрическому анализу немодифицированного Г-КСФ и конъюгата ПЭГ-Г-КСФ в диапазоне т/ζ от 10000-50000 приведены на фиг. 5.
Из фиг. 5А видно, что масс-спектр Г-КСФ содержит основной пик, соответствующий однозарядному иону [М]+ с молекулярной массой 18816 Да.
В масс-спектре конъюгата ПЭГ-Г-КСФ, приведенном на фиг. 5В, представлен размытый основной пик, соответствующий однозарядному иону [М]+ с молекулярной массой 49600 Да. Размытость пика связана с гетерогенностью препаратов монометоксиПЭГ. Для конъюгата ПЭГ-Г-КСФ измеренное значение т/ζ в максимуме пика (49600 Да) совпадает с расчетными данными по сумме молекулярных масс Г-КСФ (19295 Да) и присоединенного ПЭГ (30000 Да).
Пример 9.
Локализация сайта ПЭГ илирования в конъюгате ПЭГ-Г -КСФ.
К 5 мкл пробы конъюгата ПЭГ-Г-КСФ, полученного по п.3, добавляли 5 мкл раствора модифицированного трипсина (Рготеда) в 0,05 М ΝΗ4ΗΟΘ3 с концентрацией 15 мкгхмл-1. Гидролиз проводили в течение 16 ч при 37°С, затем к раствору добавляли 10 мкл 0,5% ТФУ в 10% растворе ацетонитрила в воде и тщательно перемешивали.
Аналогичным способом готовили пробу немодифированного ИФН. Полученные растворы использовали для получения МАЬИ1-масс-спектров.
Локализацию сайта связывания ПЭГ с молекулой Г-КСФ определяли путем сравнения массспектров триптического гидролизата конъюгата ПЭГ-Г-КСФ и немодифицированного Г-КСФ. В триптическом гидролизате конъюгата ПЭГ-Г-КСФ должен отсутствовать пептид, соответствующий участку белка, по которому произошла модификация. В табл. 2 представлены масс-спектры экспериментальных триптических пептидов для немодифицированного Г-КСФ и конъюгата ПЭГ-Г-КСФ. Из таблицы видно, что масс-спектры триптических пептидов немодифицированного Г-КСФ практически совпадают с массспектрами триптических пептидов конъюгата ПЭГ-Г-КСФ (табл. 2), но в триптическом переваре конъюгата ПЭГ-Г-КСФ отсутствует пептид с молекулярной массой 1432,7, присутствующий в триптическом переваре немодифицированного Г-КСФ. Экспериментально полученные масс-спектры триптических пептидов для немодифицированного Г-КСФ и конъюгата ПЭГ-Г-КСФ представлены на фиг. 6, из которой видно, что в триптическом переваре конъюгата ПЭГ-Г-КСФ отсутствует пептид с молекулярной массой 1432,7. Согласно анализу теоретических масс триптического гидролизата Г-КСФ пик с т/ζ 1432,7 соответствует Ν-концевому пептиду белка (табл. 2). Его отсутствие в триптическом переваре конъюгата ПЭГ -Г-КСФ свидетельствует о модификации Ν-концевого пептида, который, став тяжелее на массу ПЭГ, находится за пределами исследуемой области спектра. Связывание ПЭГ с молекулой Г-КСФ произошло по единственной свободной аминогруппе, присутствующей в этом пептиде по аминогруппе Ν-концевого метионина.
Таблица 2 Экспериментальные масс-спектры триптических пептидов конъюгата ПЭГ-Г-КСФ и немодифицированного Г-КСФ в сравнении с теоретическими значениями
| Экспериментально обнаруженные пептиды [М+Н+]+ | Теоретические пептиды | |||
| Г-КСФ | Коныогат ПЭГ-Г-КСФ | Масса [М+Н*Г | Пептид | Последовательность |
| 1432.7 | 1432.75 | 1-14 | МТРЬОРАЗЗЬРЧЗР | |
| 747.4 | 747.4 | 747.36 | 18-23 | СЬЕфУК |
| 1129.6 | 1129.6 | 1129.61 | 20-29 | ΕφνΚΚΙφΟϋΟ |
| 1359.7 | 1359.7 | 1359.75 | 42-53 | ЬСНРЕЕГУЕПЗН |
| 2527.3 | 2527.3 | 2527.3 | 54-78 | ШЛР9/ЛР1.88СР80 |
| 953.6 | 953.6 | 952.56 | 55-63 | 1.Ст1Р\УАР1.8 |
| 818.4 | 818.4 | 817.41 | 61-68 | РЬ88СР8О |
| 2033.1 | 2033.1 | 2033.10 | 72-90 | ЕАОСЬЗдЕНЗаЬЕЕУ |
| 2104.1 | 2104.1 | 2104.1 | 75-93 | СЕЗРЕНЗОЬГЬУООЕ |
| 1241.7 | 1241.7 | 1241.68 | 158-167 | ЬфЙРЬЕУЙУК. |
- 6 019043
Пример 10.
Определение удельной специфической активности конъюгата ПЭГ-Г-КСФ в сравнении с немодифицированным рчГ-КСФ.
Конъюгат ПЭГ-Г-КСФ, полученный по п.3, разводили до концентрации 0,2 нг/мл средой ΚΡΜΙ (АТСС кат. № 30-2001). Полученную пробу в объеме 100 мкл вносили в ряд лунок 96-луночного планшета и готовили ряд последовательных двукратных разведений. Затем в каждую лунку вносят по 100 мкл суспензии клеток Μ-ΝΕ8-60 и культивировали в СО2-инкубаторе в течение 50. Затем в каждую лунку вносили 20 мкл красителя Аламар Блю (либо аналогичный, например МТТ) и инкубировали в тех же условиях 14 ч. Рост числа клеток определяли спектрофотометрически по увеличению оптической плотности при длине волны 545 и 630 нм. Аналогичным образом исследовали специфическую активность ^модифицированного Г-КСФ. В качестве референс-стандарта использовали раствор международного стандартного образца активности Г-КСФ (1-81 1п1етайопа1 81апйаг1 88/502, дгапи1осу1е со1опу 8Йти1айпд Гас1ог, йитап, ιΌΝΑ-Χηνΐά. 10000 ΐυ/атр). Удельную биологическую активность исследуемых препаратов (В0) в МЕ/мг определяли расчетным методом по формуле:
где В0 - удельная биологическая активность ПЭГ -Г-КСФ или Г-КСФ (МЕ/мг); А - определенная биологическая активность ПЭГ -Г-КСФ или Г-КСФ (МЕ/мл); С - содержание белка в растворе ПЭГ -Г-КСФ или Г-КСФ (мг/мл).
Таблица 3
Удельная специфическая активность ПЭГ -Г-КСФ и немодифицированного Г -КСФ
| Препарат | Удельная специфическая активность (МЕ/мг) |
| Конъюгат ПЭГ-Г-КСФ, полученный по п.З | (0,845±0,091)х10® |
| Немодифицированный Г-КСФ | (1,00±0,081)х10® |
Пример 11.
Исследование термостабильности конъюгата ПЭГ -Г-КСФ в сравнении с немодифицированным Г КСФ.
Пробу конъюгата ПЭГ-Г-КСФ, полученного по п.3, разводили 5 мМ натрий-ацетатным буфером, рН 4,0, содержащим 140 мМ №С1, до концентрации белка 0,28 мг/мл, помещали в водяную баню при температуре 50±2°С и через различные интервалы времени исследовали появление мутности в растворе белка, измеряя оптическую плотность при 340 нм. Аналогично проводили исследование термостабильности немодифицированного Г-КСФ. Инкубация белков при температуре 50±2°С приводит к образованию нерастворимых агрегатов, в результате увеличивается мутность белкового раствора, которую можно измерить, определяя оптическую плотность раствора при 340 нм. На фиг. 7 представлены результаты исследования, из которых видно, что мутность препарата немодифицированного Г-КСФ растет с увеличением времени инкубации, тогда как препарат ПЭГ-Г-КСФ остается стабильным в течение всего времени наблюдения. Из полученных данных следует, что термостабильность заявляемого конъюгата ПЭГ-ГКСФ намного выше, чем у немодифицированного Г-КСФ.
Пример 12.
Исследование протеолитической стабильности конъюгата ПЭГ-Г-КСФ при обработке трипсином в сравнении с немодифицированным Г-КСФ.
Пробу конъюгата ПЭГ-Г-КСФ, полученного по п.3, разводили до концентрации белка 0,6 мг/мл и добавляли 150 мкл 1 М Трис-НС1, рН 8,5, так чтобы конечный рН пробы составлял 7,4, добавляли 2 мкл 0,5 М СаС12 до конечной концентрации 1 мМ, перемешивали и добавляли 15 мкл трипсина (Рготеда, Оо1й) до конечной концентрации 0,02 мкг/мл. Аналогично готовили пробы, содержащие немодифицированный Г-КСФ. Пробы инкубировали при 37°С. Через определенные промежутки времени отбирали аликвоты в 100 мкл и проводили ЭФ в ПААГ в присутствии ДДС, как описано в п.1. После проведения электрофореза гели окрашивали красителем Кумасси К-250 и сканировали. Площадь основной полосы определяли при помощи компьютерной программы Ое-1Рто Апа1у8ег. Площадь основного пика в исходных (необработанных трипсином) пробах принимали за 100%. На фиг. 8 представлены данные по чувствительности конъюгата ПЭГ-Г-КСФ и Г-КСФ к обработке трипсином. Видно, что при увеличении времени обработки трипсином количество ПЭГ-Г-КСФ и Г-КСФ снижается, однако заявляемый конъюгат ПЭГ-ГКСФ более устойчив к действию трипсина в сравнении с немодифицированным Г-КСФ.
Пример 13.
Исследование иммунореактивности конъюгата ПЭГ-Г-КСФ в сравнении с немодифицированным ГКСФ.
Для определения иммунореактивности исследовали связывание заявляемого конъюгата ПЭГ-Г
- 7 019043
КСФ с моноклональными иммуноглобулинами против Г-КСФ человека. Определение проводили иммуноферментным методом с использованием набора реагентов РгоСоп О-С8Б (ООО Протеиновый контур). Конъюгат ПЭГ-Г-КСФ, полученный по п.3, разводили 10 мМ Трис-НС1 буфером, рН 7,2, содержащим 140 мМ №1С1 и 1% бычьего сывороточного альбумина, до концентрации 1 мкг/мл, и 100 мкл полученной пробы вносили в лунки планшетов для микротитрования, предварительно сенсибилизированных моноклональными антителами против Г-КСФ. После инкубации при температуре 37°С (60 мин) в лунки вносили моноклональные антитела к независимому эпитопу, меченные биотином. Образовавшийся иммунный комплекс детектировали при помощи стрептавидина, меченного пероксидазой хрена. Для развития цветной реакции в лунки планшетов вносили 100 мкл раствора субстрата (200 мкг/мл тетраметилбензидина (81дта) и 0,1% Н2О2 в 0,05 М ТБ, рН 7,2 и инкубировали до развития голубой окраски. Реакцию останавливали внесением в лунки 50 мкл 2 М раствора серной кислоты. Результаты учитывали, измеряя оптическую плотность при длине волны 405 нм на многоканальном спектрофотометре Ми1Й8еап ЕХ. Аналогичным образом исследовали иммунореактивность немодифицированного Г-КСФ. Взаимодействие немодифицированного Г-КСФ с иммуноглобулинами принимали за 100%. Из результатов сравнительного определения иммунореактивности, представленных на фиг. 9, видно, что иммунорективность заявляемого конъюгата ПЭГ-Г-КСФ составляет 25% от иммунореактивности немодифицированного ГКСФ.
Пример 14.
Определение стабильности конъюгата ПЭГ-Г-КСФ при хранении.
Из пробы, полученной по п.3, отбирали аликвоты в стерильные пробирки с крышками, типа Эппендорф. Концентрация белка в конъюгате ПЭГ-Г-КСФ составляла 1 мг/мл. Пробы помещали в холодильник при температуре 6±2°С. Через определенные промежутки времени отбирали пробы и анализировали специфическую удельную активность и гомогенность препарата при помощи ГФ ВЭЖХ и ЭФ в ПААГ в присутствии ДДС в редуцирующих условиях, как описано в п.1. Из данных табл. 4 видно, что при хранении при температуре 6±2°С конъюгат ПЭГ-Г-КСФ стабилен в течение по крайней мере 24 месяцев.
Таблица 4
Стабильность заявляемого конъюгата ПЭГ -Г-КСФ при температуре 6±2°С
| Параметры | Срок хранения (месяцы) | ||||
| 0 | 6 | 12 | 18 | 24 | |
| Активность (МЕ/мг) | (0,84±0,09)х 108 | (О/75±ОД5)х1О & | (0,9ъ0,10)х108 | (0,80±0,15)х1 О8 | (0,86±0>07)хЮ 8 |
| Гомогенность, по ГФ ВЭЖХ (%) | >95 | >95 | >95 | >95 | >95 |
| Г омогенность, по ЭФ в ПААГ (%) | >98 | >98 | >98 | >98 | >98 |
Пример 15.
Исследование фармакокинетики конъюгата ПЭГ-Г-КСФ.
Пробу конъюгата ПЭГ-ИФН, полученного по п.3, вводили внутрибрюшинно мышам-самцам линии 1СК. весом 20 г в дозе 5 мкг/мышь. Параллельно другой группе мышей вводили немодифицированный Г КСФ. Через определенные промежутки времени у животных отбирали кровь при помощи ретроорбитальной пункции. Сыворотку крови получали стандартным методом. Наличие Г-КСФ в сыворотке определяли методом иммуноферментного анализа (ИФА). Для постановки ИФА использовали сэндвич вариант твердофазного ИФА с применением мышиных моноклональных иммуноглобулинов к различным эпитопам Г-КСФ человека. Моноклональные мышиные антитела сорбировали в лунках планшета для микротитрования в концентрации 2, 5 мкг/мл в 20 мМ Трис-НС1 буфере (ТБ), рН 9,0. Сорбция антител проходила при температуре 4°С в течение ночи. Неспецифические центры связывания блокировали добавлением 200 мкл ТБ, рН 7,4, содержащего 1% бычьего сывороточного альбумина (БСА) и 0,05% твина20. Далее в лунки вносили по 100 мкл исследуемой сыворотки, разведенной ТБ, содержащем 1% БСА и 0,05% твина-20, в соотношении 1:2, 1:4 и 1:8. Параллельно в лунки для построения калибровочной кривой вносили известные концентрации стандартного образца ПЭГ-Г-КСФ в интервале от 25 до 600 нг/мл в буфере ТБ, содержащем 1% БСА и 0,05% твина-20. Инкубация проходила при температуре 37°С в течение часа. Далее в лунки добавляли последовательно моноклональные антитела к Г-КСФ человека, меченные биотином, и стрептавидин, меченный пероксидазой. Для детекции образовавшегося комплекса
- 8 019043 использовали 100-мм раствор натрий-ацетатного буфера, рН 5,0, содержащего 0,015% перекиси водорода и 0,2 мг/мл тетраметилбензидина. Для остановки реакции использовали раствор 2 М Н28О4. Концентрацию Г -КСФ в сыворотке определяли по калибровочной кривой с учетом разведения исследуемой сыворотки.
При анализе фармакокинетики немодифицированного Г-КСФ для построения калибровочной кривой в лунки вносили известные концентрации стандартного образца Г-КСФ в интервале от 6,25 до 200 нг/мл в буфере ТБ, содержащем 1% БСА и 0,05% твина-20. Результаты фармакокинетики заявляемого конъюгата ПЭГ-Г-КСФ в сравнении с немодифицированным Г-КСФ представлены на фиг. 10. Из результатов следует, что заявляемый конъюгат ПЭГ-Г-КСФ обладает значительным пролонгированным эффектом. При введении нативного Г-КСФ его содержание в крови животных достигало максимума через 1 ч после введения и затем очень быстро снижалось. При введении конъюгата ПЭГ-ИФН максимальное содержание ИФН в крови животных наблюдалось через 6 ч (фиг. 10) и затем происходило медленное снижение содержания Г-КСФ в крови в течение 140 ч. Исходя из полученных результатов (фиг. 10) были рассчитаны основные фармакокинетические параметры для заявляемого конъюгата ПЭГГ-КСФ. Результаты показали, что всасывание из места введения, объем распределения, клиренс конъюгата ПЭГ-Г-КСФ значительно замедлены по сравнению с немодифицированным Г-КСФ, что и обеспечило длительную циркуляцию заявляемого конъюгата ПЭГ-Г-КСФ в крови (более 140 ч).
Пример 16.
Сравнительная характеристика заявляемого конъюгата ПЭГ-Г-КСФ в сравнении с конъюгатом ПЭГ-Г-КСФ, описанным в способе-прототипе.
Проведено сравнение структуры, основных физико-химических и фармакокинетических параметров заявляемого конъюгата ПЭГ-Г-ГСФ, полученного по п.3, в сравнении с конъюгатом ПЭГ-Г-КСФ, описанным в способе-прототипе (табл. 5). Данные, представленные в табл. 5, свидетельствуют о значительном улучшении свойств заявляемого конъюгата ПЭГ-ИФН в сравнении с конъюгатом из способапрототипа.
Таблица 5 Основные физико-химические и фармакокинетические параметры заявляемого конъюгата ПЭГ -Г-КСФ в сравнении с конъюгатом ПЭГ-Г-КСФ, описанным в способе-прототипе (патент И8 5824784)
| Параметры | Коньюгг Заявляемый коньюгат ПЭГ- Г-КСФ | 1т ПЭГ-Г-КСФ Коньюгат, описанный в способе-прототипе Патент 118 5,824,784 |
| Г-КСФ | филграстим | филграстим |
| Структура ПЭГ | Линейный | Линейный |
| Молекулярная масса ПЭГ (кДа) | 30-40 | 6-25 |
| Структурная формула конъюгата ПЭГ-ГКСФ | Н3С — МЙ-С-С8Р | Н3С1 л 1° ./х Г° Ί. ^-Ме(-<3-С5г |
| Удельная активность, % от немодифицированного Г-КСФ | 84-94 | 68 |
| Чистота по данным ЭФ в ПААГ (%) | 100 | ** |
| Чистота по результатам ОФ ВЭЖХ (%) | >98 | ** |
| Чистота по результатам ГФ | >98 | ж» |
- 9 019043
| ВЭЖХ (%) | ||
| Содержание бактериальных эндотоксинов (еЭ/мг) | <3 | * * |
| Фармакокинетические параметры | ||
| Отношение А1ДС ПЭГ-Г-КСФ/Г-КСФ | 18 | ** |
* Структурная формула конъюгата ПЭГ -Г -КСФ, полученного по способу-прототипу, дана по ссылке \УНО Эгид 1пРоттайоп, 2002, ν. 16, N. 1,
102, Ыз1 47.
** Данные не представлены.
Пример 17. Раствор для подкожного введения 0,6, 1,0, 2,0, 3,0 мг/мл.
Раствор для подкожного введения, применяемый в качестве лекарственного средства, содержит в качестве активного ингредиента ПЭГ илированный рекомбинантный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор человека (ПЭГ -Г-КСФ) и дополнительные фармацевтически приемлемые компоненты в следующем соотношении.
Активное вещество:
ПЭГилированный рекомбинантный гранулоцитарный колониестимулирующий фактор человека (ПЭГ-Г-КСФ) мг - 0,6-3,0.
Вспомогательные вещества:
Полисорбат 20, мг - 0,04;
Маннитол, мг - 50;
Натрия ацетата тригидрат, мг - 0,23;
Уксусная кислота ледяная до рН 4,0;
Вода для инъекций до 1 мл.
Пример 18.
Способ упаковки готового лекарственного средства, например водного раствора, содержащего ПЭГ-Г-КСФ, полученный по п.3.
По 1,0 мл в шприцах из нейтрального стекла I гидролитического класса, с впаянными иглами, покрытыми колпачками защитными эластичными или жесткими, укупоренных наконечниками на поршни из бутилкаучука, ламинированного фторполимером.
Или по 1,0 мл во флаконах из нейтрального стекла I гидролитического класса, укупоренных фторрезиновыми или бутилрезиновыми пробками с тефлоновым покрытием, обжатых алюминиевыми колпачками.
Пример 19.
Набор, содержащий лекарственное средство, например, водный раствор, содержащий в качестве активного ингредиента ПЭГ-Г-КСФ, полученный по п.3.
Набор, содержащий по 1 шприцу в комплекте с поршнем в контурной ячейковой упаковке из пленки полимерной вместе с инструкцией по применению, которые помещают в пачку из картона.
Или набор, по 1 флакону в контурной ячейковой упаковке из пленки полимерной вместе с инструкцией по применению, которые помещают в пачку из картона
Литература.
Машковский М.Д., Лекарственные средства, издание 15, М.: Новая волна, 2006 - 1206 с.
Патент И8 7655766.
Патент ЕР 0401384.
Патент ЕР 0335423.
Патент И8 5824784.
Патент ВИ 2278870.
Найипд Т., Иоске \У.Э.. Сап1пет Р., Кйедет С., 8аиет А., δΐθνθηκ Р., Уо1к Η.Ό. апб \Уепбе1 А. (1995), ЕГГсс! οί дгапи1осу1е со1опу-зйти1айпд £ас1ог 1теа1теп1 оп ех νίνο Ыооб су1о1бпе гезропзе т йитап νοίυη1еегз, В1ооб, V. 85, р. 2482-2489.
Котаки Υ., Макито1о Т., е! а1. (1987), С1ошпд оГ дгапи1осу1е со1опу-зйти1айпд Гас1ог с^NА Ггот йитап тасгорйадез апб йз ехргеззюп т ЕзсйейсЫа сой, 1арапезе )оигпа1 оГ сапсег гезеагсй, V. 78. Р. 11791181.
Ме!са1Г И. (1992), Неторо1ейс геди1а1огз, Тгепбз ш Ыосйет1са1 заепсез, V. 17, р. 286-289.
Мойпеих С. (2003), Редй1дгазйт: изтд реду1айоп !есйпо1оду !о йпргохе пеийореша зиррог! т сапсег райейз, Апй-сапсег бгидз, № 14(4), р. 259-264.
Мойпеих С. (2004), Тйе без1дп апб беνе1οртеηΐ оГ редГйдтазйт РЕС-тте1НиС-С8Р, №и1аз!а, Сиг
- 10 019043 геп! рйагшасеи!1са1 дезщп, № 10(11), р. 1235-1244.
\ада1а 8. (1986), Мо1еси1аг с1оптц апд ехргеззюп оБ с1)\А Бог Китай дгапи1осу!е со1опу-зйши1а!тд Бас1ог, \а1иге. V. 319, р. 415-418.
КоЬег!з М.1, Веп!1еу М.И., Нагпз 1.М. (2002), СЬеш181гу Бог рерйде апд рго!ет РЕОу1а!юп, Адуапсед дгид дейуегу ге\1е\\з, V. 54(4), р. 459-476.
8ои/а Е.М., е! а1. (1986), КесошЬтап! Еишап дгапи1осу!е со1опу-зйши1а!тд Бас!ог: еББес!з оп погша1 апд 1еикеш1с шуе1о1д се11з, 1оита1 оБ 8с1епсе, № 232, с. 61-65.
Vе^οпезе Е.М., Рази! О. (2005, Ыоу 1), РЕОу1а!юп, зиссеззБи1 арргоасЕ !о дгид дейуегу, Эгид д1зсоуегу !одау, V. 10(21), р. 1451-1458.
\Уе11е К., Р1а1гег Е., е! а1. (1985), Рипйсайоп апд Ь1ос11еписа1 сКагас1еп/аИоп оБ Еишап р1ипро!еп! 11е1паЮро1еИс со1опу-зйши1а!тд Бас!ог, Ргосеедтдз оБ !Ее \аИопа1 Асадешу оБ 8с1епсез оБ !Ее ϋ8Α, V. 82(5), р. 1526-1530.
де VII К., Бешен 1., е! а1. (1996), Адуегзе еББес! оп Ьопе шагготе рго!ес!юп оБ ргесЕешо!Еегару дгапи1осу!е со1опу-зйши1а!тд Бас!ог зиррог!, 1оита1 оБ !Ее \а11опа1 Сапсег 1пз!1!и!е, V. 88(19), р. 1393-8.
Claims (14)
- ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ1. Конъюгат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека с монометоксиполиэтиленгликолем формулы (I)СНз/о СИ. СН2 ; ОСН2Ун-Г-КСФ (1) , где п - целое число от 681 до 1000;ш представляет собой целое число >4;№Н-Г-КСФ представляет собой гранулоцитарный колониестимулирующий фактор.
- 2. Конъюгат по п.1, в котором средняя молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет от 30 до 40 к Да.
- 3. Конъюгат по п.2, где молекулярная масса звеньев полиэтиленгликоля составляет 30 кДа.
- 4. Конъюгат по п.1, в котором ш представляет собой целое число от 4 до 6.
- 5. Конъюгат по п.1, в котором Ν-концевая группа представлена остатком метионина (Ме!).
- 6. Фармацевтическая композиция, обладающая активностью гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, содержащая конъюгат общей формулы (I) по любому из пп.1-5 в эффективном количестве и фармацевтически приемлемые добавки.
- 7. Фармацевтическая композиция по п.6, предназначенная для применения в качестве лекарственного средства для лечения нейтропении различного происхождения.
- 8. Фармацевтическая композиция по п.6, включающая конъюгат общей формулы (I) в эффективном количестве, полисорбат, маннитол, натрия ацетата тригидрат, уксусную кислоту, воду для инъекций до 1 мл.
- 9. Фармацевтическая композиция по п.8 с рН 3-5.
- 10. Фармацевтическая композиция по п.8 с рН 4.
- 11. Лекарственное средство, обладающее активностью гранулоцитарного колониестимулирующего фактора, включающее конъюгат общей формулы (I) по любому из пп.1-5.
- 12. Лекарственное средство по п.11, предназначенное для лечения нейтропении различного происхождения.
- 13. Применение конъюгата формулы (I) по любому из пп.1-5 для получения лекарственного средства, обладающего активностью гранулоцитарного колониестимулирующего фактора.
- 14. Способ профилактики или лечения нейтропении, включающий введение эффективного количества конъюгата формулы (I) по любому из пп.1-5.Время ПЭГилирования (час)
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| RU2010133875/10A RU2446173C1 (ru) | 2010-08-13 | 2010-08-13 | Новый функционально активный, высокоочищенный стабильный конъюгат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (г-ксф) с полиэтиленгликолем с пролонгированным биологическим действием, пригодный для медицинского применения, и иммунобиологическое средство на его основе |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA201101035A1 EA201101035A1 (ru) | 2012-02-28 |
| EA019043B1 true EA019043B1 (ru) | 2013-12-30 |
Family
ID=45567857
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA201101035A EA019043B1 (ru) | 2010-08-13 | 2011-08-01 | Новый конъюгат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (г-ксф) с полиэтиленгликолем |
Country Status (18)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR101549457B1 (ru) |
| CN (1) | CN103140499B (ru) |
| CL (1) | CL2013000400A1 (ru) |
| CO (1) | CO6670557A2 (ru) |
| CR (1) | CR20130020A (ru) |
| CU (1) | CU24139B1 (ru) |
| DO (1) | DOP2013000003A (ru) |
| EA (1) | EA019043B1 (ru) |
| EC (1) | ECSP13012399A (ru) |
| MA (1) | MA34525B1 (ru) |
| MY (1) | MY160732A (ru) |
| NI (1) | NI201300007A (ru) |
| PE (1) | PE20131085A1 (ru) |
| PH (1) | PH12012502426A1 (ru) |
| RS (1) | RS20130094A1 (ru) |
| RU (1) | RU2446173C1 (ru) |
| SG (1) | SG187572A1 (ru) |
| WO (1) | WO2012021088A1 (ru) |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO2012110057A1 (en) | 2011-02-15 | 2012-08-23 | Chemisches Institut Schaefer Ag | Cefuroxime safety kit |
| US11116738B2 (en) | 2012-06-07 | 2021-09-14 | Children's Hospital Los Angeles | Methods for treating neutropenia using retinoid agonists |
| CN103908427B (zh) * | 2013-01-05 | 2014-12-17 | 石药集团百克(山东)生物制药有限公司 | 一种聚乙二醇修饰的rhG-CSF注射液及其制备方法 |
| RU2535002C2 (ru) * | 2013-04-04 | 2014-12-10 | Федеральное государственное бюджетное учреждение "Научно-исследовательский институт фармакологии" Сибирского отделения Российской академии медицинских наук | Средство коррекции отдаленных последствий нарушений сперматогенеза, вызванных цитостатическим воздействием |
| JP2017508737A (ja) | 2014-02-18 | 2017-03-30 | チルドレンズ ホスピタル ロサンゼルス | 好中球減少症の治療用の組成物及び方法 |
| EP3169697B1 (en) * | 2014-07-14 | 2024-10-23 | Gennova Biopharmaceuticals Ltd. | A novel process for purification of rhu-gcsf |
| IL247369B (en) * | 2016-08-18 | 2018-08-30 | B G Negev Tech And Applications Ltd | Polypeptides derived from CSF-m and their uses |
| KR102020995B1 (ko) * | 2017-10-30 | 2019-09-16 | 한국코러스 주식회사 | 콜로니자극인자와 폴리올이 접합된 접합물을 고수율로 제조하는 방법 |
| AU2021237761A1 (en) * | 2020-03-17 | 2022-09-22 | Drugrecure Aps | Liquid formulation of GM-CSF for inhalation |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5252714A (en) * | 1990-11-28 | 1993-10-12 | The University Of Alabama In Huntsville | Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde |
| US5824784A (en) * | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| WO2004083242A1 (en) * | 2003-03-21 | 2004-09-30 | Hanmi Pharm. Co. Ltd. | Human granulocyte-colony stimulating factor conjugate having enhanced stability in blood and process for the preparation thereof |
| RU2278870C2 (ru) * | 2004-08-30 | 2006-06-27 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | Способ получения, выделения, очистки и стабилизации рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека, пригодного для медицинского применения, и иммунобиологическое средство на его основе |
| WO2007084460A2 (en) * | 2006-01-18 | 2007-07-26 | Qps, Llc | Pharmaceutical compositions with enhanced stability |
Family Cites Families (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE68925966T2 (de) * | 1988-12-22 | 1996-08-29 | Kirin Amgen Inc | Chemisch modifizierte granulocytenkolonie erregender faktor |
| WO2007149594A2 (en) * | 2006-06-23 | 2007-12-27 | Quintessence Biosciences, Inc. | Modified ribonucleases |
-
2010
- 2010-08-13 RU RU2010133875/10A patent/RU2446173C1/ru active
-
2011
- 2011-07-19 CU CU20130012A patent/CU24139B1/es unknown
- 2011-07-19 PE PE2013000083A patent/PE20131085A1/es not_active Application Discontinuation
- 2011-07-19 PH PH1/2012/502426A patent/PH12012502426A1/en unknown
- 2011-07-19 MA MA35731A patent/MA34525B1/fr unknown
- 2011-07-19 KR KR1020137001860A patent/KR101549457B1/ko not_active IP Right Cessation
- 2011-07-19 MY MYPI2013000217A patent/MY160732A/en unknown
- 2011-07-19 WO PCT/RU2011/000532 patent/WO2012021088A1/en active Application Filing
- 2011-07-19 SG SG2013004544A patent/SG187572A1/en unknown
- 2011-07-19 RS RS20130094A patent/RS20130094A1/en unknown
- 2011-07-19 CN CN201180044089.6A patent/CN103140499B/zh not_active Expired - Fee Related
- 2011-08-01 EA EA201101035A patent/EA019043B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2013
- 2013-01-04 DO DO2013000003A patent/DOP2013000003A/es unknown
- 2013-01-18 CO CO13009151A patent/CO6670557A2/es unknown
- 2013-01-18 NI NI201300007A patent/NI201300007A/es unknown
- 2013-01-18 EC ECSP13012399 patent/ECSP13012399A/es unknown
- 2013-01-18 CR CR20130020A patent/CR20130020A/es unknown
- 2013-02-08 CL CL2013000400A patent/CL2013000400A1/es unknown
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5252714A (en) * | 1990-11-28 | 1993-10-12 | The University Of Alabama In Huntsville | Preparation and use of polyethylene glycol propionaldehyde |
| US5824784A (en) * | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| WO2004083242A1 (en) * | 2003-03-21 | 2004-09-30 | Hanmi Pharm. Co. Ltd. | Human granulocyte-colony stimulating factor conjugate having enhanced stability in blood and process for the preparation thereof |
| RU2278870C2 (ru) * | 2004-08-30 | 2006-06-27 | Закрытое Акционерное Общество "Биокад" | Способ получения, выделения, очистки и стабилизации рекомбинантного гранулоцитарного колониестимулирующего фактора человека, пригодного для медицинского применения, и иммунобиологическое средство на его основе |
| WO2007084460A2 (en) * | 2006-01-18 | 2007-07-26 | Qps, Llc | Pharmaceutical compositions with enhanced stability |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EA201101035A1 (ru) | 2012-02-28 |
| ECSP13012399A (es) | 2013-05-31 |
| CN103140499B (zh) | 2014-12-17 |
| RS20130094A1 (en) | 2013-08-30 |
| CR20130020A (es) | 2013-02-20 |
| CN103140499A (zh) | 2013-06-05 |
| DOP2013000003A (es) | 2013-07-31 |
| CU20130012A7 (es) | 2013-04-19 |
| MA34525B1 (fr) | 2013-09-02 |
| NI201300007A (es) | 2014-05-26 |
| KR101549457B1 (ko) | 2015-09-02 |
| CL2013000400A1 (es) | 2013-07-26 |
| KR20130043167A (ko) | 2013-04-29 |
| WO2012021088A1 (en) | 2012-02-16 |
| MY160732A (en) | 2017-03-15 |
| RU2446173C1 (ru) | 2012-03-27 |
| CU24139B1 (es) | 2015-12-23 |
| PE20131085A1 (es) | 2013-10-10 |
| CO6670557A2 (es) | 2013-05-15 |
| SG187572A1 (en) | 2013-03-28 |
| PH12012502426A1 (en) | 2021-06-02 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| EA019043B1 (ru) | Новый конъюгат гранулоцитарного колониестимулирующего фактора (г-ксф) с полиэтиленгликолем | |
| TWI364295B (en) | Polymer conjugates of cytokines, chemokines, growth factors, polypeptide hormones and antagonists thereof with preserved receptor-binding activity | |
| EP1425304B9 (en) | G-csf conjugates | |
| EP1250154B1 (en) | G-csf conjugates | |
| RU2447083C1 (ru) | НОВЫЙ ФУНКЦИОНАЛЬНО АКТИВНЫЙ ВЫСОКООЧИЩЕННЫЙ СТАБИЛЬНЫЙ КОНЪЮГАТ ИНТЕРФЕРОНА α С ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ПРЕДСТАВЛЕННЫЙ ОДНИМ ПОЗИЦИОННЫМ ИЗОМЕРОМ ПЭГ-NαH-ИФН, С УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, С ПРОЛОНГИРОВАННЫМ БИОЛОГИЧЕСКИМ ДЕЙСТВИЕМ, ПРИГОДНЫЙ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ, И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕГО ОСНОВЕ | |
| RU2485134C2 (ru) | Интерферон альфа 2в, модифицированный полиэтиленгликолем, получение препарата и его применение | |
| EA008866B1 (ru) | ПОЛИМЕРНЫЙ КОНЪЮГАТ МОДИФИКАЦИЙ ИНТЕРФЕРОНА-β, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ ПРОДУКТЫ НА ЕГО ОСНОВЕ И СПОСОБ ИХ ПОЛУЧЕНИЯ | |
| US20070004904A1 (en) | G-csf conjugates | |
| RU2749342C1 (ru) | Фармацевтическая композиция на основе белкового комплекса il-15 и ее применения | |
| JP2007533665A (ja) | 新規ｇ−ｃｓｆ結合体 | |
| KR101079993B1 (ko) | 폴리에틸렌글리콜 과립구 콜로니 자극인자 접합체 | |
| US8597634B2 (en) | Interferon alpha-2a modified by polyethylene glycol and methods of preparation thereof | |
| WO2011041376A1 (en) | Modified granulocyte colony stimulating factor (g-csf) | |
| TW201703793A (zh) | 聚乙二醇化介白素-11之組合物及方法 | |
| RU2664588C2 (ru) | Пролонгированный фактор эритропоэза человека и лекарственное средство на его основе | |
| RU2290411C2 (ru) | Конъюгаты g-csf | |
| AU2016277147A1 (en) | Pegylated granulocyte colony stimulating factor (GCSF) | |
| RU2576372C2 (ru) | МОЛЕКУЛА ИНТЕРФЕРОНА-β-1а ЧЕЛОВЕКА, МОДИФИЦИРОВАННАЯ ПОЛИЭТИЛЕНГЛИКОЛЕМ, ОБЛАДАЮЩАЯ ПРОТИВОВИРУСНОЙ, ИММУНОМОДУЛИРУЮЩЕЙ И АНТИПРОЛИФЕРАТИВНОЙ АКТИВНОСТЯМИ, С ПОВЫШЕННОЙ СТАБИЛЬНОСТЬЮ, УМЕНЬШЕННОЙ ИММУНОГЕННОСТЬЮ, УЛУЧШЕННЫМИ ФАРМАКОКИНЕТИЧЕСКИМИ И ФАРМАКОДИНАМИЧЕСКИМИ ПАРАМЕТРАМИ, ПРИГОДНАЯ ДЛЯ МЕДИЦИНСКОГО ПРИМЕНЕНИЯ И ИММУНОБИОЛОГИЧЕСКОЕ СРЕДСТВО НА ЕЕ ОСНОВЕ | |
| US20150329601A1 (en) | Methoxypolyethyleneglycol succinimidyl propionate modified recombinant Ganoderma Lucidum immunoregulatory protein, preparing method and application thereof | |
| CN1544472A (zh) | 支链聚乙二醇－干扰素及其制法和用途 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): MD TJ TM |
|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG RU |