EA017736B1 - Соединения 4-пиридинона и их применение для лечения рака - Google Patents

Abstract

В изобретении раскрыты соединения формулы (I)и их соли. Также раскрыты способы применения соединений в лечении пролиферативных заболеваний, таких как рак, и фармацевтические композиции, содержащие по меньшей мере одно соединение формулы (I) или фармацевтически приемлемые соли.

Description

Настоящее изобретение в целом относится к соединениям 4-пиридинона и их солям, способам применения таких соединений в лечении заболеваний, включающих рак, и фармацевтическим композициям, содержащим по меньшей мере одно из указанных соединений или их фармацевтически приемлемые соли.

Уровень техники

Мс1. также называемый рецептором фактора роста гепатоцитов (НСЕК), экспрессируется преимущественно в эпителиальных клетках, но также был идентифицирован в эндотелиальных клетках, мышечных клетках, гемопоэтических клетках и мотонейронах. Сверхэкспрессия фактора роста гепатоцитов и активация Мс1 связаны с возникновением и прогрессией целого ряда разных типов опухолей, а также активацией метастазирования.

Американская заявка на патент 2005/0245530 А1 раскрывает моноциклические гетероциклические соединения, которые ингибируют протеинтирозинкиназную активность рецепторов фактора роста, таких как Ме1, делая их эффективными в качестве противораковых агентов. Следует отметить, что все еще сохраняется потребность в противораковых соединениях, которые являются эффективными для лечения активированного Ме1 рака и предпочтительно обладают активностью против других путей развития рака.

Заявители обнаружили сильнодействующее соединение, которое обладает активностью против рака, зависимого от активации Ме1, и также обладает активностью против рака в качестве ингибитора УЕСЕК. Заявители также открыли пролекарства соединения, которые являются эффективными для введения соединения в более растворимой форме. В настоящее время стало возможным обеспечить соединения с различными фармакологическими профилями по сравнению с известными в настоящее время противораковыми соединениями для лечения активированного Ме1 рака и такими значениями стабильности, биодоступности, растворимости, терапевтическим индексом и величиной токсичности, которые обеспечивают усвоение лекарственного препарата.

Краткое описание чертежей

Изобретение проиллюстрировано прилагающимися чертежами, описанными ниже.

Фиг. 1 показывает противоопухолевые активности примеров 1 и 2 против СТЬ-16 ксенотрансплан татов карциномы желудка.

Фиг. 2 показывает противоопухолевую активность примера 1, вводимого орально один раз в день в течение 14 дней (стрелки указывают дозирование) при МПК 6.25 (мг/кг), МПК 12.5 и МПК 25 против ксенотрансплантатов глиобластомы И87.

Фиг. 3 показывает профили рН-растворимость примеров 1 и 2.

Сущность изобретения

Представлено описание соединений формулы (I)

или их солей, где С представляет собой Н, -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂ или -СНХ-0С(=0)2;

X представляет собой Н или алкил, факультативно замещенный одним или более из ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ,'Κ.²;

Ζ представляет собой алкил, циклоалкил, арил или гетероцикло, факультативно замещенный одним или более из алкила, ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ³Κ⁴; и

К¹, К², К³ и К⁴ независимо являются Н и/или алкилом.

Также представлено описание фармацевтических композиций, содержащих по меньшей мере одно соединение формулы (I) или его фармацевтически премлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.

Кроме того, представлено описание способов лечения рака, включающих введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении по меньшей мере одного соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

Подробное описание изобретения

Ниже приведены определения разных терминов, которые использовали для описания настоящего изобретения. Эти определения применяются к терминам в таком смысле, в котором они используются в заявке (за исключением их ограничения иным способом в определенных случаях) по отдельности или как часть большей группы.

Термин алкил и алк относятся к алкановому (углеводородному) радикалу с прямой или разветв

- 1 017736 ленной цепью, содержащему от 1 до 12 атомов углерода, предпочтительно от 1 до 6 атомов углерода и более предпочтительно от 1 до 4 атомов углерода. Примеры алкил и/или алк групп включают, но не ограничиваются этим, метил, этил, пропил, изопропил, η-бутил, ΐ-бутил, пентил, гексил, изогексил, гептил, октил, нонил, децил и додецил.

Термин низший алкил относится к алкил и/или алк группе, содержащей от 1 до 4 атомов углерода и предпочтительно от 1 до 2 атомов углерода. Когда индексы используются со ссылкой на алкильную или другую группу, индексы относятся к числу атомов углерода, которое может содержать группа. Например, термин Со-С₄-алкил включает связь и алкильную группу, содержащую от 1 до 4 атомов углерода, и термин С1-С₄-алкил относится к алкильным группам, содержащим от 1 до 4 атомов углерода. Примеры низших алкильных групп включают, но не ограничиваются этим, метил, этил, пропил, изопропил, η-бутил, ΐ-бутил и изобутил.

Алкил и/или алк группа может быть факультативно замещенной одним или более заместителями, предпочтительно от 1 до 4 заместителями, в любом доступном и замещаемом положении. Примеры заместителей включают галоген (например, единственный галогенозаместитель или множество галогенозаместителей, образующих во втором случае, группы, такие как перфторалкильная группа или алкильная группа, содержащие -СС1₃ или -СР₃), гидроксил, -ΝΗ₂, -ΝΗ/алкил). -Н(алкил)₂ и циано.

Термин циклоалкил относится к полностью насыщенной углеводородной группе, содержащей от 1 до 4 колец и от 3 до 8 атомов углерода в кольце. Примеры циклоалкильных групп включают, но не ограничиваются этим, циклопропил, циклобутил, циклопентил, циклогексил и циклогептил. Циклоалкильная группа может быть факультативно замещенной одним или более заместителями, предпочтительно от 1 до 4 заместителями в любой доступной и замещаемой точке присоединения. Примеры заместителей включают такие группы, которые перечислены для замещенного алкила.

Термин арил относится к циклическим ароматическим углеводородным группам, которые содержат от 1 до 2 ароматических кольца, такие как, например, фенильное, бифенильное или нафтильное. В случае, когда арильная группа содержит два ароматических кольца (например, бициклические и т.п.), ароматические кольца могут быть соединенными в одной точке (например, бифенил) или конденсированными (например, нафтил и фенантренил). Арильная группа может быть факультативно замещенной одним или более заместителями, предпочтительно от 1 до 5 заместителями, в любом доступном и замещаемом положении кольца или на любых конденсированных или присоединенных к нему кольцах, где позволяет валентность. Примеры заместителей включают алкил и такие группы, которые перечислены для замещенного алкила.

Термины гетероцикл, гетероциклик и гетероцикло относятся к полностью насыщенным, частично насыщенным или полностью ненасыщенным ароматическим (например, гетероарил) или неароматическим циклическим группам, которыми являются, например, 3-7-членные моноциклические или 711-членные бициклические кольцевые системы, содержащие по меньшей мере один гетероатом, по меньшей мере в одном углеродсодержащем кольце. Каждое кольцо гетероцикла, гетероциклика или гетероцикло, содержащее гетероатом, может содержать 1, 2, 3 или 4 гетероатомов, выбранных из атомов Ν, О и/или 8, причем гетероатомы N и/или 8 факультативно могут быть окислены и гетероатомы N факультативно могут быть кватернизованы. Гетероцикл, гетероциклик или гетероцикло могут присоединяться к остатку молекулы через любой гетероатом и атом углерода кольца кольцевой системы. Гетероцикл-, гетероциклик- или гетероциклогруппа могут быть замещенной в любой доступной точке присоединения по меньшей мере одним заместителем, предпочтительно 1-4 заместителями, выбранными из алкила, и такими, которые перечислены для замещенного алкила.

Примеры моноциклических гетероциклов, гетероцикликов или гетероцикло включают, но не ограничиваются этим, например, этиленоксид; азетидинил; пирролидинил; пирролил; пиразолил; оксетанил; пиразолинил; имидазолил; имидазолинил; имидазолидинил; оксазолил; оксазолидинил; изоксазолинил; изоксазолил; тиазолил; тиадиазолил; тиазолидинил; изотиазолил; изотиазолидинил; фурил; тетрагидрофурил; тиенил; оксадиазолил; пиперидинил; пиперазинил; 2-оксопиперазинил; 2-оксопиперидинил; 2оксопирролодинил; 2-оксоазепинил; азепинил; гексагидродиазепинил; 4-пиперидонил; пиридил; пиразинил; пиримидинил; пиридазинил; триазинил; триазолил; тетразолил; тетрагидропиранил; морфолинил; тиаморфолинил; тиаморфолинилсульфоксид; тиаморфолинилсульфон; 1,3-диоксолан и тетрагидро-1,1диоксотиенил.

Примеры бициклических гетероциклов, гетероцикликов или гетероцикло включают, но не ограничиваются этим, например, индолил; изоиндолил; бензотиазолил; бензодиоксолил; бензоксазолил; бензоксадиазолил; бензотиенил; хинуклидинил; хинолинил; тетрагидроизохинолинил; изохинолинил; бензимидазолил; бензопиранил; индолизинил; бензофурил; бензофуразанил; хромонил; кумаринил; бензопиранил; циннолинил; хиноксалинил; индазолил; пирролопиридил; фуропиридинил; такие как, например, фуро[2,3-с]пиридинил, фуро[3,2-Ь]пиридинил и фуро[2,3-Ь]пиридинил; дигидробензодиоксинил; дигидродиоксидобензотиофенил; дигидроизоиндолил; дигидроиндолил; дигидрохинолинил; дигидрохиназолинил; такие как, например, 3,4-дигидро-4-оксохиназолинил; триазинилазепинил и тетрагидрохинолинил.

Выражение терапевтически эффективное предполагает определение количества каждого агента,

- 2 017736 которое будет обеспечивать положительную динамику тяжести нарушения и частоты заболеваемости при воздействии каждого агента самого по себе, избегая при этом нежелательных побочных эффектов, которые обычно сопутствуют альтернативным методам лечения. Например, эффективные противораковые агенты пролонгируют выживаемость пациента, ингибируют быстрый рост пролиферирующих клеток, связанный с новообразованием или вызывают регрессию новообразования.

Соединения формулы (I) образуют соли, которые также находятся в рамках данного изобретения. Использующийся здесь термин соль(и) означает кислые и/или основные соли, образованные с неорганическими и/или органическими кислотами и основаниями. Дополнительно, когда соединение формулы (I) содержит как основную составляющую, такую как, в качестве неограничивающего примера, пиридинильная группа, так и кислую составляющую, такую как, в качестве неограничивающего примера, дигидрофосфатная группа, могут быть образованы цвиттерионы (внутренние соли) и включены в использующийся здесь термин соль(и). Фармацевтически приемлемые соли (т.е. нетоксичные, физиологически приемлемые) являются предпочтительными, хотя другие соли также являются полезными, например, на стадиях выделения или очистки, которые могут использоваться во время приготовлений. Соли соединений формулы (I) могут быть образованы, например, взаимодействием соединения формулы (I) с некоторым количеством кислоты или основания, например эквивалентным количеством, в среде, в которой соль осаждается или в водной среде с последующей лиофилизацией.

Использующееся здесь выражение фармацевтически приемлемая(ые) соль(и), если не указано иное, означает соли, содержащие фармацевтически приемлемые анионы или катионы, такие как гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, нитрат, сульфат, бисульфат, фосфат, кислый фосфат, изоникотинат, ацетат, лактат, салицилат, цитрат, кислый цитрат, тартрат, пантотенат, битартрат, аскорбат, сукцинат, малеат, гентизинат, фумарат, глюконат, глюкаронат, мезилат, сахарат, формат, бензоат, глютамат, метансульфонат, этансульфонат, сульфат, бензолсульфонат, р-толуолсульфонат и памоат [т.е. 1,1'-метиленбис-(2-гидрокси-3 -нафтоат)]-ные соли.

Соединения формулы (I) образуют соли, которые могут, например, использоваться для выделения и/или очистки соединений формулы (I). Соль(и) соединений формулы (I) может быть образована, например, взаимодействием соединения формулы (I), например, с эквивалентным количеством кислоты или основания в среде, которая позволяет таким образом образованной соли осаждаться или выделяться с помощью лиофилизации.

Примеры кислой(ых) соли(ей), которую могут образовывать соединения формулы (I) с неорганическими и/или органическими кислотами, включают, но не ограничиваются этим, например, ацетат, аскорбат, бензоат, бензолсульфонат, бисульфат, битартрат, кислый цитрат, цитрат, этансульфонат, формат, фумарат, гентизинат, глюконат, глюкаронат, глютамат, гидрохлорид, гидробромид, гидроиодид, изоникотинат, малеат, мезилат, метансульфонат, нитрат, пантотенат, фосфат, кислый фосфат, сахарат, салицилат, сукцинат, сульфат, тартрат, р-толуолсульфонат, лактат и памоат [т.е. 1,1'-метилен-бис-(2-гидрокси-3нафтоат)]-ные соли. Такие соли могут быть образованы согласно способам, известным среднему специалисту в данной области.

Примеры основной(ых) соли(ей), которые соединения формулы (I) могут образовывать с неорганическими и/или органическими основаниями, включают, но не ограничиваются этим, например, соли аммония; соли щелочных металлов, такие как, например, соли натрия, лития и калия; соли щелочноземельных металлов, такие как, например, соли кальция и магния; соли, образованные с органическими основаниями, такие как, например, бензатины, дициклогексиламины, 2-амино-2-(гидроксиметил)пропан1,3-диол (тризамин или трис), гидрабамины (такие как, например, Ν,Ν-бис(дегидроабиетил)этилендиамин), Ν-метил-Э-глюкамины, Ν-метил-Э-глюкамиды и ΐ-бутиламины; соли, образованные с аминокислотами, такие как, например, аргинин и лизин; и соли, образованные с помощью агентов, такие как, например, низшие галоидные алкилы (например, метил, этил, пропил и бутилхлориды, бромиды и иодиды), диалкилсульфаты (например, диметил, диэтил, дибутил и диамилсульфаты), галиды с длинной цепью (например, децил, лаурил, миристил и стеарилхлориды, бромиды и иодиды) и аралкилгалогениды (например, бензил и фенетилбромиды) для кватернизированных основных азотсодержащих групп. Такие соли могут быть образованы согласно способам, известным среднему специалисту в данной области.

Использующийся здесь термин пролекарство означает соединение, которое после введения пациенту подвергается химическому превращению с помощью метаболических или химических процессов для получения соединения формулы (I) или его соли. Разные формы пролекарств(а) хорошо известны в данной области. Примеры таких производных пролекарств можно увидеть в:

a) Эемдп οί Огобгидк, под ред. Н. Виибдаагб, (Е18еу1ет, 1985) и МеШобк ίη Еп/уто1оду, т. 112, с. 309396, под ред. К. ^1ббег е1 а1. (Асабетьс Ргекк, 1985);

b) А ТехЛоок οί Эгид Оекидп апб ОеуекртепЬ под ред. Кгокдаатб-Еаткеи и Н. Виибдаагб, СНар1ег 5, Пемди апб Аррйсабоп οί Ргобгидк, Ьу Н. Виибдаагб, с. 113-191 (1991);

c) Н. Виибдаагб, Абуаисеб Эгид Пейуегу К.еу1ете, 8:1-38 (1992).

Использующееся здесь выражение амплификация гена означает селективное образование фрагмента ДНК, что приводит к множественным копиям гена Ме1 или фрагменту хромосомы, в которой Ме1

- 3 017736 является кодированным.

Использующееся здесь выражение активированная Ме1 мутация означает селективное изменение в ДНК последовательности Ме1. что приводит к конститутивному (т.е. непрерывному) фосфорилированию Мс1 белка.

Использующееся здесь выражение НСЕ стимуляция означает способность НСЕ связывать его когнатный рецептор (Ме1) таким образом. чтобы активировать рецептор. что приводит к фенотипическому отклику. В случае Ме1. это может быть клеточной пролиферацией. подвижностью. дифференциацией и/или выживаемостью.

Использующийся здесь термин пациент охватывает все разновидности млекопитающих. включая человека. коров. лошадей. собак и кошек; и предпочтительно человека.

В одном варианте представлены соединения формулы (I)

или их соли.

где С представляет собой Н. -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂ или -ΕΉΧ-ΘΕ’(=Θ)Ζ;

X представляет собой Н или алкил. факультативно замещенный одним или более из ОН. галогена. циано и/или -ΝΚ,'Κ.²;

Ζ представляет собой алкил. циклоалкил. арил или гетероцикло. факультативно замещенный одним или более из алкила. ОН. галогена. циано и/или -ΝΚ³Κ.⁴; и

Я¹. Я². Я³ и Я⁴ независимо являются Н и/или алкилом.

В одном варианте обеспечено соединение формулы (I) или его соль. где С представляет собой Н. Соединение этого варианта имеет структуру. представленную формулой (II) н

Соединение формулы (II) может существовать в енольной форме. представленной следующей формулой:

Использующиеся здесь термины соединение формулы (II) и соединение формулы (I). где С представляет собой Н относятся к соединению формулы (II) в кето форме. енольной форме или любой смеси. содержащей кето и енольную формы.

В другом варианте соединение формулы (II) представлено в виде соли. Примеры солей соединения формулы (II) включают. но не ограничиваются этим. трифторуксусную кислоту и соли соляной кислоты.

В одном варианте представлены соединения формулы (II) или их соли. в которых

С представляет собой -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂ или -ΕΉΧ-ΘΕ’(=Θ)Ζ;

X представляет собой Н или алкил. факультативно замещенный одним или более из ОН. галогена. циано и/или -NЯ¹Я²;

Ζ представляет собой алкил. циклоалкил. арил или гетероцикло. факультативно замещенный одним или более из алкила. ОН. галогена. циано и/или -NЯ³Я⁴;

Я¹. Я². Я³ и Я⁴ независимо являются Н и/или алкилом.

Предпочтительно. чтобы X являлся Н или метилом. Соединения или их соли этого варианта являются эффективными в качестве пролекарств соединения формулы (II). После введения млекопитающему соединения этого варианта или их фармацевтически приемлемые соли подвергаются химическому пре

- 4 017736 вращению ίη νίνο путем метаболических или химических процессов для получения соединения формулы (II).

В одном варианте представлены соединения формулы (I) или их соли, в которых С представляет собой -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂; X представляет собой Н или С1_₄алкил, факультативно замещенный одним или более из ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ,'Κ.²; и Я¹ и Я² независимо являются Н и/или алкилом. Соеди-

Предпочтительно, чтобы X представлял собой Н, метил, замещенный метил, этил или замещенный этил; более предпочтительно, чтобы X представлял собой Н или метил, и более предпочтительно, чтобы X представлял собой Н. Соединения формулы (III) могут быть обеспечены в виде фармацевтически приемлемых солей, например солей этаноламина, бис-этаноламина, тризамина, бис-тризамина или Ν-метилΌ-глюкамина. Примером соединения формулы (III) является соединение формулы (Ша)

которое может быть обеспечено в виде соли. Пригодные соли соединения формулы (Ша) включают, но не ограничиваются этим, соли этаноламина, бис-этаноламина, трисамина и бис-трисамина. Соединения формулы (III) или их соли этого варианта являются эффективными в качестве пролекарств соединения формулы (II).

В одном варианте представлены соединения формулы (I) или их соли, в которых С представляет собой -СΗX-ΟС(=Ο)Ζ; X представляет собой Н или алкил, факультативно замещенный одним или более из ОН, галогена, циано и/или -NЯ¹Я²; Ζ представляет собой алкил, циклоалкил, арил или гетероцикло, факультативно замещенные одним или более из алкила, ОН, галогена, циано и/или -NЯ³Я⁴; и Я¹, Я², Я³ и Я⁴ независимо являются Н и/или алкилом. Предпочтительно, чтобы X представлял собой Н, С_1-4алкил или замещенный С_1-4алкил; более предпочтительно Н, метил, этил, замещенный метил или замещенный этил и еще более предпочтительно Н или метил. Предпочтительно, чтобы Ζ представлял собой С_1-6алкил, замещенный С_1-6алкил, С_3-6циклоалкил, замещенный С_3-6циклоалкил, замещенный фенил, факультативно замещенный моноциклический или бициклический гетероцикло. Более предпочтительно, чтобы Ζ представлял собой С_1-6алкил, замещенный -ΝΗ₂ или 5-6-членным гетероцикло, содержащим один гетероатом азота, например, пирролидинильные и пиперидинильные группы. Соединения формулы (II) или их соли этого варианта являются эффективными в качестве пролекарств соединения формулы (II).

В другом варианте представлены соединения формулы (I) или их соли, в которых С представляет собой

Соединения этого варианта могут быть обеспечены в виде солей. Соединения или их соли этого варианта являются эффективными в качестве пролекарств соединения формулы (II).

В одном варианте соединение формулы (I) или его соль представлено следующими соединениями: №(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамид (1);

- 5 017736 (3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин1-(4Н)-ил)метил первичный фосфорно-кислый (2);

(8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 2-аминопропаноат (3);

(8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 2-амино-3-метилбутаноат (4);

(8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 2-амино-4-метилпентаноат (5);

(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин1-(4Н)-ил)метилпиперидин-3-карбоксилат (6);

(8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метилпирролидин-2-карбоксилат (7);

(8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1 -(4Н)-ил)метилпирролидин-3-карбоксилат (8);

(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин1-(4Н)-ил)метилпиперидин-4-карбоксилат (9);

1-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1 -(4Н)-ил)этилпиперидин-4-карбоксилат (10);

(28)-1-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)этил 2-амино-3-метилбутаноат (11) или (3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин1-(4Н)-ил)метил 1-метилпиперидин-4-карбоксилат (12).

Фактор роста гепатоцитов (НСЕ), также известный как рассеивающий фактор (8Е), из-за его способности разрушать колониеобразование ίη νίίτο, является мезенхинально извлеченным цитокином, который вызывает множественные плейотропные эффекты в нормальных и неопластических клетках (8оппепЬегд е! а1., 1. Се11 ΒίοΙ., 123:223-235 (1993); Ма!кита!о е! а1., Сгй. Кет. Опсод., 3:27-54 (1992) и 8!окег е! а1., №1Шге. 327:239-242 (1987)). Известно, что эти эффекты включают пролиферацию как в эпителиальных, так и в эндотелиальных клетках, распад эпителиальных колоний на отдельные клетки, стимуляцию подвижности (мотогенезис) эпителиальных клеток, выживаемость клеток, стимулирование морфогенеза клеток (Моп!екапо е! а1., Се11, 67:901-908 (1991)) и развитие инвазии (81е11а е! а1., 1й. 1. Вюсйет. Се11 Βίο1., 12:1357-1362 (1999) и 8Шаг1 е! а1., 1й. 1. Ехр. Ра!1., 81:17-30 (2000)), все критические процессы, предрасполагающие к метастазированию. Сообщалось, что НСЕ также стимулирует ангиогенез (Викко1ίηο е! а1., 1. Се11 Βίο1., 119:629-641 (1992)). Дополнительно, НСЕ играет критическую роль в регенерации тканей, заживлении ран и нормальных эмбриональных процессах, все из которых зависят как от клеточной подвижности, так и от пролиферации.

НСЕ инициирует эти физиологические процессы посредством высокоаффинного связывания с его родственным рецептором, Ме! протеинтирозинкиназным рецептором, идентифицированным протоонкогеном (Рагк е! а1, Ргос. №111. Асаб. 8с1. И8А, 84:6379-6383 (1987) и Во Наго е! а1., 8с1епсе, 251:802-804 (1991)). Зрелая форма Ме! состоит из высокогликозилированной внеклеточной α-субъединицы, а также β-субъединицы с большим внутриклеточным доменом, трансмембранного сегмента и цитоплазматического тирозинкиназного домена. Связывание лиганда индуцирует димеризацию Ме!, что ведет к аутофосфорилированию и активации рецептора. Активация Ме! инициирует каскады сигнальной трансдукции, что определяется трансфосфорилированием ключевых цитоплазматических тирозиновых остатков, ответственных за обновление множественных эффекторных белков (Еигде е! а1., Опсодепе, 19:5582-5589 (2000)). Они включают р85-субъединицу киназы Р1-3, фосфолипазу Су (Саи1 е! а1., Опсодепе, 19:15091518 (2000)), адаптерные белки СгЬ2 и 81е, белок фосфотазу 8НР2 и адаптерный белок СаЫ. Последний представляет собой важную заякоривающую молекулу, которая становится фосфорилированной по тирозину в ответ на удерживание лиганда (8сйаерег е! а1., 1. Се11 Вю1., 149:1419-1432 (2000); ВагбеШ е! а1., Опсодепе, 18:1139-1146 (1999) и 8асНк е! а1, 1. Се11 Вю1., 150:1375-1384 (2000)). Сообщалось об активации других сигнальных молекул в клетках, стимулированных НСЕ, особенно Как, МАР-киназ, 8ТАТк, ЕКК1, -2 и ЕАК (Ташшцга е! а1., Опсодепе 17:57-65 (1998): Ьа1 е! а1., 1. Вю1. С1ет., 275:7474-7480 (2000) и Еигде е! а1., Опсодепе, 19:5582-5589 (2000)). Роль многих из этих сигнальных молекул была точно установлена в клеточной пролиферации.

Ме!, также называемый рецептором фактора роста гепатоцитов (НСЕК), преимущественно экспрессируется в эпителиальных клетках, но также был идентифицирован в эндотелиальных клетках, моиобластах, гематопоэтических клетках и мотонейронах. Сверхэкспрессия фактора роста гепатоцитов и активация Ме! связаны с возникновением и прогрессией целого ряда разных типов опухолей, а также активацией метастазирования. Начальное доказательство связи Ме! с раком было подтверждено идентификацией миссенс-мутаций в киназном домене, которые предрасполагают к развитию у человека папиллярной почечноклеточной карциномы (ППК) и гепатоцеллюлярной карциномы (ГЦК) (ЬиЬепкку е! а1., Атег. 1. Ра11ю1оду, 155:517-526 (1999)). Мутированные формы Ме! также были идентифицированы в раке яичников,

- 6 017736 детской ГЦК, карциноме желудка, плоскоклеточной карциноме головы и шеи, немелкоклеточной карциноме легких, метастазах колоректального рака (С11пк1епкеп е! а1., Сапсег Кек., 63:7345-7355 (2003); Ьее е! а1., Опсодепе, 19:4947-4953 (2000) и Эйен/о е! а1., С1ш. Сапсег Кек., 1:147-154 (1995)). Дополнительно, еще один признак, подтверждающий роль Ме! в раке, основан на сверхэкспрессии НСЕ и Ме! рецептора в разных опухолях, включающих рак щитовидной железы, карциному яичников и карциному поджелудочной железы. Также был показан его рост в метастазах колоректальных карцином в печень (Копд е! а1., Сапсег Кек., 55:1963-1970 (1995); Копд е! а1., Сапсег Кек., 53:5355-5360 (1993); Кепетоййу е! а1., Вг. 1. Сапсег, 66:243-247 (1992) и Зсатршо е! а1., 1. Ра!йо1о§у, 189:570-575 (1999)). ТРК-Ме! (активированная форма, аналогичная ВСК/ЛЫ в СМЬ) была описана и идентифицирована в карциноме желудка человека (Ргос. №111. Лсаб. За ИЗА, 88:4892-4896 (1991)). У пациентов с инвазивной карциномой молочной железы, а также у пациентов с немелкоклеточным раком легких в последнем исследовании экспрессия рецептора или лиганда является прогностическим фактором уменьшения выживаемости, и более того связи Ме! с прогрессированием опухоли (Сатр е! а1., Сапсег, 86:2259-2265 (1999) и Макиуа е! а1., Вг. 1. Сапсег, 90:1555-1562 (2004)). В целом, большинство человеческих опухолей и клеточных линий опухолей мезенхимального происхождения несоответственно экспрессируют НСЕК и/или НСЕ.

Многочисленные экспериментальные данные подтверждают роль НСЕ и Ме! в инвазии, росте, выживании и прогрессировании опухоли, что в конечном итоге приводит к метастазам. До появления клинических признаков трансгенная экспрессия НСЕ приводит к возникновению метастатического фенотипа (Такауата е! а1., Ргос. №111. Лсаб. 8ск И8А, 94:701-706 (1997)) и увеличенный/сверхэкспрессированный Ме! спонтанно трансформирует Ы1Н-3Т3 клетки (Соорег е! а1., ЕМВО 1., 5:2623-2628 (1986)).

Было показано, что биологические агенты, такие как рибозимы, антитела и направленное воздействие на антисмысловую РНК или Ме! ингибируют образование опухолей (8!аЫ1е е! а1., Сепе Тйетару, 11:325-335 (2004); Балд е! а1., Сйп. Сапсег Кек, 9:4274-4281 (2003) и Сепеп!есй И8 6214344 (2001)). Таким образом, предполагается, что селективные модуляторы маленьких молекул киназ, оказывающие направленное воздействие на Ме!, обладают терапевтическим потенциалом для лечения рака, при этом активация Ме! рецептора играет критическую роль в развитии и прогрессировании первичных опухолей и вторичных метастаз. Также известно, что НСЕ регулирует антиогенез, процесс, который является критическим в росте опухоли и ее распространении. Следовательно, для этого класса модуляторов существует потенциал для воздействия на антиогенез-зависимые заболевания, а также такие, которые помимо прочих, включают диабетическую ретинопатию, макулярную дегенерацию, ожирение и воспалительные заболевания, таких как ревматоидный артрит.

Соединение формулы (II) является эффективным для лечения рака, например рака, зависимого от активации Ме!. Активация Ме! регулируется амплификацией гена, активированной Ме! мутацией и/или НСЕ стимуляцией. Таким образом, лечение включает введение пациенту соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарства. Было обнаружено, что соединение формулы (II) является особенно эффективным при лечении рака из-за более сильного действия по сравнению с известными киназными ингибиторами Ме!. Кроме того, соединение формулы (II) является особенно эффективными при лечении рака, поскольку также обладает активностью в качестве ингибитора УЕСЕК (рецептор фактора роста эндотелия сосудов), такого как ингибитор УЕСЕК-2.

В одном варианте представлен способ лечения рака, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Способ этого варианта можно использовать для лечения разных видов рака, включая, но не ограничиваясь этим, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенную саркому, рабдомиосаркому, злокачественную фиброзную гистиоцитому (МЕН), фибросаркому, глиобластому/астроцитому, меланому и мезотелиому. Предпочтительно, чтобы способ этого варианта применялся для лечения рака легкого, рака органов головы и шеи, рака желудка или рака мочевого пузыря. Соединения, пригодные для введения в способе лечения этого варианта, включают пролекарства соединения формулы (II), например соединения формулы (I), в которой С является -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂ или -СНХ-ОС(=О)2; X представляет собой Н или алкил, факультативно замещенный одним или более из ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ?Κ²; Ζ представляет собой алкил, циклоалкил, арил или гетероцикло, факультативно замещенные одним или более из алкила, ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ³Κ⁴, и К¹, К², К³ и К⁴ независимо являются Н и/или алкилом. Предпочтительно, чтобы X представлял собой Н или С_1-4-алкил или замещенный С_1-4-алкил; более предпочтительно Н, метил, этил, замещенный метил или замещенный этил и еще более предпочтительно Н или метил. Предпочтительно, чтобы млекопитающим являлся человек.

В одном варианте обеспечен способ лечения рака, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарства. Например, в этом способе может вводиться терапевтически эффективное количество соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемая соль либо пролекарство. Способ этого варианта может применяться для лечения разных видов рака, включая, но не ограничиваясь этим, рак мо

- 7 017736 чевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенную саркому, рабдомиосаркому, МЕН/фибросаркому, меланому, мезотелиому и глиобластому/астроцитому. Предпочтительно, чтобы способ этого варианта применялся для лечения рака легкого, рака органов головы и шеи, рака желудка или рака мочевого пузыря. Предпочтительно, чтобы млекопитающим являлся человек.

В одном варианте обеспечен способ лечения рака, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, одного или более пролекарств соединения формулы (II) или фармацевтически приемлемые соли указанных пролекарств. Например, способ может применяться для введения терапевтически эффективного количества одного или более пролекарств соединения формулы (II) или фармацевтически приемлемых солей указанных пролекарств. После введения млекопитающему одно или более пролекарств соединения формулы (II) подвергается химическому превращению ίη νίνο с помощью метаболических или химических процессов для получения соединения формулы (II). Терапевтически эффективное количество одного или более пролекарств относится к количеству(ам) введенного пролекарства(в), которое необходимо для обеспечения терапевтически эффективного количества соединения формулы (II) ίη νίνο. Предпочтительно, чтобы в способе этого изобретения вводилось одно пролекарство. Более предпочтительно, чтобы в способе этого изобретения вводилось терапевтически эффективное количество одного пролекарства. Пригодные пролекарства включают соединения формулы (I), в которых 6 является -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂ или -ΟΗΧ-00(=0)Ζ; X представляет собой Н или алкил, факультативно замещенный одним или более из ОН, галогена, циано и/или -ΝΡ'Ρ²; Ζ представляет собой алкил, циклоалкил, арил или гетероцикло, факультативно замещенный одним или более из алкила, ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ³Κ⁴; и К¹, Я², Я³ и Я⁴ независимо являются Н и/или алкилом. Предпочтительно, чтобы X представлял собой Н или С_1-4алкил или замещенный С_1-4алкил; более предпочтительно Н, метил, этил, замещенный метил или замещенный этил и еще более предпочтительно Н или метил. Способ этого варианта может применяться для лечения разных видов рака, включая, но не ограничиваясь этим, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенную саркому, рабдомиосаркому, МЕН/фибросаркому, меланому, мезотелиому и глиобластому/астроцитому. Предпочтительно, чтобы способ этого варианта применялся для лечения рака легкого, рака органов головы и шеи, рака желудка или рака мочевого пузыря. Предпочтительно, чтобы млекопитающим являлся человек.

В одном варианте обеспечен способ лечения рака, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, соединения формулы (Ша) или его фармацевтически приемлемой соли. Соединение формулы (Ша) является пролекарством соединения формулы (II). В настоящем способе может вводиться терапевтически эффективное количество соединения формулы (Ша) или его фармацевтически приемлемая соль. Терапевтически эффективное количество соединения формулы (Ша) относится к количеству введенного пролекарства, необходимого для обеспечения терапевтически эффективного количества соединения формулы (II) ίη νίνο. Способ этого варианта может применяться для лечения разных видов рака, включая, но не ограничиваясь этим, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенную саркому, рабдомиосаркому, МЕН/фибросаркому, меланому, мезотелиому и глиобластому/астроцитому. Предпочтительно, чтобы способ этого варианта применялся для лечения рака легкого, рака органов головы и шеи, рака желудка или рака мочевого пузыря. Предпочтительно, чтобы млекопитающим являлся человек. Фармацевтически приемлемые соли соединения формулы (Ша), эффективные в способе этого варианта, включают соль бис-этаноламина и соль бис-трисамина.

В одном варианте обеспечено применение соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли в производстве медицинских препаратов для лечения рака. Предпочтительно, чтобы в настоящем изобретении подлежащим лечению раком являлся рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенная саркома, рабдомиосаркома, меланома, глиобластома/астроцитома, МЕН/фибросаркома или мезотелиома.

В одном варианте обеспечен способ лечения рака у млекопитающего, в котором рак зависит от Ме! активации, при этом Ме! активация регулируется амплификацией гена, активированной Ме! мутацией и/или НОЕ стимуляцией, включающий введение пациенту соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли. Способ этого варианта можно использовать для лечения разных видов рака, включая, но не ограничиваясь этим, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенную саркому, рабдомиосаркому, МЕН/фибросаркому, меланому, мезотелиому и глиобластому/астроцитому. Предпочтительно, чтобы способ этого варианта применялся для лечения рака легкого, рака органов го

- 8 017736 ловы и шеи, рака желудка или рака мочевого пузыря. Соединения, пригодные для введения в способе лечения в этом варианте, включают пролекарства соединения формулы (II), например соединения формулы (I), в которых С является -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂ или -СНХ-0С(=0)2; X представляет собой Н или алкил, факультативно замещенный одним или более из ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ,'Κ.²; Ζ представляет собой алкил, циклоалкил, арил или гетероцикло, факультативно замещенный одним или более из алкила, ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ³Κ⁴; и К¹, К², К³ и К⁴ независимо являются Н и/или алкилом. Предпочтительно, чтобы X представлял собой Н или С_1-4-алкил или замещенный С_1-4-алкил; более предпочтительно Н, метил, этил, замещенный метил или замещенный этил и еще более предпочтительно Н или метил. Предпочтительно, чтобы млекопитающим являлся человек. Предпочтительно, чтобы в способе этого варианта вводилось терапевтически эффективное количество соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли.

В одном варианте обеспечен способ лечения рака у млекопитающего, в котором рак зависит от Ме1 активации, при этом Ме1 активация регулируется амплификацией гена, активированной Ме1 мутацией и/или НСЕ стимуляцией, включающий введение пациенту соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарств. Способ этого варианта можно использовать для лечения разных видов рака, включая, но не ограничиваясь этим, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенную саркому, рабдомиосаркому, МЕН/фибросаркому, глиобластому/астроцитому, меланому и мезотелиому. Предпочтительно, чтобы способ этого варианта применялся для лечения рака легкого, рака органов головы и шеи, рака желудка или рака мочевого пузыря. Предпочтительно, чтобы млекопитающим являлся человек. Предпочтительно, чтобы в способе этого варианта вводилось терапевтически эффективное количество соединения формулы (II) или его фармацевтически приемлемой соли.

В одном варианте обеспечен способ лечения рака у млекопитающего, в котором рак зависит от Ме1 активации, при этом Ме1 активация регулируется амплификацией гена, активированной Ме1 мутацией и/или НСЕ стимуляцией, включающий введение пациенту одного или более пролекарств соединения формулы (II) или солей указанных пролекарств. После введения млекопитающему одно или более пролекарств соединения формулы (II) подвергается химическому превращению ίη νίνο с помощью метаболического или химического процесса для получения соединения формулы (II). Терапевтически эффективное количество одного или более пролекарств относится к количеству(ам) введенного пролекарства(в), необходимого для обеспечения терапевтически эффективного количества соединения формулы (II) ίη νίνο. Предпочтительно, чтобы в способе этого варианта вводилось одно пролекарство в терапевтически эффективном количестве. Пригодные пролекарства включают соединения формулы (I), в которой С является -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂ или -СНХ-0С(=0^; X представляет собой Н или алкил, факультативно замещенный одним или более из ОН, галогена, циано и/или -ЛКЗК²; Ζ представляет собой алкил, циклоалкил, арил или гетероцикло, факультативно замещенный одним или более из алкила, ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ³Κ⁴; и К¹, К², К³ и К⁴ независимо являются Н и/или алкилом. Предпочтительно, чтобы X представлял собой Н или С_1-4-алкил или замещенный С_1-4-алкил; более предпочтительно Н, метил, этил, замещенный метил или замещенный этил и еще более предпочтительно Н или метил. Способ этого варианта может использоваться для лечения разных видов рака, включая, но не ограничиваясь этим, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенную саркому, рабдомиосаркому, МЕН/фибросаркому, глиобластому/астроцитому, меланому и мезотелиому. Предпочтительно, чтобы способ этого варианта применялся для лечения рака легкого, рака органов головы и шеи, рака желудка или рака мочевого пузыря. Предпочтительно, чтобы млекопитающим являлся человек.

В одном варианте обеспечен способ лечения рака у млекопитающего, в котором рак зависит от Ме1 активации, при этом Ме1 активация регулируется амплификацией гена, активированной Ме1 мутацией и/или НСЕ стимуляцией, включающий введение пациенту соединения формулы (Ша) или его фармацевтически приемлемой соли. Соединение формулы (Ша) представляет собой пролекарство соединения формулы (II). Терапевтически эффективное количество соединения формулы (Ша) относится к количеству введенного пролекарства, необходимого для обеспечения терапевтически эффективного количества соединения формулы (II) ίη νίνο. Предпочтительно, чтобы вводилось терапевтически эффективное количество соединения формулы (Ша) или его фармацевтически приемлемой соли. Способ этого варианта может применяться для лечения разных видов рака, включая, но не ограничиваясь этим, рак мочевого пузыря, рак молочной железы, колоректальный рак, рак желудка, рак органов головы и шеи, рак почки, рак печени, рак легкого, рак яичников, рак поджелудочной железы/желчного пузыря, рак предстательной железы, рак щитовидной железы, остеогенную саркому, рабдомиосаркому, МЕН/фибросаркому, глиобластому/астроцитому, меланому и мезотелиому. Предпочтительно, чтобы способ этого варианта применялся для лечения рака легкого, рака органов головы и шеи, рака желудка или рака мочевого пузыря. Предпочтительно, чтобы млекопитающим являлся человек.

При лечении рака часто успешной является комбинация химиотерапевтических агентов и/или дру

- 9 017736 гих терапий (например, лучевая терапия). Второй (или третий) агент может иметь такой же или отличный механизм действия, чем первичный терапевтический агент. Особо полезным может быть использование цитотоксических лекарственных комбинаций, когда два или более введенных лекарственных препарата действуют по-разному, или на разных фазах клеточного цикла, и/или когда два или более препаратов имеют непересекающиеся токсичности или побочные эффекты, и/или когда каждый из комбинированных препаратов обладает подтвержденной эффективностью в лечении конкретной стадии заболевания, обнаруженной у пациента.

В одном варианте обеспечен способ лечения рака, включающий введение млекопитающему, нуждающемуся в таком лечении, соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемой соли или пролекарства; и введение одного или более дополнительных противораковых агентов.

Выражение дополнительный противораковый агент относится к лекарственному препарату, выбранному из одного или более следующих препаратов: алкилирующие агенты (включающие азотистый иприт, алкилсульфонаты, нитрозомочевину, этилениминовые производные и триазены); антиангиогенные препараты (включающие матричные металлопротеиназные ингибиторы); антиметаболиты (включающие ингибиторы аденозиндеаминазы, антагонисты фолиевой кислоты, пуриновые аналоги и пиримидиновые аналоги); антибиотики или антитела (включающие моноклональные антитела, СТЬА-4 антитела, антрациклины); ингибиторы ароматазы; модификаторы отклика клеточного цикла; энзимы; ингибиторы фарнесилтрансферазы; гормональные и антигормональные агенты и стероиды (включающие синтетические аналоги, глюкокортикоиды, эстрогены/антиэстрогены [например, 8ЕКМ8], андрогены/антиандрогены, прогестины, агонисты прогестероновых рецепторов и агонисты и антагонисты рилизинг-гормона лютеинизирующего гормона [ЬНКН]); инсулиноподобный фактор роста (ЮЕ)/ рецептор инсулиноподобного фактора роста (ЮЕК) модуляторов системы (включающий ингибиторы ЮЕК1); интегрин-сигнальные ингибиторы; ингибиторы киназы (включающие мультикиназные ингибиторы и/или ингибиторы 8гс киназы или 8тс/аЫ, циклин-зависимые киназные ингибиторы [СОК], рапНег, Нег-1 и Нег-2 антитела, ингибиторы УЕСЕ, включая анти-УЕСЕ антитела; ингибиторы ЕСЕК, ингибиторы митоген-активированных протеиновых киназ [МАР], ингибиторы МЕК, ингибиторы Аигога-киназы, ингибиторы РОСЕ и другие ингибиторы тирозинкиназы или серин/треонинкиназы; агенты, разрывающие микротрубочки, такие как эктеинасцидины или их аналоги и производные; агенты, стабилизирующие микротрубочки, такие как таксаны, и природные ингибиторы эпотилоны и их синтетические и полусинтетические аналоги; связывающие микротрубочки дестабилизирующие агенты (включающие винка алкалоиды); топоизомеразные ингибиторы; пренил-протеин трансферазные ингибиторы; платиновые координационные комплексы; ингибиторы сигнальной трансдукции и другие агенты, применяющиеся в качестве противораковых и цитотоксических агентов, такие как модификаторы биологического отклика, факторы роста и иммунные модуляторы.

Соответственно соединения настоящего изобретения могут вводиться в комбинации с другими противораковыми терапиями, эффективными в лечении рака или других пролиферативных заболеваний. Изобретение, кроме того, включает использование соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемых солей и пролекарств в приготовлении лекарственных препаратов для лечения рака, и/или включает упаковку соединения формулы (I) вместе с инструкциями по применению соединения в комбинации с другими противораковыми или цитотоксичными агентами и терапиями для лечения рака. Настоящее изобретение, кроме того, включает комбинации соединения формулы (I) и один или более дополнительных агентов в виде комплекта, например, когда они упакованы вместе или помещены в отдельных упаковках для продажи в виде комплекта или когда они упакованы для составления рецептуры.

Соединения настоящего изобретения можно составлять или вводить совместно с другими терапевтическими агентами, которые выбираются по их конкретной эффективности в отношении побочных эффектов, связанных с вышеупомянутыми условиями. Например, соединения изобретения могут быть составлены с агентами для предотвращения тошноты, гиперчувствительности и расстройства желудка, такими как противорвотные средства, и Н₁ и Н₂ антигистамины.

Соединения настоящего изобретения могут содержать один или более дополнительных асимметричных атомов углерода и таким образом существуют в двух или более стереоизомерических формах. Настоящее изобретение включает все возможные индивидуальные стереоизомеры, их индивидуальные таутомерные формы вместе с их смесями.

Разделение диастереоизомеров можно осуществить обычными методами, например фракционной кристаллизацией, хроматографией или ВЭЖХ стереоизомерной смеси соединения настоящего изобретения, или его пригодной соли или производного. Индивидуальный энантиомер соединения может быть также приготовлен из соответствующего оптически чистого промежуточного соединения или путем разделения, например, с помощью ВЭЖХ соответствующего рацемата с использованием хирального носителя или с помощью фракционной кристаллизации диастереоизомерных солей, образованных взаимодействием соответствующего рацемата с пригодной оптически активной кислотой или основанием, при необходимости.

Также, это изобретение включает класс фармацевтических композиций, которые содержат соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и пролекарство совместно с одним или бо

- 10 017736 лее нетоксичными, фармацевтически приемлемыми носителями и/или разбавителями, и/или адъювантами (вместе именуемые здесь как носитель) и, при желании, с другими активными компонентами. Соединение формулы (I) может вводиться любым пригодным способом, предпочтительно в форме фармацевтической композиции, адаптированной к такому способу введения, и в дозе, эффективной для планируемого лечения. Соединения и композиции настоящего изобретения могут вводиться, например, орально, мышечно или парентерально, включая интраваскулярный, внутривенный, интраперитонеальный, подкожный, внутримышечный, подложечный способ введения и вливание дозированной лекарственной формы, содержащей обычно используемые фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и растворители. Например, фармацевтический носитель может содержать смесь маннитола или лактозы и микрокристаллической целлюлозы. Смесь может содержать дополнительные компоненты, такие как лубриканты, например стеарат магния и распадающееся вещество, такое как кросповидон. Смесь носителя может быть заключена в желатиновую капсулу или прессована в виде таблетки.

Фармацевтически активные соединения этого изобретения можно обрабатывать в соответствии с обычными способами фармакологии для получения медицинских препаратов для введения пациентам, включая человека и других млекопитающих.

Для орального введения фармацевтическая композиция может быть в форме, например, таблетки, капсулы, суспензии или жидкости. Предпочтительно, чтобы фармацевтическая композиция была приготовлена в виде стандартной лекарственной формы, содержащей определенное количество активного компонента. Примерами таких стандартных лекарственных форм являются таблетки или капсулы. Например, они могут содержать активный компонент в количестве примерно от 1 до 2000 мг, предпочтительно от 1 до 500 мг, более предпочтительно от 5 до 150 мг. Пригодная ежедневная доза для человека или другого млекопитающего может различаться в зависимости от состояния пациента и других факторов, но может определяться простыми способами.

Количества вводимых соединений и режим дозирования для лечения стадии заболевания соединениями и/или композициями данного изобретения зависят от множества факторов, включающих возраст, вес, пол и медицинские показания пациента, тип заболевания, тяжесть заболевания, режим и частоту введения, а также конкретное используемое соединение. Таким образом, режим дозирования может значительно различаться, но легко определяется стандартными способами. Ежедневная доза, которая может быть назначена, составляет примерно от 0.01 до 1500 мг/кг веса тела человека, предпочтительно примерно между 0.5 и 50 мг/кг веса тела и еще более предпочтительно примерно между 0.1 и 20 мг/кг веса тела. Ежедневная доза может вводиться от одной до четырех доз в день.

В терапевтических целях активные соединения данного изобретения, как правило, комбинируются с одним или более адъювантами, соответствующими назначенному курсу введения. Для орального введения соединения могут быть смешаны с лактозой, сукрозой, порошком крахмала, эфирами целлюлозы алкановых кислот, алкильными эфирами целлюлозы, тальком, стеариновой кислотой, стеаратом магния, оксидом магния, солями натрия и кальция, фосфорной и серной кислотой, желатином, аравийской камедью, альгинатом натрия, поливинилпирролидоном и/или поливиниловым спиртом, после чего таблетированы или капсулированы для удобного введения. Такие капсулы или таблетки могут содержать составы с контролируемым высвобождением, которые могут быть обеспечены в виде дисперсии активного соединения в гидроксипропилметилцеллюлозе.

Масляная фаза эмульсий, содержащих соединения формулы (I), может быть составлена из известных компонентов известным способом. Несмотря на то что фаза может включать только эмульгатор, она может содержать смесь по меньшей мере одного эмульгатора с жиром или маслом, или как с жиром, так и с маслом. Предпочтительно, чтобы гидрофильный эмульгатор был включен вместе с липофильным эмульгатором, который действует как стабилизатор. Также предпочтительно, чтобы масло и жир были включены. Эмульгатор(ы), вместе со стабилизатором(ами) или без него, образует так называемый эмульгирующий воск, и воск вместе с маслом и жиром образует так называемую эмульгирующую мазевую основу, которая образует масляную дисперсную фазу в рецептурах крема. Эмульгаторы и стабилизаторы эмульсии, пригодные для использования в составах настоящего изобретения, включают Твин 60, 8раи 80, цетостеариловый спирт, миристиловый спирт, глицерилмоностеарат, лаурилсульфат натрия, глицерилдистеарат отдельно или с воском, или другими материалами, хорошо известными в данной области.

Выбор пригодных масел или жиров для составов основан на достижении желаемых косметических свойств, так как растворимость активного соединения в большинстве масел, подобных тем, которые используются в фармацевтических эмульсионных составах, очень низкая. Таким образом, предпочтительно, чтобы крем был нежирным, не оставляющим пятен и смываемым продуктом, имеющим соответствующую консистенцию, которая позволяла бы избежать вытекания из тюбиков или других контейнеров. Можно использовать одно- или двухосновные алкиловые сложные эфиры с линейной или разветвленной цепью, такие как ди-изоадипат, изоцетил стеарат, сложный пропиленгликолевый эфир жирных кислот кокосового масла, изопропилмиристат, децилолеат, изопропилпальмитат, бутилстеарат, 2этилгексилпалмитат или смесь сложных эфиров с разветвленной цепью. Они могут использоваться отдельно или в комбинации в зависимости от требуемых свойств. В качестве альтернативы можно использовать липиды с высокой точкой плавления, такие как белый мягкий парафин и/или жидкий парафин,

- 11 017736 или другие минеральные масла.

Составы для парентерального введения могут быть в форме водных или неводных изотонических стерильных растворов для вливаний или суспензий. Эти растворы и суспензии могут быть приготовлены из стерильных порошков или гранул с использованием одного или более носителей или разбавителей, упомянутых для использования в составах для орального введения, или с использованием пригодных диспергирующих или смачивающих и суспендирующих агентов. Соединения могут быть растворимыми в воде, полиэтиленгликоле, пропиленгликоле, этаноле, кукурузном масле, хлопковом масле, арахисовом масле, кунжутном масле, бензиловом спирте, хлориде натрия, аравийской камеди и/или разных буферах. Другие вспомогательные вещества и режимы введения хорошо известны в фармацевтической отрасли. Также, активный компонент может вводиться вливанием в виде композиции с пригодными носителями, включающими солевой раствор, декстрозу или воду, или циклодекстрин (т.е. САРТ18ОЬ®), сорастворитель для повышения растворимости (т.е. пропиленгликоль) или мицеллярный солюбилизатор (т.е. Твин 80).

Стерильный состав для вливания может также представлять собой стерильный раствор или суспензию для вливания в нетоксичном разбавителе или растворителе, пригодном для парентерального введения, например раствор в 1,3-бутандиоле. Приемлемыми носителями и растворителями, которые могут использоваться, являются вода, раствор Рингера и изотонический раствор хлорида натрия. Дополнительно в качестве растворителя или питательной взвеси обычно используются стерильные, нелетучие масла. Для этой цели может применяться любое очищенное нелетучее масло, включая синтетические моно- или диглицериды. Дополнительно в приготовлении составов для вливаний находят применение жирные кислоты, такие как олеиновая кислота.

Фармацевтические композиции могут быть подвергнуты обычным фармацевтическим операциям, таким как стерилизация, и/или могут содержать обычные вспомогательные вещества, такие как консерванты, стабилизаторы, смачивающие агенты, эмульгаторы, буферы и т.п. Дополнительно таблетки и пилюли могут быть приготовлены с энтеросолюбильными покрытиями. Такие композиции могут также включать адъюванты, такие как смачивающие реагенты, подсластители, вкусовые добавки и ароматизаторы.

Фармацевтические композиции данного изобретения содержат соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль либо пролекарство и факультативно дополнительный агент, выбранный из ингибирующего киназу агента (маленькая молекула, полипептид, антитело и т. п.), иммуносупрессанта, противоракового агента, противовирусного агента, противовоспалительного агента, противогрибкового средства, антибиотика или соединения против васкулярных гиперпролиферативных заболеваний; и любой фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель. Альтернативные композиции данного изобретения включают описанное здесь соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель, адъювант или разбавитель. Такие композиции могут факультативно содержать один или более дополнительных терапевтических агентов, например ингибирующие киназу агенты (маленькая молекула, полипептид, антитело и т.п.), иммуносупрессанты, противораковые агенты, противовирусные агенты, противовоспалительные агенты, противогрибковые средства, антибиотики или соединения против васкулярного гиперпролиферативного нарушения.

Фармацевтически приемлемые носители, адъюванты и разбавители, которые могут применяться в фармацевтических композициях данного изобретения, включают, но не ограничиваются этим, ионообменники, оксид алюминия, стеарат алюминия, лецитин, самоэмульгирующуюся систему доставки лекарств (8ΕΌΌ8), такую как Ό-альфа-токоферола полиэтиленгликоля 1000 сукцинат, поверхностноактивные вещества, которые применяются в фармацевтических лекарственных формах, такие как твины или другие аналогичные полимерные матрицы для доставки лекарств, сывороточные белки, такие как сывороточный альбумин человека, буферные вещества, такие как фосфаты, глицин, сорбиновую кислоту, сорбат калия, неполные глицеридные смеси насыщенных растительных жирных кислот, воду, соли или электролиты, такие как протамина сульфат, динатрийгидрофосфат, калийгидрофосфат, хлорид натрия, соли цинка, коллоидный диоксид кремния, трисиликат магния, поливинилпирролидон, соединения на основе целлюлозы, полиэтиленгликоль, натриевую соль карбоксиметилцеллюлозы, полиакрилаты, воски, блок-сополимеры полиэтилен-полиоксипропилен, полиэтиленгликоль и шерстяной жир. Для улучшения доставки соединений описанной здесь формулы могут также эффективно применяться циклодекстрины, такие как альфа-, бета- и гамма-циклодекстрин, или химически модифицированные производные, такие как гидроксиалкилциклодекстрины, включая 2- и 3-гидроксипропилциклодекстрины, или другие растворимые производные.

Соединения формулы (I) могут быть приготовлены согласно следующим схемам 1-4. Соединения можно легко синтезировать синтетическими способами, известными опытным специалистам в данной области. Сольваты (например, гидраты и соли) описанных соединений также включены в настоящее изобретение. Способы образования сольватов и солей в целом известны в данной области. Соответственно соединения и примеры настоящего изобретения могут быть в свободной или гидрированной форме, и могут быть получены способами, приведенными в качестве примера на схемах ниже.

Соединение формулы (II) может быть легко приготовлено с помощью синтетической последова

- 12 017736 тельности, показанной на схеме 1. Реакция 2,3-дихлорпиридина (2) с дифенилметанимином (3) в присутствии каталитического количества ацетата палладия(П), ΒΙΝΑΡ-рацемического (2,2'-бис(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтилена) и карбоната цезия в ТНЕ может дать бензофенонимин 4. Металлирование-борилирование-окисление промежуточного соединения 4, как отмечено на схеме 1, может обеспечить 3-хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4(1Н)-она (5), который можно немедленно обработать 1,2-дифтор-4-нитробензолом и основанием, например карбонатом цезия, для получения промежуточного соединения 6. Хемоселективное восстановление нитрозаместителя промежуточного соединения 6, например, сульфидом аммония в изопропаноле может обеспечить амин 7. Промежуточное соединение 7 может затем связываться с 5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоновой кислотой (8) с помощью стандартных связывающих пептид реагентов, таких как О-(7-азабензотриазол-1-ил)-^^№,№тетраметилуроний гексафторфосфат (НАТИ), для получения промежуточного соединения 9. Кислотнокаталитический гидролиз имина 9 затем обеспечивает требуемое соединение (II).

Промежуточное соединение, 5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоновая кислота (8), может быть получено с помощью реакции, описанной на схеме 2. Таким образом, 2-(4фторфенил)ацетилхлорид (10) может быть обработан 2,2-диметил-1,3-диоксан-4,6-дионом (кислота Мелдрума) в присутствии пиридина и полученный продукт присоединения можно нагревать с обратным холодильником в этаноле для получения этил 4-(4-фторфенил)-3-оксобутаноата (12). Обработка промежуточного соединения 12 триазином и этоксидом натрия в этаноле может дать нужное промежуточное соединение эфира, которое легко гидролизуется в присутствии гидроксида натрия при повышенной температуре для получения промежуточного соединения 8.

Фосфатное пролекарство, соединение (Ша), которое включает присоединение фосфатной группы к азоту пиридинона соединения (II) через саморасщепляющийся гидроксиметильный линкер, может быть приготовлено с помощью синтетического режима, описанного на схеме 3. Обработка промежуточного соединения 9 ди-трет-бутилхлорметилфосфатом (13, см. РСТ А’О 2005/090367) в присутствии основания, такого как карбонат калия в БМЕ, может обеспечить защищенное промежуточное соединение 14. Полная защита 14 в кислых условиях в этаноле может дать требуемое фосфатное пролекарство, соединение (Ша).

Схема 3

- 13 017736

Аминокислоты также можно связать с соединением (II) посредством гидроксиметильного линкера. аналогично описанному выше с помощью синтетической последовательности. показанной на схеме 4. Хлорметиловые эфиры 16. полученные из соответствующих Ν-защищенных аминокислот (с помощью процессов. описанных в 8уп1к Соттип.. 14:857-864 (1984) и 8уп1к Соттип.. 24:767-772 (1994)). могут вступать в реакцию с соединением (II) в присутствии основания. такого как карбонат калия. для получения промежуточного соединения 17. Удаление азотной защитной группы. в данном случае Вос (ΐбутилкарбамат)группы. в кислых условиях может дать требуемое пролекарство аминокислотного эфира 18.

Схема 4

X := н, алкил или замещенный алкил γ» //«защищенный алкил или циклоалкиламии Ζ= алкил или цикпоалкиламин

Примеры

Изобретение также проиллюстрировано следующими примерами. Следует понимать. что примеры представлены только для иллюстрации. На основании вышеприведенных обсуждений и примеров опытный специалист может установить важные характеристики изобретения и без отступления от духа и масштаба изобретения сможет произвести различные изменения и модификации для того. чтобы адаптировать изобретение к разному применению и условиям. Таким образом. изобретение не ограничивается иллюстративными примерами. представленными здесь ниже. но скорее определяется прилагаемой к нему формулой.

Все реакции проводили при непрерывном перемешивании на магнитной мешалке в атмосфере сухого азота или аргона. Все выпаривания и концентрирования проводили на роторном испарителе при пониженном давлении. Реагенты. приобретенные коммерческим путем. использовали без дополнительной очистки. Растворители являлись коммерческими. безводных марок и применялись без дополнительной сушки или очистки. Флэш-хроматографию проводили с помощью силикагеля (ЕМегск К1езе1§е1 60. 0.040-0.060 мм).

Аналитическую обращенно-фазовую (ОФ) ВЭЖХ выполняли с помощью колонки РЕепотепех Типа С18 85 4.6x50 мм или УМС 85 ΟΏ8 4.6x50 мм. В каждом случае линейный градиент (4 мин) (от 100% А: от 0% В до 0% А: 100% В) использовали со следующей системой подвижной фазы: А = 90% Н2О/МеОН + 0.2% Н3РО4; В = 90% МеОН/НзО + 0.2% Н3РО4 при скорости 4 мл/мин и детектировании при 220 нм.

Препаративную обращено-фазовую (ОФ) ВЭЖХ выполняли с помощью линейного градиентного элюирования с использованием 10% метанола. 90% воды. 0.1% ТЕА (растворитель А) и 90% метанола. 10% воды. 0.1 ТЕА (растворитель В) и детектировании при 220 нм на одной из следующих колонок: А колонка 8Ь1тас1/и 85 ОЭ8-УР 20 х 100 мм со скоростью потока 20 мл/мин; В - колонка УМС 85 ΟΏ8 30x100 мм со скоростью потока 20 мл/мин; С - колонка РЕепотопех 30x250 мм со скоростью потока 10 мл/мин; I) - колонка УМС 85 ΟΏ8 20x250 мм со скоростью потока 10 мл/мин; Е - колонка УМС 810 ΟΏ8 50x500 мм со скоростью потока 50 мл/мин или Е - колонка УМС 810 ΟΏ8 30x500 мм со скоростью потока 20 мл/мин.

- 14 017736

Конечный продукт характеризовали масс-спектрометрией в режиме ¹Н ЯМР, ОФ ВЭЖХ, ионизации электрораспылением (Ε8Ι М8) или ионизацией при атмосферном давлении (ΑΡΙ М8). Спектры ¹Н ЯМР получали на оборудовании 400 МГц Вгикег или 500 МГц 1ЕОЬ. Напряженности полей выражены в 5 единицах (части на миллион, ррт) относительно пиков растворителя и мультиплетность пиков обозначена следующим образом: 8, синглет; й - дуплет; йй - дуплет дуплетов; йт - дуплет мультиплетов; ΐ - триплет; с.| - квартет; Ьг 5 - широкий дуплет; т - мультиплет.

Следующая аббревиатура применяется для широко используемых реагентов: Вос или ВОС: ΐбутилкарбамат; Етос: 9Н-фторенилметилкарбамат; ТЕА: триэтиламин; ΝΜΜ: Ν-метилморфолин; М§: метансульфонил; ΌΙΕΑ или ΌΙΡΕΑ: диизопропилэтиламин или основание Хунига; ΝΜΡ: Νметилпирролидинон; реагент ВОР: гексафторофосфат бензотриазол-1-илокси-трис(триметиламино)фосфония; ЭСС: 1,3-дициклогексилкарбодиимид; ЕЭС1: гидрохлорид 1(диметиламинопропил)-З-этилкарбодиимида; КТ или й: комнатная температура; ΐ_κ: время удерживания; ч: час(ы); мин: минута(ы); РуВгоР: бромтрипирролидинфосфония гексафторфосфат; НАТО: О-(7азабензотриазол-1-ил)-Н^№,№-тетраметилурония гексафторфосфат; ТВТО: (9-(1Н-бензотриазол-1ил)Ν,Ν,Ν',Ν'-тетраметилурония тетрафторборат; ΌΜΑΡ: 4-^№диметиламинопиридин; НОВ! или НОВТ: гидроксибензотриазол; №1(ОАс)₃ВН: триацетоксиборогидрид натрия; НОАс: уксусная кислота; ΤΕΑ: трифторуксусная кислота; ЫНМЭЗ: литий бис-(триметилсилил)амид; ΌΜ8Ο: диметилсульфоксид; МеС№ ацетонитрил; МеОН: метанол; ΕΐΟΑ^ этилацетат; ЭМЕ: диметилформамид; ТНЕ: тетрагидрофуран; ЭСЕ: 1,2-дихлорэтан; Εΐ₂Ο: диэтиловый эфир; ЭСМ: дихлорметан или метиленхлорид; т-СРВА: 4хлорпероксибензойная кислота; ВINΑΡ-рацемический: (2,2'-бис-(дифенилфосфино)-1,1'-бинафтилен).

Пример 1. №(4-(2-Амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4дигидропиридин-3-карбоксамид

Приготовление 1Α. 3-Хлор-И-(дифенилметилен)пиридин-2-амин

2,3-Дихлорпиридин (105.00 г, 710 ммоль), Ρ^ΟΑ^₂ (3.98 г, 17.74 ммоль), рац-ΜΝΑΡ (16.57 г, 26.61 ммоль), карбонат цезия (346.76 г, 1065 ммоль), ТНЕ (1.05 л) и бензофенонимин (124.67 мл, 745 ммоль) добавляли в реактор СНΕΜС^Α§§® емкостью 2 л, оснащенный механической мешалкой и обратным холодильником. Смесь нагревали с обратным холодильником при перемешивании в течение 18 ч. Продукт фильтровали, промывали ТНЕ (100 мл). Полученный фильтрат концентрировали в вакууме до 1/3 об. и использовали без дальнейшей очистки. ¹Н ЯМР (СЭС1₃) δ 6.79 (йй, 1Н, 1=4.6, 7.6 Гц), 7.19-7.60 (т, 9 Н), 7.79-7.95 (т, 2Н), 8.16 (йй, 1Н, 1=1.5, 5.1 Гц); М8 (Ε8Ι⁺) т/ζ 293.1 (М+Н)⁺.

Приготовление 1В. 3-Хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4(1Н)-она

В реактор емкостью 4 л СНΕΜС^Α§§® (оснащенный капельной воронкой, в атмосфере азота) добавляли сырой 3-хлор-И-(дифенилметилен)пиридин-2-амин и триизопропилборат (196.38 мл, 852 ммоль). Полученный раствор охлаждали до 0°С. В отдельный реактор добавляли диизопропиламин (169.78 мл, 1207 ммоль) и ТНЕ (1.05 л). Этот раствор охлаждали до 0°С и медленно добавляли пбутиллития (683.22 мл, 923 ммоль). После перемешивания при 0°С этот раствор медленно добавляли в первый раствор. Реакционную смесь перемешивали в течение 30 мин без охлаждающей ванны (ВЭЖХ показала расход исходного материала). В смесь добавляли воду (1.05 л) с последующим добавлением перкарбоната натрия (336.34 г, 1065 ммоль) одной порцией. Эту смесь оставляли перемешиваться при 20°С в течение 1 ч. Медленно добавляли насыщенный раствор №1Н8О₃ (~1 л). Водный слой удаляли и в органический слой добавляли ЭМЕ (840.00 мл) и ТНЕ отгоняли (растворитель ТНЕ заменяли на ЭМЕ). ЭМЕ использовали без дальнейшей очистки. Ή ЯМР (СЭС1₃) δ 6.02 (й, 1Н, 1=7.1 Гц), 7.10 (й, 1Н, 1=7.1 Гц), 7.20-7.80 (т, 10Н); М8 (Ε8Ι⁺) т/ζ 309.07 (М+Н)⁺.

Приготовление 1С. 3 -Хлор-Н-(дифенилметилен)-4-(2-фтор-4-нитрофенокси)пиридин-2-амин

- 15 017736

В реактор емкостью 2 л СНЕМСЬА88® добавляли сырой 3-хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4(1Н)-она (см. выше, здесь в ЭМЕ) и карбонат цезия (300.52 г, 923 ммоль) с последующим добавлением 3,4-дифторнитробензола (118.15 мл, 1065 ммоль). Смесь нагревали приблизительно до 90°С при перемешивании в течение 2 ч. Смесь охлаждали до 25°С при перемешивании в течение 10 мин. В этот раствор добавляли воду (1 л). Смесь экстрагировали ЕЮАс (1 л) и водную фазу выгружали. Органические вещества концентрировали для получения масла. Масло растворяли в ЕЮН (200 мл) (иногда требуется нагревание). После выдерживания раствора при 25°С в течение 4 ч твердую фазу собирали фильтрацией для получения 3-Хлор-№(дифенилметилен)-4-(2-фтор-4-нитрофенокси)пиридин-2-амина (104.00 г, выход 32.73%) в виде желтого твердого вещества. ¹Н ЯМР (СЭС1₃) δ 6.52 (ά, 1Н, 1=5.6 Гц), 6.80 (άά, 1Н, 1=8.1, 9.1 Гц), 7.21-7.60 (т, 8Н), 7.78-7.95 (т, 2Н), 8.00 (т, 1Н), 8.11 (άά, 1Н, 1=2.5, 9.6 Гц), 8.17 (ά, 1Н, 1=5.6 Гц); М8 (Е8Т) т/ζ 448.01 (М+Н)⁺.

Приготовление 1Ό. 4-(4-Амино-2-фторфенокси)-3-хлор-№(дифенилметилен)пиридин-2-амин

Следующие материалы добавляли в реактор емкостью 2 л СНЕМСЬА88®: э-хлор-Ν(дифенилметилен)-4-(2-фтор-4-нитрофенокси)пиридин-2-амин (110.00 г, 221 ммоль), изопропиловый спирт (990.00 мл), сульфид аммония (~40% в воде, 297.00 мл, 2324 ммоль). Смесь оставляли перемешиваться при 20°С в течение 3-4 ч. 3-Хлор-№(дифенилметилен)-4-(2-фтор-4-нитрофенокси)пиридин-2амин не был обнаружен ВЭЖХ анализом. Реакционную смесь нагревали до 70°С и оставляли перемешиваться в течение 3-4 ч. Сразу же после завершения реакции добавляли воду (14 мл/г ЛР). Реакционную смесь охлаждали до 20°С (температура реакции) свыше 1 ч. После охлаждения твердую фазу осаждали и отфильтровывали, после чего отмывали водой (12.5 мл/г ЛР) с последующей смесью гептан:МТВЕ (4:1; 5 мл/г ЛР). После ЬОЭ (~25%) получали 95.3 г сырого 4-(4-амино-2-фторфенокси)-3-хлор-№ (дифенилметилен)пиридин-2-амин (90АР). Сырой 4-(4-амино-2-фторфенокси)-3-хлор-№ (дифенилметилен)пиридин-2-амин растворяли в п-ВиОАс (7 мл/г ЛР) нагреванием примерно до 85°С. При 85°С по каплям добавляли гептан (7 мл/г ЛР) до тех пор, пока раствор не становился мутным. Раствор затем оставляли охлаждаться до 20°С при перемешивании. После достижения 20°С суспензию выдерживали в течение 8 ч. Твердую фазу отфильтровывали, промывали гептаном (5 мл/г ЛР), после чего высушивали в течение ночи в вакуумной печи при 60°С для получения 4-(4-амино-2-фторфенокси)-3хлор-№(дифенилметилен)пиридин-2-амина (62.53 г, выход 67.69%) в виде бледного желтого твердого вещества. Ή ЯМР (СЭС1₃) δ 6.23 (άά, 1Н, 1=1.0, 5.6 Гц), 6.43 (т, 1Н), 6.49 (άά, 1Н, 1=2.5, 12.1 Гц), 6.92 (1, 1Н, 1=8.6 Гц), 7.25-7.60 (т, 8Н), 7.87 (т, 2Н), 7.95 (ά, 1Н, 1=6.1 Гц); М8 (Е8Т) т/ζ 418.6 (М+Н)⁺.

Приготовление 1Е. Этил 4-(4-фторфенил)-3-оксобутаноат

В раствор 2,2-диметил-1,3-диоксан-4,6-диона (кислота Мелдрума, 8.0 г, 56 ммоль), растворенного в безводном метиленхлориде (100 мл) и пиридине (11 мл), при 0°С в атмосфере азота медленно добавляли 2-(4-фторфенил)ацетилхлорид (7.6 мл, 9.6 г, 56 ммоль). Красный раствор перемешивали при 0°С в течение 1.5 ч. Реакционную смесь обрабатывали 1 Ν НС1 (13 мл) и разбавляли метиленхлоридом (200 мл). Слои разделяли и органический слой отмывали насыщенным водным раствором хлорида натрия, высушивали и концентрировали в вакууме для получения 5-(2-(4-фторфенил)ацетил)-2,2-диметил-1,3диоксан-4,6-диона. Сырой промежуточный продукт суспендировали в чистом этаноле (150 мл) и полученную смесь нагревали с обратным холодильником в течение 4 ч. Растворитель затем удаляли в вакууме и остаток очищали флэш-колоночной хроматографией (8Ю₂, 230-240 меш, градиентное элюирование 8:1 гексан-этилацетат) для получения требуемого продукта (4.6 г, 37%). ¹Н ЯМР (СЭС1₃) δ 7.23-7.15 (т, 2Н), 7.05-6.98 (т, 2Н), 4.18 (ц, 2Н, 1=7.0 Гц), 3.81 (8, 2Н), 3.46 (8, 2Н), 1.26 (1, 3Н, 1=7.0 Гц); М8 (Е8Т) т/ζ 225 (М+Н)⁺.

Приготовление 1Г. 5-(4-Фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоновая кислота

- 16 017736 но

В раствор этил 4-(4-фторфенил)-3-оксобутаноата (4.6 г, 21 ммоль) в чистом этаноле (45 мл) добавляли раствор ΝαΘΕί (21% раствор ΝαΘΕί в ΕΐΟΗ, 7.7 мл) и триазин (1.67 г, 21 ммоль). Полученную смесь нагревали до 85°С в течение 1.5 ч, охлаждали до комнатной температуры и обрабатывали дополнительной порцией триазина (0.08 г, 1 ммоль) и раствором ΝαΟΕί (21% раствор ΝαΟΕί в ΕΐΟΗ, 0.4 мл). Реакционную смесь нагревали дополнительно в течение 1 ч и концентрировали в вакууме. Остаток обрабатывали 1 Ν НС1 до тех пор, пока уровень рН реакции не достигал примерно 2. Осадок собирали для получения требуемого промежуточного соединения эфира, этил 5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3карбоксилата (4.5 г, 83%), в виде желтого твердого вещества. Μ8 (Ε8Ρ) т/ζ 262 (М+Н)⁺.

Вышеуказанный эфир (1.0 г, 3.8 ммоль) растворяли в 2 Ν ΝαΟΗ (20 мл) и нагревали до 65°С в течение 2 ч. Полученную прозрачную смесь охлаждали до комнатной температуры и отфильтровывали твердую фазу. Повышали кислотность фильтрата с помощью 1 Ν НС1 до уровня рН 1 и полученный желтый осадок собирали в качестве требуемого продукта (0.73 г, 82%). ¹Н ЯМР (ΌΜ8Ο-4₆) δ 13.52 (Ьг 8, 1Н), 8.86 (8, 1Н), 8.51 (8, 1Н), 7.99-7.96 (т, 2Н), 7.55-7.51 (т, 2Н); Μ8 (Ε8Ι⁺) т/ζ 234 (Μ+Η)⁺.

Приготовление 1С. №(4-(3-Хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3 -карбоксамид

РП РП (1С)

В раствор 4-(4-амино-2-фторфенокси)-3-хлор-№(дифенилметилен)пиридин-2-амина (836 мг, 2.0 ммоль) и 5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоновой кислоты (490 мг, 2.0 ммоль) в ΌΜΡ (10 мл) при комнатной температуре добавляли ΗΆΤϋ (913 мг, 2.4 ммоль) и ΌΙΡΕΑ (1.05 мл, 6.0 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч перед осаждением добавлением холодной воды (50 мл). Образовавшуюся твердую фазу собирали фильтрацией и отмывали водой и эфиром. Твердую фазу растворяли в ΌΟΜ и очищали флэш-колоночной хроматографией (8ίΟ₂, от ^СΜ до 10% МеОН в ΌΟΜ) для получения требуемого продукта (987 мг, 78%) в виде светло-желтого твердого вещества. Μ8 (Ε8Ι⁺) т/ζ 633 (М+Н)⁺.

Пример 1.

В раствор №(4-(3-хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбамида (410 мг, 0.65 ммоль) в ΤΗΡ (10 мл) при комнатной температуре добавляли водный раствор НС1 (2 М, 0.81 мл, 1.62 ммоль). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1 ч и затем концентрировали в вакууме. Затем в остаток добавляли холодный водный 5% раствор Ν;·ιΗίΌ₃ (5 мл). Образовавшуюся твердую фазу собирали фильтрацией, отмывали водой и затем эфиром, после чего сушили в вакууме для получения требуемого продукта (275 мг, 90%). Ή ЯМР (ΌΜ8Ο-4₆) δ 13.31 (8, 1Н), 12.70 (Ьг 8, 1Н), 8.63 (4, 1Н, 1=1.30 Гц), 8.09 (4, 1Н, 1=1.50 Гц), 8.02 (44, 1Н, 1=2.50, 13.10 Гц), 7.76 (4, 1Н, 1=5.50 Гц), 7.71 (т, 2 Н), 7.44 (44, 1Н, 1=1.50, 8.80 Гц), 7.31 (ΐ, 1Н, 1=8.80 Гц), 7.27 (ΐ, 2Н, 1=8.80 Гц), 6.43 (Ьг 8, 2Н), 5.96 (4, 1Н, 1=5.60 Гц); Μ8 (Ε8Ι⁺) т/ζ 469 (Μ+НЛ

Хлористо-водородная соль №(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамида соль НС1 №(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамида (пример 1) получали обработкой раствора №(4-(3-хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамида (приготовление 10) в ТНР избытком водной НС1 при комнатной температуре. Летучие вещества удаляли в вакууме для обеспечения требуемого соединения.

Пример 2.

(3-(4-(2-Амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил дигидрофосфат

- 17 017736

В раствор №(4-(3-хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамида (5.0 г, 7.90 ммоль) в ОМЕ (50 мл) при комнатной температуре добавляли карбонат калия (7.64 г, 55.3 ммоль) и ди-трет-бутил хлорметил фосфат (9.19 г, 35.5 ммоль, см РСТ АО 2005/090367). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 2 дней. Смесь затем разбавляли Е!ОАс (250 мл), промывали водой (200 мл), водн. 10% Ь1С1 (3x250 мл), высушивали над №₂8О₄ и фильтровали. Фильтрат концентрировали для получения остатка, который растворяли в Е!0Н (160 мл). В этот перемешанный раствор добавляли воду (60 мл) с последующим медленным добавлением конц. НС1 (40 мл). Полученную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 15 мин и затем оставляли на ночь. ВЭЖХ анализ показал завершение реакции. Твердую фазу собирали фильтрацией, споласкивали 50% Е!ОН/Н₂О (5х), водой, Е!ОН и Е!ОАс. Твердую фазу высушивали в вакууме для получения указанного соединения (4.3 г, 93%) в виде белого твердого вещества. ¹Н ЯМР (ТЕА-й) δ 9.60 (8, 1Н), 8.79 (δ, 1Н), 7.80-7.90 (т, 2Н), 7.65-7.75 (т, 2Н), 7.57 (й, 1Н, 1=7.04 Гц), 7.45 (!, 1Н, 1=6.80 Гц), 7.25-7.33 (т, 2Н), 6.50 (й, 1Н, 1=5.92 Гц), 6.39 (й, 2Н, 1=9.88 Гц); М8 (Е8Г) т/ζ 579 (М +Н)⁺.

Примеры 3-11.

Примеры 3-11 были приготовлены с помощью следующей общей методики. В смесь №(4-(2-амино-3хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамида (пример 1, 0.1 ммоль) и карбоната калия (0.4 ммоль) в ЭМЕ (1 мл) добавляли соответствующее производное хлорметилового эфира (0.3 ммоль, приготовление см. в 8νη11ι. Соттип., 14:857-864 (1984)). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 1-3 ч, разбавляли ЭСМ и отмывали водным раствором КН₂РО₄. Органический слой высушивали над Мд8О₄ и Ν-Вос-защищенное промежуточное соединение очищали колоночной хроматографией (81О₂, с использованием градиентного элюирования ЭСМ/ЕЮАс).

Ν-Вос-защищенное промежуточное соединение затем обрабатывали 30% ТЕА/ЭСМ (2 мл) в течение 1 ч. Растворители удаляли в вакууме и продукт очищали препаративной ВЭЖХ для получения указанного соединения в виде ТЕА соли.

Примеры 3-11

Таблица 1

Номер примера	X	Ζ	Аналитические данные
3	н		’Н ЯМР (СЬзОЭ) 5 12.75 (Ьг 5, 1 Н), 8.83 (4, 1 Н, 1=2.24 Гц), 8.11 (ά. 1 Н, 1=2.52 Гц), 7.95 (44, 1 Н, 1=12.56, 2.28 Гц), 7.72 (4, 1 Н, 1=7.08 Гц), 7.50-7.60 (т, 2 Н), 7.37 (4, 1 Н, 1=8.80 Гц), 7.26 ((, 1 Н, 1=8.80 Гц), 7.05-7.15 (т, 2 Н), 6.28 (4, 1 Н, 1=7.08 Гц), 6.09 (44, 2 Н, >34.52, 10.56), 4.16 (ц, ! Н, >7.32 Гц), 1.47 (4, 3 Н, >7.28 Гц); М8(Е8ГЭ т/ζ 570 (Μ + Н)*.

- 18 017736

4	н	νη2	‘Н ЯМР (СОзОО) δ 12.80 (Ьг з, 1 Н), 8.96 (ά, 1 Н, .1=2.24 Гц), 8.24 (4, 1 Н, 1=2.52 Гц), 8.07 (44, 1 Н, 1=12.84, 2.52 Гц), 7.82 (4, 1 Н, 1=7.04 Гц), 7.62-7.70 (т, 2 Н). 7.50 (4, 1 Н, 1=8.80 Гц), 7.37 (1, 1 Н, 1=8.56 Гц), 7.20-7.30 (т, 2 Н), 6.37 (4, 1 Н, 1=6.80 Гц), 6.26 (5, 2 Н), 4.14 (4, 1 Н, 1=4.52 Гц), 2.32-2.42 (т, 1 И), 1.07 (4, 6 Н, .1=6.80 Гц); М8(Е8Г) т/ζ 598 (М + Н)+.
5	н		‘Н ЯМР (СО3<Ж) δ 12.85 (Ьг 5, 1 Н), 8.95 (4, 1 Н, 1=2.28 Гц), 8.23 (4, 1 Н, 1=2.28 Гц), 8.07 (44, 1 Н, 1=12.60, 2.30 Гц), 7.82 (4, 1 Н, 1=7.04 Гц), 7.65-7.70 (т, 2 Н), 7.45 (4, 1 Н, 1=8.80 Гц), 7.37 (1, 1 Я, 1=8.80 Гц), 7.18-7.28 (т, 2 Н), 6.36 (4, 1 Н, 1=7.04 Гц), 6.23 (44, 2 Н, 1=22.40, 10.56 Гц), 4.21 (1, 1 Н, 1=6.28 Гц), 1.82-1.92 (т, 1 Н), 1.701.80 (т, 2 Н), 0.99 (1, 6 Н, 1=3.28 Гц); М8(Е81+) т/ζ 612 (М + ИГ.
6	н		Ή ЯМР (СЭзОй) δ 12.89 (Ьг з, 1 Н), 8.92 (4, 1 Н, 1=2.28 Гц), 8.22 (4,1 Н, 1=2.52 Гц), 8.07 (44, 1 Н, 1=12.40, 2.30 Гц), 7.81 (4, 1 Н, 1=7.04 Гц), 7.60-7.70 (т, 2 Н), 7.48 (4, 1 Н, 1=5.32 Гц), 7.36 (1, 1 Н, .1=8.56 Гц), 7.15-7.28 (т, 2 Н), 6.33 (4, 1 Н, .1=7.08 Гц), 6.11 (з, 2 Н), 3.45-3.55 (т, 3 Н), 2.95-3.10 (т, 2 Н), 2.10-2.25 (т, 1 Н), 1.75-2.00 (т, 3 Н); М8(Е5Г) т/ζ 6!0 (М + Н)+.
7	н	ΗΝ—\	Ή ЯМР (СОзОЭ) δ 12.85 (Ьг з, 1 Н), 8.94 (4, 1 Н, 1=2.24 Гц), 8.23 (4, 1 Н, 1=1.76 Гц), 8.07 (44, 1 Н, 1=12.84, 2.00 Гц), 7.83 (4, 1 Н, 1=7.04 Гц), 7.60-7.70 (т, 2 Н), 7.49 (4, 1 Н, 1=8.80 Гц), 7.38 (ί, 1 Н, 1=8.56 Гц), 7.20-7.30 (т, 2 И), 6.39 (4, 1 Н, .1=6.80 Гц), 6.21 (44, 2 Н, 1=42.56, 10.60 Гц), 4.57 (1, 1 Н, 1=9.15 Гц), 3.37-3.47 (т, 2 Н), 2.442.54 (т, 1 Н), 2.17-2.27 (т, 1 Я), 2.06-2.16 (т, 2 Я); М8(Е81+) т/ζ 596 (М + Н)+.
8	н	_~-ΝΗ	‘Н ЯМР (СИзСЮ) δ 12.80 (Ьг з, 1 Н), 8.81 (4, 1 Н, 1=2.28 Гц), 8.10 (з, 1 Н), 7.95 (4, 1 Н, 1=10.56 Гц), 7.71 (4, I Н, 1=7.04 Гц), 7.50-7.60 (т, 2 Н), 7.36 (4, 1 Н, 1=8.56 Гц), 7.26 (1, 1 Н, 1=8.56 Гц), 7.00-7.15 (т, .2 Н), 6.26 (4, 1 Н, 1=7.04 Гц), 6.00 (44, 2 Н, 1=14.84, 10.56 Гц), 3.45-3.55 (т, 1 Н), 3.30-3.40 (т, 2 Н), 3.15-3.30 (т, 2 Н), 2.20-2.35 (т, 1 Н), 2.10-2.20 (т, 1 Н); М8(Е81+) т/ζ 596 (М + Н)+.
9	н		'Н ЯМР (СОзСЮ) 8 12.90 (Ьг з, 1 Н), 8.92 (4, 1 Н, 1=2.24 Гц), 8.22 (4, 1 Н, .1=2.28 Гц), 8.09 (44, 1 Н, 1=12.84, 2.24 Гц), 7.82 (4, 1 Н, 1=7.04 Гц), 7.60-7.75 (т, 2 Н), 7.48 (4, 1 Н, 1=8.60 Гц), 7.38 (1, 1 Я, 1=8.56 Гц), 7.15-7.30 (т, 2 Н), 6.38 (4, 1 Я, 1=7.04 Гц), 6.10 (з, 2 Я), 3.35-3.50 (т, 2 Я), 3.00-3.20 (т, 2 Я), 2.80-3.00 (т, 1 Н), 2.10-2.30
			(т, 2 Н), 1.75-2.00 (т, 2 Н); М8(Е81+) т/ζ 610 (М + Н)+.
10	Ме		Ή ЯМР (СЭзСЮ) δ 12.85 (Ьг з, 1 Н), 8.81 (4, 1 Н, 1=2,52 Гц), 8.13 (4, 1 Н, 1=2.52 Гц), 7.97 (4, 1 Н, .1=12.60 Гц), 7.71 (4, 1 Н, 1=7.08 Гц), 7.507.60 (т, 2 Н), 7.38 (4, 1 Н, 1=8.60 Гц), 7.25 (1, 1 Н, 1=8.80 Гц), 7.05-7.15 (т, 2 Н), 6.64 (ф 1 Н, 1=6.04 Гц), 6.26 (4, 1 Н, 1=7.04 Гц), 3.20-3.35 (т, 2 Н), 2.90-3.05 (т, 2 Н), 2.70-2.85 (т, 1 Н), 2.05-2.20 (т, 2 Н), 1.65-1.85 (т, 5 Н); М8(Е8Г) т/ζ 624 (М + Н)+.
11	Ме	ΝΗ, ί	‘Н ЯМР (СГ)<00} δ 12.92 (Ьг з, 1 Н), 8.97 (4, 1 Я, 1=6.04 Гц), 8.28 (4, 1 Н, 1=21.12 Гц), 8.08 (4, 1 Н, 1=12.32 Гц), 7.82 (4, 1 Н, 1=7.08 Гц), 7.607.75 (т, 2 Н), 7.40 (4, 1 Н, 1=8,20 Гц), 7.38 (1, 1 И, 1=8.80 Гц), 7.20-7.30 (т, 2 Н), 6.64 (я, 1 Н, 1=6.28 Гц), 6.36 (4, 1 Н, 1=6.80 Гц), 4.08-4.20 (т, 1 Я), 2.25-2.45 (т, 1 Н), 2.25-2.45 (т, 1 Н), 1.97 (4, 3 Н, 1=5.28 Гц), 0.85-1.15 (т, 5 Н); М8(Е81+) т/ζ 612 (М + Н)+.

Пример 12. (3-(4-(2-Амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1 -(4Н)-ил)метил 1-метилпиперидин-4-карбоксилат

- 19 017736

Приготовление 12А. Ы-(4-(2-(Бензгидриламино)-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3 -карбоксамид

РЬ'^РЬ (12 А)

В раствор Ы-(4-(3-хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамида (приготовление 1С, 127 мг, 0.2 ммоль) в ΕΐΟΗ (5 мл) и ТИБ (5 мл) при 0°С добавляли ЫаВН₄ (300 мг, 7.93 ммоль). Смесь перемешивали при 0°С в течение 3 ч и затем при комнатной температуре в течение ночи. Реакцию осаждали водой, экстрагировали ЭСМ и высушивали над Мд8О₄. После фильтрации и концентрирования в вакууме получали 120 мг требуемого продукта в виде белого твердого вещества. М8 (Ε8Ε) т/ζ 635(М+Н)⁺.

Приготовление 12В. 4-(3-(4-(2-(Бензгидриламино)-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 1-трет-бутилпиперидин-1,4-дикарбоксилат

Смесь Ы-(4-(2-(бензгидриламино)-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо1,4-дигидропиридин-3-карбоксамида (120 мг, 0.189 ммоль), К₂СО₃ (104 мг, 0.756 ммоль) и 1-трет-бутил 4-хлорметилпиперидин-1,4-дикарбоксилата (157 мг, 0.567 ммоль) в ЭМБ (2 мл) перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Реакционную смесь затем разбавляли ЭСМ и образовавшуюся твердую фазу отфильтровывали. Остаток отмывали насыщенным водным раствором КН₂РО₄. Органический слой высушивали над Мд8О₄ и требуемый продукт очищали флэш-колоночной хроматографией (81О₂, элюируя градиентом ЭСМ/ЕЮАс) для получения требуемого соединения (145 мг) в виде белого твердого вещества. М8 (Ε8Ε) т/ζ 876 (М+Н)⁺.

Приготовление 12С. (3 -(4-(2-(Бензгидриламино)-3 -хлорпиридин-4-илокси)-3 -фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метилпиперидин-4-карбоксилат

- 20 017736

В раствор 4-(3-(4-(2-(бензгидриламино)-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 1-трет-бутил пиперидин-1,4-дикарбоксилата (135 мг, 0.154 ммоль) в ЭСМ (5 мл) при комнатной температуре добавляли НС1 (4 N в диоксане, 1 мл). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 3 ч. Растворитель удаляли в вакууме и полученный остаток очищали препаративной ВЭЖХ для получения требуемого продукта (128 мг) в виде белого твердого вещества. М8 (Е8Е) т/ζ 776 (М+Н)⁺.

Приготовление 12Ό. (3-(4-(2-(Бензгидриламино)-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 1-метилпиперидин-4-карбоксилат

В смесь (3-(4-(2-(бензгидриламино)-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метилпиперидин-4-карбоксилата (60 мг, 0.077 ммоль), формальдегида (37% в воде, 0.08 мл, 0.077 ммоль) и уксусной кислоты (0.03 мл, 0.077) в ацетонитриле (2 мл) при комнатной температуре добавляли NаСNΒНз (50 мг, 0.8 ммоль). Полученную смесь перемешивали в течение 30 мин. Растворитель удаляли в вакууме и сырой остаток продукта использовали непосредственно на следующей стадии без дальнейшей очистки.

Пример 12. Приготовление (12Е) (0.077 ммоль) обрабатывали ТЕА (3 мл) при комнатной температуре в течение 30 мин. Летучие вещества удаляли в вакууме и полученный остаток очищали препаративной ВЭЖХ для получения указанного соединения (32 мг) в виде белого твердого вещества. 'Н ЯМР (СЭ₃0Э) δ 12.91 (Ьг 8, 1Н), 8.92 (б, 1Н, 1=2.52 Гц), 8.21 (б, 1Н, 1=2.00 Гц), 8.08 (б, 1Н, 1=13.08, 2.04 Гц), 7.83 (б, 1Н, 1=7.08 Гц), 7.62-7.70 (т, 2Н), 7.48 (б, 1Н, 1=8.80 Гц), 7.39 (ί, 1Н, 1=8.56 Гц), 7.20-7.28 (т, 2Н), 6.41 (б, 1Н, 1=6.28 Гц), 6.10 (8, 2Н), 3.50-3.60 (т, 2Н), 3.00-3.10 (т, 2Н), 2.89 (8, 3Н), 2.80-2.89 (т, 1Н), 2.25-2.35 (т, 2Н), 1.80-1.90 (т, 2Н); М8 (ЕМ⁺) т/ζ 624 (М+Н)⁺.

Пример 13. (3-(4-(2-Амино-3 -хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил дигидрофосфат, бис-этаноламиновая соль

НОСН₂СНгМН₃

Приготовление 13А. Ди-трет-бутил (3-(4-(3-хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1 -(4Н)-ил)метил фосфат

- 21 017736

В раствор №(4-(3-хлор-2-(дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамида (1.0 г, 1.58 ммоль) в ОМЕ (10 мл) при комнатной температуре добавляли С§₂СО₃ (1.3 г, 3.95 ммоль), иодид калия (525 мг, 3.16 ммолъ) и затем ди-третбутил хлорметил фосфат (1.2 мл, 1.90 ммоль, 2.0 М в ОМЕ). Реакционную смесь перемешивали при комнатной температуре в течение 26 ч перед осаждением добавлением изопропилацетата (10 мл) и холодной воды (50 мл). Органический слой отделяли и промывали водой (50 мл). Растворитель заменяли на изопропанол (10 мл) путем непрерывной дистилляции при 86°С. Раствор охлаждали до 20°С и твердую фазу осаждали. Твердую фазу собирали фильтрацией и высушивали в вакууме при 60°С в течение 12 ч для получения требуемого продукта (0.98 г, 72%) в виде грязно-белого твердого вещества. М8 (Е§[') т/ζ 856 (М+Н)⁺.

Пример 13.

В колбу с круглым дном емкостью 50 мл добавляли ди-трет-бутил (3-(4-(3-хлор-2(дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3 -фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1(4Н)-ил)метил фосфат (4 г, 4.68 ммоль) и СН₂С1₂ (4 мл). Смесь охлаждали до 0°С и затем добавляли трифторуксусную кислоту (4 мл). Реакционную смесь оставляли нагреваться до 20°С. ВЭЖХ показала, что ди-трет-бутилфосфат гидролизовался в кислоту. Воду (0.4 мл) добавляли при 20°С и смесь оставляли перемешиваться при 20°С в течение 5-6 ч. Смесь становилась густой суспензией. Добавляли толуол (20 мл) и затем концентрировали приблизительно до 5 мл для удаления избыточной трифторуксусной кислоты, СН₂С1₂ и воды. Это повторяли дважды. Суспензию разбавляли ЕЮАс (120 мл, 100%). В эту суспензию добавляли этаноламин до установления уровня рН примерно 8.1 при 20°С. Суспензия становилась прозрачной во время добавления. После добавления раствор нагревали до 75°С и наблюдали образование квадратных пластинчатых кристаллов. Смесь оставляли охлаждаться до 20°С и затем перемешивали в течение 24 ч. Твердую фазу удаляли фильтрацией и отмывали ЕЮН (100%) для получения соли бисэтаноламина в виде квадратных пластинчатых кристаллов. Твердую фазу ресуспендировали ЕЮН (120 мл, 100%) при 75°С этаноламином (~0.1 г). Стержнеобразные игольчатые кристаллы добавляли в суспензию и перемешивали при 75°С в течение 7 ч. Смесь оставляли охлаждаться до 20°С и твердую фазу собирали фильтрацией для получения соли бис-этаноламина в виде больших стержнеобразных кристаллов. Кристаллы высушивали при 55°С в течение 14 ч.

Пример 14. (3-(4-(2-Амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил дигидрофосфат, бис-трис-аминовая соль

Η₂Ν N

В колбу с круглым дном емкостью (дифенилметиленамино)пиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1(4Н)-ил)метил фосфат (1 г, 1.17 ммоль) и СН2С12 (1 мл). Смесь охлаждали до 0°С и затем добавляли трифторуксусную кислоту (1 мл). Реакционную смесь оставляли нагреваться до 20°С. ВЭЖХ показала, что ди-трет-бутилфосфат гидролизовался в кислоту. Добавляли воду (0.1 мл) при 20°С и смесь перемешивали при 20°С в течение 6 ч. Смесь становилась густой суспензией. Добавляли толуол (5 мл) и затем концентрировали примерно до 1 мл для удаления избытка трифторуксусной кислоты, СН₂С1₂ и воды. Это мл добавляли ди-трет-бутил (3-(4-(3-хлор-2- 22 017736 повторяли дважды. Добавляли Е1ОН (30 мл, 100%), что давало мутную суспензию. Суспензию нагревали до 75°С и добавляли концентрированный водный раствор трис-амина (2-амино-2-гидроксиметил-1,3пропандиол) для установления рН ~7.3. Раствор затем становился прозрачным и при 75 °С добавляли гранулы бис-трисамина и суспензию выдерживали в течение 4 ч при 75°С. Суспензию охлаждали до 20°С и выдерживали в течение 2 ч. Кристаллическую твердую фазу собирали фильтрацией и высушивали в вакууме при 55°С для получения соли бис-трисамина.

Анализы.

Фармакологические свойства соединения данного изобретения могут быть подтверждены рядом фармакологических анализов. Последующие иллюстративные фармакологические анализы проводили с соединением согласно изобретению, и/или его солями, и/или пролекарствами.

Ме1-киназный анализ.

Инкубационные смеси, которые использовали для Ме1-киназного анализа, содержат бакуловирус, экспрессирующий С8Т-Ме1 киназу, синтетический субстрат ро1уС1и:Туг, (4:1), АТР, АТР-у-³³Р и буфер, содержащий Мп⁺², ОТТ, В8А и Тик. Реакции инкубировали в течение 60 мин при 30°С и останавливали добавлением холодной трихлоруксусной кислоты (ТСА) до конечной концентрации 8%. Осадок ТСА собирали на планшеты СЕ/С ЬшЕП1ег (Раскагй [п51гнтеп1 Со., Мегйеп, СТ) с помощью универсального коллектора ЕШТЕКМАТЕ® (Раскагй Iη8ί^итеηΐ Со., Мегйеп, СТ) и фильтры рассчитывали с использованием ТорСоип! 96/384-луночного жидкого сцинтилляционного счетчика (Раскагй Iп8ί^итепΐ Со., Мегйеп, СТ). Кривые отклика дозы генерировали для определения концентрации, требуемой для ингибирования 50% активности киназы ДС»). Соединения растворяли при 10 мМ в диметилсульфоксиде (ЭМ8О) и оценивали при десяти концентрациях, каждую в двух повторностях. Конечная концентрация ЭМ8О в анализе составляла 1.7%. Значения ГС50 были получены нелинейной регрессией.

Таблица 2

Реагенты	Конечная концентрация смеси субстратов
Базовый раствор
Тпз-НС1, (1М, рН 7.4)	20 мМ
МпС12(1М)	1 мМ
ϋΤΤ(ΙΜ)	1 мМ
В8А(100 мг/мл)	0.1 мг/мл
ро!уО1и4Луг (10 мг/мл)	0.1 мг/мл
АТР (1 мМ)	1 мкМ
Г-АТР (10мкСРмкл)	0.2 мкС1/мл

Таблица 3

Буфер	Смесь энзимов
20 мкл 1 МОТТ	4 мкл О8Т/Ме1 энзим (3.2 мг/мл) = 10 п§/гхп
200 мкл 1М ТП8-НС1, рН 7,4	довести до метки 12 мл Буфера
20 мкл 100 мг/мл В8А
довеси до метки 20 мл Н2О

Анализ пролиферации линии клеток СТЬ-16 карциномы желудка.

Ингибирование роста СТЬ-16 клеток оценивали с помощью МТ8-теста с использованием набора для нерадиоактивного анализа клеточной пролиферации СЕЬЬТПЕВ 96® Ацнеонк Моп-Кайоасйуе РгоШегайоп Аккау от Рготеда. Набор состоит из растворов нового тетразолиевого соединения (3-(4,5диметилтиазол-2-ил)-5-(3-карбоксиметоксифенил)-2-(4-сульфофенил)-2Н-тетразолий, внутренняя соль; МТ8) и переносчика электронов (феназинметосульфат, РМ8). В этом колориметрическом анализе превращение МТ8 в водный, растворимый формазан происходит при помощи энзимов дегидрогеназы, обнаруженных в метаболически активных клетках. Количество продукта формазана, измеренное его абсорбцией при 490 нм, прямо пропорционально количеству живых клеток в культуре.

СТЬ-16 клетки инокулировали в 96-луночные титрационные микропланшеты в 0.5% фетальную телячью сыворотку и инкубировали при 37°С, 5% СО₂, 95% воздуха и 100% относительной влажности в течение 24 ч перед добавлением соединения. При внесении лекарственного препарата один планшет с клеточной линией анализировали с помощью вышеуказанного набора для представления результатов измерения клеточной популяции в момент добавления лекарственного препарата. После внесения лекарственного препарата планшеты инкубировали дополнительно в течение 72 ч перед обработкой и измерением клеточных популяций. Каждое соединение тестировали при 8 разных концентрациях в трех повторностях, как и необработанный контрольный образец. Ингибирование роста на 50% ДС50) рассчитывали анализом данных в Ехсе1 с использованием логистического уравнения с 4 параметрами с данными, заполненными с помощью алгоритма ЬеуепЬигд Мащиагй!.

- 23 017736

УЕОРВ-2 киназный анализ.

Реагенты	Конечная концентрация
Базовый раствор	УЕОРК-2
Тп5 рН 7.0	20 мМ
В8А 10 мг/мл	25 мкг/мл
МпС12(1М)	1.5 мМ
ϋΤΤ(ΙΜ)	0,5 мМ
Смесь энзимов в 10% глицероле (1 мг/мл)	7.5 ηο,τχη

Инкубационные смеси, которые использовали для анализа УЕСЕК-2, содержали синтетический субстрат ро1у д1и/1уг, (4:1), АТР, АТР-у-³³Р и буфер, содержащий Ми⁺², ЭТТ, В8А и ТгЬ буфер. Реакцию инициировали добавлением энзима и через 60 мин при комнатной температуре завершали добавлением 30% ТСА до конечной концентрации 15% ТСА. Ингибиторы доводили до 10 мМ в 100% ΌΜ8Ο. Образцы готовили в 96-луночном формате в четырех повторностях. Соединения разбавляли 1:500 в 100% ΌΜ8Ο и затем 1:10 в воде для получения конечной концентрации ΌΜ8Ο 10%. Аликвоты (10 мкл) добавляли в ряды В-Н в 96-луночный формат 10% ΌΜ8Ο. Соединение (20 мкл) добавляли в ряд А при концентрации, в 5 раз превышающей рабочий режим. Аликвоты (10 мкл) переносили в каждый ряд с последующими шестью серийными разбавлениями с перемешиванием и в ряду Р 10 мкл удаляли. Ряд О являлся контрольным без соединения и ряд Н не содержал соединения и контрольного энзима. Энзим и субстрат доставляли с помощью ТопИес Оиабга йайои.

Планшеты накрывали адгезионной верхней стороной пластин, инкубировали при 27°С в течение 60 мин и затем кислоту осаждали ТСА в течение 20 мин на льду. Осадок переносили в ишРШег-96, ОР/С микропланшеты с помощью Тот1ес или Раскагб ПЬТЕРМАТЕ® коллектора. Активность определяли подстчетом внедренной радиоактивности с помощью Раскагб ТорСоии! М1сгор1а4е 8сш4111айои СошИег с последующим добавлением М1сго8сш4-20 коктейля в каждую высушенную лунку ип1Б111ег микроплан шетов.

Табл. 4 показывает активности примеров 1 и соединений А и В в МЕТ киназном анализе, УЕОРВ-2 анализе и/или ОТЬ-16 анализе. Составы соединений А и В раскрыты в Американской заявке 2005/0245530 в примерах 56 и 101 соответственно.

Таблица 4

	МЕТ Киназа Ю50 (нМ)	ОТЬ-16 (нМ)	1С»	УЕОРК-2 (нМ)	1С50
Пример 1	1.7	39	15
Соединение А	160	5400	-
Соединение В	4.8	170	40

Соединение А. №(4-(2-Аминопиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-бензил-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамид, соль трифторуксусной кислоты.

Соединение В. Ν-(4-(2-Аминопиридин-4-илокси)-3 -фторфенил)-1 -(4-фторфенил)-2-оксо-1,2-дигидропиридин-3-карбоксамид, хлористо-водородная соль.

Ш у1уо определение эффективности.

№(4-(2-Амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4-дигидропиридин-3-карбоксамид (пример 1) и 3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил дигидрофосфат (пример 2) оценивали на эффективность ш У1уо против человеческой ксенографтной модели линии клеток ОТЬ-16 опухоли желудка. Пример 2 является пролекарством примера 1. Как показано на фиг. 1, примеры 1 и 2 были активными, что было определено более чем 50% ингибированием роста опухоли (ТОЦ за время удвоения по меньшей мере одной опухоли в модели ОТЬ-16 карциномы желудка. Выраженной токсичности не наблюдалось ни при каких

- 24 017736 уровнях доз при введении один раз в день на протяжении 14 дней. В этом исследовании эквимолярные концентрации примера 1 (25 мг/кг примера 1 и 31.2 мг/кг примера 2) обеспечивали полный стаз опухоли.

Пример 1 также был протестирован на модели глиобластомы И87, Ме!-зависимой опухоли на основе НСЕ аутокринного механизма активации Ме!. Как показано на фиг. 2, полный стаз опухоли наблюдали при 25 мг/кг, аналогично активности, наблюдаемой против СТЬ-16 ксенотрансплантатов опухоли.

Claims (13)

1. ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ

   1. Соединение, имеющее формулу (I)

   I или его соль, где С представляет собой Н, -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂ или -ί.ΉΧ-Οί.’(=Ο)Ζ;

   X представляет собой Н или С₁-С₂-алкил, возможно замещенный одним или более заместителем, выбранным из ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ¹Κ²;

   Ζ представляет собой С₁-С₆-алкил или 5-6-членный гетероцикло, содержащий один атом азота в качестве гетероатома, возможно замещенный одним или более заместителем, выбранным из С1-С4-алкила, ОН, галогена, циано и/или -ΝΚ³Κ⁴;

   К¹, К², К³ и К⁴ независимо являются Н и/или С1-С4-алкилом.
2. 2. Соединение по п.1 или его соль, в котором С представляет собой Н.
3. 3. Соединение по п.1 или его соль, в котором С представляет собой -СНХ-ОР(=О)(ОН)₂.
4. 4. Соединение по п.3 или его соль, в котором X представляет собой Н или метил.
5. 5. Соединение по п.4 или его соль, в котором X представляет собой Н.
6. 6. Соединение по п.1 или его соль, в котором С представляет собой -СНХ-ОС(=О^.
7. 7. Соединение по п.6 или его соль, в котором X представляет собой Н или метил.
8. 8. Соединение по п.7 или его соль, в котором С представляет собой
9. 9. Соединение по п.1 или его соль, представляющее собой №(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4-фторфенил)-4-оксо-1,4дигидропиридин-3-карбоксамид;

   (3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин1-(4Н)-ил)метил дигидрофосфат;

   (8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 2-аминопропаноат;

   (8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 2-амино-3-метилбутаноат;

   (8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1-(4Н)-ил)метил 2-амино-4-метилпентаноат;

   (3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин1-(4Н)-ил)метилпиперидин-3-карбоксилат;

   (8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1-(4Н)-ил)метилпирролидин-2-карбоксилат;

   (8)-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1-(4Н)-ил)метилпирролидин-3-карбоксилат;

   (3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин1-(4Н)-ил)метилпиперидин-4-карбоксилат;

   1-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4

   - 25 017736 оксопиридин-1 -(4Н)-ил)этилпиперидин-4-карбоксилат; (28)-1-(3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4оксопиридин-1-(4Н)-ил)этил 2-амино-3-метилбутаноат или (3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин1-(4Н)-ил)метил 1-метилпиперидин-4-карбоксилат.
10. 10. Фармацевтическая композиция. содержащая по меньшей мере одно соединение по п.1 или его фармацевтически приемлемую соль и фармацевтически приемлемый носитель или разбавитель.
11. 11. Фармацевтическая композиция по п.10. в которой указанным по меньшей мере одним соединением является

    С1 или его фармацевтически приемлемая соль.
12. 12. Применение соединения по п.1 или его фармацевтически приемлемой соли для изготовления лекарственных препаратов для лечения рака. где указанное соединение или его фармацевтически приемлемая соль является выбранным из №(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3-фторфенил)-5-(4фторфенил)-4-оксо-1.4-дигидропиридин-3-карбоксамида и (3-(4-(2-амино-3-хлорпиридин-4-илокси)-3фторфенилкарбамоил)-5-(4-фторфенил)-4-оксопиридин-1-(4Н)-ил)метилдигидрофосфата.
13. 13. Применение по п.12. при котором раком является рак мочевого пузыря. рак молочной железы. рак ободочной и прямой кишки. рак желудка. рак органов головы и шеи. рак почки. рак печени. рак легких. рак яичников. рак поджелудочной железы/желчного пузыря. рак предстательной железы. рак щитовидной железы. остеогенная саркома. рабдомиосаркома. меланома. глиобластома/астроцитома. МЕН/фибросаркома или мезотелиома.