EA001988B1 - СПОСОБ ИСТОЩЕНИЯ АДЕНОЗИН 5'-МОНОФОСФАТА В МЕТИЛТИОАДЕНОЗИНФОСФОРИЛАЗА (МТАза)-НЕДОСТАТОЧНЫХ КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО-ХОЗЯИНА - Google Patents
СПОСОБ ИСТОЩЕНИЯ АДЕНОЗИН 5'-МОНОФОСФАТА В МЕТИЛТИОАДЕНОЗИНФОСФОРИЛАЗА (МТАза)-НЕДОСТАТОЧНЫХ КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО-ХОЗЯИНА Download PDFInfo
- Publication number
- EA001988B1 EA001988B1 EA199800806A EA199800806A EA001988B1 EA 001988 B1 EA001988 B1 EA 001988B1 EA 199800806 A EA199800806 A EA 199800806A EA 199800806 A EA199800806 A EA 199800806A EA 001988 B1 EA001988 B1 EA 001988B1
- Authority
- EA
- Eurasian Patent Office
- Prior art keywords
- mtase
- cells
- deficient
- host
- nucleic acid
- Prior art date
Links
- 230000002950 deficient Effects 0.000 title claims abstract description 60
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 57
- 229950006790 adenosine phosphate Drugs 0.000 title claims abstract description 36
- UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N adenosine 5'-monophosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O UDMBCSSLTHHNCD-KQYNXXCUSA-N 0.000 title claims abstract description 33
- UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N Coenzym Q(11) Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(O)=O)C(O)C1O UDMBCSSLTHHNCD-UHFFFAOYSA-N 0.000 title claims abstract description 31
- 230000000779 depleting effect Effects 0.000 title claims abstract description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims abstract description 115
- 239000000523 sample Substances 0.000 claims abstract description 52
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 claims abstract description 26
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims abstract description 24
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims abstract description 24
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims abstract description 22
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims abstract description 20
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 18
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 18
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 18
- 239000000758 substrate Substances 0.000 claims abstract description 13
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 11
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 claims abstract description 9
- 208000024893 Acute lymphoblastic leukemia Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000014697 Acute lymphocytic leukaemia Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000006664 Precursor Cell Lymphoblastic Leukemia-Lymphoma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000002154 non-small cell lung carcinoma Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 208000029729 tumor suppressor gene on chromosome 11 Diseases 0.000 claims abstract description 7
- 206010018338 Glioma Diseases 0.000 claims abstract description 5
- 208000032612 Glial tumor Diseases 0.000 claims abstract description 4
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 claims abstract description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 18
- 102100034187 S-methyl-5'-thioadenosine phosphorylase Human genes 0.000 claims description 17
- 108010034457 5'-methylthioadenosine phosphorylase Proteins 0.000 claims description 16
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 claims description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 claims description 2
- 208000029584 urinary system neoplasm Diseases 0.000 claims description 2
- ZGNLFUXWZJGETL-YUSKDDKASA-N (Z)-[(2S)-2-amino-2-carboxyethyl]-hydroxyimino-oxidoazanium Chemical group N[C@@H](C\[N+]([O-])=N\O)C(O)=O ZGNLFUXWZJGETL-YUSKDDKASA-N 0.000 abstract description 26
- MLFKVJCWGUZWNV-UHFFFAOYSA-N L-alanosine Natural products OC(=O)C(N)CN(O)N=O MLFKVJCWGUZWNV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 26
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 20
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 abstract description 7
- 102000003960 Ligases Human genes 0.000 abstract description 5
- 108090000364 Ligases Proteins 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 2
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 37
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 34
- WUUGFSXJNOTRMR-IOSLPCCCSA-N 5'-S-methyl-5'-thioadenosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](CSC)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 WUUGFSXJNOTRMR-IOSLPCCCSA-N 0.000 description 31
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 26
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 14
- GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N Adenine Chemical compound NC1=NC=NC2=C1N=CN2 GFFGJBXGBJISGV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 13
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 13
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 13
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 13
- 229930024421 Adenine Natural products 0.000 description 12
- 229960000643 adenine Drugs 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 10
- 239000013615 primer Substances 0.000 description 10
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 9
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 9
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 9
- 238000001802 infusion Methods 0.000 description 9
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 9
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 8
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 8
- 239000002299 complementary DNA Substances 0.000 description 8
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 8
- GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N IMP Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](COP(O)(O)=O)O[C@H]1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 GRSZFWQUAKGDAV-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 7
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 7
- 241000699660 Mus musculus Species 0.000 description 6
- 229950005033 alanosine Drugs 0.000 description 6
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 6
- FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N hypoxanthine Chemical compound O=C1NC=NC2=C1NC=N2 FDGQSTZJBFJUBT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 6
- 238000011580 nude mouse model Methods 0.000 description 6
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 5
- 210000004962 mammalian cell Anatomy 0.000 description 5
- 101710201354 Metallothionein A Proteins 0.000 description 4
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 4
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 4
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 4
- 238000012012 milestone trend analyses Methods 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 4
- 230000004044 response Effects 0.000 description 4
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 4
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 4
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 4
- ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N Adenosine triphosphate Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@@H]1O[C@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)[C@@H](O)[C@H]1O ZKHQWZAMYRWXGA-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 3
- ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N Adenosine triphosphate Natural products C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1C1OC(COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)C(O)C1O ZKHQWZAMYRWXGA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003155 DNA primer Substances 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 108700024394 Exon Proteins 0.000 description 3
- UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N Hypoxanthine nucleoside Natural products OC1C(O)C(CO)OC1N1C(NC=NC2=O)=C2N=C1 UGQMRVRMYYASKQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020005187 Oligonucleotide Probes Proteins 0.000 description 3
- 229960001456 adenosine triphosphate Drugs 0.000 description 3
- 238000001042 affinity chromatography Methods 0.000 description 3
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 3
- 230000037396 body weight Effects 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 230000005764 inhibitory process Effects 0.000 description 3
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 3
- 230000037353 metabolic pathway Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 239000002751 oligonucleotide probe Substances 0.000 description 3
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- XGYIMTFOTBMPFP-KQYNXXCUSA-N 5'-deoxyadenosine Chemical compound O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1N1C2=NC=NC(N)=C2N=C1 XGYIMTFOTBMPFP-KQYNXXCUSA-N 0.000 description 2
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 2
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 206010030216 Oesophagitis Diseases 0.000 description 2
- 101710188297 Trehalose synthase/amylase TreS Proteins 0.000 description 2
- JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N [3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-[[5-(2-amino-6-oxo-1H-purin-9-yl)-3-hydroxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(5-methyl-2,4-dioxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(6-aminopurin-9-yl)oxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl]oxy-5-(4-amino-2-oxopyrimidin-1-yl)oxolan-2-yl]methyl [5-(6-aminopurin-9-yl)-2-(hydroxymethyl)oxolan-3-yl] hydrogen phosphate Polymers Cc1cn(C2CC(OP(O)(=O)OCC3OC(CC3OP(O)(=O)OCC3OC(CC3O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)C(COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3COP(O)(=O)OC3CC(OC3CO)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3ccc(N)nc3=O)n3cc(C)c(=O)[nH]c3=O)n3cnc4c3nc(N)[nH]c4=O)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)n3cnc4c(N)ncnc34)O2)c(=O)[nH]c1=O JLCPHMBAVCMARE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N acridine Chemical compound C1=CC=CC2=CC3=CC=CC=C3N=C21 DZBUGLKDJFMEHC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000011543 agarose gel Substances 0.000 description 2
- 230000003197 catalytic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 2
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 2
- 239000002872 contrast media Substances 0.000 description 2
- 238000000326 densiometry Methods 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 208000006881 esophagitis Diseases 0.000 description 2
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 2
- 201000001441 melanoma Diseases 0.000 description 2
- GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N mercaptopurine Chemical compound S=C1NC=NC2=C1NC=N2 GLVAUDGFNGKCSF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 230000004060 metabolic process Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 231100000417 nephrotoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 231100000956 nontoxicity Toxicity 0.000 description 2
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 2
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 2
- 208000003265 stomatitis Diseases 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 description 2
- WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N tioguanine Chemical compound N1C(N)=NC(=S)C2=C1N=CN2 WYWHKKSPHMUBEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 2
- MSTNYGQPCMXVAQ-RYUDHWBXSA-N (6S)-5,6,7,8-tetrahydrofolic acid Chemical compound C([C@H]1CNC=2N=C(NC(=O)C=2N1)N)NC1=CC=C(C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(O)=O)C=C1 MSTNYGQPCMXVAQ-RYUDHWBXSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 3-(dimethylamino)propyliminomethylidene-ethylazanium;chloride Chemical compound Cl.CCN=C=NCCCN(C)C FPQQSJJWHUJYPU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 206010000830 Acute leukaemia Diseases 0.000 description 1
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 1
- 206010005003 Bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 206010065553 Bone marrow failure Diseases 0.000 description 1
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 1
- 206010009944 Colon cancer Diseases 0.000 description 1
- 230000006820 DNA synthesis Effects 0.000 description 1
- 108010015776 Glucose oxidase Proteins 0.000 description 1
- 239000004366 Glucose oxidase Substances 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 244000068988 Glycine max Species 0.000 description 1
- 206010019233 Headaches Diseases 0.000 description 1
- 206010019670 Hepatic function abnormal Diseases 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020772 Hypertension Diseases 0.000 description 1
- 208000001953 Hypotension Diseases 0.000 description 1
- 102000008394 Immunoglobulin Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010021625 Immunoglobulin Fragments Proteins 0.000 description 1
- 208000008839 Kidney Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- 206010058467 Lung neoplasm malignant Diseases 0.000 description 1
- 108020005196 Mitochondrial DNA Proteins 0.000 description 1
- 206010028116 Mucosal inflammation Diseases 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 208000033776 Myeloid Acute Leukemia Diseases 0.000 description 1
- 206010028813 Nausea Diseases 0.000 description 1
- 108020004711 Nucleic Acid Probes Proteins 0.000 description 1
- 241000566145 Otus Species 0.000 description 1
- 238000010222 PCR analysis Methods 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000013009 Pyruvate Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020005115 Pyruvate Kinase Proteins 0.000 description 1
- 206010038389 Renal cancer Diseases 0.000 description 1
- 101710136206 S-methyl-5'-thioadenosine phosphorylase Proteins 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 108010071698 Spermine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000001742 Tumor Suppressor Proteins Human genes 0.000 description 1
- 108010040002 Tumor Suppressor Proteins Proteins 0.000 description 1
- 208000007097 Urinary Bladder Neoplasms Diseases 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 150000001251 acridines Chemical class 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- 230000001399 anti-metabolic effect Effects 0.000 description 1
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 1
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 description 1
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 1
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 1
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 1
- 239000002246 antineoplastic agent Substances 0.000 description 1
- 239000000074 antisense oligonucleotide Substances 0.000 description 1
- 238000012230 antisense oligonucleotides Methods 0.000 description 1
- 239000003443 antiviral agent Substances 0.000 description 1
- 238000011717 athymic nude mouse Methods 0.000 description 1
- 238000000211 autoradiogram Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 1
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000002146 bilateral effect Effects 0.000 description 1
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000012472 biological sample Substances 0.000 description 1
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 description 1
- 230000002051 biphasic effect Effects 0.000 description 1
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 description 1
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 239000012560 cell impurity Substances 0.000 description 1
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 1
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 208000029742 colonic neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 238000012937 correction Methods 0.000 description 1
- SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N dATP Chemical compound C1=NC=2C(N)=NC=NC=2N1[C@H]1C[C@H](O)[C@@H](COP(O)(=O)OP(O)(=O)OP(O)(O)=O)O1 SUYVUBYJARFZHO-RRKCRQDMSA-N 0.000 description 1
- 238000013461 design Methods 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 231100000371 dose-limiting toxicity Toxicity 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001962 electrophoresis Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 1
- 238000002523 gelfiltration Methods 0.000 description 1
- 238000012224 gene deletion Methods 0.000 description 1
- 229940116332 glucose oxidase Drugs 0.000 description 1
- 235000019420 glucose oxidase Nutrition 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000010536 head and neck cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000014829 head and neck neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 231100000869 headache Toxicity 0.000 description 1
- 108091008039 hormone receptors Proteins 0.000 description 1
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 1
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 1
- 239000007943 implant Substances 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 230000002687 intercalation Effects 0.000 description 1
- 238000009830 intercalation Methods 0.000 description 1
- 239000007928 intraperitoneal injection Substances 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 201000010982 kidney cancer Diseases 0.000 description 1
- 239000002502 liposome Substances 0.000 description 1
- HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N luminol Chemical compound O=C1NNC(=O)C2=C1C(N)=CC=C2 HWYHZTIRURJOHG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 201000005202 lung cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000020816 lung neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 1
- 231100000682 maximum tolerated dose Toxicity 0.000 description 1
- 229960001428 mercaptopurine Drugs 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 239000002207 metabolite Substances 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 150000002739 metals Chemical class 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 101150026150 mt gene Proteins 0.000 description 1
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 1
- 208000025113 myeloid leukemia Diseases 0.000 description 1
- 230000008693 nausea Effects 0.000 description 1
- 230000017066 negative regulation of growth Effects 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 238000007899 nucleic acid hybridization Methods 0.000 description 1
- 239000002853 nucleic acid probe Substances 0.000 description 1
- 125000003835 nucleoside group Chemical group 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000003204 osmotic effect Effects 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 description 1
- 230000000144 pharmacologic effect Effects 0.000 description 1
- 108060006184 phycobiliprotein Proteins 0.000 description 1
- 210000002826 placenta Anatomy 0.000 description 1
- 102000054765 polymorphisms of proteins Human genes 0.000 description 1
- 239000002987 primer (paints) Substances 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000006825 purine synthesis Effects 0.000 description 1
- 150000003212 purines Chemical class 0.000 description 1
- 229910052761 rare earth metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000002910 rare earth metals Chemical class 0.000 description 1
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000010802 sludge Substances 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 239000005460 tetrahydrofolate Substances 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960003087 tioguanine Drugs 0.000 description 1
- 230000002110 toxicologic effect Effects 0.000 description 1
- 231100000027 toxicology Toxicity 0.000 description 1
- 201000005112 urinary bladder cancer Diseases 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/02—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving viable microorganisms
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
- A61K31/185—Acids; Anhydrides, halides or salts thereof, e.g. sulfur acids, imidic, hydrazonic or hydroximic acids
- A61K31/19—Carboxylic acids, e.g. valproic acid
- A61K31/195—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group
- A61K31/197—Carboxylic acids, e.g. valproic acid having an amino group the amino and the carboxyl groups being attached to the same acyclic carbon chain, e.g. gamma-aminobutyric acid [GABA], beta-alanine, epsilon-aminocaproic acid or pantothenic acid
- A61K31/198—Alpha-amino acids, e.g. alanine or edetic acid [EDTA]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
- A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
- C12N9/10—Transferases (2.)
- C12N9/1048—Glycosyltransferases (2.4)
- C12N9/1077—Pentosyltransferases (2.4.2)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/25—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving enzymes not classifiable in groups C12Q1/26 - C12Q1/66
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/34—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase
- C12Q1/42—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving hydrolase involving phosphatase
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
- C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
- C12Q1/6876—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes
- C12Q1/6883—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material
- C12Q1/6886—Nucleic acid products used in the analysis of nucleic acids, e.g. primers or probes for diseases caused by alterations of genetic material for cancer
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/5005—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing involving human or animal cells
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/566—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds
- G01N33/567—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor using specific carrier or receptor proteins as ligand binding reagents where possible specific carrier or receptor proteins are classified with their target compounds utilising isolate of tissue or organ as binding agent
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/573—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for enzymes or isoenzymes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
- C12Q2600/00—Oligonucleotides characterized by their use
- C12Q2600/106—Pharmacogenomics, i.e. genetic variability in individual responses to drugs and drug metabolism
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/963—Methods of stopping an enzyme reaction or stabilizing the test materials
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/968—High energy substrates, e.g. fluorescent, chemiluminescent, radioactive
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/975—Kit
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Hematology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Public Health (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Oncology (AREA)
- Hospice & Palliative Care (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Представлен способ in vivo истощения аденозин 5'-монофосфата (АМФ) в клетках млекопитающих, применяемый при лечении определенных форм рака. В соответствии со способом популяцию клеток получают от хозяина и анализируют на утрату активности метилтиоаденозинфосфорилазы (МТАзы). МТАза расщепляет метилтиоаденозин до аденина для эндогенного использования его включения во внутриклеточный пул АМФ. Предпочтительным способом анализа утраты активности МТАзы является способ гибридизации с целью детекции гомозиготной утраты кодирующего гена с помощью терапевтически эффективного количества агента, который ингибирует активность аденилсукцинатсинтетазы, конвертирующей инозин 5'-монофосфат в АМФ, истощая таким образом субстраты опухолевых клеток для образования АМФ de novo. L-аланозин является предпочтительным ASS-ингибирующим агентом для использования в способе, соответствующем изобретению. На фиг. 1 представлена нуклеотидная последовательность геномной МТАзы (SEQ ID No 1), в которой подчеркнуты экзоны.
Description
Изобретение относится к фармацевтическим агентам и способам, используемым в химиотерапии рака. Более специфично, изобретение относится к идентификации раковых клеток, которые не могут преобразовать метилтиоаденозинфосфорилазу до аденина для использования в синтезе адениновых нуклеотидов, и к использованию Ь-аланозина для ингибирования синтеза бе ηονο аденозин 5'-монофосфата (АМФ) в таких раковых клетках.
Предшествующий уровень техники
Метилтиоаденозин (МТА) расщепляется в здоровых клетках млекопитающих метилтиоаденозинфосфорилазой (МТАзой) до аденина и метилтиорибозы-1-Р, последняя является субстратом для метаболического синтеза метионина. Аденин сохраняется в клеточном пуле аденозин 5'-монофосфата (АМФ), из которого клетки производят аденозин 5'-трифосфат (АТФ) для метаболической энергии и 2'дезоксиаденозин-5'-трифосфат (6АТФ) для синтеза ДНК.
На основе ранних исследований ίη νίνο Ьизомер бактериального антибиотика аланозина (полученного из 81гер!отусе§ а1апо81шси8; далее Ь-аланозин) представляется перспективным для применения в качестве антивирусного и противоопухолевого агента. В частности, считают, что Ь-аланозин ингибирует конверсию инозин 5'-монофосфата (ИМФ) до АМФ с помощью аденилсукцинатсинтетазы (А88), истощая таким образом АМФ и АТФ в клеткахмишенях (при отсутствии аденина). Однако, клинические исследования терапевтической эффективности Ь-аланозина в отношении раковых пациентов не оправдали надежд (см., например, данные, собранные ТуаЦ апб Соопеу, Α6ν. Рйагтасо1. Сйето!йегару, 20:69-120, 1984 [результаты до настоящего времени были мало обнадеживающими в отношении эффективности Ь-аланозина для лечения рака человека]; Сгеадап е! а1., Сапсег, 52:615-618, 1993 [исследования стадии II имели общий уровень ответа только 4%]; Сгеадап е! а1., Ат. 1. С1ш. Опсо1., 7:543-544, 1984 [исследования пациентов с меланомой в стадии II; наблюдали незначительный терапевтический ответ]; УопНоГГ е! а1., ШуеЧ. Иете Игидк, 9:87-88, 1991 [объективные ответы не были отмечены у пациентов с раком молочной железы]). В конечном итоге все клинические свойства Ь-аланозина для применения при лечении рака были отвергнуты.
Другим известным ингибитором активности А88 является гадацидин. Однако гадацидин считается более токсичным, чем Ь-аланозин для человека. Далее, активность других ингибиторов синтеза пуринов бе ηονο (таких как мето трексат, 6-меркаптопурин, 6-тиогуанин и бидеазатетрагидрофолат), которые блокируют синтез ИМФ (и поэтому теоретически элиминируют ИМФ как источник образования АМФ) была устранена ш νί\Ό посредством сохранения гипоксантина, который в большом количестве содержится в плазме, для использования его в качестве субстрата для образования ИМФ.
Вследствие этого к настоящему времени действие ш νί\Ό агентов, которые блокируют путь метаболизма аденина для внутриклеточного образования АМФ, было разочаровывающе слабым.
Однако с разработкой достаточно чувствительного метода анализа для идентификации гомозиготных делеций гена, кодирующего МТАзу в ряде человеческих раковых клеток (см. переуступленную Патентную заявку США Ио 08/176855), теперь представляется, что опухоли, которые лечили при клинических исследованиях Ь-аланозина, образовывали МТАзу и вследствие этого были способны образовывать достаточно аденина для поддержания пула АМФ, несмотря на ингибирование образования АМФ из ИМФ. Поэтому данное изобретение представляет способ идентификации клеток, в которых отсутствует МТАза, и лечения таких клеток истощением в них АМФ.
Сущность изобретения
Было обнаружено, что клетки, в которых произошла делеция гена, кодирующего белок МТАзы, и которые вследствие этого неспособны метаболизировать метилтиоаденозин (МТА) до аденина (МТАза-недостаточные клетки), селективно уничтожаются ш νί\Ό при контакте с терапевтически эффективными дозами ингибитора синтеза АМФ бе ηονο, такого как Ьаланозин. Таким образом, хотя Ь-аланозин не является терапевтически эффективным в отношении всех раковых клеток, он терапевтически эффективен в отношении МТАазанедостаточных клеток.
Способ ингибирования активности аденилсукцинатсинтетазы (А88) в метилтиоаденозинфосфорилаза (МТАза)-недостаточных клетках предусматривает предварительное определение, являются ли раковые клетки МТАзанедостаточными, путем проведения анализа для установления, отсутствует ли в клетках белок МТАзы. Предпочтительным анализом для использования с этой целью является способ детекции гомозиготных делеций в клетках гена, который кодирует белок МТАзы.
Изобретение представляет способ истощения аденозин 5'-монофосфата в метилтиоаденозинфосфорилаза (МТАза)-недостаточных клетках млекопитающего-хозяина, предусматривающий введение млекопитающему-хозяину терапевтически эффективного количества А88ингибирующего агента, причем указанный агент ингибирует А88 и тем самым истощает аденозин 5'-монофосфат в МТАза-недостаточных клетках млекопитающего-хозяина. В частности, способ истощения аденозин 5'-монофосфата в МТАза-недостаточных клетках проводят в две стадии: на стадии (а) устанавливают, что популяция клеток, полученных от млекопитающего хозяина, является МТАза-недостаточной, и на стадии (Ь) осуществляют введение хозяину терапевтически эффективного количества А88ингибирующего агента, причем указанный агент обладает эффектом истощения аденозин 5'монофосфата в МТАза-недостаточных клетках. Стадию (а) проводят следующим образом:(1) получением пригодного для анализа образца клеток, которые предположительно являются МТ Аза-недостаточными;
(2) добавлением к образцу клеток олиго нуклеотидных зондов, комплементарных нуклеиновой кислоте, кодирующей МТАзу в условиях, которые позволяют зондам определяемо гибридизоваться с любой такой нуклеиновой кислотой, присутствующей в образце клеток, и (3) определением, присутствует ли кодирующая МТАзу нуклеиновая кислота в образце клеток. Отсутствие кодирующей МТАзу нуклеиновой кислоты в образце клеток определяют по неспособности зондов гибридизоваться с данной нуклеиновой кислотой. МТАза-недостаточные клетки являются клетками первичной опухоли, выбранными из группы, состоящей из клеток немелкоклеточного рака легкого, клеток острого лимфобластного лейкоза, клеток глиомы и клеток опухолей мочевыводящей системы.
Изобретение представляет также способ лечения МТАза-недостаточных раков посредством контактирования МТАза-недостаточных клеток с терапевтически эффективным количеством ингибитора синтеза пуринов бе ηονο, который ингибирует активность А88. предпочтительно, с Ь-аланозином. Лечение проводят путем истощения аденозин 5'-монофосфата в метилтиоаденозинфосфорилаза (МТАза)-недостаточных клетках млекопитающего-хозяина и оно предусматривает введение млекопитающему-хозяину, заведомо содержащему МТАзанедостаточные клетки, терапевтически эффективного количества А88-ингибирующего агента, причем указанный агент ингибирует А88 и тем самым истощает аденозин 5'-монофосфат в МТАза-недостаточных клетках млекопитающего-хозяина. При этом МТАза-недостаточные клетки являются клетками первичной опухоли, выбранными из группы, состоящей из клеток немелкоклеточного рака легкого, клеток острого лимфобластного лейкоза и клеток глиомы.
А88-ингибирующие агенты, соответствующие данному изобретению, могут вводиться клинически приемлемыми средствами, но предпочтительно вводятся непрерывным вливанием в концентрациях, меньших максимальной переносимой дозы для пролонгирования желательной ингибирующей активности и минимизации токсичности для тканей хозяина. После введе ния хозяину А88-ингибирующего агента хозяину вводят субстрат для внутриклеточного образования АМФ.
Предложены также наборы для применения в способах, соответствующих изобретению, которые включают реагенты, используемые при проведении анализа МТАза-недостаточности, соответствующего изобретению, а также фармацевтические композиции ингибитора А88, предпочтительно Ь-аланозина и/или его активного метаболита, Ь-аланозинил-А1СОК
Краткое описание чертежей
На фиг. 1 представлена нуклеотидная последовательность геномной МТАзы (8ЕО ΙΌ Νο 1), в которой подчеркнуты экзоны.
На фиг. 2 представлен график, показывающий эффект ίη νίνο Ь-аланозина после непрерывного вливания на стабилизированные человеческие МТАза-компетентные и МТАзанедостаточные ксенотрансплантаты опухолей немелкоклеточного рака легкого у голых мышей.
На фиг. 3 представлен график, показывающий эффект ίη νίνο Ь-аланозина после непрерывного вливания на стабилизированные человеческие МТАза-недостаточные ксенотрансплантаты острого лимфобластного лейкоза у голых мышей.
На фиг. 4 и 5 представлены графики, показывающие эффект введения различных экзогенных субстратов МТАзы на МТАзакомпетентные или МТАза-недостаточные клеточные линии после лечения Ь-аланозином.
На фиг. 6 схематически представлены внутриклеточные пути метаболизма для образования АМФ.
На фиг. 7 представлен график, показывающий эффект ίη νίνο Ь-аланозина после ежедневной инъекции на стабилизированные человеческие МТАза-недостаточные ксенотрансплантаты опухолей немелкоклеточного рака легкого у голых мышей.
Сведения, подтверждающие возможность осуществления изобретения
Ι. Пути метаболизма для внутриклеточного образования АМФ.
Для лучшего понимания изобретения схема, показывающая внутриклеточные пути метаболизма, при которых образуется АМФ, представлена на фиг. 6. Вообще говоря, существуют три основных источника субстратов для внутриклеточного образования АМФ. Первым является превращение метилтиоаденозина до аденина с помощью МТАзы. Этот путь блокирован в МТАза-недостаточных клетках.
Второй путь представляет конверсию ИМФ в АМФ с помощью аденилсукцинатсинтетазы (А88) или аденилсукцинатлиазы (А8Ь). В настоящее время ингибиторы активности А8Ь неизвестны. Однако при утрате активности А88 конверсия ИМФ-АМФ в значительной степени прекращается.
Третьим является использование гипоксантина для получения АМФ. Однако, поскольку конверсия ИМФ-АМФ происходит отдельно от использования гипоксантина, ингибирование катаболизма ИМФ-АМФ с помощью А88 блокирует путь использования гипоксантина.
II. Способ определения, являются ли опухолевые клетки в анализируемом образце, полученном от млекопитающего-хозяина, МТАзанедостаточными.
А. Полинуклеотидные реагенты для использования при идентификации МТАзанедостаточных клеток
Предпочтительным способом определения, являются ли определенные популяции клеток МТАза-недостаточными является гибридизационный анализ с целью детекции гомозиготных делеций гена, который кодирует МТАзу в клетках. Процедуры скрининга, которые основаны на гибридизации нуклеиновых кислот, делают возможным определить любую полинуклеотидную последовательность (и в результате любой белок, кодируемый такой полинуклеотидной последовательностью) в любом организме, при условии наличия соответствующего зонда.
Полное описание способов гибридизации, подходящих для использования в изобретении, а также описание гена, который кодирует МТАзу, представлены в одновременно рассматриваемой переуступленной Патентной заявке США 8епа1 Νο 08/176855 (поданной 29 декабря 1993 г.), описание которой введено здесь в виде данной ссылки вместе с любыми исправлениями, которые могут быть в ней сделаны. Для простоты ссылки полинуклеотидная последовательность гена, кодирующего МТАзу, описана здесь как 8ЕО Ш Νο 1 в прилагаемом Списке последовательностей и на фиг. 1, где кодирующие участки гена выделены подчеркиванием.
Полинуклеотид геномной МТАзы находится в хромосоме 9 на участке р21. Интересно, что очень высокий процент клеток, имеющих гомозиготную делецию гена, который кодирует опухолевый супрессор р16, также имеют гомозиготную делецию гена, который кодирует МТАзу. Таким образом, альтернативным средством детекции гомозиготных делеций последнего гена (МТАзы) является детекция гомозиготной делеции первого гена (р16). Для дальнейшей ссылки по этому вопросу см. переуступленную одновременно рассматриваемую Патентную заявку США 8епа1 Νο 08/227800, описание которой включено здесь в виде этой ссылки.
Штамм Е. сой, содержащий полную геномную ДНК МТАзы крыс, депонирован в Ашепсап Туре СиЙиге Сойесйоп (Американская Коллекция Типовых Культур), КоскуШе, ΜΌ. по почте до 29 декабря 1993 г., и Идентификационные номера 55536, 55537, 55538, 55539 и 55540 присвоены в совокупности. Нет сомнений, что этот депозит необходим для того, что бы дать возможность специалисту осуществить ил и предполагать осуществление изобретения. Депозит будет, однако, поддерживаться в жизнеспособной форме в течение всего периода, который является или может являться необходимым по патентному праву, применимому к данному описанию.
Для того, чтобы определить, имела ли место гомозиготная делеция гена МТАзы в клетках, представляющих интерес, пригодный для анализа образец клеток получают от хозяина. Например, образец может содержать жидкость или клетки тела, например, из ткани хозяина или опухоли. Такие образцы получают, используя способы, известные из клинической практики, например, опухолевые клетки могут быть получены биопсией или хирургической операцией. Предпочтительно, если клетки практически не содержат примеси, т.е. клетки, белки и подобные компоненты, которые могут фальсифицировать результат анализа. Например, если солидные (плотные) опухоли являются источником анализируемого образца клеток, нормальные незлокачественные клетки и МТАза, которая может быть выделена из нормальных клеток во время процедуры, проводимой для получения биологического образца, рассматривались бы как примеси. Такие примеси могут быть удалены традиционными способами очистки, например, аффинной хроматографией с антителами против МТАзы.
Поскольку изобретение направлено на определение наличия или отсутствия этого гена в образце клеток, которые предположительно являются МТАза-отрицательными, нуклеиновые кислоты в образце предпочтительно амплифицируют для повышения чувствительности способа детекции. Эту амплификацию предпочтительно выполняют с использованием полимеразной цепной реакции (ПЦР), хотя использование цепной реакции в стадии полимеризации не является абсолютно необходимым.
Нуклеиновая кислота, предназначенная для амплификации в образце, может состоять из геномной или дикого типа ДНК, которая, как ожидалось бы в норме, кодирует МТАзу, если она присутствует в образце (см. 8ЕО Ш Νο 1). Полагают, что кодирующая МТАзу ДНК (далее ДНК-мишень) должна присутствовать во всех нормальных клетках млекопитающих, включая клетки человека.
Для использования в качестве контроля или источника олигонуклеотидных зондов или праймеров ДНК, кодирующая геномную МТАзу, может быть выделена согласно способам, известным из уровня техники, таким как способ, описанный Мап1аЙ8 е! а1. ΜοΚα.ι1;π Οοηίη§: А ΕαΕοπιΙοίΎ Мапиа1 (С'о1б 8ргшд Η;·ιγΕογ ΕαΕοπιЮгу. 1982). Здесь приведен рабочий пример, демонстрирующий выделение геномного клона гена МТАзы человека, в котором скрининг библиотеки космидных генов проводят, используя олигонуклеотидный зонд кДНК гена МТ Азы (см. Пример III). Однако, специалист будет знать, что возможно применение других подходящих средств для получения ДНК МТ Азы.
Например, скрининг библиотеки кДНК, которая, как полагают, содержит полинуклеотид, представляющий интерес, может быть проведен инъекцией различных мРНК, выделенных из кДНК, в яйцеклетки, обеспечением достаточного времени для того, чтобы произошла экспрессия генных продуктов кДНК, и тестированием присутствия желаемого продукта экспрессии кДНК, например, с использованием антител, специфичных к пептиду, кодируемому полинуклеотидом, представляющим интерес, или с использованием зондов к повторяющимся фрагментам и образца тканевой экспрессии, характеризующего пептид, кодируемый полинуклеотидом, представляющим интерес. Альтернативно может быть проведен непрямой скрининг библиотеки кДНК на экспрессию представляющих интерес пептидов (например, белка МТАзы), имеющих, по меньшей мере, один эпитоп, с использованием антител, специфичных к пептидам. Такие антитела могут быть либо поликлонально, либо моноклонально выделены и использованы для детекции продукта экспрессии, указывающего на присутствие кДНК, представляющей интерес (см. для дальнейших ссылок Машайк е! а1., Мо1еси1аг С1опшд: А ЬаЬога!огу Мапиа1 (Со1б 8ргшд НагЬог ЬаЬ., \еи Уогк, 1982).
Полинуклеотиды для использования в качестве контролей, зондов или праймеров в изобретении, могут быть также синтезированы с использованием способов и оборудования для синтеза нуклеиновых кислот, которые хорошо известны из уровня техники. В качестве ссылки по этому поводу см. Аи8иЬе1 е! а1. Сиггеп! Рго!осо1к ίη Мо1еси1аг Вю1о§у, гл. 2 и 4 (\УПеу 1п!егкс1епсе, 1989).
В. Амплификация кодирующей МТАзу геномной ДНК и ее гибридизационный анализ.
Для повышения чувствительности гибридизационных анализов, соответствующих изобретению, анализируемый образец клеток предпочтительно подвергают воздействию условий, способствующих селективной амплификации нуклеиновой кислоты-мишени. Предпочтительно нуклеиновая кислота-мишень будет являться полинуклеотидной частью гена, который кодирует МТАзу (т.е. полинуклеотидоммишенью). Предпочтительным средством амплификации полинуклеотида-мишени является ПЦР.
ПЦР представляет собой способ ш уйго ферментативного синтеза специфических последовательностей ДНК или РНК с использованием олигонуклеотидных праймеров, которые гибридизуются со специфическими последовательностями нуклеиновых кислот и фланкируют представляющий интерес участок нуклеиновой кислоты-мишени. Повторяющаяся серия циклов денатурации матрицы, отжигания праймера и ферментного удлинения отжигаемых праймеров приводит к экспоненциальному накоплению фрагмента специфической нуклеиновой кислоты, ограниченного по его концам 5'-концами праймеров. Полученные продукты (продукты ПЦР), синтезированные в одном цикле, служат матрицами для следующего цикла, следовательно, число копий нуклеиновой кислоты-мишени приблизительно удваивается в каждом цикле.
Основные способы ПЦР описаны в Патентах США 4 683 195 и 4 683 202 МиШк е! а1, описания которых включены здесь как примеры известных способов проведения ПЦР. Однако не предполагается ограничивать изобретение применением способов ПЦР, предложенных в патенте 4683202 МиШк е! а1. Со времени появления способа МиШк е! а1. было разработано много способов анализа на базе ПЦР, в которых использованы модификации этого способа. Эти модификации известны в уровне техники и поэтому здесь подробно не описываются. Однако с целью иллюстрации возможностей уровня техники в этой области ряд модификаций описывается ниже.
Способ ПЦР, который обеспечивает получение внутреннего амплификационного стандарта при использовании конкурентной матрицы, которая отличается от нуклеиновой кислоты-мишени по последовательности и размеру, описан в Ргос. №!1. Асаб. 8ск И8А (1990) 87: 2725-2729 (ОйШапб е! а1., аиШогк). Иной способ проведения конкурентной ПЦР, в котором используют матрицы, отличающиеся по последовательности, но не по размеру, описан Мс. Ас1б8. Век., 21: 3469-3472, (1993), (Койкака е! а1., аи!йог8). Этот способ является предпочтительным, поскольку в нем используют способ твердофазного иммуноферментного анализа (ЕЫ8А) для определения амплифицированной нуклеиновой кислоты (кислот).
Неконкурентный способ ПЦР, в котором используют сайт-специфические олигонуклеотиды для детекции мутаций или полиморфизмов в генах, который также может быть использован в способе, соответствующем изобретению, описан в Ргос. ЫаЙ. Асаб. 8сй И8А (1989) 86:62306234 (8а1к1 е! а1., аиШогк). Преимуществом каждого из этих способов является использование гибридизационных зондов, которые помогают избежать ложных положительных результатов, обусловленных неспецифической амплификацией, которая может происходить при ПЦР.
Для дополнительного описания уровня техники специалисты могут обратиться к 1пшк е! а1., ОрШш/айоп о! РСВ'к, РСВ Рго!осо1к: А Ошбе !о Ме!йобк апб Аррйсайопк (Асаб. Ргекк, 1990). Эта публикация представляет обзор способов, влияющих на специфичность, надежность и выход желаемых продуктов ПЦР.
Выбирают олигонуклеотидные праймеры (по меньшей мере, одну пару праймеров), которые будут специфически гибридизоваться с маленьким участком пар оснований на любом конце (т.е. 5'- или З'-конце) полинуклеотидамишени МТАзы (т.е. фланкирующие последовательности). Специалисты смогут легко выбрать подходящие праймеры без экспериментальных исследований на основе информации о полинуклеотидной последовательности, приведенной в прилагаемом Списке последовательностей как 8ЕЦ. ΙΌ. Νο 1 и на фиг. 1.
При конструировании праймеров важно, чтобы праймеры не содержали комплементарные основания, чтобы они не могли бы гибридизоваться друг с другом. Для устранения амплификации примесного материала, который может присутствовать в образце, предпочтительно конструирование праймеров к определенному кругу экзонов (которые для гена МТАзы подчеркнуты на фиг. 1).
Как указано выше, нет необходимости использовать цепную реакцию на этой стадии полимеризации с целью адекватной амплификации нуклеиновых кислот в образце. Например, когда используют способ, описанный Койкака с1 а1., кирга, стадию полимеризации проводят на твердофазном носителе и за ней следует гибридизация с зондами, специфичными к полинуклеотиду-мишени, при этом чувствительность анализа будет такой, что может быть необходима только одна полимеризация полинуклеотида-мишени.
После проведения стадии амплификации продукты ПЦР анализируют и определяют, присутствует ли в образце ген, кодирующий МТАзу. Предпочтительным будет связывание двунитевых продуктов ПЦР с твердой фазой, чтобы их нити могли быть разделены при денатурации, позволяя таким образом специфичным к последовательности зондам гибридизоваться со связанной антисмысловой нитью продукта ПЦР с целью детекции гена, в основном, как описано Койкака с1 а1., кирга. Альтернативно продукты ПЦР будут удалены из реакционной среды и отделены от амплификационной смеси перед добавлением зондов для гибридизации к двунитевым продуктам ПЦР. В этом последнем случае продукты ПЦР отделяют от амплификационной смеси известными из уровня техники способами, которые в отношении данного способа выбраны для детекции, например, гельфильтрация, электрофорез или аффинная хроматография.
Детекция амплифицированного продукта может быть выполнена с использованием гибридизационных зондов, которые стабильно связаны с определяемой меткой. Метка является субстанцией, которая ковалентно связана или жестко ассоциирована с зондом нуклеиновой кислоты, что обеспечивает возможность детекции зонда. Например, метка может представлять собой радиоизотоп, ферментный субстрат или ингибитор, фермент, контрастное вещество (в том числе коллоидные металлы), люминофоры, хемолюминесцентную молекулу, липосомы, содержащие любую из указанных меток или парный член специфического связывания. Подходящая метка не теряет качества, ответственного за определяемость, в течение амплификации.
Специалистам в области диагностики известны подходящие определяемые метки для использования в детекционных анализах ίη νίΐτο. Например, подходящие радиоизотопы для применения ίη νίΐτο включают 3Н, 125Ι, 131Ι, 32Р, 14С, 358. Амплифицированные фрагменты, меченные с помощью радиоизотопов, могут быть определены непосредственно с помощью счетчика гамма-излучения или денситометрией авторадиограмм посредством блоттинга по 8ои1йсгп амплифицированных фрагментов в сочетании с денситометрией. Примерами подходящих хемолюминесцентных молекул являются акридины или люминол. Последовательности-мишени, гибридизованные с зондами, дериватизированными акридиновым эфиром, защищены от гидролиза интеркаляцией. Примерами подходящих люминофоров служат флуоресцеин, фикобилипротеин, хелаты редкоземельных металлов, дансил или родамин.
Примерами подходящих ферментных субстратов или ингибиторов являются соединения, которые будут специфически связывать пероксидазу хрена, глюкозооксидазу, глюкоза-6фосфатдегидрогеназу, β-галактозидазу, пируваткиназу или щелочную фосфатазуацетилхолинэстеразу. Примерами контрастных веществ служат коллоидное золото или магнитные частицы.
Пара специфического связывания содержит две различные молекулы, при этом на поверхности или в полости одной из молекул имеется область, которая специфически связывает определенную пространственную или полярную организацию другой молекулы. Члены пары специфического связывания часто называются лиганд и рецептор или лиганд и антилиганд. Например, если рецептор представлен антителом, лигандом является соответствующий антиген. Иные пары специфического связывания включают пары гормон-рецептор, пары фермент-субстрат, пары биотин-авидин и пары гликопротеин-рецептор. Сюда относятся фрагменты и части пар специфического связывания, которые сохраняют специфичность связывания, такие как фрагменты иммуноглобулинов, включая фрагменты Рай и т.п. Антитела могут либо моноклональными, либо поликлональными. Если член пары специфического связывания используют в качестве метки, то предпочтительный способ разделения будет включать аффинную хроматографию.
Если никакие амплифицированные продукты не могут быть определены в ходе опи11 санного выше анализа, это указывает на МТАзанедостаточность в клетках, присутствующих в образце. Поскольку нормальные (т.е. незлокачественные) клетки всегда будут рассматриваться, как содержащие кодирующий МТАзу ген в определяемых количествах (даже при утрате одного аллеля), обнаружение того, что клетки не содержат ген, кодирующий МТАзу (т.е. имеют гомозиготную делецию гена), указывает на то, что анализируемые клетки не имеют обеих каталитически активной и каталитически неактивной МТАзы.
Однако, при желании возможно предварительное исследование образца на каталитическую активность МТАзы с использованием способа, описанного 8е1бепГе1б е! а1., Вюсйет. Βίοрйуз. Вее. Соттип., 95: 1861-1866 (1980), см. также Пример I 1п1га. Способ, соответствующий изобретению, будет затем использован для определения, присутствует ли ген, кодирующий МТАзу, в клетках образца. Образец может быть также протестирован на присутствие каталитической активного или неактивного белка с целью скрининга клеточных примесей, т. е. незлокачественных клеток в анализируемом образце. Подходящий способ иммуноанализа для альтернативного применения с этой целью (т. е. в плане гибридизационного анализа) описан Νοόοπ е! а1., Сапсег Вее. 53: 1098-1101 (1991) и в одновременно рассматриваемой переуступленной Патентной заявке США 8епа1 Νο 08/177855, поданной 29 декабря 1993 г..описание которой включено в данную заявку.
С. МТАза-недостаточные клетки
Используя вышеописанные способы анализа, следующие первичные опухоли человека были определены как МТАза-недостаточные. Следует понимать, что данный список типов рака, которые могут быть определены как МТАза-недостаточные с использованием описанных способов анализа, является репрезентативным, но не исчерпывающим.
Острые лимфобластные лейкозы (приблизительно 80% случаев)
Глиомы (приблизительно 67% случаев)
Немелкоклеточные раки легких (приблизительно 18% случаев)
Уротелиальные опухоли (например, рак мочевого пузыря, частота варьирует в зависимости от типа опухоли).
Основываясь на этих данных, МТАзанедостаточность следует обоснованно предполагать у пациентов, страдающих от этих состояний. Таким образом, образцы клеток от таких пациентов следует рутинно анализировать на МТАза-недостаточность для определения, вероятно ли улучшение состояния пациента от терапии способом, соответствующим изобретению.
Образцы клеток от пациентов с другими формами рака следует анализировать на МТАзанедостаточность при клинических показаниях. В частности, не было обнаружено, что образцы первичных опухолей пациентов, страдающих от следующих состояний, являются МТАзанедостаточными (т.е. формы рака являются МТАза-компетентными):
Рак молочной железы
Рак толстой кишки
Рак головы и шеи
Меланома
Рак почки
Нелимфобластные лейкозы взрослых людей Определенные острые лейкозы (взрослых и подростков)
Проведены клинические исследования применения Ь-аланозина для лечения вышеуказанных МТАза-компетентных форм рака, которые не привели к заметному успеху.
II. Способ лечения МТАза-недостаточных клеток.
A. Фармакологические и токсикологические параметры Ь-аланозина
У приматов приблизительно 75% Ьаланозина выделяется с мочой в течение приблизительно 24 ч в основном в виде нуклеозидных форм Ь-аланозил-ИМФ и Ь-аланозилА1СОВ. Клиренс из плазмы после внутривенного введения человеку является двухфазным при Ιι/2„= 14 мин. и ΐι/2β=99 мин. (где !1/2 является периодом полужизни, а значения времени (!) являются приблизительными).
В предшествующих клинических исследованиях токсичность была доза-лимитирующей, включая почечную токсичность, стоматит, эзофагит и (с меньшей частотой) миелосупрессию, головную боль, тошноту и гипо- или гипертензию. Почечная токсичность наблюдалась при однократной ударной дозе более 4 г/м2 массы тела. Далее два педиатрических пациента, которые получали более высокие дозы, приблизительно 350 мг/м2 массы тела в день, в раздельных дозах, страдали от нарушения функции печени. Стоматит и эзофагит появлялись после многократного введения. Другие отмеченные реакции были специфическими для пациентов.
В одном из исследований фазы II использовали непрерывное вливание в дозе приблизительно 125 мг/м2 массы тела в течение 5 дней для взрослых субъектов с острым нелимфобластным лейкозом. Доза-лимитирующая токсичность была представлена воспалением слизистой оболочки.
B. Введение ингибиторов А88 хозяину
Млекопитающих-хозяев (например, человека) с формами рака, определенными как МТАза-недостаточные согласно анализу МТАза-недостаточности в соответствии с изобретением, лечат терапевтически эффективными дозами ингибитора А88, такого как Ь-аланозин, Ьаланозил-АШОВ или гадацидин, предпочтительно первого. В этом плане терапевтически эффективная доза является дозой, которая дает объективную реакцию опухоли у исследуемых пациентов, где реакция опухоли представляет собой остановку или регрессию роста, определяемых по принятым в клинике стандартам (см., например, Еадап е! а1., Сапсег, 44, 1125-1128, 1979 [описание которого введено здесь этой ссылкой] и доступные сообщения о параметрах, применяемых (в основном для Еадап е! а1.) в клинических исследованиях, проводимых под ΙΝΏ# 14247 (Министерство лекарственных и пищевых продуктов)). Определение терапевтически эффективных доз для ингибиторов Л88, используемых в изобретении для истощения внутриклеточной АМФ, по отношению к этим стандартам может быть легко выполнено специалистами в области онкологии.
Вообще, ежедневное введение или непрерывное вливание ингибиторов А88 в меньших дозах, чем те, которые, как известно, вызывают токсические эффекты, будет предпочтительным терапевтическим способом усиления антиметаболической активности лекарственных веществ. Благодаря уникальной чувствительности МТАаза-недостаточных клеток к данному способу лечения, можно ожидать, что будут необходимы дозы, которые меньше доз, тестированных в клинических исследованиях Ь-аланозина при лечении МТАза-компетентных клеток, что снижает токсичность в отношении непролиферирующих клеток.
Незлокачественные МТАза-компетентные клетки могут быть также защищены от любого эффекта воздействия ингибиторов А88 посредством введения МТА или подходящего субстратного аналога для использования в синтезе аденина. Подходящие соединения для использования с этой целью включают МТА, 2'-5'дидезоксиаденозин, 5'-дезоксиаденозин, 2'дезокси-5 -дезокси-5 '-метилтиоаденозин (см., например, Пример II). Следует оценить, однако, что МТАза-компетентные клетки способны образовывать аденин при метаболизме метилтиоаденозина для восполнения клеточного пула АМФ, и поэтому не следовало бы ожидать в них истощения АМФ до той же степени, что в МТАза-недостаточных клетках.
Поскольку изобретение полностью описано, его практическое применение иллюстрируют примерами, представленным ниже. Следует понимать, однако, что примеры не ограничивают объем изобретения, который определен прилагаемой формулой изобретения. Во всех примерах используются стандартные сокращения, такие как мл - миллилитр, час. - часы и мг - миллиграмм.
Пример 1. Эффект ίη νίνο Ь-аланозина на МТАза-недостаточные и МТАза-компетентные ксенотрансплантаты опухолей человека после непрерывного вливания.
Для оценки эффекта ίη νίνο Ь-аланозина на известные человеческие МТАза-недостаточные опухоли после непрерывного вливания и сравнения данного эффекта с эффектом лекарственного препарата на известные человеческие
МТАза-компетентные опухоли, 2х106 МТАзанедостаточных клеток Н292 ЖСЬС и МТАзакомпетентных опухолевых клеток Са1и-6 (в 0,3 мл 50% носителя МАТЯЮЕЬ™) инъецируют в правый и левый бок, соответственно, восьми бестимусных голых мышей Ва1Ь/С. МАТШОЕЬ™ сначала образует твердый матрикс ίη νίνο, который измеряют у каждой мыши на первый день после инфузии для контроля размера опухоли (которая рассасывается через 14 дней). Для дальнейшего сравнения 107 клеток СЕМ ТАЬЬ (МТАза-недостаточного острого лимфобластного лейкоза) в 50% носителе МАТШОЕЬ™ инъецируют в правый бок 8 другим голым мышам. Многие клетки получают из серийно выпускаемых клеточных линий, поставляемых АТСС и маркируемыми при продаже номерами СЯЬ-1848 и НТВ-56, соответственно.
На следующий день 4 мышам с билатеральным инокулятом ЖСЬС и 4 - с инокулятом Т-АЬЬ подкожно имплантируют осмотические инфузионные насосы АЬ2ЕТ™ 1007Ώ в область спины на некотором расстоянии от областей инокулятов опухолевых клеток. Насосы наполняют Ь-аланозином в концентрации, рассчитанной для доставки 60 мг/кг ежедневно при непрерывном введении. Поскольку через 7 дней при дозе 60 мг/кг никакой токсичности не обнаруживается, насосы удаляют и замещают насосами, содержащими Ь-аланозин для доставки 90 мг/кг в день еще на 7 дней.
Как показано на фиг. 2 и 3, введенный Ьаланозин вызывает сморщивание инокулумов ксенотрансплантатов установленных МТАзанедостаточных ШСЬС (Н292 Ь-а1ап Тх, фиг. 2) и Т-АЬЬ (Леченые мыши; фиг. 3) у иммунодефицитных мышей-хозяев и препятствует росту новых инокулумов ксенотрансплантатов МТАзанедостаточных Ν8ί.Έί.' или Т-АЬЬ у иммунодефицитных мышей-хозяев по сравнению с лечеными МТАза-компетентными клетками Νδί'Έί.' и нелечеными МТАза-недостаточным и клетками. В частности, стабилизированные МТАзакомпетентные опухоли быстро растут, несмотря на Ь-аланозин, также как и нелеченые МТАФнедостаточные ксенотрансплантаты Ν8ί.Έί.' или Т-АЬЬ.
Пример 2. Защита здоровых МТАзакомпетентных клеток субстратами МТАзы.
Селективную неспособность МТАзанедостаточных клеток Ν8ί.Έί.' пролиферировать в присутствии 40 мкМ Ь-аланозина, несмотря на добавление к каждой культуре субстрата МТАзы метилтиоаденозина (МТА), подтверждают при сравнении двухклеточных линий - МТАзакомпетентной Са1и-6 и МТАза-недостаточной Н292 (фиг. 4). Контрольные культуры, содержащие аденин (1А6е), пролиферируют несмотря на Ь-аланозин, подтверждая, что селективная токсичность обусловлена неспособностью МТАза-недостаточных клеток превращать МТА до аденина.
При дальнейшем сравнении добавление МТА или субстратного аналога МТА 5'дезоксиаденозина приводит к восстановлению роста только МТАза-компетентных клеток А427 и клеток МОЬТ-4, тогда как у МТАзанедостаточных клеток А549 и СЕМ сохраняется ингибирование роста (фиг. 5А и В). Поскольку МТА является ингибитором сперминсинтетазы по типу обратной связи, некоторые клеточные линии, такие как МОЬТ-4, ингибируются при высоких концентрациях. Это приводит к восстановлению кривой двухфазного роста с повышением концентрации МТА (фиг. 5А).
Пример 3. Клонирование и частичная характеризация геномного клона МТАзы.
Геномный клон МТАзы человека выделяют следующим образом. Космидную библиотеку генов, сконструированную из ДНК плаценты человека (С1оШсе11), исследуют с помощью зонда кДНК генов МТАзы, представленного фрагментом Νοΐ Ι/ΕοοΒί из субклона МТАР-7. Трансформированные клетки Е. сой из библиотеки помещают на чашки со средой ЬВ, содержащей ампициллин (50 мг/л) при густоте колоний 1-2 х 104 на чашку размером 135 х 15 мм.
Выполняют следующие процедуры. Из полумиллиона колоний выделяют и частично характеризуют анализом с помощью ПЦР и прямым секвенированием одну положительную колонию, обозначаемую МТАР-10. Два праймера, смысловой олигонуклеотид, расположенный на расстоянии 120 пар оснований слева от стопкодона, и антисмысловой олигонуклеотид, расположенный на расстоянии 20 пар оснований справа от стоп-кодона, синтезируют и используют в анализе с помощью ПЦР. Проводят 25 циклов ПЦР, каждый из циклов состоит из денатурации (92°С, 1 мин), отжига (50°С, 2 мин) и удлинения (72°С, 5 мин). Продукты ПЦР разделяют в 0,8% агарозном геле.
Положение экзонов, идентифицированных в настоящее время в гене МТАзы с использованием вышеописанных способов, представлено на фиг. 1 (подчеркнуто).
Пример 4. Применение обработки олигонуклеотидами, специфичными к последовательности МТАзы, злокачественных клеточных линий для определения присутствия или отсутствия в них МТАзы.
Для оценки возможности применения олигонуклеотидных зондов, выделенных из МТАзы, геномный клон идентифицируют, как описывают в примере 4 (8Е(^ ΙΌ Νο 1), проводят ПЦР ряда клеточных линий рака легкого человека, которые заведомо содержат МТАзакомпетентные (Са1и-6; АТСС Регистрационный Νο НТВ-56) и -недостаточные клетки (А549; АТСС Регистрационный Νο ССЬ-185). Геномную ДНК выделяют, как описано в Примере ΙΙΙ, и для ПЦР используют 1 мкг этой ДНК.
Проводят 40 циклов амплификации, как описано выше, при этом каждый цикл состоит из денатурации (92°С, 1 мин), отжига (55°С, 1 мин) и удлинения (72°С, 1/2 мин). Продукты ПЦР анализируют в 1,5% агарозном геле. В заведомо МТАза-недостаточных клеточных линиях активность МТАзы не обнаруживают, тогда как в МТАза-компетентных клеточных линиях определяют МТАзу.
Пример 5. Ингибирование Ь-аланозином МТАР-недостаточных опухолей после ежедневной инъекции голым мышам со стабилизированными опухолевыми ксенотрансплантатами.
107 клеток Ν8ί.Εί.’ А549 или А427 инъецируют подкожно бестимусным голым мышам Ва1й/с 6-недельного возраста. Когда опухоли достигают диаметра приблизительно 0,4 см, начинают лечение Ь-аланозином или солевым раствором посредством внутрибрюшинной инъекции каждые 12 ч.
Мыши получают 15 мг/кг с каждой инъекцией в течение 7 дней, затем 22,5 мг/кг в течение 5 дней. Размер опухоли измеряют по перпендикулярным диаметрам. Результаты для леченых (п=6 [размер образца] для каждого типа клеток) против контрольных (п=4 [размер образца] для каждого типа клеток), мышей представлены на фиг. 7.
Ни для одного исследованного уровня дозировки не была отмечена токсичность (мыши имели стабильную массу во время тестирования). Ь-аланозин, вводимый инъекцией дважды в день в ударной дозе, вызывает уменьшение размера хорошо стабилизированных МТАзанедостаточных опухолей, но не обладает эффектом в отношении МТАР-положительных клеток.
Краткое описание последовательностей
Последовательность ГО Νο 1 является геномным клоном метилтиоаденозинфосфорилазы (МТАзы).
Claims (5)
Фиг. 4
Фиг. 5 А
Фиг. 1 о 2 4 6 8 10 12 14
О 20 40 60 80 100
1. Способ истощения аденозин 5’монофосфата в метилтиоаденозинфосфорилаза (МТАза)-недостаточных клетках млекопитающего-хозяина, предусматривающий введение млекопитающему-хозяину, заведомо содержащему МТАза-недостаточные клетки, терапевтически эффективного количества А88ингибирующего агента, причем указанный агент ингибирует А88 и тем самым истощает аденозин 5’-монофосфат в МТАза-недостаточных клетках млекопитающего-хозяина.
2. Способ по п.1, отличающийся тем, что установление недостаточности клеток по МТАзе осуществляют следующим образом:
получают пригодный для анализа образец клеток от хозяина, которые предположительно являются МТАза-недостаточными, добавляют к образцу клеток один или более полинуклеотидных зондов, комплементарных нуклеиновой кислоте, кодирующей МТАзу в условиях, которые позволяют зондам гибридизоваться с любой указанной нуклеиновой кислотой, присутствующей в образце клеток, и затем определяют отсутствие кодирующей МТАзу нуклеиновой кислоты в образце клеток по неспособности зондов гибридизоваться с данной нуклеиновой кислотой.
3. Способ по п.1, отличающийся тем, что млекопитающее-хозяин является человеком.
4. Способ по п.1, отличающийся тем, что А88-ингибирующий агент является Еаланозином.
5. Способ по п.1, отличающийся тем, что А88-ингибирующий агент вводят, по меньшей мере, один раз ежедневно или непрерывно вплоть до 14 дней.
6. Способ по п.1, отличающийся тем, что МТАза-недостаточные клетки являются клетками первичной опухоли, выбранными из группы, состоящей из клеток немелкоклеточного рака легкого, клеток острого лимфобластного лейкоза, клеток глиомы и клеток опухоли мочевыводящей системы.
7. Способ по п.1, отличающийся тем, что после введения терапевтически эффективного количества А88-ингибирующего агента хозяину дополнительно вводят субстрат для внутриклеточного образования АМФ.
8. Способ по п.6, отличающийся тем, что МТАза-недостаточные клетки уничтожаются при введении А88-ингибирующего агента.
ССАААЙААТЙ
ТЙАЙЙААЙАА
АТЙЙЙАСТСТ
ТТййТТАТТТ
АТТЙАТЙСЙА
СТЙТАААТТЙ
2700 йТАСАйТАТТ
ТСТЙЙАЙЙЙС
ААТТТйОТАА
ААТЙСАТСАА
ААйАСТТААА
ААТАСййАСй
2760
ТАС
2763
5*-дезоксиаденозин, мкМ
Фиг. 5В
День лечения
Фиг. 2
НАТО АТФ
Фиг. 3
Фиг. 6
День лечения
Фиг. 7
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, ГСП-9 101999, Москва, Центр, М. Черкасский пер., 2/6
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US08/612,542 US5840505A (en) | 1993-12-29 | 1996-03-08 | Method for inhibiting adenylosuccinate synthetase activity in methylthioadenosine phosphorylase deficient cells |
| PCT/US1997/001193 WO1997032994A1 (en) | 1996-03-08 | 1997-01-27 | Method for inhibiting adenylosuccinate synthetase activity methylthioadenosine phosphorylase deficient cells |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| EA199800806A1 EA199800806A1 (ru) | 1999-02-25 |
| EA001988B1 true EA001988B1 (ru) | 2001-10-22 |
Family
ID=24453611
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| EA199800806A EA001988B1 (ru) | 1996-03-08 | 1997-01-27 | СПОСОБ ИСТОЩЕНИЯ АДЕНОЗИН 5'-МОНОФОСФАТА В МЕТИЛТИОАДЕНОЗИНФОСФОРИЛАЗА (МТАза)-НЕДОСТАТОЧНЫХ КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО-ХОЗЯИНА |
Country Status (20)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5840505A (ru) |
| EP (1) | EP0902839B1 (ru) |
| JP (1) | JP2000509247A (ru) |
| KR (1) | KR19990087627A (ru) |
| CN (1) | CN1213406A (ru) |
| AT (1) | ATE357223T1 (ru) |
| AU (1) | AU722813B2 (ru) |
| BR (1) | BR9708002A (ru) |
| CA (1) | CA2244733A1 (ru) |
| CZ (1) | CZ286698A3 (ru) |
| DE (1) | DE69737499D1 (ru) |
| EA (1) | EA001988B1 (ru) |
| HU (1) | HUP9901858A3 (ru) |
| IL (1) | IL126114A0 (ru) |
| NO (1) | NO984124L (ru) |
| NZ (1) | NZ331088A (ru) |
| PL (1) | PL328810A1 (ru) |
| RO (1) | RO118210B1 (ru) |
| UA (1) | UA47465C2 (ru) |
| WO (1) | WO1997032994A1 (ru) |
Families Citing this family (12)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6210917B1 (en) * | 1993-12-29 | 2001-04-03 | The Regents Of The University Of California | Method for suppressing multiple drug resistance in cancer cells |
| US6214571B1 (en) * | 1993-12-29 | 2001-04-10 | The Regents Of The University Of California | Method for inhibiting adenylosuccinate synthetase activity in malignant methylthioadenosine phosphorylase deficient cells |
| US6911309B2 (en) * | 1993-12-29 | 2005-06-28 | The Regents Of The University Of Californnia | Nucleic acids encoding MTAse |
| AU2001297765A1 (en) * | 2000-12-05 | 2002-10-21 | Incyte Genomics, Inc. | Ligases |
| US20040043959A1 (en) * | 2002-03-04 | 2004-03-04 | Bloom Laura A. | Combination therapies for treating methylthioadenosine phosphorylase deficient cells |
| US20040127435A1 (en) * | 2002-08-02 | 2004-07-01 | Regents Of The University Of California | Uses for inhibitors of inosine monophosphate dehydrogenase |
| TW200427463A (en) * | 2003-02-14 | 2004-12-16 | Salmedix | Compositions and methods for the detection and treatment of methylthioadenosine phosphorylase deficient cancers |
| US20060041013A1 (en) * | 2004-08-18 | 2006-02-23 | Brittain Jason E | Alanosine formulations and methods of use |
| US20090030005A1 (en) * | 2007-07-19 | 2009-01-29 | Amgen Inc. | Combinations for the treatment of cancer |
| CA3045752A1 (en) * | 2016-12-01 | 2018-06-07 | Glaxosmithkline Intellectual Property Development Limited | Methods of treating cancer |
| JP7016958B2 (ja) * | 2017-12-21 | 2022-02-07 | ボード オブ リージェンツ，ザ ユニバーシティ オブ テキサス システム | アデノシンおよび／またはメチルチオアデノシンの酵素媒介枯渇方法 |
| CN110124038A (zh) * | 2019-05-08 | 2019-08-16 | 山东大学齐鲁医院 | 腺苷酸琥珀酸合成酶基因和/或其编码的蛋白的新应用 |
Family Cites Families (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4792520A (en) * | 1984-02-16 | 1988-12-20 | University Of Cincinnati | Methods and kits for identifying mutagenic agents and molecular mutations in DNA in mammalian cells |
| US4822736A (en) * | 1984-07-05 | 1989-04-18 | Baylor College Of Medicine | Amplification of adenosine deaminase genes in mammalian cells using adenosine, alanosine, uridine, and deoxycoformycin |
| US5030623A (en) * | 1986-03-27 | 1991-07-09 | The Regents Of The University Of California | Methods for increasing extracellular adenosine and for stabilizing mast cells |
| US5118601A (en) * | 1986-03-27 | 1992-06-02 | The Regents Of The University Of California | Method of screening purine nucleoside compounds or analogs for the ability to enhance the cellular synthesis and release of adenosine |
| PT733123E (pt) * | 1993-12-29 | 2002-09-30 | Univ California | Metodo para a deteccao de uma deficiencia em metiltioadenosina-fosforilase em celulas de mamifero |
-
1996
- 1996-03-08 US US08/612,542 patent/US5840505A/en not_active Expired - Fee Related
-
1997
- 1997-01-27 CZ CZ982866A patent/CZ286698A3/cs unknown
- 1997-01-27 NZ NZ331088A patent/NZ331088A/xx unknown
- 1997-01-27 CN CN97192895A patent/CN1213406A/zh active Pending
- 1997-01-27 IL IL12611497A patent/IL126114A0/xx unknown
- 1997-01-27 WO PCT/US1997/001193 patent/WO1997032994A1/en active IP Right Grant
- 1997-01-27 KR KR1019980707079A patent/KR19990087627A/ko not_active Application Discontinuation
- 1997-01-27 EP EP97903962A patent/EP0902839B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-27 CA CA002244733A patent/CA2244733A1/en not_active Abandoned
- 1997-01-27 PL PL97328810A patent/PL328810A1/xx unknown
- 1997-01-27 EA EA199800806A patent/EA001988B1/ru not_active IP Right Cessation
- 1997-01-27 HU HU9901858A patent/HUP9901858A3/hu unknown
- 1997-01-27 AU AU18388/97A patent/AU722813B2/en not_active Ceased
- 1997-01-27 RO RO98-01362A patent/RO118210B1/ro unknown
- 1997-01-27 JP JP9531750A patent/JP2000509247A/ja not_active Ceased
- 1997-01-27 DE DE69737499T patent/DE69737499D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1997-01-27 UA UA98105274A patent/UA47465C2/ru unknown
- 1997-01-27 BR BR9708002A patent/BR9708002A/pt not_active Application Discontinuation
- 1997-01-27 AT AT97903962T patent/ATE357223T1/de not_active IP Right Cessation
-
1998
- 1998-09-07 NO NO984124A patent/NO984124L/no not_active Application Discontinuation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0902839A1 (en) | 1999-03-24 |
| US5840505A (en) | 1998-11-24 |
| HUP9901858A3 (en) | 1999-12-28 |
| NZ331088A (en) | 2000-08-25 |
| CA2244733A1 (en) | 1997-09-12 |
| JP2000509247A (ja) | 2000-07-25 |
| EP0902839B1 (en) | 2007-03-21 |
| WO1997032994A1 (en) | 1997-09-12 |
| IL126114A0 (en) | 1999-05-09 |
| RO118210B1 (ro) | 2003-03-28 |
| NO984124D0 (no) | 1998-09-07 |
| KR19990087627A (ko) | 1999-12-27 |
| HUP9901858A2 (hu) | 1999-09-28 |
| CZ286698A3 (cs) | 1999-03-17 |
| EP0902839A4 (en) | 2004-06-30 |
| AU722813B2 (en) | 2000-08-10 |
| EA199800806A1 (ru) | 1999-02-25 |
| UA47465C2 (ru) | 2002-07-15 |
| BR9708002A (pt) | 1999-07-27 |
| CN1213406A (zh) | 1999-04-07 |
| PL328810A1 (en) | 1999-02-15 |
| AU1838897A (en) | 1997-09-22 |
| NO984124L (no) | 1998-09-07 |
| DE69737499D1 (de) | 2007-05-03 |
| ATE357223T1 (de) | 2007-04-15 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| AU2016270321B2 (en) | Compositions and methods for treating patients with RTK mutant cells | |
| AU736937B2 (en) | Method for suppressing multiple drug resistance in cancer cells | |
| BR112013005806B1 (pt) | Métodos para detectar se um indivíduo é um candidato para o tratamento com ou responsivo a um inibidor de ezh2 e usos terapêuticos do dito inibidor de ezh2 | |
| US11685954B2 (en) | Biomarkers predictive of endocrine resistance in breast cancer | |
| EA001988B1 (ru) | СПОСОБ ИСТОЩЕНИЯ АДЕНОЗИН 5'-МОНОФОСФАТА В МЕТИЛТИОАДЕНОЗИНФОСФОРИЛАЗА (МТАза)-НЕДОСТАТОЧНЫХ КЛЕТКАХ МЛЕКОПИТАЮЩЕГО-ХОЗЯИНА | |
| TW202039862A (zh) | 受體酪氨酸激酶(kit)基因突變 | |
| KR20220061190A (ko) | Atp-기반 세포 분류 및 과증식성 암 줄기 세포 | |
| Liu et al. | EGR1-mediated metabolic reprogramming to oxidative phosphorylation contributes to ibrutinib resistance in B-cell lymphoma | |
| US20140315973A1 (en) | Parp-1 inhibitors | |
| US6214571B1 (en) | Method for inhibiting adenylosuccinate synthetase activity in malignant methylthioadenosine phosphorylase deficient cells | |
| WO2022244807A1 (ja) | Ｌｔｋ融合遺伝子 | |
| US20210324478A1 (en) | Compositions and methods for identification assessment, prevention, and treatment of ewing sarcoma using tp53 dependency biomarkers and modulators | |
| KR20180129585A (ko) | Mage-1에 특이적으로 결합하는 압타머 및 이의 용도 | |
| Oh et al. | Preclinical development of oncology drugs | |
| US20250049823A1 (en) | Mitochondrial atp inhibitors targeting the gamma subunit prevent metastasis | |
| US20220184029A1 (en) | Compositions and methods for treating neuroblastoma | |
| US20240091247A1 (en) | Inhibitor for chronic myeloid leukemia stem cells | |
| Ivanov et al. | Use of Anti-EGFR Aptamer Construct GR20hh for Controlled Delivery of Doxorubicin into Patient-Derived Glioblastoma Cells | |
| US10254283B2 (en) | Biomarker for MELK activity and methods of using same | |
| KR20230001587A (ko) | 암의 예방 또는 치료용 약학 조성물 | |
| WO2011089197A1 (en) | Low levels of cytidine deaminase as a marker for predisposition to develop cancer | |
| WO2004112730A2 (en) | Method and compositions for treating tumors |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Lapse of a eurasian patent due to non-payment of renewal fees within the time limit in the following designated state(s) |
Designated state(s): AM AZ BY KZ KG MD TJ TM RU |