DK171308B1 - Stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulocytkolonistimulerende faktor og fremgangsmåde til fremstilling af dette - Google Patents
Stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulocytkolonistimulerende faktor og fremgangsmåde til fremstilling af dette Download PDFInfo
- Publication number
- DK171308B1 DK171308B1 DK368387A DK368387A DK171308B1 DK 171308 B1 DK171308 B1 DK 171308B1 DK 368387 A DK368387 A DK 368387A DK 368387 A DK368387 A DK 368387A DK 171308 B1 DK171308 B1 DK 171308B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- leu
- gin
- ala
- ser
- pro
- Prior art date
Links
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/32—Macromolecular compounds obtained by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. carbomers, poly(meth)acrylates, or polyvinyl pyrrolidone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/08—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing oxygen, e.g. ethers, acetals, ketones, quinones, aldehydes, peroxides
- A61K47/10—Alcohols; Phenols; Salts thereof, e.g. glycerol; Polyethylene glycols [PEG]; Poloxamers; PEG/POE alkyl ethers
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
- A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
- A61K47/183—Amino acids, e.g. glycine, EDTA or aspartame
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/20—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing sulfur, e.g. dimethyl sulfoxide [DMSO], docusate, sodium lauryl sulfate or aminosulfonic acids
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
- A61K47/26—Carbohydrates, e.g. sugar alcohols, amino sugars, nucleic acids, mono-, di- or oligo-saccharides; Derivatives thereof, e.g. polysorbates, sorbitan fatty acid esters or glycyrrhizin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
- A61K47/38—Cellulose; Derivatives thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
- A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
- A61K47/42—Proteins; Polypeptides; Degradation products thereof; Derivatives thereof, e.g. albumin, gelatin or zein
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K9/00—Medicinal preparations characterised by special physical form
- A61K9/14—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles
- A61K9/19—Particulate form, e.g. powders, Processes for size reducing of pure drugs or the resulting products, Pure drug nanoparticles lyophilised, i.e. freeze-dried, solutions or dispersions
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Inorganic Chemistry (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Medicinal Preparation (AREA)
Description
DK 171308 B1
Opfindelsen angår et stabilt farmaceutisk præparat indeholdende en granulocytkolonistimulerende faktor og især et stabiliseret farmaceutisk præparat indeholdende en granulocytkolonistimulerende faktor, 5 der er beskyttet mod tab eller inaktivering af den aktive komponent (dvs. den granulocytkolonistimulerende faktor) pga. absorption på væggen af beholderen, hvori præparatet findes eller pga. association, polymerisation eller oxidation af denne komponent. Desuden angår 10 opfindelsen en fremgangsmåde til fremstilling af et sådant præparat.
Kemoterapi udføres som en metode til behandling af en mangfoldighed af infektionssygdomme, men det har fornylig vist sig, at kemoterapi giver nogle alvorlige 15 kliniske problemer, såsom udvikling af medikamentresistente organismer, ændring af de sygdomsfremkaldende organismer og store bivirkninger. Til undgåelse af disse problemer forbundet med kemoterapi, der involverer anvendelse af terapeutiske midler, såsom antibiotika og 20 baktericider, gøres der forsøg på at anvende et materiale, der aktiverer den profylaktiske evne hos værten for en infektionsfremkaldende organisme, og derved tilvejebringe en fuldstændig løsning på de ovennævnte problemer ved kemoterapi. Af værtens forskellige profylak-25 tiske egenskaber formodes leukocyternes fagocytiske baktericide virkning at have den største indflydelse under den indledende periode af en bakteriel infektion, og den antages derfor at være vigtig til forstærkning af værtens infektionsbeskyttende evner ved at 30 fremme væksten af neutrofiler og deres differentiering til det modne stadium. En granulocytkolonistimulerende faktor (G-CSF) er et af de meget nyttige materialer, der udviser sådanne virkninger, og den samme ansøger som for den foreliggende opfindelse indleverede tidli-35 gere en patentansøgning på et infektionsbeskyttende middel med anvendelse af G-CSF (Japansk Patentansøgning 2 DK 171308 B1 nr. 23777/1985).
Som nævnt i det foregående involverer kemoterapi/ som det idag praktiseres, forskellige uundgåelige problemer, og der har været gjort intensive forsøg på 5 at anvende et medikament, der kan aktivere de profylaktiske funktioner hos værten eller hos den person, som er inficeret.
Det er unødvendigt at sige, at G-CSP i sig selv udviser evne til at aktive værtens profylaktiske funk-10 tioner, og det har også vist sig, at G-CSF udviser større terapeutiske virkninger ved kliniske anvendelser, hvis det anvendes i kombination med et materiale, der aktiverer værtens profylaktiske evner.
G-CSF anvendes i en meget lille mængde, og et 15 farmaceutisk præparat indeholdende 0,1-500 pg (fortrinsvis 5-50 pg) G-CSF administreres sædvanligvis med en doseringsrate på 1-7 gange pr. uge til en voksen person. G-CSF har imidlertid tendens til at blive adsorberet på væggen af beholderen, hvori det 20 findes, såsom en ampul til injektion eller en sprøjte. Hvis medikamentet anvendes som et injektionspræparat i form af en vandig opløsning, vil det derfor blive adsorberet på væggen af beholderen, hvori det findes, såsom en ampul eller sprøjte. Dette resulterer enten i at 25 G-CSF'et ikke udviser dets fulde aktivitet som farmaceutisk middel eller nødvendiggør inkorporering af G-CSF i en mængde, der er større end den nødvendige, for at tage hensyn til det mulige tab pga adsorbtion.
Desuden er G-CSF labilt og stærkt følsomt over 30 for miljøfaktorer, såsom temperatur, fugtighed, oxygen og ultraviolette stråler. Ved indvirkning af sådanne faktorer undergår G-CSF fysiske eller kemiske ændringer, såsom association, polymerisation og oxidation, og den lider et stort tab af aktivitet. Disse fænomener 35 gør det vanskeligt at sikre fuldstændig opnåelse af en terapeutisk virkning ved administrering af en meget 3 DK 171308 B1 lille mængde G-CSF på en meget præcis måde.
Derfor er det nødvendigt at udvikle et stabilt, farmaceutisk præparat af G-CSF, der er fuldstændigt beskyttet mod et fald i dets virksomme komponents 5 aktivitet. Dette er hovedformålet med den foreliggende opfindelse, ifølge hvilken der tilvejebringes et stabilt farmaceutisk præparat af G-CSF samt en fremgangsmåde til fremstilling af et sådant præparat.
Opfinderne har udført intensive undersøgelser 10 med henblik på forøgelse af stabiliteten for G-CSF-holdige farmaceutiske præparater og fundet, at dette effektivt kan opnåes ved tilsætning af visse nærmere definerede farmaceutisk acceptable overfladeaktive midler, saccharider, proteiner eller forbindelser med høj 15 molekylevægt.
Opfindelsen angår således et stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulocytkolonistimulerende faktor, hvilket præparat er ejendommeligt ved, at den granulocytkolonistimulerende faktor er humant G-CSF med 20 de følgende fysisk-kemiske egenskaber: i) molekylvægt: ca. 19.000 ± 1.000 målt ved elektroforese gennem en natrium-dodecylsulfat - polyacrylamid-gel, 25 ii) isoelektrisk punkt: med mindst ét af de tre isoelektriske punkter, pi = 5,5 ± 0,1, pi = 5,8 ± 0,1 og pi 6,1 ± 0,1, iii) ultraviolet absorption: med en maksimal ab- 30 sorption ved 280 nm og en mi nimal absorption ved 250 nm, iv) aminosyresekvens for de 21 rester fra N-ter minus : H2N-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-Ser-Ser-Leu-Pro-Gln-Ser-35 Phe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-
Gln-Val-, 4 DK 171308 B1 og at præparatet foruden den granulocytkolonistimule-rende faktor, der er den virksomme bestanddel, indeholder mindst ét materiale valgt blandt farmaceutisk acceptable overfladeaktive midler valgt blandt ikke-5 ioniske, anioniske og naturlige overfladeaktive midler, hvor det ikke-ioniske overfladeaktive middel kan være en ester af sorbitan, en polyoxyethylensorbitan eller en polyethylenglycol med en alifatisk syre, en polyoxy-ethylenpolyoxypropylenalkylether eller en polyoxyethy-10 leret hærdet castorolie, det anioniske, overfladeaktive middel kan være et alkylsulfatsalt og det naturlige overfladeaktive middel, kan være lecithin, saccharider valgt blandt glycerol, xylitol, sorbitol, mannitol, glucuronsyre, neuraminsyre, ketoglycolsyre, hyaluronsy-15 re og salte deraf, heparin, chitin og derivater deraf, chitosan og derivater deraf, dextrin, dextran med en middelmolekylvægt på 5.000-150.000, og alginsyre og salte deraf, proteiner valgt blandt humant serumalbumin, humant serumglobulin, gelatine, syre- eller base-20 behandlet gelatine med en middelmolekylvægt på 7.000- 100.000, og collagen og forbindelser med høj molekylvægt valgt blandt hydroxypropylcellulose, hydroxyme-thylcellulose, natriumcarboxymethylcellulose, hydroxy-ethylcellulose, polyethylenglycol med en molekylvægt på 25 300-6.000, polyvinylalkohol med en molekylvægt på 20.000-100.000 og polyvinylpyrrolidon med en molekylvægt på20.000-100.000.
I en særlig udformning angår opfindelsen et stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulocytkolo-30 nistimulerende faktor, hvilket præparat er ejendommeligt ved, at den granulocytkolonistimulerende faktor indeholder enten et polypeptid, der har human granulo-cytstimulerende faktoraktivitet og er repræsenteret ved hele eller en del af aminosyresekvensen vist nedenfor, 35 eller et glycoprotein med både dette polypeptid og en sukkerkædedel: 5 DK 171308 B1 (Ket)nThr Pro Leu Gly Fro Ala Ser Ser Leu Pro
Gin Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gin Val
Arg Lys Ile Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin 5
Glu Lys Leu (Val Ser Glu)nCys Ala Thr Tyr Lys
Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly
Bis Ser Leu Gly Ile Pro Trp Ala Pro Leu Ser
Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly 10
Cys Leu Ser Gin Leu Bis Ser Gly Leu Phe Leu
Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Ile
Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu
Gin Leu Asp Val Ala As? Phe Ala Thr Thr Ile 15 Trp Gin Gin Het Glu Glu Leu Gly Het Ala Pro
Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Het Pro Ala
Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly , Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu 20 i Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala
Gin Pro (forudsat, at m er 0 eller 1, og n er 0 eller 1) og mindst et materiale valgt blandt farmaceutisk accep-25 table overfladeaktive midler, saccharider, proteiner og forbindelser med høj molekylvægt, som anført i et eller flere af kravene 1-5.
Pra GB-A 2 016 477 er det kendt at anvende albumin til stabilisering af et HGI (human granulocytindu-30 cerende) glycoprotein under oprensningen af dette.
EP-A-0 162 332 viser i eksemplerne, at y-inter-feron (iFN-y) kan stabiliseres ved anvendelse af en modificeret gelatine.
EP-A-0 178 576 beskriver en fremgangsmåde til at 35 hindre erythropoietin (EPO) i at blive adsorberet på den indvendige overflade af en beholdervæg. Der er in- 6 DK 171308 B1 gen beskrivelse af stabilisering af en aktiv substans.
I alle tre tilfælde er der tale om substanser, der afviger fra G-CSF, der stabiliseres ifølge opfindelsen, på så væsentlige punkter som f.eks. molekyl-5 vægt, polysaccharidindhold, aminosyresammensætning, herunder tilstedeværelse af frie SH-grupper, renhed og lignende, at det G-CSF-holdige stabliserede præparat ifølge opfindelsen ikke kan anses for nærliggende for en fagmand på baggrund af denne kendte teknik.
10 G-CSF'en til inkorporering i det farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen kan opnåes ved en vilkårlig fremgangsmåde, som f.eks. dem der er beskrevet i beskrivelsen til de japanske patentansøgninger nr. 153273/1984, 269455/1985, 269456/1985 (de to sidstnævn-15 te jfr. dansk patentansøgning nr. 4432/86), 270838/1985 og 270839/1985. En human G-CSF kan f.eks. fremstilles enten ved dyrkning af en cellestamme (CNCM Accessions nr. 1-315 eller 1-483) opsamlet fra tumorceller fra patienter med mundhulecancer eller ved eksprime-20 ring af et rekombinant DNA (som var fremstillet ud fra et humant G-CSF-kodende gen) i en passende værtscelle (f.eks. E.coli, C 127-celler eller ovarieceller fra en kinesisk hamster).
En hvilken som helst G-CSF med de ovenfor anfør-25 te karakteristika, der er oprenset til en høj grad af renhed, kan anvendes som G-CSF til inkorporering i det farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen. Foretrukne humane G-CSF'er er dem der opnås ved isolation fra su-pernatanten fra en kultur af en human G-CSF-dannende 30 celle, og polypeptider eller glycoproteiner med human G-CSF-aktivitet, der opnås ved transformation af en vært med en rekombinant vector, hvori der er inkorope-reret et gen, der koder for et polypeptid med human G-CSF-aktivitet.
35 For detaljer vedrørende fremgangsmåden til frem stilling af ovennævnte to typer G-CSF, se beskrivelser- 7 DK 171308 B1 ne til Japansk patentansøgning nr. 153273/1984, 269455/1985, 269456/1985, 270838/1985 og 270839/1985, der alle er indleveret af ansøgeren til den foreliggende ansøgning.
5 En anden fremgangsmåde, der kan anvendes, består i udførelse af fusion af en G-CSP-dannende celle med en selvprolifererende malign tumorcelle og dyrkning af den resulterende hybridoma i eller uden tilstedeværelse af mytogen.
10 Den opnåede opløsning indeholdende humant G-CSF
kan opbevares i frossen tilstand efter udførelse af yderligere rensning og koncentrering efter behov ved en vilkårlig kendt metode. Alternativt kan opløsningen opbevares efter dehydratisering ved metoder, såsom fryse-15 tørring.
Alle de således fremstillede humane G-CSF'er kan oparbejdes i henhold til den foreliggende opfindelse til opnåelse af stabile G-CSF-holdige farmaceutiske præparater.
20
Typiske eksempler på det overfladeaktive middel, der anvendes til opnåelse af det stabile G-CSF-holdige farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen er opremset i det følgende: ikke-ioniske overfladeaktive 25 midler med HLB på 6-18, såsom estere af sorbitan og alifatiske syrer (f.eks. sorbitanmonocaprylat, sorbi-tanmonolaurat og sorbitanmonopalmitat), estere af glycerol og alifatiske syrer (f.eks. glycerolmonoca-prylat, glycerolmonomyristat og glycerolmonostearat), 30 estere af polyglycerol og alifatiske syrer (f.eks. de-caglycerylmonostearat, decaglyceryldistearat og deca-glycerylmonolinoleat), polyoxyethylen-sorbitanestere af alifatiske syrer (f.eks. polyoxyethylen-sorbitanmono-laurat, polyoxyethylen-sorbitanmonooleat, polyoxyethy-35 len-sorbitanmonostearat, polyoxyethylensorbitanmonopal-mitat, polyoxyethylen-sorbitantrioleat, og polyoxyethy- 8 DK 171308 B1 len-sorbitantristearat), polyoxyethylen-sorbitolestere af alifatiske syrer (f.eks. polyoxyethylen-sorbitolte-trastearat og polyoxyethylen-sorbitoltetraoleat), po-lyethylenglycerolestere af alifatiske syrer (f.eks. po-5 lyoxyethylenglycerylmonostearat), polyethylenglycole-stere af alifatiske syrer (f.eks. polyethylenglycoldi-stearat), polyoxyethylenalkylethere (f.eks. polyoxy-ethylenlaurylether), polyoxyethylen-polyoxypropylenal-kylethere (f.eks. polyoxyethylen-polyoxypropylenglycol-10 ether, polyoxyethylen-polyoxypropylenpropylether og po-lyoxyethylen-polyoxypropylencetylether), polyoxyethyle-nalkylphenylethere (f.eks. polyoxyethylennonylphenyl-ether), polyoxyethyleret castorolie, polyoxyethyleret hærdet castorolie (polyoxyethyleret, hydrogeneret ca-15 storolie), polyoxyethylerede bivoksderivater (f.eks. polyoxyethyleret sorbitolbivoks), polyoxyethylenlano-linderivater (f.eks. polyoxyethylenlanolin), og polyo-xyethylen(alifatisk syre)amider, (f.eks. polyethylen-stearinsyreamid); ikke-ioniske overfladeaktive mid-20 ler, såsom alkylsvovlsyresalte med en C10_18 alkyl-gruppe (f.eks. natriumcetylsulfat, natriumlaurylsulfat og natriumoleylsulfat), polyoxyethylenalkylether-svovlsyresalte, hvori middelmoltallet for ethylenoxid--addition er 2-4, og alkylgruppen har 10-18 carbonato-25 mer (f.eks. polyoxyethylennatriumlaurylsulfat), salte af alkylsulfosuccinatestere, hvori alkylgruppen har 8-18 carbonatomer (f.eks. natriumlaurylsulfosuccinat-estere); og naturlige overfladeaktive midler, såsom lecithin, glycerophospholipider, sphingophospholipid 30 (f.eks. sphingomyelin), og sucroseestere af alifatiske syrer, hvori den alifatiske syre indeholder 12-18 carbonatomer. Disse overfladeaktive midler kan selvfølgelig anvendes enten enkeltvis eller i blanding.
De overfladeaktive midler opremset ovenfor an-35 vendes fortrinsvis i mængder på 1-10.000 vægtdele pr. vægtdel G-CSF.
9 DK 171308 B1
Saccharidet til anvendelse ved fremstilling af det stabile G-CSF-holdige farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen kan vælges blandt monosaccharider, oligo-saccharider og polysaccharider og phosphatestere og nu-5 cleotidderivater deraf, for så vidt de er farmaceutisk acceptable. Typiske eksempler er opremset i det følgende : trivalente og højere sukkeralkoholer, såsom glycerol, erythritol, arabitol, xylitol, sorbitol, og mannitol; sukkersyrer, såsom glucuronsyre, iduronsyre, neu-10 raminsyre, galacturonsyre, gluconsyre, mannuronsyre, ketoglycolsyre, ketogalactonsyre og ketogulonsyre; hya-luronsyre og salte deraf, chondroitinsulfat og salte deraf, heparin, inulin, chitin og derivater deraf, chi-tosan og derivater deraf, dextrin, dextran med en mid-15 delmolekylvægt på 5.000-150.000, og alginsyre og salte deraf. Alle disse saccharider kan anvendes med fordel enten enkeltvis eller i blanding.
De ovenfor opremsede saccharider anvendes fortrinsvis i mængder på 1-10.000 vægtdele pr. vægtdel G-CSF. 20 Typiske eksempler på proteinet, der kan anvendes til fremstilling af det stabile G-CSF-holdige farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen, omfatter humant serumalbumin, humant serumglobulin, gelatine, syrebehandlet gelatine (middelmolvægt 7.000-100.000), basebe-25 handlet gelatine (middelmolvægt 7.000-100.000), og collagen. Disse proteiner kan selvfølgelig anvendes enten enkeltvis eller i blanding.
Proteinerne opremset ovenfor anvendes fortrinsvis i mængder på 1-20.000 vægtdele pr. vægtdel G-CSF.
30 Typiske eksempler på forbindelser med høj mole kylvægt til anvendelse ved fremstilling af det stabile G-CSF-holdige farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen omfatter: naturlige polymerer, såsom hydroxypropylcel-lulose, hydroxymethylcellulose, natriumcarboxymethyl-35 cellulose og hydroxyethylcellulose; og syntetiske polymerer, såsom polyethylenglycol (molvægt = 300-6.000), 10 DK 171308 B1 polyvinylalkohol (molvægt = 20.000-100.000), og poly-vinylpyrrolidion (molvægt = 20.000-100.000). Det er klart, at disse forbindelser med høj molekylvægt kan anvendes enten enkeltvis eller i blandig.
5 Forbindelserne med høj molekylvægt opremset ovenfor anvendes hensigtmæssigt i mængder på 1-20.000 vægtdele pr. vægtdel G-CSF.
Foruden det overfladeaktive middel, saccharidet, proteinet eller forbindelsen med høj molekylvægt beskre-10 vet ovenfor kan mindst en komponent valgt blandt aminosyrer, svovlholdige reduktionsmidler og antioxidanter også inkoporeres ved fremstilling af det G-CSF-holdige farmaceutiske præparat ifølge opfindelsen. Eksempler på aminosyrer omfatter glycin, threonin, tryptofan, lysin, 15 hydroxylysin, histidin, arginin, cystein, cystin og methionin. Eksempler på svovlholdige reduktionsmidler omfatter: N-acetylcystein, N-acetylhomocystein, thioc-tinsyre, thiodiglycol, thioethanolamin, thioglycerol, thiosorbitol, thioglycolsyre og salte deraf, natrium-20 thiosulfat, natriumhydrogensulfit, natriumpyrosulfit, natriumsulfit, thiomælkesyre, dithiothreitol, gluta-thion og et mildt svovlholdigt reduktionsmiddel med en sulfhydrylgruppe, såsom en C^y-thioalkansyre. Eksempler på antioxidanter omfatter erythorbinsyre 25 (isoascorbinsyre), dibutylhydroxytoluen, butylhydroxya-nisol, dl-a-tocopherol, tocopherolacetat, L-ascorbin-syre og salte deraf, L-ascorbinsyrepalmitat, L-ascorbinsyrestearat, triamylgallat, propylgallat og chelateringsmidler, såsom dinatriumethylendiamintetra-30 cetat (EDTA), natriumpyrophosphat og natriummetaphos-phat.
De ovenfor opremsede aminosyrer, svovlholdige reduktionsmidler og antioxidanter eller blandinger deraf anvendes fortrinsvis i mængder på 1-10.000 vægtdele 35 pr. vægtdel G-CSF.
Med henblik på formulering af det stabile G-CSF- 11 DK 171308 B1 holdige præparat ifølge opfindelsen i en passende dosisform, kan et eller flere af de følgende midler inkorporeres: et fortyndingsmiddel, et solubiliserings-hjælpestof, et isotonisk middel, en excipient, et pH-5 modificerende middel, et beroligende middel og en puffer.
Det stabiliserede, farmaceutiske G-CSF-præparat ifølge opfindelsen kan formuleres enten til oral eller parenteral administrering, som f.eks. ved injektion på 10 forskellige måder, og en mangfoldighed af dosisformer kan anvendes afhængigt af den specifikke administreringsmetode. Typiske dosisformer omfatter: dem der er beregnet til oral administrering, såsom tabletter, piller, kapsler, granulatpræparater og suspen-15 sionspræparater; opløsninger, suspensionspræparater og frysetørrede præparater, primært beregnet til intravenøs injektion, intramuskulær injektion, subcutan injektion eller intracutan injektion, og de former, der er beregnet til trasmucosal administrering, såsom rectal-20 suppositorier, nasale medikamenter og vaginialsupposi-torler.
Ifølge den foreliggende opfindelse sættes mindst et materiale valgt fra den angivne gruppe bestående af overfladeaktive midler, saccharider, proteiner og for-25 bindeiser med høj molekylvægte til et G-CSF-holdigt farmaceutisk præparat, således at det hindres i at blive adsorberet på væggen af beholderen eller sprøjten, hvori det befinder sig, idet det samtidig forbliver stabilt over langt tid.
30 Den detaljerede mekanisme, ved hvilken materia lerne nævnt i det foregående stabiliserer G-CSF eller hindrer det i at blive adsorberet, er endnu ikke afklaret. I tilstedeværelse af et overfladeaktivt middel, vil overfladen af G-CSF, som er et hydrofobt pro-35 tein, blive dækket med det overfladeaktive middel, der bliver solubiliseret, således at G-CSF'et, det er til 12 DK 171308 B1 stede i spormængder, effektivt hindres i at blive ad-sorberet på væggen af beholderen eller sprøjten, hvori det befinder sig. Et saccharid eller en hydrofil forbindelse med høj molekylvægt vil danne et hydratiseret 5 lag mellem G-CSF og den adsoberende overflade af væggen af beholderen eller sprøjten og derved effektivt hindre adsorption af G-CSF. Et protein vil konkurrere med G-CSF om adsorption på væggen af beholderen eller sprøjten og derved effektivt hindre adsorption af G-10 CSF.
Foruden forebyggelsen af G-CSF-adsorption, vil materialerne omtalt i det foregående også bidrage til forebyggelse af association eller polymerisation af G-CSF-molekylerne. I tilstedeværelse af et overfladeak-15 tivt middel, saccharid, protein eller en forbindelse med høj molekylvægt, spredes de enkelte G-CSF-molekyler i disse materialer, og interaktionen mellem G-CSF-molekylerne reduceres tilstrækkeligt til fremkaldelse af en væsentlig formindskelse af sandsynligheden for 20 association eller polymerisation af disse molekyler. Desuden vil disse materialer forsinke autooxidation af G-CSF, der accelereres ved høj temperatur eller fugtighed, eller hindre G-CSF i at blive associeret eller po-lymeriseret som et resultat af dets autoxidation. Disse 25 virkninger med forsinkelse af autoxidation af G-CSF eller hindring af G-CSF i association eller polymerisation vil blive forstærket yderligere ved tilsætning af en aminosyre, et svovlholdigt reduktionsmiddel eller en antioxidant.
30 Problemerne beskrevet i det foregående træder særligt frem i opløsninger til injektion og i suspensioner, men de forekommer også under processen til formulering af G-CSF i andre dosisformer, såsom tabletter. Tilsætningen af overfladeaktive midler, saccharider, 35 proteiner eller forbindelser med høj molekylvægt er også virksom i det sidste tilfælde.
13 DK 171308 B1
Som det vil blive vist i eksemplerne, der følger, stabiliseres G-CSF i høj grad og dets aktivitet bevares i lang tid ved tilsætningen af mindst ét materiale valgt blandt overfladeaktive midler, saccharider, 5 proteiner og forbindelser med høj molekylvægt. Til opnåelse af disse resultater er mængden af hver af disse materialer, især de nedre grænser, afgørende, og de følgende mængdeområder er ønskelige: 1-10.000 vægtdele overfladeaktivt middel, 1-10.000 vægtdele saccharid, 10 1-20.000 vægtdele protein og 1-20.000 vægtdele forbindelse med højmolekylvægt pr. 1 vægtdel G-CSF.
Ifølge den foreliggende opfindelse anvendes et overfladeaktivt middel, et saccharid, et protein og/eller en forbindelse med høj molekylvægt i en speci-15 ficeret koncentration, og dette er ikke kun effektivt til hindring af G-CSF i at blive adsorberet på væggen af beholderen eller sprøjten, hvori den befinder sig, men også til forbedring af stabiliteten af et G-CSF-holdigt farmaceutisk præparat. Som et resultat heraf 20 bliver det muligt at sikre administrering af en lille, men meget præcis dosis af G-CSF til patienter. Idet G-CSF er dyrt, vil dets effektive udnyttelse føre til lavere omkostninger ved fremstilling af G-CSF-holdige farmaceutiske præparater.
25 De følgende eksempler gives med henblik på nær mere belysning af opfindelsen og må på ingen måde opfattes som begrænsende. I disse eksempler bestemtes restaktiviteten af G-CSF ved en af de følgende metoder.
30 (a) Blød agarmetoden med anvendelse af museknoglemarvs-celler: 0,4 ml hesteserum, 0,1 ml af prøven, 0,1 ml 35 C3H/He (hun)museknoglemarvscellesuspension (0,5- 1 x 105 nuclearceller), og 0,4 ml af en modificeret McCoy's 14 DK 171308 B1 5A-kulturopløsning indeholdende 0,75% agar blandedes, hældtes i en plastskål til vævsdyrkning (35 mm i diameter) , koaguleredes og dyrkedes i 5 dage ved 37 °C i 5% C02/95% luft ved 100% fugtighed. Antallet af dannede 5 kolonier taltes (en koloni bestående af mindst 50 celler) og aktiviteten bestemtes med en enhed som aktiviteten til dannelse af en koloni.
Den modificerede McCoy's 5A-kulturopløsning anvendt ved metoden (a) fremstilledes ved den følgende 10 fremgangsmåde.
Modificeret McCoy's 5A-kulturopløsning (dobbelt koncentration).
15 12 g af McCoy's 5A kulturopløsning (Gibco), 2,55 g MEM-aminosyre-vitaminmedium (Nissui Seiyaku Co., Ltd.), 2,18 g natriumhydrogencarbonat og 50.000 enheder kaliumpenicillin G opløstes 2 gange i 500 ml destilleret vand, og opløsningen filtreredes aseptisk gennem et 20 0,22 ym Milliporefilter.
(b) Revers fase HPLC:
Restaktiviteten af G-CSP (injiceret i en mængde 25 svarende til lyg) bestemtes ved anvendelse af en revers fase C8-kolonne (4,6 mm x 300 mm; 5 ym) og en n-propanol/trifluoreddikesyreblanding som mobil fase under de følgende gradientbetingelser; 1 2 3 4 5 6
Tid (sek.) Opløsn.middel(A) Opløsn♦middel(B) Gradient 2 0 100% 0% 3 lineær 4 15 0% 100% 5 lineær 6 25 100% 0% 15 DK 171308 B1
Opløsningsmiddel (A): 30% n-propanol og 0,1 tri- fluoreddikesyre,
Opløsningsmiddel (B): 60% n-propanol og 0,1% tri- fluoreddikesyre.
5 Detektion udførtes ved en bølgelængde på 210 nm, og den procentvise rest-G-CSF-aktivitet beregnes ved hjælp af den følgende formel:
Rest-G-CSF- restmængden af G-CSF efter 10 aktivitet (%) = et givet tidsrum_ x 100
startmængden af G-CSF
Restmængden af G-CSF bestemt ved denne fremgangsmåde svarerede meget godt til resultaterne opnået 15 ved måling ved blødagarmetoden (a) med anvendelse af museknoglemarvsceller.
EKSEMPEL 1 20 Til 5 pg G-CSF sattes et af stabiliseringsmid lerne angivet i tabel l, og blandingen opløstes aseptisk i 20 mM pufferopløsning (indeholdende 100 mM na-triumchlorid, pH 7,4) til fremstilling af et farmaceutisk præparat indeholdende 5 pg G-CSF pr. ml., som der-25 næst frysetørredes. Den tidsafhængige ændring af G-CSF-aktiviteten måltes ved metoden (a), og resultaterne er vist i tabel l. Udtrykket "aktivitet (%)" i tabellen betegner restaktiviteten af G-CSF i forhold til startaktiviteten og er defineret ved den følgende formel: 30 aktivitet i enheder efter
Aktivitet (%) = et givet tidsrum_x 100 startaktivitet i enheder o 35 Frysetørring udførtes ved følgende fremgangsmå de: 16 DK 171308 B1 G-CSF-opløsningen indeholdende et stabiliseringsmiddel fyldtes i et sterilt sulfabehandlet hætteglas, blev frosset til -40 eC eller til en lavere temperatur i 4 timer, underkastedes primær tørring ved op-5 varmning fra -40 °C til 0 °C i løbet af 48 timer, idet trykket øgedes fra 4 til 13,3 Pa, og dernæst sekundær ved opvarmning fra fra 0 °C til 20 °C i løbet af 12 timer med en trykstigning fra 4 til 10,7 Pa. Derefter fyldtes hætteglassets indre med en steril tør nitrogen-10 gas til opnåelse af atmosfæretryk, og hætteglasset lukkedes med en frysetørringsgummiprop og forsegledes dernæst med en aluminiumhætte.
DK 171308 B1 n
Tabel 1 Mængde Aktivitet (%) (vægtdele) Efter opbe- Efter opbe-
Stabiliserincsmiddel . , . . · , " varing ved vanng ved 4°C i 6 370C i 1 _____måneder__måned._ xylitol 10,000 92 86 mannitol 10,000 91 85 10 glucuron-syre 10,000 86 82 hyaluron-éyre 2,000 92 89 dextran (m-v· 40,000) 2,000 95 90 heparin 5,000 85 80 15 chitosan 2,000 93 91 algininsyre 2', 000 90 90 hu&iant serumalbumin 1,000 98 99 humant serumglobulin 1,000 98 95 2o -->---- syrebehandlet gelatine 2,000 97 95 basebehandlet gelatine 1,000 99 96 collagen 2,000 95 90 25 polyethylenglycol (m.v. 4,000) 10,000 94 90 hydroxypropy^cellulose 1,000 98 94
Tiatriumcarboxymethyl- . ... on cellulose 1,000 88 80 30 hydroxymethyl cellulose 5,000 92 90 polyvinyl alkphol (rø.v. 50,000) 2/000 96 95 polyvinylpyrrolidon 2 ...
(m.v. 50,000) <2,000 95 94 35 ’ humant serumalbumin 2,000 mannitol 2,000 100 97 cystein 100 5 18 DK 171308 B1
Tabel 1 (fortsat) aktivitet (%) . . ,, , Mæn^de Efter opbe-l Efter opbe-
Stabiliseringsmiddel (vægtdele) bevar<n| bevaring ved 4°C i ved 37 C i 10 6 måneder 1 måned humant serumalbumin 2,000 polyoxyethvlen 100 99 96 sbrbitanmonolaurat mannitol 2,000 humant serumalbumin 2,000 hydroxypropylcellulose 500 98 92 I dextran pn.v. 40,000) 2,000 polyoxyethylen- ,nn 20 sorbitanmonolaurat 98 96 sorbitol 2,000 polyoxyethyliéret-, hærdet castorolie 94 92 25 dextran ( m.v.40,000) 2,000 ikke tilsat__~__^__£8_ 1 35 DK 171308 B1 19 EKSEMPEL 2
Til 10 yg G-CSF sattes et af stabiliseringsmidler angivet i tabel 2, og blandingen opløstes aseptisk 5 i 20 mM phosphatpufferopløsning (indeholdende 100 mM natriumchlorid, pH 7,4) til fremstilling af et farmaceutisk præparat indeholdende 10 yg G-CSP pr. ml. Præparatet fyldtes aseptisk i et sulfabehandlet hætteglas, som forsegledes, til opnåelse af en G-CSP-opløsning.
10 Den tidsafhængige ændring af G-CSP-aktiviteten i denne opløsning måltes ved den samme metode som anvendt i eksempel 1, og resultaterne er vist i tabel 2.
DK 171308 B1 20
Tabel 2
Aktivitet (%) Mængde Efter , Bfter Efter 5 Stabiliseringsmiddel (vægt- opbeva- opbeva- opbeva- dele) rincf ved rina ved rina ved 4C i 4°C i RT„ i 7 dage 2 mån. 1 mån.
mannitol 5,000 91 87 82 hyaluronayre * 2,000 93 87 70 10 —---—^------- dextran (m.v. 40,000) 2,000 96 95 85 glycerol 10,000 90 90 88 neuraminsyre 5,000 93 91 84 15 chitin 2,000 95 92 86 dextrin 2,000 90 92 87 humant serumalbumin 1,000 99 95 92 humant serumglobulin 1,000 98 94 90 20 syrebehandlet gelatine 2,000 97 96 87 basebehandlet gelatine 500 99 95 92 collagen 2,000 99 94 88
polyethylenglycol 10 000 94 89 gQ
25 (m. V. 4,000) ιυ,υυυ *4 ay yu hydroxypropyicellulose 2,000 98 95 92
Natriumcarboxymethyl- cellulose 2,000 92 91 80 30 hydroxyethylcellulose 4,000 92 94 90 polyvinylalkohol 4,000 97 93 90 \ · m. v. 3 u ·υ u u i pol winy lpyrrolidon 95 95 92 l m.v.bu,uuu) 35 sorbitarfnonolaurat 400 97 96 95 polyoxyet hylen- 400 100 96 94 sorbitaimonolaurat 4UU ιυυ y4 21 DK 171308 B1
Tabel 2 (fortsat)
Aktivitet (%) Mængde Efter Efter Efter 5 Stabiliserinasmiddel °?beva' opbeva- opbeva- dele) ring ved ring ved r^na ved '* 4°C i 4°C ‘i ÉT' i 7 dage 2 mån. 1 måned polyoxyethylen- 400 98 97 94 scrbitanmonostearat 10----- polyoxyethylen- polyoxypropylen- 400 100 94 93 glycolether polyoxyethyleret, 400 99 98 90 hærdet castorolie
Natriumlaurylsulfat 2/000 97 93 87 lecithin 2,000 97 94 90 humant serumalbumin 2 000 mannitol 2,000 100 99 97 20 cystein 100 humant serumalbumin 2,000 polyoxyethylen- 100 99 97 95 sorbitanmonolåurat ±υυ ** 3 25 mannitol 2,000 humant serumalbumin 1,000 hydroxypropylcellulose 500 99 97 95 dextran (m.v. 40,000) 2,000 polyoxyethylen- lon
30 sorbitanmonopalmitat A
96 96 93 sorbitol 2,000 polyoxyethylated, inn
hærdet castorolie iUU
95 92 92 35 dextran (m.v. 40,000) 2,000 ikke tilsat - 72 61 47 22 DK 171308 B1 EKSEMPEL 3
Til 10 yg G-CSF sattes et af stabiliseringsmidlerne angivet i tabel 3, og blandingen opløstes asep-5 tisk i 20 mM phosphatpufferopløsning (indeholdende 100 mM natriumchlorid, pH 7,4) til opnåelse af et farmaceutisk acceptabelt præparat indeholdende 10 yg G-CSP pr. ml. En milliliter af dette præparat fyldtes i et sulfa-behandlet siliconeovertrukket hætteglas, som man lod 10 henstå ved 4 °C . Effektiviteten af hvert stabiliseringsmiddel til forebyggelse af G-CSF-adsorption bedømtes ved måling af rest-G-CSF-aktiviteten i opløsningen efter 0,5, 2 og 24 timer. Målingerne udførtes ved metode (b) ved anvendelse af revers-fase hplc. Resultater-15 ne er vist i tabel 3.
DK 171308 B1 23
Tabel 3 ----—- <- I-“T-
Restaktivitet (%)
Stabiliseringsmiddel Mæn9de (vægtdele initial 0.5 h 2 h 24 h mannitol 5/000 100 93 90 91 hyaluronsyre 2,000 100 97 92 92 dextran (m.v. 40,000) 2,000 100 98 95 96 10 glycerpl 10,000 100 94 91 90 heparin 2,000 100 92 90 90 glucuronsyre 5,000 100 96 90 91 ketoglycolsyre 5,000 100 92 88 90 15 -------- humant serumalbumin 1,000 100 100 101 99 ^ humant serumglobulin 1,000 100 98 100 98
Basebehandlet gelatine 500 100 99 98 99 20 .Syrebehandlet gelatine 2,000 100 99 97 97 collagen 2,000 100 100 98 99 u.rtfooo")91^01 100 100 100 99 hydroxypropylcellulose 2,000 100 100 100 99 25 —---:----- ”lnu™ierbOXymethy1' 2'000 100 98 96 95 hydroxyethylpellulose _ 4,000 100 96 93 92 30 M°° 100 99 100 98 ffy^ffio)011*0" 4-000 100 98 98 96 sorbitarfnonocaprylat 400 100 100 100 98 1 polyoxyet hylen- 40n 100 10Q 10n 35 sorbitarfnonostearat 400 100 100 98 100 — ---- '______ - polyoxyet hyleret, 40Q 100 99 1M 99 hærdet castorolie____J____ DK 171308 B1 24
Tabel 3 (forsat)
Restaktivitet ^ Stabili seringsmiddel længde (vægtdele *n*^*a^· 0*5 h 2 h 24 h I " * ' '—" ----- natriumlaurylsulfat * 2,000 100 100 99 97 lecithin 2,000 100 99 . 100 98 10 humant serumalbumin 2,000 mannitol 2,000 100 100 100 101 cystein 100 humant serumalbumin 2,000 15 P°i£?£i®thyl®nrr“ 100 100 100 98 99 sorbitanmonolaurat mannitol 2,000 i " j humant serumalbumin 1,000 j hydroxypropylpellulose 500 100 101 99 100 20 dextran (m-v· 40,000) 2,000
polyoxyethylen- 10Q
so r b i t arhnbno laur at 100 100 99 99 sorbitol 2,000 ------------ *-- ---------- · - . _ - 1 r ------ ·> 25 polyoxyethyLeret, 100 hærdet-castorolie 100 100 98 97 dextran (m.v. 40,000) 2,000 ’ikke tilsat “ 100 91 72 73 30 35
Claims (12)
1. Stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulo-cytkolonistimulerende faktor, kendetegnet ved, 5 at den granulocytkolonistimulerende faktor er humant G-CSF med de følgende fysisk-kemiske egenskaber: i) molekylvægt: ca. 19.000 ± 1.000 målt ved elektro-forese gennem en natriumdodecylsulfat - polyacrylamidgel, 10 ii) isoelektrisk punkt: med mindst ét af de tre isoelektriske punkter, pi = 5,5 ±0,1, pi - 5,8 ± 0,1 og pi 6,1 ± 0,1, iii) ultraviolet absorption: med en maksimal absorp tion ved 280 nm og en minimal absorp-15 tion ved 250 nm, iv) aminosyresekvens for de 21 rester fra N-terminus: H2N-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-Ser-Ser-Leu Pro-GIn-Ser-Phe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-Gin-Val-. 20 og at præparatet foruden den granulocytkolonistimulerende faktor, der er den virksomme bestanddel, indeholder mindst ét materiale valgt blandt farmaceutisk acceptable overfladeaktive midler valgt blandt ikke-ioniske, anioniske og naturlige overfladeaktive midler, hvor det ikke-ioniske 25 overfladeaktive middel kan være en ester af sorbitan, en polyoxyethylensorbitan eller en polyethylenglycol med en alifatisk syre, en polyoxyethylenpolyoxypropylenalkylether eller en polyoxy-ethyleret hærdet castorolie, det anioniske, overfladeaktive middel kan være et alkylsulfatsalt og 30 det naturlige overfladeaktive middel, kan være lecithin, saccharider valgt blandt glycerol, xylitol, sorbitol, mannitol, glucuronsyre, neuraminsyre, ketoglycolsyre, hyaluronsyre og salte deraf, heparin, chitin og derivater deraf, chitosan og derivater deraf, dextrin, dextran med en 35 middelmolekylvægt på 5.000-150.000, og alginsyre og salte deraf, proteiner valgt blandt humant serumalbumin, humant serumglobulin, gelatine, syre- eller basebehandlet gelatine DK 171308 B1 med en middelmolekylvægt på 7.000-100.000, og collagen og forbindelser med høj molekylvægt valgt blandt hydroxy-propylcellulose, hydroxymethylcellulose, natriumcarboxymet-hylcellulose, hydroxyethylcellulose, polyethylenglycol med 5 en molekylvægt på 300-6.000, polyvinylalkohol med en molekylvægt på 20.000-100.000 og polyvinylpyrrolidon med en molekylvægt på 20.000-100-000.
2. Stabilt farmaceutisk præparat ifølge krav l, 10 kendetegnet ved, at det indeholder det overfladeaktive middel i en mængde på 1-10.000 vægtdele pr. vægtdel af den granulocytkolonistimulerende faktor.
3. Stabilt farmaceutisk præparat ifølge krav 1 eller 15 2,kendetegnet ved, at det indeholder sacchari- det i en mængde på 1-10.000 vægtdele pr. vægtdel af den granulocytkolonistimulerende faktor.
4. Stabilt farmaceutisk præparat ifølge et eller flere 20 af de foregående krav, kendetegnet ved, at det indeholder proteinet i en mængde på 1-20.000 vægtdele pr. vægtdel af den granulocytkolonistimulerende faktor.
5. Stabilt farmaceutisk præparat ifølge et eller flere 25 af de foregående krav, kendetegnet ved, at det indeholder forbindelsen med høj molekylvægt i en mængde på 1-20.000 vægtdele pr. vægtdel af den granulocytkolonistimulerende faktor. 1
6. Stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulo cytkolonistimulerende faktor, kendetegnet ved, at den granulocytkolonistimulerende faktor indeholder enten et polypeptid, der har human granulocytstimulerende faktoraktivitet og er repræsenteret ved hele eller en del af 35 aminosyresekvensen vist nedenfor, eller et glycoprotein med både dette polypeptid og en sukkerkædedel: DK 171308 B1 (Met)nThr Pro Leu Gly Fro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gin Vel Arg Lys Ile Gin Gly Asp Gly Ala Ala Leu Gin 5 · Glu Lys Leu (Val Ser Glu)mCys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly His Ser Leu Gly Ile Pro Trp Ala Pro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly 10 Cys Leu Ser Gin Leu Bis Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Ile Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr Ile
15 Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro (forudsat, at m er 0 eller 1, og n er 0 eller 1) 25 og mindst et materiale valgt blandt farmaceutisk acceptable overfladeaktive midler, saccharider, proteiner og forbindelser med høj molekylvægt, som anført i et eller flere af kravene 1-5.
7. Fremgangsmåde til fremstilling af et stabilt 30 farmaceutisk præparat indeholdende granulocytkolonistimulerende faktor i form af humant G-CSF med de følgende fysisk-kemiske egenskaber: i) molekylvægt: ca. 19.000 ± 1.000 målt ved elektro-forese gennem en natriumdodecylsulfat 35 - polyacrylamidgel, DK 171308 B1 ii) isoelektrisk punkt: med mindst ét af de tre isoelektriske punkter, pi = 5,5 ±0,1, pi = 5,8 ± 0,1 og pi 6,1 ± 0,1, iii) ultraviolet absorption: med en maksimal absorp- 5 tion ved 280 nm og en minimal absorp tion ved 250 nm, iv) aminosyresekvens for de 21 rester fra N-terminus: H2N-Thr-Pro-Leu-Gly-Pro-Ala-Ser-Ser-Leu Pro-Gin-Ser-Phe-Leu-Leu-Lys-Cys-Leu-Glu-10 Gin-Val-. kendetegnet ved, at man til et præparat af den granulocytkolonistimulerende faktor, der er til stede som virksom bestanddel, sætter mindst ét materiale valgt blandt farmaceutisk acceptable overfladeaktive midler, sacchari-15 der, proteiner og forbindelser med høj molekylvægt, som anført i krav 1.
8. Fremgangsmåde til fremstilling af et stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulocytkolonistimu-20 lerende faktor, kendetegnet ved, at man til et præparat af den granulocytkolonistimulerende faktor, der er til stede som virksom bestanddel, hvilken faktor indeholder enten et polypeptid, der har human granulocytstimulernede faktoraktivitet og er repræsenteret ved hele eller en del 25 af aminosyresekvensen vist nedenfor, eller et glycoprotein med både dette polypeptid og en sukkerkædede1: 1 35 DK 171308 B1 (Ket)nTbr Pro Leu Gly Fro Ala Ser Ser Leu Pro Gin Ser Phe Leu Leu Lys Cys Leu Glu Gin Val Arg Lys Ile Gin Gly As? Gly Ala Ala Leu Gin 5 Glu Lys Leu (Val Ser Glu)raCys Ala Thr Tyr Lys Leu Cys His Pro Glu Glu Leu Val Leu Leu Gly Bis Ser Leu Gly Ile Pro Tr? Ala Fro Leu Ser Ser Cys Pro Ser Gin Ala Leu Gin Leu Ala Gly
10 Cys Leu Ser Gin Leu Bis Ser Gly Leu Phe Leu Tyr Gin Gly Leu Leu Gin Ala Leu Glu Gly Ile Ser Pro Glu Leu Gly Pro Thr Leu Asp Thr Leu Gin Leu Asp Val Ala Asp Phe Ala Thr Thr Ile
15 Trp Gin Gin Met Glu Glu Leu Gly Met Ala Pro Ala Leu Gin Pro Thr Gin Gly Ala Met Pro Ala Phe Ala Ser Ala Phe Gin Arg Arg Ala Gly Gly Val Leu Val Ala Ser His Leu Gin Ser Phe Leu
20 Glu Val Ser Tyr Arg Val Leu Arg His Leu Ala Gin Pro 1 (forudsat, at m er 0 eller 1, og n er 0 eller 1), sætter mindst ét materiale valgt blandt farmaceutisk acceptable overfladeaktive midler, saccharider, proteiner og forbindelser med høj molekylvægt, som anført i krav l.
Applications Claiming Priority (8)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| JP16948686 | 1986-07-18 | ||
| JP16948686 | 1986-07-18 | ||
| JP16948886 | 1986-07-18 | ||
| JP16948786 | 1986-07-18 | ||
| JP16948986 | 1986-07-18 | ||
| JP16948886 | 1986-07-18 | ||
| JP16948786 | 1986-07-18 | ||
| JP16948986 | 1986-07-18 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK368387D0 DK368387D0 (da) | 1987-07-15 |
| DK368387A DK368387A (da) | 1988-01-19 |
| DK171308B1 true DK171308B1 (da) | 1996-09-02 |
Family
ID=27474266
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK368387A DK171308B1 (da) | 1986-07-18 | 1987-07-15 | Stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulocytkolonistimulerende faktor og fremgangsmåde til fremstilling af dette |
Country Status (24)
| Country | Link |
|---|---|
| KR (1) | KR930004597B1 (da) |
| CN (1) | CN1033738C (da) |
| AT (1) | AT402259B (da) |
| AU (1) | AU611856B2 (da) |
| BE (1) | BE1000253A3 (da) |
| CA (1) | CA1297007C (da) |
| CH (1) | CH671157A5 (da) |
| DE (1) | DE3723781C2 (da) |
| DK (1) | DK171308B1 (da) |
| ES (1) | ES2010226A6 (da) |
| FR (1) | FR2601591B1 (da) |
| GB (1) | GB2193631B (da) |
| GR (1) | GR871067B (da) |
| HK (1) | HK64893A (da) |
| HU (1) | HU198627B (da) |
| IE (1) | IE60290B1 (da) |
| IL (1) | IL83220A (da) |
| IT (1) | IT1218927B (da) |
| NL (1) | NL192917C (da) |
| NO (1) | NO171828C (da) |
| PT (1) | PT85343B (da) |
| SE (1) | SE503312C2 (da) |
| SG (1) | SG64393G (da) |
| YU (1) | YU47543B (da) |
Families Citing this family (45)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4929442A (en) * | 1986-09-26 | 1990-05-29 | Exovir, Inc. | Compositions suitable for human topical application including a growth factor and/or related materials |
| US4847325A (en) * | 1988-01-20 | 1989-07-11 | Cetus Corporation | Conjugation of polymer to colony stimulating factor-1 |
| NO179479C (no) * | 1988-03-11 | 1996-10-16 | Teikoku Seiyaku Kk | Fremgangsmåte for fremstilling av et intravaginalt farmasöytisk preparat |
| US5981485A (en) | 1997-07-14 | 1999-11-09 | Genentech, Inc. | Human growth hormone aqueous formulation |
| US5349052A (en) * | 1988-10-20 | 1994-09-20 | Royal Free Hospital School Of Medicine | Process for fractionating polyethylene glycol (PEG)-protein adducts and an adduct for PEG and granulocyte-macrophage colony stimulating factor |
| GB8824591D0 (en) * | 1988-10-20 | 1988-11-23 | Royal Free Hosp School Med | Fractionation process |
| US6132763A (en) * | 1988-10-20 | 2000-10-17 | Polymasc Pharmaceuticals Plc | Liposomes |
| US5104651A (en) * | 1988-12-16 | 1992-04-14 | Amgen Inc. | Stabilized hydrophobic protein formulations of g-csf |
| EP0459516A1 (en) * | 1990-06-01 | 1991-12-04 | Kirin-Amgen, Inc. | Oral dosage form of biologically active proteins |
| JP3249147B2 (ja) * | 1990-06-01 | 2002-01-21 | キリン−アムジエン・インコーポレーテツド | 生理活性蛋白含有経口製剤 |
| FR2686899B1 (fr) | 1992-01-31 | 1995-09-01 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides biologiquement actifs, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
| FR2686900B1 (fr) * | 1992-01-31 | 1995-07-21 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Nouveaux polypeptides ayant une activite de stimulation des colonies de granulocytes, leur preparation et compositions pharmaceutiques les contenant. |
| FR2693907B1 (fr) * | 1992-07-23 | 1994-09-02 | Rhone Poulenc Rorer Sa | Procédé d'administration de solutions de facteur de stimulation des colonies granulocytaires. |
| EP0582932A1 (de) * | 1992-08-11 | 1994-02-16 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Therapeutisches System zur parenteralen Verabreichung von hämatopoetischen Wachstumsfaktoren |
| DE4242863A1 (de) * | 1992-12-18 | 1994-06-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Stabile lyophilisierte pharmazeutische Zubereitungen von G-CSF |
| DE4242919A1 (de) * | 1992-12-18 | 1994-06-23 | Boehringer Mannheim Gmbh | Verfahren zur Herstellung von lagerstabilen wässrigen pharmazeutischen Zubereitungen von G-CSF |
| US20030053982A1 (en) | 1994-09-26 | 2003-03-20 | Kinstler Olaf B. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| US5824784A (en) | 1994-10-12 | 1998-10-20 | Amgen Inc. | N-terminally chemically modified protein compositions and methods |
| AU695129B2 (en) * | 1995-02-06 | 1998-08-06 | Genetics Institute, Llc | Formulations for IL-12 |
| TW434020B (en) * | 1995-03-15 | 2001-05-16 | Kirin Brewery | Methods for preventing adsorption of thrombopoietin (TPO), and stable top-containing compositions |
| TW434021B (en) * | 1995-03-15 | 2001-05-16 | Kirin Brewery | Methods for preventing adsorption of thrombopoietin (TPO), and stable TPO-containing compositions |
| GB9526733D0 (en) | 1995-12-30 | 1996-02-28 | Delta Biotechnology Ltd | Fusion proteins |
| US20030190307A1 (en) | 1996-12-24 | 2003-10-09 | Biogen, Inc. | Stable liquid interferon formulations |
| EP1060746A4 (en) * | 1998-03-06 | 2002-06-19 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | PROTEIN-FREE PREPARATIONS |
| US6979442B1 (en) * | 1998-08-17 | 2005-12-27 | Pfizer Inc. | Stabilized protein compositions |
| WO2001017542A1 (fr) * | 1999-09-08 | 2001-03-15 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preparation de solution de proteines et procede de stabilisation associe |
| TR200401573T4 (tr) * | 2000-02-29 | 2004-08-23 | Pfizer Products Inc. | Stabilize edilmiş granülosit koloni uyarıcı faktör |
| WO2001064241A1 (fr) * | 2000-02-29 | 2001-09-07 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preparations stabilisees a long terme |
| CA2747325A1 (en) | 2000-04-12 | 2001-10-25 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| US6946134B1 (en) | 2000-04-12 | 2005-09-20 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| CA2420850A1 (en) | 2000-09-01 | 2003-02-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Solution formulations having long-term stability |
| US8435939B2 (en) | 2000-09-05 | 2013-05-07 | Biokine Therapeutics Ltd. | Polypeptide anti-HIV agent containing the same |
| US7507413B2 (en) | 2001-04-12 | 2009-03-24 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| CA2471363C (en) | 2001-12-21 | 2014-02-11 | Human Genome Sciences, Inc. | Albumin fusion proteins |
| US7423007B2 (en) | 2002-08-27 | 2008-09-09 | Biokine Therapeutics Ltd. | Cxcr4 antagonist and use thereof |
| EP1598074B1 (en) | 2003-02-28 | 2019-01-02 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Stabilized protein-containing formulations |
| DE202006020194U1 (de) | 2006-03-01 | 2007-12-06 | Bioceuticals Arzneimittel Ag | G-CSF-Flüssigformulierung |
| EP2104507A4 (en) | 2006-12-21 | 2011-05-25 | Biokine Therapeutics Ltd | T-140 PEPTIDE ANALOGUE WITH CXCR4 SUPERAGONIST ACTIVITY FOR CANCER THERAPY |
| WO2010092571A2 (en) | 2009-02-11 | 2010-08-19 | Yeda Research And Development Co. Ltd. | Short beta-defensin-derived peptides |
| CN102740840A (zh) * | 2010-01-19 | 2012-10-17 | 韩美科学株式会社 | 长效g-csf缀合物的液体制剂 |
| EP2399572A1 (en) | 2010-06-22 | 2011-12-28 | Sandoz AG | Long-term storage of non-glycosylated recombinant human G-CSF |
| EP3943098A3 (en) | 2015-07-16 | 2022-05-11 | Biokine Therapeutics Ltd. | Compositions and methods for treating cancer |
| BR112018016924A2 (pt) | 2016-02-23 | 2019-01-02 | Biokine Therapeutics Ltd | método de seleção de regime de tratamento para indivíduo que tem leucemia mieloide aguda (lma), método de maximização de resposta ao tratamento de leucemia mieloide aguda (lma), método de tratamento de lma, antagonista de cxcr4 e agente quimioterápico no tratamento de lma |
| WO2018138267A1 (en) | 2017-01-27 | 2018-08-02 | Cinfa Biotech S.L. | Method for determining the efficacy of a g-csf containing composition |
| PL3797752T3 (pl) * | 2018-05-21 | 2024-10-28 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Preparat liofilizowany szczelnie zamknięty w pojemniku szklanym |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE2652636A1 (de) * | 1976-11-19 | 1978-05-24 | Hans Uwe Dr Rer Nat Wolf | Verfahren zur stabilisierung von proteinen und verwandten verbindungen waehrend ihrer reinigung, isolierung und lagerung |
| SE451844B (sv) * | 1978-03-20 | 1987-11-02 | Morinaga Milk Industry Co Ltd | Glykoprotein, forfarande for framstellning derav samt terapeutiskt medel innehallande nemnda glykoprotein |
| DE3380726D1 (en) * | 1982-06-24 | 1989-11-23 | Japan Chem Res | Long-acting composition |
| JPS60228422A (ja) * | 1984-04-26 | 1985-11-13 | Suntory Ltd | 安定化された生理活性物質製剤 |
| JPS61227526A (ja) * | 1984-07-25 | 1986-10-09 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 新規なコロニー刺激因子 |
| JPS6191131A (ja) * | 1984-10-09 | 1986-05-09 | Chugai Pharmaceut Co Ltd | 医薬品の吸着防止方法および組成物 |
| ATE80894T1 (de) * | 1985-02-05 | 1992-10-15 | Cetus Oncology Corp | Reinigung des natuerlichen kolonie-stimulierenden faktors-1. |
| US4810643A (en) * | 1985-08-23 | 1989-03-07 | Kirin- Amgen Inc. | Production of pluripotent granulocyte colony-stimulating factor |
| JPH0618778B2 (ja) * | 1985-10-04 | 1994-03-16 | 中外製薬株式会社 | 白血球減少症治療剤 |
-
1987
- 1987-07-08 GR GR871067A patent/GR871067B/el unknown
- 1987-07-10 IT IT67594/87A patent/IT1218927B/it active
- 1987-07-13 NL NL8701640A patent/NL192917C/nl not_active IP Right Cessation
- 1987-07-14 AT AT0177587A patent/AT402259B/de not_active IP Right Cessation
- 1987-07-15 BE BE8700787A patent/BE1000253A3/fr not_active IP Right Cessation
- 1987-07-15 DK DK368387A patent/DK171308B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-07-15 AU AU75665/87A patent/AU611856B2/en not_active Expired
- 1987-07-15 CA CA000542239A patent/CA1297007C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-16 PT PT85343A patent/PT85343B/pt unknown
- 1987-07-16 NO NO872966A patent/NO171828C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-07-16 CH CH2727/87A patent/CH671157A5/de not_active IP Right Cessation
- 1987-07-17 IE IE193387A patent/IE60290B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-07-17 DE DE3723781A patent/DE3723781C2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-17 SE SE8702907A patent/SE503312C2/sv not_active IP Right Cessation
- 1987-07-17 IL IL83220A patent/IL83220A/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-07-17 ES ES8702106A patent/ES2010226A6/es not_active Expired
- 1987-07-17 FR FR878710156A patent/FR2601591B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-17 YU YU134287A patent/YU47543B/sh unknown
- 1987-07-17 HU HU873268A patent/HU198627B/hu unknown
- 1987-07-17 GB GB8716904A patent/GB2193631B/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-18 CN CN87104963A patent/CN1033738C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1987-07-18 KR KR1019870007804A patent/KR930004597B1/ko not_active IP Right Cessation
-
1993
- 1993-05-18 SG SG64393A patent/SG64393G/en unknown
- 1993-07-08 HK HK648/93A patent/HK64893A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK171308B1 (da) | Stabilt farmaceutisk præparat indeholdende granulocytkolonistimulerende faktor og fremgangsmåde til fremstilling af dette | |
| JP7329571B2 (ja) | Ｉｌ－２医薬組成物 | |
| JP3927248B2 (ja) | Ｈｇｆ凍結乾燥製剤 | |
| JP2577744B2 (ja) | 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤 | |
| AU2001282607B2 (en) | Solution preparations stabilized over long time | |
| KR100389726B1 (ko) | 안정한 과립구 콜로니-자극 인자 함유 제제 | |
| JP2577742B2 (ja) | 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤 | |
| JPS63146828A (ja) | 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤 | |
| JP2577743B2 (ja) | 安定な顆粒球コロニ−刺激因子含有製剤 | |
| JP2629000B2 (ja) | 安定な顆粒球コロニー刺激因子含有製剤 | |
| JPH0378847B2 (da) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| B1 | Patent granted (law 1993) | ||
| PUP | Patent expired |