DE69602886T2

DE69602886T2 - Im kardiovaskulären System aktive seco-D-Steroide und diese enthaltende pharmazeutische Zubereitungen

Info

Publication number: DE69602886T2
Application number: DE69602886T
Authority: DE
Inventors: Patrizia Ferrari; Mauro Gobbini; Piero Melloni; Marco Torri
Original assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Current assignee: Sigma Tau Industrie Farmaceutiche Riunite SpA
Priority date: 1995-05-11
Filing date: 1996-04-11
Publication date: 1999-11-04
Anticipated expiration: 2016-04-12
Also published as: CA2174715A1; JPH09291086A; GR3031118T3; EP0742214A1; IT1282286B1; ITRM950303A1; ES2133918T3; DK0742214T3; DE69602886D1; EP0742214B1; ITRM950303A0; US5731345A; ATE181324T1

Description

Diese Erfindung betrifft neue seco-D-Steroidderivate, die für das cardiovaskuläre System aktiv sind, und pharmazeutische Zusammensetzungen, die diese enthalten, für die Behandlung von cardiovaskulären Erkrankungen wie Herzinsuffizienz und Hypertonie.
Digitale Produkte wie Digoxin, Ouabain und Digitoxigenin sind natürliche Verbindungen, deren Wirksamkeit für das cardiovaskuläre System seit langem bekannt ist. Diese Aktivität ist hauptsächlich der Fähigkeit dieser Verbindungen für die Inhibition der Na&spplus;, K&spplus;-ATPase zuzuschreiben (Repke K. R. H. Schönfeld W. (1984); Na&spplus;/K&spplus;-ATPase als Digitalrezeptor; Trends Pharmacol. Sci. 5; 393-397)
Die cis-Verbindung zwischen den A/B und den C/D-Ringen des Steroidgerüstes ist die typische Konfiguration solcher Derivate und bestimmt die räumliche Form der Digitalisverbindungen (Thomas R., Gray P., Andrews J. (1990); Digitalis; its mode of action, Receptor and Structureactivity relationships; Adv. Drugs Res. 19; 312-562).
EP-A-0 576 915 offenbart steroide Perhydrophenanthrenderivate für die Behandlung von cardiovaskulären Erkrankungen wie Herzinsuffizienz und Hypertonie, die im Gegensatz von den erfindungsgemäßen Verbindungen einen intakten D-Ring aufweisen.
Obwohl die hierin beanspruchten Verbindungen den D-Ring des Steroidgerüstes tatsächlich nicht aufweisen und folglich nicht das oben genannte strukturelle Erfordernis erfüllen, entfalten sie überraschenderweise eine gute Affinität für die Na&spplus;, K&spplus;-ATPase- Rezeptorstelle und sind für das cardiovaskuläre System aktiv.
Die erfindungsgemäßen Erfindungen haben die folgende allgemeine Formel
worin R 3-Furyl oder 2,5-Dihydro-5-oxo-3-furyl ist; wenn R 3-Furyl ist, das Symbol eine Einfachbindung bedeutet, R¹ Methyl oder Hydroxymethyl ist; R² und R³ OH bzw. H sind oder zusammen eine Ketogruppe bilden;
mit dem Vorbehalt, daß dann, wenn R² und R³ zusammen eine Ketogruppe bilden, R¹ Methyl ist,
wenn R 2,5-Dihydro-5-oxo-3-furyl ist, das Symbol eine Einfach- oder Doppelbindung ist; R¹ Methyl,
Cyano oder CH=N R&sup4; ist
R² und R³ die oben angegebene Bedeutung haben; mit dem Vorbehalt, daß dann, wenn R¹ CH=N R&sup4; ist
R² und R³ zusammen eine Ketogruppe bilden; mit dem Vorbehalt, daß dann, wenn das Symbol eine Doppelbindung bedeutet, R¹ Methyl ist und R², R³ zusammen eine Ketogruppe bilden; worin das Symbol das Z oder E-Isomer ist; R&sup4; NHC(=NH)NR&sup5;R&sup6; oder OR&sup7; bedeutet;
worin R&sup5;, R&sup6;, die gleich oder verschieden voneinander sind, H oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl sind; oder worin R&sup5; und R&sup6; zusammen mit dem Heteroatom, an das sie gebunden sind, einen 5- oder 6-gliedrigen, monoheterozyklischen Ring bilden können;
R&sup7; H, CH&sub3;, C&sub2;&submin;&sub6;-Alkyl, unsubstituiert oder substituiert durch NR&sup8;R&sup9; ist, worin
R&sup8; und R&sup9;, gleich oder verschieden, H oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl sind.
Wenn die Verbindungen der Formel (I) in Form von unterschiedlichen tautomeren Formen vorhanden sind, soll die genannte Formel ebenfalls solche Formen umfassen. Die Formel umfaßt die Z- und E-Isomeren ebenso wie Mischungen davon, die Metaboliten und metabolischen Vorläufer der Verbindungen der Formel (I).
Diese Erfindung betrifft ebenfalls die pharmakologisch akzeptablen Salze der Verbindungen der Formel (I). Mit pharmakologisch akzeptablen Salzen sind solche Salze gemeint, die die biologische Aktivität der nicht verseiften Stamverbindung beibehalten und sich von solchen pharmakologisch akzeptablen Säuren, wie z. B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Fumarsäure, Succinsäure, Oxalsäure, Äpfelsäure, Weinsäure, Maleinsäure, Zitronensäure, Methansulfonsäure oder Benzoesäure und anderen Säuren ableiten, die dem Fachmann auf dem Gebiet der pharmazeutischen Technologie leicht offensichtlich sind.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen umfassen ebenfalls die Solvate wie die Hydrate.
Die Alkylketten sind geradkettig oder verzweigt.
Die C&sub1;&submin;&sub4;-Alkylgruppe ist bevorzugt Methyl, Ethyl, n-Propyl, Isopropyl, n-Butyl, tert-Butyl.
Die NR&sup5;R&sup6;-Gruppe ist bevorzugt Amino, Methylamino, Dimethylamino, Diethylamino, Pyrrolidinyl, Piperidyl, 2-Dimethylaminoethyl, 2- Diethylaminoethyl.
Bevorzugte Beispiele von spezifischen Verbindungen gemäß dieser Erfindung sind:
17β-(3-Furyl)-14,15-seco-5β-androstan-3β,14β-diol,
17β-(3-Furyl)-14,15-seco-5β-androstan-3β,14β,15-triol,
17β-(3-Furyl)-14-oxo-14,15-seco-5β-androstan-3β-on,
3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid,
3β,14β-Dihydroxy-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid,
3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-8,20(22)-dienolid,
3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-nitril,
3β,14β-Dihydroxy-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-nitril,
3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)enolid-15-(2- dimethylaminoethoxy-(E)-iminoethyl)
3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-(2- dimethylaminoethoxy-(Z)-iminoethyl)
3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-(E)- (guanidinimino).
Diese Erfindung stellt weiterhin ein Verfahren zur Herstellung der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) zur Verfügung, worin R 3-Furyl ist, umfassend die Reduktion der Verbindungen mit der Formel (I), worin R 2,5- Dihydro-5-oxo-3-furyl ist, worin die Hydroxygruppen geeignet geschützt sind, z. B. in der Form von Tetrahydropiranylethern, Tetrahydrofuranylethern, Methoxymethylethern, Ethoxyethylethern, Silylethern, wie z. B. Trimethylsilyl, t-Butyldimethylsilyl, t- Butyldiphenylsilyl. Andere Schutzgruppen, die unter den gewählten Reduktionsbedingungen geeignet sind, können verwendet werden.
Die Reduktionsreaktion wird am besten in inerten Lösungsmitteln wie z. B. Diethylether, Tetrahydrofuran, Toluol, Methylenchlorid, Hexan oder Mischungen davon in der Gegenwart eines komplexen Hydrides wie Diisobutylaluminiumhydrid oder 9-Borabicyclo[3.3.1]nonan bei einer Temperatur im Bereich von -78ºC bis zum Siedepunkt der genannten Lösungsmittel oder deren Mischungen durchgeführt. Während der Aufarbeitung der Reaktionsmischung mit verdünnten wässrigen Lösungen von anorganischen Säuren wie Salzsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure oder organische Säuren wie Essigsäure, Weinsäure, Zitronensäure, Oxalsäure, werden die Schutzgruppen der geschützten Hydroxygruppen abgespalten, unter Erhalt der Verbindungen mit der Formel (I).
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin R wie oben angegebene Bedeutung hat und R² und R³ OH bzw. H sind, werden von den Verbindungen (I), worin R² und R³ zusammen eine Ketogruppe bilden und worin die 3-Hydroxygruppe wahlweise als Acetat geschützt ist, durch Reduktion mit komplexen Hydriden wie z. B. Natriumborhydrid, Tri-t-butoxylithiumaluminiumhydrid, Natriumcyanoborhydrid, in Lösungsmitteln wie z. B. Dioxan, Methanol, Ethanol, Tetrahydrofuran oder einer Mischung von solchen Lösungsmitteln wahlweise in der Gegenwart von Wasser erhalten. Zu den Reaktionsmischungen können Säuren wie z. B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Essigsäure, Schwefelsäuren oder Basen wie z. B. Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid zum Beibehalten des gewählten pH-Wertes gegeben werden.
Die Reaktion wird bei einer Temperatur im Bereich von -78ºC bis Raumtemperatur durchgeführt. Die Reduktion der Ketogruppe ergibt eine Mischung aus β/α-Epimeren in variablen Anteilen in Abhängigkeit von den gewählten Reaktionsbedingungen. Das β-Isomer wird von der Mischung durch Kristallisation mit geeigneten Lösungsmitteln wie z. B. Ethylacetat, Ethanol, Methanol, Diethylether, Hexan, Cyclohexan oder Mischungen davon oder durch Silicagel-Chromatographie unter Verwendung von Ethylacetat, Diethylether, Hexan, Cyclohexan oder einer Mischung davon als Eluent isoliert.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin R² und R³ OH bzw. H sind und die 3-Hydroxygruppe selektiv durch eine große Gruppe wie z. B. t- Butyldimethylsilylgruppe geschützt ist, können in andere Verbindungen der allgemeinen Formel (I) umgewandelt werden, worin R² und R³ zusammen eine Ketogruppe bilden und zwar durch Oxidation durch konventionelle Vorgehensweisen, wie z. B. mit CrO&sub3;, 2Py oder CrO&sub3; und 2,5-Dimethylpyrazol in Pyridin oder chlorierten Lösungsmitteln, Thionylchlorid, Oxalylchlorid oder Py, So&sub3; in DMSO in der Gegenwart von Triethylamin; Morpholin-N-oxid und katalytischen Mengen an Tetrapropylammoniumperruthenat in der Gegenwart von Molekularsieben in der Gegenwart von chlorierten Lösungsmitteln und/oder Acetonitril.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), worin R 2,5-Dihydro-5- oxo-3-furyl, R¹CH=N R&sup4; R² und R³ zusammen eine Ketogruppe bilden und R&sup4; die oben angegebene Bedeutung hat, werden durch Kondensationsreaktion von Verbindungen der allgemeinen Formel (II) oder
H&sub2;NNHC( = NH)NR&sup5;R&sup6; H&sub2;NOR&sup7;
(II) (III)
worin R&sup5;, R&sup6; und R&sup7; die oben angegebenen Bedeutungen haben, mit Ketoaldehyd (IV) erhalten, das eine bekannte Verbindung ist (Cohnen E., Wedemeier K., Sinnwell V. (1982); Cardenolide. I. D-Ringspaltung von Cardenoliden, Liebigs Ann. Chem. 908-913).
Die Verbindungen (II) und (III) können als freie Basen oder als Salze mit einer Säure wie z. B. Salzsäure, Bromwasserstoff, Jodwasserstoffsäure, Kohlensäure, Oxalsäure oder Schwefelsäure verwendet werden.
Die Reaktion kann in einem Lösungsmittel wie Ethanol, Methanol, Acetonitril, Dioxan, Tetrahydrofuran, wahlweise in der Gegenwart von Wasser oder einer Mischung der oben genannten Lösungsmitteln bei einer Temperatur von 0ºC bis zum Siedepunkt der oben erwähnten Lösungsmittel oder Mischungen davon durchgeführt werden. Zusätzliche Salze wie z. B. NaH&sub2;PO&sub4;, Na&sub2;HPO&sub4;, NaOAc können zu der Reaktionsmischung gegeben werden, um den gewählten pH aufrecht zu erhalten, können Säuren wie z. B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure oder Basen wie z. B. Natriumhydroxid oder Kaliumhydroxid zugegeben werden.
Die Schutzgruppe der 3-Hydroxygruppe wird durch saure oder basische Hydrolyse am Ende der Kondensationsreaktion abgespalten.
Die Verbindungen (II) und (III) sind kommerziell erhältliche Produkte und können durch bekannte Verfahren hergestellt werden.
Alle oben genannten Umwandlungsreaktionen sind Beispiele von gut bekannten Vorgehensweisen in der organischen Chemie (siehe z. B. J. March "Advanced Organic Chemistry", J. Wiley & Sons, 1985; D. Barton and W. D. Ollis "Comprehensive Organic Chemistry", Pergamon Press, 1979).
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I), hergestellt gemäß dieser Erfindung, ebenso wie deren pharmakologisch akzeptablen Salze sind nützliche Mittel für die Behandlung von cardiovaskulären Erkrankungen wie Herzinsuffizienz und Hypertonie.
Die Verbindungen der allgemeinen Formel (I) hergestellt gemäß dieser Erfindung, ebenso wie ihre pharmakologisch akzeptablen Salze, haben eine verminderte Toxizität im Vergleich zu positiven inotropen Mitteln wie Ouabain und Digitoxin.
Die erwähnten Verbindungen der allgemeinen Formel (I) zeigen eine hohe Affinität und Affinität für die Na&spplus;, K&spplus;-ATPase Rezeptorstelle.
Zum Testen für die Affinität der Rezeptorstelle der Na&spplus;, K&spplus;-ATPase und der Agonisten- oder Inhibitionsaktivität bei dem Enzym wurden die folgenden Tests angewandt:
a) Verschiebung der spezifischen ³H-Ouabainverbindung von dem Na&spplus;, K&spplus;-ATPase-Rezeptor, gereinigt entsprechend Jorghensen (Jorghensen P., BBA, 1974, 356, 36) und Erdamnn (Erdmann E. et al., Arzneim. Forsh. 1984, 34, 131.4); und
b) Inhibition der Aktivität der gereinigten Na&spplus;, K&spplus;-ATPase, gemessen als %-Hydrolyse von ³²p-ATP in der Gegenwart und Abwesenheit der untersuchten Verbindung (Doucet A. et al., Am. J. Physiol., 1986, 251, F851).
Der systolische Blutdruck (SBP) und die Herzrate (HR) wurden durch ein indirektes Schwanzmanschettenplethysmographisches Verfahren bei 4 Monate alten hypertonischen männlichen Ratten (MHS oder SHR), d. h. vor dem Beginn der Hypertonie gemessen, um so die Basalwerte von SBP aufzuzeichnen. Die Ratten wurden dann in Gruppen mit jeweils 7 Tieren unterteilt und die Gruppen wurden in Kontroll- und Behandlungsgruppen unterteilt. Die Verbindung, suspendiert in 0,5% (G/V) Methocel, wurde täglich für wenigstens 5 Wochen oral verabreicht. Die Kontrollgruppe erhielt nur Methocel.
SBp und HR wurden 6 und 24 h wöchentlich nach der Behandlung gemessen.
Nach 5-wöchiger Behandlung wurde, als die Hypertonie in der Kontrollgruppe (9 Monate alte Ratten) entwickelt war, eine einwöchige Auswaschbehandlung durchgeführt, um zu verifizieren, ob der SBP niedrig blieb oder sich auf die Basalwerte der Kontrollgruppe einstellte. Die Zuverlässigkeit dieses Verfahrens bei der Feststellung der hypotensiven Aktivität wurde zuvor bei β-Blockern getestet, die keine hypotensive Aktivität entfalten, wenn sie hypertensiven Ratten (SHR) verabreicht wurden, die aber bei der Verhinderung von Hypertonie effektiv waren, wenn sie für mehr als 5 Wochen nach der Entwöhnung verabreicht wurden (Takeda K. et al., Japan J. Pharmacol., 1979, 29, 171; Takeda K. et al., Japan J. Pharmacol., 1982, 32, 283; Richer C. et al., Eur. J. Pharmacol., 1978, 47, 393).
Die Affinität für und die Inhibitionsaktivität auf das Enzym von einigen erfindungsgemäßen Verbindungen sind in der folgenden Tabelle gezeigt.
Die Aktivität einiger Verbindungen bei der Verhinderung der Entwicklung der Hypertonie ist in der folgenden Tabelle gezeigt: Wirkung der 5-wöchigen Behandlung bei spontan hypertonischen Ratten (2018) auf die Entwicklung von Hypertonie
* in 0,5% G/V Methocel
Die folgenden Beispiele erläutern diese Erfindung, ohne sie zu beschränken.

Beispiel 1:

17β-(3-Furyl)-14,15-seco-5β-androstan-3β,14β-diol (I-a)

Zu einer Lösung aus 0,54 g 3β,14β-Dihydroxy-14,15-seco-5β-card-20(22)- enolide (I-e) in THF (13 ml) wurden 1,9 g Imidazol und 1,78 ml Trimethylchlorsilan gegeben. Nach 1 h wurde die Reaktionsmischung in Wasser gegossen, die somit gebildete Suspension mit EtOAc gewaschen, die organische Phase getrennt, mit einer gesättigten Lösung NaCl gewaschen und auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert; das Lösungsmittel wurde durch Verdampfen unter vermindertem Druck entfernt, 716 mg Disilylether wurden als weißer Schaum erhalten; das Produkt wurde ohne weitere Reinigung in den folgenden Schritt verwendet.
Der Disilylether wurde in wasserfreiem THF (10 ml) aufgelöst, und zu der Lösung, die bei -50ºC gehalten wurde, wurden 7 ml (1 M in Hexan) DIBAL- H über 30 Minuten in einer Stickstoffatmosphäre gegeben. Nach 1 h wurden 10 ml einer gesättigten Lösung NaH&sub2;PO&sub4; langsam zugegeben, während die Temperatur bei weniger als -20ºC gehalten wurde; dann wurde die Reaktionsmischung auf Raumtemperatur gebracht, der erhaltene Feststoff wurde abfiltriert, mit EtOAc gewaswchen und eliminiert; das wässrige Filtrat wurde mit dem verwendeten EtOAc extrahiert, um den Feststoff zu waschen. Die organische Phase wurde getrennt und mit einer gesättigten Lösung NaHCO&sub3;, dann mit einer gesättigten Lösung NaCl gewaschen und auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert. Das Lösungsmittel wurde dann unter vermindertem Druck durch Einengung entfernt. Das rohe Produkt (Zwischenprodukt: α,β-ungesättigtes Lactol) wurde in THF (22 ml) aufgelöst und dann mit 1 N H&sub2;SO&sub4; (22 ml) 30 Minuten bei Raumtemperatur behandelt. Die Reaktionsmischung wurde durch Zugabe von festem NaHCO&sub3; neutralisiert, das organische Lösungsmittel unter vermindertem Druck eingeengt und die verbleibende wässrige Suspension CH&sub2;Cl&sub2; extrahiert. Die organische Phase wurde getrennt, mit einer gesättigten Lösung NaCl gewaschen und auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert. Das Lösungsmittel wurde durch Verdampfung unter vermindertem Druck entfernt. Das somit erhaltene rohe Produkt: wurde durch Silicagelchromatographie gereinigt, wobei Cyclohexan/ EtOAc (70 : 30 V/V) als Eluent verwendet wurde; 0,31 g der Verbindung (I-a) wurden als weißer Feststoff erhalten.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, ppm von TMS): 0,75 (3H, t); 0,93 (3H, s); 1,00 (3H, s); 2,62 (1H, dd); 2,81 (1H, d); 4,08 (1H, bs); 6,30 (1H, bs); 7,26 (1H, bs); 7,39 (1H, bt).

Beispiel 2

17β-(3-Furyl)-14,15-seco-5β-androstan-3β,14β-15-triol (I-b)

Die Verbindung (I-b) (0,25 g) wurde als weißer Feststoff, ausgehend von 0,45 g 3β, 14β-15-Trihydroxy-14,15-seco-β-card-20(22)enolide (Cohnen E., Wedemeier K., Sinnwell V., (1982), Cardenolide I. D. Ringspaltung von Cadenoliden, Liebigs Ann. Chem. 908-913) unter Anwendung der Vorgehensweise von Beispiel 1 erhalten.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, ppm von TMS): 0,96 (3H, s); 1,03 (3H, s); 2,81 (1H, d); 2,94 (1H, dd); 3,45 (1H, m); 3,55 (1H, m); 4,08 (1H, bs); 6,37 (1H, bs); 7,00 (1H, bs); 7,41 (1H, bt).

Beispiel 3

17β-(3-Furyl)-14-oxo-14,15-seco-5β-androstan-3β-ol (I-c)

Zu einer Lösung aus 332 mg 17β-(3-Furyl)-14,15-seco-5β-androstan-3β- 14β-diol (I-a) in DMF (5 ml), die bei 0ºC gehalten wurde, wurden 634 mg (9.3 mM) Imidazol und 980 mg t-Butyldimethylchlorsilan gegeben; die Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur gebracht und 19 h gerührt. Die Reaktionsmischung wurde mit Wasser und CH&sub2;Cl&sub2; extrahiert. Die organische Phase wurde getrennt und mit einer gesättigten Lösung NaCl gewaschen und auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert; das Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck entfernt, unter Erhalt von 384 mg des 3-Silylderivates als farbloses Öl, das so in dem folgenden Schritt verwendet wurde.
Der Silylether wurde in 12 ml CH&sub2;Cl&sub2; aufgelöst und 200 mg pulferförmiges 4 A Molekularsieb, 285 mg Morpholin-N-oxid und 17 mg Tetrapropylammoniumperruthenat wurden zu der Lösung in Folge gegeben. Nach 24 h heftigem Rühren wurde die Reaktionsmischung auf einer Schicht aus Silicagel filtriert, wobei Cyclohexan/EtOAc (97/3 V/V) als Eluent verwendet wurde, 0,32 g des 3-Silylethers von (I-c) wurden als farbloses Öl erhalten.
Die Schutzgruppe dieses Produktes wurde durch Auflösen in CHCl&sub3;/MeOH (7,5 ml/15 ml) und Zugabe eines Tropfens konzentrierter HCl abgespalten. Nach 21 h wurde die Reaktionsmischung mit einer gesättigten Lösung NaHCO&sub3; neutralisiert, das organische Lösungsmittel unter vermindertem Druck eingeengt und die resultierende wässrige Suspension mit EtOAc extrahiert; die organische Phase wurde mit Wasser gewaschen, auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert und das Lösungsmittel durch Verdampfung unter vermindertem Druck entfernt. Das rohe Produkt wurde auf einer Silicagelsäule unter Verwendung von Cyclohexan/EtOAc (75 : 25 V/V) als Eluent gereinigt; 0,20 g der Verbindung (I-c) als weißer Feststoff wurden erhalten.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, ppm von TMS): 0,81 (3H, t); 1,01 (3H, s); 1,20 (3H, s); 2,62 (1H, m); 2,78 (1H, dd); 4,09 (1H, bs); 6,25 (1H, bs); 7,17 (1H, bs); 7,34 (1H, bt).

Beispiel 4

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)enolid (I-d)

Zu einer Lösung aus 5 g 3β-Acetoxy-14,15-dioxo-14,15-seco-5β-card- 20(22)-enolid in CH&sub2;Cl&sub2; (50 ml) (IV) (Cohnen E., Wedemeier K., Sinnwell V. (1982), Cardenolide I. D-Ringspaltung von Cardenoliden, Liebigs Ann. Chem. 908-913) wurden 1,6 ml 1,2-Ethandithiol und 1,25 ml BF&sub3; · Et&sub2;O gegeben; eine augenblickliche Reaktion fand statt. Nach etwa 10 Minuten wurde die Reaktionsmischung in eine gesättigte Lösung NaHCO&sub3; gegossen, die organische Phase wurde getrennt, mit Wasser gewaschen, auf Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck entfernt. Das rohe Produkt wurde in 96% EtOH aufgelöst, zu dem ein großer Überschuß an Raney-Nickel gegeben wurde. Die Reaktionsmischung wurde bei Rückflußtemperatur 2 h gehalten, der Feststoff abfiltriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abfiltriert, unter Erhalt des 3-Acetatderivates von (I-d). Das rohe 3- Acetat wurde in MeOH aufgelöst und mit einer wässrigen Lösung 5% HCl bei Raumtemperatur 48 h lang behandelt; die Reaktionsmischung wurde dann mit einer gesättigten Lösung NaHCO&sub3; neutralisiert, das organische Lösungsmittel unter vermindertem Druck gezogen und die resultierende wässrige Suspension mit EtOAc extrahiert; die organische Phase wurde mit Wasser gewaschen, auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen. Das rohe Prodkt wurde auf einer Silicagelsäule unter Verwendung von Hexan/EtoOAc (70 : 30 V/V) als Eluent gereinigt; 3,2 g des Produktes (I-d) als weißer Feststoff wurden erhalten.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, ppm von TMS): 0,89 (3H, t); 1,03 (3H, s); 1,23 (3H, s); 2,57 (2H, m); 4,13 (1H, bs); 4,70 (1H, dd); 4,94 (1H, dd); 5,86 (1H, bt).

Beispiel 5

3β,14β-Dihydroxy-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid (I-e)

Zu einer Lösung aus 7,0 g 3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card- 20(22)-enolid (I-d) in MeOH (600 ml), die bei -30ºC gehalten wurde, wurden 1,6 g NaHB&sub4; gegeben; nach 12 h wurde die Reaktionsmischung mit einer wässrigen Lösung 10% HOAc behandelt, auf Raumtemperatur gebracht und mit einer gesättigen Lösung NaCl verdünnt. Das organische Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck eingeengt, unter Erhalt einer wässrigen Suspension, die mit CHCl&sub3; extrahiert wurde. Die organische Phase wurde getrennt, mit einer gesättigten Lösung NaCl gewaschen, auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen. Das rohe Produkt wurde auf einer Silicagelsäule unter Verwendung von EtOAc/Cyclohexan (70 : 30 V/V) als Eluent gereinigt. 1,8 g der Verbindung (I-e) als weißer Feststoff und 3,6 g 3β-14 α-Dihydroxy-14,15-seco-5βcard-20(22)-enolid wurden erhalten.
(I-e) ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, ppm von TMS): 0,86 (3H, t); 0,94 (3H, s); 1,02 (3H, s); 2,50 (1H, dd); 2,75 (1H, m); 4,15 (1H, bs); 4,72 (1H, dd); 4,97 (1H, dd); 5,90 (1H, bt).

Beispiel 6

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-8,20(22)-dienolid (I-f)

Zu einer Lösung aus 770 mg 3β-Acetoxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card- 20(22)-enolid (1-d, 3-Acetat), erhalten wie in Bsp. 4 beschrieben in THF (23 ml), wurden 0,9 g Pyridiniumbromidperbromid gegeben und die Reaktionsmischung bei Raumtemperatur 18 h gerührt. Die Reaktionsmischung wurde dann in Wasser gegossen und mit EtOAc extrahiert; die organische Phase wurde getrennt und mit 1 NaCl und mit einer gesättigten Lösung NaCl gewaschen. Das Lösungsmittel wurde durch Verdampfung unter vermindertem Druck entfernt. Der ölige Rest wurde 30 Minuten lang bei 70ºC erwärmt und durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von Cyclohexan/CH&sub2;Cl&sub2;/EtOAc (3 : 2 : 1 V/V/V) als Eluent gereinigt, unter Erhalt von 400 mg (I-f 3-Acetat), bei dem die Schutzgruppe durch das in Bsp. 4 beschriebene Verfahren abgespalten wurde; 200 mg der Verbindung (I-f) als weißer Feststoff wurden erhalten.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, ppm von TMS): 0,88 (3H, t); 1,14 (3H, s); 1,17 (3H, s); 2,76 (1H, dd); 3,92 (1H, bs); 4,74 (1H, dd); 4,78 (1H, dd); 5,83 (1H, bt).

Beispiel 7

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-nitril (1-g)

Zu einer Lösung aus 2,0 g 3β-Acetoxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card- 20(22)-enolid-15-carbonsäure (Cohnen E., Wedemeier K., Sinnwell V. (1982), Cardenolide, I. D-Ringspaltung von Cardenoliden, Liebigs Ann. Cehm. 908- 913) in Dioxan (30 ml) wurden 4,0 ml SOCl&sub2; gegeben und die Reaktionsmischung 2 h bei 50ºC erwärmt. Danach wurde die Temperatur auf 100ºC erhöht und ein Stickstoffstrom wurde in die Reaktionsmischung geblubbert, um das Lösungsmittel und überschüssiges Reaktionsmittel zu entfernen. Der Rest wurde in Dioxan (30 ml) aufgelöst und die Reaktionsmischung auf 0ºC gekühlt. Zu dieser Zeit wurde gasförmiges NH&sub3; 30 Minuten lang in die Lösung geblubbert; die Temperatur der Reaktionsmischung wurde auf Raumtemperatur erhöht und nach 1 h wurden 10 ml Ch&sub2;Cl&sub2; zu der Mischung gegeben. Das feste Präzipitat, das sich gebildet hatte, wurde afiltriert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck eingeengt. 2,5 g eines Amides wurden erhalten, das in dem folgenden Schritt ohne weitere Reinigung erhalten wurde.
Das Amid wurde in 30 ml Pyridin aufgelöst und 0,82 ml POCl&sub3; zu der resultierenden Lösung gegeben. Die Reaktionsmischung wurde 24 h bei 60ºC erwärmt und dann in eine Mischung aus 1 N HCl und Eis gegossen. Die somit erhaltene Suspension wurde mit CH&sub2;Cl&sub2; extrahiert, die organische Phase getrennt, mit Wasser gewassen, auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck eingeengt; der erhaltene Rest wurde mit verdünnter Säure wie in Beispiel 4 behandelt und durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von CH&sub2;Cl&sub2;/EtOAc (50 : 50 V/V) als Eluent gereinigt; 0,5 g der Verbindung (I-g) als weißer Feststoff wurden erhalten.
¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;, ppm von TSM): 1,05 (3H, s); 1,27 (3H, s); 2,59 (1H, dt); 2,65 (1H, dd); 3,10 (1H, dd); 4,13 (1H, bs); 4,80 (1H, dd); 4,88 (1H, dd); 6,09 (1H, bs).

Beispiel 8

3β,14β-Dihydroxy-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-nitril (I-H)

Zu einer Lösung aus 1,66 g 3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card- 20(22)-enolid-15-nitril (I-g) in MeOH (135 ml), bei -30ºC gehalten; wurden 240 mg NaBH&sub4; gegeben; eine Stunde später wurden 10 ml einer Lösung aus 10% HOAc zu der Reaktionsmischung gegeben, die Temperatur konnte sich auf Raumtemperatur erhöhen und die Mischung wurde mit einer gesättigten Lösung NaCl verdünnt. Das organische Lösungsmittel wurde unter vermindertem Druck abgezogen und die resultierende Suspension mit CH&sub2;Cl&sub2; extrahiert; die organische Phase wurde getrennt, mit Wasser gewaschen, auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck abgezogen. Das rohe Produkt wurde durch Silicagelchromatographie unter Verwendung von CH&sub2;Cl&sub2;/EtOAc (70 : 50 V/V) als Eluent gereinigt. 0,38 g der Verbindung (I-h) als weißer FEststoff und 0,42 g 3β,14α-Dihydroxy-14,15- seco-5β-card-20(22)-enolid-15-nitril wurden erhalten.
(I-h) ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3;/CD&sub3;OD, ppm von TMS): 0,89 (3H, s); 0,99 (3H, s); 2,49 (1H, dd); 2,72 (1H, d); 2,81 (1H, dd); 3,05 (1H, dd); 4,07 (1H, bs); 4,80 (1H, dd); 4,98 (1H, dd); 6,02 (1H, bs)

Beispiel 9

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-(2- dimethylaminoethoxy-(E)-iminoethyl)(I-i) und 3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco- 5β-card-20(22)-enolid-15(2-dimethylaminoethoxy-(Z)-iminoethyl (I-1)

Eine Lösung aus 0,5 g 3β-Acetoxy-14,15-dioxo-14,15-seco-5β-card- 20(22)-enolid (IV) (Cohnen E., Wedemeier K., Sinnwell V. (1982) Cardenolide I. D-Ringspaltung von Cardenoliden, Liebigs Ann. Chem. 908-913), 0,2 g Natriumacetat und 0,42 g 2-Dimethylaminoethoxyamindichlorhydrat in 70 ml 96%-igem Ethanol wurden 2 h bei 50ºC erwärmt. Das organische Lösungsmittel wurde durch Verdampfung unter vermindertem Druck entfernt und der Rest mit CH&sub2;Cl&sub2; und Wasser extrahiert. Die organische Phase wurde getrennt, mit Wasser gewaschen, auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert und das Lösungsmittel unter vermindertem Druck eingeengt. Der rohe Rest wurde in Methanol (100 ml) aufgelöst und in einer sauren Umgebung wie in Beispiel 4 beschrieben hydrolysiert. Nach der Reinigung auf einer Silicagelsäule unter Verwendung von CH&sub2;Cl&sub2;/MeOH (80/10 V/V) als Eluent wurden 0,15 g der Verbindung (I-i) als weißer Schaum und 0,18 g der Verbindung (I-1) als gelber Schaum erhalten.
(I-i) ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3; ppm von TMS): 1,05 (3H, s); 1,28 (3H, s); 2,27 (3H, s); 2,35-3,10 (6H, m); 4,08 (2H, t); 4,14 (1H, m); 4,25-4,95 (2H, m); 5,91 (1H, m); 7,36 (1H, dd).
(I-l) ¹H-NMR (300 MHz, CDCl&sub3; ppm von TMS): 1,05 (3H, s); 1,28 (3H, s); 2,31 (3H, s); 2,35-3,07 (6H, m); 4,14 (1H, m); 4,16 (2H, t); 4,68 - 4,90 (2H, m); 5,91 (1H, m); 6,57 (1H, dd)

Beispiel 10

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)enolide-15-(E)-(guanidinoimino) (I-m)

Zu einer Lösung aus 0,5 g 3β-Acetoxy-14,15-dioxo-14,15-seco-5β-card- 20(22)-enolid (IV) (Cohnen E., Wedemeier K., Sinnwell V. (1982), Cardenolide, I. D-Ringspaltung von Cardenoliden, Liebigs Ann. Chem. 908-913) in 25 ml einer Mischung (1 : 1 V/V) aus Dioxan und Wasser wurden 0,19 g Aminoguanidinbicarbonat, aufgelöst in 10 ml der gleichen Lösungsmittelmischung, zugegeben. Die Reaktionsmischung wurde bei Rückflußtemperatur 1 h erwärmt und das organsiche Lösungsmittel durch Verdampfung unter vermindertem Druck entfernt. Die somit erhaltene wässrige Suspension wurde mit einer (9 : 1 V/V) Mischung aus CHCl&sub3;/MeOH extrahiert; die organische Phase wurde getrennt, mit einer gesättigtren Lösung NaCl gewaschen, auf wasserfreiem Na&sub2;SO&sub4; dehydratisiert und das Lösungsmittel durch Verdampfung unter vermindertem Druck entfernt. Der somit erhaltene Rest wurde mit verdünnter Säure wie in Beispiel 4 beschrieben behandelt und das Silicagelchromatographie unter Verwendung von CHCl&sub3;/MeOH/NH&sub4;OH (80/20/2 V/V/V) als Eluent gereinigt. 0,15 g der Zielverbindung wurden als weißer Feststoff erhalten.
¹H-NMR (300 MHz, DMSO-D&sub6;, ppm von TMS); 0,99 (3H, s); 1,19 (3H, s); 2,01 (3H, s); 2,30 - 2,70 (3H, m); 3,18 (1H, dd); 4,81 (2H, m); 4,91 (1H, m); 5,40 - 5,91 (4H, bb); 6,02 (1H, s); 7,23 (1H, dd).

Claims

1. Seco-D-Steroide der allgemeinen Formel (I)

worin R 3-Furyl oder 2,5-Dihydro-5-oxo-3-furyl ist; wenn R 3-Furyl ist, das Symbol eine Einfachbindung bedeutet, R¹ Methyl oder Hydroxymethyl ist; R² und R³ OH bzw. H sind oder zusammen eine Ketogruppe bilden;

mit dem Vorbehalt, daß dann, wenn R² und R³ zusammen eine Ketogruppe bilden, R¹ Methyl ist,

wenn R 2,5-Dihydro-5-oxo-3-furyl ist, das Symbol eine Einfach- oder Doppelbindung ist; R¹ Methyl,

Cyano oder CH=N R&sup4; ist

R² und R³ die oben angegebene Bedeutung haben; mit dem

Vorbehalt, daß dann, wenn R¹ CH=N R&sup4; ist

R² und R³ zusammen eine Ketogruppe bilden; mit dem Vorbehalt, daß dann, wenn das Symbol eine Doppelbindung bedeutet, R¹ Methyl und R², R³ zusammen eine Ketogruppe bilden; worin das Symbol das Z oder E-Isomer ist; R&sup4; NHC(=NH)NR&sup5;R&sup6; oder OR&sup7; bedeutet;

worin R&sup5;, R&sup6;, die gleich oder verschieden voneinander sind, H oder 4-Alkyl sind; oder worin R&sup5; und R&sup6; zusammen mit dem Heteroatom, an das sie gebunden sind, einen 5- oder 6-gliedrigen, monoheterozyklischen Ring bilden können;

R&sup7; H, CH&sub3;, C&sub2;&submin;&sub6;-Alkyl, unsubstituiert oder substituiert durch NR&sup8;R&sup9; ist, worin

R&sup8; und R&sup9;, gleich oder verschieden, H oder C&sub1;&submin;&sub4;-Alkyl sind; und die pharmazeutisch akzeptablen Salze davon.

2. Verbindung nach Anspruch 1, die ausgewählt ist aus:

17β-(3-Furyl)-14,15-seco-5β-androstan-3β,14β-diol,

17β-(3-Furyl)-14,15-seco-5β-androstan-3β,14β,15-triol,

3β-Hydroxy-17β-(3-furyl)-14,15-seco-5β-androstan-14-on,

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid,

3β,14β-Dihydroxy-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid,

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-8,20(22)-dienolid,

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-nitril,

3β,14β-Dihydroxy-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-nitril,

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)enolid-15-(2- dimethylaminoethoxy-(E)-iminoethyl)

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-(2- dimethylaminoethoxy-(Z)-iminoethyl)

3β-Hydroxy-14-oxo-14,15-seco-5β-card-20(22)-enolid-15-(E)- (guanidinimino).

3. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend eine Verbindung der Formel (I) und einen pharmazeutisch akzeptablen Träger dafür.