DE69517191T2

DE69517191T2 - Wasserlösliche derivate epipodophyllotoxine, verfahren zu ihrer herstellung, ihre verwendung als medikament und ihre verwendung zur herstellung eines antikrebsmittels

Info

Publication number: DE69517191T2
Application number: DE69517191T
Authority: DE
Inventors: Yves Guminski; Bridget Hill; Thierry Imbert; Barbara Monse; Jean-Pierre Robin
Original assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Current assignee: Pierre Fabre Medicament SA
Priority date: 1994-10-21
Filing date: 1995-10-20
Publication date: 2001-02-15
Anticipated expiration: 2015-10-21
Also published as: PT787135E; US6107284A; JPH10507462A; AU705248B2; EP0787135A1; WO1996012727A1; FR2725990A1; AU3808795A; ATE193297T1; FR2725990B1; GR3034155T3; DK0787135T3; NZ294878A; DE69517191D1; ES2148572T3; EP0787135B1

Description

In der Klasse der Epipodophylloide werden bestimmte Verbindungen wie Etoposid oder Teniposid, Derivate von Epipodophyllotoxin, halbsynthetische Verbindungen aus natürlichem Lignan bei der Herstellung von Medikamenten zur Behandlung von zahlreichen Formen von Krebs verwendet. Sie werden aktuell als Hauptprodukte des therapeutischen Arsenals betrachtet.
Von den verschiedenen Krebsarten, die mit diesem Typ Verbindungen behandelt werden, kann man kleinzelligen Lungenkrebs, Embryonal-Tumore, Neuroblastome, Nierenkrebs, Lymphome, Morbus Hodgkin, akute Leukämien, und sogar Brustkrebs angeben. Etoposid wird vorteilhafterweise in Verbindung mit weiteren Anti-Krebs- Produkten und insbesonderen den Platin-Derivaten wie Cis-Platin angewendet.
Ein bedeutender Nachteil dieses Derivats, und genauso seines verwandten Derivats Teniposid ist sein Mangel an Wasserlöslichkeit. Es gibt keine kommerziell angebotenen wasserlöslichen Formen für intravenöse Anwendungen. Im Gegenteil wird das Lösen tatsächlich in partiell nichtwäßrigen Lösungsmitteln durchgeführt, erfordert eine Gabe durch langsame Perfusion und ruft bestimmte nicht wünschenswerte, wenn nicht sogar toxische Effekte hervor. Es besteht daher ein Bedarf an wasserlöslichen Formen von Produkten, die von dieser Verbindungsklasse abgeleitet sind, um die Gabe an den Kranken genauso wie die Bioverfügbarkeit zu verbessern. Die vorliegende Erfindung betrifft daher Derivate von Etoposid, die aufgrund der Anwesenheit von funktionellen Phosphat- oder Carboxylat-Gruppen wasserlöslich sind, deren Additionssalze mit organischen oder mineralischen Säuren wasserlösliche Einheiten bilden. Diese wäßrige Formulierung bietet den Vorteil, weniger toxisch und leichter verabreichbar zu sein als die momentan kommerziell angebotenen Formen.
Die Herstellung von Etoposid-Derivaten hat zu zahlreichen Arbeiten und zahlreichen Patenten Anlaß gegeben; und insbesondere die Diester-Derivate 2", 3" und die Triester 2", 3", 4' von Etoposid wurden im Patent FR 2 699 535-A1 beansprucht. Bestimmte von diesen Derivaten haben eine Aktivität gezeigt, die der von Etoposid gleich oder überlegen ist, und eine geringere Toxizität. Eine zusätzliche Verbesserung wird erzielt aufgrund der Wasserlöslichkeit, die ihnen eine leichte Verabreichbarkeit verleiht und aufgrund einer besseren Passage durch die verschiedenen biologischen Membranen eine gesteigerte Bioverfügbarkeit erwarten läßt,.
Die Literatur erwähnt Patente, die mit Epotosid verwandte Verbindungen betreffen und eine Verbesserung der Wasserlöslichkeit anstreben, insbesondere (US 4 904 768, EP 0 369 369-A2, EP 0 196 618-A1, EP 0 320 988, EP 0 415 453-A2).
Der Vorteil, die Wasserlöslichkeit von Verbindungen durch Phosphatgruppen zu modulieren, wurde in einigen Fällen in günstiger Weise genutzt, sei es auf dem Gebiet der Anti-Krebs-Mittel WO 8707609, sei es auf dem Gebiet der Analgetika (BE 893 563); trotz allem erlaubt jedoch nichts die Vorhersage, daß die so erhaltene Verbindung eine interessante biologische Aktivität vollständig beibehält, genauso wie bei der Verbindung, aus der sie erhalten wurde.
Es wurde gefunden, daß die Phosphat- und Carboxylat-Derivate eine Wasserlöslichkeit besitzen, die die Gabe auf dem Injektionsweg ermöglicht, und darüber hinaus eine verbesserte Anti-Krebs-Aktivität verglichen mit Etoposid zeigen.
Die vorliegende Erfindung betrifft daher eine Verbindung der allgemeinen Formel I
wobei R' eine Phosphatmonoester-Gruppe; eine Carbamat-Gruppe vom Typ -CO-N(R&sub1;R&sub2;), wobei N(R&sub1;R&sub2;) eine Aminodiacetatgruppe oder ein polycyclisches Amin wie 3-Aminochinuclidin darstellt; eine Phosphonoacetatgruppe CO-CH&sub2;-PO&sub3;H&sub2;; CO-CH&sub2;-SO&sub2;CH&sub2;COOH; CO-CH&sub2;-OCH&sub2;COOH; oder einen Rest R der Formel A-Z-CH&sub2;-CO darstellt, wobei
- Z ein Sauerstoff-, Schwefelatom, eine SO&sub2;-Gruppe, eine lineare oder verzweigte (C&sub1;-C&sub4;)Alkylengruppe darstellt, und
- A einen substituierten oder unsubstituierten Phenylkern darstellt, unter der Bedingung daß:
- für den Fall, daß R' = R, d. h. triacylierte Derivate, A einen aromatischen Kern darstellt, der eine versalzbare Funktion aufweist, mit Ausnahme von 4-Hydroxyphenyl,
- für den Fall, daß R' ≠ R, A einen Benzyl-, Naphthyl-, Heteroaryl-, substituierten oder unsubstituierten Phenylrest darstellt, wobei in diesem Fall Phenyl je nach seiner Position am aromatischen Ring einmal, zweimal, dreimal, viermal oder fünfmal durch gleiche oder verschiedene Gruppen substituiert sein kann,, die ausgewählt werden aus den Gruppen Halogen, F, Cl, Br, lineares oder cyclisches (C&sub1;-C&sub6;)Alkoxy, (C&sub1;-C&sub6;)Alkyl, Methylendioxy, OCF&sub3;, CF&sub3;, NO&sub2;, CN, OCH&sub2;-Aryl, OH, OPO&sub3;H&sub2;, CH&sub2;-PO&sub3;H&sub2;, PO&sub3;H&sub2;, OCH&sub2;CO&sub2;H, COOH, CH&sub2;COOH, COCH&sub3;, CHO, genauso wie ihre therapeutisch verträglichen und wasserlöslichen Salze mit Mineralsäuren oder -basen oder organischen Säuren oder Basen.
In vorteilhafter Weise werden die Verbindungen der allgemeinen Formel I ausgewählt mit R', das eine Phosphatmonoester-Gruppe (PO&sub3;H&sub2;), ein Carbamat CONR&sub1;R&sub2; darstellt, wobei NR&sub1;R&sub2; eine Aminodiacetatgruppe oder ein Amino-3- chinuclidin darstellt, wobei R' gleichzeitig eine Phosphonoacetatgruppe CO-CH&sub2;-PO&sub3;H&sub2;, Acetyl, Phenylsulfonylacetyl, Pentafluorophenoxyacetyl, 2- und 4-Formylphenoxyacetyl, 4-Cyanophenoxyacetylgruppe darstellt.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch Verfahren zur Herstellung einer Verbindung der Formel I, dargestellt im Schema 1 (Weg A), bei dem man ein glykosyliertes Zwischenprodukt der allgemeinen Formel II
mit einem Zwischenprodukt der allgemeinen Formel III zur Bildung eines Zwischenproduktes IV
umsetzt, wobei R die vorstehende Bedeutung hat. R&sub4; ist eine Schutzgruppe, beispielsweise Benzyloxycarbonyl, oder ein Carbamatrest. Dieses Herstellungsverfahren ist im älteren Patent FR 2 699 535 in Beispiel 17 beschrieben. Um Verbindungen der Formel IV zu bilden, bei denen R&sub4; eine Schutzgruppe ist und R wie vorstehend definiert ist. Dieses Derivat IV wird an seiner Position 4' (R&sub4;), sei es durch Hydrogenolyse oder durch schwach-basische Hydrolyse, zur Bildung des Derivats I (R' = H) entschützt. Es ist auch möglich, diese Verbindungen der Formel I, bei denen R' = R ist, durch diese Methode herzustellen, indem das Zwischenprodukt der Formel III verwendet wird, bei dem R&sub4; eine Acylgruppe R darstellt. Dieses Verfahren ist ebenfalls im älteren Patent FR 2 699 535 in Beispiel 1 beschrieben. Je nach der Kompatibilität der Substituenten R des Glykosyl ist es auch möglich, die Verbindungen der Formel I ausgehend von Etoposid selbst herzustellen (Weg B).
In einem ersten Schritt kann Etoposid in Position 4' (R&sub4;) mit einer Gruppe R&sub4; = Benzyloxycarbonyl oder mit einer Chinuclidincarbamat-Gruppe (R&sub4; = CONH3- Chinuclidinyl) geschützt werden, erhalten durch schrittweise Reaktion von Phosgen, gefolgt von Amino-3-chinuclidin mit Etoposid, zur Bildung des Zwischenprodukts V.
In allgemeiner Weise werden die Zwischenprodukte V durch Säurechlorid- Derivate der zuvor definierten Gruppen R acyliert (gebildet durch Einwirkung von Oxalylchlorid) in Gegenwart von Pyridin in Methylenchlorid bei niedriger Temperatur unter der Voraussetzung, daß die anderen Funktionen der Gruppe R unter diesen Bedingungen inert sind, wenn nicht, werden die Phenol-, Carboxy- oder Phosphon- Substituenten in Form von Ethern oder Benzylestern geschützt, was die Deblockierung im nachfolgenden Schritt der Synthese durch Hydrogenolyse ermöglicht (V ergibt I R' = H). Die Derivate, bei denen R' = R ist, werden hergestellt ausgehend von Etoposid durch Triacylierung an den Positionen 2", 3" und 4' (Weg C).
Im Fall von funktionellen Derivaten R, die empfindlich gegen die Bedingungen der Hydrogenolyse sind wie beispielsweise, jedoch nicht ausschließlich, die Gegenwart von Cl oder NO&sub2;, kann die für die Position 4' ausgewählte Schutzgruppe ein Carbamat- Derivat vom Typ CONH-3-Chinuclidinyl oder Carbonat oder Ester mit geringem Molekulargewicht sein, wie Chloracetate, die schließlich unter anderem unter schwachbasischen Bedingungen wie einer wäßrigen Natriumbicarbonat-Lösung bei niedriger Temperatur abgespalten werden können, ohne daß die Stereochemie der trans-Lactone beeinträchtigt wird.
Der letzte Schritt I (R' = H), der 1 (R' ≠ H) ergibt, besteht in einer Phosphorylierung zur Bildung eines Monoester-Phosphats des oder der Phenole mit POCl&sub3; in Gegenwart von Pyridin, gefolgt von einer langsamen Hydrolyse in saurem wäßrigen Medium.
Die Herstellung von Derivaten, die in Position 4' einen Diacetat-Carbamatrest des Typs R' = CON(CH&sub2;CO&sub2;H)&sub2; besitzen, verläuft durch Einwirkung von Phosgen auf die Verbindung der Formel I (R' = H) zur Bildung des nicht isolierten Chlorcarbonat- Zwischenprodukts (R' = COCl), und anschließend in der Umsetzung mit dem Benzyldiesters von Aminodiessigsäure, gefolgt von einer Hydrogenolyse zur anschließenden Freisetzung der sauren Funktionen in freier Form.
Die Phosphonoacetat-Derivate in Position 4' werden erhalten durch Umsetzung des in dieser Position freien Phenols mit dem Säurechlorid von Diethylphosphonoessigsäure (Synthesis 1987, 131) oder Dibenzylphosphonoessigsäure (Tet. Let. 1974, Nr. 9, 711), und dann in einer Hydrolyse der Phosphonesterfunktion durch Trimethylsilylbromid in Gegenwart von Pyridin in Acetonitril im Fall von Ethylestern oder durch Hydrogenolyse im Fall von Benzylestern. Die Derivate der Formel I, bei denen R' = R ist, d. h., die dieselbe Acyl-Substitution an den Positionen 2", 3" und 4' aufweisen, erfolgt auf dem Weg C durch Triacylierung von Etoposid selbst mit Acylgruppen AZCH&sub2;CO, die eine Carboxylfunktion an der zuvor definierten Gruppe A aufweisen, geschützt beispielsweise in Form eines Benzylesters, den man durch schlußendliche Hydrogenolyse entschützt.
Die so erhaltenen Carboxyl-Derivate oder die Phosphat- oder Phosphonat- Derivate werden in Wasser gegebenenfalls in Gegenwart eines organischen Cosolvens durch Zugabe von organischen oder mineralischen Basen in stöchiometrischer Menge bezogen auf die vorhandenen Säuren und beispielsweise mit N-Methylglucamin, Triethanolamin, Lysin versalzt.
Die amorphen oder kristallinen Salze werden durch einfache Lyophilisierung erhalten. Schema 1

Messung der Wasserlöslichkeit

Die Löslichkeit in Wasser der Salze der Phosphat- oder Carboxylat-Derivate durch Zugabe von physiologisch verträglichen organischen Aminen wie beispielsweise N- Methylglucamin, Triethanolamin, Lysin oder der Salze mit mineralischen Kationen wie Natrium, erhalten in lyophilisierter Form oder durch gleichzeitige Zugabe einer Base zu der freien Säureform der Verbindung, hat als Beispiele die folgenden Ergebnisse ergeben. Tabelle II
Die so hergestellten Derivate sind unter den üblichen Bedingungen neutraler und saurer pH und Temperatur stabil. Die Phosphat-Derivate an Position 4' haben eine ausreichende chemische Stabilität, um für verschiedene pharmazeutische Formulierungen geeignet zu sein.

Biologisches Experiment

Die Moleküle wurden in vitro in einem biologischen Experiment getestet und haben ihren Nutzen als Anti-Krebs-Mittel in den folgenden Tests gezeigt.
Die Messung der Inhibierung der Aktivität von Topoisomerase II wird durchgeführt nach dem in der Literatur beschriebenen Verfahren: "Nuclear topoisomerse II levels correlate with the sensitivity of mammalian cells to intercalating Agents and Epipodophyllotoxins". LD. HICKSON et coll., J. Biol. Chem. (1988), 263, 17724 -1772.
Diese Messung hat die folgenden Ergebnisse geliefert.

Tabelle I

Verbindungen Inhibierungstest der Aktivität von Topoisomerase II (ED&sub5;&sub0;M)
Etoposid 5,6 · 10&supmin;&sup5;
Etopofos > 10&supmin;&sup4;
Beispiel 1 5,6 · 10&supmin;&sup6;
Beispiel 3 3,2 · 10&supmin;&sup7;
Beispiel 4 1,8 · 10&supmin;&sup6;
Beispiel 6 3,2 · 10&supmin;&sup7;
Beispiel 7 5,6 · 10&supmin;&sup5;
Beispiel 11 5,6 · 10&supmin;&sup6;
Beispiel 19 5,6 · 10&supmin;&sup6;
Beispiel 24 5,6 · 10&supmin;&sup6;
Beispiel 25 7,6 · 10&supmin;&sup7;
Der Vergleich von Etoposid mit seinem löslichen 4'-Phosphat-Analogon Etopofos (US-4 904 768) zeigt einen Aktivitätsverlust in vitro. Hier sind die erfindungsgemäßen Verbindungen genauso, wenn nicht sogar aktiver als Etoposid. Die zuvor definierten Gruppen R und R' führen bei den erfindungsgemäßen Verbindungen zu einer Erhöhung der Inhibierung der enzymatischen Aktivität in vitro um einen Faktor 10 bis 100 verglichen mit Etoposid.
Man kann angesichts dieser Ergebnisse den Nutzen von Verbindungen mit einer Anti-Krebs-Aktivität einschätzen, die gleich oder höher ist als die von Etoposid, sowie mit einer geringeren Toxizität, für verschiedene Formen von Krebs wie insbesondere kleinzelligen Lungenkrebs, die Embryonal-Tumore, Neuroblastome, Nierenkrebs, pädiatrische Tumore, Hodgkin- und Nicht-Hodgkin-Lymphome, akute Leukämien, Plazenta-Choriokarzinome und Mamma-Adenokarzenome.
Diese Derivate können ebenso bei Pathologien verwendet werden, die durch das Human-Papilloma-Virus verursacht wurden, wie für rheumatoide Arthritis, die mit Krebs- Pathologien verbunden sind oder nicht.
Darüber hinaus können diese Derivate zur Erhöhung der therapeutischen Wirksamkeit von Topoisomerase II-Inhibitor-Verbindungen eingesetzt werden und insbesondere für die Behandlung von Tumoren, die normalerweise gegen die übliche Therapie resistent sind, d. h. colorektalen Krebs und Melanome. Weiter kann man den Nutzen dieser Produkte einschätzen, die einerseits eine bedeutende Wasserlöslichkeit aufweisen, was die Gabe auf intravenösem Weg und erleichtertem oralem Weg ermöglicht, und andererseits eine bessere Bioverfügbarkeit zeigen als die von Etoposid.
Die vorliegende Erfindung betrifft auch die pharmazeutischen Zusammensetzungen, die mindestens eine Verbindung der allgemeinen Formel I gemäß der Erfindung und einen geeigneten Exzipienten umfassen.
Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können in angepaßter Weise für die Gabe auf Injektionsweg oder auf oralem Weg in Form von Kapseln, Gelkapseln, Tabletten mit einem Gewicht von 2 bis 200 mg/m² fit den Injektionsweg und 5 bis 400 mg/m² in 24 Stunden für den oralen Weg zubereitet werden.
Als Beispiel und in nicht beschränkender Weise beschreiben die folgenden Beispiele die Herstellung von erfindungsgemäßen Verbindungen:

Beispiel 1 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bisphenoxyacetyl-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)- epipodophyllotoxin-4'-desoxy-4'-phosphat
Zu einer Lösung von 4'-Demethyl-4-O-(2,3-bisphenoxyacetyl-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)-epipodophyllotoxin (1 g, 1,16 mmol) in 50 ml THF bei 10ºC werden 0,22 ml (2,33 mmol) POCl&sub3; und anschließend 0,5 ml (3,5 mmol) Triethylamin gegeben. Bei dieser Temperatur wird während 20 Minuten weiter gerührt. Die Hydrolyse wird anschließend durch Zugabe von 20 ml N-Salzsäure zu dem Medium bewirkt und anschließend eine Nacht bei Umgebungstemperatur gerührt. Das Reaktionsmedium wird mit Ethylacetat extrahiert, um das Phosphat-Derivat mit quantitativer Ausbeute zu erhalten, das in Isopropylether kristallisiert.
Die Eigenschaften sind die folgenden:
Smp.ºC - 175ºC Analyse C&sub4;&sub5;H&sub4;&sub5;O&sub0;P; 1,5 H&sub2;O; M = 963,831
Massenspektrum (FAB) m/e 959 (M&spplus; + Na)
¹H-NMR 200 MHz CDCl&sub3; δ 1,30 (3H, d, 3 = 4,4 Hz, H&sub8;"); 2,9 (1H, m, H&sub3;); 3,1 (1H, m, H&sub2;); 5,0 (1H, dd, J = 8,8 Hz, H&sub2;"); 5,3 (1H, dd, J ~ 9,2 Hz, H&sub3;"); 5,5 (1H, s, OCHAO); 5,7 (1H, s, OCHBO); 6,25 (2H, s, H&sub2;'H&sub6;'); 6,44 (1H, s, H&sub8;).
IR ν (KBr) 2941, 1774, 1599, 1487.
N-Methylglucamin-Salz
Das vorstehende Phosphat-Derivat wird in Wasser suspendiert, und man gibt zwei Äquivalente N-Methylglucamin als 0,1M Lösung in Wasser zu. Die Lösung wird unter Ultraschall-Beschallung gerührt und auf 200 ml verdünnt. Nach Filtration wird die Lösung eingefroren und anschließend während 12 Stunden lyophilisiert. Der Rückstand wird anschließend in Aceton aufgenommen und kristallisiert, filtriert und getrocknet und ergab 350 mg eines weißen Feststoffs.
Smp. ~ 135ºC
Analyse C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub9;N&sub2;O&sub3;&sub0;P, H&sub2;O M = 1345,256
IR ν (KBr) 3426, 1772, 1599, 1487
200 MHz ¹H-NMR CDCl&sub3; δ 1,22 (3H, d, J = 4,8 Hz, H&sub8;"); 2,3 (6H, s, N- CH&sub3;), 2,6-3,0 (2H, m, H&sub2;-H&sub3;); 5,36 (1H, dd, J = 7,8 Hz, H&sub3;"); 5,74 (1H, s, OCHAO); 5,97 (1H, s, OCHBO); 6,15 (2H, s, H&sub2;'-H&sub6;'); 6,5 (1H, s, H&sub8;); 7,10 (1H, s, H&sub5;); 6,65 (2H, d, J = 8 Hz, Ar Ortho); 6,8 a 6,96 (2H, d, J = 8 Hz Ar ortho et 2H, t, J = 7 Hz, Ar para); 7,24 (4H, m, Ar meta).
Natrium-Salz
Das vorstehende Phosphat-Derivat wird als Lösung in Aceton mit einem Ionenaustauscherharz (Dowex 50 · 8-100) gerührt, das durch Elution mit N Soda vorbereitet war. Das Medium wird mit Wasser verdünnt, filtriert und konzentriert. Der wäßrige Rückstand wird lyophilisiert und liefert das Di-Natriumsalz Smp. ~ 190ºC Analyse C&sub4;&sub5;H&sub4;&sub3;Na&sub2;O&sub2;&sub0;P3.3H&sub2;O M = 1040, 208
Durch dieselbe Methode wir in Beispiel 1, jedoch unter Verwendung der entsprechenden Zwischenprodukte der Formel I (R' = H) wurden die folgenden neuen Derivate hergestellt:

Beispiel 2 -Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-cyclohexyloxyacetyl-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)- epipodophyllotoxin-4'-desoxy-4'-phosphat.
Ausbeute = 90% Smp. ~ 160ºC Analyse C&sub4;&sub5;H&sub4;&sub5;O&sub2;&sub0;P, H&sub2;O M = 966, 920
N-Methylglucamin-Salz
4' -Demethyl-4-O-(2, 3-bis-cyclohexyloxyacetyl-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)- epipodophyllotoxin-4'-desoxy-4'-phosphat, Di-N-methylglucamin-Salz
Ausbeute: = 50% Smp. ~ 112ºC Analyse C&sub5;&sub9;H&sub9;N&sub2;O&sub3;&sub0;Pm 4 H&sub2;O M = 1411, 420

Beispiel 3 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-(4-trifluoromethylphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)-epipodophyllotoxin-4'-desoxy-4'-phosphat, Di-N-Methylglucamin-Salz
Ausbeute = 68% Smp. ~ 132ºC Analyse C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub7;N&sub2;O&sub3;&sub2;F&sub6;P, 2,6 WO M 1541, 840

Beispiel 4 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-(4-fluorophenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)- epipodophyllotoxin-4'-desoxy-4'-phosphat Di-N-Methylglucamin-Salz
Ausbeute = 60% Smp. ~ 130ºC Analyse C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub7;N&sub2;O&sub3;&sub0;F&sub2;P, 2,7 H&sub2;O M = 1363, 240

Beispiel 5 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-(3,4-methylendioxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)-epipodophyllotoxin-4'-desoxy-4'-phosphat, Di-N-Methylglucamin-Salz
Ausbeute = 50% Smp. ~ 120ºC Analyse C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub9;N&sub2;O&sub3;&sub4;P, H&sub2;O M = 1433, 274

Beispiel 6 - Formel I

4'-(4-Phosphonooxyphenoxyacetyl)-4'-demethyl-4-O-(2,3-bis-(4- phosphonooxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Das Phenol-Derivat der Formel I, entsprechend R = R' = 4- Hydroxyphenoxyacetyl, ist im Patent FR 2 699 535-A1 als Beispiel 16 beschrieben, hergestellt nach Weg A. 1 g dieses Derivats (9,6 mmol) wird unter Stickstoffatmosphäre in 50 ml THF bei -10ºC gegeben, und man fügt 1,2 ml (8,7 mmol) Triethylamin zu und anschließend tropfenweise 0,53 ml (5,8 mmol) POCl&sub3;, und man rührt während 30 Minuten. Nach Filtration des gebildeten Triethylaminhydrochlorids wird THF abgedampft. Der Rückstand wird in 1 N HCl aufgenommen und bei Raumtemperatur während 30 Minuten gerührt. Der weiße Niederschlag wird abfiltriert, mit Wasser gewaschen und im Vakuum bei 60ºC über Nacht getrocknet. Man erhält 800 mg des Derivats in Form des freien Phosphats. Ausbeute = 80%
Smp. ~ 160ºC Analyse C&sub5;&sub3;H&sub5;&sub3;O&sub3;&sub1;P&sub3; M = 1278, 898
Massenspektrum (FAB) m/e: 1277 (M&spplus; -1)
IR (KBr) ν (cm&supmin;¹) 3404, 1768, 1603, 1500, 1485, 1203, 1086
200 MHz ¹H-NMR (DMSO) δ: 1,23 (3H, d, 3 = 4,26 Hz H&sub8;"); 3,03 (2H, m, H&sub2;-H&sub3;); 5,37 (2H, m, H&sub2;"-H&sub3;"); 5,77 (1H, s, O-CHAO); 5,97 (1H, s, O-CHBO); 6,3 (2H, s, H&sub2;'-H&sub6;').
Die Herstellung des Glucamin-Salzes wird auf gleiche Weise wie in Beispiel 1 durchgeführt, jedoch unter Zugabe von 3 Äquivalenten N-Methylglucamin. Die Verbindung wird direkt nach Lyophilisierung mit einer Ausbeute von 88% erhalten und ergibt die folgenden Analysen: Smp. ~ 155ºC Analyse C&sub7;&sub4;H&sub1;&sub0;&sub4;N&sub3;O&sub4;&sub6;P&sub3; M = 1864, 54
IR (KBr) ν (cm&supmin;¹): 3458, 1768, 1604, 1500, 1485, 1199, 1084.

Beispiel 7 - Formel I

4-Demethyl-4-O-(2,3-bis-(4-phosphonooxyphenoxyacetysl)-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)-epipodophyllotoxin-4'-desoxy-4'-phosphat.
Durch dieselbe Reaktionsfolge wie für Beispiel 6, jedoch unter Verwendung des Derivats der Formel I (R = 4-Hydroxyphenoxyacetyl und R' = H). Beschrieben im französischen Patent FR 2 699 535-A1 als Beispiel 20 erhält man die Verbindung mit einer Ausbeute von: Smp. ~ 130º Analyse C&sub6;&sub6;H&sub9;&sub8;N&sub3;O&sub4;&sub3;P&sub3;, 6 H&sub2;O M = 1822, 503
IR (KBr) ν (cm&supmin;¹): 3429, 1763, 1508, 199, 1084.

Beispiel 8 - Formel I

4'-(4-Phosphonomethylphenoxyacetyl)-4'-demethyl-4-O-(2,3-bis-(4- phosphonomethylphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Erster Schritt: 4-Benzyloxyphenylmethyldiethylphosphonat
1 g (4,3 · 10-3 Mol) 4-Benzyloxybenzylchlorid werden 6 h mit 0,9 ml (5,15 · 10&supmin;³ Mol) Triethylphosphit unter Rückfluß erhitzt. Das Reaktionsmedium wird über 150 g SiO&sub2; filtriert, mit einer Mischung von Heptan-Ethylacetat (20-80) eluiert und ergibt nach Verdampfen 1,4 g des Phosphonat-Derivats (Ausbeute = 100%).
Zweiter Schritt: 4-Hydroxyphenylmethyldiethylphosphonat
In einem Autoklaven werden 1,1 g (3,3 · 10&supmin;³ Mol) des Benzyloxy-Derivats des ersten Schritts unter einem Wasserstoffdruck von 7 bar in Gegenwart von 200 mg Palladium-Kohle 10% in 15 ml einer Mischung Ethylacetat-Ethanol (90 -10) bei einer Temperatur von 80ºC während 12 Stunden unter Rühren hydriert. Nach Filtration des Katalysators wird das Filtrat unter reduziertem Druck eingedampft und liefert 800 mg (Ausbeute 100%) des Phenolderivats.
Dritter Schritt: Diethylphosphonomethylphenoxyessigsäure
Zu einer THF-Lösung (25ß ml) von 2,7 g (11 mmol) des vorstehenden Phenol- Derivats werden 1,3 g (26 mmol) NaH (50%ige Dispersion) bei Raumtemperatur gegeben, und anschließend werden 1,8 g (13 mmol) Bromessigsäure zugegeben und das Reaktionsmedium während 8 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Das Reaktionsmedium wird auf 1 l Eiswasser gegossen und mit Ethylether extrahiert. Die wäßrigen Phasen werden auf pH 1,2 angesäuert und mit Ethylacetat extrahiert, getrocknet, und eingedampft und ergeben 3,1 g (Ausbeute 94%) des Essigsäurederivats.
200 MHz ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 8,09 (breit 1H, austauschbar), 7,16-7,26 (dd, 2H, J = 8 Hz, 2 Hz, H aromatisch), 6,85 (2H, d, J = 8 Hz, H aromatisch), 4,6 (2H, s OCH&sub2;CO&sub2;H), 4,0 (4H, m, Phosphonatester OCH&sub2;), 3,12 (2H, d, J = 21,7 H&sub2;, CH&sub2;P), 1,23 (6H, t, J = 7 Hz, Phosphonatester OCH&sub2;CH&sub3;).
Vierter Schritt: Kondensation der im dritten Schritt erhaltenen Säure mit Etoposid
Zu 3 g (10,2 mmol) der vorstehenden im dritten Schritt erhaltenen Säure in Lösung in Methylenchlorid (15 ml) und 0,2 ml DMF bei 0ºC unter Stickstoff werden tropfenweise 1,4 g (11,2 mmol) Oxalylchlorid gegeben, nach einer bedeutenden CO&sub2;- Entwicklung läßt man das Reaktionmedium auf Raumtemperatur kommen. Man kühlt erneut auf 0ºC ab, um tropfenweise eine Lösung zuzugeben, die 1 g (1,7 mmol) Etoposid, 2 g (25,5 mmol) Pyridin in Methylenchlorid (45 ml) enthält. Am Ende der Zugabe wird das Medium noch während 4 Stunden gerührt, während es auf Raumtemperatur aufwärmt. Nach Verdampfen unter reduziertem Druck wird das Reaktionsmedium mit Toluol aufgenommen und eingedampft, der Rückstand wird mit Ethylacetat und N Salzsäure gerührt. Nach Extraktion wird die organische Phase mit einer eiskalten Natriumbicarbonatlösung und anschließend mit einer gesättigten NaCl-Lösung gewaschen, dekantiert, getrocknet, eingedampft, und ergibt einen braunen Schaum, der auf SiO&sub2; chromatographiert wird (Eluens CH&sub2;Cl&sub2;-MeOH-98-2) und ergibt nach Verdampfen einen festen Rückstand von 220 mg (Ausbeute 10%), Masse (FAB) m/e 1441 (M&spplus;).
200 MHz ¹H-NMR ergibt die charakteristischen Peaks dieser Moleküle: (CDCl&sub3;) δ, 7,20 (6H, m, H aromatisches Phosphonat), 6,65-6,93 (6H, d, J = 8,4 Hz, H aromatisches Phenoxy), 6,75 (1H, s H&sub5;), 6,47 (1H, s, H&sub8;), 6,24 (2H, s, H&sub2;', und H&sub6;'), 5,87 (1H, s, OCHAO), 5,61 (1H, s, OCHBO), 5,35 (1H, t, H&sub3;"), 5,05 (1H, t, H&sub2;"), 3,0 (6H, d, J = 21 Hz, CH&sub2;-Phosphonat).
Fünfter Schritt: Hydrolyse der Phosphonester
220 mg (0,16 mmol) des im vierten Schritt erhaltenen Phosphon-Triesterderivats werden bei 0ºC unter Stickstoff in CH&sub3;CN (50 ml) gegeben, und man gibt 0,26 ml Pyridin (3,2 mmol) und anschließend tropfenweise 0,49 g (3,2 mmol) Trimethylsilylbromid zu. Man rührt während 24 Stunden, während auf Raumtemperatur aufgewärmt wird. Man dampft bis zur Trockne ein, nimmt das Medium und das ausgefallene Produkt mit N HCl auf, filtriert den weißen Niederschlag, und wäscht mit Wasser bis zur Neutralität. Der Niederschlag wird in Methanol gelöst, filtriert und eingedampft. Der Rückstand wird mit Wasser aufgenommen und kristallisiert und ergibt 120 mg des Phosphonderivats (Ausbeute 57%).
Smp.: 190ºC Analyse (C&sub5;&sub6;H&sub5;&sub9;O&sub2;&sub8;P&sub3;, 5 H&sub2;O M = 1301, 41
IR ν (KBr) 3431, 2922, 1774, 1608, 1512, 1485
200 MHz ¹H-NMR (CD&sub3;OD) δ 7,15-7,23 (6H, m H aromatisches Methylphosphon), 7,04 (1H, s, H&sub5;), 6,9 (2H, d, H aromatisches Phenoxy), 6,8 (2H, d, H aromatisches Phenoxy), 6,67 (2H, d, H aromatisches Phenoxy), 6,50 (1H, s, H&sub8;), 6,35 (2H, s H&sub2;', H&sub6;'), 5,85 (1H, s, OCHAO), 5,58 (1H, s, OCHBO), 3,05 (2H, d, CH&sub2;P), 2,9 (1H, dd, H&sub3;), 1,3 (3H, d, H&sub8;").
Durch dieselbe Reaktion wie bei Beispiel 8, vierter Schritt oder Beispiel 25, stellt man (Weg C) durch Triacylierung von Etoposid die folgenden Derivate ausgehend von den entsprechenden Säuren A-Z-CH&sub2;-CO&sub2;H her.

Beispiel 9 - Formel I

4'-(Phosphonoacetyl)-4'-demethyl-4-O-(2,3-bis-phenoxyacetyl-4,6-ethyliden-β- D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Zu einer Lösung von 400 mg (2 mmol) Diethylphosphonoessigsäure in S ml CH&sub2;Cl&sub2; und 3 Tropfen DMF werden unter Stickstoff bei 0ºC 266 mg (2,1 mmol) Oxalylchlorid gegeben. Man rührt während 15 Minuten bei 0ºC und anschließend wird eine Lösung von 500 mg (0,583 mmol) 4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-phenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)epipodophyllotoxin in 5 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 184 mg (188 ul, 23 mmol) Pyridin bei 0ºC in das Reaktionsmedium gegeben. Der Kontakt wird während 2,5 Stunden aufrechterhalten, anschließend wird das Reaktionsmedium auf N HCl gegossen. Die organische Phase wird dekantiert, mit einer NaCl-Lösung gewaschen, getrocknet und eingedampft. Der Rückstand wird in Ethylether kristallisiert und ergibt einen weißen Niederschlag (450 mg, Ausbeute 75%).
320 mg (0,31 mmol) dieses Derivats werden unter Rühren in 10 ml Acetonitril in Gegenwart von 470 mg (0,4 ml, 0,31 mmol) Trimethylsilylbromid und 240 mg (0,25 ml, 0,31 mmol) Pyridin bei Raumtemperatur während 6 Stunden gegeben.
Nach Eindampfen wird der Rückstand in N HCl aufgenommen und ergibt einen weißen Feststoff, der filtriert, mit Wasser gewaschen und getrocknet wird. Man erhält 180 mg (Ausbeute 57%) des Phosphon-Derivats.
Smp.: ~ 140ºC Analyse C&sub4;&sub7;H&sub4;&sub7;O&sub2;&sub1;P, 2 H&sub2;O (M = 1014, 996)
IR ν (KBr) 3431, 1774, 1601, 1487
200 MHz ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 7,16-7,27 (4H, m, H m. Arom.), 6,68-6,95 (7H, m, H o.p. Arom, H&sub5;), 6,44 (1H, s, H&sub8;), 6,24 (2H, s, H&sub2;'-H&sub6;'), 5,82.
(1H, s, OCHAO), 5,56 (1H, s, OCHBO), 5,32 (1H, dd, H&sub3;"), 5,02 (1H, t, H&sub2;"), 3,2 (m, 3H, CH&sub2;P, H&sub2;), 1,32 (d, 3H, J ~ 4.4 Hz, H&sub8;").

Beispiel 10 - Formel I

4'-(Phosphonoacetyl)-4'-demethyl-4-O-(2,3-bis-(4- trifluoromethoxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin. N- Methylglucamin-Salz.
Dieses Derivat wird mit derselben Methode wie in Beispiel 9 erhalten, jedoch ausgehend vom Derivat der Formel I, bei dem R = 4-Trifluoromethoxyphenoxyacetyl und R' = H.
Herstellung des N-Methylglucaminsalzes: Man gibt 810 mg (0,7 mmol) des Phosphon-Derivats in Ethanol (15 ml), und 0,5 ml Aceton und anschließend 14,1 ml einer 0,1 N-Lösung von N-Methylglucamin (1,41 mmol) in Ethanol werden tropfenweise unter Rühren zugegeben. Man rührt während 1 Stunde weiter. Das Reaktionsmedium wird eingedampft und der Rückstand in Wasser aufgenommen und filtriert (Filter 0,45 u). Die wäßrige Lösung wird lyophilisiert und der Rückstand in Isopropanol aufgenommen, kristallisiert, filtriert und getrocknet und ergibt 740 mg (Ausbeute 65%) des N- Methylglucaminsalzes.
Smp. = 120ºC Analyse C&sub6;&sub3;H&sub7;&sub9;N&sub2;F&sub6;O&sub3;&sub3;P, 3,5 H&sub2;O M = 1600, 47
IR ν (KBr) 3426, 1774, 1601, 1500, 1487

Beispiel 11 - Formel I

4'-(Dicarboxymethylaminocarbonyl)-4'-demethyl-4-O-(2,3-bis-(p-hydroxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Erster Schritt: Herstellung des Dibenzylesters der Aminodiessigsäure.
Zu einer Lösung von 10 g (49,6 mmol) des Hydrochlorids von Glycinbenzylester in 200 ml CH&sub3;CN werden 13,7 g (99 mmol) K&sub2;CO&sub3; und tropfenweise 8 ml (49,6 mmol) Benzylbromacetat gegeben. Das Medium wird bei Raumtemperatur während 2 Stunden gerührt. 200 ml Wasser werden zugegeben, und das Medium wird durch konzentrierte HCl auf pH 2 bis 3 angesäuert und anschließend mit Ethylacetat extrahiert und ergibt 12 g (Ausbeute 80%) des im folgenden Schritt verwendeten Diesters.
Zweiter Schritt: Herstellung des Carbamats.
Eine Lösung von Phosgen (0,79 ml, 1,5 mmol) in Toluol 1,93 M wird in 50 ml Acetonitril gegeben und anschließend unter Stickstoffatmosphäre auf-10ºC gekühlt. Man gibt tropfenweise 820 mg (0,76 mmol) 4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-(p- benzyloxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin in 13 ml Acetonitril und 0,24 g Diisopropylamin zu. Das Reaktionsmedium wird 2 Stunden bei - 10ºC gerührt, und anschließend gibt man 0,24 g des im ersten Schritt erhaltenen Dibenzylesters von Aminodiessigsäure in 6 ml Acetonitril bei -5ºC zu. Man rührt während 6 Stunden weiter. Das Reaktionsmedium wird anschließend eingedampft und dann über SiO&sub2; filtriert und mit einem Gradienten der Lösungsmittel Petrolether- Ethylacetat 70.30, dann 60.40 und schließlich 50.50 eluiert, und ergibt 700 mg (Ausbeute 65%) des Benzyldiesterderivats.
Dritter Schritt: Hydrogenolyse der Benzylfunktion.
700 mg des im zweiten Schritt erhaltenen Derivats werden in einer Mischung von 13 ml Ethylacetat und 3 ml Ethanol in einem Autoklaven in Wasserstoffatmosphäre in Gegenwart von 70 mg Palladium-Kohle 10% gelöst. Man rührt während 24 Stunden, und anschließend wird das Reaktionsmedium abfiltriert und eingedampft. Der Rückstand wird in Isopropylether kristallisiert und ergibt 480 mg (Ausbeute 92%) des Disäurederivats.
Smp.: ~ 150ºC Analyse C&sub5;&sub0;H&sub4;&sub9;NO&sub2;&sub4; M = 1047, 94
IR ν (KBr) 3433, 1768, 1603, 1512, 1485, 1460, 1236, 1199
200 MHz ¹H-NMR (DMSO) δ 9,03 und 8,98 (2H, 2s, CO&sub2;H, austauschbar),
6,45-6,67 (10H, m, H&sub5;, H&sub8;, ArH), 6,21 (2H, s, H&sub2;', H&sub6;'), 6,0 (1H, s, OCHAO), 5,79 (1H, s, OCHBO), 5,32 (2H, m, H&sub2;" et H&sub3;"), 3,39 (s, N- CH&sub2;-CO&sub2;H), 1,20 (3H, d, H&sub8;").
Mit derselben Methode wie in Beispiel 11 - zweiter Schritt, jedoch unter Verwendung der entsprechenden Zwischenprodukte der Formel I (R' = H) wurden die folgenden neuen Derivate hergestellt.

Beispiel 12 - Formel I

4'-(Dicarboxymethylaminocarbonyl)-4'-demethyl-4-O-(2,3-biscyclohexyloxyacetyl-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Ausbeute = 98%
Smp. = 170ºC Analyse C&sub5;&sub0;H&sub6;&sub1;NO&sub2;&sub2; M = 1028, 037

Beispiel 13 - Formel I

4'-(Dicarboxymethylaminocarbonyl)-4'-demethyl-4-O-(2,3-bis(p- trifluoromethoxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Ausbeute = 87% Smp. ~ 150ºC Analyse C&sub5;&sub2;H&sub4;&sub7;NO&sub2;&sub4;F&sub6; M = 1183, 94

Beispiel 14 - Formel I

4'-(Dicarboxymethylaminocarbonyl)-4'-demethyl-4-O-(2,3-bis-phenoxyacetyl- 4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Ausbeute = 25% Smp. ~ 170ºC Analyse C&sub5;&sub0;H&sub4;&sub9;NO&sub2;&sub2;, H&sub2;O M = 1033, 955

Beispiel 15 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-carboxymethoxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)-epipodophyllotoxin, N-Methylglucamin-Salz
Erster Schritt: Benzyl-4-hydroxyphenoxyacetat
Zu einer Suspension von 10 g (59 mmol) p-Hydroxyphenoxyessigsäure in 100 ml CH&sub2;Cl&sub2; gibt man bei 0ºC unter Stickstoffatmosphäre 0,2 ml DMF und anschließend tropfenweise 9 g Oxalylchlorid (71 mmol). Man rührt während 12 Stunden bei Raumtemperatur und anschließend werden 7,7 g (71 mmol) Benzylalkohol zugegeben, und man rührt während 8 Stunden bei Raumtemperatur. Man gießt das Reaktionsmedium auf eine eisgekühlte Ammoniak-Lösung und extrahiert mit Methylenchlorid. Die organische Phase wird mit N HCl gewaschen, dekantiert, getrocknet und abgedampft. Der Rückstand wird über 150 SiO&sub2; filtriert und mit einer Mischung Heptan-Ethylacetat (75 - 25) eluiert und ergibt 3,8 g (Ausbeute 25%) eines weißen Feststoffs.
200 MHz ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 7,36 (SH, s, Ar), 6,75 (4H, d, ArOH), 5,24 (2H, s CH&sub2; Ar), 4,61 (2H, s, OCH&sub2;CO).
Zweiter Schritt: 4-Benzyloxycarbonylmethoxyphenoxyessigsäure 3,8 g des im ersten Schritt erhaltenen Phenols werden in Gegenwart von 1,3 g NaH (60 %ige Disperison) und 2 g Bromessigsäure während 48 Stunden in THF (200 ml) unter Rückfluß erhitzt. Man gießt das Reaktionsmedium anschließend auf Eis und extrahiert mit Isopropylether und anschließend mit Ethylacetat. Die wäßrige Phase wird angesäuert und mit CH&sub2;Cl&sub2; extrahiert und ergibt 2,8 g (Ausbeute 60%) eines cremefarbenen Feststoffs.
200 MHz ¹H-NMR (CDCl&sub3;) δ 7,35 (5H, s, Ar), 6,78 (4H, s, ArO), 5,15 (2H, s, CH&sub2; Ar), 4,55 (2H, s, OCH&sub2;-Ester), 4,45 (2H, s, OCH&sub2;-Säure)
Dritter Schritt: Kupplung der Säure aus Schritt 2 mit 4'- Benzyloxycarbonyletoposid
Zu 1,75 g (5,5 mmol) der Säure aus Schritt 2 in einer Lösung von 40 ml CH&sub2;Cl&sub2; mit 0,2 ml DMF gibt man bei 0ºC unter Stickstoffatmosphäre tropfenweise 770 mg (6,1 mmol) Oxalylchlorid. Man rührt während 2 Stunden bei Raumtemperatur weiter. Man gibt dann nach Abkühlen auf 0ºC eine Lösung von 1 g (1,38 mmol) 4'- Benzyloxycarbonyletoposid und 1,1 g (1,38 mmol) Pyridin in 10 ml CH&sub2;Cl&sub2; zu. Nach 3 Stunden Rühren bei Raumtemperatur wird das Reaktionsmedium konzentriert, mit Ethylacetat aufgenommen und anschließend mit Wasser, dann mit einer eisgekühlten Lösung von Natriumbicarbonat nach erneutem Waschen mit N HCl und anschließend mit einer gesättigten Lösung von NaCl gewaschen, die organische Phase wird dekantiert, getrocknet, eingedampft und ergibt 800 mg (Ausbeute 66%), die direkt im folgenden Schritt hydriert wird (CCM SiO&sub2; Heptan - AcOEt 20-80 Rf = 0,9).

Vierter Schritt: Hydrogenolyse

800 mg (0,6 mmol) des im dritten Schritt erhaltenen Derivats werden in einer Wasserstoffatmosphäre bei Atmosphärendruck in 15 ml Ethylacetat und 5 ml Ethanol in Gegenwart von 100 mg Palladium-Kohle gegeben und heftig während 1 Stunde gerührt. Der Katalysator wird abfiltriert und das Filtrat eingedampft. Der Rückstand wird in Aceton aufgenommen und erneut filtriert und eingedampft und ergibt quantitativ (650 mg) das debenzylierte Derivat. Dieses Derivat wird durch Zugabe von zwei Equivalenten einer Lösung 0,1 M von N-Methylglucamin in der Mischung EtOH, H&sub2;O-Aceton in das N- Methylglucaminsalz umgewandelt. Nach 1 Stunde Rühren wird die Lösung eingedampft, mit H&sub2;O aufgenommen, über einen Filter 0,45 u filtriert und lyophylisiert und man erhält so 700 mg des Carboxylderivats. Smp. ~ 130ºC Analyse C&sub6;&sub3;H&sub8;&sub2;N&sub2;O&sub3;&sub3;, 6 H&sub2;O M = 1503, 422
IR ν (KBr) 3427, 1772, 1618, 1508, 1205, 1087
200 MHz ¹H-NMR (DMSO) δ 7,04 (1H, s, H&sub5;), 6,59-6,70 (8H, m, OArO), 6,47 (1H, s, H&sub8;), 6,13 (2H, s, H&sub2;' et H&sub6;'), 5,96 (1H, s, OCHAO), 5,73 (1H, s, OCHBO), 5,33 (2H, m, H&sub2;" et H&sub3;"), 2,46 (6H, s, NCH&sub3;), 1,20 (3H, d, 3 = 4 Hz, H&sub8;").
Durch dieselbe Reaktionsfolge von Beispiel 15, jedoch unter Verwendung der geeigneten Reagentien, werden die Derivate der allgemeinen Formel I (R' = H) erhalten:

Beispiel 16 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-(phenylsulfonylacetyl-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)- epipodophyllotoxin.
Ausbeute = 92%
Smp. = 248ºC Analyse C&sub4;&sub5;H&sub4;&sub4;O&sub1;&sub9;S&sub2; M = 976, 790

Beispiel 17 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-(pentafluorophenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Ausbeute = 75% Analyse C&sub4;&sub5;H&sub3;&sub4;O&sub1;&sub7;F&sub1;&sub0; M = 1036, 75

Beispiel 18 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-(trifluoromethylphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Ausbeute = 53% Analyse C&sub4;&sub7;H&sub4;&sub2;O&sub1;&sub7;F&sub6; M = 992, 820

Beispiel 19 - Formel I

4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-=-(2,3-bis-(phenylsulfonylacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin
Di-N-Methylglucamin-Salz
Unter Verwendung des Verfahrens von Beispiel 1, jedoch mit der Verbindung aus Beispiel 16 wird das Phosphatderivat in Form des N-Methylglucaminsalzes erhalten.
Ausbeute = 60% Analyse C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub9;N&sub2;O&sub3;&sub2;PS&sub2;; 3,8 H&sub2;O
Smp. ~ 148ºC
M = 1492, 85

Beispiel 20 - Formel I

4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-=-(2,3-bis-(pentafluorophenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin. Di-N-Methylglucamin-Salz
Unter Verwendung des Verfahrens von Beispiel 1, jedoch mit der Verbindung aus Beispiel 17 wird das Phosphatderivat in Form des N-Methylglucaminsalzes erhalten.
Ausbeute = 78% Analyse Smp. ~ 140ºC Analyse C&sub5;&sub9;H&sub6;&sub9;F&sub1;&sub0;N&sub2;O&sub3;&sub0; P, 3,5 H&sub2;O M = 1507, 147

Beispiel 21 - Formel I

4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(trifluoromethylphenoxyacetyl)- 4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin. Di-N-Methylglucamin-Salz
Unter Verwendung des Verfahrens von Beispiel 1, jedoch mit der Verbindung aus Beispiel 18 wird das Phosphatderivat in Form des N-Methylglucaminsalzes erhalten.
Ausbeute = 33% Smp. ~ 120ºC Analyse C&sub6;&sub1;H&sub7;&sub7;N&sub2;O&sub3;&sub0; F&sub6; P, 4,15 H&sub2;O M = 1538, 170

Beispiel 22 - Formel I

Weg C

4'-Demethyl-4'-(4-carboxyphenoxyacetyl)-4-O-(2,3-bis-(4-carboxyphenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin - Glucaminsalz
Erster Schritt: Kondensation von 4-Benzyloxycarbonylphenoxyessigsäure mit Etoposid.
Zu einer Lösung von 4,9 g (17 mmol) 4-Benzyloxycarbonylphenoxyessigsäure in 100 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 0,2 ml DMF werden bei 0ºC unter Stickstoff tropfenweise 2,4 g (18,7 mmol) Oxalylchlorid gegeben, und nach 2 Stunden Rühren bei Raumtemperatur gibt man zu dieser Lösung tropfenweise bei 0ºC 2 g (3,4 mmol) Etoposid in einer Lösung in 15 ml CH&sub2;Cl&sub2; und 3,2 g (41 mmol) Pyridin. Nach Aufwärmen auf Raumtemperatur während 2 Stunden wird das Reaktionsmedium auf N HCl gegossen und anschließend schrittweise mit einer Lösung von NaHCO&sub3; und gesättigter NaCl gewaschen, wobei nach Verdampfen ein Rohprodukt erhalten wird, das über SiO&sub2; durch Elution in einer Mischung Heptan- AcOEt (60 - 40) chromatographiert wird. Man erhält 1,8 g (Ausbeute 38%) des trisubstituierten Derivats, das direkt im folgenden Schritt eingesetzt wird.

Zweiter Schritt: Hydrogenolyse

1,5 g (1,07 mmol) des vorstehenden Benzyltriesters werden in Gegenwart von Wasserstoff bei Atmosphärendruck in einer Mischung EtOH (15 ml) AcOEt (60 ml) mit 300 mg Palladium-Kohle 10% unter gutem Rühren während 8 Stunden bei Umgebungstemperatur hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, und das eingedampfte Filtrat wird über SiO&sub2; chromatographiert und mit einer Mischung CH&sub2;Cl&sub2;-MeOH (96,4) eluiert, wobei ein weißer Feststoff (600 mg, Ausbeute 50%) erhalten wird. Das Glucaminsalz wird erhalten, indem 3 Äquivalente einer wäßrigen Lösung 0,1 M N- Methylglucamin in einer Mischung EtOH-H&sub2;O (80 - 20) gegeben werden, und diese Lösung wird zu einer Lösung der Trisäure in Aceton gegeben wird. Ein gummiartiger Niederschlag wird erhalten, das Medium wird eingedampft und anschließend mit H&sub2;O aufgenommen und durch einen Filter 0,45 u filtriert. Das Filtrat wird anschließend lyophilisiert und ergibt das Glucaminsalz. Ausbeute = 50% Smp. ~ 135ºC Analyse C&sub7;&sub7;H&sub1;&sub0;&sub1;N&sub3;O&sub4;, 7 H&sub2;O M = 1836, 103
IR ν (KBr) 3404, 1604, 1545, 1385, 1086.
200 MHz ¹H-NMR (DMSO), 7,77-7,85 (6H, m, Ar), 7,1 (1H, s, H&sub5;), 6,89, 6,79, 6,64 (6H, d, J = 8,7 Hz, ArO), 7,08 (1H, s, H&sub5;), 6,46 (1H, s, H&sub8;), 6,26 (2H, s, H&sub2;' et H&sub6;'), 6,13 (1H, s, OCHAO), 5,95 (1H, s, OCHBO), 2,42 (9H, s, N-CH&sub3;), 1,20 (3H, d, J = 4,9 Hz, H&sub8;").

Beispiel 23 - Formel I

4'-Demethyl-4'-carboxymethylphenoxyacetyl-4-O-(2,3-bis-(4- carboxymethylphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Dieses Derivat wird mit derselben Methode wie in Beispiel 22 erhalten, jedoch unter Verwendung von Benzyloxycarbonylmethylphenoxyessigsäure. Ausbeute = 20% Smp. ~ 150ºC Analyse C&sub5;&sub9;H&sub5;&sub6;O&sub2;&sub5;, 1,4 H&sub2;O M = 1190, 703

Beispiel 24 - Formel I

4'-Demethyl-4'-carboxymethoxyphenoxyacetyl-4-O-(2,3-bis-(4- carboxymethyoxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
N-Methylglucamin-Salz
Dieses Derivat wird mit derselben Methode wie in Beispiel 22 erhalten, jedoch unter Verwendung von Benzyloxycarbonylmethoxyphenoxyessigsäure. Ausbeute = 84% Smp. ~ 110ºC Analyse C&sub8;&sub0;H&sub1;&sub0;&sub7;N&sub3;O&sub4;&sub3; 6,3 H&sub2;O M = 1912, 036

Beispiel 25 - Formel I

4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(4-chlorophenoxyacetyl)-4,6- ethyiden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Herstellung der Zwischenprodukte (Weg B)
4'-Demethyl-4'-3-chinuclidinylaminocarbonyl)-4-O-(2,3-bis-(4- chlorophenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Erster Schritt: 4'-(3-Chinuclidinylaminocarbonyl)etoposid
Formel V R&sup4; = COHN-3-chinuclidinyl
Zu einer Lösung 1,93 M von Phosgen in Acetonitril (8,8 ml, 16,9 mmol), die unter Stickstoff auf 0ºC gekühlt wurde, wird tropfenweise während 10 Minuten eine Lösung von Etoposid (5 g, 8,49 mmol) in 200 ml CH&sub3;CN und 2,74 g (21,2 mmol) N,N- Diisopropylethylamin gegeben, und anschließend werden 1,07 g (8,49 mmol) 3-Aminochinuclidin in Lösung in 20 ml CH&sub3;CN zugegeben. Das Medium wird 24 Stunden gerührt. Nach Verdampfen wird der Rückstand über SiO&sub2; mit einer Mischung der Lösungmittel: CHCl&sub3;-MeOH-NH&sub4;OH (93-7-0,7), anschließend (90-10-1) chromatographiert. Man erhält 1,67 g (Ausbeute 26%) des Carbamat-Produkts V, homogen in CCM, das dann im zweiten Schritt umgesetzt wird.

Zweiter Schritt: Kondensation mit p-Chlorophenoxyessigsäure

Zu einer Lösung von 1,68 g (8,98 mmol) p-Chlorophenoxyessigsäure in Chloroform (40 ml) und 0,5 ml DMF bei 0ºC unter Stickstoffatmosphäre werden tropfenweise 1,25 g (9,88 mmol) Oxalylchlorid gegeben. Man rührt während 1 Stunde weiter. Diese Lösung wird anschließend tropfenweise zu einer Lösung des im ersten Schritt erhaltenen Etoposid-Derivats (1,66 g, 2,24 mmol) in 60 ml Chloroform und 1,77 g Pyridin bei 0ºC gegeben. Diese neue Lösung wird unter Aufwärmen auf Raumtemperatur während 5 Stunden gerührt. Das Reaktionsmedium wird dann auf N HCl (100 ml) gegossen, dekantiert und anschließend mit einer gesättigten Lösung von NaCl gewaschen, getrocknet, eingedampft und ergibt ein Öl, das über Silika chromatographiert wird. Elution mit einer Mischung von CHCl&sub3;, MeOH, NH&sub4;OH (95,5, 0,5) ergibt 1,97 g (Ausbeute 80%) des Derivats aus Beispiel 26. Man bildet daraus das Hydrochlorid (durch Zugabe einer gesättigten Etherlösung von Chlorwasserstoffgas zu einer Lösung der Base in Aceton). Nach Rühren während 10 Minuten wird der erhaltene Niederschlag langsam filtriert, mit Ether gewaschen und getrocknet (Ausbeute 50%). Smp. ~ 180ºC Analyse C&sub5;&sub3;H&sub5;&sub4;Cl&sub2;N&sub2;O&sub1;&sub8;, HCl, 2 H&sub2;O M = 1150, 422
Massenspektrum (FAB) m/e 1077 (M&spplus;)
Dritter Schritt: Hydrolyse
Zu einer Lösung von 1,08 g des Derivats des zweiten Schritts in 70 ml Aceton gibt man 30 ml einer gesättigten Lösung von NaHCO&sub3;. Das Medium wird während 2 Tagen gerührt, man verdampft das Aceton und säuert das Medium mit konzentrierter HCl bis pH 2 an und extrahiert dann mit Methylenchlorid.
Eine Chromatographie über SiO&sub2; (Elution CH&sub2;Cl&sub2; - MeOH 97-3) ergibt das Derivat von Beispiel 27. Eine neue Chromatographie über SiO&sub2; (Elution Petrolether- AcOEt 1-1) ergibt nach Eindampfen einen Rückstand, der in Isopropylether kristallisiert (200 mg, Ausbeute = 21%). Smp. ~ 125ºC Analyse C&sub4;&sub5;H&sub4;&sub2;Cl&sub2;O&sub1;&sub7; M = 925, 730
Massenspektrum (FAB) m/e 924 (M ± 1)
IR ν (KBr) 3458, 1774, 1618, 1491
¹H-NMR 200 MHz (CDCl&sub3;) δ 7,15-7,22 (4H, m, Ar), 6,75 (1H, s, H&sub5;), 6,77 (2H, d, J = 8,8 Hz, ArO), 6,64 (2H, d, J = 8,8 Hz, ArO), 6,51 (1H, s, H&sub8;), 6,22 (2H, s, H&sub2;' et H&sub6;'), 5,91 (1H, s, OCHAO); 5,71 (1H, s, OCHBO), 5,33 (1H, t, J = 9 Hz, H&sub3;"), 5,02 (1H, t, J = 7,8 Hz, H&sub2;"), 4,91 (1H, d, J = 7,8 Hz, H&sub1;"), 4,83 (1H, d, J = 3,2 Hz, H&sub4;), 4,69 (1H, q, H&sub7;"), 3,1 (1H, dd, H&sub2;), 2,9 (1H, m, H&sub3;), 1,34 (3H, d, J = 5 Hz, H&sub8;").

Herstellung des Phosphats:

Dieses Derivat wird nach dem Verfahren von Beispiel 1 erhalten, jedoch unter Verwendung des im dritten Schritt erhaltenen Derivats.
N-Methylglucaminsalz:
Ausbeute = 70% Smp. ~ 140ºC Analyse C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub7;Cl&sub2;N&sub2;O&sub3;&sub0;P, 6 H&sub2;O M = 1461, 49

Beispiel 26 - Formel I

4'-Demethyl-4'-carboxymethoxyacetyl-4-O-(2,3-bis-carboxymethoxyacetyl-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Dieses Derivat wird nach dem Verfahren von Beispiel 22, erster und zweiter Schritt hergestellt, wobei man Benzyloxycarbonylmethoxyessigsäure anstelle von 4-Benzyloxycarbonylphenoxyessigsäure verwendet, wobei die jeweiligen Ausbeuten von 77% und 75% erhalten werden.
Smp. = 138ºC Analyse C&sub4;&sub1;H&sub4;&sub4;O&sub2;&sub5; · H&sub2;O M = 954, 805
Massenspektrum (FAB) m/e 959 (M&spplus; + Na)

Beispiel 27 - Formel I

4'-Demethyl-4'-carboxymethylsolfonylacetyl-4-O-(2,3-bis- carboxymethylsulfonylacetyl-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.
Dieses Derivat wird wie das vorstehende nach dem Verfahren von Beispiel 22, erster und zweiter Schritt hergestellt, wobei man Benzyloxycarbonylmethylsulfonylessigsäure verwendet, wobei die jeweiligen Ausbeuten von 55% und 90% erhalten werden. Smp. ~ 165ºC Analyse C&sub4;&sub1;H&sub4;&sub4;O&sub2;&sub8; · S&sub3;, H&sub2;O M = 1098, 98
Massenspektrum (FAB) m/e 1103 (M&spplus; + Na)
R = HOCOCH&sub2;OCH&sub2;CO · R=

Beispiel 28 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-carboxymethoxyacetyl-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)- epipodophyllotoxin.
Dieses Derivat wird mit der für Beispiel 15, dritter und vierter Schritt beschriebenen Methode erhalten, jedoch unter Verwendung von Benzyloxycarbonylmethoxyessigsäure anstelle von Benzyloxycarbonylmethoxyphenoxyessigsäure. Die jeweiligen Ausbeuten sind 42% und 71%. Smp. ~ 192ºC Analyse C&sub3;&sub7;H&sub4;&sub0;O&sub2;&sub1; · 0,2 H&sub2;O M = 824, 32
R = R = H&sub2;PO&sub3;CH&sub2;C

Beispiel 29 - Formel I

4'-Demethyl-4'-phosphonacetyl-4-O-(2,3-bis-phosphonoacetyl-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)epipodophyllotoxin.
Dieses Derivat wird auf identische Weise mit der Methode von Beispiel 22, erster und zweiter Schritt, erhalten, jedoch unter Verwendung von Dibenzylphosphonoessigsäure (Tetramethylcyclopentadienylgruppe. Let. 1974, Nr. 9, 711). Die Veränderungen bezogen auf Beispiel 24 sind die folgenden: der erste Schritt wird bei 0ºC unter Aufwärmen auf Raumtemperatur während 18 Stunden durchgeführt; die Hydrogenolyse im zweiten Schritt wird im Lösungsmittel THF 25 ml und EtOH 50 ml durchgeführt, die Reaktion wird während 4 Stunden bei 0ºC durchgeführt. Die Ausbeuten sind schrittweise 34% und 83%. Smp. ~ 184ºC Analyse C&sub3;&sub5;H&sub4;&sub1;O&sub2;&sub5;P&sub3;, 4 H&sub2;O M = 1026, 58
Massenspektrum (FAB) m/e 955 (M&spplus; +1)
R = H&sub2;O&sub3;PCCH&sub2;CO, R'=

Beispiel 30 - Formel I

4'-Demethyl-4-O-(2,3-bis-phosphonoacetyl-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)epipodophyllotoxin.
Dieses Derivat wird auf identische Weise zu der Methode von Beispiel 15, dritter und vierter Schritt erhalten, jedoch unter Verwendung von Dibenzylphosphonoessigsäure, die bereits im Beispiel 29 verwendet wurde.
Der Hydrogenolyse-Schritt wird durchgeführt unter Verwendung einer Mischung der Lösungsmittel THF-EtOH (30-70) bei 0ºC während 4 Stunden. Man erhält so ein Derivat mit einer Gesamtausbeute von 45%.
Smp. ~ 168ºC, Analyse C&sub3;&sub3;H&sub3;&sub8;O&sub2;&sub1;P&sub2; M = 832, 606
Massenspektrum (FAB) m/e 833 (M&spplus; + 1)
Die folgenden erfindungsgemäßen Verbindungen wurden ebenfalls hergestellt:
4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis(4-cyanophenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)epipodophyllotoxin. N-Methylglucamin-Salz. Smp. ~ 205ºC Analyse C&sub4;&sub7;H&sub4;&sub3;N&sub2;O&sub2;&sub0;P, 6 H&sub2;O = 1112, 93
4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis(4-nitrophenoxyacetyl)4,6-ethyliden-β- D-glucosyl)epipodophyllotoxin. N-Methylglucamin-Salz.
Smp. 190ºC Analyse C&sub4;&sub5;H&sub4;&sub3;N&sub2;O&sub2;&sub4;P, 4 H&sub2;O = 1098,88
4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis(4-methylphenoxyacetyl)-4,6-ethylidenβ-D-glucosyl)epipodophyllotoxin. Smp. ~ 190ºC Analyse C&sub4;&sub7;H&sub4;&sub9;N&sub2;O&sub2;&sub0;P, 1,25 H&sub2;O = 987,378
4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis(4-hydroxyphenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)epipodophyllotoxin. N-Methylglucamin-Salz. Smp. ~ 145ºC Analyse C&sub5;&sub9;H&sub7;&sub9;N&sub2;O&sub3;&sub2;P, H&sub2;O = 1377, 26

Claims

1. Verbindung der allgemeinen Formel I

wobei R' eine Phosphatmonoester-Gruppe; eine Carbamat-Gruppe vom Typ -CO-N(R&sub1;R&sub2;), wobei N(R&sub1;R&sub2;) eine Aminodiacetatgruppe oder ein polycyclisches Amin wie 3-Aminochinuclidin darstellt; eine Phosphonoacetatgruppe CO-CH&sub2;-PO&sub3;H&sub2;; CO- CH&sub2;-SO&sub2;CH&sub2;COOH; CO-CH&sub2;-OCH&sub2;COOH; oder einen Rest R der Formel A-Z-CH&sub2;-CO darstellt, wobei

- Z ein Sauerstoff-, Schwefelatom, eine SO&sub2;-Gruppe, eine lineare oder verzweigte (C&sub1;-C&sub4;)Alkylengruppe darstellt, und

- A einen substituierten oder unsubstituierten Phenylkern darstellt, unter der Bedingung daß:

- für den Fall, daß R' = R, d. h. triacylierte Derivate, A einen aromatischen Kern darstellt, der eine versalzbare Funktion aufweist, mit Ausnahme von 4-Hydroxyphenyl,

- für den Fall, daß R' ≠ R, A einen Benzyl-, Naphthyl-, Heteroaryl-, substituierten oder unsubstituierten Phenylrest darstellt, wobei in diesem Fall Phenyl je nach seiner Position am aromatischen Ring einmal, zweimal, dreimal, viermal oder fünfmal durch gleiche oder verschiedene Gruppen substituiert sein kann" die ausgewählt werden aus den Gruppen Halogen, F, Cl, Br, lineares oder cyclisches (C&sub1;-C&sub6;)Alkoxy, (C&sub1;-C&sub6;)Alkyl, Methylendioxy, OCF&sub3;, CF&sub3;, NO&sub2;, CN, OCH&sub2;-Aryl, OH, OPO&sub3;H&sub2;, CH&sub2;-PO&sub3;H&sub2;, PO&sub3;H&sub2;, OCH&sub2;CO&sub2;H, COOH, CH&sub2;COOH, COCH&sub3;, CHO,

genauso wie ihre therapeutisch verträglichen und wasserlöslichen Salze mit Mineralsäuren oder -basen oder organischen Säuren oder Basen.

2. Verbindung nach Anspruch 1, dadurch charakterisiert, daß R' eine Phosphatmonoester-Gruppe (PO&sub3;H&sub2;); ein Carbamat CONR&sub1;R&sub2;, wobei NR&sub1;R&sub2; eine Aminodiacetatgruppe oder ein Amino-3-chinuclidin darstellt; oder CO-CH&sub2;-PO&sub3;H&sub2; darstellt.

3. Verbindung nach den Ansprüchen 1 und 2, dadurch charakterisiert, daß R ausgewählt wird aus den Resten: Phenoxyacetyl, 3,4-Methylendioxyphenoxyacetyl, 4- Methoxyphenoxyacetyl, 4-Hydroxyphenoxyacetyl, 4-Phosphonooxyphenoxyacetyl, 4- Carboxymethylphenoxyacetyl, 4-Carboxymethoxyphenoxyacetyl, 4- Carboxyphenoxyacetyl, 4-Trifluoromethylphenoxyacetyl, 4- Trifluoromethoxyphenoxyacetyl, 4-Chlorophenoxyacetyl, 4-Nitrophenoxyacetyl, 4- Fluorophenoxyacetyl, Cyclohexyloxyacetyl, Phenylsulfonylacetyl, Pentafluorophenoxyacetyl, 2- und 4-Formylyphenoxyacetyl, 4-Cyanophenoxyacetyl.

4. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 3, dadurch charakterisiert, daß sie ausgewählt wird aus den organischen Salzen oder Mineralsalzen von:

- 4'-Demethyl-4'-deoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bisphenoxyacetyl-4,6-ethyliden-β- D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-di(carboxymethyl)aminocarbonyl-4-O-(2,3-bisphenoxyacetyl-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-phosphonoacetyl-4-O-(2,3-bis-phenoxyacetyl-4,6-ethyliden-β-D- glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(4-trifluoromethylphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-di(carboxymethyl)aminocarbonyl-4-O-(2,3-bis-(4- trifluoromethoxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(4-trifluoromethoxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-phosphonoacetyl-4-O-(2,3-bis-(4- trifluoromethoxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-(4-phosphonooxyphenoxyacetyl)-4-O-(2,3-bis-(4- phosphonooxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(4- phosphonooxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-di(carboxymethyl)aminocarbonyl-4-O-(2,3-biscyclohexyloxyacetyl-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-cyclohexyloxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-(3-chinuclidinylaminocarbonyl)-4-O-(2,3-bis-(3,4- methylendioxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(3,4- methylendioxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(2,3,4,5,6- pentafluorophenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(4-fluorophenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-(3-chinuchuidinylaminocarbonyl)-4-O-(2,3-bis-(4- chlorophenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(4-chlorophenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-phenylstilfonylacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-(4-carboxyphenoxyacetyl)-4-O-(2,3-bis-(4- carboxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-(4-carboxymethylphenoxyacetyl)-4-O-(2,3-bis-(4- carboxymethylphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-(4-carboxymethoxyphenoxyacetyl)-4-O-(2,3-bis-(4- carboxymethoxyphenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-(3-chinuclidinylaminocarbonyl)-4-O-(2,3-bis-(4- nitrophenoxyacetyl)-4,6-ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(4-methoxyphenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis-(4-cyanophenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis(4-nitrophenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

- 4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis(4-methylphenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin,

4'-Demethyl-4'-desoxy-4'-phosphat-4-O-(2,3-bis(4-hydroxyphenoxyacetyl)-4,6- ethyliden-β-D-glucosyl)-epipodophyllotoxin.

5. Verbindungen nach Anspruch 4, dadurch charakterisiert, daß die mit den Säurefunktionen Salze bildenden Mittel insbesondere ausgewählt werden aus Aminen wie N-Methylglucamin, Lysin, Triethanolamin, oder aus Kationen wie Natrium oder Kalium und dadurch, daß die mit den basischen Funktionen Salze bildenden Mittel insbesondere ausgewählt werden aus Mineralsäuren oder organischen Säuren wie Salzsäure, Schwefelsäure, Methansulfonsäure, Ethanolsulfonsäure, Maleinsäure, Weinsäure.

6. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch charakterisiert, daß man ein glycosyliertes Zwischenprodukt der allgemeinen Formel II

mit einem Zwischenprodukt III

umsetzt, bei denen R wie in Anspruch 1 definiert ist und R&sup4; eine Schutzgruppe ist, beispielsweise Benzyloxycarbonyl oder ein Carbamatrest, die man zur Herstellung von Verbindungen der Formel I R' = H entschützt, und die man mit geeigneten Reagentien zur Herstellung von Verbindungen der Formel I R' ≠ H umsetzt.

7. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch charakterisiert, daß man das in Position 4' mit einer Benzyloxycarbonyl- oder Chinuclidincarbamatgruppe geschütztes Etoposid der Formel V,

wobei R&sup4; wie in Anspruch 6 definiert ist, mit einem Acylierungsmittel vom Typ A-Z- CH&sub2;CO umsetzt, um nach Hydrogenolyse oder Hydrolyse die Verbindung der Formel I zu erhalten, bei der R' = H ist.

8. Verfahren zur Herstellung einer Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, dadurch charakterisiert, daß man Etoposid triacyliert zur Herstellung von Verbindungen der Formel I, bei denen R' = R = A-Z-CH&sub2;CO, wobei A eine versalzbare Funktion aufweist.

9. Verfahren zur Herstellung eines Salzes einer Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 5, dadurch charakterisiert, daß man die saure Verbindung mit einer stöchiometrischen Menge Base oder mit Ionenaustauscherharz behandelt und sie lyophilisiert oder kristallisiert.

10. Verfahren zur Herstellung eines Salzes einer Verbindung nach den Ansprüchen 1 bis 5, dadurch charakterisiert, daß man die basische Verbindung mit einer stöchiometrischen Menge des sauren Mittels behandelt und sie lyophilisiert oder kristallisiert.

11. Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 5 als Medikament.

12. Pharmazeutische Zusammensetzung, dadurch charakterisiert, daß sie mindestens eine Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 5 und einen geeigneten Exzipienten umfaßt.

13. Verwendung einer Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung eines Medikaments zur Antikrebs-Behandlung, insbesondere von kleinzelligem Lungenkrebs, embryonalen Tumoren, Neuroblastomen, Nierenkrebs, pädiatrischen Tumoren, Hodgkin- und Non-Hodgkin-Lymphomen, akuten Leukämien, Plazenta-Choriokarzinomen, Mamma-Adenokarzinomen, und zur Erhöhung der therapeutischen Wirksamkeit von Topoisomerase II-inhibitorischen Verbindungen für die Behandlung von gegen übliche Therapeutika resistenten Tumoren: kolorektalen Krebsarten und Melanomen.

14. Verwendung einer Verbindung der Formel I nach einem der Ansprüche 1 bis 5 zur Herstellung eines Medikaments zur Behandlung von rheumatoider Arthritis und durch Human-Papilloma-Virus hervorgerufenen Krankheiten.