DE69434598T2

DE69434598T2 - Verwendung von Paclitaxel und seinen Derivaten zur Herstellung eines Medikaments für die Behandlung von Restenose

Info

Publication number: DE69434598T2
Application number: DE69434598T
Authority: DE
Inventors: James L. Kinsella; Steven J. Sollot
Original assignee: US Department of Health and Human Services
Current assignee: US Department of Health and Human Services
Priority date: 1993-07-29
Filing date: 1994-07-29
Publication date: 2006-10-05
Anticipated expiration: 2014-07-30
Also published as: ES2210258T5; JP2006206611A; JP2010184935A; JP4850985B2; JP4997318B2; DK1118325T4; US20080194671A1; US20100137418A1; US6403635B1; DK1118325T3; EP0711158B2; AU7476894A; DE69434598T3; US20070123583A1; DE69434598D1; EP1118325B2; JP4615478B2; DK0711158T3; EP0711158B1; ES2255477T3

Description

Gebiet der Erfindung
Die vorliegende Erfindung betrifft die Verwendung von Paclitaxel zur Behandlung von Patienten, die gefährdet sind, Restenose zu entwickeln.
Insbesondere betrifft die Erfindung Paclitaxel die Behandlung dieser Patienten mit einer Lösung mit einer niedrigen Dosis Paclitaxel, um die Entwicklung von Restenose zu verhindern oder zu verringern.
Hintergrund der Erfindung
Gefäßerkrankungen sind die Hauptursache für Tod und Behinderung in der entwickelten Welt, wobei besonders ältere Menschen betroffen sind. Allein in den Vereinigten Staaten sind Herz-Kreislauf-Erkrankungen trotz neuester ermutigender Rückgänge noch immer für fast eine Million Todesopfer jedes Jahr und mehr als die Hälfte aller Todesfälle verantwortlich; fast 5 Millionen Personen, die unter einer Herz-Kreislauf-Erkrankung leiden, werden jedes Jahr ins Krankenhaus eingewiesen. Die Kosten für diese Erkrankung sind, was Leiden der Menschen und materielle Mittel anbetrifft, fast unermesslich.
Restenose, das Wiederauftreten von Stenose oder einer Gefäßverengung nach korrigierender Chirurgie, stellt eine beschleunigte Form der Atherosklerose dar. Neues Material unterstützt eine vereinheitlichende Hypothese bezüglich vaskulärer Verletzungen, der zufolge man davon ausgehen kann, dass koronare arterielle Restenose, koronare Venentransplantate und Herzallotransplantat-Atherosklerose eine sehr beschleunigte Form desselben pathogenen Prozesses darstellen, der zu einer spontanen Atherosklerose führt (Ip, J.H., et al., (1990) J Am Coll Cardiol, 15:1667-1687; Muller, D.W.M., et al., (1992) J Am Coll Cardiol, 19:418-432). Restenose wird verursacht durch eine komplexe Reihe von fibroproliferativen Antworten auf vaskuläre Verletzungen, umfassend wirksame wachstumsregulierende Moleküle, einschließlich von Thrombocyten-stammender Wachstumsfaktor (PDGF) und basischen Fibroblastenwachstumsfaktor (bFGF), die auch häufig auftreten in den späteren Stadien von atherosklerotischen Läsionen, die zum Wachstum, der Migration und der neointimalen Akkumulation von glatten vaskulären Muskelzellen führen.
Restenose tritt nach koronaren arteriellen Beipassoperationen (CAB), Endarteriektomien und Herztransplantationen und besonders nach Herzballonangioplastien, Arteriektomien, Laserablationen oder endovaskulärem Stenting auf (wobei innerhalb von 6 Monaten jeweils ein Drittel der Patienten erneut eine Arterienblockade (Restenose) entwickeln) und ist verantwortlich für das erneute Auftreten von Symptomen (oder den Tod), oft wird erneut eine chirurgische Revaskularisation benötigt. Trotz über zehnjähriger Forschung und deutlichen Fortschritten bei der anfänglichen Erfolgsrate der verschiedenen medizinischen und chirurgischen Behandlungen von atherosklerotischen Erkrankungen, einschließlich Angioplastien, Bypasstransplantationen und Endarteriektomien, tritt ein Sekundärversagen aufgrund spätere Restenose immer noch bei 30 – 50% der Patienten auf (Ross, R. (1993) Nature, 362:801-809).
Als Ergebnis besteht ein Bedarf an einer erfolgreichen chemotherapeutischen Therapie, um eine Arterienblockierung zu verringern oder zu verhindern. Der wirksamste Weg zum Verhindern dieser Erkrankung ist auf der Zellebene, im Gegensatz zur wiederholten Revaskularisierungsoperation, die ein signifikantes Risiko für Komplikationen oder Tod tragen kann, Zeit und Geld verbraucht und für den Patienten unbequem ist.
Mikrotubuli, in allen eukaryontischen Zellen vorliegende Zellorganellen, sind für gesunde, normale Zellaktivitäten erforderlich. Sie sind ein wesentlicher Bestandteil der für die Zellteilung benötigten Mitosespindel und sind zum Aufrechterhalten der Zellform und anderer Zellaktivitäten wie Beweglichkeit, Befestigung, Transport zwischen Zellorganellen, extrazellulären Sekretionsvorgängen (P. Dustin (1980) Sci. Am., 243:66 – 76) sowie zum Modulieren der Wechselwirkungen von Wachstumsfaktoren mit Zelloberflächenrezeptoren und für intrazelluläre Signaltransduktion erforderlich. Außerdem spielen Mikrotubuli eine entscheidende regulatorische Rolle bei der Zellreplikation sowohl als c-mos-Onkogen als auch als CDC-2-Kinase, die den Eintritt in die Mitose regulieren, an Tubulin binden und Tubulin phosphorylieren (F. Verde et al. (1990) Nature, 343:233 – 238), und sowohl das Produkt des Tumorsuppressorgens, p53, als auch das T-Antigen von SV-40 binden Tubulin in einem ternären Komplex (S. A. Maxwell et al. (1991) Cell Growth Differen., 2:115 – 127). Mikrotubuli sind nicht statisch, sondern sind in einem dynamischen Gleichgewicht mit ihren löslichen Proteinuntereinheiten, den α- und β-Tubulin-Heterodimeren. Der Zusammenbau unter physiologischen Bedingungen erfordert Guanosintriphosphat (GTP) und bestimmte Mikrotubulus-assoziierte und organisierende Proteine als Kofaktoren; andererseits verursachen hoher Calciumspiegel und kalte Temperatur Depolymerisation.
Es würde deshalb erwartet werden, dass eine Störung dieses normalen Gleichgewichtes zwischen dem Mikrotubulus und seinen Untereinheiten Zellteilung und Beweglichkeit sowie andere von Mikrotubuli abhängige Aktivitäten unterbricht. Diese Strategie ist mit signifikantem Erfolg bei der Behandlung bestimmter Malignome verwendet worden. Tatsächlich gehören anti-Mikrotubulus-Agentien wie Colchicin und die Vinca-Alkaloide zu den wichtigs ten Arzneistoffen gegen Krebs. Diese anti-Mikrotubulus-Agentien, die die Mikrotubuluszerlegung fördern, spielen Hauptrollen bei der Chemotherapie der meisten heilbaren Neoplasmen, einschließlich akuter lymphocytischer Leukämie, Hodgkin- und non-Hodgkin-Lymphom, und Keimzelltumoren sowie bei der Palliativbehandlung vieler anderer Karzinome.
Das neueste und vielversprechendste anti-Mikrotubulus-Agens in der Forschung ist Taxol (der Handelsname von Paclitaxel). Taxol ist ein Anti-Mikrotubulus-Agens, das aus der Stammrinde von Taxus brevifolia, der westlichen (pazifischen) Eibe isoliert wird. Im Gegensatz zu anderen anti-Mikrotubulus-Agentien wie Colchicin und den Vinca-Alkaloiden, die die Mikrotubuluszerlegung fördern, wirkt Taxol durch Fördern der Bildung ungewöhnlich stabiler Mikrotubuli, wobei die normale dynamische Reorganisation des Mikrotubulusnetzwerkes, das für Mitose und Zellproliferation erforderlich ist, gehemmt wird (P. B. Schiff et al. (1979) Nature 277:665; P. B. Schiff et al. (1981) Biochemistry 20:3247). In Gegenwart von Taxol ist die Tubulinkonzentration, die zur Polymerisation erforderlich ist, signifikant erniedrigt; Mikrotubuluszusammenbau tritt ohne GTP und bei niedrigen Temperaturen auf und die gebildeten Mikrotubuli sind stabiler gegen Depolymerisation durch Verdünnung, Calcium, Kälte und hemmende Arzneistoffe. Taxol wird reversibel an polymerisiertes Tubulin binden und andere Tubulin-bindende Arzneistoffe werden sogar in Gegenwart von Taxol noch an Tubulin binden.
Taxol weist eines der breitesten Spektren antineoplastischer Wirkung auf, wobei erneut ernsthaftes Interesse an chemotherapeutischen Strategien, die gegen Mikrotubuli gerichtet sind, hervorrief (E. K. Rowinsky et al. (1990) Jrnl. of the Nat'1. Cancer Inst., 82:1247 – 1259). In neuesten Untersuchungen hat Taxol signifikante Wirkung bei fortgeschrittenem und refraktärem Eierstockkrebs (A. I. Einzig et al. (1992) J. Clin. Oncol., 10:1748), malignem Melanom (A. I. Einzig (1991) Invest. New Drugs, 9:59 – 64) sowie bei Karzinomen der Brust (F. A. Holmes et al. (1991) JNCI, 83:1797 – 1805), des Kopfes und Halses und der Lunge gezeigt.
Taxol ist auf seine Wirkung beim Bekämpfen des Tumorwachstums in verschiedenen klinischen Versuchen unter Verwendung einer Vielfalt an Verabreichungsplänen untersucht worden. Schwere allergische Reaktionen sind nach der Verabreichung von Taxol beobachtet worden. Jedoch ist gezeigt worden, dass das Auftreten und die Heftigkeit allergischer Reaktionen durch die Dosierung und Geschwindigkeit der Taxolinfusion beeinflusst wird (R. B. Weiss et al. (1990) J. Clin. Oncol. 8:1263).
Herzarrhythmien werden mit einer Taxolverabreichung in Verbindung gebracht, und wie bei den allergischen Reaktionen wird hierbei ihr Auftreten durch die Dosierung und Geschwindigkeit der Taxolverabreichung beeinflusst. Sinusbradykardie und Mobitz II-Arrhythmie werden sich bei etwa 40% bzw. 5% der Patienten entwickeln, wobei sie 4 – 6 Stunden nach dem Beginn einer Taxolinfusion beginnen und 4 – 8 Stunden nach ihrer Beendigung andauern. Bei den meisten Patienten ist der anomale Rhythmus vorübergehend, symptomlos, hämodynamisch stabil und erfordert keine Herzarzneimittelverordnungen oder elektrische Schrittsteuerung. Außerdem ist beobachtet worden, dass das Auftreten schwerer kardiologischer Ereignisse bei Patienten, die Taxol allein erhalten, gering ist. So sind bei der Behandlung mit Taxol Infusionszeiten bis zu 24 Stunden angewendet worden, um das Auftreten von Toxizität und einer allergischen Reaktion auf den Arzneistoff herabzusetzen.
Während einer Angioplastie führt Aufblasen eines intraarteriellen Ballonkatheters zur Entendothelialisierung, Zerstörung der Membrana elastica interna und Verletzung an medialen glatten Muskelzellen. Während Restenose wahrscheinlich aus einem Zusammenspiel aus darauf folgender Entzündung, Thrombose und der Akkumulation glatter Muskelzellen resultiert (M. Ferrell et al. (1992) Circ., 85:1630-1631), entsteht schlussendlich der gemeinsame Pfag als Resultat einer medialen VSMC-Entdifferenzierung von einem kontraktilen zu einem sekretorischen Phänotyp. Dies umfasst in erster Linie VSMC-Sekretion von Matrixmetalloproteinasen, die die umgebende Basalmembran zersetzen, Proliferation und chemotaktische Migration in die Intima und Sekretion einer großen extrazellulären Matrix, wobei die neointimale fibroproliferative Verletzung gebildet wird. Vieles der VSMC-phänotypischen Entdifferenzierung nach einer Arterienverletzung ahmt die neoplastischer Zellen nach (d.h. anomale Proliferation, Sekretion von Wachstumsregulationsmolekülen und Protease, Migration und Basalmembraninvasion).
Obwohl die Verwendung des anti-Mikrotubulus-Agens Colchicin zur Verhinderung von Restenose von anderen Forschern untersucht wurde, kamen diese zu gegensätzlichen Schlussfolgerungen (vg. Currier et al., "Colchicine Inhibits Restenosis After Iliac Angioplasty In The Atherosclerotic Rabbit" (1989) Circ., 80:II-66; O'Keefe et al., "Ineffectiveness of Colchicine For The Prevention of Resenosis After Coronary Angioplasty" (1992) J. Am. Coll. Cardiol., 19:1597-1600). Der Stand der Technik schlägt nicht die Verwendung eines Mikrotubulus-Stabilisierungsmittels wie Taxol zum Verhindern oder Verringern dieser Erkrankung vor. So soll das Verfahren der vorliegenden Erfindung die Entwicklung von Atherosklerose oder Restenose unter Verwendung eines Mikrotubulus-Stabilisierungsmittels wie Taxol oder einem wasserlöslichen Taxol-Derivat verhindern oder verringern. Dieser Mikrotubulus-stabilisierende Mechanismus der Atherosklerose- oder Restenosevorbeugung wird durch die analogen Ergebnisse bei Versuchen an Zellproliferation und Migration unter Verwendung von Taxol und ²H₂O (Deuteriumoxid), die vergleichbare Mikrotubulus-Effekte über verschiedene zugrundeliegende Mechanismen ausüben, gestützt.
Folglich ist eine Aufgabe dieser Erfindung, ein Mittel zum Verhindern oder Verringern von Restenose bereitzustellen, wobei ein Arzneimittel verwendet wird, das eine niedrige Dosierung von Taxol(Paclitaxel) oder wasserlösliches Taxol-(Paclitaxel)-Derivat enthält.
Alle zitierten Literaturangaben sind hier durch Bezugnahme aufgenommen.
Zusammenfassung der Erfindung
Gemäß diesen und anderen Aufgaben der vorliegenden Erfindung wird ein Mittel zum Verhindern oder Verringern von Restenose bereitgestellt, das die Behandlung mit einer therapeutisch wirksamen Menge an Taxol oder einem wasserlöslichen Taxol-Derivat umfasst. Eine therapeutisch wirksame Menge des Mittels ist eine Menge, die ausreicht, um die Entwicklung von Restenose zu verhindern oder zu verringern. Dieser Ansatz stellt einen wirksamen Weg zum Verhindern oder Verringern der Entwicklung von Restenose bei Patienten, die für eine solche Erkrankung anfällig sind, bereit. Außerdem ist die Chance eines Patienten, nachteilige Reaktionen zu entwickeln, wegen der niedrigen Dosis des verwendeten chemotherapeutischen Mittels potentiell verringert.
Kurzbeschreibung der Figuren
1 veranschaulicht die durch Taxol ausgelöste Beeinträchtigung der Fähigkeit von VSMCs, in mit Basalmembranproteinen beschichtete Filter einzudringen, und die Taxol-hemmung des [³H]-Thymidineinbaus in gezüchtete VSMCs.
2 zeigt die Taxolhemmung der neointimalen Akkumulation glatter Muskelzellen nach Ballonkatheterverletzung der Rattenhalsschlagader.
4 zeigt Konzentrationen von Taxol, die dosisabhängig eine Mikrotubulus- Bündelung in auf Kunststoff gezüchteten VSMCs verursachen.
5 zeigt eine durch Deuteriumoxid ausgelöste Mikrotubulus-Bündelung in gezüchteten VSMCs.
Ausführliche Beschreibung der Erfindung
Die Ausübung einer Ausführungsform gemäß der vorliegenden Erfindung kann über verschiedene alternative Arzneistoffverabreichungswege wie intraperitoneale oder subkutane Injektion, kontinuierliche intravenöse Infusion, orale Stoffaufnahme oder lokale (direkte) Verabreichung oder eine Kombination von zweien oder mehreren erreicht werden. Wenn eine Lösung zur Injektion oder kontinuierlichen Infusion formuliert wird, muss man zuerst eine Taxollösung herstellen. Taxol wird durch CTEP, DCT, NCI (IND Nr. 22850) als konzentrierte Lösung, 6 mg/ml, in 5 ml-Fläschchen (30 mg/Fläschchen) in einem Vehikel aus polyoxyethylierten Rizinusöl (Cremophor EL^®) 50% und wasserfreiem Alkohol, USP (amerikanisches Arzneibuch (USP, United States Pharmacopoeia)) (50%) geliefert. Die unversehrten Fläschchen sollten unter Kühlung gelagert und vor Gebrauch verdünnt werden. Wenn sie entweder in 5 %iger Dextroseinjektions- oder 0,9 %iger Natriumchloridlösung verdünnt werden, sind Taxolkonzentrationen von 0,3 – 1,2 mg/ml mindestens 12 Stunden bei Raumtemperatur physikalisch und chemisch stabil (NCI Investigation Drugs; Pharmaceutical Data (1990)). Es ist auch gezeigt worden, dass Taxolkonzentrationen von 0,6 mg/ml, entweder in D5W oder NS verdünnt, und von 1,2 mg/ml, in NS verdünnt, hergestellt in Polyolefinbehältern, mindestens 25 Stunden bei Umgebungstemperaturen (20 – 23°C) stabil sind (Waugh et al. (1990) Am. J. Hosp. Pharm. 48, 1520). Obgleich diese Konzentrationen Stabilität für die vorstehenden Zeiträume gezeigt haben, sollen sie nicht die Anwendung der vorliegenden Erfindung beschränken, bei der eine beliebige Konzentration von Taxol verwendet werden kann.
Alle Lösungen von Taxol zeigen eine leichte Trübung, die direkt proportional zu den Arzneistoffkonzentrationen und der nach der Zubereitung vergangenen Zeit ist. Die Bildung einer kleinen Zahl von Fasern in der Lösung (innerhalb zulässiger Grenzen, die durch den USP-Particulate Matter Test für LVPs festgesetzt sind) ist nach Herstellung von Taxolinfusionslösungen beobachtet worden. Obwohl eine Feststoffteilchenbildung keine Abnahme der Arzneistoffwirksamkeit anzeigt, sollten Lösungen, die übermäßige Feststoffteilchenbildung zeigen, nicht verwendet werden. Wenn sie über kontinuierliche Infusion verabreicht werden, kann deshalb eine In-Line-Filtration notwendig sein und diese kann durch Einbau eines hydrophilen, mikroporösen Filters mit einer nicht größeren Porengröße als 0,22 μm (IVEX-HP In Line Filter Set-SL, 15", Abbott Modell Nr. 4525 oder äquivalent) in den Flüssigkeitsweg distal zu einer Infusionspumpe erreicht werden.
Taxol muss in weichmacherfreien Lösungsbehältern (z.B. Glas, Polyolefin oder Polypropylen) aufgrund der Freisetzung von Diethylhexylphthalat-(DEHP)-Weichmacher aus Polyvinylchlorid-(PVC)-Beuteln und intravenöser Schlauchleitung hergestellt werden. Taxol darf nicht über intravenöse Verabreichungs- oder Injektionssets aus PVC verabreicht werden. Deshalb sollten Polyolefin- oder Polyethylen-Leitungssets wie i.v.-Nitroglycerin-Sets (oder Äquivalent) verwendet werden, um die Flasche oder den Beutel (die/der die Taxollösung für eine kontinuierliche Infusion enthält) mit der i.v.-Pumpe zu verbinden; ein 0,22 μm-Filter wird dann an dem i.v.-Set befestigt und kann dann direkt an der zentralen Zugangsvorrichtung des Patienten befestigt werden. Falls notwendig, kann ein Polyolefin-Leitungsverlängerungsset (Polyfin^TM Extension Set, MiniMed Technologies, Modell Nr. 126) verwendet werden, um einen zusätzlichen Abstand zwischen der i.v.-Pumpe und der zentralen Zugangsvorrichtung des Patienten bereitzustellen.
Die Verwendung von Taxol umfasst die Prävention des Wiederauftretens einer Stenose (Restenose) nach einer therapeutischen Angioplastie oder Arteriektomie einer koronaren oder periphären Arterie, nach einer koronaren Bypasstransplantation oder einer Stent-Operation oder nach einer periphär-vaskulären Operation (z.B. die Endarteriektomie der Karotis oder eines anderen periphären Gefäßes, eines vaskulären Bypasses, Stents oder eines prothetischen Transplantationsverfahrens). Ein Dosierungsplan für einen Menschen kann bestehen aus (aber ist nicht begrenzt auf) einer kontinuierlichen 24-Stunden-IV-Vorbehandlung mit bis zu etwa 0,5-2 mg/kg (20-80 mg/m²) vor dem vaskulären Verfahren, etwa 0,25-2 mg/kg (10-80 mg/m²) einer kontinuierlicher IV-Infusion über das 24-Stunden nach dem Verfahren, dann alle 21 Tage etwa 0,25-2 mg/kg (10-80 mg/m²) einer kontinuierlichen IV-Infusion über 24 Stunden für 1 bis 6 Zyklen. Eine solche Dosierung ist bedeutend geringer als die Dosierung, die zur Behandlung von Krebs beim Menschen eingesetzt wird (etwa 4-6 mg/kg).
Jede der vorstehend erwähnten Anwendungen kann auch einer selektiven, lokalisierten Anwendung von Präparaten von Taxol (oder einem anderen Mikrotubulus-Stabilisierungsmittel) mit anhaltender Freisetzung zugänglich sein, die eine hohe Dosierung lokaler Arzneistoffverabreichung mit wenig systemischer Toxizität ermöglichen würde.
Außerdem können auch wasserlösliche Derivate von Taxol gemäß der vorliegenden Erfindung verwendet werden. Die wasserlöslichen Derivate von Taxol, wie sie im US-Pat. Nr. 5,157,049 von Haugwitz et al. (hier durch Bezugnahme aufgenommen) beschrieben sind, schließen 2'-Succinyltaxol, 2'-Succinyltaxoltriethanolamin, 2'-Glutaryltaxol, 2'-Glutaryltaxoltriethanolaminsalz, 2'-O-Ester mit N-(Dimethylaminoethyl)glutamid, 2'-O-Ester mit N-(Dimethylaminoethyl)glutamidhydrochloridsalz ein, aber sind nicht darauf beschränkt. Diese wasserlöslichen Taxol-Derivate können in einem Dosierungszeitplan, der dem vorstehend für Taxol angegebenen analog ist, mit den notwendigen Abänderungen nach Klärung der Pharmakokinetik dieser Mittel verabreicht werden.
Ein Arzneimittel, das eine wirksame Menge eines wasserlöslichen Taxol-Derivates als Wirkstoff umfasst, wird leicht durch Standardverfahren, die gut im Fachgebiet bekannt sind, mit pharmazeutisch verträglichen ungiftigen, sterilen Trägern, falls notwendig, hergestellt. Solche Zubereitungen könnten einem Patienten, der gefährdet ist, Atherosklerose zu entwickeln oder daran zu leiden, oral oder in injizierbarer Form oder direkt auf eine befallene Fläche verabreicht werden, um die Entwicklung der Erkrankung zu verhindern oder zu verringern.
Die folgenden Beispiele veranschaulichen die Wirksamkeit von Taxol (oder wasserlöslichen Taxol-Derivaten) beim Hemmen der Proliferation und Migration glatter Gefäßmuskelzellen, und dürfen nicht dazu verwendet werden, den Schutzbereich der Erfindung einzuschränken.
Beispiel 1
Die in vitro-Fähigkeit gezüchteter VSMCs, die mit verschiedenen Taxolkonzentrationen vorbehandelt sind, in mit rekonstituierten Basalmembranproteinen beschichtete Filter einzudringen, wurde geprüft, um zu bewerten, wie die durch Taxol ausgelöste Mikrotubulusbündelung Zellprozesse, die für die Neointimabildung in vivo notwendig sind, beeinträchtigen würde.
Glatte Gefäßmuskelzellen (VSMCs) wurden durch enzymatische Kollagenase/Elastase-Verdau der Mediaschichten der Rattenaorta, die von 6 Monate alten Wistar-Ratten erhalten wurde, isoliert. Die Zellen wurden in Kultur mit 10% fetalem Kälberserum, glucosereichem DMEM und Aminosäurezusatz gehalten. Die Zellkulturen wurden bei 37°C in 5% CO₂ gehalten.
Nach 18-stündiger Taxolvorbehandlung in Kultur wurden die Zellen in 3,7 %igem Formalin fixiert, mit 1% Triton X-100 permeabilisiert, und polymerisiertes Tubulin wurde mit Mausanti-δ-Tubulin-Antikörper monoclonaler SMI 62-Antikörper an polymerisiertem δ-Tubulin, Paragon Biotec, Inc., Baltimore, MD) markiert. Sekundäre Markierung wurde mit silberangereichertem, 1 nm goldkonjugiertem Kaninchen-anti-Maus-Antikörper (Goldmark Biologicals, Phillipsburg, NJ) erreicht. Repräsentative Lichtmikrophotographien von (A) Kontrolle, mit (B) 0,1 nM Taxol, (C) 1 nM Taxol und (D) 10 nM Taxol behandelten VSMCs sind in 4 gezeigt.
Chemoinvasionsuntersuchungen (Boyden-Kammer) wurden unter Verwendung einer modifizierten Boyden-Kammer (Albini et al. (1987) Cancer Res., 47:3239 – 3245) durchgeführt, die eine obere Kammer umfasste, die durch ein poröses PVPF-Filter von einer unteren Kammer getrennt war. PVPF-Filter (8 μm Porendurchmesser, Nucleopore Filters, Pleasonton, CA) wurden nacheinander mit Lösungen, die 100 μg/ml Typ I-Kollagen, 5 μg/ml Fibronektin und 5 μg rekonstituierte Basalmembran (hergestellt aus dem Englebreth-Holm-Swarm-Tumor) (Kleinman et al. (1986) Biochemistry, 25:312 – 318) enthielten, beschichtet und luftgetrocknet, wobei eine kontinuierliche 10 μm dicke Beschichtung aus Matrixmaterial hergestellt wurde. Die Boyden-Kammern wurden durch Zugeben von 10 ng/ml PDGF-BB in DMEM zur unteren (Chemolockstoff)-Kammer zusammengefügt. Zellen (etwa 200.000), in 0,1% BSA enthaltendem DMEM suspendiert, wurden dann der oberen Kammer zugesetzt. Einige der in diesen Untersuchungen verwendeten Zellen wurden 18 Stunden mit Taxol (Konzentration 30 pM bis 100 nM) in Kultur vorbehandelt. Bei den Taxol-behandelten Gruppen wurde Taxol den oberen und unteren Kammern in der gleichen Konzentration wie der, die zur Vorbehandlung verwendet wurde, zugesetzt. Die Kammern wurden dann 4 Stunden bei 37°C in einer 5 %igen CO₂-Atmosphäre inkubiert. Am Ende des Inkubationszeitraums wurden die Zellen fixiert und mit Hämatoxylin und Eosin angefärbt. Die Zellen auf der oberen Oberfläche (Nicht-Invasoren) wurden mechanisch entfernt und die Zellen auf der Unterseite des Filters (Invasoren) wurden unter 400-facher Vergrößerung gezählt (vier willkürliche Felder wurden pro Filter gezählt und alle Versuche wurden in dreifacher Ausfertigung durchgeführt, und jede dreifache Untersuchung wurde mindestens dreimal bei verschiedenen Gelegenheiten unter Verwendung von verschiedenen VSMC-Präparaten wiederholt). Chemotaxis wurde in analoger Weise in den vorstehend beschriebenen Boyden-Kammern untersucht, nur dass die rekonstituierte Basalmembran weggelassen wurde. In der Fachwelt ist anerkannt, dass diese Chemoinvasionsuntersuchung eine hohe Korrelation zwischen Invasivität in vitro und Zellverhalten, wie es in vivo auftritt, aufweist (Y. Iwamoto et al. (1992) Advances In Experimental Medicine & Biology, 324:141 – 9).
Unter Verwendung von PDGF-BB als Lockstoff hemmte Taxol die VSMC-Invasion bei einer halbmaximalen hemmenden Konzentration von 0,5 nM. Taxol verursachte im Prinzip die vollständige Hemmung bei 100 nM, und eine signifikante Hemmung war noch bei 30 pM (der niedrigsten verwendeten Dosis) auflösbar (1). Eine Chemotaxisuntersuchung (Filter nur mit Fibronektin und Kollagen I beschichtet, ohne die Filterporen verstopfende Basalmembranproteine) mit PDGF-BB als Lockstoff wurde in analoger Weise durchgeführt, wobei das gleiche Ergebnis erhalten wurde. Diese Ergebnisse zeigen, dass Taxol mindestens bei nanomolaren Arzneistoffspiegeln die VSMC-Invasion hauptsächlich über die Hemmung der Fortbewegungsfähigkeit und/oder der Formänderungen hemmt, statt durch Hemmung der Zellsekretion von Kollagenasen und Metalloproteinasen, von denen bekannt ist, dass sie bei dieser Untersuchung notwendig sind, damit VSMCs die Basalmembranproteine durchdringen können.
Gelatinase-Zymographie wurde an den Überständen durchgeführt, die 4 Stunden nach Schluss der vorstehend beschriebenen Boyden-Untersuchungen entfernt wurden. Gelatinezersetzende Proteinasen, die durch VSMCs in die Medien sezerniert wurden, wurden durch nichtreduzierende Natriumdodecylsulfat-Polyacrylamid-Gelelektrophorese in 10 %igen Polyacrylamid-Gelen, die 0,1% (Gew./Vol.) Gelatine enthielten, analysiert. Nach Elektrophorese wurden die Gelatinasen durch 30-minütiges Inkubieren des Gels bei 23°C in 2,5% (Vol./Vol.) Triton X-100, gefolgt von 18-stündiger Inkubation bei 37°C in 0,2 M NaCl, 5 mM CaCl₂, 0,02% Brij 35 (Gew./Vol.), 50 mM Tris-HCl (pH 7,6) renaturiert. Die Gele wurden 90 Minuten mit 0,5 %igem Coomassie-Brillantblau G-250 angefärbt und mit 10 %iger Essigsäure und 40 %igem Methanol entfärbt. Gelatinolytische Wirkung wurde durch ein klares Band gegen den Hintergrund blau-angefärbter Gelatine angezeigt.
Diese Gelatinase-Zymographieuntersuchungen aus den Boyden-Kammer-Invasionsversuchen bestätigen, dass im Vergleich zur Kontrolle der Anteil der VSMC-Kollagenasesekretion über den Taxol-Bereich von 30 pM bis 100 nM nicht signifikant variierte (2, Nebenbild).
Beispiel 2
Um die Tatsache zu bestätigen, dass Mikrotubulusstabilisierung und Hyperpolymerisation der entscheidene und ausreichende Faktor ist, der an der Taxol-Hemmung der VSMC-Invasivität beteiligt ist, wurde die Chemoinvasionsuntersuchung (Boyden-Kammer) mit Deuteriumoxid (²H₂O, schwerem Wasser) durchgeführt. Deuteriumoxid steigert die Mikrotubulus/Tubulinpolymerisation über einen Mechanismus, der von dem des Taxols verschieden ist. Eine Kombination der Isotopen- und Lösungsmitteleffekte des Deuteriumoxids erhöht die Mikrotubuluspolymerisation reversibel sowohl durch Verringern der entscheidenden Konzentration für die Polymerisation für αδ-Tubulinheterodimere über verbesserte hydrophobe Tubulinwechselwirkungen (T. J. Itoh et al. (1984) Biochim. Biophys. Acta., 800:21 – 27) als auch durch Umwandeln einer Population nicht polymerisierbaren Tubulins in die polymerisierbare Form (T. C. Takahashi et al. (1984) Cell Struct. Funct., 9:45 – 52).
VSMCs wurden durch enzymatischen Kollagenase/Elastase Verdau der Mediaschichten der Rattenaorta, die von 6 Monate alten Wistar-Ratten erhalten wurde, isoliert. Die Zellen wurden mit 10% fetalem Kälberserum, glucosereichem DMEM und Aminosäurezusatz in Kultur gehalten. Zellkulturen wurden bei 37°C in 5% CO₂ gehalten.
Bei Deuteriumoxid-behandelten Zellen wurde bei der Herstellung des DMEM aus konzentriertem Ausgangsmaterial Wasser (H₂O) durch ²H₂O (Vol./Vol.) ersetzt. Nach 18-stündiger Deuteriumoxidvorbehandlung in Kultur wurden die Zellen in 3,7 %igem Formalin fixiert, mit 1% Triton X-100 permeabilisiert, und polymerisiertes Tubulin wurde mit Maus-anti-δ-Tubulin-Antikörper (monoclonaler SMI 62 Antikörper an polymerisiertem δ-Tubulin, Paragon Biotec, Inc., Baltimore, MD) markiert. Sekundäre Markierung wurde mit silberangereichertem, 1 nm goldkonjugiertem Kaninchen-anti-Maus-Antikörper (Goldmark Biologicals, Phillipsburg, NJ) erreicht. Repräsentative Lichtmikrophotographien von (5A) Kontrolle und (5B) mit 75% Deuteriumoxid behandelten VSMCs sind in 5 gezeigt.
Chemoinvasionsuntersuchungen wurden unter Verwendung einer modifizierten Boyden-Kammer durchgeführt, die aus einer oberen Kammer bestand, die von einer unteren Kammer durch ein poröses PVPF-Filter getrennt war. PVPF-Filter (8 μm Porendurchmesser, Nucleopore Filters, Pleasonton, CA) wurden nacheinander mit Lösungen, die 100 μg/ml Typ I Kollagen, 5 μg/ml Fibronektin und 5 μg rekonstituierte Basalmembran (hergestellt aus dem Englebreth-Holm-Swarm-Tumor) enthielten, beschichtet und luftgetrocknet, wobei eine kontinuierliche 10 μm dicke Beschichtung aus Matrixmaterial erhalten wurde. Die Boyden-Kammern wurden mit 10 ng/ml PDGF-BB in DMEM in der unteren (Chemolockstoff)-Kammer zusammengefügt, dann wurden Zellen (etwa 200000), die in 0,1% BSA enthaltendem DMEM suspendiert waren, der oberen Kammer zugesetzt. Einige der in diesen Untersuchungen verwendeten Zellen wurden 18 Stunden mit Deuteriumoxid (25%, 50% oder 75% Vol./Vol. Ersatz für H₂O) in Kultur vorbehandelt. Bei den Deuteriumoxid-behandelten Gruppen wurde mit ²H₂O substituiertes DMEM (Vol./Vol.) den oberen und unteren Kammern in der gleichen Konzentration wie der, die zur Vorbehandlung verwendet wurde, zugesetzt. Die Kammern wurden dann 4 Stunden bei 37°C in einer befeuchteten 5 %igen CO₂-Atmosphäre inkubiert. Am Schluss des Versuchs wurden die Filter entfernt und die Zellen wurden fixiert und mit Hämatoxylin und Eosin angefärbt. Nachdem die Zellen auf der oberen Oberfläche des Filters (Nicht-Invasoren) mechanisch entfernt worden waren, wurden die Zellen auf der Unterseite (Invasoren) unter 400-facher Vergrößerung gezählt (vier willkürliche Felder wurden pro Filter gezählt und alle Versuche wurden dreimal durchgeführt).
Das 18-stündige Vorbehandeln gezüchteter VSMCs mit 25%, 50% oder 75% Deuteriumoxid verursachte eine dosisabhängige Mikrotubulushyperpolymerisation, ähnlich der bei Taxol beobachteten. Diese Behandlung hemmte ebenso die PDGF-vermittelte Boyden-Kammerinvasion der VSMCs in einer dosisabhängigen Weise, wobei eine halbmaximale Hemmung bei 25% ²H₂O und eine fast vollständige Hemmung bei 75% ²H₂O erreicht wurde (3).
Beispiel 3
Zusätzlich zu Zellrekrutierung und -Migration sind die verschiedenen Wachstumsregulationsmoleküle, die sich nach einer Arterienverletzung herauskristallisierten, wie PDGF und bFGF auch an Mitogenese und Zellproliferation beteiligt. Um die Wirkung von Taxol auf die VSMC-DNA-Synthese zu messen, wurde der [³H]-Thymidineinbau gemessen. VSMCs wurden zu 4,5 × 10⁴ auf Platten mit 24 Vertiefungen aufgebracht. Nach 5-stündiger Inkubation in 10% FCS + DMEM wurden 0,5 mCi [³H]-Thymidin zugesetzt und die Inkubation wurde weitere 16 Stunden fortgesetzt. Die Zellen wurden zweimal mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung gewaschen, mit 10% TCA 2 Stunden auf Eis extrahiert, dann bei 2000 g 10 Minuten zentrifugiert. Die Überstände wurden abdekantiert und die Pellets wurden in 0,5 ml 1 N NaOH gelöst. Nach Neutralisieren mit 0,5 ml 1 N HCl wurde die [³H]-Thymidinaufnahme mit einem Beckman-Flüssigkeitsszintillationszähler bestimmt. VSMCs wurden sowohl die 18 Stunden vor der Zugabe des Thymidins als auch während des Thymidineinbaus mit den verschiedenen Taxolkonzentrationen behandelt. Jede Versuchsvariante wurde dreimal durchgeführt.
Taxol hemmte den [³H]-Thymidineinbau gezüchteter VSMCs, ein Index der Zellteilung, in einer dosisabhängigen Weise mit einer halbmaximalen hemmenden Konzentration von 5 nM. Taxol verursachte im Prinzip die vollständige Hemmung bei 100 nM, und eine signifikante Hemmung war bei 1 nM auflösbar (1). Dass sich dieses hemmende Profil ein wenig von dem der Invasion und Chemotaxis unterscheidet, wobei eine um eine log-Konzentrations-Einheit geringere Empfindlichkeit, aber eine steilere Konzentrations-Abhängigkeit gezeigt wird, ergibt sich wahrscheinlich aufgrund der beträchtlich unterschied lichen Rollen, die Mikrotubuli bei diesen Prozessen spielen. Taxol hemmte auch die durch PDGF-BB-ausgelöste c-fos-mRNA-Expression bei diesem VSCM-Kulturmodell in einer dosisabhängigen Weise bei einer halbmaximalen hemmenden Konzentration von 1 nM, wobei eine im Prinzip vollständiger Hemmung oberhalb von 20 nM erfolgte. So ist die Hemmung der sofortigen frühen Geninduktion ein weiterer bedeutender Mechanismus, durch den Taxol die Wachstumsfaktorstimulation in VSMCs blockiert, und kann mindestens zum Teil den Ergebnissen des Thymidineinbaus zugrundeliegen.
So hemmt Taxol signifikant in vitro Invasion und Proliferation gezüchteter VSMCs durch Störung der Mikrotubulusfunktion, wobei die Fortbewegungsfähigkeit und die Fähigkeit zum Verändern der Form zerstört wird, sowie die durch den Wachstumsfaktor ausgelöste frühe Genexpression und Zellproliferation bei 100- bis 1000-fach niedrigeren Konzentrationen als denen, die zum Behandeln von Krebs bei Menschen verwendet werden.
Beispiel 4
Der Einbau des Thymidinanalogons Bromdesoxyuridin (BrDU) wurde gemessen, um die Wirkung von Deuteriumoxid auf die VSMC-DNA-Synthese zu bestimmen. VSMCs wurden zu 4,5 × 104 auf Platten mit 24 Vertiefungen aufgebracht. Nach 20-stündiger Inkubation in 10% FCS + DMEM bei verschiedenen ²H₂O Konzentrationen wurden 10 μM BrDU zugesetzt und die Inkubation wurde weitere 4 Stunden fortgesetzt. Die Zellen wurden zweimal mit phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS) gewaschen und mit 100% Methanol (–20°C) 10 Minuten fixiert. Die Zellen wurden 2 Stunden mit 1 N HCl inkubiert, um die DNA zu denaturieren, und anschließend viermal in PBS gewaschen. Monoclonaler Maus-BrDU-Antikörper (Boehringer Mannheim) in 2% BSA-PBS wurde mit Zellen 1 Stunde inkubiert. Nach PBS-Waschung wurde Ziegen-anti-Maus-Antikörper, konjugiert mit alkalischer Phosphatase, zugesetzt. Zellkerne, die BrDU als Ersatz für Thymidin enthielten, färbten sich mit alkalischem Phosphatasesubstrat rot, während sich alle anderen Kerne blau färbten. Die Fraktion der BrDU-positiven Kerne der Kontrolle (definiert als 100%) und die der Deuteriumoxid-vorbehandelten Gruppen wurden miteinander verglichen.
Die Ergebnisse zeigten, dass Deuteriumoxid, ähnlich wie Taxol, die Proliferation und DNA-Synthese gezüchteter VSMCs in einer dosisabhängigen Weise hemmte, was mit dem entscheidenden Gleichgewicht der Mikrotubulus-Tubulin-Dynamik bei der Proliferation der VSMCs vereinbar ist.
Obwohl Taxol und Deuteriumoxid potentiell vielfältige intrazelluläre Effekte aufweisen, zeigt die Koinzidenz ihrer parallelen Effekte auf Mikrotubuli (trotz unterschiedlicher Wirkungsmechanismen) und auf die Funktionalität der VSMCs auf mehreren Ebenen, dass der gemeinsame Mikrotubulus-stabilisierende Wirkungsmechanismus für die beobachteten Funktionsänderungen verantwortlich ist. So ist auf Grundlage der Ergebnisse der Versuche sowohl mit Taxol als auch mit Deuteriumoxid offensichtlich, dass Mikrotubuli an der Steuerung der entscheidendsten und empfindlichsten intrazellulären Mechanismen beteiligt sind, die dafür notwendig sind, dass die VSMCs die vielfältigen Transformationen durchmachen, die an der Entwicklung von Atherosklerose und Restenose nach einer Arterienverletzung beteiligt sind, wodurch Mikrotubuli zu besonders strategischen Zielen werden, um das Ergebnis zu beeinflussen.
Beispiel 5
Unter einem Protokoll, das vom National Institute on Aging Animal Care and Use Committee genehmigt wurde, wurden 6-monatige Wistar-Ratten aus der GRC-Kolonie mit 20 mg/kg Körpergewicht Pentobarbital, 2 mg/kg Körpergewicht Ketamin und 4 mg/kg Körpergewicht Xylazin intraperitoneal narkotisiert. Die linke Karotis externa-Arterie wurde mit einem 2-French-Fogarty-Katheter zur operativen Embolusentfernung kanüliert, mit Kochsalzlösung aufgebläht und dreimal durch die Karotis communis-Arterie gleiten gelassen wurde, um eine sich ausdehnende Entendothelialisierungsverletzung zu erzeugen. Die Tiere wurden mit 2 mg/kg Körpergewicht Taxollösung oder die Kontrolltiere mit Vehikel allein (13,4 ml/kg Körpergewicht pro Tag von 1:2:2:165 DMSO : Cremophor EL : wasserfreiem Ethanol: phosphatgepufferter Kochsalzlösung) durch intraperitoneale Injektion behandelt, die 2 Stunden nach der Verletzung begann. Die Taxollösung oder das Vehikel allein wurde die nächsten 4 Tage einmal täglich als intraperitoneale Injektion verabreicht. Nach 11 Tagen wurden die Tiere (8 Taxol-behandelte und 10 Vehikel-behandelte) wie vorstehend narkotisiert und die Halsschlagader wurde isoliert und in 10 %igem gepuffertem Formalin fixiert und in Paraffin eingebettet. Querschnitte der Halsschlagadern wurden auf Objektträgern fixiert und mit Hämatoxylin- und Eosin-Färbemittel angefärbt. Das Bild der Halsschlagader wurde auf ein Digitalisierbrett projiziert und die Querschnittflächen der Intima und der Media wurden gemessen. Die Ergebnisse sind in 2 gezeigt. Wie im Stand der Technik angegeben (G.A.A. Ferns et al. (1991), Science, 253:1129-1132), kann das Restenosemodell einer Verletzung der Rattenhalsschlagader nützlich für die Untersuchung der Restenose beim Menschen sein und auf eine potentiell therapeutische Wirkung beim Menschen hinweisen.
Die quantitative Analyse verletzter Halsschlagaderabschnitte zeigte, dass die Taxol-Behandlung im Vergleich zu Vehikel-behandelten Tieren die Neointimafläche um 70% verringerte (Tabelle I) (*P < 0,001; †P' = NS; ‡P < 0,001). Mehrere der mit Taxol behandelten Tiere zeigten praktisch keine wahrnehmbaren Neointima (bei entblößtem Endothel, was eine Verletzung beweist), während alle Vehikel-behandelten Tiere mindestens eine mäßige Neointimaverdickung aufwiesen.
Obwohl die systemische in vivo-Taxoldosis (2 mg/kg), die bei diesen Versuchen verwendet wird, bedeutend niedriger ist als die, die normalerweise zum Behandeln von Karzinomen bei Menschen verwendet wird (etwa 3 – 6 mg/kg), könnte eine dramatisch niedrigere systemische Dosierung mit anhaltender oder sogar verbesserter Wirksamkeit möglich sein, wenn ein Vorbehandlungsschema mit der optimalen Behandlungsdauer kombiniert wird. Da außerdem das Therapieziel ist, die "aktivierten" VSMCs in Schach zu halten bzw. vorzugsweise die Aktivierung von vornherein zu verhindern, bis sich der Stimulus für Wachstum und Migration aufgelöst hat (statt eine zum Zelltod führende Zytotoxizität zu verursachen), kann das Ziel einer Kurzzeittherapie mit begrenzter Toxizität beim Menschen erreicht werden. Schließlich werden es wohl lokale Verabreichungssysteme mit anhaltender Freisetzung sein, die die beste Lösung zum Verhindern von Restenose nach Angioplastie bieten, wodurch hohe lokale Konzentrationen der Arzneistoffverabreichung ermöglicht werden und im Prinzip die Probleme systemischer Toxizität ausgeschlossen werden. Systeme zur Verabreichung eines Arzneistoffs, die wertvoll sein können, umfassen arzneistoffimprägnierte polymerbeschichtete Metall-Stents, biologisch abbaubare Arzneistoffe eluierende Polymer-Stents und genetisch sensibilisierte Endothelzellen, um Metall-Stents zu überziehen oder direkt als lokaler Endothelzellüberzug abgegeben zu werden (D. W. M. Muller et al. (1991) JACC 17:126b – 131 b). Diese Systeme erlauben eine sichere Verwendung eines chemotherapeutischen Mittels ohne systemische Nebenwirkungen. In einer anderen Ausführungsform kann die Behandlung einen Vorbehandlungszeitraum (d.h. vor der Gefäßoperation) mit kontinuierlicher intravenöser Infusion über einen Zeitraum, gefolgt von einer anderen Therapie während der Operation (lokale, direkte Verabreichung) oder danach (oral, Injektion) umfassen.
Die vorstehenden Beispiele lehren die potentiellen vorteilhaften Anwendungen von Taxol (bzw. wasserlöslichen Taxol-Derivaten), um eine Arterienverstopfung zu verhindern und dadurch die Gefahr von Herzanfällen, Schlaganfällen, eines Nierenversagens und einer Nierendialyse, einer Erblindung, einer Gliedmaßenamputation, eines Nervenschadens, eines Bedarf an einer korrigierenden Gefäßoperation/angioplastie oder einer Organtransplantation und einer vorzeitigen und dauerhaften Arbeitsunfähigkeit, wobei ein chronischer Krankenhausaufenthalt erforderlich ist, zu verringern oder diese zu verhindern. Die Erfindung ist ausführlich beschrieben worden, aber sie ist selbstverständlich auch zu anderen als den beschriebenen Ausführungsformen fähig ist. Der Fachmann weiß, dass Variationen und Modifikationen im Sinne der Erfindung unter den Schutzbereich der Erfindung bewirkt werden können. Demgemäß dienen die obenstehende Offenbarung und Beschreibung lediglich der Veranschaulichung. Sie beschränken keineswegs die Erfindung, die ausschließlich durch die Ansprüche definiert ist. TABELLE 1

EP-B1-1 118 325 (00 12 8626.9)
The United States of America, represented by the Secretary, Department of Health and Human Services
u.Z.: A 1186 EP/1 S3

Claims

Verwendung von Paclitaxel oder einem Paclitaxel-Derivat für die Herstellung eines Arzneimittels zur Verhinderung oder Verringerung von Restenose bei einem Patienten.
Verwendung gemäß Anspruch 1, wobei das Paclitaxel-Derivat ein wasserlösliches Paclitaxel-Derivat ist, ausgewählt aus der Gruppe bestehend aus 2'-Succinylpaclitaxel, 2'-Succinylpaclitaxeltriethanolamin, 2'-Glutarylpaclitaxel, 2'-Glutarylpaclitaxeltriethanolaminsalz, 2'-O-Ester mit N-(Dimethylaminoethyl)glutamid und 2'-O-Ester mit N-(Dimethylaminoethyl)glutamidhydrochloridsalz.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 2, wobei die Behandlung die systemische Verabreichung des Arzneimittels umfasst.
Verwendung gemäß einem der Ansprüche 1 bis 3, wobei die Behandlung die lokale Verabreichung des Arzneimittels umfasst.
Verwendung gemäß Anspruch 3, wobei das Paclitaxel oder das Paclitaxel-Derivat in einer Dosis von 2 mg/kg verabreicht wird.
Verwendung gemäß Anspruch 4, wobei die lokale Verabreichung ein lokales Verabreichungssystem mit kontinuierlicher Freisetzung umfasst.
Verwendung gemäß Anspruch 6, wobei das lokale Verabreichungssystem mit kontinuierlicher Freisetzung einen Stent umfasst.
Verwendung gemäß Anspruch 7, wobei der Stent einen polymerbeschichteten Metall- oder einen Polymer-Stent umfasst.
Verwendung gemäß den Ansprüchen 7 und 8, wobei der Stent mit dem Arzneimittel beschichtet ist.