DE69429511T2

DE69429511T2 - Reduzierung von durch liposome induzierte physiologischen gegenreaktionen

Info

Publication number: DE69429511T2
Application number: DE69429511T
Authority: DE
Inventors: L. Ahl; K. Bhatia; S. Janoff; R. Minchey
Original assignee: Liposome Co Inc
Current assignee: Elan Pharmaceuticals LLC
Priority date: 1993-05-21
Filing date: 1994-05-20
Publication date: 2002-05-16
Anticipated expiration: 2014-05-21
Also published as: PT699068E; WO1994027580A1; NO954691L; EP1118326A3; NO954691D0; NZ267310A; KR960702297A; DE69429511D1; EP1118326A2; ES2165875T3; GR20010300075T1; US5662930A; JPH08510748A; EP0699068A1; DE1118326T1; AU6956894A; ES2193005T1; CA2160118A1; AU680513B2; DK0699068T3

Description

Diese Erfindung betrifft die Verringerung der liposomeninduzierten nachteiligen physiologischen Reaktionen wenn Liposomenzusammensetzungen Lebewesen verabreicht werden, einschließlich Säuger, wie etwa Menschen. Derartige Liposomenzusammensetzungen können verwendet werden, um bioaktive Mittel einzukapseln.
Liposomen sind vollständig geschlossene Lipiddoppelschichtmembranen, die ein eingeschlossenes wässriges Volumen enthalten. Die Doppelschicht besteht aus Lipidmolekülen, welche Monoschichten mit einem hydrophoben Bereich und einem hydrophilen Bereich umfassen. Die Struktur der Doppelschicht ist derart, dass der hydrophobe (nichtpolare) Acylkettenbereich der Lipiddoppelschicht sich in Richtung des Zentrums der Doppelschicht orientiert, während die hydrophilen (polaren) Kopfgruppen sich in Richtung der wässrigen Phase orientieren.
In einem Liposomen-Arzneimittel-Verabreichungssystem wird ein bioaktives Mittel, wie etwa ein Arzneimittel, in dem Liposom eingeschlossen und dann dem zu behandelnden Patienten verabreicht (Rahman et al., U.S. Patent Nr. 3,993,754; Sears, U.S. Patent Nr. 4,145,410; Papahadjopoulos et al., U.S. Patent Nr. 4,235,871; Schneider, U.S. Patent Nr. 4,224,179; Lenk et al., U.S. Patent Nr. 4,522,803; und Fountain et al., U.S. Patent Nr. 4,588,578.
Bioaktive Mittel können innerhalb der Lipiddoppelschichten von Liposomen oder ihren wässrigen Kompartimenten eingeschlossen sein. Die Einkapselung von bioaktiven Mitteln, insbesondere therapeutischen oder diagnostischen Mitteln, in Liposomenzusammensetzungen ist ein gut entwickeltes Verfahren zur Zuführung dieser Mittel an spezielle Stellen innerhalb des Körpers.
EP-A-0 213 523 offenbart pharmazeutische Zusammensetzungen, umfassend Phospholipide, welche in der Form von Liposomen vorliegen. Darüber hinaus offenbart WO-A-9205773 Zuführungsvehikelformulierungen, umfassend ein aktives Mittel, das innerhalb von Liposomen eingekapselt ist, welche einen superfiziellen Transportpromotor umfassen, welcher eine unversehrte Cytoplasmaaufnahme des Mittels durch Zellen erleichtert.
Es wird angenommen, dass Liposomen durch phagocygote Zellen des Retikuloendothelialsystems (RES) aufgenommen werden können. Liposomen sind als geeignet zum Befördern von Kontrastmedien in Retikuloendothelialgewebe in der Leber, Nieren, Lungen und Milz erkannt worden. Liposomeneingekapselte jodierte organische Verbindungen wurden in das Kreislaufsystem eines Patienten injiziert, um bestimmte Organe für eine diagnostische Untersuchung darzustellen (Schneider et al., "Injectable Opacifying Liposome Composition", Internationale Anmeldung Nr. PCT/EP88/00447, Internationale Veröffentlichungsnr. WO 88109165, veröffentlicht am 10. Mai 1989).
Es ist erkannt worden, dass mit Erhöhung der Teilchengröße auf 2 bis 3 um von Lipidemulsionen ein relativ größerer Anteil der Teilchen in der Leber und der Milz im Gegensatz zum Knochenmark phagocytosiert werden. Jedoch sind nachteilige physiologische Reaktionen nachfolgend auf die Infusion jodierter Lipidemulsionen beobachtet worden. Andere Studien zeigten, dass ein Schwefelkolloid mit einer mittleren Größe von 0,3 Mikrometer ohne diese schlechten Wirkungen verwendet werden kann (siehe Ivancev et al., "Effect of Intravenously Injected Iodinated Lipid Emulsions on the Liver", Acta Radiologica 30 (1989) S. 291-298.
Negativ geladene Phospholipidderivate wurden auf den Einfluss auf die Zirkulationszeit von Liposomen untersucht (siehe Park et al., "Some negatively charged phospholipid derivatives prolong the liposome circulation time in vivo" Biochimica et Biophysica Acta, 1992, 1108 (2), S. 257-60.
Verfahren zum Verbessern der Blutkreislaufzeit intravenös verabreichter Liposomen umfassen das Zugeben eines amphipatischen Lipids zu dem Liposom, welches mit einem Polyalkylether derivatisiert ist (Woodle et al., U.S. Patent Nr. 5,013,556 "Liposomes with Enhanced Circulation Time", veröffentlicht am 07. Mai 1991).

ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG

Diese Erfindung betrifft eine Verwendung eines Liposoms mit einer Lipiddoppelschicht, umfassend ein Molekül, das oberflächenmittelmodifiziert ist, umfassend ein oberflächenmodifizierendes Mittel, ausgewählt aus Monocarbonsäuren, Dicarbonsäuren und Sulfolipiden und einen Anker, ausgewählt aus Phospholipiden und amphiphilen Proteinen, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zum Verringern der Blutdruckabnahme, die mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist, welches kein Molekül aufweist, das oberflächenmittelmodifiziert ist.
Das gemäß der Erfindung unter Verwendung des oben angegebenen Liposoms hergestellte Arzneimittel kann insbesondere in einem Verfahren zur Verabreichung einer Liposomenzusammensetzung an ein Lebewesen angewendet werden, welches das Verabreichen einer Liposomenzusammensetzung an das Lebewesen umfasst, umfassend eine wirksame Menge eines Liposoms zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und ein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül, welches ein oberflächenmodifizierendes Mittel und einen Anker umfasst. Das in dem Verfahren verwendete Liposom hat typischerweise einen Durchmesser von 200 nm bis 5000 nm, bevorzugter von 400 nm bis 5000 nm und am bevorzugtesten derzeit von ungefähr 400 nm bis 1000 nm. Liposomen mit derartigen Durchmessern sind vorzugsweise Interdigitationsfusionsliposomen (IFV), können aber auch große unilamellare Liposomen (LUV) oder multilamellare Liposomen (MLV) sein. Die Konzentration des oberflächenmittelmodifizierten Moleküls in der Doppelschicht ist typischerweise mindestens 2 Mol-%, bevorzugter mindestens 5 Mol-% und am bevorzugtesten mindestens 10 Mol-%. Vorzugsweise ist die wirksame Menge des Liposoms zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion 50 mg des Liposoms pro kg des Körpergewichts des Lebewesens.
Das oberflächenmodifizierende Mittel ist vorzugsweise eine Dicarbonsäure, z.B. Succinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Pimelinsäure, Suberinsäure, Weinsäure, Mucinsäure, Tetrafluorsuccinsäure oder Hexafluorglutarsäure, eine Monocarbonsäure, z.B. Essigsäure, Propionsäure, Butansäure, Valeriansäure, Glykolsäure, Milchsäure, Trifluoressigsäure, Pentafluorpropionsäure oder Heptafluorbutansäure oder ein Sulfolipid, z.B. Bis- (succinimidooxycarbonyloxy)ethylsulfon, N-Succinimidyl-S-acetylthioacetat oder 2-Iminothiolan (Traut's-Reagenz). Vorzugsweise ist das oberflächenmodifizierende Mittel Glutarsäure. Der Anker ist vorzusweise ein Phospholipid; vorzugsweise hat das Phospholipid gesättigte Acylketten. Derzeit bevorzugte gesättigte Acylketten sind Palmitatketten. Vorzugsweise ist der Phospholipidanker Dipalmitoylphosphatidylethanolamin (DPPE). Der Anker kann auch ein amphiphiles Protein sein. Das oberflächenmodifizierende Mittel ist vorzugsweise an die hydrophobe Domäne des Ankers gebunden.
Das oberflächenmodifizierte Molekül kann eine Spacergruppe (Abstandsgruppe) umfassen, welche typischerweise ein organischer Rest ist, der eine oder mehr organische funktionelle Gruppen enthält, welche zum Binden des Glycerolgrundgerüsts eines Phospholipidankers und an die Phosphatgruppe des Phospholipidankers in der Lage sind. Typischerweise ist die funktionelle Gruppe eine Hydroxyl-, Thiol-, Epoxid- oder Amingruppe; vorzugsweise ist die Spacergruppe Ethylenglykol oder Polyethylenglykol.
Das in dem Verfahren verwendete Liposom umfasst ein bioaktives Mittel, welches typischerweise ein Kontrastmittel, ein antibakterielles Mittel, ein antivirales Mittel, ein antimykotisches Mittel, ein antparasitäres Mittel, ein tumorizides Mittel, ein Antimetabolit, ein Kohlenhydrat, ein Polypeptid, ein Peptid, ein Protein, ein Toxin, ein Enzym, ein Hormon, ein Neurotransmitter, ein Glycoprotein, ein Lipoprotein, ein Immunoglobulin, ein Immunomodulator, ein Vasodilator, ein Farbstoff, ein Radiomarkierungsmittel, ein strahlendurchlässiges Mittel, eine fluoreszente Verbindung, ein Rezeptorbindungsmolekül, ein entzündungshemmendes Mittel, ein mydriatisches Mittel, ein Lokalanästhetikum, ein Narkotikum, ein Vitamin, eine Nukleinsäure, ein Polynukleotid, ein Nukleosid, ein Nukleotid, ein MRI, ein radioaktives oder wasserlösliches jodiertes Kontrastmittel und Gemische und pharmazeutisch verträgliche Salze davon oder ein Gemisch davon ist. Vorzugsweise ist das bioaktive Mittel ein wasserlösliches jodiertes Kontrastmittel, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Iohexol, Iopamidol, Ioxoglat, Iotrolan, Iovesol. Iothalamat, Iodimid, Iodipamid, Iopromid, Metrizamid, Iopentol, Iodixanol, Diatrizoat, Iotroxsäure und Gemische und pharmazeutisch verträgliche Salze davon. Bevorzugter ist das wasserlösliche jodierte Kontrastmittel Iotralan. Vorzugsweise wird die Liposomenzusammensetzung durch intravenöse oder intrarterielle Verabreichung verabreicht.
Das Arzneimittel, das gemäß der Erfindung unter Verwendung des oben angegebenen Liposoms erzeugt wird, kann ebenfalls im Besonderen in einem Verfahren zum Verabreichen einer Liposomenzusammensetzung an ein Lebewesen verwendet werden, umfassend das Verabreichen eines entzündungshemmenden Mittels und einer Liposomenzusammensetzung, umfassend eine wirksame Menge zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion eines Liposoms, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und ein Molekül, das oberflächenmittelmodifiziert ist, worin das entzündungshemmende Mittel dem Lebewesen vor einer Verabreichung der Liposomenzusammensetzung verabreicht wird. In einer Ausführungsform der Erfindung ist das entzündungshemmende Mittel ein Steroid; in einer alternativen Ausführungsform der Erfindung ist das entzündungshemmende Mittel ein nichtstereoides entzündungshemmendes Mittel, vorzugsweise Indomethacin. Vorzugsweise wird das Mittel dem Lebewesen intravenös oder intraarteriell, zumeist 30 Minuten vor der Verabreichung der Liposomenzusammensetzung, verabreicht.
Diese Erfindung betrifft eine Verwendung eines Liposoms mit einer Lipiddoppelschicht, umfassend ein Molekül, das oberflächenmittelmodifiziert ist, umfassend ein oberflächenmodifizierendes Mittel ausgewählt aus Monocarbonsäuren, Dicarbonsäuren und Sulfolipiden und einen Anker, ausgewählt aus Phospholipiden und amphiphilen Proteinen zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zum Verringern der Blutdruckabnahme, die mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist, welches kein Molekül umfasst, das durch ein Oberflächenmittel modifiziert ist. Daher beschreibt diese Erfindung die Verwendung einer wirksamen Menge eines Liposoms zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion, umfassend eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und einem Molekül, das durch ein oberflächenmittel modifiziert ist, umfassend ein oberflächenmodifizierendes Mittel und einen Anker, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Verringerung von liposomeninduzierten nachteiligen physiologischen Reaktionen, wie etwa Blutdruckabnahme, die mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist, welches kein Molekül umfasst, das oberflächenmittelmodifiziert ist.
Typischerweise hat das Liposom einen Durchmesser von 200 nm bis 5000 nm, wünschenswerterweise von 400 nm bis 5000 nm, wünschenswerter von 400 nm bis 1000 nm. Vorzugsweise ist das Liposom ein großes unilamellares Liposom oder ein Interdigitationsfusionsliposom, es kann jedoch ebenfalls ein multilamellares Liposom sein, wie etwa ein multilamellares Liposom, das ein Solut umfasst, das in seinen wässrigen Kompartimenten eingeschlossen ist, worin die Konzentration des Soluts in jedem der wässrigen Kompartimente im Wesentlichen gleich ist.
Die Konzentration des Moleküls, das mit einem Oberflächenmittel modifiziert ist, ist in der Doppelschicht typischerweise mindestens 2 Mol-%, vorzugsweise mindestens 5 Mol%, bevorzugter mindestens 10 Mol-%. Vorzugsweise ist das oberflächenmodifizierende Mittel eine Dicarbonsäure, wie etwa Succinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Pimelinsäure, Suberinsäure, Weinsäure, Mucinsäure, Tetrafluorsuccinsäure oder Hexafluorglutarsäure. Am bevorzugtesten ist derzeit das oberflächenmodifizierende Mittel die Dicarbonsäure Glutarsäure. Jedoch kann das oberflächenmodifizierende Mittel ebenfalls eine Monocarbonsäure, wie etwa Essigsäure, Propionsäure, Butansäure, Valeriansäure, Glykolsäure, Milchsäure, Trifluoressigsäure, Pentafluorpropionsäure oder Heptafluorbutansäure oder ein Sulfolipid, wie etwa ein Bis- (succinimidooxycarbonyloxy)ethylsulfon, N-Succinimidyl-S-actylthioacetat oder 2- Iminothiolan (Traut's-Reagenz) sein.
Vorzugsweise ist der Anker ein Phospholipid, bevorzugter ein Phospholipid mit gesättigten Acylketten, wie etwa Palmitatketten. In einer besonderen Ausführungsform der vorliegenden Erfindung, welche derzeit bevorzugt ist, ist der Phospholipidanker Dipalmitoylphosphatidylethanolamin (DPPE). Jedoch kann der Anker auch ein amphiphiles Protein sein.
Das oberflächenmodifizierte Molekül kann einen Phospholipidanker und eine Spacergruppe umfassen, worin die Spacergruppe ein oder mehrere organische funktionelle Gruppen umfasst, die in der Lage zum Binden an das Glycerolgrundgerüst des Phospholipidankers und an die Phosphatgruppe des Phospholipidankers sind. Typischerweise ist die funktionelle Gruppe eine Hydroxyl-, Thiol-, Epoxid- oder Amingruppe. Vorzugsweise ist die Spacergruppe Ethylenglykol oder Polyethylenglykol.
Vorzugsweise umfasst das Liposom der vorliegenden Erfindung weiterhin ein bioaktives Mittel.
Das umfasste bioaktive Mittel in dem Liposom kann, ohne darauf begrenzt zu sein, ein Kontrastmittel, ein antibakterielles Mittel, ein antivirales Mittel, ein Antimykotikum, ein antparasitäres Mittel, ein tumorizides Mittel, ein Antimetabolit, ein Kohlenhydrat, ein Polypeptid, ein Peptid, ein Protein, ein Toxin, ein Enzym, ein Hormon, ein Neurotransmitter, ein Glycoprotein, ein Lipoprotein, ein Immunglobulin, ein Immunmodulator, ein Vasodilator, ein Farbstoff, ein Radiomarkierungsmittel, eine strahlendurchlässige Verbindung, eine fluoreszente Verbindung, ein Rezeptorbindungsmolekül, ein entzündungshemmendes Mittel, eine mydriatische Verbindung, ein Lokalanästhetikum, ein Narkotikum, ein Vitamin, eine Nukleinsäure, ein Polynukleotid, ein Nukleosid, ein Nukleotid, ein MRI, ein radioaktives oder wasserlösliches jodiertes Kontrastmittel sein und umfasst Gemische und pharmazeutisch verträgliche Salze davon. Vorzugsweise ist das bevorzugte bioaktive Mittel ein wasserlösliches Radiokontrastmittel, wie etwa Iohexol, Iopamidol, Ioxoglat, Iotrolan, Iversol, Iothalamat, Iodimid, Iodipamid, Iopromid, Metrizamid, Iopentol, Iodixanol, Diatrizoat und Iotroxsäure, einschließlich Gemische und pharmazeutisch verträgliche Salze davon.
Vorzugsweise ist das wasserlösliche Radiokontrastmittel Iotrolan. Vorzugsweise ist die wirksame Menge zum Verringern nachteiliger physiologischer Einflüsse des Liposoms, im Besonderen die blutdrucksenkende Menge des Liposoms 50 mg des Liposoms pro kg Körpergewicht des Lebewesens.
Die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung ist bevorzugt zur Verwendung in Verbindung mit einem entzündungshemmenden Mittel zum Verringern der Blutdruckabnahme, die mit der Verwendung des Liposoms verbunden ist, welches kein Molekül umfasst, das oberflächenmittelmodifiziert ist, worin das entzündungshemmende Mittel nicht in das Liposom eingekapselt ist. Das entzündungshemmende Mittel kann ein Steroid oder ein nichtsteroides entzündungshemmendes Mittel sein. Das bevorzugte entzündungshemmende Mittel ist Indomethacin.
Daher beschreibt die Erfindung die Verwendung einer wirksamen Menge eines Liposoms zum Verringern einer nachteiligen physiologischen Reaktion, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und einem Molekül, das oberflächenmittelmodifiziert ist, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zum Verringern liposomeninduzierter nachteiliger physiologischer Reaktionen in Verbindung mit einem entzündungshemmenden Mittel, worin das entzündungshemmende Mittel nicht in dem Liposom eingekapselt ist.
Daher ist die erfindungsgemäße Zusammensetzung abgestimmt zum Verringern von liposomeninduzierten nachteiligen physiologischen Reaktionen, worin die Zusammensetzung eine wirksame Menge eines Liposoms zum Verringern einer nachteiligen physiologischen Reaktion umfasst, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und einem Molekül, das oberflächenmittelmodifiziert ist.

KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHUNGEN

Fig. 1. Dipalmitoylphosphatidylethanolaminglutarsäure (DPPE-GA).
Fig. 2. Prozentuale Liposomendosis in Rattenplasma nachfolgend auf die Injektion von DSPC oder DSPC/DPPE-GA Interdigitationsfusionsliposomen (IFV). Ausgefüllte Quadrate: DSPC IFV, ausgefüllte Kreise: DSPC/DPPE-GA (10 Mol-% IFV) X-Achse: Zeit (Stunde); y-Achse: prozentuale Dosis, die im Plasma verbleibt.
Fig. 3: Prozentuale Liposomendosis in Rattenplasma nachfolgend auf die Injektion von DSPC oder DSPC/DPPE-GA-multilamellaren Liposomen (MLV). Ausgefüllte Quadrate: DSPC MLV; ausgefüllte Kreise: DSPC/DPPE-GA (10 Mol-%) MLV. X-Achse: Zeit (Stunden); y-Achse: prozentuale Dosis, die in dem Plasma verbleibt.
Fig. 4: Prozentanteile Liposomendosis in Rattenplasma nachfolgend auf die Injektion von DSPC oder DSPC/DPPE-GA-unilamellaren Liposomen, hergestellt von Extrusion Technique (LUVET). Ausgefüllte Quadrate: DSPC LUVET; ausgefüllte Kreise: DSPC/DPPE-GA (10 Mol-%) LUVET. X-Achse: Zeit (Stunden); y- Achse: prozentuale Dosis, die in dem Plasma verbleibt.
Fig. 5: Volumengewichteter Durchmesser von Iotrolan-enthaltendem DSPC und DSPC/DPPE-GA IFV. Ausgefüllte Quadrate: DSPC IFV; ausgefüllte Kreise: DSPC/DPPE-GA IFV (5 Mol-% DPPE-GA); ausgefüllte Dreiecke: DSPC/DPPE-GA IFV (10 Mol-% DPPE-GA). Die dicke vertikale Linie bedeutet eine Malvern-Grenze. X-Achse: volumengewichteter Durchmesser (Mikrometer); y-Achse: prozentuale Verteilung.
Fig. 6: Blutdruckveränderungen, die durch DSPC und DSPC-GA IFV induziert werden. Spuren (Spitze bis zum niedrigsten Punkt): 10 Mol-% DPPE-GA; 5 Mol-% DPPE-GA; 2 Mol-% DPPE-GA; 0 Mol-% DPPE-GA. X-Achse: Zeit (Minuten); y-Achse: mittlerer arterieller Blutdruck (mmHg).
Fig. 7: Normalisierte AUC (Fläche unter den Kurven) als eine Funktion des mittleren Durchmessers von DSPC/N-Glutaryl-DPPE-Liposomen. X- Achse: Liposomendurchmesser (nm); y-Achse: normalisiertes AUC.
Fig. 8: Mittlerer Blutdruck während der Infusion von DPPE-FGA, enthaltend IF-Liposomen in Ratten. Die gezeigten Daten sind für das Tier #1. X-Achse: Zeit (min) nach der Infusion; y-Achse: Blutdruck (mmHg).
Fig. 9: Mittlerer Blutdruck während der Infusion von DPPE-FGA IF. Die gezeigten Daten sind für das Tier #2.
Fig. 10: Mittlerer Blutdruck während der Infusion von DSPC (4,5) IF Liposomen. Die gezeigten Daten sind für das Tier #3.
Fig. 11: Mittlerer Blutdruck während der Infusion von DSPC (4,5) IF Liposomen. Die gezeigten Daten sind für das Tier #4.
Fig. 12: Mittlerer Blutdruck während der Infusion von DSPC (4,5) IF Liposomen. Die gezeigten Daten sind für das Tier #5.
Fig. 13: Die Wirkung einer Einbringung von DPPE-GA in verschiedene Liposomentypen. X-Achse: Zeit (h); y-Achse (%-Dosis im Plasma). Ausgefüllte Quadrate: DSPC LUVET; ausgefüllte Kreise: DSPC- DPPE/GA LUVET; ausgefüllte Dreiecke: DSPC IF; ausgefüllte Rauten: DSPC-DPPE/GS IF; offene Quadrate: DSPC multilamellare Liposomen (MLV); offene Kreise: DSPC-DPPE/GA MLV.
Fig. 14: Malvern-Teilchengrößenverteilungsanalyse von DPPE-GA IF, enthaltend Iotrolan. X-Achse: Probenaufbewahrungsbedingungen; y-Achse: % Liposomen im Behälter, z-Achse: Liposomendurchmesser (Mikrometer). Die dargestellten Daten sind für Charge #1.
Fig. 15: Malvern-Teilchengrößenverteilungsanalyse von DPPE-GA IF, enthaltend Iotrolan. X-Achse: Probenaufbewahrungsbedingungen; y-Achse: % Liposomen im Behälter; z-Achse: Liposomendurchmesser (Mikrometer). Die gezeigten Daten sind für Charge #2.
Fig. 16: CT-Bilderdarstellungsuntersuchung von Kaninchenlebern unter 7 Verwendung von DPPE-GA; Iotrolan enthaltenden IF-Liposomen. X- Achse: Zeit nach der Injektion (min); y-Achse: Dichte ( HU).

DETAILLIERTE BESCHREIBUNG DER ERFINDUNG

Die Erfindung betrifft eine Verwendung eines Liposoms mit einer Lipiddoppelschicht, umfassend ein Molekül, das oberflächenmittelmodifiziert ist, umfassend ein oberflächenmodifizierendes Mittel, ausgewählt aus Monocarbonsäuren, Dicarbonsäuren und Sulfolipiden, und einen Anker, ausgewählt aus Phospholipiden und amphiphilen Proteinen zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Verringerung der Blutdruckabnahme, die verbunden ist mit der Verwendung eines Liposoms, welches kein Molekül umfasst, das mit einem Oberflächenmittel modifiziert ist.
Das gemäß der Erfindung unter Verwendung des oben genannten Liposoms hergestellte Arzneimittel kann besonders angewendet werden in einem Verfahren zum Verabreichen einer Liposomenzusammensetzung an ein Lebewesen, umfassend das Verabreichen an das Lebewesen einer Liposomenzusammensetzung, die eine wirksame Menge zur Induktion einer nachteiligen physiologischen Reaktion eines Liposoms umfaßt, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und einem Molekül, das oberflächenmittelmodifiziert ist. Nachteilige physiologische Reaktionen in Lebewesen sind mit der Verabreichung einiger Liposomenzusammensetzungen an die Lebewesen verbunden gewesen. Derartige Lebewesen sind vorzugsweise Säuger, z.B. Menschen, können jedoch andere Lebewesen sein, welchen Liposomen verabreicht werden können. Der Ausdruck "nachteilige physiologische Reaktion" umfasst, ohne darauf begrenzt zu sein, klinische Symptome, wie etwa Lethargie, cyanotische Gingivalmembranen, Übelkeit, Erbrechen, Defäkation, Diarrhoe, Anstieg der Körpertemperatur, Fieber, Frösteln, Zittern, Schläfrigkeit, Schmerzen im unteren Rücken, Gastrointestinalstörungen, Atemdepression, hämatologische Reaktionen, wie etwa Neutropenie, Thrombocytopenie, cardiovaskuläre Reaktionen, wie etwa vorübergehende Hypotension, Vasodilatation und vorübergehende Herzrytmusveränderungen.
Das in dem Verfahren verwendete Liposom hat vorzugsweise einen Durchmesser von 200 nm bis 5000 nm, bevorzugter von 400 nm bis 1000 nm. Es ist bekannt, dass größere Liposomen dazu neigen bei einer Verabreichung an ein Lebewesen schneller aus dem Kreislauf des Lebewesens gecleared zu werden als Liposomen mit ähnlicher Zusammensetzung, jedoch kleinerer Größe. Es ist ebenfalls bekannt, dass bestimmte Modifikationen einer Liposomenoberfläche die Zeitdauer, über welche das Liposom in dem Kreislauf des Lebewesens verbleibt, verbessern kann. Es war jedoch bisher nicht bekannt, dass Liposomen mit Größen (Durchmessern) wie denjenigen, die in dem Verfahren verwendet werden, aus einem Kreislauf eines Lebewesens mit einer Rate gecleart werden, welche vergleichbar ist mit derjenigen von unmodifizierten (kein Molekül enthaltend, das oberflächenmittelmodifiziert ist) Liposomen mit ähnlicher Größe und dazu neigen zum gleichen Ausmaß in der Leber zu akkumulieren, sondern dass im Vergleich mit unmodifizierten Liposomen ähnlicher Größe eine Verabreichung der Liposomen dieser Erfindung zu einer Verringerung nachteiliger physiologischer Reaktionen führen kann, welche Lebewesen erfahren, wie etwa Blutdruckabnahme, die mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist.
Liposomen, die in dem Verfahren verwendet werden, sind vorzugsweise Interdigitationsfusionsliposomen (IFV), können jedoch ebenso groß sein wie unilamellare Liposomen (LUV) und multilamellare Liposomen (MLV); bevorzugte MLV sind diejenigen, welche ein Solut umfassen, das in ihren wässrigen Kompartimenten eingeschlossen ist, worin die Konzentration des Soluts in jedem der wässrigen Kompartimente des MLV im Wesentlichen gleich ist, d.h. in MLV mit im Wesentlichen gleicher interlamellarer Solutverteilung. Die Konzentration des oberflächenmodifizierten Moleküls in der Doppelschicht ist typischerweise mindestens 2 Mol-%, bevorzugter mindestens 5 Mol-% und am bevorzugtesten mindestens 10 Mol-%, wobei Mol-% berechnet werden als die Anzahl von Molen von oberflächenmodifiziertem Molekül in der Doppelschicht, geteilt durch die Gesamtanzahl von Molen von Verbindungen, die in der Doppelschicht vorliegen.
Es ist gefunden worden, dass das Einbringen von oberflächenmittelmodifizierten Molekülen in Liposomen gemäß der Praxis dieser Erfindung zu deutlich verringerten nachteiligen physiologischen Reaktionen führt, die mit der Verabreichung einiger Liposomenzusammensetzungen an Lebewesen verbunden sind. Es ist ebenfalls gefunden worden, dass oberflächemittelmodifizierte Moleküle in Liposomen eingebracht werden können ohne wesentlich die hohe Einkapselungskapazität von größeren Liposomen zu beeinträchigten, mit den verkürzten in vivo-Kreislaufzeiten von größeren Liposomen, der Darstellu ngseffizienz von Liposomen, die radiologische Kontrastmittel enthalten und auf Organe innerhalb eines Körpers eines Lebewesens gerichtet sind, die Bioverteilung von grßeren Liposomen und ihrer Akkumulation in einer Leber eines Lebewesens und ohne wesentlich mit dem Verfahren der Herstellung von Interdigitationsfusionsliposomen nachteilig wechselzuwirken.
Die Liposomenzusammensetzung dieser Erfindung ist eine "Oberflächenmodifizierte Liposomzusammensetzung", d.h. eine Liposomenzusammensetzung, umfassend ein Liposom, enthaltend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht, enthaltend ein Lipid und ein oberflächenmittel modifiziertesmolekül. Der Ausdruck "oberflächenmittelmodifiziertes Molekül" wird hier verwendet, um ein Molekül zu bedeuten, umfassend ein oberflächenmodifizierendes Mittel und einen Anker. Ein "oberflächenmodifizierendes Mittel" ist, wie hier verwendet, eine organische Verbindung oder Rest, die/der in der Lage ist, kovalent an ein Ende des hydrophilen Teils des Ankers zu binden. Ein "Anker" ist, wie hier verwendet, ein Molekül mit einer ausreichend hydrophoben Charakteristik, um stabil in eine Lipiddoppelschicht insertiert zu werden und welches ebenfalls einen hydrophilen Teil enthält, der geeignet ist zur Modifizierung mit dem oberflächenmodifizierenden Mittel, z.B. ein hydrophiler Teil, enthaltend eine Hydroxy-, Amin- oder Thiolgruppe. Das oberflächenmodifizierende Mittel wird an einen hydrophilen Teil des Ankers gebunden und ist ebenfalls frei, um mit dem zum Liposom externen Medium wechselzuwirken.
Das oberflächenmittelmodifizierte Molekül wird hergestellt durch Lösen des Ankers in einem Lösungsmittel, z.B. Chloroform, Methylenchlorid, Acetonitril, Essigester, Methanol u. dgl., Zugeben einer Base, z.B. Triethylamin, Dimethylaminopyridin, Pyridin u. dgl., gefolgt von einer Zugabe des oberflächenmodifizierenden Mittels. Man lässt das Gemisch dann bei Raumtemperatur oder unter Erhitzen unter Rühren reagieren. Die Zeitdauer für das Rühren oder Erhitzen wird mit dem speziell verwendeten oberflächenmodifizierenden Mittel variieren und ist durch den Fachmann in der Technik durch Mittel bestimmbar, wie etwa durch Dünnschichtchromatografie (TLC). Wenn die Reaktion einmal abgeschlossen ist, wie durch TLC oder ein anderes in der Technik bekanntes Mittel bestimmbar, wird das Lösungsmittel durch Erhitzen auf einem Rotationsverdampfer unter Vakuum entfernt. Das Produkt wird durch Gelfiltration oder Kieselgelchromatografie oder Ionenaustauschharz oder durch ein dem Fachmann in der Technik bekanntes Mittel entfernt. Das Produkt wird dann lyophilisiert. Dies ist ein derartiges Verfahren zur Herstellung des oberflächenmodifizierten Moleküls, wobei andere Verfahren durch den Fachmann in der Technik auf Basis der Lehren dieser Erfindung verwendet werden können.
Das oberflächenmodifizierende Mittel ist vorzugsweise eine Dicarbonsäure, z.B. Succinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Pimelinsäure, Suberinsäure, Weinsäure, Mucinsäure, Tetrafluorsuccinsäure oder Hexafluorglutarsäure, eine Monocarbonsäure, z.B. Essigsäure, Propionsäure, Butansäure, Valeriansäure, Glykolsäure, Milchsäure, Trifluoressigsäure, Pentafluorpropionsäure oder Heptafluorbutanäure, oder ein Sulfolipid, z.B. Bis- (succinimidooxycarbonyloxy)ethylsulfon, N-Succinimidyl-S-acetylthioacetat oder 2-Iminothiolan (Traut's-Reagenz). Vorzugsweise ist das oerflächenmodifizierende Mittel Glutarsäure (siehe Fig. 1), welche vorzugsweise kovalent an einen hydrophilen Teil des Ankers gebunden ist, z.B. mittels einer Amidverbindung an das primäre Amin einer Phosphatidylethanolamingruppe, z.B. Dipalmitoylphosphatidylethanolamin (DPPE). Demgemäß umfasst in einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung das oerflächenmodifizierte Molekül Glutarsäure, die an die DPPE gebunden ist (DPPE-GA). Jedoch ist diese Erfindung nicht auf die Verwendung von DPPE-GA begrenzt, sondern kann mit jeder Kombination von oberflächen-modifizierendem Mittel und Anker durchgeführt werden.
Der "Anker" kann jedes Molekülsein mit einem hydrophoben Teil, der ausreichend hydrophoben Charakter aufweist, um stabil in eine Liposomenlipiddoppelschicht insertiert zu werden, und einem hydrophilen Teil, der geeignet ist zum Binden des oberflächenmodifizierenden Mittels. Vorzugsweise umfasst der hydrophobe Teil des Ankers eine oder mehrere Fettsäureketten und der Anker ist ein amphiphiles Lipid. Derartige Lipide umfassen, ohne darauf begrenzt zu sein: Phospholipide, Glykolipide, Sphingolipide einschließlich Spingomyelin, Diacylammoniumamphiphile, Diacylglycerole, Glykosphingolipide, Cerebroside, Sulfatide, Ceramide, Polyhexoside, Ganglioside, Sterole u. dgl. Vorzugsweise ist der Anker ein Phospholipid, d.h. ein amphiphiles Lipid mit einer oder zwei Acylketten und einem phosphatenthaltenden Glycerolgrundgerüst, wie etwa ein Phosphatidylcholin, Phosphatidylethanolamin, Phosphatidylglycerol, Phosphatidylinositol oder ein Phosphatidylserin; derzeit ist das bevorzugte Phospholipid ein Phosphatidylethanolamin. Vorzugsweise hat das Phospholipid gesättigte Acylketten, welche vorzugsweise Palmitatketten sind. In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung ist der Phospholipidanker Dipalmitoylphosphatidylethanolamin (DPPE). Der Anker kann ebenfalls ein amphiphiles Protein oder Peptid sein. Das oberflächenmodifizierende Mittel ist vorzugsweise an die hydrophile Domäne des Ankers gebunden.
Das Molekül mit modifizierter Oberfläche kann eine Spacergruppe umfassen, welche typischerweise eine organische Gruppe oder ein organischer Rest ist, enthaltend eine oder mehrere organische funktionelle Gruppen, welche in der Lage sind kovalent an den hydrophilen Teil des Ankers zu binden, z.B. das Glycerolgrundgerüst eines Phospholipidankers und an die Phosphatgruppe des Phospholipidankers. Typischerweise ist die funktionelle Gruppe eine Hydroxyl-, Thiol-, Epoxid- oder Amingruppe. Vorzugsweise ist die funktionelle Gruppe eine Hydroxylgruppe und die Spacergruppe ist Ethylglykol oder Polyethylenglykol, welches ein variierendes Molekulargewicht aufweisen kann.
Die Synthese von spacergruppenenthaltenden Molekülen, die durch ein Oberflächenmittel modifiziert sind, wird durchgeführt durch Umsetzen der Spacergruppe mit einer Schutzgruppe, z.B. Methoxytriphenylmethyl, Acetyl- oder Triphenylmethylchlorid (Tritylchlorid), z.B. durch Mittel, die dem Fachmann in der Technik bekannt sind. Der Phospholipidanker wird dann durch die Verwendung eines Aktivierungsmittels, z.B. p-Nitrobenzolsulfonat, p-Toluolsulfonat, Benzolsulfonat, Methansulfonat, Trifluomethansulfonat u. dgl., aktiviert. Die geschützte Spacergruppe und der aktivierte Phospholipidanker werden dann durch Mittel umgesetzt, die dem Fachmann in der Technik bekannt sind.
Zum Beispiel wird die Spacergruppe durch die Verwendung von Poly(oxyethylen), ebenfalls als (Poly)ethylenglykol bezeichnet, eingeführt. Eine der beiden Hydroxylgruppen in (Poly)ethylenglykol wird durch Umsetzen von Ethylenglykol mit 1 Äq Triphenylmethylchlorid (Tritylchlorid) in einem organischen Lösungsmittel geschützt, vorzugsweise in der Gegenwart einer Base, wie etwa Triethylamin, um monotrityliertes Ethylenglykol zu liefern. 1,2-Dipalmitoylglycerol wird dann durch eine gute Abgangsgruppe aktiviert, vorzugsweise unter Verwendung von p-Nitrobenzolsulfonylchlorid, um 1,2-Dipalmitoyl-3-p- nitrobenzolsulfonat zu ergeben. Dieses wird dann mit dem monotritylierten Ethylenglykol umgesetzt, gefolgt von der Entfernung der Tritylgruppe unter milden sauren Bedingungen. Dies führt zur Bildung von 1,2-Dipalmitoyl-3- (oxyethylen)glycerol. Ein Zweistufenverfahren auf dieser Verbindung unter Verwendung von 2-Chlor-2-oxo-dioxophospholan bzw. Trimethylamin führt einen Cholinrest ein, um das Produkt zu erzeugen.
Das in dem Verfahren verwendete Liposom umfasst ein bioaktives Mittel, d.h. eine Verbindung oder Zusammensetzung mit etwas biologischer Aktivität in Lebewesen, einschließlich Menschen. Der Ausdruck "bioaktives Mittel" umfasst herkömmliche Arzneimittel und damit in Verbindung stehende interessierende biologisch aktive Zusammensetzungen. Bioaktive Mittel umfassen, sind jedoch nicht begrenzt auf: antibakterielle Mittel, antivirale Mittel, Antimykotika, antiparasitäre Mittel, tumorizide Mittel, Antimetaboliten, Kohlenhydrate, Polypeptide, Peptide, Proteine, Toxine, Enzyme, Hormone, Neurotransmitter, Glycoproteine, Lipoproteine, Immunoglobuline, Immunomodulatoren, Vasodilatoren, Farbstoffe, Radiomarkierungsmittel, strahlendurchlässige Verbindungen, fluoreszente Verbindungen, Polysaccharide, Zellrezeptorbindungsmoleküle, entzündungshemmende Mittel, mydriatische Verbindungen, Lokalanesthetika, Narkotika, Antiglaukommittel, Vitamine, Nukleinsäuren, Polynukleotide, Nukleoside, Nukleotide, MRI und Radiokontrastmittel, wasserlösliche jodierte Kontrastmittel, einschließlich Iohexol, Iopamidol, Ioxoglat, Iotrolan, Ioversol, Iothalamat, Iodimid, Iodipamid, Iopromid, Metrizamid, Iopentol, Iodixanol, Diatrizoat, Iotroxsäure und Gemische und pharmazeutisch verträgliche Salze davon. Vorzugsweise ist das bioaktive Mittel ein wasserlösliches iodiertes Kontrastmittel, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus Iohexol, Iopamidol, Ioxoglat, Iotrolan, Ioversol, Iothalamat, Iodimid, Iodipamid, Iopromid, Metrizamid, Iopentol, Iodixanol, Diatrizoat und Iotroxsäure. Bevorzugter ist das wasserlösliche iodierte Kontrastmittel Iotralan. Vorzugsweise wird die Liposomenzusammensetzung durch intravenöse oder intraarterielle Verabreichung verabreicht.
Die Lipiddoppelschicht des in dem Verfahren verwendeten Liposoms umfasst zusätzlich zu dem oberflächenmittelmodifizierten Molekül ein "Lipid", welches umfasst, ohne darauf begrenzt zu sein: synthetische oder natürliche Phospholipide, Glycolipide, Glycerophospholipide, Cholinglycerophospholipide, Ethanolaminglycerophospholipide, Seringlycerophospholipide, Inositolglycerophospholipide, Phosphatidylglycerole, Glykoglycerolipide, Glykoglycerolipidsulfate, Sphingolipide, Sphingomyelin, Diacylammoniumamphiphile, Diacylglycerole, Glykosphingolipide, Cerebroside, Sulfatide, Ceramide, Polyhexoside, Ganglioside, Phosphatidylcholin, Phosphatidylethanolamin, Phosphatidylserin, Phosphatidylglycerol, Phosphatidylsäure, Phosphatidylinositol, Cardiolipin u. dgl. alleine oder in Kombination. Die Phospholipide können synthetisch sein oder können aus natürlichen Quellen stammen, wie etwa Ei oder Soja. Geeignete synthetische Phospholipide sind Dimyristoylphosphatidylcholin und
Dimyristoylphosphatidylglycerol. Distearylphosphatidylcholin, Dipalmitoylphosphatidylcholin, Dimyristoylphosphatidylcholin und Diarachidonylphosphatidylcholin können verwendet werden. Die Liposomen können auch Steroidkomponenten enthalten, wie etwa Coprostanol, Cholestanol oder Cholestan, Polyethylenglykolderivate von Cholesterol (PEG-Cholesterole). Sie können auch organische Säurederivate von Sterolen enthalten, wie etwa Cholesterolhemisuccinat u. dgl. Organische Säurederivate von Tocopherolen können ebenfalls als liposombildende Bestandteile verwendet werden, wie etwa alpha-Tocopherolhemisuccinat. Liposomen, die sowohl organische Säuredemate von Styrolen, wie etwa Cholesterolhemisuccinat (CHS), und organische Säurederivate von Tocopherolen, wie etwa Tocopherolhemisuccinat (THS) als auch ihre Trissalzformen enthalten, können im Allgemeinen durch ein in der Technik bekanntes Verfahren zur Herstellung von Liposomen, die diese Sterole enthalten, hergestellt werden. Siehe im Besonderen die Verfahren von Janoff et al., U.S. Patent Nr. 4,721,612, veröffentlicht am 26. Januar 1988, mit dem Titel "Steroidal Liposomes" und Janoff et al., U.S. Patent Nr. 4,861,580, veröffentlicht am 29. August 1989 und U.S. Patent Nr. 5,041,278, veröffentlicht am 20. August 1991, PCT-Veröffentlichungsnr. Nr. 87/02219, veröffentlicht am 23. April 1987, mit dem Titel "Alpha Tocopherol-Based Vehicles" und Mayhew et aL, PCT- Veröffentlichungsnr. WO85/00968, veröffentlicht am 14. März 1985.
Ein Verfahren zur Herstellung von sterolenthaltenden Liposomen umfasst das Zugeben zu einem wässrigen Puffer einer Salzform eines organischen Säurederivats eines Sterols, das in der Lage zur Bildung geschlossener Doppelschichten ist, in einer Menge, die ausreichend ist, um vollständig geschlossene Doppelschichten zu bilden, welche ein wässriges Kompartiment einschließen. Eine Suspension multilamellarer Vesikel wird durch Schütteln des Gemischs gebildet. Die Bildung der Vesikel wird erleichtert wenn der wässrige Puffer ebenfalls das Gegenion des Salzes in Lösung enthält.
Dies ist eine Vielzahl von Verfahren, die derzeit zur Herstellung von Liposomen verfügbar sind und jedes kann geeignet in der Praxis dieser Erfindung sein. Sie umfassen das Verfahren von Bangham (siehe J. Mol. Biol. 13: 238-252 (1965). Zum Herstellen multilamellarer Vesikel (MLV). Dieses Verfahren umfasst, daß zuerst eine Lösung von Lipiden in einem organischen Lösungsmittel gebildet wird und dann das Verdampfen des Lösungsmittels, wobei ein getrocknetes Lipid auf der inneren Oberfläche des Reaktionsbehälters zurückbleibt, zu welchem eine wässrige Lösung gegeben wird. Die Hydratisierung des Lipidfilms führt zur Bildung von MLV.
Multilamellare Vesikel können im Wesentlichen gleiche intralamellare Solutverteilung aufweisen. Die Herstellung derartiger MLV ist in Lenk et al., U.S. Patent Nr. 4,522,803 und 5,030,453 und Fountain et al., U.S. Patent Nr. 4,588,708 beschrieben.
Lenk et al. beschreiben ein Verfahren, umfassend das Mischen einer wässrigen Lösung der einzuschließenden Substanz mit einer organischen Lösung des/der Lipids/Lipide, das/die verwendet wird/werden, um die Vesikel zu bilden. Die wässrige Phase wird dann emulgiert während das organische Lösungsmittel verdampft wird. Das Verfahren von Fountain umfasst, daß zuerst eine Lösung aus mindestens einem amphipathischen Lipid und einer wässrigen Komponente in einer Menge, die ausreichend ist, um eine Monophase zu bilden, gebildet wird. Das organische Lösungsmittel wird dann verdampft und eine zweite wässrige Komponente wird unter Rühren zugegeben, um die Liposomen zu bilden.
Die Klasse multilamellarer Liposomen kann bezeichnet werden als stabile mehrfach lamellare Liposomen (SPLV), wie in dem U.S. Patent Nr. 4,522,803 von Lenk et al. beschrieben, monophasige Liposomen, wie im U.S. Patent Nr. 5,030,453 von Lenk et al., veröffentlicht am 09. Juli 1991, beschrieben und umfasst die SPLV im U.S. Patent Nr. 4,558,579 von Fountain et al. und multilamellare Gefrier- und Auftauliposomen (FATMLV), worin die Liposomen mindestens einem Gefrier-Tau-Zyklus unterzogen werden, wobei dieses Verfahren in Cullis et al., U.S. Patent Nr. 4,975,282, veröffentlicht am 04. Dezember 1990 und in der PCT-Veröffentlichung Nr. 87/00043, veröffentlicht am 15. Januar 1987, mit dem Titel "Multilamellar Liposomes Having Improved Trapping Efficiencies", beschrieben ist.
Die Herstellung kleiner beschallter unilamellarer Vesikel ist von Papahadjopoulos et al. (Biochim Biophys Acta, 1968, 135 : 624-638) beschrieben.
Große unilamellare Vesikel können unter Verwendung einer Extrusionsvorrichtung durch ein in Cullis et al., U.S. Patent Nr. 5,008,050, veröffentlicht am 16. April 1991 und die PCT-Veröffentlichung Nr. WO86/00238, veröffentlicht am 16. Januar 1986, mit dem Titel "Extrusion Technique for Producing Unilamellar Vesicles" beschriebenen Verfahrens hergestellt werden.
Vesikel, die durch diese Technik hergestellt werden, bezeichnet als LUVET, werden unter Druck durch einen Membranfilter extrudiert. Vesikel können ebenfalls hergestellt werden durch eine Extrusionstechnik durch einen 200 nm Filter, wie etwa Vesikel, die als VET200s bekannt ist. Diese Vesikel können mindestens einem Gefrier- und Tauzyklus vor der Extrusionstechnik unterzogen werden; dieses Verfahren ist beschrieben in Mayer et al., (Biochim. Biophys. Acta, 1985, 817: 193-196) bezeichnet als "Solute Ditributions and Trapping Efficiencies Observed in Freeze-Thawed Multilamellar Vesicles". Die Anwendung von Energie auf diese Suspension, z.B. Schall oder eine Extrusion der Vesikel durch eine French-Press-Zelle oder durch einen porösen Filter mit geeigneter Porengröße wird die multilamellare Sterolvesikel in unilamellare Vesikel überführen.
Unilamellare Liposomen können durch eine Gefrier-Tau-Technik gefolgt durch eine Extrusion durch einen oder mehrere Polycarbonatfilter gebildet werden. Liposomen mit einer vorbestimmten Größe können auch durch ein- oder mehrmaliges Leiten einer Suspension von Liposomen unter Druck durch eine poröse Aluminiumoxidfolie gebildet werden, Coe et al. "Liposome Extrusion Process", PCT/US91/O7272, mit Datum vom 14. Oktober 1991 und veröffentlicht als WO92/05772 am 16. April 1992. Alternativ können LUV durch Infusions- Reverse-Phasen-Verdampfung oder Detergenzienverdünnungstechniken hergestellt werden (Deamer und Uster, "Liposome Preparation: Methods and Materials", in: Liposomes, Marcel Dekker, Inc., New York (1983), Seiten 27-51 und Papahadjopoulos et al., U.S. Patent Nr. 4,235,871.
Interdigiationsfusionsliposomen (IFV) und Gele sind in der Praxis dieser Erfindung geeignet und können gemäß dem von Boni et al., U.S. Patent 5,820,848, mit Datum vom 13. Oktober 1998 und U.S. Patent 6,086,851 mit Datum vom 11. Juli 2000, hergestellt werden. IFV werden gebildet durch Mischen eines Soluts in dem wässrigen Lösungsmittel mit größenbemessenen Liposomen und Zugeben eines Induktionsmittels zu dem wässrigen Lösungsmittel, welches dazu führt, dass die größenbemessenen Liposomen fusionieren. Das IF-Gel wird dann über der Phasenübergangstemperatur des Lipids inkubiert, wobei sich IFV bilden.
Das in dem Verfahren verwendete Liposom kann dehydratisiert werden. Liposomendehydratation kann es ermöglichen, dass die Vesikel für eine ausgedehnte Zeitdauer aufbewahrt werden; dehydratisierte Liposomen können dann bedarfsmäßig rekonstituiert werden. Liposomen können durch Gefrieren unter Verwendung einer Standardgefriertrocknungsausstattung oder äquivalente Verfahren dehydratisiert werden. Lyophilisieren wird vorzugsweise durchgeführt nach Einbringen von einem oder mehreren Schutzzuckern in Liposomenpräparationen gemäß den in Schneider et af. (U.S. Patent Nr. 4,229,360) und Janoff et al. (U.S. Patent Nr. 4,880,635) beschriebenen Verfahren. Der Schutzzucker kann vermieden werden, wenn die Dehydratisierung ohne Gefrieren durchgeführt wird und ausreichend Wasser in der Liposomenpräparation zurückbleibt, um die Integrität eines wesentlichen Teils der Liposomendoppelschicht während des Dehydratisierungs- Rehydratisierungsverfahrens aufrechtzuerhalten.
Hydrophile bioaktive Mittel können in Liposomen eingeschlossen werden durch Lösen des bioaktiven Mittels in dem wässrigen Medium, in welches Lipide gegeben werden. Ein Teil des bioaktiven Mittels wird in den resultierenden Liposomen eingekapselt werden, wenn sie sich bilden. Alternativ können die Liposomen zuerst hergestellt werden und dann durch Aufbauen einer Potenzialdifferenz über die Liposomendoppelschicht gemäß den Verfahren von Bally et al., "Encapsulation of Antineoplastic Agents in Liposomes", U.S. Patent Nr. 5,077,056; PCT-Anmeldung Nr. 85101501, Veröffentlichungsnummer WO 86/01102, veröffentlicht am 27. Februar 1986 und Mayer et al., "High Drug: Lipid Formulations of Liposomal Encapsulated Antineoplastic Agent" PCT- Anmeldungsnummer 88/00646, PCT-Veröffentlichungsnummer WO 88/06442, veröffentlicht am 7. September 1988 und Madden et al., "Accumulation of Drugs into Liposomes by a Proton Gradient" PCT-Veröffentlichung WO 90114105, veröffentlicht am 29. November 1990, PCT-Anmeldung WO 90/02736, eingereicht am 15. Mai 1990, mit ionisierbaren bioaktiven Mitteln beladen werden.
Diese Techniken erlauben das Beladen von Liposomen mit ionisierbaren bioaktiven Mitteln, um Innenkonzentrationen zu erreichen, die beachtlich größer sind als ansonsten aus der Löslichkeit der Arzneimittel in einer wässrigen Lösung bei einem neutralen pH-Wert erwartet wird und/oder welche größer sind als durch passive Einschlusstechniken erhältlich.
Das oben beschriebene Verfahren kann mit jeder der oben beschriebenen Herstellungs- und Beladungstechniken oder einem anderen Verfahren zum Herstellen von Liposomen und ihrer Beschickung mit Arzneimitteln, welches derzeit bekannt ist oder später entwickelt wird, durchgeführt werden.
Die Einbringung von Molekülen gemäß dieser Erfindung, die oberflächenmittelmodifiziert sind in Liposomenzusammensetzungen ändert nicht wesentlich die in vivo-Zirkulationszeit bestimmter Liposomen. Wie in den Fig. 2 und 3 gezeigt, blieb der mittlere Prozentanteil der Lipiddosis, der in dem Rattenplasma verbleibt als eine Funktion der Zeit nach der Injektion sowohl für DSPC-IFV als auch DSPC-MLV, die mehr als 10 Mol-% des durch ein Oberflächenmittel modifizierten Moleküls DPPE-GA enthielt, die gleiche wie für DSPC-IFV und DSPC-MLV ohne das durch ein Oberflächenmittel modifizierte Molekül. Jedoch, wie in Fig. 4 angegeben, zeigten Liposomen, die durch ein 0,2 Mikrometer Filter bemessen wurden, welche 10 Mol-% des durch ein Oberflächenmittel modifizierten DPPE-GA-Moleküls enthielten eine ausgedehnte Zirkulationszeit gegenüber denjenigen Vesikeln, die kein Molekül enthielten, das durch ein Oberflächenmittel modifiziert war.
Die Einbringung von Molekülen, die durch ein Oberflächenmittel modifiziert sind, wechselwirkt nicht nachteilig mit der Effizienz des Verfahrens zum Herstellen von Liposomen mit hohem eingeschlossenen Volumen, z.B. Interdigitationsfusionsliposomen. Das Radiokontrastmittel Iotrolan wurde in DSPC IFV eingekapselt, welche das durch ein Oberflächenmittel modifizierte Molekül DPPE-GA enthielten. Die DSPC-IFV, welche 10 und 5 Mol-% oberflächenmittelmodifiziertes Molekül DPPE-GA enthielten, wurden aus DSPC/DPPE-GA SUV in der Gegenwart des Radiokontrastmittels Iotrolan hergestellt. Das Vorliegen des mit einem Oberflächenmittel modifizierten Moleküls welchselwirkte nicht nachteilig mit der Effizienz der Einkapselung von Iotrolan. Wie in Tabelle 1 gezeigt, waren die mit DSPC/DPPE-GA-IFV erhaltenen Jod-zu-Lipid-Verhältnisse so hoch wie die DSPC IFV-Werte, welchen das durch ein Oberflächenmittel modifizierte Molekül fehlte. Die Einbringung von DPPE-GA verringerte den mittleren volumengewichteten Durchmesser des Iotrolans DSPC IFV wie in Fig. 5 gezeigt.
Diese Iotrolanenthaltenden DSPC/DPPE-GA IFV waren effektiv zur Bereitstellung des Kontrastmittels in der Leber und Milz von Ratten. Tabelle 2 zeigt die Hounsfield-Einheiten (HU)-Verstärkungswerte für Ratten, die Dosen mit iotrolanenthaltenden DSPC/DPPE-GA IFV mit 5 und 10 Mol-% oberflächenmittelmodifiziertes DPPE-GA-Molekül erhielten. Diese Daten zeigen, dass Iotrolan DSPC IFV, modifiziert zur Reduktion nachteiliger physiologischer Reaktionen, wie etwa zwischenzeitliche Hypotension, durch die Zugabe eines oberflächenmittelmodifizierten Moleküls, effektiv bei der Bereitstellung von Kontrastmitteln in Zielorganen waren. Darüberhinaus beeinflusste die Einbringung der durch ein Oberflächenmittel modifizierten Moleküle die Darstellungseffizienz des eingekapselten Radiokontrastmittels nicht nachteilig, wie in Tabelle 2 gezeigt.
Die Verabreichungsart der Liposomenzusammensetzungen der vorliegenden Erfindung kann die Stellen und Zellen in dem Organismus bestimmen, welchen die Verbindung zugeführt werden kann. Die Liposomenzusammensetzungen der vorliegenden Erfindung können alleine oder im Gemisch mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger, der im Hinblick auf den vorgesehenen Verabreichungsweg ausgewählt wird, und durch pharmazeutische Standardpraktiken verabreicht werden. Für eine parenterale Verabreichung oder Injektion über einen intravenösen, intraperentonalen, intramuskulären, subkutanen oder einen intramammären Weg werden sterile Lösungen der Liposomenzusammensetzung hergestellt. Zur intravenösen Verwendung kann die Gesamtkonzentration von Soluten gesteuert werden, um die Präparation isotonisch zu machen. Andere Anwendungen können in Abhängigkeit von den speziellen Eigenschaften der Präparation durch den Fachmann in Betracht gezogen werden. Geeignete pharmazeutisch verträgliche Träger umfassen, ohne darauf begrenzt zu sein: Wasser, Salzlösungen, Alkohole, Gummi Arabicum, Benzylalkohole, Gelatine, Kohlenhydrate, wie etwa Lactose, Amylose oder Stärke, Magnesiumstearat, Talk, Kieselsäure, Hydroxymethylcellulose, Polyvinylpyrrolidon u. dgl. Die pharmazeutischen Zusammensetzungen können sterilisiert werden und, falls dies gewünscht ist, mit Hilfsmitteln, z.B. Gleitmitteln, Konservierungsmitteln, Stabilisierungsmitteln, Benetzungsmitteln, Salzen zur Beeinflussung des osmotischen Drucks, Puffern, Färbemitteln, Duftstoffen und/oder aromatischen Substanzen u. dgl. gemischt werden, welche nicht nachteilig mit den bioaktiven Mitteln oder Bestandteilen dieser Erfindung reagieren.
Die Verabreichung der Liposomenzusammensetzungen dieser Erfindung kann jedes Verfahren sein, welches leicht in der Technik verfügbar ist, einschließlich, ohne darauf begrenzt zu sein, parenteral, wie etwa subkutan, intramuskulär, intraorbital, intrakapsulär, intraspinal, intrasternal, intravenös, intraarteriell, intrathecal u. dgl., oral und topisch.
Die Zusammensetzungen dieser Erfindung werden in Einheitsdosisform zubereitet, umfassend eine therapeutisch wirksame Menge des bioaktiven Mittels in einem pharmazeutisch verträglichen Träger pro Einheitsdosis. Sie können ebenfalls in Formulierungen eingebracht werden, umfassend eine therapeutisch wirksame Menge eines bioaktiven Mittels. Therapeutisch wirksam soll ausreichend bioaktives Mittel bedeuten, um das gewünschte biologische Ergebnis zu erreichen.
Es wird ersichtlich sein, dass die tatsächlich bevorzugten Mengen bioaktiver Mittel in einem speziellen Fall entsprechend der speziellen Zusammensetzungen, die verwendet werden, der speziellen formulierten Zusammensetzungen, dem Verabreichungsmodus und dem speziellen Situs und dem zu behandelnden Organismus variieren werden. Dosen für einen gegebenen Wirt können unter Verwendung herkömmlicher Betrachtungen, z.B. durch den üblichen Vergleich der verschiedenen Wirkungen der einzelnen Zusammensetzungen und eines bekannten Mittels, z.B. mittels eines geeigneten, herkömmlichen pharmakologischen Protokolls, bestimmt werden. Zur Verabreichung an Lebewesen, einschließlich Menschen, wird der verordnende Arzt letztendlich die geeignete Dosis des bioaktiven Mittels für einen Menschen bestimmen, und es kann erwartet werden, dass diese entsprechend dem Alter, Gewicht und der Reaktion des Individuums als auch der Pharmakokinetiken des verwendeten Mittels variieren wird. Ebenfalls wird die Natur und die Schwere des Krankheitszustands des Patienten oder der pharmakologische Zustand den Dosierungsablauf bestimmen. Die Menge oder Dosis des Liposoms, welches ein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül enthält, das verwendet wird, wird eine effektive Menge zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion sein, d.h. eine Menge, die wirksam ist, um eine nachteilige physiologische Reaktion, die ein Lebewesen erfährt, welchem das Liposom verabreicht wird, zu verringern. Sie kann ebenfalls abhängen von der Konzentration des oberflächenmittelmodifizierten Moleküls in der Lipiddoppelschicht des Liposoms. Typischerweise ist die Menge zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion des Liposoms, die in dem Verfahren verwendet wird, 50 mg des Liposoms pro kg des Körpergewichts des Lebewesens, kann jedoch bedarfsmäßig höher oder geringer sein.
Die gemäß der Erfindung unter Verwendung des oben angegebenen Liposoms hergestellten Arzneimittel können ebenfalls im Besonderen in einem Verfahren zum Verabreichen einer Liposomenzusammensetzung an ein Lebewesen verwendet werden, umfassend die Verabreichung eines entzündungshemmenden Mittels und einer Liposomenzusammensetzung an das Lebewesen, umfassend eine wirksame Menge eines Liposoms, die eine nachteilige physiologische Reaktion induziert, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und ein ein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül, worin das entzündungshemmende Mittel in Lebewesen vor der Verabreichung der Liposomenzusammensetzung verabreicht wird. Das entzündungshemmende Mittel kann durch jedes Verfahren in der Technik verabreicht werden, einschließlich durch subkutane, intravenöse tägliche oder kontinuierliche intravenöse Infusionsverabreichung, wird jedoch vorzugsweise durch intravenöse Verabreichung verabreicht. Es kann mit einem pharmazeutisch verträglichen Träger oder Verdünnungsmittel verabreicht werden. In einer Ausführungsform der Erfindung ist das entzündungshemmende Mittel ein Steroid; in einer alternativen Ausführungsform der Erfindung ist das entzündungshemmende Mittel ein nichtstereoides entzündungshemmendes Mittel. Vorzugsweise ist das nichtstereoide entzündungshemmende Mittel Indomethacin. Vorzugsweise wird das Mittel dem Lebewesen intravenös oder intraarteriell zumeist etwa 30 Minuten vor der Verabreichung der Liposomenzusammensetzung verabreicht.
Die Erfindung betrifft eine Verwendung eines Liposoms mit einer Lipiddoppelschicht, umfassend ein Molekül, das durch ein Oberflächenmittel modifiziert ist, umfassend ein oberflächenmodifizierendes Mittel, ausgewählt aus Monocarbonsäuren, Dicarbonsäuren und Sulfolipiden, und einen Anker, ausgewählt aus Phospholipiden und amphiphilen Proteinen, zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Verringerung des Blutdruckabfalls, der mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist, welches kein oberflächemittelmodifiziertes Molekül umfasst. Daher beschreibt diese Erfindung die Verwendung einer wirksamen Menge eines Liposoms zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und einem Oberflächenmittelmodifizierten Molekül, umfassend ein oberflächenmodifizierendes Mittel und einen Anker zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Verringerung liposomeninduzierter nachteiliger physiologischer Reaktionen, wie etwa Blutdruckabfall, der mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist, welches kein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül umfasst. Typischerweise hat das Liposom einen Durchmesser von 200 nm bis 5000 nm, wünschenswerterweise von 400 nm bis 5000 nm, noch wünschenswerter von 400 nm bis 1000 nm. Vorzugsweise ist das Liposom ein großes unilamellares Liposom oder ein Interdigitationsfusionsliposom, kann jedoch ebenfalls ein multilamellares Liposom sein, wie etwa ein multilamellares Liposom, umfassend ein Solut, das in seinen wässrigen Kompartimenten eingeschlossen ist, worin die Konzentration des Soluts in jedem der wässrigen Kompartimenten im Wesentlichen gleich ist.
Die Konzentration des oberflächenmittelmodifizierten Moleküls in der Doppelschicht ist typischerweise mindestens 2 Mol-%, vorzugsweise mindestens 5 Mol-%, bevorzugter mindestens 10 Mol-%. Vorzugsweise ist das oberflächenmodifizierende Mittel eine Dicarbonsäure, wie etwa Succinsäure, Glutarsäure, Adipinsäure, Pimelinsäure, Suberinsäure, Weinsäure, Mucinsäure, Tetrafluorsuccinsäure oder Hexafluorglutarsäure. Am bevorzugtesten ist das · oberflächenmodifizierende Mittel derzeit die Dicarbonsäure Glutarsäure. Jedoch kann das oberflächenmodifizierende Mittei auch eine Monocarbonsäure sein, wie etwa Essigsäure, Propionsäure, Buttersäure, Valeriansäure, Glykolsäure, Milchsäure, Trifluoressigsäure, Pentafluorpropionsäure oder Heptafluorbuttersäure oder ein Sulfolipid, wie etwa Bis- (succinimidooxycarbonyloxy)ethylsulfon, N-Succinylimidyl-S-acetylthioacetat oder 2-Iminothiolan (Traut's Reagenz).
Vorzugsweise ist der Anker ein Phospholipid, bevorzugter ein Phospholipid mit gesättigten Acylketten, wie etwa Palmitatketten. In einer speziellen Ausführungsform der Erfindung, welche derzeit bevorzugt ist, ist der Phospholipidanker Dipalmitoylphosphatidylethanolamin (DPPE). Jedoch kann der Anker auch ein amphiphiles Protein sein.
Das oberflächenmittelmodifizierte Molekül kann einen Phospholipidanker und eine Spacergruppe umfassen, worin die Spacergruppe eine oder mehrere organische funktionelle Gruppen umfasst, die in der Lage zum Binden an das Glycerolgrundgerüst des Phospholipidankers und an die Phosphatgruppe des Phospholipidankers sind. Typischerweise ist die funktionelle Gruppe eine Hydroxyl-, Thiol-, Epoxid- oder Amingruppe. Vorzugsweise ist die Spacergruppe Ethylenglykol oder Polyethylenglykol.
Vorzugsweise umfasst das Liposom der vorliegenden Erfindung weiterhin ein bioaktives Mittel. Das umfasste bioaktive Mittel in dem Liposom kann, ohne darauf begrenzt zu sein, ein Kontrastmittel, antibakterielles Mittel, antivirales Mittel, ein Antimykoticum, ein Antiparasitenmittel, ein tumorizides Mittel, ein Antimetabolit, ein Kohlenhydrat, ein Polypeptid, ein Peptid, ein Protein, ein Toxin, ein Enzym, ein Hormon, ein Neurotransmitter, ein Glykoprotein, ein Lipoprotein, ein Immunoglobulin, ein Immunomodulator, ein Vasodilator, ein Farbstoff, ein Radiomarkierungsmittel, eine strahlendurchlässige Verbindung, eine fluoreszente Verbindung, ein Rezeptorbindungsmolekül, ein entzündungshemmendes Mittel, eine mydriatische Verbindung, ein Lokalanästhetkium, ein Narkotikum, ein Vitamin, eine Nukleinsäure, ein Polynukleotid, ein Nukleosid, ein Nukleotid, ein MRI, ein radioaktives oder wasserlösliches jodiertes Kontrastmittel sein, und umfasst Gemische und pharmazeutisch verträgliche Salze davon. Derzeit ist das bevorzugte bioaktive Mittel ein wasserlösliches Radiokontrastmittel, wie etwa Iohexol, Iopamidol, Ioxoglat, Iotrolan, Ioversol, Iothalamat, Iodimid, Iodipamid, Iopromid, Metrizamid, Iopentol, Iodixanol, Diatrizoat und Iotroxsäure, einschließlich Gemische und pharmazeutisch verträgliche Salze davon. Vorzugsweise ist das wasserlösliche Radiokontrastmittel Iotrolan.
Vorzugsweise ist die wirksame Menge zur Verringerung nachteiliger physiologischer Reaktionen des Liposoms, insbesondere die zur Verringerung des Blutdruckabfalls wirksame Menge des Liposoms 50 mg des Liposoms pro kg des Körpergewichts des Lebewesens. Die pharmazeutische Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung ist vorzugsweise zur Verwendung in Verbindung mit einem entzündungshemmenden Mittel zur Verringerung des Blutdruckabfalls, der mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist, welches kein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül umfasst, worin das entzündungshemmende Mittel nicht in das Liposom eingekapselt ist.
Daher beschreibt die Erfindung die Verwendung einer wirksamen Menge eines Liposoms zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und einem durch ein Oberflächenmittel modifiziertes Molekül zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Verringerung liposomeninduzierter nachteiliger physiologischer Reaktionen in Verbindung mit einem entzündungshemmenden Mittel, worin das entzündungshemmende Mittel nicht in das Liposom eingekapselt ist.
Die Erfindung betrifft auch eine pharmazeutische Zusammensetzung umfassend ein Liposom mit einer Lipiddoppelschicht, umfassend ein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül, worin das oberflächenmittelmodifizierte Molekül einen Anker umfasst, ausgewählt aus Dipalmitoylphosphatidylethanolamin und amphiphilen Proteinen, ein oberflächenmodifizierendes Mittel, ausgewählt aus Monocarbonsäuren, Sulfolipiden, Glutarsäure, Hexafluorglutarsäure, Tetrafluorsuccinsäure und Heptafluorbuttersäure und optional einen Spacer. Vorzugsweise umfasst das Liposom weiterhin ein bioaktives Mittel.
Daher ist die Zusammensetzung gemäß der Erfindung angepasst zur Verringerung liposomeninduzierter nachteiliger physiologischer Reaktionen, worin die Zusammensetzung eine wirksame Menge zur Verringerung einer nachteiligen physiologischen Reaktion eines Liposoms umfasst, umfassend ein bioaktives Mittel und eine Lipiddoppelschicht mit einem Lipid und ein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül.
Diese Erfindung wird aus den folgenden Beispielen besser verstanden werden. Jedoch wird der Fachmann in der Technik leicht erkennen, dass diese Beispiele rein veranschaulichend für die Erfindung sind, die durch die Ansprüche definiert ist, welche später folgen.

BEISPIELE

BEISPIEL 1

HERSTELLUNG DES OBERFLÄCHENEMODIFIZIERENDEN MITTELS DPPE- GLUTARSÄURE

Eine Suspension von Dipalmitoylphosphoethanolamin (DPPE) (Avanti, Alabaster, Alabama) 692 mg (1 mMol) in wasserfreiem Chloroform (125 ml) wurde bei 50 bis 55ºC erhitzt bis es eine klare Lösung wurde (15 bis 20 min). Nach Abkühlen dieser Lösung auf Raumtemperatur wurde Triethylamin (Fluka Chemicals, Ronkonkama, New York) 190 ul (1,4 mMol) und Glutaranhydrid (Fluka Chemicals, Ronkonkama, New York) 137 mg (1,2 mMol) zu der resultierenden Lösung gegeben und bei Raumtemperatur für 3 Stunden gerührt. Dünnschichtchromatographie (TLC) dieses Reaktionsgemischs wurde auf Kieselgelplatten durchgeführt, um das Fortschreiten der Reaktion zu beobachten. Nach 3 Stunden zeigte die TLC, dass das gesamte DPPE abreagiert war.
An diesem Punkt wurde das Chloroform aus dem Reaktionsgemisch durch Erhitzen auf einem Rotationsverdampfer unter Vakuum entfernt. Der Rückstand wurde auf Kieselgel (aktiviert durch Erhitzen bei 110ºC für mindestens 6 Stunden) chromatographiert. Das Elutionssystem war Chloroform : Methanol : Wasser (65 : 25 : 4). Das Vorliegen von Phospholipid in der Säulenfraktionen war ersichtlich indem TLC-Platten zuerst einem Joddampf ausgesetzt wurden und dann mit Molybdänsäurespray besprüht wurden, wodurch sich eine blaue Farbe mit Phospholipiden ergibt. Jede Fraktion von der Säule wurde durch TLC auf das Vorliegen von Phospholipiden analysiert. Die Fraktionen, welche das Produkt enthielten, wurden gepoolt und Lösungsmittel unter Vakuum entfernt. Das Produkt wurde dann gefriergetrocknet und schließlich im Vakuumofen bei 60ºC für 6 Stunden erhitzt, um ein weißes kristallines Material zu erhalten. Die Ausbeute war 660 mg (82%).
Produkt-DPPE-Glutarsäure ergab einen einzelnen Fleck in der TLC in dem Lösungsmittelsystem Chloroform : Methanol : Wasser (65 : 25 : 4) und wurde durch NMR und IR charakterisiert.

BEISPIEL 2

HERSTELLUNG VON DSPC/DPPE-GAIFV, DIE 0, 2, 5 UND 10 MOL-% DPPE- GA ENTHALTEN

Separate Stammlösungen von DSPC (20 mg/ml) und DPPE-GA (5 mg/ml) wurden durch Lösen der pulverförmigen Formen jedes Lipids in Chloroform hergestellt. Das DSPC wurde von Princeton Lipids, Princeton, New Jersey, bezogen. DPPE-GA wurde gemäß den in Beispiel 1 angegeben Verfahren hergestellt. Vier DSPC/DPPE-GA-Proben wurden durch Mischen der beiden Chloroformausgangslösungen in vier getrennten Rundkolben hergestellt. Der Gesamt-Lipidgehalt von jeder Probe war 180 uM. Die Gesamtmenge für jedes Lipid und die Menge der Stammlösungen die zugegeben wurden, sind für jede Probe in der folgenden Tabelle gezeigt.
Das Chloroform wurde auf einem Rotationsverdampfer unter Verwendung eines Rotovac entfernt. Die Lipide wurden zu einem dünnen Film getrocknet. Die Proben wurden über Nacht unter Vakuumpumpen gehalten, um restliches Chloroform zu entfernen. Die DSPC-Probe (BP1) wurde oberhalb der Übergangstemperatur (Tm) von DSPC mit 10 ml 0,9%-iger Salzlösung zur Injektion hydratisiert. Die anderen drei Proben wurden oberhalb der Tm von DSPC mit 6 ml 0,9%-iger Salzlösung zur Injektion hydratisiert. Dies führte zu einer Gesamtlipidkonzentration von 30 uM/ml für alle vier Proben. An diesem Punkt der Herstellung waren die Liposomen MLV. Alle vier Proben wurden auf eine identische Art für den Rest der Herstellung behandelt.
Die Proben wurden überhalb der Tm von DSPC ultrabeschallt, um SUV unter Verwendung eines Branson-Sondenbeschallungsmodells 450 (Branson, Danbury, Conn.) zu bilden. Die Liposomenproben wurden beschallt bis sie optisch klar waren. Eine Niedergeschwindigkeitszentrifugation (2000 UPM) wurde unter Verwendung einer Tischzentrifuge durchgeführt, um Metallflocken, die durch den Beschallungsschritt gebildet wurden, zu entfernen. Der pH-Wert jeder Probe wurde mit 0,1 N NaOH und pH-Papier eingestellt, um den pH-Wert in den Bereich von 6,5 bis 7,0 zu bringen.
Man ließ die Temperatur der Proben Raumtemperatur erreichen. Es wurde ausreichend Ethanol zu jeder Probe gegeben, um die Ethanolkonzentration auf 3,0 M, d.h. 2,12 ml bzw. 1,27 ml für den Fall der Probe mit 10 ml bzw. 6 ml. Die Proben wurden mit einem Deckel verschlossen und dann verwirbelt, um sicherzustellen, dass das Ethanol gleichmäßig in der Probe verteilt war. Die Proben wurden für 20 Minuten bei Raumtemperatur inkubiert. Nach der 20- minütiger Raumtemperaturinkubation wurden die Proben in ein Wasserbad mit 70ºC übergeführt, worin sie für 10 Minuten bei dichtem Verschluss inkubiert wurden, gefolgt von einer 40 minütigen Inkubation bei 70ºC mit gelockertem Deckel.
Die Proben erhielten eine 5-minütige N&sub2;-"Spülung" durch Durchblasen eines leichten N&sub2;-Stromes durch die Probe während die Proben weiterhin in dem 70ºC Wasserbad waren. Nach dem Spülungsschritt (Durchsprudelungsschritt) wurden die Proben BP1 (0% DPPE-GA) und BPG4 (2% DPPE-GA) in 30 ml Corex- Glas-Zentrifugenrohre übergeführt. Die Proben wurden dreimal durch Zentrifugation bei 9000 UPM für 10 Minuten unter Verwendung einer Beckman J- 2 Zentrifuge (Beckman, Palo Alto, Calif.) gewaschen. Die 5% und 10% DPPE- GA-Liposomen (Proben BPG2 und BPG 3) setzten bei 9000 UMP unter Verwendung einer Niedergeschwindigkeits-Beckman J-2-Zentrifuge nicht ab. Daher wurden diese beiden Proben dreimal durch Ultrazentrifugation bei 25000 UPM für 15 Minuten unter Verwendung eines Beckman L5-50E SW27 Rotors (Beckman, Palo Alto, Calif.) gewaschen. Die Proben wurden in 0,9%-iger Salzlösung zur Injektion resuspendiert (10 ml für BP1 und 6,0 ml für den gesamten Rest). Der pH-Wert wurde erneut überprüft, um sicherzustellen, dass er in dem Bereich von 6,5 bis 7,0 war. Eine Phosphatbestimmung wurde durchgeführt, um die Lipidkonzentration zu bestimmen. Wenn die Phosphatkonzentration für jede Probe bekannt war, waren die Proben fertig zur Injektion in Lebewesen.

BEISPIEL 3

DSPC IVF-INDUZIERTE BLUTDRUCKREAKTION IN RATTEN: WIRKUNG DER DPPE-GA-EINBRINGUNG
Die intravenöse Injektion von DSPC IFV mit 50 mg/kg induziert einen raschen Blutdruckabflall in Ratten. Die Einbringung des Phospholipiddicarbonsäurederivats DPPE-GA(3) in DSPC IFV erwies sich dahingehend, dass sie deutlich diesen Blutdruckabfall verringert. In diesem Beispiel beschreiben wir unsere experimentellen Verfahren und Ergebnisse für diese Rattenblutdruckmessungen.
Drei Tage vor dem Blutdruckversuch wurden Kanülen in die Aorta und die Halsvene von spontan hypertensiven Ratten eingebracht. Die Ratten waren in dem Bereich von 350 bis 400 Gramm. Die Kanüle wurde an der Rückseite des Nackens durch eine Metallhalterung zum Schutz nach außen geführt. Heparinhaltige Salzlösung wurde durch die Kanüle täglich gespült, um ein Verstopfen zu verhindern.
Vor der Liposomeninjektion wurde die Aortakanüle mit einem Winston Electronic Druckwandler (Winston Electronics, Millbrae, Calif.) verbunden, um den mittleren Aortadruck (MAP) darzustellen. Die Halsvenenkanüle wurde mit einer 3 ml Spritze verbunden, welche die IFV-Probe, befestigt auf einer Harvard Infusionspumpenvorrichtung (Harvard, South Natic, Mass.) enthielt. Der MAP der Ratte wurde für einige Minuten vor der Injektion der Liposomen dargestellt.
Die Infusion der IFV in die Halsvene wurde zum Zeitpunkt Null durch Anschalten der Infusionspumpe begonnen. Die Gesamtlipiddosis und Dosisrate für jedes Tier war 50 mg/kg bzw. 4 mg/kg/min. Die Lipidkonzentration der Proben war typischerweise im Bereich von 10 bis 15 mg/ml. Eine typische Injektion war etwa 1 bis 2 ml der IFV-Probe über eine Dauer von 12 Minuten. Der MAP wurde alle 30 Sekunden durch den Druckwandler dargestellt.
Wie in Tabelle 3 angegeben, induzierte die Salzlösungsinfusion (1,5 ml über 12 Minuten) keinen Abfall des MAP. Dagegen resultierte aus der Infusion von DSPC IFV eine starke Abnahme des MAP, welche über 50 bis 60 Minuten, Fig. 6, bestand. Der mittlere maximale MAP-Abfall für DSPC IFV war 56 ± 5,0%, Tabelle 3. Der DSPC IFV-induzierte MAP-Abfall wurde deutlich verringert wenn DPPE-GA in der IFV-Formulierung enthalten war. Ein Erhöhen des DPPE-GA- Gehalts des IFV erhöhte den Effekt deutlich. Dies wird in Fig. 6 gezeigt. Die Ergebnisse sind in Tabelle 3 gezeigt.
Fig. 6 zeigt typische Rattenblutdruckreaktionen auf intravenöse Injektionen von DSPC IFV-Formulierungen, welche 10, 5, 2 und 0 Mol-% DPPE-GA, hergestellt wie in Beispiel 2, enthielten. Tabelle 3 zeigt, dass der mittlere Arterienblutdruckabfall für das 10% DPPE-GA IFV 8,3 ± 2,1% war. Die Daten in Tabelle 2 zeigen deutlich, dass ein Phospholipiddicarbonsäurederivat den Blutdruckabfall, der durch DSPC IFV induziert wird, reduziert.

BEISPIEL 4

VERABREICHUNG VON INDOMETHACIN, UM EINEN BLUTDRUCKABFALL BEI INTRAVENÖSER INJEKTION VON DSPG IFV ZU VERRINGERN

Eine intravenöse Injektion von DSPC IFV/0% GA (50 mg/kg), hergestellt gemäß Beispiel 2, erzeugte in Wistar spontan hypertensiven Ratten einen raschen vorübergehenden Blutdruckabfall.
Der Blutdruckabfall als Reaktion auf eine DSPC IFV-Injektion begann typischerweise etwa 4 bis 6 Minuten nach Injektion. Ein 30 bis 40%-iger Abfall des Anfangsblutdrucks trat typischerweise über eine Dauer von 3 bis 4 Minuten auf Der Blutdruck begann typischerweise sich nach 20 bis 25 Minuten nach der DSPC-Injektion wieder aufzubauen. Der Blutdruckwiederaufbau war nach 30 bis 40 Minuten nicht vollständig.
Eine intravenöse Injektion des entzündungshemmenden Mittels Indomethacin (5 mg/kg) erfolgte entweder 15 oder 30 Minuten vor der Injektion von DSPC IFV und erzeugte eine signifikant unterschiedliche Blutdruckreaktion. Nach einem anfänglichen geringen Abnehmen bildete sich der Druck rasch auf den Anfangsblutdruck innerhalb von 30 bis 40 Minuten zurück.

BEISPIEL 5

NORMALISIERT AUC VON DSPC/N-GLUTARYL-DPPE-DPPE-LIPOSOMEN ALS EINE FUNKTION DES MITTLERE LIPOSOMENDURCHMESSERS

LUVET (LUV, hergestellt durch eine Extrusionstechnik) wurden durch Extrudieren von Liposomen durch Polycarbonatfilter mit den folgenden Porendurchmessern von 50, 80, 200, 400, 600 und 800 nm hergestellt. Die IFV wurden durch die Interdigitationsfusionstechnik hergestellt. Der mittlere Durchmesser der LUVET und IFV wurde durch quasi-elastische Lichtstreuung und Gefrierbruchelektronenmikroskopie bestimmt. Die Liposomen wurden radiomarkiert mit ³H-Cholesterolhexadecylether, welcher nicht austauschbar ist mit anderen Plasmakomponenten. Spraque-Dawley-Ratten erhielten eine Dosis von 50 mg/kg Lipid durch einen intravenösen Bolus über die laterale Schwanzvene. Vier bis elf Ratten wurden für jede Liposomengrößenpräparation verwendet. Blutproben wurden 0,5, 3,5, 6,5 und 24 h nach der Injektion durch retroorbitales Bluten entnommen. Das Blut wurde in einer Tischzentrifuge zentrifugiert, um die roten Blutkörperchen zu entfernen. Die Menge der Radiomarkierung in dem Plasma wurde duch Szintillationszählen bestimmt. Die Dosisprozent, die in dem Plasma verbleiben, wurden unter Verwendung eines Wertes von 3,08 ml Plasma pro 100 g Körpergewicht berechnet.
Die Dosisprozent, die in dem Plasma als eine Funktion der Zeit verbleiben, wurden für jede Liposomengröße aufgetragen. Der Bereich unter der Kurve (AUC) für jede Liposomengröße wurde durch Trapezintegration berechnet. Die Figur wurde durch Auftragen der AUC für jede Liposomengröße gegenüber dem oberflächengewichteten Durchmesser für jede Liposomenpräparation erzeugt.
Fig. 7 zeigt die normalisierten AUC von DSPC IFV und LUVET, aufgetragen als eine Funktion des oberflächengewichteten mittleren Durchmessers. Die AUC wurden durch Trapezintegration der Zirkulations- bzw. Kreislaufprofile der IFV und LUVET berechnet und wurden normalisiert auf die AUC der LUVET mit 200 nm Porengröße. Die Punkte sind normalisierte AUC von DSPC IFV und LUVET (der Oberflächengewichtete Durchmesser von disaggregierten DSPC LUVET mit 200 nm Porengröße war 197 ± 93 nm, gemäß Bestimmung durch quasielektrische Lichtstreuung über der Tm von DSPC. Jedoch kann die tatsächliche Teilchengröße in Plasma deutlich größer sein aufgrund der DSPC LUVET- Aggregation).

BEISPIEL 6

IF-Liposomen enthalten fluorierte Glutarsäurederivate Synthese N-Fluorglutaryl-DPPE

Eine Suspension von DPPE (1 mMol) in trockenem Ethylacetat (100 ml) wurde auf 80ºC erhitzt, um das DPPE zu lösen. Triethylamin (4 mMol) und dann Hexafluorglutaranhydrid (3 mMol) wurde zu dieser Lösung gegeben, gefolgt von einem Erhitzen bei 80 bis 85ºC für 6 Stunden. Gelfiltration des resultierenden Rohmaterials unter Verwendung von Sephadex LH-20 in Chloroform : Methanol (1 : 1), gefolgt durch Silikagelsäulenchromatografie in Chloroform : Methanol : Wasser (64 : 25 : 4), lieferte N-Fluorglutaryl-DPPE in 54% Ausbeute als ein weißes kristallines Material. Dieses Produkt wurde durch IR und NMR charakterisiert.

N-Fluorsuccinyl-DPPE

Die gleichen Reaktionsbedingungen wurden verwendet, ausgenommen die Substitution von Tetrafluorsuccinsäureanhydrid für Hexafluorglutaranhydrid. Die resultierende Verbindung wurde in 44% Ausbeute erhalten; ergab einen einzelnen Fleck auf der Dünnschichtchromatografie und wurde durch IR und NMR charakterisiert.

N-Fluorbutyryl-DPPF

Diese Verbindung wurde durch Umsetzen von DPPE mit Heptafluorbutansäureanhydrid unter den oben beschriebenen Bedingungen hergestellt. Die resultierende Verbindung erschien als ein einzelner Fleck auf TLC; wurde durch NMR charakterisiert und wurde in 60% Ausbeute erhalten.

Blutdruckscreening

Männliche Spraque-Dawley-Ratten (Charles River) wurden IP anästhesiert mit Natriumpentobarbital und chirurgisch wurden eine Kanüle in die abdominale Aorta, plus eine externe Halsvene eingebracht. Die Arterienkanüle wurde mit zwei Einheiten Heparin offengehalten, einmal gespült. Der Blutdruck wurde durch Verbinden mit einem Winston Electronics Modell VT-15 Blutdruckdarstellungssystem mit der arteriellen Kanüle dargestellt. Der Grundlinienblutdruck wurde für mehrere Minuten vor der Infusion von DPPE-FGA IF-Liposomen (Interdigitationsfusionsliposomen, Dipalmitoylphoshatidylethanolamin/Fluorglutarsäuren enthalten) aufgenommen; der Grundlinienblutdruck wurde als ein Mittel von 4 Proben bestimmt. Den Tieren wurden 50 mg/kg Lipid mit einer Rate von 4 mg/kg/min unter Verwendung einer Harvard Pump 22 Infusionspumpe in die Jugulärvene (Halsvene) zugeführt. Nach der Infusion wurden die Tiere für etwa 15 Minuten beobachtet, um die Erholungsphase zu beobachten. Der Druck wurde alle 30 Sekunden auf dem VT- 15 dargestellt, vor, während und nach der IF-Infusion. Der prozentuale Abfall des Grundlinienblutdrucks (Grundlinien BP) wurde berechnet als: [(Basislinien-BP- Maximaldepressions-BP)Basislinien-BP] · 100. DPPE-FGA-IF-Liposomen bewirkten einen 12% Abfall des Blutdrucks von der Basislinie in dem ersten Tier und eine 1,3%-ige Zunahme in dem zweiten Tier (die mittlere Abnahme war 5,3 ± 9,24%). Die Daten sind in der folgenden Tabelle dargestellt.
Der Blutdruck während der Liposomeninfusion für jedes dieser Lebewesen ist in den Fig. 8 bis 12 (jeweils für die Ratten 1-5) dargestellt.

Beispiel 7

Herstellung und Verwendung von Iotrolan, DPPE-GA enthaltenden IF-Liposomen

Kleine unilamellare Liposomen (SUV), enthaltend DSPC (920 mg) mit oder ohne DPPE-GA (828 mg DSPC und 92 mg DPPE-GA) wurden in dH&sub2;O oder Kochsalzlösung bei einer Lipidkonzentration von 40 mg/ml und einer Temperatur von 10ºC über der Lipidübergangstemperatur hergestellt (50ºC für DSPC, wobei die Liposomen bei 65 bis 70ºC hergestellt werden). Das Lipid oder das Lipidgemisch wurden in Methylenchlorid gelöst und dann zu einem dünnen Film getrocknet. Die DSPC-Lipösomen wurden durch Resuspendieren des getrockneten Lipids in 23 ml dH&sub2;O unter Erhitzen auf 65ºC für 30 min hergestellt (der Erhitzungsschritt kann umgangen werden wenn eine Sondenbeschallung verwendet wird, um die SUV herzustellen). DSPC/DPPE-GA-Liposomen wurden hergestellt durch Resuspendieren der getrockneten Lipide in Kochsalzlösung bei 65ºC
Eine Iotrolansuspension wurde hergestellt durch Mischen von 46 mg Iotrolan (300 mg/ml Jod), 16,3 ml Ethanol und 6,7 ml dH&sub2;O, Zugeben des destillierten Wassers zu dem Iotrolan vor dem Ethanol und langsames Zugeben des Ethanols unter konstantem Mischen.
Sechzeheinhalb ml der Iotrolansuspension wurden in Aliquoten in jedes der vier Schraubdeckelgläschen gegeben und 5,5 ml der SUV-Suspension wurden zugegeben. Die resultierenden Gele wurden kräftig gemischt und bei Raumtemperatur für mindestens eine Stunde inkubiert. DSPC/DPPE-GA- Liposomen wurden bei 30ºC für 24 Stunden inkubiert. Hiernach wurden die Rohre bei 65 bis 70ºC für 1 Stunde inkubiert. Jedes Rohr wurde dann für 15 Minuten verwirbelt.
Jede Probe wurde dann gemischt und mit einem Stickstoffstrom gespült, wobei sie bei 65 bis 70ºC für 111-113 Minuten gehalten wurde. Die Proben wurden dann in einem 250 ml Erlenmayer-Kolben gepoolt und man ließ sie auf Raumtemperatur kühlen, um eine klare Lösung mit weißem Schaum auf der Oberfläche zu erzeugen. Es wurde eine ausreichende Menge des folgenden Puffers zu der Präparation gegeben um das Volumen auf 200 ml zu bringen: 2,4 mg/ml Tris-Base, 0,1 mg/ml Na/Ca-EDTA, 0,9% NaCl (pH-Wert 7 = 7,4) und es wurde gemischt, um eine opaque IF-enthaltende Suspension zu erhalten.
Diese Suspension wurde in 50 ml Zentrifugenflaschen für mindestens 5 Minuten bei 3200 g zentrifugiert. Die Zentrifugation wurde bedarfsmäßig wiederholt (z.B. drei Zyklen), um nicht eingeschlossenes Iotrolan zu entfernen. Die Präparation wurde dann auf den Lipid- und Iotrolangehalt untersucht und durch Elektronenmikroskopie charakterisiert. Malvern- Teilchengrößenverteilungsanalysen erfassten das Volumen und die Lamellarität und sie wurden bei Raumtemperatur bis zur Verwendung aufbewahrt.
Der Prozentanteil injizierter Liposomen (200 nm exrudierte Vesikel), die im Plasma als eine Funktion der Zeit verbleiben ist in Fig. 13 für verschiedene Präparationen mit und ohne DPPE-GA angegeben.
Tabelle 4 (siehe nachstehend) ergibt CT-Scanergebnisse in Ratten unter Verwendung verschiedener Chargen von DSPC, DSPC/DPPE-GA (5 Mol-%) und DSPC/DPPE-GA (10 Mol-%) IF-Liposomen. Die Fig. 14 und 15 zeigen Malven-Größenverteilungsdaten für zwei dieser Chargen. Die folgende Tabelle zeigt eine Formulierungszusammenfassung für verschiedene Chargen.
Die folgenden Tabellen zeigen den pH-Wert, % Jod im Überstand, % Lysophosphatidylcholin und CT-Ergebnisse in Ratten, die eine Dosis von 250 mg/kg Jod aus stabilen Proben erhielten, die für unterschiedliche Zeitdauern aufbewahrt waren, für verschiedene Chargen von DPPE-GA, Iotrolan enthaltende IF. Keine Veränderung der Farbe oder Erscheinung der Proben wurde beobachtet. pH-Wert % Jod im Überstand % Lyso PC in der Probe CT Scan-Ergebnisse von Ratten unter Verwendung stabiler Proben Verbesserung in der Leber (ΔHU*)

Beispiel 8

CT-Bilddarstellungsuntersuchung in Kaninchen unter Verwendung von DPPE- GA Iotrolan Pnthaltenden IF-Linosomen

DPPE-GA, Iotrolan enthaltende IF-Liposomen wurden wie oben beschrieben hergestellt und enthielten 100,5 mg/ml Jod, 16,3 mg/ml Lipid (Jod: Lipid-Verhältnts von 6,2), haften eine Dichte von 1,09 g/ml, ein eingeschlossenes Volumen von 18,6 (Mikroliter pro Mikromol Lipid) und wiesen weniger als 5 Mikrometer Durchmesser auf. Weiblichen Kaninchen, die 4, 5 bis 5,8 kg wogen, wurden Dosen derartiger Liposomen mit 100 und 250 mg Jod/kg Körpergewicht verabreicht (ein Tier pro Dosis) mit einer Rate von 50 mg 1/min · kg Körpergewicht und wurden mit Xylazin/Ketamin anästhisiert.
Die Dichten von Leber, Milz, Aorta und Niere (Cortex) wurden (in Hounsfield- Einheiten - HU) vor und zu unterschiedlichen Zeiten nach der intravenösen Liposomenverabreichung gemessen. Die Kaninchen wurden vier Stunden nach der Liposomenverabreichung getötet. Die Jodkonzentration wurde in der Leber, Milz, Niere, Lunge und Blut bestimmt. Die Ergebnisse sind in Fig. 16 dargestellt.

Tabelle 1

Jod-zu-Lipid-Verhältnis für Iotrolan DSPC/DPPE-GA IFV
Formulierung Jod/Lipid-Verhältnis, Gew/Gew
DSPC IFV 4,5
DSPC/DPPE-GA IFV 5 Mol-% DPPE-GA 5,9
DSPC/DPPE-GA IFV 10 Mol-% DPPE-GA 5,7 Tabelle 2 HU-Verbesserung in Ratten, die eine Dosis mit Iotrolan/DSPC/DPPE-GA IFV erhielten Tabelle 3 Mittlare Arterienblutdruckreaktion von Raten, die Dosis DSPC/DPPE-GA IVF erhielten Tabelle 4 Iotrolan-Liposomenproduktkandidat Zusammenfassung der CT-Ergebnisse in Ratten

Claims

1. Verwendung eines Liposoms mit einer Lipiddoppelschicht, umfassend ein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül, umfassend ein oberflächenmodifizierendes Mittel, ausgewählt aus Monocarbonsäuren, Dicarbonsäuren und Sulfolipiden, und einen Anker, ausgewählt aus Phospholipiden und amphiphilen Proteinen zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Verringerung der Blutdruckabnahme, die mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist, welches kein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül umfasst.

2. Verwendung nach Anspruch 1, worin das Liposom einen Durchmesser von 200 nm bis 5000 nm aufweist.

3. Verwendung nach Anspruch 1 oder 2, worin das Liposom ein unilamellares Liposom oder/und ein multilamellares Liposom ist.

4. Verwendung nach Anspruch 3, worin das multilamellare Liposom ein Solut umfasst, eingeschlossen in seinen wässrigen Kompartimenten, und worin die Konzentration des Soluts in jedem der wässrigen Kompartimente im Wesentlichen gleich ist.

5. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 4, worin die Konzentration des oberflächenmittelmodifizierten Moleküls in der Doppelschicht mindestens 2 Mol-% ist.

6. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 5, worin das oberflächenmodifizierende Mittel Glutarsäure ist.

7. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 6, worin das Phospholipid gesättigte Acylketten aufweist.

8. Verwendung nach Anspruch 7, worin die gesättigten Acylketten Palmitatketten sind.

9. Verwendung nach Anspruch 8, worin das Phospholipid Dipalmitoylphosphatidylethanolamin (DPPE) ist.

10. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 9, worin das oberflächenmittelmodifizierte Molekül einen Phospholipidanker und eine Spacergruppe umfasst und worin die Spacergruppe eine oder mehrere organische funktionelle Gruppen umfasst, die in der Lage zum Binden an das Glycerolgrundgerüst des Phospholipidankers und die Aminogruppe des Phospholipidankers sind.

11. Verwendung nach Anspruch 10, worin die funktionelle Gruppe eine Hydroxyl-, Thiol-, Epoxid- oder Amingruppe ist.

12. Verwendung nach Anspruch 10, worin die Spacergruppe Ethylenglykol oder Polyethylenglykol ist.

13. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 12, worin das Liposom weiterhin ein bioaktives Mittel umfasst.

14. Verwendung nach Anspruch 13, worin das bioaktive Mittel ein Kontrastmittel, ein antibakterielles Mittel, ein antivirales Mittel, ein Antimykotikum, ein Antiparasitenmittel, ein tumorizides Mittel, ein Antimetabolit, ein Kohlenhydrat, ein Polypeptid, ein Peptid, ein Protein, ein Toxin, ein Enzym, ein Hormon, ein Neurotransmitter, ein Glykoprotein, ein Lipoprotein, ein Immunoglobulin, ein Immomodulator, ein Vasodilator, ein Farbstoff, ein Radiomarkierungsmittel, eine strahlendurchlässige Verbindung, eine fluoreszente Verbindung, ein Rezeptorbindungsmolekül, ein entzündungshemmendes Mittel, eine mydriatische Verbindung, ein Lokalanästhetikum, ein Narkotikum, ein Vitamin, eine Nukleinsäure, ein Polynukleotid, ein Nukleosid, ein Nukleotid, ein MRI, ein radioaktives oder wasserlösliches jodiertes Kontrastmittel und Gemische und pharmazeutisch verträgliche Salze davon oder Gemische davon ist.

15. Verwendung nach Anspruch 14, worin das wasserlösliche jodierte Kontrastmittel ausgewählt wird aus der Gruppe, bestehend aus Iohexol, Iopamidol, Ioxoglat, Iotrolan, Ioversol, Iothalamat, Iodimid, Iodipamid, Iopromid, Metrizamid, Iopentol, Iodixanol, Diatrizoat, Iotroxsäure und Gemischen und pharmazeutisch verträglichen Salzen davon.

16. Verwendung nach einem der Ansprüche 1 bis 15, worin die pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung in Verbindung mit einem entzündungshemmenden Mittel zur Verringerung der Blutdruckabnahme ist, die mit der Verwendung eines Liposoms verbunden ist, welches kein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül umfasst, worin das entzündungshemmende Mittel nicht in das Liposom eingekapselt ist.

17. Verwendung nach Anspruch 16, worin das entzündungshemmende Mittel Indomethacin ist.

18. Pharmazeutische Zusammensetzung, umfassend ein Liposom mit einer Lipiddoppelschicht, umfassend ein oberflächenmittelmodifiziertes Molekül, worin das durch ein oberflächenmittelmodifizierte Molekül einen Anker umfasst, ausgewählt aus Dipalmitoylphosphatidylethanolamin und amphiphilen Proteinen, ein oberflächenmodifizierendes Mittel, ausgewählt aus Monocarbonsäuren, Sulfolipiden, Glutarsäure, Hexafluorglutarsäure, Tetrafiuorsuccinsäure und Heptafluorbutansäure, und gegebenenfalls einen Spacer.

19. Zusammensetzung nach Anspruch 18, worin das Liposom ein bioaktives Mittel umfasst.