DE69325256T2

DE69325256T2 - Insizierbare lecithin gel

Info

Publication number: DE69325256T2
Application number: DE69325256T
Authority: DE
Inventors: Ralph Tarantino
Original assignee: HOFFMANN LA ROCHE; F Hoffmann La Roche AG
Current assignee: HOFFMANN LA ROCHE; F Hoffmann La Roche AG
Priority date: 1992-10-14
Filing date: 1993-10-05
Publication date: 1999-12-16
Anticipated expiration: 2013-10-06
Also published as: ZA937459B; CA2125784A1; JP2613750B2; MX9306239A; ATE180976T1; DE69325256D1; NZ256413A; EP0620740B1; UY23665A1; CN1090509A; JPH06511263A; RU94033520A; WO1994008623A1; AU5111093A; IS4083A; SI9300468A; US5863549A; ES2133413T3; LV10180A; IL107207A0

Description

Dosierungsformen zur hinhaltenden Freisetzung können die Häufigkeit der Verabreichung von biologisch aktiven Verbindungen senken und können zur Verminderung der Nebenwirkungen durch Senken der Spitzenserumspiegel der Verbindungen dienen. Es gibt ebenfalls einen wesentlichen Vorteil beim Verabreichen von biologisch aktiven Proteinen und Polypeptiden bei Dosierungsformen mit hinhaltender Freisetzung, da Verbindungen solcher Klassen im allgemeinen kurze biologische Halbwertszeiten aufweisen.
Wässerige Gele von pharmazeutisch verträglichen Polymeren, wie Gelatine, Methylcellulose und Polyethylenglycol wurden zur Steuerung der Freisetzungsgeschwindigkeit von Arzneimitteln aus Dosierungsformen angewendet. Die Diffusion der Arzneimittel durch solche Gele wird durch die Viskosität dieser Systeme sowie den erschwerten Diffusionsweg behindert, was sich aus dem vorliegenden dreidimensionalen polymeren Netzwerk ergibt. Diese Gele können nicht einfach verwendet werden, um die Freisetzung des parenteral verabreichten Arzneimittels hinzuhalten, aufgrund des innewohnenden Problems der Injektion solcher viskosen Materialien durch eine hypoderme Nadel. Zusätzlich verhindert das hohe Molekulargewicht dieser Polymere ihrer schnelle Entfernung von der Injektionsstelle.
Lecithingele sind an sich bekannt, siehe beispielsweise Scartazzini et al., J. Phys. Chem., 92: 829-833 (1988) und Luisi et al., Colloid Polym. Sci., 268: 356-374 (1990). Diese Gele werden ex vivo durch die Zugabe einer kritischen Menge Wasser zu einem Gemisch von Lecithin und einem organischen Lösungsmittel für das Lecithin gebildet. Lecithingele weisen viele der rheologischen Eigenschaften von polymeren Gelen auf.
Gemäß der Erfindung wurde gefunden, daß ein Lecithingel in vivo durch die intramuskuläre oder subkutane Injektion einer Lösung von Lecithin in einem mittelkettigen Triglycerid oder Gemisch von mittelkettigen Triglyceriden gebildet werden kann. Die Lecithingele der Erfindung werden in vivo durch Absorption von Wasser aus der wässerigen interstitiellen Flüssigkeit an der Injektionsstelle gebildet.
Es wurde weiterhin gefunden, daß in vivo gebildete Lecithingele als Träger verwendet werden können, um die in vivo Freisetzung von biologisch aktiven Proteinen oder Polypeptiden zu verzögern. Die bevorzugten Verbindungen sind Proteine und Polypeptide, beispielsweise Interferon-α (IFN-α) und Humanwachstumshormon-Freisetzungsfaktor (GRF) oder Analoge davon mit GRF-Aktivität.
Die Druckschrift WO-A-8804556 offenbart Zusammensetzungen zur nasalen Verabreichung von Arzneimitteln, wie Polypeptiden, beispielsweise Interferon, das darüber hinaus die aktiven Arzneimittelphospholipide, wie Lecithin und gegebenenfalls ein Pflanzenöl, beispielsweise Erdnußöl, umfaßt. Die Druckschrift FR-A-2 519 864 offenbart ölige Zusammensetzungen für die Verabreichung von Antitumormitteln, die schlecht fettlöslich sind, die eine ölige Grundlage, beispielsweise Sesamöl, und ein Solubilisierungshilfsmittel, beispielsweise Lecithin, umfassen.
Insbesondere umfaßt die vorliegende Erfindung eine injizierbare pharmazeutische Zusammensetzung, die in vivo ein Lecithingel zur hinhaltenden Freigabe eines biologisch aktiven Proteins oder Polypeptids bildet, umfassend:
1) 1 Gewichtsteil eines mittelkettigen Triglycerids oder Gemisches von mittelkettigen Triglyceriden;
2) eine therapeutisch wirksame Menge des biologisch aktiven Proteins oder Polypeptids, das in dem mittelkettigen Triglycerid oder Gemisch von mittelkettigen Triglyceriden dispergiert ist; und
3) etwa 0,1 bis etwa 2,0 Gewichtsteile Lecithin, das in dem mittelkettigen Triglycerid oder Gemisch von mittelkettigen Triglyceriden dispergiert ist.
Wenn hierin verwendet, umfaßt der Begriff "Lecithin" ein komplexes Gemisch von in Aceton unlöslichen, das heißt polaren Phosphatiden, die hauptsächlich aus Phosphatidylcho lin, Phosphatidylethanolamin, Phosphatidylserin und Phosphatidylinosit, kombiniert mit verschiedenen Mengen an anderen Substanzen, wie Triglyceriden, Fettsäuren und Kohlenhydraten, worin die in Aceton unlöslichen Stoffe nicht weniger als 50% sind, besteht. Siehe The United States Pharmacopeia (1990) Seite 1942. Der Begriff "Lecithin" schließt ebenfalls Zusammensetzungen ein, die wesentliche Mengen von einem der vorstehend beschriebenen Phosphatide enthalten.
Die Quelle und besondere Zusammensetzung des Lecithins ist nicht kritisch, solange das Lecithin in der Lage ist, ein Gel zu bilden und zur Injektion in Menschen oder anderen Säugern geeignet ist. Quellen für Lecithin schließen Pflanzenquellen, wie Sojabohnen, Mais, Erdnüsse und Sonnenblumensamen ein. Beispiele für tierische Quellen von Lecithin sind Eigelb und tierische Hirnstoffe.
Das bevorzugte Lecithin ist von Sojabohnen abgeleitet und enthält einen wesentlichen Prozentsatz an Phosphatidylcholin. Ein solches Lecithin kann aus ungereinigtem, kommerziellem Sojalecithin (beispielsweise Typ IV-S. Sigma Chemical Co., St. Louis, Missouri), beispielsweise das Verfahren von Scartazzini et al., supra, hergestellt werden. Alternativ ist gereinigtes Sojalecithin, das > 90% Phosphatidylcholin enthält, kommerziell erhältlich (beispielsweise LIPOID S 100, Lipoid KG, Frigenstr. 4, D-6700 Ludwigshafen 24, Deutschland; Type III-S. Sigma Chemical, supra).
Der Begriff mittelkettige Triglyceride (MCT) bedeutet Triglyceride, in denen die Fettsäuren 8-10 Kohlenstoffatome aufweisen. Insbesondere bevorzugt ist ein MCT von fraktionierten Kokosnußölfettsäuren C&sub8;-C&sub1;&sub0;, die 50-65% Caprylsäure (C 8,0) und 30-45% Caprinsäure (C 10,0) und nicht mehr als 2% Capronsäure (C 6,0) und 3% Laurinsäure (C 12,0) enthält. Ein solches MCT wird von Dynamit Nobel unter dem Namen MIGLYOL 812 hergestellt und kann von Kay-Fries, Inc., Montvale, New Jersey, erhalten werden.
Das Gewichtsverhältnis von Lecithin zu MCT in erfindungsgemäßen Zusammensetzungen ist nicht kritisch, solange die Zusammensetzung in der Lage ist, ein Lecithingel zu bilden. Das bevorzugte Gewichtsverhältnis von Lecithin zu MCT liegt innerhalb des Bereichs von etwa 0,1 bis etwa 2,0, wobei ein Gewichtsverhältnis von etwa 0,3 besonders bevorzugt ist.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können ebenfalls Substanzen einschließen, die zum Stabilisieren des Wirkstoffs dienen. Diese stabilisierenden Substanzen unterscheiden sich in Abhängigkeit von dem bestimmten aktiven Bestandteil, der in die Zusammensetzung eingearbeitet wird. Beispiele von üblichen Protein- und Polypeptidstabilisatoren sind Humanserumalbumin (HSA), α-Tocopherol und Dinatriumethylendiamintetraessigsäure ("Dinatrium-EDTA").
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können auch Konservierungsmittel, die das Wachstum von Bakterien in der Zusammensetzung während der Lagerung verzögern, einschließen. Beispiele für übliche Konservierungsmittel sind Methylparaben und Propylparaben.
In einer bevorzugten Ausführungsform der Erfindung umfassen die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen weiterhin Exzipienten, die wirken, um die Eigenschaften des Lecithingels zu modifizieren, das sich in vivo nach subkutaner oder intramuskulärer Verabreichung einer erfindungsgemäßen Zusammensetzung bildet. Solche Exzipienten schließen ein:

(1) Osmotische Mittel.

Die osmotischen Mittel erhöhen die Geschwindigkeit der Wassersorption in das Lecithingel und stellen eine erhöhte Freisetzungsgeschwindigkeit des Wirkstoffs bereit, der relativ gleichförmig über das Gel verteilt ist. Beliebige übliche osmotische Mittel können gemäß der Erfindung verwendet werden. Bevorzugte osmotische Mittel sind Mannit, Dextrose und Natriumchlorid.

(2) Hydrophobe Mittel.

Die hydrophoben Mittel vermindern die Entfernungsgeschwindigkeit des Lecithingels von der Injektionsstelle und senken die Freisetzungsgeschwindigkeit des Wirkstoffs. Beliebige übliche hydrophobe Mittel können gemäß der Erfindung angewendet werden. Bevorzugte hydrophobe Mittel sind Choleste rin und Cholesterinderivate, wie Cholesterinsulfat, Cholesterinacetat und Cholesterinhemisuccinat; und

(3) Tenside.

Die Tenside erhöhen die Entfernungsgeschwindigkeit des Lecithingels aus der Injektionsstelle und stellen eine anfänglich hohe Freisetzungsgeschwindigkeit des Wirkstoffs bereit. Beliebige übliche Tenside können gemäß der Erfindung angewendet werden. Bevorzugte Tenside sind Stearinsäure, Palmitinsäure, C&sub8;-C&sub2;&sub6;-Carbonsäuren und die Salze von diesen Säuren. Andere Tenside schließen Polyoxyethylenglycole (beispielsweise PLURONIC) und Polyoxyethylensorbitanmonooleate (beispielsweise POLYSORBAT) ein.
Die vorstehenden Exzipienten (1)-(3) liegen vorzugsweise einzeln in Mengen von 0,1-1,0 Gewichtsteilen zu 1 Gewichtsteil MCT vor. Jedoch ist die Gesamtmenge an solchen Exzipienten vorzugsweise weniger als 1,5 Gewichtsteile bis 1 Gewichtsteil an MCT.
Wenn der Wirkstoff nicht leicht in dem Lecithin/MCT- Gemisch dispergierbar ist, kann der Wirkstoff zuerst in einer kleinen Wassermenge oder in einer Pufferlösung, die im Stand der Technik für den einzelnen Wirkstoff als geeignet bekannt ist, gelöst werden. Zusätzlich können Wasser oder eine Pufferlösung in eine erfindungsgemäße Zusammensetzung eingearbeitet werden, um das Gelbildungsverfahren zu starten und somit die Viskosität der Zusammensetzung vor der Injektion zu erhöhen. In jedem der vorstehenden Fälle sollte das Volumen an Wasser oder Pufferlösung weniger als die Menge sein, die veranlassen würde, daß sich die Zusammensetzung in wässerige und nichtwässerige Phasen trennt oder veranlassen würde, die Viskosität der Zusammensetzung bis zu dem Punkt zu erhöhen, wo sie durch die Injektion verabreicht werden könnte.
Die Fähigkeit eines in vivo aus einer erfindungsgemäßen Zusammensetzung gebildeten Lecithingels, die Freisetzung eines biologisch aktiven Proteins oder Polypeptids hinzuhalten, kann durch übliche Mittel bestimmt werden. Beispielsweise kann die, das biologisch aktive Protein oder Polypeptid enthaltende Testzusammensetzung geeigneten Labortieren, z. B. Ratten, injiziert werden. Die Blutspiegel des aktiven Proteins oder Polypeptids in dem Labortier werden dann über die Zeit beobachtet.
Die Fähigkeit eines Gels, die Freisetzung eines aktiven Proteins oder Polypeptids zu verzögern, kann auch in vitro durch Messen der Freisetzung des aktiven Proteins oder Polypeptids nach dem Eintauchen des Gels in aufeinanderfolgende Testlösungen bestimmt werden. Beispielsweise kann die in vitro Freisetzungsgeschwindigkeit einer Verbindung von Interesse in Phosphatpuffer, pH 7,4, gemessen werden. Dreifache Proben von jedem Gel (200 mg) werden auf den Boden von 1,5 ml Mikrozentrifugenröhrchen mit einer Spritze angeordnet. Pufferlösung (400 Mikroliter) wird dann auf das Obere des Gels angeordnet. Die Zentrifugenröhrchen werden verschlossen und in ein Inkubatorschüttlerbad, das bei 37ºC gehalten und mit einer Geschwindigkeit von 120 U/min gerührt wird, gegeben. Zu jedem Zeitpunkt wird die Pufferlösung entfernt und unter Verwendung von jeden Mitteln, die geeignet sind, das aktive Protein oder Polypeptid nachzuweisen, bestimmt. Frischer Puffer wird dann zu dem Mikrozentrifugenröhrchen, das die Testproben enthält, gegeben und die vorstehenden Schritte werden wiederholt, bis der Anteil des aktiven Proteins oder Polypeptids null oder nicht signifikant ist.
In einer bevorzugten Ausführungsform umfassen die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen zur hinhaltenden Freisetzung von Interferon-α 1 Gewichtsteil MCT, 0,1 bis 2,0 Gewichtsteile eines Lecithins, das in dem MCT dispergiert ist und das mehr als etwa 90% Phosphatidylcholin enthält, 0,1 bis 1,0 Gewichtsteile von einem oder mehreren Exzipienten, wobei die Exzipienten ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus osmotischen Mitteln, hydrophoben Mitteln und Tensiden, und die Gesamtmenge der Exzipienten 1,5 Gewichtsteile nicht übersteigt und etwa 100 Millionen Internationale Einheiten bis etwa 300 Millionen Internationale Einheiten Interferon-α pro Gramm der Endzusammensetzung.
Die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können durch Dispergieren des Lecithins, des biologisch aktiven Proteins oder Polypeptids und, falls erforderlich, Exzipienten, ausge wählt aus osmotischen Mitteln, hydrophoben Mitteln und Tensiden oder Gemischen davon, in einem MCT und Homogenisieren des Gemisches, hergestellt werden. In einem besonderen Aspekt des Herstellungsverfahrens wird ein weiteres Lösungsmittel, wie Hexan, zu dem Gemisch gegeben und nach Homogenisierung verdampft.
Die injizierbaren Zusammensetzungen der nachstehenden Beispiele 1(a)-(k) wurden durch das folgende Verfahren hergestellt:

Nicht-Lösungsmittel-Verfahren

(1) Während des Spülens mit Stickstoff, Erhitzen des MCT auf 40ºC.
(2) Zugeben und Dispergieren von Lecithin.
(3) Zugeben und Dispergieren von Exzipienten.
(4) Abkühlen auf 25ºC.
(5) Homogenisieren für 10 Minuten unter Halten der Temperatur unterhalb 40ºC.
(6) Abkühlen auf 25ºC, Zugeben von Wirkstoff und Gemisch, bis zur Homogenität.
Die injizierbaren, erfindungsgemäßen Zusammensetzungen können auch durch das nachstehende Verfahren hergestellt werden:

Lösungsmittel-Verfahren

(1) Unter Spülen mit Stickstoff, Dispergieren von MCT, Lecithin und Exzipienten in Hexan.
(2) Zugeben von Wirkstoff und Emulgieren.
(3) Unter Halten von Rühren, das Mischgefäß unter Unterdruck setzen, bis Hexan verdampft ist.

Beispiel 1

Die nachstehenden sind Beispiele für injizierbare Zusammensetzungen der Erfindung:

Beispiel 1(a)

Interferon-α-2a, konzentriertes 0,148 ml
Lösungsvolumen (2,02 · 10¹&sup0; IU/ml)
Ammoniumacetat, pH 5,0 Puffer 0,052 ml
Lecithin (LIPOID S 100) 6,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 14,8 g

Beispiel 1(b)

Interferon-α-2a/Mannit, Lyophilisat (5,4 · 10&sup8; IU/mg) 0,5 g
LeCithin (LIPOID S 100) 3,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 1,485 g
Methylparaben. 0,009 g
Propylparaben 0,001 g
dl-α-Tocopherol 0,005 g

Beispiel 1(c)

Interferon-α-2a Lösungsvolumen (2,02 · 10&sup8; IU/ml) 0,65 ml
Ammoniumacetat, pH 5,0 Puffer 0,35 ml
Lecithin (LIPOID S 100) 6,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 2,97 g
Methylparaben 0,018 g
Propylparaben 0,002 g
dl-α-Tocopherol 0,01 g

Beispiel 1(d)

Interferon-α-2a Lösungsvolumen (13,2 · 10&sup8; IU/ml) 1 ml
Cholesterin 3,0 g
Mannit 1,5 g
Lecithin (LIPOID S 100) 3,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 4,0 g

Beispiel 1(e)

Interferon-α-2a Lösungsvolumen (11,3 · 10&sup8; IU/ml) 0,9 ml
Stearinsäure 1,0 g
Lecithin (LIPOID S 100) 4,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 4,0 g
Humanserumalbumin (25%ige Lösung) 0,1 ml

Beispiel 1(f)

Interferon-α-2a Lösungsvolumen (16,6 · 10&sup8; IU/ml) 4,86 ml
Ammoniumacetat, pH 5,0 Puffer 1,03 ml
Cholesterin 9,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 9,0 g
Mannit 3,0 g
Lecithin (LIPOID S 100) 3,0 g
Methylparaben 0,016 g
Propylparaben 0,0018 g

Beispiel 1(Q)

Interferon-α-2a Lösungsvolumen (16,6 · 10&sup8; IU/ml) 4,86 ml
pH 5,0 Animoniumacetatpuffer 1,03 ml
Stearinsäure 9,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 9,0 g
Mannit 3,0 g
Lecithin (LIPOID S 100) 3,0 g
Methylparaben 0,016 g
Propylparaben 0,0018 g

Beispiel 1(h)

Interferon-α-2a Lösungsvolumen (16,6 · 10&sup8; IU/ml) 4,86 ml
pH 5,0 Ammoniumacetatpuffer 1,03 ml
Cholesterin 4,5 g
Stearinsäure 4,5 g
MCT (MIGLYOL 812) 9,0 g
Mannit 3,0 g
Lecithin (LIPOID S 100) 3,0 g
Methylparaben 0,016 g
Propylparaben 0,0018 g

Beispiel 1(i)

GRF Analog* 0,003 mg
pH 4,0 Natriumacetatpuffer 3,957 g
Cholesterin 6,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 6,0 g
Mannit 2,0 g
Lecithin (LIPOID S 100) 2,0 g
Methylparaben 0,04 g
Propylparaben 0,004 g
* [His¹, Val², Gln&sup8;, Ala¹&sup5;, Leu²&sup7;]-GRF(1-32)-OH, das die ersten 32 Reste von natürlichen GRF mit den angeführten Substitutionen an Resten 1, 2, 8, 15 und 27 enthält.

Beispiel 1(i)

Interferon-α-2a Lösungsvolumen (16,6 · 10&sup8; IU/ml) 0,453 ml
Ammoniumacetat, pH 5,0 Puffer 2,0 ml
Lecithin (LIPOID S 100) 5,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 10,0 g
Cholesterin 7,5 g

Beispiel 1(k)

Interferon-α-2a Lösungsvolumen (16,6 · 10&sup8; IU/ml) 0,905 ml
Ammoniumacetat, pH 5,0 Puffer 1,548 ml
Lecithin (LIPOID S 100) 5,0 g
MCT (MIGLYOL 812) 10,0 g
Cholesterin 7,5 g

Beispiel 2

Bestimmung der Dauer der Freisetzung von IFN-α

Die Zusammensetzungen von Beispielen 1(a)-1(h), die IFN-α enthalten, wurden jeweils subkutan an drei Sprague-Dawley-Ratten verabreicht. Weiteren Ratten würden die IFN-α in einem üblichen Träger (normale Salzlösung) zum Vergleich verabreicht. Blutproben wurden gezogen und die Plasma-IFN-α- Spiegel wurden durch ein immunoradiometrisches Assay (Cell tech Ltd., Berkshire, England) oder durch ein Enzym-Immunosorbant-Assay (EIA) durch das Verfahren von Gallati et al., J. CZin. Chem. CZin. Biochem., 20: 907-914 (1982) bestimmt.
Fig. 1-4 zeigen die hinhaltende Freisetzungswirkung, die bei Ratten durch Verabreichen der Zusammensetzungen der Beispiele 1(a)-1(h) erhalten wird. Die Werte sind die mittleren Serumspiegel von Interferon-α-2a, die in Ratten gefunden wurden.
Fig. 1 und 2 vergleichen übliche Lösungen von Interferon-α-2a mit erfindungsgemäßen Zusammensetzungen, die keine Freisetzung-modifizierenden Exzipienten enthalten. Fig. 1 zeigt, daß, wenn Interferon-α-2a in einer üblichen Lösung bei einer Dosis von 150 Millionen Einheiten verabreicht wird, die Serumspiegel von Interferon nach 24 Stunden unter die Nachweisgrenzen fallen. Jedoch zeigt Fig. 1 auch, daß die Zusammensetzung von Beispiel 1(a) zur hinhaltenden Freisetzung nachweisbare Serumspiegel für mindestens 96 Stunden bereitstellt. Fig. 2 zeigt die hinhaltende Freisetzung, die aus den Zusammensetzungen von Beispielen 1(b) und 1(c), im Vergleich zu einer üblichen Lösung mit einer Dosis von 54 Millionen Einheiten pro Ratte, erhalten wurden.
Fig. 3 zeigt, daß die Freisetzung von Interferon in erfindungsgemäßen Zusammensetzungen durch Zugeben eines osmotisch aktiven Mittels (Mannit) und Einstellen des Verhältnisses eines hydrophoben Additivs (Cholesterin) und eines Tensids (Stearinsäure), die das Solubilisieren des hydrophoben Mittels unterstützt, verändert werden kann. Die Zusammensetzung von Beispiel 1(f) enthält 30% Cholesterin, und nachweisbare Spiegel an Interferon werden für mindestens 336 Stunden beobachtet. Die Zusammensetzung von Beispiel 1(h) ist mit 1(f) identisch, mit der Ausnahme, daß statt dessen 30% Cholesterin enthalten sind; sie enthält 14% Cholesterin und 15% Stearinsäure. Der Freisetzungszeitraum an Interferon-α-2a dauerte aus dieser Zusammensetzung ungefähr 240 Stunden. Die Zusammensetzung von Beispiel 1(g), die kein Cholesterin und 30% Stearinsäure enthielt, hatte die kürzeste Freisetzungszeit, die ungefähr 72 Stunden dauerte. Fig. 3 zeigt, daß die Freisetzung von Interferon in die erfindungsgemäßen Zusammen setzungen durch die Zugabe von weiteren Exzipienten gesteuert werden kann.
Fig. 4 zeigt die mit den Zusammensetzungen von Beispielen 1(d) und 1(e) erhaltenen Freisetzungszeiträume, was weiterhin die Vielseitigkeit der Erfindung zeigt.
Die Ergebnisse in Fig. 1-4 zeigen, daß die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen wesentlich die Zeitdauer erhöhen, in der IFN-α in dem Blut der Versuchstiere, im Vergleich mit üblichen IFN-α-Lösungen, vorliegt. Mit den üblichen IFN- α-Lösungen kehrten die Blutspiegel an IFN-α innerhalb von 24 Stunden nach Verabreichung auf null zurück. Mit den erfindungsgemäßen Zusammensetzungen, die IFN-α enthielten, kehrten die Blutspiegel von IFN-α nicht zu null zurück, bis von 47,5 bis mehr als 300 Stunden nach Verabreichung, in Abhängigkeit von der Formulierung der Zusammensetzung.

Beispiel 3

Bestimmung der Freisetzungsdauer eines GRF-Analogen

Die Zusammensetzung von Beispiel 1(i), die ein GRF- Analoges enthielt, wurde subkutan an C57/BL6-Mäuse verabreicht. Über einen Zeitraum von 7 Tagen wurden Blutproben bei regelmäßigen Intervallen gezogen und auf die Anwesenheit von Wachstumshormon untersucht. Die Ergebnisse werden in Fig. 5 gezeigt, die den Blutspiegel von Wachstumshormon zeigen, der über einen Zeitraum von 168 Stunden von der Injektion der Formulierung von Beispiel 1(i) induziert wurde. Es waren fünf Mäuse in jeder Testgruppe (Arzneimittel und Plazebo). Die erhöhte Anwesenheit von Wachstumshormon in den Mäusen, die mit der Formulierung vom Beispiel 1(i) injiziert wurden, zeigt die Fähigkeit der erfindungsgemäßen Zusammensetzungen, die Freisetzung von GRF-Analog in vivo zu verzögern.

Beispiel 4

Bestimmung der Anti-Tumor-Aktivität von Zusammensetzungen, die IFN-α-2a enthalten

Humane Lymphzellen wurden in athymische Nacktmäuse implantiert und wachsen lassen. Den Mäusen wurde IFN-α-2a in einem üblichen Träger dreimal pro Woche oder in einer erfin dungsgemäßen Zusammensetzung (Zusammensetzungen von Beispielen 1(j) und 1(k)) einmal pro Woche verabreicht. Das insgesamt pro Woche verabreichte IFN-α-2a war in beiden Gruppen gleich. Fig. 6 zeigt die Wirkungen der üblichen IFN-α-Zusammensetzungen und der Zusammensetzungen von Beispielen 1(j) und 1(k) an der Stelle der implantierten Tumore über die Zeit.
Die Ergebnisse in Fig. 6 zeigen, daß die erfindungsgemäßen Zusammensetzungen, wenn sie einmal wöchentlich verabreicht wurden, das Wachstum der implantierten Tumore so wirksam wie übliche Zusammensetzungen, die 3mal pro Woche verabreicht wurden, inhibieren.

Claims

1. Pharmazeutische Zusammensetzung, die in vivo ein Lecithingel zur hinhaltenden Freigabe eines biologisch aktiven Proteins oder Polypeptids bildet, umfassend:

1) 1 Gewichtsteil eines mittelkettigen Triglycerids oder Gemisches von mittelkettigen Triglyceriden;

2) eine therapeutisch wirksame Menge des biologisch aktiven Proteins oder Polypeptids, das in dem mittelkettigen Triglycerid oder Gemisch von mittelkettigen Triglyceriden dispergiert ist; und

3) 0,1 bis 2,0 Gewichtsteile Lecithin, das in dem mittelkettigen Triglycerid oder Gemisch von mittelkettigen Triglyceriden dispergiert ist.

2. Zusammensetzung nach Anspruch 1, die weiterhin Exzipienten, die in dem mittelkettigen Triglycerid oder Gemisch von mittelkettigen Triglyceriden dispergiert sind, umfaßt, wobei die Exzipienten ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus osmotischen Mitteln, hydrophoben Mitteln und Tensiden oder Gemischen davon.

3. Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei die einzelnen Exzipienten in einer Menge von etwa 0,1 bis etwa 1,0 Gewichtsteilen vorliegen, wobei die Gesamtmenge der Exzipienten weniger als etwa 1, 5 Gewichtsteile auf 1 Gewichtsteil des mittelkettigen Triglycerids oder Gemisches von mittelkettigen Triglyceriden ausmacht.

4. Zusammensetzung nach Anspruch 1, wobei das Lecithin mehr als etwa 90% Phosphatidylcholin enthält.

5. Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei die osmotischen Mittel ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Mannit, Dextrose und Natriumchlorid.

6. Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei die hydrophoben Mittel ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Cholesterin und Cholesterinderivaten.

7. Zusammensetzung nach Anspruch 2, wobei die Tenside ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus Stearinsäure, Palmitinsäure, C&sub8;-C&sub2;&sub6;-Carbonsäuren und den Salzen dieser Säuren, Polyoxyethylenglycolen und Polyoxyethylensorbitanmonooleaten.

8. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1-7, wobei das biologisch aktive Protein oder Polypeptid Interferon α ist.

9. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 1-7, wobei das biologisch aktive Protein oder Polypeptid Growth-Hormone-Releasing-Factor oder ein Analoges davon mit Growth- Hormone-Releasing-Factor-Aktivität ist.

10. Zusammensetzung nach Anspruch 8, wobei Interferon α in einer Menge von etwa 100 Millionen Inernationalen Einheiten bis etwa 300 Millionen Internationalen Einheiten pro Gramm fertiger Zusammensetzung in dem mittelkettigen Triglycerid oder Gemisch von mittelkettigen Triglyceriden dispergiert ist.

11. Zusammensetzung nach Anspruch 10, die weiterhin 0,1 bis 1,0 Gewichtsteile auf 1 Gewichtsteil des mittelkettigen Triglycerids oder Gemisches von mittelkettigen Triglyceriden einen oder mehrere in dem Lösungsmittel dispergierte Exzipienten umfaßt, wobei die Exzipienten ausgewählt sind aus der Gruppe, bestehend aus osmotischen Mitteln, hydrophoben Mitteln und Tensiden und die Gesamtmenge der Exzipienten 1,5 Gewichtsteile auf 1 Gewichtsteil des mittelkettigen Triglycerids oder Gemisches von mittelkettigen Triglyceriden nicht übersteigt.

13. Verfahren zur Herstellung von pharmazeutischen Zusammensetzungen nach einem der Ansprüche 1-11, das Dispergieren von Lecithin in einem mittelkettigen Triglycerid oder Gemisch von mittelkettigen Triglyceriden, Zugabe des Wirkstoffes und falls erforderlich, der aus osmotischen Mitteln, hydrophoben Mitteln und Tensiden oder Gemischen davon ausgewählten Exzipienten und Homogenisieren des Gemisches, umfaßt.

13. Verfahren nach Anspruch 12, wobei ein weiteres Lösungsmittel, wie Hexan, zugegeben wird und nach Homogenisierung der Zusammensetzung verdampft wird.