DE69230287T2

DE69230287T2 - Verbindungen und pharmazeutische zusammensetzungen zum nachweis und zur lokalisierung von geweben mit neurokinin-1-rezeptoren

Info

Publication number: DE69230287T2
Application number: DE69230287T
Authority: DE
Inventors: Willem Bakker; Eric Krenning; Steven Lamberts; Petrus Van Hagen; Theofilus Visser
Original assignee: Mallinckrodt Medical Inc
Current assignee: Mallinckrodt Inc
Priority date: 1991-04-22
Filing date: 1992-04-22
Publication date: 2000-05-11
Anticipated expiration: 2012-04-23
Also published as: WO1992018536A2; IL101675A; EP0584256B1; ATE186550T1; CA2106874A1; EP0584256A1; AU2175492A; DE69230287D1; JPH06507174A; IL101675A0; WO1992018536A3

Description

Die Erfindung betrifft Verbindungen und pharmazeutische Zusammensetzungen zum Nachweis und zur Lokalisierung von Geweben mit Neurokinin-1-Rezeptoren in dem Körper eines warmblütigen Lebewesens. Die Erfindung betrifft auch Verbindungen und Zusammensetzungen, die in dem Körper des genannten Lebewesens bei der therapeutischen Behandlung von Tumoren eingesetzt werden können, die auf ihrer Oberfläche Neurokinin-1-Rezeptoren haben. Die Erfindung betrifft ferner einen Präparatesatz zur Herstellung einer radiopharmazeutischen Zusammensetzung.
Bindungsstudien, die in vitro durchgeführt wurden, haben gezeigt, dass kleine Peptide, die an der Regelung diverser biologischer Prozesse teilhaben, sowie ihre Analoga eine hohe Affinität zu bestimmten Geweben haben. Neurokinin-1(NK1)-Rezeptoren wurden in dem Gehirn- und peripheren Gewebe nachgewiesen. Diese Gewebe bevorzugen die Wechselwirkung mit bestimmten kleinen Peptiden, wie etwa Substanz P (SP) und verwandten Verbindungen. In diesen Studien wurden mit ¹²&sup5;I-Bolton Hunter derivatisierte Analoga des SP und verwandte Verbindungen benützt, um die Bindungsaffinität dieser kleinen Peptide zu NK1-spezifischen Bindungsstellen zu bestimmen. Eine Reihe neuer Veröffentlichungen widmet sich diesen in vitro-Studien, wobei verschiedene Gewebepräparate von Testlebewesen benutzt werden, z. B. Präparate von Gehirnmembranen, der Synaptosome, der Duodenalmembrane, der Darmbeine, der Halsschlagader und der Speicheldrüsen. In diesem Zusammenhang wird Bezug genommen auf die Veröffentlichungen von Lavielle et al. in Biochem. Pharmacol. 37, 1988, 41-49; Regoli et al. in Pharmacology 38, 1989, 1-15; Lew et al. in Eur. J. Pharmacol. 184, 1990, 97-108; und Tousignant et al. in Brain Research 524, 1990, 263-270.
Es ist Aufgabe der vorliegenden Erfindung, Verbindungen und pharmazeutische Zusammensetzungen zum Nachweis und zur Lokalisierung von Geweben mit Neurokinin-1-Rezeptoren in dem Körper eines Warmblüters zu schaffen. Diese Verbindungen und pharmazeutischen Zusammensetzungen wären kräftige Werkzeuge bei der in vivo-Diagnose verschiedener Krankheiten und Störungen, die zu Neurokinin-1-Rezeptoren in Körpergeweben in Beziehung stehen, wie Tumoren mit NK1-Rezeptoren, z. B. bösartigen Glyomen, Pheochromocytomen, Paraganglia und SCLC (kleinzelliger Lungenkrebs) und bei der Sichtbarmachung von NK1-Rezeptoren auf bestimmten Geweben, wie etwa sich erneuerndem Nervengewebe, z. B. Polyneuropathie, Nervensektion und andere degenerative Prozesse in dem zentralen Nervensystem einschließlich des Rückenmarks, und an Geweben, die eine immunologische Reaktion zeigen, z. B. im Falle von Granulom, Lymphom und Crohn'scher Krankheit. Um eine spezifische Therapie für die obigen Krankheiten und Störungen erreichen zu können, ist der Nachweis und die Lokalisierung von Geweben mit NK1-Rezeptoren in einer frühen Krankheitsstufe von äußerster Wichtigkeit. Ferner ist eine gute Diagnosemethode für die Unterstützung der angewandten Therapie ebenfalls unverzichtbar. Verschiedene Voraussetzungen muß ein Mittel erfüllen, das bei einer solchen diagnostischen Methode eingesetzt wird, z. B. Ungiftigkeit, keinen nachteiligen Einfluß auf die Widerstandskraft des Wirtsorganismus und/oder die therapeutische Behandlung, gute Nachweisbarkeit und hohe Selektivität. Die geforderte hohe Selektivität bedeutet, dass das diagnostische Mittel nach Einführung in den Körper sich stärker in dem nachzuweisenden oder sichtbar zu machenden Gewebe oder Geweben ansammeln muß als in dem Umgebungsgewebe. Diese Selektivität, d. h. eine vergleichsweise stärkere Konzentration des Diagnosemittels in dem Zielgewebe oder den Zielgeweben im Vergleich mit den Nicht-Zielgeweben befähigt den Anwender, die Krankheit oder Störung genau zu diagnostizieren. Um von außerhalb des Körper nachweisbar zu sein, sollte das diagnostische Mittel markiert sein, vorzugsweise mit einem Radionuklid oder einem paramagnetischen Metallisotop. Im ersteren Falle kann die radioaktive Strahlung unter Benutzung eines geeigneten Detektors (Abtastung) nachgewiesen werden. Moderne Verfahren auf diesem Gebiet benutzen die Emissionstomographie; wenn gammastrahlende Isotope eingesetzt werden, kann die sogenannte Einzelphotonenemission-Computertomographie (SPECT) angewandt werden. Der Einsatz paramagnetischer Diagnosemittel erlaubt den Nachweis mittels Abbildung durch magnetische Resonanz.
Gemäß der vorliegenden Erfindung wird eine Verbindung geschaffen, die ein markiertes kleines Peptid mit einer selektiven Affinität zu Neurokinin-1-Rezeptoren ist, das sich ableitet von einer Verbindung der allgemeinen Formel
R&sub1;-(A&sub1;)m-A&sub2;)n-A&sub3;)o-Pro)p-A&sub4;)q-A&sub5;-Phe-A&sub6;-A&sub7;-A&sub8;-Met(O)s-R&sub2;,
worin alle Symbole m, n, o, p und q die Zahl 1 sind oder alle Symbole m, n, o, p und q bis auf eins die Zahl 1 sind und das übrige Symbol null ist,
R&sub1; ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub4;- Alkylcarbonylgruppe ist,
R&sub2; eine Aminogruppe, eine Hydroxygruppe oder eine C&sub1;-C&sub4;-Alkoxygruppe ist,
A&sub1; Arg, Gly oder 5-Oxo-Pro (pGlu) ist,
A&sub2; Pro oder β-Ala ist,
A&sub3; Lys oder Asp ist,
A&sub4; Gln, Asn oder 5-Oxo-Pro ist,
A&sub5; Gln, Lys, Arg, N-acetyliertes Arg oder 5-Oxo-Pro
ist, oder worin
A&sub5; zusammen mit A&sub3; eine Cystin-Gruppe bildet,
A&sub6; Phe oder Tyr ist,
A&sub7; Gly, Sar oder Pro ist,
A&sub8; Leu oder Pro ist, und
S null, 1 oder 2 ist,
oder ein Tyr&sup0;-Derivat davon,
wobei das genannte Peptid markiert ist mit (a) einem unter Tc-99 m, Pb-203, Ga-67, Ga-68, As-72, In-111, In- 113m, Ru-97, Cu-62, Cu-64, Fe-52, Mn-52m, Cr-51, Na-23, Gd-157, Mn-55, Dy-162, Cr-52, Fe-56, Re-186, Re-188, As- 77, Y-90, Cu-67, Er-169, Sn-121, Te-127, Pr-142, Pr-143, Au-198, Pd-109 und Dy-165 ausgewählten Metallisotop, das an das genannte Peptid über ein Verbindungsglied gebunden ist, das zur Umsetzung mit einer Aminogruppe des Peptids befähigt ist und eine chelatbildende Gruppe zur Chelatbildung mit dem genannten Metallisotop hat und sich ableitet von Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), Diethylentriaminpentaessigsäure (DPTA), Ethylenglykol- O,O'-bis(2-aminoethyl)-N,N,N',N'-tetraessigsäure (EGTA), N,N'-bis(Hydroxybenzyl)ethylendiamin-N,N'-diessigsäure (HBED), Triethylentetraminhexaessigsäure (TTHA), substituierter EDTA oder substituierter DTPA, 1,4,7,10- Tetraazazyklododekan-N,N',N",N'''-tetraessigsäure (DOTA) oder 1,4,8,11-Tetraazazyklotetradekan-N,N',N",N'''- tetraessigsäure (TETA), oder über ein Verbindungsglied, das sich von einer Verbindung der allgemeinen Formel
ableitet, worin R ein verzweigter oder unverzweigter, wahlweise substituierter Kohlenwasserstoffrest ist, der durch ein oder mehrere, unter N, O und S ausgewählte Heteroatome und/oder durch eine oder mehrere NH-Gruppen unterbrochen sein kann, und Y eine Gruppe ist, die zur Umsetzung mit einer Aminogruppe des Peptids befähigt ist und vorzugsweise unter Carbonyl, Carbimidoyl, N-(C&sub1;-C&sub6;)- Alkylcarbimidoyl, N-Hydroxycarbimidoyl und N-(C&sub1;-C&sub6;)- Alkoxycarbimidoyl ausgewählt ist; oder markiert ist mit (b) einem nachweisbaren Halogenisotop, das unter I-123, I-131, Br-75 und Br-76 ausgewählt ist und direkt oder über eine verbindende Tyrosylgruppe an dem genannten Peptid hängt.
Diese Verbindungen können eingesetzt werden bei einem Verfahren, bei dem man (i) einem Warmblüter eine Zusammensetzung verabreicht, umfassend eine zur externen Abbildung ausreichende. Menge eines kleinen Peptids der obigen allgemeinen Formel, das markiert ist mit (a) einem nachweisbaren Metallisotop, ausgewählt aus der aus Tc- 99m, Pb-203, Ga-67, Ga-68, As-72, In-111, In-113 m, Ru-97, Cu-62, Cu-64, Fe-52, Mn-52 m, Cr-51, Na-23, Gd-157, Mn-55, Dy-162, Cr-52 und Fe-56 bestehenden Gruppe, wobei das Metallisotop an das Peptid über ein geeignetes Verbindungsglied gebunden ist, das zur Umsetzung mit einer Aminogruppe, vorzugsweise einer endständigen Aminogruppe des Peptids befähigt ist und eine chelatbildende Gruppe zur Chelatierung des Metallisotops hat, oder mit (b) einem nachweisbaren, unter I-123, I- 131, Br-75 und Br-76 ausgewählten Halogen-Radioisotop, das direkt oder über eine Tyrosyl-Verbindungsgruppe an das Peptid gebunden ist, und dann (ii) das Lebewesen einer externen Abbildung unterzieht, um die Zielstellen in dem Körper des Lebewesens im Verhältnis zu der Hintergrundaktivität zu bestimmen, um so den Nachweis und die Lokalisierung des genannten Gewebes in dem genannten Körpers zu ermöglichen.
Die obigen markierten Peptide mit einer selektiven Affinität zu Neurokinin-1-Rezeptoren wurden in einer Anzahl geeigneter Modellexperimente getestet, die für die Anwendung in vivo aussagefähig sind. Diese Versuche sind in den Beispielen beschrieben. Aus den Ergebnissen wird deutlich, dass die getesteten markierten Peptide Eigenschaften haben, die sie als Diagnosemittel geeignet machen. Wie aus den Beispielen deutlich wird, bleibt das markierte Peptid nach der Verabreichung genügend lange intakt, um die Abbildung des Zielorgans oder -gewebes ohne eine störende Hintergrundaktivität, z. B. infolge entbundener Markierung, zu ermöglichen. Ferner ist es von größter Wichtigkeit, dass die Verbindungen und Zusammensetzungen der vorliegenden Erfindung sich auch gut zum Nachweis und zur Lokalisierung von Geweben mit Neurokinin-1-Rezeptoren eignen, wenn diese Gewebe in der Bauchregion des Lebewesens vorliegen, z. B. für den Nachweis und die Lokalisierung bestimmter Tumore in der Bauchhöhle und zur Sichtbarmachung der Crohn'schen Krankheit. Wie aus den Beispielen, siehe die darin beschriebenen Leberperfusion-Modellversuche, deutlich wird, zeigen die geprüften markierten Peptide der Erfindung eine so langsame Stoffwechselausscheidung aus der Leber, dass nicht nur in der Bauchregion, sondern auch im Kreislaufsystem nur eine geringe Hintergrundaktivität resultiert. Diese Stoffwechseleigenschaften, wie sie in den oben beschriebenen und in den Beispielen erläuterten Modellversuchen bestimmt wurden, machen die markierten Peptide für den Nachweis und die Lokalisierung von Geweben mit Neurokinin-1-Rezeptoren besonders geeignet, weil ein günstiges Verhältnis Zielgewebe/Hintergrund erwartet werden kann. Demgegenüber zeigt ein mit ¹²&sup5;I- Bolton Hunter modifiziertes SP, das aus den oben erwähnten Bindungsstudien in vitro bekannt ist, eine relativ schnelle Leber-Stoffwechselausscheidung, was diese Substanz für die Anwendung in vivo deutlich weniger geeignet macht. Dies wird aus den folgenden Beispielen deutlich.
Eine andere Aufgabe der Erfindung ist die Schaffung von Verbindungen und Zusammensetzungen für die therapeutische Behandlung von Tumoren mit Neurokinin-1- Rezeptoren auf ihrer Oberfläche in dem Körper eines Warmblüters.
Diese Aufgabe kann nach einem anderen Aspekt der vorliegenden Erfindung durch eine Zusammensetzung zur Verabreichung an das genannte Lebewesen erreicht werden, die ein kleines Peptid gemäß obiger Definition in einer zur Krebsbekämpfung oder -kontrolle wirksamen Menge enthält, wobei das Peptid wie oben erwähnt über ein geeignetes Verbindungsglied mit einem für den vorgesehenen Zweck geeigneten Isotop markiert wurde. Geeignete Isotope für die Tumorbekämpfung und -kontrolle sind β-emittierende Isotope, wie Re-186, Re-188, As-77, Y-90, Cu-67, Er-169, Sn-121, Te-127, Pr-142, Pr-143, Au- 198, Pd-109 und Dy-165.
Die selektive Affinität der obigen markierten Peptide gegenüber Neurokinin-1-Rezeptoren macht diese markierten Verbindungen besonders für die therapeutische Behandlung bestimmter bösartiger Tumore geeignet, die mit Neurokinin-1-Bindungsstellen in Beziehung stehen, wie etwa bösartiges Glyom, Pheochromocytoma, Paraganglia und SCLC.
Das markierte Peptid der Erfindung ist abgeleitet von einer Verbindung der allgemeinen Formel
R&sub1;-(A&sub1;)m-A&sub2;)n-A&sub3;)o-Pro)p-A&sub4;)q-A&sub5;-Phe-A&sub6;-A&sub7;-A&sub8;-Met(O)s-R&sub2;,
worin alle Symbole m, n, o, p und q die Zahl 1 sind oder alle Symbole m, n, o, p und q bis auf eins die Zahl 1 sind und das übrige Symbol null ist,
R&sub1; ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub4;- Alkylcarbonylgruppe ist,
R&sub2; eine Aminogruppe, eine Hydroxygruppe oder eine C&sub1;-C&sub4;-Alkoxygruppe ist,
A&sub1; Arg, Gly oder 5-Oxo-Pro (pGlu) ist,
A&sub2; Pro oder β-Ala ist,
A&sub3; Lys oder Asp ist,
A&sub4; Gln, Asn oder 5-Oxo-Pro ist,
A&sub5; Gln, Lys, Arg, N-acetyliertes Arg oder 5-Oxo-Pro
ist, oder worin
A&sub5; zusammen mit A&sub3; eine Cystin-Gruppe bildet,
A&sub6; Phe oder Tyr ist,
A&sub7; Gly, Sar oder Pro ist,
A&sub8; Leu oder Pro ist, und
S null, 1 oder 2 ist,
oder ein Tyr&sup0;-Derivat davon.
Geeignete Beispiele für eine solche Verbindung der obigen allgemeinen Formel I sind:
(1) H-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Gly-Leu-Met-NH&sub2; (Substanz P).
(2) H-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Phe-Sar-Leu-Met- (O&sub2;)-NH&sub2;,
(3) H-Ala-Gln-Gln-Phe-Phe-Sar-Leu-Met(O&sub2;)-NH&sub2;,
(4) H-Arg-Pro-Lys-Pro-Gln-Gln-Phe-Tyr-Gly-Leu-Met-NH&sub2; und
und ihre Tyr&sup0;-Derivate.
Die Erfindung betrifft auch die Verwendung markierter kleiner Peptide wie oben definiert, die aus Aminosäuren bestehen, von denen wenigstens eine die d- Konfiguration hat. Die nach der Erfindung einzusetzenden markierten Peptide können auch sogenannte Pseudopeptid- Bindungen, nämlich -CH&sub2;-NH-Bindungen, neben den natürlichen Amid-Bindungen, nämlich -CO-NH-Bindungen enthalten.
Das wie oben definierte, gewünschte Isotop sollte fest an das Molekül des kleinen Peptids gebunden sein, um nach der Verabreichung an das Lebewesen die Trennung dieser Markierung zu verringern. Aus dem obigen ist klar, dass die passende Wahl des Verbindungsglieds ein wesentlicher Aspekt der vorliegenden Erfindung ist. Das kleine Peptid kann mit dem gewünschten Halogen- Radioisotop direkt oder indirekt, nämlich über eine Tyrosyl-Gruppe markiert sein. Die direkte Markierung kann beispielsweise dadurch erfolgen, dass ein Halogenatom oder ein radioaktives Halogenatom in eine in dem Peptidinolekül vorliegende, aktivierte aromatische Gruppe (z. B. Tyrosyl oder Imidazolyl) in an sich bekannter Weise eingeführt wird mit gewünschtenfalls folgendem Austausch mit I-123, I-131, Br-75 oder Br-76, z. B. durch das in EP 165630 beschriebene Verfahren. Im allgemeinen wird jedoch die Markierung über das genannte Verbindungsglied bevorzugt, wobei das Verbindungsglied zur Umsetzung mit einer Aminogruppe, vorzugsweise einer endständigen Aminogruppe des Peptids befähigt ist und eine funktionelle Gruppe zur Bindung des Isotops hat. Durch Benutzung des Verbindungsglieds kann das gewünschte Isotop im allgemeinen besser in das Peptidmolekül eingeführt werden. Es ist vorteilhaft, das Verbindungsglied an eine endständige Aminogruppe des Peptidmoleküls zu binden, um die biologischen Eigenschaften dieses Peptids soweit wie möglich aufrecht zu erhalten. Es wurde gefunden, dass eine Tyrosyl- Verbindungsgruppe für die Bildung eines mit radioaktivem Halogen markierten Peptids sehr geeignet ist, das eine selektive Affinität zu NK-1-Rezeptoren mit einer langsamen Leber-Stoffwechselausscheidung vereinigt. Eine Tyrosyslgruppe kann in die Aminosäurekette während der Peptidsynthese vorzugsweise in der O-Position eingeführt werden. Alternativ kann die Tyrosylgruppe durch eine getrennte Umsetzung des Peptids mit Tyrosyl oder seinem funktionellen Derivat eingeführt werden. Das so erhaltene derivatisierte Peptid wird in einer geeigneten Reaktion durch das gewünschte Halogen-Radioisotop substituiert. Auf diese Weise kann das Peptid mit dem gewünschten radioaktiven Halogen-Isotop ohne Beeinträchtigung seiner biologischen Eigenschaften markiert werden. Die Radiohalogenierungsreaktion wird vorzugsweise durchgeführt durch Umsetzung des Peptids mit einer Lösung eines unter ¹²&sup5;I-, ¹³¹I-, &sup7;&sup5;Br- und &sup7;&sup6;Br- ausgewähltem Alkalimetall-Radionuklids unter Einfluss eines Halogenid- Oxidationsmittels, wie Chloramin T oder Iodogen. Alternativ kann die obige Substitutionsreaktion mit einem nicht-radioaktiven Halogen durchgeführt werden, worauf ein Halogenaustausch mit radioaktivem Halogen durchgeführt wird, wie beispielsweise in EP 165630 beschrieben ist.
Eine geeignete Verbindungsgruppe zur Anfügung eines Metallisotops an ein kleines Peptid ist mit einer Chelatbildungsgruppe versehen. Diese Isotope werden ausgewählt aus der Gruppe, die aus Tc-99m, Pb-203, Ga-67, Ga-68, As-72, In-111, In-113 m, Ru-97, Cu-62, Cu-64, Fe- 52, Mn-52 m, Cr-51, Na-23, Gd-157, Mn-55, Dy-152, Cr-52, Fe-56, Re-186, Re-188, As-77, Y-90, Cu-67, Er-169, Sn- 121, Te-127, Pr-142, Pr-143, Au-198, Pd-109 und Dy-165 besteht. Verschiedene Kupplungsmittel zur Bindung von Metallisotopen an Proteine sind in der Literatur beschrieben, wie etwa Verbindungen, die nach Bindung an das Protein das Metallisotop durch eine N&sub2;S&sub2;-, N&sub3;S- oder N&sub4;-tetrazähnige Ringstruktur komplexieren können, Aminohaltige Verbindungen, wie die in EP-A-178125 beschriebenen Maleimid-Derivate, Peptid-Derivate und Verbindungen mit chelatbildenden Gruppen, wie Isocyanat-, Formyl-, Diazonium-, Isothiocyanat- oder Alkoxycarbimidoyl-Gruppen. Geeignete Verbinder sind abgeleitet von N-haltigen Di- oder Polyessigsäuren oder ihren Derivaten, nämlich Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), Diethylentriaminpentaessigsäure (DTPA), N,N'- bis(Hydroxybenzyl)ethylendiamin-N,N'-diessigsäure (HBED), Triethylentetraminhexaessigsäure (TTHA), substituierte EDTA oder DTPA, 1,4,7,10-Tetraazacylododekan- N,N', N",N'''-tetraessigsäure (DOTA) oder 1,4,8,11- Tetraazacyclodekan-N,N',N",N'''-tetraessigsäure (TETA). Zur Modifizierung des fraglichen kleinen Peptids wird jedoch ein Verbindungsglied bevorzugt, das sich von den in der PCT-Anmeldung WO 89/07456 beschriebenen Kupplungsmitteln ableitet. Diese Kupplungsmittel sind allgemein dargestellt durch die Formel
worin
R ein verzweigter oder unverzweigter, wahlweise substituierter Kohlenwasserstoffrest ist, der durch ein oder mehrere(unter N, O und S ausgewählte Heteroatome und/oder durch eine oder mehrere NH-Gruppen unterbrochen sein kann, und
Y eine Gruppe ist, die zur Umsetzung mit einer Aminogruppe des Peptids befähigt ist und vorzugsweise unter Carbonyl, Carbimidoyl, N-(C&sub1;-C&sub6;)-Alkylcarbimidoyl, N-Hydroxycarbimidoyl und N-(C&sub1;-C&sub5;)-Alkoxycarbimidoyl ausgewählt ist. Beispiele für Kupplungsmittel hierfür sind unsubstituierte oder substituierte 2-Iminothiolane und 2-Iminothiacyclohexane.
Die Modifizierung des fraglichen Peptids, d. h. die Umsetzung mit dem Kupplungsmittel führt zu einem Peptidkonjugat. Diese Reaktion kann im allgemeinen in einer einfachen Weise durchgeführt werden. In der anschließenden Komplexbildungsreaktion wird das Metallisotop im Peptidkonjugat in Form eines Salzes oder Chelats zugeführt. In dem letzteren Falle werden relativ schwache Chelatbildner benutzt, z. B. ein Phosphonat oder Polyphosphonat, ein Oxinat, ein Carboxylat, ein Hydroxycarboxylat, ein Aminocarboxylat oder ein Enolat. Dann wird der gewünschte Komplex durch Ligandenaustausch gebildet. Die Komplexbildungsreaktionen können im allgemeinen in einer einfachen Weise und unter Bedingungen ausgeführt werden, die das Peptid schonen.
Die Erfindung betrifft ferner eine pharmazeutische Zusammensetzung zur Verwendung für den Nachweis und die Lokalisierung von Geweben mit Neurokinin-1-Rezeptoren in dem Körper eines Warmblüters, die neben einem pharmazeutisch zulässigen Träger und gewünschtenfalls wenigstens einem pharmazeutischen zulässigen Hilfsstoff als die aktive Substanz ein kleines Peptid mit einer selektiven Affinität zu Neurokinin-1-Rezeptoren enthält, wobei das Peptid mit einem nachweisbaren Isotop gemäß obiger Definition markiert ist. Eine solche Zusammensetzung ist für die diagnostische Anwendung bestimmt oder bei Markierung mit einem geeigneten Isotop gemäß obiger Angabe für die therapeutische Anwendung. Gewünschtenfalls kann die so erhaltene Zusammensetzung in eine zur intravenösen oder subkutanen Anwendung geeignetere Form gebracht werden, z. B. durch Zusatz eines pharmazeutisch zulässigen flüssigen Trägermaterials. Zur intravenösen oder subkutanen Anwendung sollte die Lösung natürlich in einem sterilen Zustand sein.
Die Erfindung betrifft auch ein markiertes kleines Peptid zur Verwendung als aktiver Bestandteil in der oben beschriebenen Zusammensetzung, wobei das Peptid eine selektive Affinität zu Neurokinin-1-Rezeptoren hat und mit einem Isotop gemäß vorgenannter Definition markiert ist.
Wenn ein radioaktives markiertes Peptid als Diagnosemittel dient, ist es häufig wegen der oft geringen Lebensdauer der radiomarkierten Verbindung und/oder der kurzen Halbwertzeit des eingesetzten Radionuklids unmöglich, dem Benutzer eine gebrauchsfertige Zusammensetzung zur Verfügung zu stellen. In diesen Fällen führt der Benutzer die Markierungsreaktion mit dem Radionuklid in dem klinischen Krankenhaus oder Laboratorium durch. Für diesen Zweck werden dem Benutzer die verschiedenen Reaktionsbestandteile in der Form eines sogenannten Präparatesatzes angeboten. Es ist offensichtlich, dass die zur Durchführung der gewünschten Reaktion nötigen Arbeitsgänge möglichst einfach sein sollten, um dem Benutzer zu ermöglichen, unter Benutzung der ihm verfügbaren Einrichtungen die radioaktiv markierte Zusammensetzung aus dem Präparatesatz herzustellen. Daher bezieht sich die Erfindung auch auf einen Präparatesatz zur Herstellung einer radiopharmazeutischen Zusammensetzung.
Ein solcher Präparatesatz nach der vorliegenden Erfindung kann umfassen (i) ein kleines Peptid mit selektiver Affinität zu Neurokinin-1-Rezeptoren und wahlweise mit einer Verbindungsgruppe gemäß obiger Definition, dem gewünschtenfalls ein inerter, pharmazeutisch zulässiger Träger und/oder Formulierungsmittel und/oder Begleitstoffe zugesetzt sind, (ii) eine Lösung einer Verbindung eines geeigneten Radionuklids und (iii) Gebrauchsanweisungen mit einer Vorschrift zur Umsetzung der in dem Präparatesatz vorliegenden Bestandteile.
Geeignete Radionuklide für den obigen Präparatesatz sind Pb-203, Ga-67, Ga-68, As-72, In-111, In-113 m, Ru-97, Tc-99 m, Re-186, Re-188, Cu-62, Cu-64, Fe-52, Mn-52 m, Cr- 51, I-123, I-131, Br-75, Br-76, As-77, Y-90, Cu-67 Er- 169, Sn-121, Te-127, Pr-142, Pr-143, Au-198, Pd-109 und Dy-165. Wenn in einem solchen Präparatesatz das Radionuklid ein unter I-123, I-131, Br-75 und Br-76 ausgewähltes radioaktives Halogen ist, dient vorzugsweise ein in der Technik generell bekanntes Alkalimetallhalogenid als Bestandteil des Präparatesatzes, gewünschtenfalls begleitet von einem Halogenid-Oxidationsmittel, wie Chloramin T oder IodogenR. Vorzugsweise wurde das als Bestandteil des obigen Präparatesatzes eingesetzte kleine Peptid durch Umsetzung mit einem Kupplungsmittel gemäß obiger Definition modifiziert. Das resultierende Peptidkonjugat schafft eine Möglichkeit, das Radionuklid in einfacher Weise fest anzufügen. Geeignete Kupplungsmittel zur Modifizierung des Peptids sind im einzelnen oben beschrieben, N-haltige Di- oder Polyessigsäuren oder ihre Derivate, wie die oben erwähnten Verbindungen, haben sich als außerordentlich geeignet erwiesen, um verschiedene Metallradionuklide, wie In-111 und In-113m, an die Peptidmoleküle anzuhängen. Der dem Benutzer zu liefernde Präparatesatz kann auch den unter (i) oben definierten Bestandteil zusammen mit Gebrauchsanweisungen enthalten, während die oben unter (ii) definierte Lösung einer Verbindung des Radionuklids von begrenzter Lebensdauer dem Benutzer getrennt zur Verfügung gestellt werden kann.
Wenn der Präparatesatz zur Zubereitung einer mit Tc- 99m, Re-186 oder Re-188 markierten radiopharmazeutischen Zusammensetzung dient, kann dieser erfindungsgemäße Präparatesatz neben den oben unter (i) definierten Bestandteilen (ii) ein Reduktionsmittel und gewünschtenfalls einen Chelatbildner sowie (iii) Gebrauchsanweisungen mit einer Vorschrift zur Umsetzung der Bestandteile des Präparatesatzes mit Tc-99 m in der Form einer Pertechnetat-Lösung oder mit Re-186 oder Re- 188 in der Form einer Perrhenat-Lösung enthalten. Gewünschtenfalls können die Bestandteile des Präparatesatzes vereinigt werden, vorausgesetzt, sie sind verträglich. Der Präparatesatz sollte zur Reduzierung der Pertechnetats oder Perrhenats ein Reduktionsmittel enthalten, z. B. ein Dithionit, ein metallisches Reduktionsmittel oder ein komplexstabilisierendes Reduktionsmittel, z. B. SnCl&sub2;, Sn(II)-Tartrat, Sn(II)- Phosphonat oder -Pyrophosphat oder Sn(II)-Glucoheptonat. Die Pertechnetat- oder Perrhenatlösung kann der Benutzer einfach aus einem geeigneten Generator erhalten.
Bei der bevorzugten Ausführungsform umfasst der erfindungsgemäße Präparatesatz ein modifiziertes Peptid oder ein Peptid-Konjugat, das man durch Modifizierung des oben definierten Peptids durch eine Behandlung mit einem Kupplungsmittel erhält. Geeignete Kupplungsmittel wurden oben beschrieben. Der Einsatz einer Verbindung der allgemeinen Formel
worin die Symbole die oben angegebenen Bedeutungen haben, ist als Kupplungsmittel bevorzugt.
Wenn das Radionuklid in dem Präparatesatz selbst vorliegt, kann die komplexbildende Umsetzung mit dem Peptidkonjugat einfach in der Weise erfolgen, dass die Komponenten in einem neutralen Medium vereinigt und zur Umsetzung veranlasst werden. Zu diesem Zweck kann das Radionuklid dem Peptidkonjugat in Form eines Chelats zugeführt werden, das wie oben beschrieben an einen vergleichsweise schwachen Chelatbildner gebunden ist.
Wenn der Präparatesatz ein Peptidkonjugat gemäß obiger Definition enthält und zur Herstellung einer mit Tc-99m, Re-186 oder Re-188 markierten, radiopharmazeutischen Zusammensetzung bestimmt ist, wird das Radionuklid vorzugsweise getrennt in der Form einer Pertechnetat- oder Perrhenat-Lösung zugesetzt. In diesem Falle enthält der Präparatesatz ein geeignetes Reduktionsmittel und gewünschtenfalls einen Chelatbildner, das erstere zur Reduzierung des Pertechnetats oder des Perrhenats. Als Reduktionsmittel kann beispielsweise ein Dithionit oder ein metallisches Reduktionsmittel dienen. Die Bestandteile können wahlweise vereinigt sein, vorausgesetzt, dass sie verträglich sind. Ein solcher Einkomponenten- Präparatesatz, in dem die vereinigten Bestandteile vorzugsweise gefriergetrocknet sind, eignet sich ausgezeichnet für die Umsetzung mit der Radionuklid- Lösung durch den Anwender. Als Reduktionsmittel für die oben erwähnten Präparatesätze wird vorzugsweise ein metallisches Reduktionsmittel eingesetzt, z. B. Sn(II), Fe(II), Cu(I), Ti(III) oder Sb (III). Sn(II) ist außerordentlich gut geeignet. Der Peptid-Bestandteil der oben erwähnten Präparatesätze, nämlich vorzugsweise das Peptid-Konjugat, kann als eine Lösung z. B. in Form einer physiologischen Salzlösung, oder in einer Pufferlösung geliefert werden, liegt aber vorzugsweise in trockenem Zustand, z. B. in dem gefriergetrockneten Zustand vor. Bei Einsatz als Bestandteil für eine Injektionsflüssigkeit sollte er steril sein, wobei der Benutzer - wenn der Bestandteil in dem trockenen Zustand vorliegt - vorzugsweise eine physiologische Salzlösung als Lösungsmittel benutzen sollte. Gewünschtenfalls kann der oben erwähnte Bestandteil in herkömmlicher Weise mit geeigneten Stabilisatoren, z. B. Ascorbinsäure, Gentisinsäure oder Salzen dieser Säuren stabilisiert werden, oder er kann andere Hilfsstoffe, z. B. Füllstoffe, wie Glucose, Lactose oder Mannit enthalten.
Die Erfindung wird nun eingehender unter Bezugnahme auf die folgenden spezifischen Beispiele beschrieben.

Beispiel 1

Synthese markierter Peptide

Tyr&sup0;-Substanz P wird nach der Festphasen-Methode nach Merrifield synthetisiert (J. Am. Chem. Soc. 85, 1963, 2149). Dabei wird die sogenannte Fmoc-Strategie (Int. J- Pept. Protein Res. 35, 1990, 161-214) benutzt. Dies bedeutet, dass Fmoc-geschützte Aminosäuren successive gekuppelt werden, jedesmal gefolgt von einer Spaltung der schützenden Fmoc-Gruppe in basischem Medium.
DTPA-Substanz P wird hergestellt durch das von Hnatowich (US-Patent 4,479,930) beschriebene Verfahren unter Benutzung von Lysin-geschützter Substanz P und DTPA-Dianhydrid. In entsprechender Weise wird DTPA-Tyr&sup0;- Substanz P hergestellt.
Tyr&sup0;-Substanz P wird mit I-123 markiert, indem man diese Verbindung in Phosphat-Puffer auflöst und dieser Lösung in Gegenwart von Chloramin T eine aquimolare Menge ¹²³I&supmin;-Natriumjodid zusetzt. Die Markierung der DTPA- modifizierten Peptide mit In-111 erfolgt durch Auflösung der Peptide in 0,01 M Essigsäure und Mischen dieser Lösungen mit ¹¹¹In-InCl&sub3;-Lösung in wässrigem 0,5 M Natriumacetat bei Raumtemperatur. Dann wird zu Neutralisierungszwecken HEPES-Puffer zugesetzt.

Beispiel II

Bindungsstudien

Bindungsstudien in vitro werden in einem standardisierten System ausgeführt, wobei der Ersatz der ¹²&sup5;I-Bolton Hunter Substanz P{[¹²&sup5;I]BH-SP} durch die oben synthierten markierten Peptide studiert wurde. Fig. 1 zeigt, dass [¹²&sup5;I]BH-SP spezifisch an Membranen der Rinde von Rattenhirn und menschliche Glyommembrane bindet, jedoch nicht an menschliche Meningeoma-Membrane. Der Ersatz von [¹²&sup5;I]BH-SP durch jodierte Tyr&sup0;-Substanz P ist in Fig. 2 demonstriert; der gemessene IC&sub5;&sub0;-Wert (nM) ist 0,4 (Cortex) und 0,7 (Glyom). Der Ersatz durch Inkomplexierte DTPA-Tyr&sup0;-Substanz P ist durch Fig. 3 gezeigt; der IC&sub5;&sub0;-Wert (nM) ist 0,9 (Cortex) und 3,2 (Glyom).
Die Ergebnisse zeigen, dass die markierten Peptide der Erfindung spezifisch an die auf den Gewebemembranen anwesenden SP-Rezeptoren binden, weil sie befähigt sind, SP von diesen Rezeptoren zu verdrängen.

Beispiel III

Leberperfusionsversuche mit markierter Substanz P

Ein Leberperfusionsmodell wird benutzt, wie es von Docter et al. in Endocrinology 1990, 126, 451-459 beschrieben wurde. Es ist eine allgemein anerkannte Tatsache in dieser Technik, dass die Behandlung bioaktiver Substanzen durch die isolierte, perfundierte Rattenleber nach diesem Modell einen sehr guten Voraussagewert für das Auftreten von Metaboliten der eingesetzten Substanz in dem Kreislauf des Menschen hat. Kurz gesagt wird bei diesem Modell isolierte Leber in einem Umlaufsystem mit Krebs-Ringer-Medium perfundiert, das mit 1% Rinderserumalbumin und 10 nM Glucose ergänzt ist. Nach 0,5 h Vorperfusion werden die Versuche begonnen durch Zusatz der markierten Substanz P (5 uCi) zu dem Medium. Zu regelmäßigen Zeitpunkten werden Proben entnommen. Die Mediumproben werden durch Säulenchromatographie unter Benutzung von Seppak®-C-18- Säulen analysiert.
Die durchschnittlichen Ergebnisse sind in den Fig. 4-6 angegeben. Sie zeigen das Verschwinden der Gesamtradioaktivität ("Ges. Akt.") und der peptidgebundenen Radioaktivität ("Protein") bei gleichzeitigem Erscheinen von nicht-peptidgebundener Radioaktivität in dem zirkulierenden Medium als ein Abbauprodukt.
Die Fig. 7-9 zeigen die Ausscheidung der getesteten markierten Peptide in die Galle.
In den Fig. 4 und 7 sind die Ergebnisse der [¹²&sup5;I]BH-SP dargestellt, die zeigen, dass nach 60 Minuten etwa 50% der gesamten Radioaktivität verschwunden ist, offensichtlich in beträchtlichem Ausmass über Leber- Stoffwechselausscheidung: etwa 25% der Radioaktivität wird in die Galle ausgeschieden. Die Differenzen bei den getesteten markierten Peptiden der Erfindung sind eindrucksvoll. Die Ergebnisse der [¹²³I] Tyr&sup0;-SP sind in den Fig. 5 und 8 dargestellt; sie zeigen, dass nach 60 Minuten nur etwa 15% der gesamten Radioaktivität verschwunden ist. Die in die Galle ausgeschiedene Radioaktivität beträgt nur etwa 0,8% und steigt auf nur etwa 1,2% nach 120 Minuten. Noch günstigere Resultate erhält man mit [¹¹¹In] DTPA-Tyr&sup0;-SP: nach den Fig. 6 und 9 kann nach 120 Minuten nur eine vernachlässigbare Ausscheidung von Radioaktivität in die Galle beobachtet werden.
Aus den obigen Ergebnissen ist zu schließen, dass im Gegensatz zu [¹²³I]BH-SP die markierten Peptide der Erfindung vielversprechende Substanzen für scintigraphische Abbildungszwecke in Bezug auf die Beförderung durch die Leber sind. Es ist zu schließen, dass die metabolische Ausscheidung dieser Substanzen durch die Leber vernachlässigbar ist, was zu einer niedrigen Hintergrundaktivität führt.

Beispiel IV

Versuche in vivo

In Ratten wurde ein Pilotversuch mit [¹¹¹In]DTPA- Tyr&sup0;-SP durchgeführt, wobei Granulome hervorgerufen werden. Es ist bekannt, dass Granulome SP-Rezeptoren enthalten. Das radiomarkierte Peptid wird in einer Menge entsprechend 500 uCi injiziert. Ein in einem Bein der Ratte hervorgerufenes Granulom kann 2,5 Stunden nach der Injektion leicht durch Schreiben eines Scintigramms erkannt werden. Die Ratten werden 4 Stunden oder 24 Stunden nach der Injektion getötet, und verschiedene Organe einschließlich der Granulome werden excidiert und gewogen. Die gemessene Radioaktivität, korrigiert um das Gewicht der Organe ist in der Tabelle 1 unten angegeben. In der Tabelle 1 ist die Radioaktivität ausgedrückt in Verhältnissen verglichen mit der Radioaktivität im Blut, die willkürlich auf 1,0 festgelegt ist; relative Radioaktivität.
Aus den Ergebnissen ist zu schließen, dass in den Granulomen eine beträchtliche Ansammlung der Radioaktivität erfolgt, die für scintigraphische Zwecke ausreicht, und das die Leber-Stoffwechselausscheidung im Vergleich zu der Nierenausscheidung vernachlässigbar ist. Tabelle 1 Relative Radioaktivität

Claims

1. Peptid mit einer selektiven Affinität zu Neurokinin-1- Rezeptoren, das von einer Verbindung der allgemeinen Formel

R&sub1;-(A&sub1;)m-A&sub2;)n-A&sub3;)o-Pro)p-A&sub4;)q-A&sub5;-Phe-A&sub6;-A&sub7;-A&sub8;-Met(O)s-R&sub2;

abgeleitet ist, worin alle Symbole m, n, o, p und q die Zahl 1 sind oder alle Symbole m, n, o, p und q bis auf eins die Zahl 1 sind und das übrige Symbol null ist,

R&sub1; ein Wasserstoffatom oder eine C&sub1;-C&sub4;- Alkycarbonylgruppe ist,

R&sub2; eine Aminogruppe, eine Hydroxygruppe oder eine C&sub1;-C&sub4;-Alkoxygruppe ist,

A&sub1; Arg, Gly oder 5-Oxo-Pro (pGlu) ist,

A&sub2; Pro oder β-Ala ist,

A&sub3; Lys oder Asp ist,

A&sub4; Gln, Asn oder 5-Oxo-Pro ist,

A&sub5; Gln, Lys, Arg, N-acetyliertes Arg oder 5-Oxo-Pro

ist, oder worin

A&sub5; zusammen mit A&sub3; eine Cystin-Gruppe bildet,

A&sub6; Phe oder Tyr ist,

A&sub7; Gly, Sar oder Pro ist,

A&sub5; Leu oder Pro ist, und

S null, 1 oder 2 ist,

oder ein Tyr&sup0;-Derivat davon, wobei das genannte Peptid markiert ist mit (a) einem unter Tc-99m, Pb-203, Ga-67, Ga-68, As-72, In-111, In-113m, Ru-97, Cu-62, Cu-64, Fe-52, Mn-52 m, Cr-51, Na- 23, Gd-157, Mn-55, Dy-162, Cr-52, Fe-56, Re-186, Re-188, As-77, Y-90, Cu-67, Er-169, Sn-121, Te-127, Pr-142, Pr-143, Au-198, Pd-109 und Dy-165 ausgewählter Metallisotop, das an das genannte Peptid über ein Verbindungsglied gebunden ist, das zur Umsetzung mit einer Aminogruppe des Peptids befähigt ist und ein chelatbildende Gruppe zur Chelatbildung mit dem genannten Metallisotop hat und sich ableitet von Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), Diethylentriaminpentaessigsäure (DPTA), Ethylenglykol- O,O'-bis(2-aminoethyl)-N,N,N',N'-tetraessigsäure (EGTA), N,N'-bis(Hydroxybenzyl)ethylendiamin-N,N'-dieessigsäure (HBED), Triethylentetraminhexaessigsäure (TTHA), substituierter EDTA oder substituierter DTPA, 1,4,7,10- Tetraazazyklododekan-N,N',N",N'''-tetraessigsäure (DOTA) oder 1,4,8,11-Tetraazazyklotetradekan-N,N',N",N'''- tetraessigsäure (TETA), oder über ein Verbindungsglied, das sich von einer Verbindung der allgemeinen Formel

ableitet, worin R ein verzweigter oder unverzweigter, wahlweise substituierter Kohlenwasserstoffrest ist, der durch ein oder mehrere, unter N, O und S ausgewählte Heteroatome und/oder durch eine oder mehrere NH-Gruppen unterbrochen sein kann, und Y eine Gruppe ist, die zur Umsetzung mit einer Aminogruppe des Peptids befähigt ist und vorzugsweise unter Carbonyl, Carbimidoyl, N-(C&sub1;-C&sub6;)- Alkylcarbimidoyl, N-Hydroxycarbimidoyl und N-(C&sub1;-C&sub6;)- Alkoxycarbimidoyl ausgewählt ist; oder markiert ist mit (b) einem nachweisbaren Halogenisotop, das unter I-123, I-131, Br-75 und Br-76 ausgewählt ist und direkt oder über eine verbindende Tyrosylgruppe an dem genannten Peptid hängt.

2. Verbindung nach Anspruch 1 zum Nachweis und zur Lokalisierung von Geweben mit Neurokinin-1-Rezeptoren in dem Körper eines Warmblüters, wobei das Peptid markiert ist mit (a) einem nachweisbaren Metallisotop, das unter Tc-99m, Pb-203, Ga-67, Ga-68, As-72, In-111, In-113m, Ru-97, Cu-62, Cu-64, Fe-52, Mn-52 m, Cr-51, Na-23, Gd-157, Mn-55, Dy-162, Cr-52, Fe-56 ausgewählt ist, oder mit (b) einem nachweisbaren Halogenisotop, das unter I-123, I- 131, Br-75 und Br-76 ausgewählt ist.

3. Verbindung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, in der das nachweisbare Halogenisotop über eine Tyrosyl- Verbindungsgruppe an einer endständigen Aminogruppe des Peptids hängt.

4. Verbindung nach Anspruch 1 zur therapeutischen Behandlung von Tumoren mit Neurokinin-1-Rezeptoren auf ihrer Oberfläche in dem Körper eines Warmblüters, wobei das Peptid mit einem Metallisotop markiert ist, daß unter Re-186, Re-188, As-77, Y-90, Cu-67, Er-169, Sn-121, Te-127, Pr-142, Pr-143, Au-198, Pd-109 und Dy-165 ausgewählt ist.

5. Pharmazeutische Zusammensetzung, die neben einem pharmazeutisch zulässigen Träger und gewünschtenfalls wenigsten einem pharmazeutisch zulässigen Hilfsstoff eine Verbindung nach einem der Ansprüche 1 bis 4 als aktive Substanz enthält.

6. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 2 für die Herstellung eines diagnostischen Mittels zum Nachweis und zur Lokalisierung von Geweben mit Neurokinin-1-Rezeptoren in dem Körper eines Warmblüters.

7. Verwendung einer Verbindung nach Anspruch 4 zur Herstellung eines therapeutischen Mittels zur Behandlung von Tumoren mit Neurokinin-1-Rezeptoren auf ihrer Oberfläche in dem Körper eines Warmblüters.

8. Präparatesatz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung mit (i) einem kleinen Peptid mit selektiver Affinität zur Neurokinin-1-Rezeptoren und wahlweise mit einer Verbindungsgruppe gemäß Definition in Anspruch 1, welcher Substanz gewünschtenfalls ein inerter pharmazeutisch zulässiger Träger und/oder Formulierungsmittel und/oder Begleitstoffe zugesetzt sind, (ii) einer Lösung einer Verbindung eines Radionuklids, das aus der aus Pb-203, Ga-67, Ga-68, As- 72, In-111, In-113m, Tc-99 m, Re-186, Re-188, Ru-97, Cu- 62, Cu-64, Fe-52, Mn-52 m, Cr-51, I-123, I-131, Br-75, Br- 76, As-77, Y-90, Cu-67, Er-169, Sn-121, Te-127, Pr-142, Pr-143, Au-198, Pd-109 und Dy-165 bestehenden Gruppe ausgewählt ist, und (iii) Gebrauchsanweisungen mit einer Vorschrift zur Umsetzung der in dem Präparatesatz vorliegenden Bestandteile.

9. Präparatesatz zur Herstellung einer radiopharmazeutischen Zusammensetzung mit (i) einem kleinen Peptid mit selektiver Affinität zur Neurokinin-1- Rezeptoren und wahlweise mit einer Verbindungsgruppe gemäß Definition in Anspruch 1, welcher Substanz gewünschtenfalls ein inerter pharmazeutisch zulässiger Träger und/oder Formulierungsmittel und/oder Begleitstoffe zugesetzt sind, (ii) einem Reduktionsmittel und gewünschtenfalls einem Chelatbildner, wobei die Bestandteile (i) und (ii) wahlweise vereinigt sind, und (iii) Gebrauchsanweisungen mit einer Vorschrift zur Umsetzung der Bestandteile des Präparatesatzes mit Tc-99m in der Form einer Pertechnetat-Lösung oder mit Re-186 oder Re-188 in der Form einer Perrhenat-Lösung.

10. Präparatesatz nach Anspruch 8 oder Anspruch 9 mit einem Peptid-Konjugat, erhalten durch Modifizierung eines kleinen Peptids gemäß Definition in Anspruch 1 durch Umsetzung mit einem Verbindungsglied mit einer funktionellen Gruppe zur Bindung oder Chelatierung eines Radionuklids gemäß Definition in Anspruch 1.

11. Präparatesatz nach Anspruch 10 mit einem Peptidkonjugat, das durch Modifizierung des kleinen Peptids durch Umsetzung mit einem Verbindungsglied erhalten wurde, wobei das Verbindungsglied sich ableitet von Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), Diethylentriaminpentaessigsäure (DPTA), Ethylenglykol- O,O'-bis (2-aminoethyl) -N,N,N',N'-tetraessigsäure (EGTA), N,N'-bis(Hydroxybenzyl)ethylendiamin-N,N'-dieessigsäure (HBED), Triethylentetraminhexaessigsäure (TTHA), substituierter EDTA oder DTPA, 1,4,7,10- Tetraazazyklododekan-N,N',N",N'''-tetraessigsäure (DOTA) oder 1,4,8,11-Tetraazazyklotetradekan-N, N',N",N'''- tetraessigsäure (TETA), oder von einer Verbindung der allgemeinen Formel

worin R ein verzweigter oder unverzweigter, wahlweise substituierter Kohlenwasserstoffrest ist, der durch ein oder mehrere unter N, O und S ausgewählte Heteroatome und/oder eine oder mehrere NH-Gruppen unterbrochen sein kann, und

Y eine zur Umsetzung mit einer Aminogruppe des Peptids befähigte Gruppe ist, die vorzugsweise aus der aus Carbonyl, Carbimidoyl, N-(C&sub1;-C&sub6;)-Alkylcarbimidoyl, N- Hydroxycarbimidoyl und N-(C&sub1;-C&sub6;)-Alkoxycarbimidoyl bestehenden Gruppe ausgewählt ist.