DE69212034T2

DE69212034T2 - Probiotik

Info

Publication number: DE69212034T2
Application number: DE69212034T
Authority: DE
Inventors: William Dennis Allen; Margaret Anneli Linggod; Philip Porter
Original assignee: Quest International BV
Current assignee: Givaudan Nederland Services BV
Priority date: 1991-04-08
Filing date: 1992-04-06
Publication date: 1997-01-23
Anticipated expiration: 2012-04-07
Also published as: KR0123456B1; GB9107305D0; DE69212034D1; EP0508701A3; JP3186202B2; US5728380A; EP0508701B1; AU652815B2; KR920019930A; IE921092A1; US5589168A; ATE140265T1; ES2089398T3; NZ242195A; JPH05252934A; GR3021069T3; CA2064954A1; EP0508701A2; DK0508701T3; AU1473892A

Description

Diese Erfindung betrifft sogenannte "probiotische" Organismen und derartige Organismen enthaltende Zusammensetzungen, die zur Förderung und Erhaltung der Gesundheit und des allgemeinen Wohlbefindens von Menschen und Tieren hilfreich sind.
In Scandinavian Journal of Primary Health Care, 7, 23-26 (1939) wird die Verwendung eines derartigen probiotischen Organismus zur Behandlung des Reizdarmsyndroms beschrieben.
Obgleich die Organismen in gewissem Maße wirksam sind, besteht ein Bedarf nach einem verbesserten probiotischen Stamm.
Mit der Erfindung haben wir einen neuen Stamm des Enterococcus faecium-Bakteriums (im folgenden als Stamm PRSS bezeichnet) entdeckt, der besonders günstige Fähigkeiten zur Besiedelung des humanen gastromtestinalen Systems und zur Linderung der Symptome von gastromtestinalen Störungen, insbesondere des sogenannten "Reizdarmsyndroms" (irritable bowel syndrome, IBS). Der Stamm PR88 zeigt ähnliche Vorteile in Fällen anderer schwerer abdominaler Beschwerden, wie der sogenannten "entzündlichen Darmkrankheit" (inflammatory bowel disease, IBD). Die günstigen Eigenschaften des Stamms PR88 können auch die Wiederherstellung der normalen gastromterischen Funktionen bei Menschen erleichtern, die sich schweren abdominalen chirugischen Eingriffen oder anderen Behandlungen (wie Chemotherapie oder Radiotherapie) unterzogen haben, die zur Folge hatten, daß ihre natürlichen gastroenterischen Funktionen aus dem Gleichgewicht geraten sind.
Die Verabreichung des Stamms an Individuen, die, obwohl sie keine Krankheitssymptome zeigen, dennoch für gastroenterische Störungen empfänglich sein können, kann dazu beitragen, ihren Gesundheitsstatus aufrechtzuerhalten oder faktisch zu verbessern. Ein Beispiel einer derartigen gelegentlichen Störung ist die "Reise-Diarrhöe", die durch den Streß des Reisens oder durch Infektion durch einen pathogenen Mikroorganismus ausgelöst werden kann, mit dem der Reisende zuvor noch keinen Kontakt hatte.
Außerdem kann der Stamm PR88 mit Vorteil Tieren, insbesondere domestizierten Säugetieren, wie Schweinen, Rindern, Pferden und Haustieren, verabreicht werden.
Eine Probe des Stamms PR88 ist am 25.02.1991 gemäß den Bestimmungen des Budapester Vertrags bei der National Collections of Industrial and Marine Bacteria Limited, Aberdeen, unter der Zugangsnummer NCIMB 40371 hinterlegt worden.
Eine Ausführungsform der Erfindung besteht im neuen Stamm PR88 selbst. Die Erfindung erstreckt sich auf Mutanten und Abkömmlinge des Stamms PR88, die ähnliche oder größere probiotische Wirksamkeit, insbesondere im Zusammenhang mit dem IBS, zeigen.
Eine weitere Ausführungsform ist die Verwendung des Stamms PR88 bei der Behandlung von Menschen oder Tieren.
Die Erfindung stellt eine lebensfähige Organismen des Stamms PR88 in einem Trägermaterial enthaltende eßbare Zusammensetzung zur Verabreichung an einen Menschen bereit, der Symptome einer gastroenterischen Störung zeigt. Das Trägermaterial ist vorzugsweise wäßrig. Das Trägermaterial sollte pharmazeutisch zulässig sein.
Die Zusammensetzung wird normalerweise mit Anweisungen verpackt, die einen Modus der Verabreichung an den Patienten empfehlen, d. h. die Dosierungsmenge und Verabreichungshäufigkeit festlegen, basierend auf klinischen Studien, die mit einer bestimmten erfindungsgemäßen Formulierung durchgeführt wurden.
Eine weitere Ausführungsform der Erfindung besteht in der Verwendung des Stamms PR88 bei der Herstellung einer Zusammensetzung zur Verabreichung an Menschen oder Tiere. Eine derartige Zusammensetzung kann z. B. Organismen des Stamms PR88 in einem pharmazeutisch zulässigen Trägermedium umfassen die einem Patienten zu essen gegeben werden oder durch Intubation verabreicht werden kann. Alternativ können lyophilisierte lebensfähige PRSS-Organismen in fester Form, d. h. als eine Kapsel, zubereitet werden.
Die Erfindung umfaßt auch den Stamm PR88 enthaltende eßbare Produkte wie fermentierte Milchprodukte, z. B. Joghurts Produkte auf milchfreier Grundlage können ebenfalls bereitgestellt werden, wie Joghurt-ähnliche Zusammensetzungen mit einem Gehalt an Milchersatzstoffen, wie Soja. Der Stamm kann auch in die wäßrige Phase eßbarer Emulsionen, wie Margarine, fettarme Aufstriche, oder Dressings, einbezogen werden.
Üblicherweise enthält die Zusammensetzung mindestens 10³, vorzugsweise mindestens 10&sup6; und im Idealfall von 10&sup9; bis 10¹&sup0; lebensfähige PR88-Organismen pro Gramm.
Der Stamm PR88 kann industriell zur Bereitstellung kommerzieller Mengen an Organismen durch Vermehrung unter typischen Baktieren-Fermentationsbedingungen kultiviert werden.
Der Stamm kann kommerziell als Konzentrat in einem eßbaren Träger (z. B. Wasser) geliefert werden, der das Wachstum der Bakterien nicht induziert. Eine andere Alternative ist eine lebensfähige PR88-Organismen enthaltende gefriergetrocknete Zusammensetzung. Derartige Zusammensetzungen können geeigneten Nahrungsmitteln während der Herstellung der Nahrungsmittel zugesetzt werden, um probiotische Produkte zu erhalten. Es sollte darauf geachtet werden, daß die nachfolgende Verarbeitung des Nahrungsmittels nicht zu einem Verlust der gewünschten probiotischen Aktivität führt.
Den Stamm PR88 (vorzugsweise in lyophilisierter Form) enthaltende eßbare Kapseln, z. B. aus Gelatine, können eine hilfreiche Produktform zur prophylaktischen oder therapeutischen Verwendung sein.
Obwohl PR88 zur Fermentierung von Milch fähig ist, ist er in dieser Hinsicht nicht besonders wirksam. Wenn PR88 z. B. in einen probiotischen Joghurt einbezogen werden soll, kann es zweckdienlich sein, den Joghurt mittels eines herkömmlichen Joghurt-Stamms, z. B. einem Lactobacillus, herzustellen und die PR88-Organismen später zuzusetzen.
Die Erfindung erstreckt sich auch auf die Verwendung des Stamms PR88 als probiotischer Zusatzstoff in Humannahrungsmitteln oder Tiernahrung.
Obwohl geplant ist, daß der Stamm PR88 im allgemeinen in der Form intakter lebensfähiger Zellen verwendet wird, erstreckt sich die Erfindung auch auf nicht lebensfähige Zellen des Stamms PR88, wie abgetötete Kulturen und andere Zusammensetzungen, die durch den Stamm PRS88 exprimierte vorteilhafte Faktoren enthalten.
Wichtige Ausführungsformen der Erfindung sind:
1. Eine lebensfähige Organismen des Stamms NCIMB 40371 enthaltende eßbare Zussammensetzung, die mit Anweisungen verpackt ist, die einen Modus der Verabreichung an einen Symptome einer gastroenterischen Störung aufweisenden Menschen empfehlen,
2. eine, eine derartige Zusammensetzung beinhaltende kontrollierte Diät für einen Menschen, der Symptome von IBS zeigt,
3. ein Verfahren zur Linderung von Symptomen einer gastroenterischen Störung, insbesondere IBS, bei einem Menschen durch die orale Verabreichung einer lebensfähige Organismen des Stamms NCIMB 40371 enthaltenden eßbaren Zusammensetzung, wobei die Zusammensetzung in einer Menge verabreicht wird, die ausreicht, eine Population des Stamms im gastroenterischen Trakt des Menschen zu begründen und/oder aufrechtzuerhalten, und
4. ein Verfahren zur Linderung von Symptomen des IBS bei einem Menschen durch wiederholte Verabreichung eines fermentierten Milchprodukts, welches lebensfähige Organismen des Stamms NCIMB 40371 enthält.

Reizdarmsyndrom (IBS)

Obwohl Individuen, bei denen im weiteren Verlauf die Diagnose IBS gestellt wird, einen sehr großen Anteil der Patienten bilden, die bei Gastroenterologen vorstellig werden (20 - 50%) , gibt es keine einfachen Tests, diese Diagnose zu bestätigen. Die am häufigsten mit der Bestimmung zusammenhängenden Symptome sind jedoch:
1. Abdominalschmerz, der durch Darmbewegung erleichtert wird,
2. Lockerer Stuhl im Zusammenhang mit dem Schmerz
3. Häufigere Stuhlgänge im Zusammenhang mit dem Schmerz
4. Abdominale Distension
5. Mukus im Stuhl
6. Gefühl unvollständiger Entleerung
(Manning et al, 1978)
Wenn keine andere organische Störung als Ursache für die vorstehenden Symptome gefunden werden kann, lautet die Diagnose üblicherweise IBS.
Neben den erkannten vorstehend aufgezählten kolonischen Symptomen können zusätzliche extrakolonische Symptome mit der Krankheit in Verbindung stehen; diese beinhalten chronischen Kopfschmerz oder Migräne und Schwellungen und Schmerz in den Gelenken (Tilbe & Sullivan, 1990; Watson et al, 1973).
Die bei Krankenhausärzten vorstelligen und von diesen als IBS- Fälle diagnostizierten Individuen stellen möglicherweise nur "die Spitze des Eisbergs" dar. Epidemiologische Berichte in England, den USA und Dänemark zeigten, daß 14%, 17% bzw. 15% der augenscheinlich gesunden Individuen mehr als 6 Fälle von Schmerzen im unteren Abdomen mit mindestens 3 der typischen sechs IBS Symptomen während des vergangenen Jahres erlebt hatten: Drossmann et al (1982), Krag (1985), Thompson and Heaton (1930). Somit geht nur eine Minderheit der Individuen mit IBS (wahrscheinlich die schwereren Fälle und die Individuen, die bei allen möglichen Gelegenheiten zum Aufsuchen medizinischer Hilfe neigen) mit dem Problem zu ihrem Arzt. Die Mehrheit der Leidenden findet sich entweder damit ab oder probiert verschiedenartige Hausmittel, von denen die meisten unerprobt und wahrscheinlich wirkungslos sind.

Ursachen der IBS-Symptome

An IBS leidende Individuen erleben Störungen in der Motilität sowohl des Ober- als auch Unterdarms, und diese können zu Diarrhöe und/oder Verstopfung und Schmerz führen. Die anormale Darmfunktion kann auf einer Störung der intestinalen Steuerung beruhen. Die extrakolonischen Erscheinungsformen des Syndroms, wie chronischer Kopfschmerz und Migräne, legen nahe, daß auch ein systemisch wirkendes Agens beteiligt sein könnte (Watson et al 1978).
Es ist vorgeschlagen worden, daß Prostagladin 52 (PGE) als intestinaler Mediator in von Diarrhöe begleitenden Formen des IBS wirkt. Exogenes PGE übt einen starken sekretorischen Effekt auf das intestinale Epithel aus und kann beim Menschen im Anschluß an orale, intrajejunale oder parenterale Verabreichung reichlich wäßrige Diarrhöe auslösen. PGS beeinträchtigen auch die intestinale Motilität. PGE wird lokal im Dünndarm synthetisiert und seine Synthese/Freisetzung geschieht normalerweise unter hormonaler und neuronaler Steuerung. Anormale Freisetzung von PGE würde klarerweise zu ungünstigen Symptomen führen, und Individuen mit IBS-Diarrhöe haben oft höhere PGE-Spiegel als normal (Rask-Madsen & Bukhave, 1935). Ein Umstand, der die Freisetzung von PGE auslösen kann, ist eine Nahrungsmittelunverträglichkeit. Jones et al (1982) berichteten, daß bestimmte Nahrungsmittel bei 14 von 21 Patienten Symptome von IBS hervorriefen und daß dies mit erhöhten Spiegeln von rektalem PGE zusammenhängt.
Viele Patienten können den Ausbruch ihres IBS auf ein eindeutiges Ereignis datieren, wie einen Anfall von Gastroenteritis, einen chirugischen Eingriff im Unterleib oder Beckenbereich oder eine Antibiotikakur. Frauen, die sich einer Hysterektomie unterziehen, entwickeln postoperativ mit größerer Warscheinlichkeit IBS-Symptome, wenn sie im Anschluß an die Operation Metronidazol erhalten. Das deutet darauf hin, daß, wenn die Darmflora gestört wird, ein neues Darmökosystem die Oberhand gewinnen kann, das den Patienten für IPS anfälliger macht (Hunter and Jones, 1985). Eine chronische Infektion mit bislang unidentifizierten pathogenen oder darmhaftenden E.coli ist als Folge von IBS und entzündlicher Darmkrankheit bei einem Teil der Patienten vorgeschlagen worden (Borody et al, 1989; Burke and Axon, 1983) ; eine andexe Möglichkeit besteht jedoch darin, daß der gestreßte Darm durch Bakterien besiedelt werden kann, die im allgemeinen harmlos sind, aber bestimmte Nahrungmittel unter Erhalt von Zwischenstufen metabolisieren können, die die PGE-Freisetzurg auslösen können.
Probiotische Therapie kann für 155-Patienten von Nutzen cjelr, aber es ist notwendig, einen geeigneten Bakterienstamm zu identifizieren. Die Wirkungsweise von Probiotika wird gegenwärtig nicht völlig begriffen. Die folgenden drei Parameter scheinen wichtig zu sein.
1. Der Stamm sollte ein natürlicher intestinaler Stamm und nicht pathogen und nicht toxisch sein.
2. Ein geeignetes, sicheres Darreichungssystem sollte zur Verabreichung großer Zahlen lebensfähiger Zellen an den Patienten verfügbar sein.
3. Der Stamm sollte zum Überleben und Metabolisieren in der Darmumgebung fähig sein, d. h. gegen niedrigen pH und organische Säuren beständig sein.

Methoden

Stamm und Wachstumsmedien

Der Stamm PR88 ist eine natürlich vorkommende gram-positive Kokke, gekennzeichnet als Streptococcus (Enterococcus) faecium. Der API 20S-Code des Stamms ist 5357 511 (sehr gute Kennzeichnung Ent. faecium), und erwächst auf Thallium (I)- acetat/Tetrazoliumglucose-Agar, wobei weiße Kolonien erhalten werden.
PR88 fermentiert Zucker, wie Glukose, unter Erhalt von Säuren, wodurch er den pH auf etwa 4,5 erniedrigt, und wandelt Milchmedien nach 19 bis 24 Stunden bei 37ºC in Joghurt um; die bei dieser Untersuchung verwendeten Joghurts wurden jedoch 48 Stunden lang inkubiert (man fand, daß ein Patient mit Milchunverträglichkeit auf 24 Stunden-Joghurts eine Reaktion zeigte, jedoch nicht auf 48 Stunden-Joghurts). Die Titer von PR88 in den Joghurts waren üblicherweise zwischen 10&sup8; und 10&sup9; pro Gramm und der pH betrug etwa 10&sup6;.
PR88 wurde in 500 ml-Aliquote von GYSM* zur intracaecalen Inokulation und 100 ml-Aliquote von DS* zur oralen Inokulation vermehrt.
*GYSM - 10g Glucose, 3g Hefeextrakt (Oxoid L21) und 100g Milchpulver (Oxoid L31) pro Liter.
*DS - 10g Glucose und 100g Milchpulver (Oxoid L31) pro Liter.
Die Charchen von zubereiteten GYSM und "Joghurts" (einzelne Becher von zubereitetem DS) wurden zur Bestätigung überprüft, daß sie reine Kulturen von PR88 waren, indem man auf Blutagar plattierte und die Platten bei 37ºC sowohl aerob als auch anaerob inkubierte.

Untersuchung der Stuhlproben

Stuhlproben der Patienten wurden vor Beginn der Joghurt- Therapie und dann jede Woche während des Versuchs untersucht. Die Stuhlproben wurden zuerst mikroskopisch auf Abnormalitäten (Ova, Zysten, Parasiten, Eiterzellen, Rote Blutkörperchen, Mukus und dergleichen) untersucht und dann nach der Methode von Miles and Misra (1938) "ausgezählt", um die Fäkalkonzentrationen verschiedener Bakterientypen zu bestimmen. Die verschiedenen Bakterientypen wurden durch Auszählen auf verschiedenen Selektivmedien und aerobes und anaerobes Inkubieren der Platten bei 37ºC spezifiziert.
Das versetzt uns in die Lage, die lebensfähigen Titer pro Gramm Fäkalstoffe von Ent. faecium, Ent. faecalis, Enterobakterien, Anaerobiern und Hefen zu bestimmen. Wo notwendig, wurde die vorläufige Identifizierung durch Mikroskopie und biochemische Tests bestätigt.

Untersuche Subjekte

Es wurden 17 Patienten mit chronischem IBS ausgewählt, die zuvor auf eine herkömmliche Behandlung nicht angesprochen hatten und ihre klinische Verfassung überwacht. 9 waren Fälle "hochvolumiger Diarrhöe" (High Volume Diarrhoea HVD), die verbleibenden 8 hatten mit Unterbrechungen Diarrhöe oder andere IBS-Symptome (Tabelle 1).
Die durchschnittlichen täglichen Fäkalgewichte der HVD- Patienten wurden (über eine Spanne von 3 bis 4 Tagen hinweg) vor und nach der Behandlung gemessen. Die Gesamtverfassurig aller Patienten wurde vor und nach der Behandlung durch das einfache Indexverfahren von Harvey and Bradshaw (1980) bewertet. Bei 12 der Patienten wurde die PR88-Kultur anfänglich durch intracaecale Intubation verabreicht und ihre intestinalen PR88-Spiegel dann durch tägliche Joghurts aufrechterhalten. 5 Patienten hatten nur die orale Joghurt- Therapie (siehe Tabelle 1). Später reduzierten alle Individuen ihre Joghurtaufnahme (ein Becher jeden zweiten oder dritten Tag) bis sie eine Häufigkeit erreichten, die sie als die Richtige zur Erhaltung einer verbesserten Gesundheit erachteten.
Am Ende der Untersuchung sind Patienten über Zeitspannen hinweg mit PR88 behandelt worden, die von 4 Monaten bis zu 2,5 Jahren reichten.

Ergebnisse

Allgemeine Bakteriologie

Die Fäkalbakteriologie gesunder Individuen, gemessen durch anaerob/aerob-Verhältnisse, kann von Tag zu Tag erheblich variieren, obgleich es möglich ist, den "Normalbereich" für auf Standardweise behandelte Stuhlproben zu berechnen.
Die Fäkalbakteriologie-Titer von IBS-Patienten ergaben einen höheren Prozentsatz anormaler anaerob/aerob-Verhältnisse als gesunde Individuen, ergaben aber nach probiotischer Behandlung Verhältnisse im normalen Bereich. Die anormalen Verhältnisse konnten jedoch entweder oberhalb oder unterhalb der Norm liegen und viele 155-Patienten zeigten ähnliche Verhältnisse im Normalzustand und während eines diarrhöischen Anfalls. Daraus läßt sich schließen, daß es kein charakteristisches 155-Profil gibt, obwohl manche 155-Patienten eine anormale fäkale Flora aufweisen können, gemessen durch rohe anaerob/aerob-Verhältnisse. (Ungleichgewichte innerhalb der aeroben oder anaeroben Gruppe würden durch diese Methode nicht gezeigt werden).
Keiner der IBS-Patienten hatte vor der Behandlung nachweisbare Konzentrationen von Ent.faecium in seinem Stuhl. Viele gesunde Individuen schienen jedoch Ent.faecium ebenfalls nicht zu tragen.
Die Effekte der Joghurt-Therapie bei allen 17 in der Untersuchung eingeschlossenen Patienten sind in Tabelle 2 zusammengefaßt. Die Therapie war bei 7 von 9 HVD-Patienten und bei 5 von 8 der anderen erfolgreich. Die zwei Fehlschläge bei der HVD-Gruppe (Patienten 8 und 9) reagierten nachteilig auf die Joghurts, sie zeigten normalerweise eine Unverträglichkeit auf Molkereiprodukte und wurden zweifellos durch irgendeinen Faktor in der Milch beeinträchtigt, der durch den Joghurtprozeß nicht verändert wurde.
Die durchschnittlichen täglichen Fäkalgewichte der Patienten (1) bis (7) vor und nach der Behandlung sind in Tabelle 3 angegeben; während sie vor der Behandlung hoch waren, kehrten sie nach der Behandlung in den normalen Bereich zurück.
Die Bewertung der anderen IBS-Symptome war natürlich subjektiver als die Messung der Fäkalgewichte, aber es war möglich, einen "Symptomindex" (Methode von Harvey and Bradshaw, 1980) eines jeden Patienten vorher" und "nachher" zu gewinnen - siehe Tabellen 4 und 5. Die Therapie mit dem Stamm PR88 verringerte den Abdominalschmerz, migräneartige Kopfschmerzen und Gelenkschmerzen, die bei den 12 erfolgreichen Patienten mit IBS zusammenhingen und, mit Ausnahme von Patient (2) kehrten diese Symptome wieder, als die PR88-Therapie abgebrochen wurde.

Diskussion

Die Öffentlichkeit hat eine Vorstellung von Joghurt als einem "gesundheitsfördernden Nahrungsmittel", wissenschaftliche Belege für die vorteilhaften wirkungen fermentierter Milchprodukte sind jedoch ziemlich dürftig. Ein Grund dafür liegt darin, daß die zur kommerziellen Herstellung von Joghurt (Lact . bulgaricus und Stred. thermodhilus) und anderer fermentierter Milchprodukte verwendeten Bakterienstämme auf rasches Wachstum in vitro und ihre Fähigkeit hin selektiert wurden, Lebensmittel mit einem angenehmen Geschmack zu produzieren. Diese Stämme haben die Fähigkeit, in vivo zu überleben, weitgehend verloren, so daß ein probiotischer Effekt bei üblichen kommerziellen Joghurts eher unwahrscheinlich ist. Der Ent.faecium PR88 hat jedoch die Fähigkeit, an Darmzellen zu haften und in der intestinalen Umgebung zu überleben. PR88 verwandelt Milch sehr viel langsamer in Joghurt als eine kommerzielle Kultur, aber er kann im Nahrungsmitteltrakt überleben und proliferieren. Frühe Versuche bei Patienten zeigten, daß PR88 nach Intubation große intestinale Populationen mehrere Wochen lang einpflanzen und erhalten konnte. Spätere Experimente zeigten, daß oral aufgenommene Joghurts ebenfalls hohe Zahlen des Stamms im Darm zur Folge haben konnten, da Patienten bei der Untersuchung üblicherweise PR88-Fäkalspiegel von 10&sup6; bis 10&sup9; pro Gramm aufwiesen.
Die probiotische Therapie mit PR88 war sehr wirksam beim Lindern der Symptome des IBS, insbesondere des IBS im Verbund mit Diarrhöe. Die durchschnittlichen tätlichen Fäkalgewichte der Patienten wurden vor und nach der probiotischen Behandlung bestimmt und zeigten deutlich die Wirksamkeit von PR88. Bei 5 von 7 IBS-Patienten mit den diarrhöischen Syndromen wurde das durchschnittliche tägliche Fäkalgewicht durch die probiotische Therapie auf Normalwerte herabgesetzt. Die zwei "Fehlschälge" zeigten beide eine Unverträglichkeit auf Kuhmilch und reagierten außerdem nachteilig auf Molkereijoghurts. Die drei Patienten mit zeitweiser Diarrhöe sprachen ebenfalls gut auf die Joghurtbehandlung an, wie auch zwei Individuen mit IBS ohne Diarrhöe. Die anderen Symptome des IBS, wie Abdominalschmerz, migräneartiger Kopfschmerz und arthritischer Schmerz und Schwellung der Gelenke, konnten ebenfalls durch die probiotische Therapie gelindert werden (siehe Tabelle 4).
Vielen (jedoch nicht allen) der IBS-Patienten wurde PR88 anfänglich bei einem Versuch, eine rasche Verbesserung ihrer Kondition zu erreichen, durch ein intracaecales Rohr verabreicht. Intracaecale Intubation umgeht den Magen und erlaubt es, PR88 unmittelbar in den Unterdarm darzureichen. Da man fand, daß die meisten Patienten erfolgreich auf die alleinige orale Joghurttherapie ansprachen, wurde die Intubation nicht weiter fortgesetzt.
Wir fanden, daß Joghurts ein sicheres und wirksamens Mittel zur Verabreichung von PR88 sind. Lebensfähige Titer waren etwa 10&sup8; pro ml, so daß ein Joghurt 10¹&sup0; Bakterien enthielt. Der Joghurt-pH betrug etwa 4,5, was die Risiken einer Kontamination reduzierte; pathogene Keime, wie Salmonellen und Listerien können bei niedrigen pHs nicht überleben. PR88 überlebte in der sauren Joghurtumgebung gut, und die auf Joghurt herangezogenen Bakterien befanden sich in einem geeigneten metabolischen Zustand zur Besiedelung des Darms.
Die an IBS leidenden Patienten, die an dieser Untersuchung beteiligt waren, waren schwere chronische Fälle, bei denen herkömmliche andersartige Therapien fehlgeschlagen hatten. Die meisten von ihnen hatten 10 bis 20 Jahre lang unter IBS gelitten und es war höchst unwahrscheinlich, daß sie während unserer Testdauer spontan genesen sind. Obwohl IBS-Symptome gleichfalls durch psychologische Faktoren beeinflußt werden können, hatten frühere Therapiearten keine "psychologische Heilung" bei diesen Patienten bewirkt. Die PRBS-Therapie wurde langfristig getestet, die gut untersuchten IES-Patienten und die Verbesserungen in ihrer Verfassung und Lebensqualität waren echt. Tabelle 1 Zusammenfassung der mit Ent.faecium PR88 behandelten IBS- Patienten
* nur anfängliche Intubation
** zeitweilige Diarrhöe Tabelle 2 Zusammenfassung der mit Ent.faecium PR88 behandelten IBS-Patienten
* zeitweilige Diarrhöe
Keiner der vorstehenden wies vor der Behandlung Ent.faecium auf. Tabelle 3 Durchschnittliche tägliche Fäkalgewichte der Patienten vor und nach probiotischer Behandlung Tabelle 4 Reizdarmsyndrom - Patienten-Symptomindex Die Bestimmung beruht auf der "Einfach Index"-Methode von Harvey and Bradshaw (1980). Der Index beruht auf der Anzahl von Stuhlgängen pro Tag plus weiteren Syntomen, abgestuft nach 0= sehr gut, 1= geringfügig unter Bestform, 2= schlecht, 3= sehr schlecht, 4= schrecklich. Tabelle 5 Symptomindex, Zusammenfassung

Beispiel 1

Die gleichzeitige Verabreichung des Stammes PR88 und eines zweites Stammes von Enterococcus faecium mit offensichtlich identischen biochemischen und Kultureigenschaften (als PR192 bezeichnet) in einer einzigen Dosis, die 1x10¹¹ PR88 und 1x10¹¹ PR192 beinhaltete, an einen an IBS leidenden Menschen, zeigte, daß, während die Fäkalausscheidung des Stamms PR88 über 50 Tage lang nach der Behandlung auf einem Niveau von über 1x10&sup5; pro Gramm Naßgewicht anhielt, die Ausscheidung von PR192 weniger als 5 Tage lang nach Behandlung auf einem ähnlichen Niveau anhielt. Außerdem erfuhr der Patient eine Verringerung der Symptome des IBS in Übereinstimmung mi; mindestens einer teilweisen Remission, die 7 Tage nach den Behandlung begann und mehr als 50 Tage lang dauerte.

Beispiel 2

Die tägliche orale Verabreichung einer Dosis von 1x10¹&sup0; Enterococcus faecium PR88 an einen an IBS leidenden Humanpatienten über eine zusammenhängende Periode von 14 Tagen hatte eine tägliche Fäkalausscheidung des Organismus von mehr als 1x10&sup5; über die Dauer der Behandlung hinweg zur Folge. Dies war begleitet von einer Verringerung der Symptome des IBS, was im Einklang mit einer zumindest teilweisen Remission der Verfassung stand.

Beispiel 3

Die tagliche orale Verabreichung einer Dosis von 1x10¹&sup0; Enterococcus faecium PR192 (siehe Beispiel 1) an einen an IBS leidenden Humanpatienten über eine zusammenhängende Periode von 7 Tagen brachte keine Verbesserung. der Symptome des IBS, die mit einer Remission einhergingen, obwohl eine Fäkalausscheidung der Organismen von mehr als 1x10&sup5; pro Gramm Naßgewicht sichergestellt war. Die Behandlung mit PR192 wurde aufgrund der anhaltenden Verschlechterung der Patientenverfassung nicht fortgesetzt. Eine Behandlung mit PR88 wurde stattdessen aufgenommen und führte zu einem vorteilhaften Ansprechen.

Beispiel 4

Ein Humanpatient mit einem natürlich vorkommenden Stamm von Enterococcus faecium, mit identischen biochemischen und Kultureigenschaften wie PR88 und mit einer Fäkalausscheidungsrate des Stamms von mehr als 1x10&sup5; pro Tag, zeigte Symptome von IBS. Die Verabreichung einer täglichen Dosis von 1x10¹&sup0; von Enterococcus faecium PR88 über eine Periode von 14 Tagen führte zu einer täglichen Fäkalausscheidung des Stamms PR88 von mehr als 1x10&sup5; Organismen pro Gramm und einer Verbesserung der Symptome, was mit zumindest einer teilweisen Remission einherging.
Diese Beispiele zeigen, daß der Enterococcus faecium-Stamm PR88 einen einzigartigen Vorteil hinsichtlich der zumindest mit einer teilweisen Remission einhergehenden Verbesserung der Symptome des IBS birgt, den andere Stämme von Enterococcus faecium, nicht aufweisen, seien sie natürlich vorkommend oder medizinisch verabreicht.

Beispiel 5

Enterococcus faecium Stamm PR88 wurde in Ampullen gehalten, die in flüssigen Stickstoff eingefroren waren. Eine Starterkultur zur Herstellung im kommerziellen Maßstab wurde aus eingefrorenen Ampullen in einem Medium propagiert, die aus hydrolysiertem Sojaprotein, Hefeextrakt, Glucose und puffernden Salzen (z. B. Monokaliumhydrogenphosphat und Dinatriumhydrogenphosphat) und einer Mineralquelle (z. B. Magnesiumsulfat) bestand.
Zur Fermentation im kommerziellen Maßstab wird ein Medium verwendet, das aus mindestens einer Stickstoffquelle (z. B. fettarme Trockenmilch, hydrolysiertes Sojaprotein, Samenquellauge und Hefeextrakt) mit einer Kohlenstoff- und Energiequelle (z. B. Glucose oder Lactose) besteht. Eine Mineralquelle (z. B. Magnesiumsulfat) wird mit herangezogen, um die Bedingungen für Kinase-Reaktionen zu erfüllen. Puffernde Salze (z. B. Monokaliumhydrogenphosphat und Dinatriumhydrogenphosphat) werden mit einbezogen, um Beschädigungen durch Säure zu verhindern und die vermehrte Rückgewinnung lebensfähiger Zellen zu fördern. Die Bestandteile werden gleichmäßig in Wasser vermischt und io einem unter Druck gesetzten Fermentierbehälter sterilisiert. Der Behälter besitzt aseptische Aufsätze zum Überwachen und Steuern der Temperatur und des pH. Unmittelbar nach Erschöpfung der Kohlenstoffquelle(n) oder kurz vor den vollständigen Erschöpfung wird der Behälter auf Kühltemperatun abgekühlt und die Zellen werden entweder durch Zentrifugieren oder Ultrafiltration geerntet.
Das kalte Zellkonzentrat kann entweder nach Zusatz von Kryoprotektanten, wie steriler Milch, Lactose- oder Sucroselösung, Glycerol, oder Mononatriumglutamat, eingefroren oder als flache Schichten auf sterilen Trägern eingefroren und gefriergetrocknet werden.
Bei einer typischen Fermentation wird ein Medium verwendet, das aus fettarmer Trockenmilch zu 1%, Hefeextrakt zu 1%, Lactose oder Glucose zu 2-3%, Magnesiumsulfat zu 0,1% und einer Kombination von Natriumphosphat und Kaliumphosphat zu 0,9% besteht. Das sterilisierte Medium hatte einen Anfangs-pH zwischen 6,3 und 6,6. Die Inkubation erfolgte bei 37ºC. Der pH-Konstanthalter wurde auf 5,3 eingestellt. Nach 14 bis 15 Stunden wurden die Zellen durch Zentrifugieren geerntet, wobei eine 10fach-Konzentration erhalten wurde. Vor der Lyophilisierung wurde dem Konzentrat eine kryoprotektive Mischung aus Milch und Lactose zugesetzt. Ein Titer von 1,5x10¹¹ Kolonie-bildenden Einheiten pro Gramm Zellpulver wurde erhalten.

Beispiel 6

Enterococcus faecium Stamm PRBS, der nach Beispiel 5 als Zellpulver hergestellt wurde, wird durch einfaches Zumischen einem herkömmlichen fermentierten Milchprodukt, z. B. einem Joghurt, in einer zur Bereitstellung einer Menge von 10&sup9; lebensfähigen PR88-Organismen pro 100g Produkt ausreichenden Menge zugesetzt. Von einem Menschen, der das Produkt regelmäßig zu sich nimmt, werden probiotische Vorteile abgeleitet, beruhend auf normalen Niveaus des Verbrauchs derartiger Produkte.

Beispiel 7

Enterococcus faecium-Stamm PR88 wird einem Getränkeprodukt in einer Menge zugesetzt, die ausreicht, etwa 10&sup9; lebensfähige PR88-Organismen pro 100ml Produkt bereitzustellen. Das Getränk ist im wesentlichen wäßrig, kann jedoch Protein enthalten, z. B. Kasein oder Soja, plus Mineralien und Elektrolyte.
Im allgemeinen werden die probiotischen Organismen der Erfindung, insbesondere Stamm PR88, in Medikamenten, Prophylaktika und Nahrungsmitteln im allgemeinen als im wesentlichen reine Kulturen verwendet.

Literaturverweise

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Watson et al (1978). Canadian Medical Association Journal, 118, 387-388. Globus and headache; common symptoms of the irritable bowel syndrome.

Claims

1. Organismen von Enterococcus faecium, ausgewählt aus der aus Stamm NCIMB 40371, seinen Reizdarmsyndrom-lindernden Mutanten und Abkömmimgen davon bestehenden Gruppe.

2. Enterococcus faecium Stamm NCIMB 40371.

3. Organismen nach Anspruch 1 oder 2 in lebensfähiger Form.

4. Organismen nach Anspruch 1 oder 2 in lyophilisierter Form.

5. Eßbare Kapsel, enthaltend Mikroorganismen nach einem der Ansprüche 1 bis 4.

6. Eßbare Zusammensetzung, umfassend Organismen nach einem der Ansprüche 1 bis 4 in einem Trägermaterial.

7. Zusammensetzung nach Anspruch 6, verpackt mit Anweisungen, die einen Modus der Verabreichung an einen Symptome gastroenterischer Störung aufweisenden Humanpatienten empfehlen.

8. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 oder 7, wobei die Störung Reizdarmsyndrom ist.

9. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 8, wobei es sich um ein fermentiertes Milchprodukt handelt.

10. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 8, wobei es sich um einen Brotaufstrich oder um ein Dressing handelt.

11. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 8, wobei es sich um ein Getränk handelt.

12. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 11, die pro Gramm mindestens 10³ lebensfähige Organismen umfaßt.

13. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 12, die pro Gramm mindestens 10&sup6; lebensfähige Organismen umfaßt.

14. Zusammensetzung nach einem der Ansprüche 6 bis 13, die pro Gramm 10&sup9; bis 10¹&sup0; lebensfähige Organismen umfaßt.

15. Zusammensetzung, die abgetötete Kulturen der Organismen nach Anspruch 1 oder 2 umfaßt.

16. Tiernahrung, die Organismen nach einem der Ansprüche 1 bis 4 umfaßt.

17. Verfahren zur Herstellung einer Zusammensetzung, umfassend den Schritt der Zugabe von Organismen nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zu eßbarem Material in einer Menge, die zur Bereitstellung von mindestens 10³ Organismen pro Gramm der Zusammensetzung ausreicht.

18. Organismen nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Verwendung als Medikament.

19. Verwendung der Organismen nach einem der Ansprüche 1 bis 4 zur Herstellung einer Zusammensetzung zur Verabreichung an einen Humanpatienten, der Symptome gastroenterischer Störung aufweist.

20. Verwendung nach Anspruch 19, wobei die gastroenterische Störung das Reizdarmsyndrom ist.

21. Verwendung nach Anspruch 19, wobei die gastroenterische Störung Reise-Diarrhöe ist.

22. Verwendung von Organismen nach einem der Ansprüche 1 bis 4 bei der Herstellung einer Zusammensetzung zur Verabreichung an Tiere.