DE672078C - Verfahren zur Anreicherung von Zellvermehrung bewirkenden Wachstumsstoffen - Google Patents

Description

• Verfahren zur Anreicherung von Zellvermehrung bewirkenden Wachstumsstoffen Durch das Hauptpatent 661929 und das Zusatzpatent 670 742 werden Verfahren zur Anreicherung von Zellvermehrung bewirkenden Wachstumsstoffen beschrieben. Nach dem im Hauptpatent beschriebenen Verfahren gelingt eine Anreicherung des wirksamen Stoffgemisches, das in der Literatur gewöhnlich als »Biosc< bezeichnet wird, z. B. auf das oofache, nach dem Zusatzpatent z. B. auf das 2o ooofache.
• Es wurde nun gefunden, daß man eine weitere erhebliche Anreicherung des zellvermehrenden Wachstumsprinzips erreicht, wenn man an dem Wachstumsprinzip angereicherte Fraktionen, wie sie nach dem Haupt- und Zusatzpatent erhältlich sind, mit alkoholischen Mineralsäurelösungen in der Wärme behandelt, die Lösung mit Chloroform ausschüttelt und dem Chloroform die Wirkstoffe mit Mineralsäuren entzieht. Gegenüber einem Ausgangsmaterial mit einer Wirkung von - / 5 Millionen Saccharomyceseinheiten je Gramm (S. E./g) beträgt die erzielte Anreicherung z. B. etwa das ,fache. Kombiniert man die genannte Behandlung mit Adsorptions-, Fällun,gs- und Elutionsverfahren, insbesondere solchen, wie sie im Haupt- und Zusatzpatent beschrieben sind, etwa mit einer Adsorption an Tierkohle, Elution des Adsorbates mit organischen Lösemitteln unter Zusatz- von Alkali, Fällung mit Phosphorwolframsäure und Brompikrolonsäure, wobei zweckmäßig gelegentlich die wirksamen Fraktionen wieder der Behandlung mit- einer alkoholischen Mineralsäurelösung wie oben unterworfen werden, kann man zu außerordentlich wirksamen Produkten gelangen. Höchstwirksame Produkte konnten im Hochvakuum destilliert werden und lieferten Kristalle, die eine-Wirksamkeit von 25 Milliarden S. E./g zeigen.
• ,Beispiel 2, i g eines nach den Verfahren der Patente 661929 und 6/0 /42 vofgereinigten Produktes mit etwa /5 Millionen S. E./g werden mit i 5o ccm einer 3 %igen methylalkoholischen Chlörl#iasserstofflösung-. i Stunde gekocht. Nach dem Abdampfen des Methanols ' wird der Rückstand in Chloroform aufgenommen und die Lösung so lange mit Wasser extrahiert, bis dieses nicht mehr gefärbt wird. Die Chlor oformlösung wird dann z omal mit 2n-Salzsäure ausgeschüttelt. Die Säurefraktion enthält 33o Millionen S. E. je Gramm Trockensubstanz, während die -übrigen Fraktionen weniger wirksam als das Ausgangsprodukt@sind.
• Nachdem man nun entsprechend der ersten Phase des Beispiels des Patents 670 74,-, nochmals an Kohle adsorbiert, eluiert und das Eluat mit Phosphorwolframsäure gefällt und danach nochmals, wie oben angegeben, mit 3'? oiger methylalkoholischer Chlorwasserstofflösung gekocht hat, wird der- saure Extrakt in 15 ccm Alkohol gelöst und mit 3 ccm einergesättigten alkoholischen Brompikrolonsäiire-.: Lösung versetzt. Die braunschwarze Fällung', wird nach einiger Zeit abfiltriert und der Niederschlag durch Behandlung mit Salzsäure-Äther vom Fällungsmittel befreit. Er entspricht einer Wirksamkeit von 1,2 Milliarden S. E./g.
• Das bei der Brompikrolonsäurefällung gewonnene Produkt wird wiederum mit 150 ccm einer 30,'oigen Chiorwasserstoffsäure-Methylalkohollösung gekocht. Nach Entfernen des Alkohols wird das Reaktionsprodukt in 5 ccm Wasser gelöst und mit wenig Natriumcarbonat versetzt. Die Lösung wird dann fünfmal mit der gleichen Menge Chloroform ausgeschüttelt, wobei der Wirkstoff in die Chloroformlösung übergeht. Diese wird über Natriumsulfat getrocknet und dann eingedampft. Der Rückstand enthält etwa 2 Milliarden S. E./g. Das Chioroformlösliche wird nun bei o,oo i mm destilliert. Nach einem etwa i/3 der Gesamtmenge betragenden umwirksamen Vorlauf (i3o bis 185°) wird etwa ein weiteres Drittel bei 185 bis 250° mit einer Wirksamkeit von etwa 6 Milliarden S. E./g erhalten. Die wirksame Fraktion wird in Chloroform gelöst und die Lösung mit Petroläther vom Siedepunkt ¢o bis 6o° versetzt. Beim Stehen in der Kälte scheiden sich farblose Kristall-`:i?ädelchen aus. Sie zeigen nach dem Ab-X,Itrieren und einmaligem Umkristallisieren aüs Chloroform/Petroläther eine Wirksamkeit von 25 Milliarden S. E./g.

Claims (3)

1. PATENTANSPRÜCHE i. Weitere Ausbildung des Verfahrens nach Patent 661929, dadurch gekennzeichnet, daß man an Wachstumsstoffen angereicherte Fraktionen, wie sie nach den Patenten 661929 und 670742 erhalten werden, mit alkoholischen Mineralsäurelösunger, in der Wärme behandelt, die Lösung mit Chloroform ausschüttelt und dem Chloroform die Wirkstoffe mit Mineralsäuren entzieht.
2. 2. Verfahren nach Anspruch i, dadurch gekennzeichnet, daß man das Anreicherungsverfahren in Kombination mit den Reinigungsmethoden der Patente 661929 und 6; 0 742 wiederholt antvendet.
3. 3. Verfahren nach Anspruch i und 2, dadurch gekennzeichnet, daß die hochgereinigten Fraktionen des Wirkstoffes einer Destillation bei sehr geringem Druck unterworfen werden.