DE472651T1 - Endo-f-freie-pngase. - Google Patents
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Claims (22)
1. Enzymprobe enthaltend PNGase F-Aktivität, wobei die
Probe vollständig frei von Endo F-Aktivität ist.
2. Enzymprobe nach Anspruch 1, wobei die PNGase F-Aktivität
gegenüber sialylierten Glycoproteinen wirksam ist.
3. Enzymprobe nach Anspruch 1, wobei die PNGase F-Aktivität
identisch mit der PNGase-Aktivität von Flavobacterium meningosepticum-PNGase ist.
4. Enzymprobe nach Anspruch 1, wobei die Enzymaktivität identisch mit einem Enzym ist, das in einer Bakterienart
vorkommt.
5. Enzymprobe nach Anspruch 4, wobei die Bakterienart zur Gattung Flavobacterium oder zur Gattung Cytophaga gehört.
6. Kohlenhydratprobe, erhalten durch Behandlung eines
Glycoproteins oder Glycopeptids mit PNGase F in vollständiger Abwesenheit von Endo F, wobei die Probe vollständig
frei ist von Produkten der Einwirkung von Endo F auf das Glycoprotein oder Glycopeptid.
7. Gereinigte Nucleinsäuresequenz, die ein Enzym mit
PNGase-Aktivität codiert.
8. Gereinigte Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 7, wobei das Enzym eine Aminosäuresequenz enthält, die mindestens
40 % Homologie mit der Aminosäuresequenz eines natürlich
vorkommenden Enzyms mit PNGase-Aktivität aufweist.
,' 9. Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 7, wobei das natürlich
• vorkommende Enzym von Bakterien hergestellt wird.
10. Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 9, wobei die Bakterien
zur Gattung Flavobacterium oder zur Gattung Cytophaga gehören.
11. Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 10, wobei die Bakterien F.meningosepticum, F. balastinum oder F. breve
sind.
12. Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 11, wobei die Nucleinsäuresequenz eine Homologie von mindestens 90 %
mit dem PNGase F-Gen aufweist, das vorliegt in pGB29,
hinterlegt bei der ATCC unter der Hinterlegungsnummer 67987.
13. Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 7, wobei die Nucleinsäuresequenz unter stringenten Bedingungen mit
einer 30 Basenpaare umfassenden Sequenz des PNGase F-Gens hybridisiert, das vorliegt in pGB29, hinterlegt bei
der ATCC unter der Hinterlegungsnummer 67987.
14. Gereinigte Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 7, wobei
die Nucleinsäuresequenz in einem Plasmid enthalten ist.
15. Gereinigte Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 7, wobei die Nucleinsäuresequenz in einer Wirtszelle bereitgestellt
wird, die keine Endo F-Aktivität aufweist.
16. Nucleinsäuresequenz nach Anspruch 15, wobei die ■■** Würzzelle zur Gattung Escherichia, Streptomyces oder
Bacillus gehört.
17. Verfahren zur Herstellung einer Enzymprobe, die PNGase F-Aktivität enthält und vollständig frei ist von Endo F- *
Aktivität, umfassend die folgenden Schritte:
a) Bereitstellung einer Nucleinsäureseguenz, die >
ein Enzym mit PNGase F-Aktivität codiert
b) Einführen der Nucleinsäureseguenz in eine Wirtszelle, die keine Endo F-Aktivität aufweist, um eine
rekombinante Zelle bereitzustellen,
c) Züchten der rekombinanten Zelle unter Bedingungen, die die Expression des Enzyms gestatten,
und
d) Gewinnen des Enzyms.
18. Protein- oder Peptidprobe, erhalten durch Behandlung eines Glycoproteins oder Glycopeptids mit PNGase F in
vollständiger Abwesenheit von Endo F, wobei die Probe vollständig frei ist von Produkten der Einwirkung von
Endo F auf das Glycoprotein oder Glycopeptid.
19. Nucleinsäure, die unter stringenten Bedingungen spezifisch mit einer 20-Basenpaare umfassenden Sequenz des
PNGase F-Gens hybridisiert, das vorliegt in pGB29, hinterlegt bei der ATCC unter der Hinterlegungsnummer
67987.
20. Rekombinante PNGase.
21. Rekombinante PNGase nach Anspruch 20, wobei die PNGase eine Aminosäuresequenz aufweist, die identisch ist mit
der der entsprechenden, natürlich hergestellten PNGase.
22. Rekombinante PNGase nach Anspruch 21, wobei die PNGase ·-
die PNGase F ist.
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